WO2019234476A1 - Extracto natural de blechnum chilense, con actividad inmunosupresora y antiinflamatoria para inhibir la activación linfocitaria asociada a patologías autoinmunes, antiinflamatorias, y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados - Google Patents

Extracto natural de blechnum chilense, con actividad inmunosupresora y antiinflamatoria para inhibir la activación linfocitaria asociada a patologías autoinmunes, antiinflamatorias, y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados Download PDF

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Enrique Erasmo MONTIEL EULEFI
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Abstract

En el tratamiento de enfermedades autoinmunes y antiinflamatorias, y en pacientes con trasplante de órganos, se utilizan, medicamentos inmunosupresores como los corticosteroides y fármacos antinflamatorios no esteroidales, sin embargo, estos tienen numerosos efectos adversos (hiperglucemia, hipertensión, debilidad muscular, mayor susceptibilidad a infecciones, osteoporosis, glaucoma, trastornos psiquiátricos, detención del crecimiento entre otros) y plantean la necesidad de encontrar nuevos y mejores fármacos inmunosupresores, que se puedan utilizar, solos o en combinación, con el objetivo de reducir los efectos no deseados. En este sentido los inventores han encontrado que el extracto de la planta autóctona de Chile Blechnum chilense, cuenta con efectos antiinflamatorios e inmunosupresores y proponemos que sus moléculas bioactivas con actividad inmunosupresora serán útiles para todos aquellos pacientes que necesitan terapias con fármacos inmunosupresores. Los inventores han determinado, a partir del extracto total de Blechnum chilense mediante LC-MS/MS y la presencia de derivados fenilpropánicos C6-C3 y C6-C3-C6 y terpenos de núcleo indeterminado, que posee potencial efecto inmunomodulador tales como polidin butanodiol, limonin, 5Cl-feniltrimetil y antioxidante como gammaglutamilmetionina. También, los resultados indican que Blechnum chilense no presenta citotoxicidad sobre linfocitos T CD3+, tanto de origen humano como murino, lo que se determinó mediante análisis de extracto total en rango dosis respuesta 0,1ug/ml a 500 ug/ml y que los extractos metanólicos y acuosos en rango dosis respuesta 10 ug/ml a 100 ug/ml muestran una clara inhibición de la proliferación de linfocitaria, linfocitos T, CD3+ tanto de origen humano como murino no afectando la viabilidad linfocitaria (ver figuras adjuntas). De este modo, la invención apunta a un extracto natural de la planta Blechnum chilense que contiene metabolitos secundarios bioactivos con actividad inmunosupresora que inhibe la activación de linfocitos T.

Description

Extracto natural de Blechnum chítense , con actividad inmunosupresora y antiinflamatoria para inhibir la activación linfocitaria asociada a patologías autoinmunes, antiinflamatorias, y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados
MEMORIA DESCRIPTIVA
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La invención apunta a un extracto natural de Blechnum chítense con efecto inmunosupresor y antiinflamatorio, para la profilaxis y tratamiento de patologías antiinflamatorias, autoinmunes y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Los fármacos inmunosupresores y antiinflamatorios utilizados actualmente para el tratamiento de numerosas patologías inflamatorias y autoinmunes, así como, también su uso en pacientes trasplantados genera importantes efectos adversos. Más aún, su utilización en padecimientos crónicos de larga data, multiplica el número de los efectos no deseados, incluso a nivel sistémico. Por ejemplo, el uso de corticosteroides, el más común de los fármacos antinflamatorios, genera frecuentemente osteoporosis, aumento del apetito, obesidad centrípeta, alteración de la cicatrización de heridas, aumento de infecciones, supresión del eje hipotálamo-hipofisiario, detención del crecimiento normal en niños, miopatía, osteonecrosis, hipertensión, plétora, piel frágil, estrías, púrpura, edema, hiperlipidemia, síntomas psiquiátricos, euforia, diabetes mellitus y cataratas subcapsular (Duru et al., 2013; Henneicke et al., 2014). Por otro lado, los anti-inflamatorios no esteroidales o AINEs pueden producir trastornos gastrointestinales, alergias, retención de líquido y disfunción plaquetaria entre otros efectos adversos (Duru et al., 2013). Durante la última década, los protocolos inmunosupresores han utilizado una combinación de fármacos para disminuir estos efectos adversos, sin perder efectividad. Los protocolos de inmunosupresión actuales incluyen una combinación de inhibidores de la calcineurina, como tacrolimus, y agentes antiproliferativos (micofenolato mofetilo), con o sin diferentes regímenes de dosis de corticosteroides. Además, se incorporó la rapamicina, inhibidor de mTOR para ser utilizado en combinación con ciclosporina, pero no ganó mucha aceptación debido a su perfil de efectos adversos (Mühlbacher et al., 2013). La desregulación del sistema inmune conduce a la inflamación crónica, la causa fundamental de todas las enfermedades crónicas no transmisibles. En este sentido, existe la necesidad de contar con nuevos fármacos de mayor eficiencia y con menos efectos secundarios. Es urgente mejorar las políticas y capacidades de los proveedores de salud (los gobiernos, las agencias internacionales y los aseguradores de salud), así como también de la industria farmacéutica e instituciones públicas y privadas para ofrecer nuevas y mejores alternativas para el tratamiento de estas patologías, inflamatorias, autoinmunes y pacientes trasplantados. Es un desafío de hoy repensar la forma en que aseguraremos una vida saludable mañana, con mejores estándares en la calidad de vida de una población que cada vez vive más años.
Las enfermedades crónicas, según la definición de la OMS, son enfermedades de larga duración y generalmente de progresión lenta. Las enfermedades crónico-inflamatorias y autoinmunes como la artritis reumatoide, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, enfermedad de Crohn entre otras, adquieren cada vez más relevancia debido al aumento en la expectativa de vida, al envejecimiento de la población, que genera numerosos pacientes que deben mantenerse bajo tratamiento antiinflamatorio y/o inmunosupresor por largos años aumentando los costos de tratamiento. Se espera que para el año 2020 las enfermedades inflamatorias crónicas sean la cuarta causa de discapacidad. Además, los estudios epidemiológicos sugieren que la inflamación crónica es un factor de riesgo importante para varios tipos de cáncer (Gautam y Jachak, 2009). Según el NIH (National Institute of Health), 23,5 millones de personas en USA, sufren enfermedades autoinmunes, sin embargo, la agencia AARDA (American Autoimmune Related Diseases Associations) estima que el número es significativamente mayor llegando a 50 millones, (www.aarda.org). La tasa de incidencia en USA de 1 por cada 31 individuos (Rose y Mackay 1998). En Chile, el número de personas registradas con patologías autoinmunes es cercano a las 500.000 con una tasa de incidencia similar a la descrita por AARDA en USA (Rose y Mackay 1998). Estas enfermedades generan problemas funcionales graves que deprimen el desarrollo físico, psicológico y social, deteriorando la calidad de vida de niños y adultos afectados, siendo la mayoría de estas patologías difíciles de revertir mediante el uso de los fármacos disponibles actualmente. Lógicamente, el aumento de la expectativa de vida conllevará a un aumento en los gastos en salud. Hoy en día, las patologías asociadas a alteraciones del sistema inmunológico se encuentran dentro de las 20 áreas que más gastan en salud (Source: Royal Society Diseases Publishing). Tanto los individuos, como el estado deberán replantearse los requerimientos para años venideros. Lo que sí es seguro, es la urgencia hoy en avanzar en investigación, desarrollo, actualizar las políticas y gestión en salud. Aumentar la capacidad de los proveedores de salud (los gobiernos, las agencias internacionales y los aseguradores de salud), así como también de la industria farmacéutica para ofrecer nuevas y mejores alternativas para el tratamiento de enfermedades asociadas una población envejecida.
Hasta ahora no se habían reportado las propiedades inmunosupresoras de extractos de plantas de la especie Blechnum chilense. Plantas del género Blechnum, han sido usadas como ingredientes de composiciones farmacéuticas y cosmetológicas, en mezclas con extractos de otras plantas, pero sin referencias a un efecto inmunosupresor.
En el estado de la técnica no existen protocolos o métodos de extracción específicos para la especie empleada en la invención. De acuerdo con lo cual, la invención no se deriva de forma natural ni obvia desde datos previos.
El extracto de la invención puede ser aplicado en la industria farmacéutica para obtener medicamentos útiles para tratar enfermedades inflamatorias/autoinmunes y en cualquier tratamiento donde sea requerida la inmunosupresión.
SOLUCIÓN AL PROBLEMA TÉCNICO
De este modo la invención provee una alterativa natural para obtener medicamentos útiles para tratar enfermedades inflamatorias/autoinmunes y en cualquier tratamiento donde sea requerida la inmunosupresión, que consiste en el extracto de Blechnum chilense de la invención.
DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Fig. 1. Experimento de viabilidad de cultivo de linfocitos extraídos de bazo de ratón, mediante ensayo de exclusión de yoduro de propidio. Las células (1x106 cel/mL) fueron incubadas en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10% y concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0, 1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B) por 24, 48 y 72 horas en presencia de extracto de B. chítense sin filtrar y filtrado con membranas de 0,2 y 5 pm de poro. Se evaluaron concentraciones de 0,001 a 10 pg/mL. La mortalidad se determinó por porcentaje de células que incorporaron yoduro de propidio. Encontrándose en general menos del 10% de mortalidad en todo el rango de concentraciones ensayadas. Segmento anterior de la figura (fotografías) se muestran el cultivo celular de linfocitos tratadas con 1 pg/mL de extracto de B. chítense las 48 hrs.
Fig. 2. Ensayo de viabilidad de cultivo de linfocitos T CD3+, extraídos de bazo de ratón (Spleen; gráficos superior e inferior izquierdos) y de sangre periférica humana (PBMC; gráficos superior e inferior derechos), mediante ensayo de exclusión de yoduro de propidio. Los linfocitos T de bazo de ratón (1x106 cel/mL) fueron incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10% y concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0,1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B) por 60 horas. Luego se evaluaron por separado dos réplicas del extracto de B. chítense (ExBL2 y ExBL2b), en concentraciones de 0,1 a 100 pg/mL incubando por 12 y 60 hrs. Los linfocitos T de sangre periférica se incubaron en el mismo medio descrito anteriormente reemplazando concavalina A por fitohemaglutinina (PHA) 15 pg/mL. La mortalidad linfocitaria, se evaluó por porcentaje de células que incorporaron yoduro de propidio. Encontrándose un rango de mortalidad similar al producido por el control (DMSO 0-100 pg/mL) y menor que el basal en linfocitos de ratón.
Fig. 3. Ensayo de citometría de flujo de linfocitos T CD3+, extraídos de bazo de ratón.
Los dot-blot muestran el tamaño (FSC) y complejidad (SSC) y la selección de poblaciones (P1 a P4). Los linfocitos T de bazo de ratón (1x106 cel/mL) fueron incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10% y concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0,1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B) por 60 horas. Luego se agregó extracto de B. chítense (ExBL2b), en concentraciones de 1 pg/mL, incubando por 12 hrs (gráficos superiores) y 60 hrs (gráficos inferiores). APC y PE muestran la proliferación y viabilidad celular. Fig. 4. Histogramas derivados de análisis por citometría de flujo que representan proliferación de linfocitos T CD3+, de ratón incubados por 60 horas con extracto de B. chítense (EXBL2b) en concentraciones de (1 , 10, 50, y 100 pg/mL pg/mL). Los linfocitos T de bazo de ratón (1x106 cel/mL) fueron incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10% y concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0,1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B). Se observó que en concentraciones de 50 y 100 pg/mL del extracto se produce una evidente disminución de la proliferación de estas células.
Fig. 5. Perfil cromatográfico del extracto de B. chítense obtenido por UV-HPLC. Se muestra la frecuencia de moléculas según su absorbancia y su masa asociada al tiempo de retención (RT) en polaridad positiva (espectro +) y negativa (espectro -).
DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN
La invención se refiere a un extracto natural de Blechnum chítense, con efecto inmunosupresor y antiinflamatorio, útil para la profilaxis y tratamiento de patologías antiinflamatorias, autoinmunes y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados. Los inventores han encontrado que el extracto de Blechnum chítense, reduce significativamente la proliferación de linfocitos T humanos y murinos, sin afectar su viabilidad (ver ejemplos). La actividad biológica encontrada en el extracto de la invención, permite plantear sus posibles aplicaciones farmacológicas en el tratamiento de diferentes patologías tales como: lupus eritematoso, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades inflamatorias intestinales, así como, en terapia inmunosupresora dirigida a pacientes con trasplante de órganos, donde la desregulación de linfocitos T es el punto clave.
Los extractos de B. chítense de la invención se preparan macerando material vegetal seco pulverizado en metanol puro durante seis días, con agitación constante y en oscuridad. El extracto obtenido se concentra en un rotavapor bajo presión reducida a 30° C, obteniéndose un residuo de color marrón oscuro, que posteriormente es resuspendido en agua destilada. Luego se desgrasa por extracción líquido-líquido con n-hexano. La fracción de n-hexano se desecha y la fracción acuosa se concentra a sequedad en un evaporador rotatorio con presión reducida a 30° C. El residuo concentrado se disuelve en agua destilada a 35° C y posteriormente se liofiliza obteniéndose un material pulverizado.
La invención proporciona un extracto de la planta de la especie Blechnum chítense, y en especial de su raíz, el que tiene actividad inmunosupresora sobre linfocitos T humanos. Los inventores han encontrado que la planta autóctona de Chile Blechnum chítense, cuenta con efectos antiinflamatorios e inmunosupresores y proponemos que sus moléculas bioactivas con actividad inmunosupresoras y antiinflamatorias serán útiles para todos aquellos pacientes que necesitan terapias con fármacos inmunosupresores y/o antiinflamatorios.
De este modo, en un primer aspecto la invención apunta a un extracto de la planta Blechnum chítense con propiedades inmunosupresoras y antiinflamatorias que contiene metabolitos secundarios bioactivos que inhiben la activación de linfocitos. Donde este extracto se obtiene macerando material vegetal seco pulverizado de B. chítense en metanol puro. Y donde los metabolitos secundarios bioactivos son polidin, butanodiol, limonin, 5CI-feniltrimetilsilano, alfa-gallocatequina quinona A y gammaglutamilmetionina.
En un segundo aspecto la invención se refiere al uso del extracto para preparar un medicamento con actividad inmunosupresora y antiinflamatoria, donde el medicamento comprende el extracto de la invención y excipientes y auxiliares de formulación para distintas formas farmacéuticas, como jarabes, grageas, comprimidos, solución inyectable, colirio, cremas o ungüentos.
De este modo el extracto de la invención permite obtener o preparar un medicamento útil para prevenir y tratar enfermedades autoinmunes tales como lupus eritematoso, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades inflamatorias crónicas, enfermedades inflamatorias intestinales. En un aspecto adicional el extracto de la invención permite obtener o preparar un medicamento útil para terapia inmunosupresora en caso de trasplante de órganos, en el cuerpo humano o animal. Adicionalmente, el extracto de la invención permite obtener o preparar un medicamento útil para reducir la proliferación de linfocitos T, in vivo o in vitro. Los inventores han determinado, a partir del extracto total de Blechnum chítense mediante análisis HPLC-MS/MS, la presencia de derivados fenilpropánicos C6-C3 y C6-C3-C6 y terpenos de núcleo indeterminado, que el extracto posee potencial inmunomodulador. También, los resultados indican que Blechnum chítense no presenta citotoxicidad sobre linfocitos T CD3+, tanto de origen humano como murino, lo que se determinó mediante análisis de extracto total en rango dosis respuesta 0,1 ug/ml a 500 ug/ml y que los extractos metanólicos y acuosos en rango dosis respuesta 10 ug/ml a 100 ug/ml muestran una clara inhibición de la proliferación de linfocitaria, linfocitos T, CD3+ tanto de origen humano como murino no afectando la viabilidad linfocitaria (ver ejemplos). En este sentido la inhibición de la proliferación de linfocitos T CD3+ in vivo por efecto del extracto se presenta como un mecanismo inmunosupresor de respuestas de rechazo inmunológico y de procesos inflamatorios con potencial terapéutico.
De este modo, la invención apunta a un extracto natural de la planta Blechnum chítense que contiene metabolitos secundarios bioactivos con actividad inmunosupresora que inhibe la proliferación de linfocitos T, el cual se ha determinado que está enriquecido en los compuestos inmunomoduladores y antiinflamatorios: polidin
(+m/z:341 ,20/RT :20,7±0, 1 ), butanodiol (+m/z:327,2/RT:20,7±0,1 ), limonin (- m/z:515,30/RT:21 ,397±0, 1 ), 5CI-feniltrimetilsilano o flavonoides como: alfa-gallocatequina (+m/z:899,20/RT:20,7±0,1 ) o quinona A (-m/z:515,30/RT:21 ,397±0, 1 ) y antioxidante como gammaglutamilmetionina (+m/z:279, 10/RT :20,7±0, 1 ).
EJEMPLOS DE APLICACIÓN
EJEMPLO 1. Obtención del extracto.
Se maceró 100 g de material vegetal seco pulverizado en 500 mL de metanol puro durante seis días, con agitación constante y en oscuridad. El extracto obtenido se concentró en un rotavapor bajo presión reducida a 30° C, obteniéndose 2 g de residuo de color marrón oscuro, que posteriormente se resuspendió en 50 mi de agua destilada. Luego el residuo se desgrasó por extracción líquido-líquido con 50 mL de n-hexano. La fracción de n-hexano se desechó y la fracción acuosa se concentró a sequedad en un evaporador rotatorio con presión reducida a 30° C. Posteriormente el residuo concentrado se disolvió en 50 mL agua destilada a 35° C y finalmente se liofilizó obteniéndose 5 g de material seco pulverizado. Se obtuvo un rendimiento promedio del 5 % de extracto seco respecto a la masa de hojas secas extraídas. La solubilidad en agua del extracto seco se determinó en 1 ,5 mg/ mi. El pH de la solución fue de 6, 1 a 25 °C. Los sólidos totales soluble se determinaron en 1 ,0 mi solución evaporada a 103 °C a sequedad y enfriados en desecador con sílica hasta peso contante de la cápsula, determinándose en 1 ,10 g/mL.
EJEMPLO 2. Ensayo de viabilidad de cultivo de linfocitos T CD3+.
Con el objetivo de evaluar el efecto citotóxico del extracto sobre linfocitos T CD3+ se realizó un ensayo in vitro utilizando linfocitos aislados de bazo de ratón, mediante ensayo de exclusión de yoduro de propidio.
En primer lugar, linfocitos CD3+ T (1x106 cel/mL), extraídos de bazo de ratón, fueron incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10%, el inductor de mitosis concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0, 1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B), en presencia de extractos de B. chítense, en concentraciones de 0,001 a 10 pg/mL por 24, 48 y 72 hrs. Donde el extracto de B. chítense se obtuvo resuspendiendo el material seco liofilizado, obtenido en el ejemplo 1 , a las concentraciones evaluadas. El extracto resuspendido se filtró con membranas de 0,2 y 5 pm de poro, antes de su utilización. La mortalidad se determinó por porcentaje de células que incorporaron yoduro de propidio. Los resultados se muestran en la figura 1. En todas las condiciones evaluadas hubo una mortalidad de menos del 10 % de los linfocitos en cultivo. Los mejores resultados se obtienen con el extracto filtrado con poro 0,2 pm, aunque la diferencia entre las distintas condiciones es mínima. A las 72 horas, en todas las condiciones de filtrado evaluadas y en todas las concentraciones, la mortalidad celular es similar al control (0% extracto).
En un segundo ensayo se evaluó si el extracto de la invención afecta la viabilidad de cultivo de linfocitos T CD3+ extraídos de bazo de ratón (Spleen) y linfocitos T CD3+ de sangre periférica humana (PBMC) en presencia de extracto de B. chítense, en concentraciones de 0,1 a 100 pg/mL por 12 y 60 hrs. Los linfocitos CD3+ T (1x106 cel/mL) fueron incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10%, el inductor de mitosis concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0,1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B), en presencia de extracto de B. chítense, en concentraciones de 0, 1 a 100 pg/mL por 12 y 60 hrs. Los linfocitos T de sangre periférica se incubaron en el mismo medio descrito anteriormente reemplazando concavalina A por el inductor de mitosis fitohemaglutinina (PHA) 15 pg/mL. La mortalidad se evaluó por porcentaje de células que incorporaron yoduro de propidio. Los resultados se muestran en la Figura 2.
Encontrándose un rango de mortalidad similar al producido por el control (DMSO 0-100 pg/mL) y menor que el basal en linfocitos de ratón. Este ejemplo permite concluir que en el rango de concentración utilizado no se observó citoxicidad diferente al nivel el control sin tratamiento.
EJEMPLO 3. Ensayo de citometría de flujo de linfocitos T CD3+.
El objetivo de este ensayo fue valuar el efecto proliferativo y de viabilidad celular del extracto en poblaciones aisladas de linfocitos T CD3+ obtenidos de bazo de ratón.
Los dot-blot muestran el tamaño (FSC) y complejidad (SSC) y la selección de poblaciones de linfocitos T incubados en medio RPMI 1640 suplementado con suero fetal bovino 10% y concavalina A (1 pg/mL) y antibióticos 0,1 % (ampicilina, estreptomicina, anfotericina B) por 60 horas en presencia de extracto de B. chítense, en concentraciones de 1 pg/mL por 12h (gráfico superior) y 60h (gráfico inferior). Los marcadores fluorescentes alo-ficocianina (APC) y ficoeritrina (PE) muestran la proliferación y viabilidad celular de linfocitos T CD3+. Los resultados se muestran en la Figura 3. Se concluye que el extracto en las concentraciones utilizadas posee un efecto antiproliferativo en cultivos celulares estimulados con el compuesto mitogénico concavalina A.
EJEMPLO 4. Ensayo de citometría de flujo para evaluar proliferación de linfocitos T CD3+, de ratón incubados en con extracto de B. chítense, en cuatro concentraciones (1 , 10, 50, y 100 pg/mL). El objetivo de este experimento fue determinar el efecto de un rango de concentraciones del extracto (1 a 100 pg/mL), sobre proliferación de estas células. Los resultados se muestran en la Figura 4. Se observó que en concentraciones de 50 y 100 pg/mL del extracto se produce una evidente disminución del número de poblaciones celulares de linfocitos T CD3+ diferentes estadios de proliferación (en la figura: menor número de curvas). Se concluye que concentraciones de 50 y 100 pg/mL se genera una significativa inhibición de la proliferación celular en cultivos tratados con extracto de B. ch ilense.
EJEMPLO 5. Perfil cromatográfico por UV- HPLC del extracto de Blechnum chítense.
El objetivo de este ensayo fue caracterizar molecularmente el extracto. Para ello, se realizó un análisis mediante cromatografía liquida de alta eficacia de espectro ultra visible UV- HPLC y espectrometría de masa-masa (MS/MS) para identificar metabolitos con actividad inmunológica. En la figura 5 se muestran la frecuencia de moléculas según su absorbancia y su masa asociada al tiempo de retención (RT) en polaridad positiva (+) y negativa (-). El análisis del perfil cromatográfico permitió detectar metabolitos secundarios bioactivos con actividad inmunosupresora que inhibe la activación de linfocitos T, el cual se ha determinado que está enriquecido en los compuestos inmunomoduladores y antiinflamatorios: polidin (+m/z:341 ,20/RT:20,7±0,1 ), butanodiol (+m/z:327,2/RT:20,7±0,1 ), limonin (-m/z:515,30/RT:21 ,397±0, 1 ), 5CI-feniltrimetilsilano o flavonoides como: alfa- gallocatequina (+m/z:899,20/RT:20,7±0, 1 ) o quinona A (-m/z:515,30/RT:21 ,397±0, 1 ) y antioxidante como gammaglutamilmetionina (+m/z:279, 10/RT :20,7±0, 1 ).
En otra realización de la invención, el extracto de obtenido en el ejemplo 1 puede estar comprendido en una composición farmacéutica, la cual además comprende excipientes, auxiliares o vehículos farmacéuticamente aceptables.
Dicha composición farmacéutica puede estar formulada en forma de jarabes, grageas, comprimidos, solución inyectable, colirio, cremas o ungüentos.
Para el experto en la técnica será evidente que los excipientes, auxiliares o vehículos farmacéuticamente aceptables de formulación dependen del método de aplicación que se aplique.
EJEMPLO 6. Composición farmacéutica. Se preparó un jarabe para administración farmacéutica con la siguiente composición:
Extracto obtenido en el ejemplo 1 a una concentración de 500 pg/mL en agua destilada, 800 mL, sacarosa al 65% 100 mL, benzoato sódico 1 g, agua purificada c.s.p. 1000 mL.
Esta composición puede administrarse oralmente, y obtenerse el efecto inmunosupresor y antiinflamatorio de la invención al inhibir la proliferación de linfocitos.

Claims

REIVINDICACIONES
1.- Extracto vegetal con propiedades inmunosupresoras y antiinflamatorias, CARACTERIZADO porque es un extracto de Blechnum chítense con metabolitos secundarios bioactivos que inhiben la proliferación de linfocitos.
2.- Extracto vegetal de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque se obtiene macerando material vegetal seco de B. chítense pulverizado en metanol puro.
3.- Extracto vegetal de acuerdo a la reivindicación 1 , CARACTERIZADO porque contiene polidin, butanodiol, limonin, 5CI-feniltrimetilsilano, alfa-gallocatequina quinona A y gammaglutamilmetionina.
4.- Composición farmacéutica, CARACTERIZADA porque comprende el extracto de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, y excipientes y auxiliares farmacéuticamente aceptables.
5.- La composición farmacéutica de la reivindicación 4, CARACTERIZADA porque la composición se encuentra en forma de jarabes, grageas, comprimidos, solución inyectable, colirio, cremas o ungüentos.
6.- La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, CARACTERIZADA porque la composición se encuentra preferentemente en forma de jarabe y comprende excipientes farmacéuticamente aceptables tales como sacarosa y benzoato sódico.
6.- Uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADO porque sirve para preparar un medicamento.
7.- Uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADO porque sirve para preparar un medicamento útil para prevenir y tratar enfermedades autoinmunes e inflamatorias.
8.- El uso de acuerdo con la reivindicación 7, CARACTERIZADO porque dichas enfermedades autoinmunes son tales como lupus eritematoso, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades inflamatorias crónicas, enfermedades inflamatorias intestinales.
9.- Uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, CARACTERIZADO porque sirve para preparar un medicamento útil para terapia inmunosupresora en caso de trasplante de órganos.
10.- Uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,
CARACTERIZADO porque sirve para preparar un medicamento útil para reducir la proliferación de linfocitos T.
PCT/IB2018/054131 2018-06-07 2018-06-07 Extracto natural de blechnum chilense, con actividad inmunosupresora y antiinflamatoria para inhibir la activación linfocitaria asociada a patologías autoinmunes, antiinflamatorias, y en el rechazo de tejidos de pacientes trasplantados WO2019234476A1 (es)

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CN112362771A (zh) * 2020-10-29 2021-02-12 上海鹿明生物科技有限公司 基于lcms高通量分析植物次生代谢产物的方法及应用

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