WO2018208128A1 - 틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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박성욱
박히준
전송희
김영만
조승연
안소라
김동희
정구원
오승택
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경희대학교 산학협력단
전남대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention is a peony (Paeonia lactiflora), Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba and Car Clove (Eugenia)
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing, ameliorating or treating Parkinson's disease, and a nutraceutical composition comprising a complex extract.
  • Parkinson disease is a common neuropathic disorder, with symptoms such as tremor, rigidity, bradykinsia, and postural instability (Parkinsonism IN: Merritt's neurology, 2000, Ed 10, 679-693). Parkinson's disease also includes microgliosis, astrogliosis, progressive degeneration of dopaminergic neurons, the presence of Lewy bodies in dopaminergic neurons, and substantia nigra pars compacta. Is characterized by the accumulation of alpha -synuclein (Neuron, 2003, 39, 889-909).
  • Parkinson's disease can alleviate the symptoms of Parkinson's disease, but chronic use of the drug can cause side effects that weaken the mind and body (Neurology, 1991, 41, 202-205). It is not developed. The exact cause of Parkinson's disease is unknown, but environmental toxins, genetic factors, and mitochondrial dysfunction have been linked.
  • 6-hydroxydopamine 6-hydroxydopamine
  • MPTP 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine
  • DAT dopamine transporter
  • MPTP reduces dopaminergic neurons in humans and nonhuman primates, causes astrocytes and activates microglia in cerebral black matter rather than specific targets for dopaminergic neurons associated with Parkinson's disease (Nat Med, 1999, 5). (12), 1403-1409), causing typical biochemical or pathological symptoms of Parkinson's disease (Neurosci, 2000, 16 (2), 135-142).
  • Parkinson's disease is also referred to as shaking palsy due to tremors, numbness, sobbing and limb weakness.
  • the most important pathological features of Parkinson's disease include Qi stagnation and blood arrest, lack of liver-yin and lack of liver-yin, And lack of both Gi and blood (Behav Pharmacol, 2006, 17 (5-6), 403-410).
  • l-dopa preparations As drugs for the treatment of Parkinson's disease, l-dopa preparations, dopamine receptor agonists, anticholinergic agents, Eldepryl and the like are known. However, most of these drugs are responsible for controlling symptoms, not for causative treatments, and therefore require consistently continuous drug use. Long-term administration of these drugs causes problems with drug side effects. For example, anticholinergic drugs may show autonomic nervous system abnormalities or mental dysfunctions, and thus are limited to continuous administration to older patients. In addition, in the case of the L-dopa formulation, the effect gradually decreases with long-term use, and the side effects such as the body twisting and abnormal movements of the hands or feet are generated. In addition, surgical treatment such as high frequency nerve stimulation, that is, high frequency destruction or deep brain stimulation, is also performed, but there is a problem that requires invasive surgery and consumes a lot of money.
  • high frequency nerve stimulation that is, high frequency destruction or deep brain stimulation
  • the present inventors have made intensive efforts to develop a composition capable of preventing or treating Parkinson's disease, and as a result, Peony lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Buleurum falcatum, Gardenia (Gardenia)
  • the present invention was completed by confirming that a composition comprising a complex extract consisting of jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba, and Clove (Eugenia caryophyllata) is effective against Parkinson's disease.
  • the present invention is Paeonia lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba, and carp phyllenia It is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of Parkinson's disease comprising a complex extract consisting of.
  • the present invention is Paeonia lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba and Clove.
  • Eugenia caryophyllata to provide a health functional food composition for the prevention or improvement of Parkinson's disease comprising a complex extract consisting of.
  • the present invention is Paeonia lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa It provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of Parkinson's disease comprising a complex extract consisting of), Agastachis Herba and Clove (Eugenia caryophyllata).
  • 'peony' used in the present invention is a plant called the scientific name 'Paeonia lactiflora', and it is distributed in Korea, Mongolia, and East Siberia as a dicotyledonous plant perennial belonging to the genus Butaria.
  • Beautiful flowers are used for horticulture, roots are used as medicine for pain, abdominal pain, dysmenorrhea, amenorrhea, hemostasis, anemia, bruises.
  • 'archbow' used in the present invention is a plant named as the scientific name 'Ligusticum chuanxiong', and is a dicotyledonous plant belonging to the Apiaceae, which is native to China and is grown as a medicinal plant. Efficacy in sedation, pain relief and tonic, so it is used to treat headaches, anemia and gynecological diseases.
  • the term 'donkey' used in the present invention is a plant referred to by the scientific name 'Angelica gigas', and in Korea, the root of a true donkey is used.
  • the benefit of Angelica is blood production that produces blood when blood is scarce. Pharmacologically, Angelica stimulates coronary blood flow and stimulates red blood cell production.
  • 'siho' used in the present invention is a plant, which is referred to as the scientific name 'Bupleurum falcatum', and is a perennial herb of the dicotyledon plant hawthorn apiaceae, also called the north siho or hyacinth. Root contains saponin and fatty oil, and it is used as herbal medicine to treat fever, pain, tonic, respiratory, digestive and circulatory diseases.
  • the term 'garden garden' is a plant named as the scientific name 'Gardenia jasminoides', and it is a cedar blue cedar radish belonging to the quince family, which has blood, diuretic, diurnal, clear, and detoxification effects.
  • the term 'necked bark' used in the present invention is a root peel of peony (Paeonia Suffruticosa), a plant that is harmless to the human body that is used as a medicine in Oriental medicine. Anti-inflammatory, antibacterial and histamine release inhibitory effects on mast cells are known.
  • the term ' ⁇ ' used in the present invention is a medicinal herb made by using the ground part of Agastache rugosa, which is used only in Korea and treats only the abdominal window, anorexia, nausea, vomiting and diarrhea. Cold with digestive problems, vomiting due to planting in summer, diarrhea, bad breath, scabies and ringworms are effective.
  • An aspect of the present invention may be to include tilianin (tilianin) as an active ingredient.
  • the 'tilianin' is a flavonoid having a structure of the formula (1) and is one of the main components of the vertigo and has the effect of improving the arteriosclerosis by inhibiting the accumulation of cholesterol in the body.
  • the term 'clove' used in the present invention is a plant called the scientific name 'Eugenia caryophyllata', a tropical evergreen arachnid, native to the Moluca Islands, and produced on Africa's Zanzibar Island, Indonesia's Sumatra, Brazil, Malaysia, and the like. It is used for vomiting, stomach cancer, abdominal pain, dyspepsia and increased sexual function, gum inflammation and gum pain.
  • kwak hyang, peony, cheonggung, donkey, shiho, gardenia, bark and clove can be used to buy commercially available, or can be used or collected in nature, but is not limited thereto.
  • 'extract' as used in the present invention means a material obtained by separating it from the above-mentioned fennel, peony, celestial organ, Angelica, shiho, gardenia, bark, or cloves, and a conventional fraction solvent known in the art, for example, water , Polar solvents such as C1-C4 alcohols such as ethanol, methanol (e.g. methanol, ethanol, butanol, etc.), and nonpolar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, or a mixed solvent thereof. have.
  • Polar solvents such as C1-C4 alcohols such as ethanol, methanol (e.g. methanol, ethanol, butanol, etc.)
  • nonpolar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, or a mixed solvent thereof. have.
  • the extract of the present invention is dried in the shade of Kwakhyang, Peony, Cheongung, Angelica, Shiho, Gardenia vulgaris, cinnabar, or cloves, about 1 to 10 times its weight, preferably about 2 to 5 times the volume of water, Lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent having a mixing ratio of about 1: 0.1 to 1:10, preferably 1: 0.2 to 1: 3, 20 ° C. to 100 ° C., preferably 30 ° C. to 70 ° C.
  • the extract is repeated two to three times to obtain an extract, and the resultant is filtered under reduced pressure, and the filtered extract is mixed and concentrated under reduced pressure at 20 ° C. to 100 ° C., preferably at 50 ° C. to 70 ° C., using a rotary vacuum concentrator. Removed by water, 1 to 4 carbon atoms Crude extract which is a soluble extract according to a lower alcohol or a mixed solvent thereof can be obtained.
  • the polar solvent soluble extract is 1 to 5 times, preferably 2 to 4 times by adding about 1 to 10 times, preferably about 1 to 5 times the volume of ethanol to the water-soluble fraction obtained through the extraction process of the non-polar solvent soluble component.
  • the ethanol soluble fraction and the water soluble fraction may be obtained by fractionation once, and the solvent fraction may be concentrated under reduced pressure with a rotary vacuum concentrator to remove the solvent to obtain respective extracts.
  • the extract of the present invention may be a water soluble extract or an ethanol soluble extract, more specifically 30% ethanol extract.
  • the extract according to the present invention after extracting 100g of a mixture of Kwakhyang, Peony, Cheongung, Angelica, Siho, Gardenia, Bark, Cloves using a reflux condenser at 100 ° C with 30% ethanol, and then filter Filtered and concentrated under reduced pressure and lyophilized to give 15.47 g of ethanol extract (CGT II, Example 1).
  • the term 'Parkinson' disease used in the present invention is caused by the progressive loss of dopamine neurons distributed in the substantia nigra of the brain, chronic progressive degenerative of the nervous system which is characterized by stability, stiffness, locomotor and postural instability. Means disease.
  • the term 'prevention' refers to any action that inhibits or delays Parkinson's disease by administration of a composition comprising CGT II.
  • the term 'treatment' used in the present invention means all the actions that improve or beneficially change the symptoms of the disease by administration of the composition containing the CGT II.
  • composition of the present invention may be characterized in that the Parkinson's disease improvement effect is improved due to the addition of the fennel and clove extract.
  • the CGT II confirmed the improvement of the excellent behavioral ability and the protective effect of the melanoma progenitor dopaminergic cells compared to CGT and CGT I in MPTP-induced Parkinson's disease model mice (FIGS. 2 and 3).
  • composition comprising the herbal mixture extract of the present invention or a fraction thereof as an active ingredient has an antioxidant effect and a neuronal protective effect, and thus can be usefully used for preventing and treating Parkinson's disease.
  • composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the term 'pharmaceutically effective amount' refers to an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment
  • the effective dose level refers to the individual type and severity, age, sex, drug Can be determined according to the activity of the drug, the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of treatment, factors including the drug used concurrently and other factors well known in the medical field.
  • the CGT II may be administered in an amount of 0.01 to 500 mg / kg, preferably 10 to 100 mg / kg, per day as an active ingredient, and the administration may be administered once or several times a day.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise 0.001 to 50% by weight of the herbal mixture extract or fractions thereof based on the total weight of the composition.
  • compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition for preventing or treating Parkinson's disease of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent in addition to the active ingredient described above.
  • the carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • compositions of the present invention may be used in the form of oral dosage forms, external preparations, suppositories, or sterile injectable solutions, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, respectively, according to conventional methods.
  • it may be prepared by using diluents or excipients such as fillers, weighting agents, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants which are commonly used.
  • Solid preparations for oral administration include, but are not limited to, tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like.
  • Such solid preparations may be prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin and the like.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin and the like.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc can also be used.
  • It may be prepared by adding various excipients such as humectants, sweeteners, fragrances, preservatives and the like in addition to liquid oral liquids or liquid paraffin for oral use.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized formulations and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository utopsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) according to the desired method, and the dosage is determined by the condition and weight of the patient, disease Depending on the degree, drug form, route of administration, and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the present invention is a peony (Paeonia lactiflora), Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba ) And clove (Eugenia caryophyllata) provides a health functional food composition for the prevention or improvement of Parkinson's disease, including a complex extract.
  • 'health functional food' used in the present invention means a food manufactured and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body according to Act No.6775 of the Health Functional Food Act. This means that it is ingested for the purpose of obtaining useful effects on health use such as nutrient control or physiological action on the structure and function of the human body.
  • the dietary supplement composition includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof. , Organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like. Others may contain pulp for the production of natural fruit juices and fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination.
  • the nutraceutical composition may be any one of meat, sausage, bread, chocolate, candy, confectionary, pizza, ramen, gum, ice cream, soup, beverage, tea, functional water, drink, alcoholic beverage and vitamin complex Can be.
  • the health functional food composition may further include a food additive, and whether or not conformity as 'food additive' to the item in accordance with the General Regulations and General Test Law of the Food Additives Code approved by the Food and Drug Administration unless otherwise specified Determined by the relevant standards and standards.
  • the chemical additives such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid, and cinnamic acid, natural additives such as navy dye, licorice extract, crystalline cellulose, guar gum, and sodium L-glutamate Mixed preparations, such as a preparation, an alkali addition agent, a preservative preparation, and a tar pigment preparation, are mentioned.
  • Extracts according to the present invention added to foods, including beverages in the process of preparing the health functional food composition may be appropriately added or reduced its content as needed.
  • the present invention is Paeonia lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Bupleurum falcatum, Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis
  • a method for preventing or treating Parkinson's disease comprising administering to a subject a complex extract consisting of Herba) and Clove (Eugenia caryophyllata).
  • the term "individual” may mean any animal, including humans, who have or are likely to develop Parkinson's disease.
  • the animal may be a mammal such as, but not limited to, a human, a cow, a horse, a sheep, a pig, a goat, a camel, a antelope, a dog, a cat, and the like, which require treatment of similar symptoms.
  • the prophylactic or therapeutic method of the present invention may specifically include administering the composition in a pharmaceutically effective amount to an individual with or at risk of developing Parkinson's disease.
  • the term "administration" refers to introducing the pharmaceutical composition of the present invention to a patient in any suitable manner, the route of administration of the composition of the present invention being oral or parenteral as long as it can reach the target tissue. Administration can be via a variety of routes.
  • the present invention provides Paeonia lactiflora, Ligusticum chuanxiong, Angelica gigas, Buleurum falcatum, for the preparation of a composition for the prevention, treatment, or improvement of Parkinson's.
  • a complex extract consisting of Gardenia jasminoides, Paeonia suffruticosa, Agastachis Herba and Eugenia caryophyllata.
  • composition may be the above-described pharmaceutical composition or nutraceutical composition, the definition of the extract and Parkinson's disease is as described above.
  • composition comprising tilianin of the present invention as an active ingredient has an excellent effect on preventing, improving and treating Parkinson's disease because it improves the behavioral disorder induced by MPTP and restores the loss of dopaminergic neurons.
  • 1 is a graph confirming the neuronal protective effect by the administration of the complex extract in the neuronal cell line SH-SY5Y.
  • Figure 2 is a graph showing the results of behavioral analysis to confirm the inhibitory effect of behavioral degradation by the administration of complex extract in Parkinson's disease animal model. a) Rotarod test, b) Rearing test, c) Open field test.
  • Figure 3 shows the immunohistochemical staining of Tyrosine Hydroxyase (TH) in striatum (Striatum, ST) and black matter (Substantia nigra, SN).
  • TH Tyrosine Hydroxyase
  • Figure 4 is a graph showing the results of HPLC analysis of complex extracts CGT, CGT I and CGT II.
  • Figure 6 is a graph showing the results of HPLC analysis for confirming the content of tilianin in the outline and broad direction.
  • Figure 7 is a graph showing the neuroprotective effect of directional and tilianin in Parkinson's disease cell model; a) neuroprotective effect of quart, b) neuroprotective effect of tilianin.
  • Dry Peony, Cheongung, Angelica, Siho, Gardenia, Clove, Bark Peel and Root Flakes were mixed in a ratio of 6: 4: 4: 3.2: 1.6: 6: 1.6: 6 to 324 g, and then placed in a reflux extractor with 10% of 30% ethanol. Heated at 95 ° C. and further heated for 4 hours from the time when the liquid started to boil. After the heating was stopped and cooled for 30 minutes, the extract was filtered under reduced pressure using two sheets of filter paper, and then a powder sample was prepared using a lyophilizer and used for the experiment.
  • Human neuroblastoma SH-SY5Y cells were cultured under dulbecco's modified eagle's medium (Hyclone, Thermo, USA) medium containing 10% fetal bovine serum and antibiotics (Gibco-BRL, USA). The incubator was maintained at 37 ° C. and gas was mixed with 95% air and 5% CO 2 to ensure proper cell culture conditions. Cells were incubated 24 hours prior to experiment to 1 ⁇ 10 6 in 96-well plates.
  • mice Twelve week old male C57BL / 6 mice weighing 22-26 g (Central Lab. Animal Inc., Seoul Republic of Korea) were used. Animals were 23 ⁇ with a 12-hour day and a 12-hour night cycle following the guidelines of the NIH (NIH publication No. 85-23, revised 1985) and the Korean Academy of Medical Sciences (KHUASP (SE) -14-052). It was kept at room temperature of 1 ° C.
  • MTT reduction assay was performed using the SH-SY5Y cell line of Example 2.
  • each complex extract CCT, CGT I, CGT II
  • 6-OHDA 6-hydroxydopamine
  • MTT solution was added to each well so that the final concentration of the 96-well plate was 0.5 mg / ml.
  • the medium and the MTT solution were removed, followed by stirring with DMSO.
  • the UV absorbance was measured at 540 nm using a microplate reader (Molecular device, USA).
  • the measured absorbance value was calculated using the following equation (1) cell viability (cell viability).
  • CGT II showed the best cell viability at each concentration compared to CGT or CGT I in the presence of the neurotoxin 6-OHDA. This confirmed that the composition of the present invention has neuronal cell protective activity in vitro.
  • Parkinson's disease Generally, dopamine is depleted within minutes of MPTP injection, and symptoms of severe Parkinson's disease, including stiffness, convulsions and bradyness, appear.
  • the following experiment was conducted to test the motor functionality.
  • This experiment is a test that measures the time to run on a rod of spinning circle, which measures the time when the mouse runs on the rod and falls down.
  • the total measurement time was measured at 480 seconds, and the speed at which the rod rotates was set to increase gradually from 0 to 35 rpm.
  • An experimental animal was placed in a cylindrical plastic cylinder having a height of 20 cm and a diameter of 12 cm, and a camera was installed for 5 minutes. The number of contact between the cylinder wall and both forefoots was recorded.
  • the open flied test is an experimental method for evaluating the walking ability of the animals. The number of times the animals pass through the central area of the activity cage was measured.
  • Activity cage was 40 ⁇ 40 ⁇ 30 cm 2 with white cage. Five minutes of free movement of the experimental animals was photographed by camera on the activity cage, and the distance traveled by using the program was analyzed. After the evaluation, the activity cage was cleaned with 70% ethyl alcohol, dried sufficiently, and the following experimental animals were evaluated.
  • mice were sacrificed on day 7 after the last MPTP injection in Example 3 and sprinkled cold 4% paraformaldehyde (PFA) in 0.2 M phosphate buffer transcardially. Each brain was isolated and fixed at 4 ° C. with 4% PFA all day and soaked in 30% sucrose solution to prevent freezing. Frozen brain was cut into 40 ⁇ m sections using a frozen slicer (CM1850; Leica, Germany) and stored in a 4 ° C. cryorotectant (30% ethylene glycol, 30% glycol, 0.02M PB) until use. It was. In immunohistochemistry, brain sections were washed with 0.05 M PBS containing PBS and 3% H 2 O 2 and blocked with 1% BSA and standard goat serum.
  • PFA paraformaldehyde
  • TH (1: 1000; Santa Cruz Biotechnology, CA, USA) was added to rabbit anti-tyrosine hydroxylase and incubated at room temperature all day. After incubation of brain tissue with biotin-attached anti-rabbit IgG (Vector Laboratories Inc., CA, USA) for 1 hour, and finally, ABC reagent (for 1 hour at room temperature) Vector Laboratories Inc., CA, USA). Peroxidase activity was incubated for 2 minutes in a solution containing 0.02% diaminobenzidine and 0.003% hydrogen peroxide in 1 M TBS (tris-buffered saline, pH7.5). . Sections were placed on gelatin-coated slides, dried to drain moisture and covered with coverslips.
  • TBS tris-buffered saline, pH7.5
  • Photographs of striatum and substantia nigra were taken using a bright field microscope (BX51; Olympus, Japan).
  • TH-immunopositivity in striatum was measured using Image Pro version 6.0 for Window (Media Cybernetics Inc., MD, USA). The number of TH-positive cells in SN was counted.
  • the black matter was also confirmed to damage neurons by the administration of MPTP compared to the control group, but the administration of CGT II was confirmed to protect the neuronal cell death from neurotoxicity.
  • CGT II exhibited a therapeutic effect of Parkinson's disease by inhibiting the loss of dopaminergic neurons in the medulla and striatum.
  • Example 1 0.1 g of the 30% ethanol complex extract prepared in the same manner as in Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 was placed in a volumetric flask and ultrasonically extracted for 60 minutes in 9 mL of 100% methanol. After ultrasonic extraction, 10 mL of 100% methanol was added, mixed well with a magnetic stirrer for 60 minutes, and filtered through a 0.2um polyvinylidene difluoride (PVDF) filter. This is referred to as sample 1, and the reagent obtained by adding 70% ethanol instead of 100% methanol is prepared as sample 2 in the same manner.
  • PVDF polyvinylidene difluoride
  • HPLC high-performance liquid chromatography
  • Standard stock solution is dissolved in methanol from standard geniposide to decursin except tilianin in order of 0.15mg / mL, 0.15mg / mL, 0.1mg / mL, 0.25mg / mL, 0.1mg It was set as the concentration of / mL, 0.5 mg / mL, and 0.15 mg / mL.
  • the tilianin was dissolved in 70% ethanol, solubilized for 60 minutes and then dissolved well, and quantitatively analyzed at a final concentration of 0.05 mg / mL.
  • Example 2 Specifically, 0.1% of the 30% ethanol complex extract (CGT-II) and the single herbal extract prepared in the same manner as in Example 1 were put in a volumetric flask, followed by ultrasonic extraction for 60 minutes in 9 mL of 70% ethanol. After ultrasonic extraction, 10 mL of 70% ethanol was adjusted, mixed well with a magnetic stirrer for 60 minutes, and filtered through a 0.2um PVDF (polyvinylidene difluoride) filter. This is used as the test liquid.
  • CCT-II 30% ethanol complex extract
  • HPLC high-performance liquid chromatography, high-performance liquid chromatography
  • MTT reduction assay was performed using SH-SY5Y cell line of Example 2 in order to confirm the effect of protecting the neuronal damage of the extract (30% ethanol) and tilianin by 6-hydroxy dopamine treatment.
  • 6-hydroxydopamine (6-OHDA) 200 ⁇ M was treated.
  • MTT solution was added to each well so that the final concentration of the 96-well plate was 0.5 mg / ml.
  • the medium and the MTT solution were removed, followed by stirring with DMSO.
  • the UV absorbance was measured at 540 nm using a microplate reader (Molecular device, USA).

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Abstract

본 발명은 틸리아닌을 함유하는 곽향(Agastachis Herba) 및 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 건강기능식품에 대한 것으로, 본 발명의 조성물은 MPTP에 의해 유도된 행동 장애를 개선시키고, 도파민성 뉴런의 손실을 회복시키므로 파킨슨병의 예방, 개선 및 치료에 우수한 효과가 있다.

Description

틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물, 및 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
파킨슨병(Parkinson disease, PD)은 흔한 신경병성 장애로, 떨림증(tremor), 경직(rigidity), 운동완서(bradykinesia), 자세의 불안정(postural instability) 등의 증상이 나타난다(Parkinsonism IN: Merritt's neurology, 2000, Ed 10, 679-693). 또한 파킨슨병은 미세아교세포증(microgliosis), 성상교세포증(astrogliosis), 도파민성 뉴런의 진행적인 퇴화, 도파민성 뉴런에서 루이 소체(Lewy bodies)의 존재, 및 뇌흑질 치밀부(substantia nigra pars compacta)에서 알파-시누클레인(α-synuclein)이 축적되는 특징을 가진다(Neuron, 2003, 39, 889-909). 파킨슨병의 증상을 경감시키는 약물이 다 수 있으나, 약물의 만성적인 사용은 심신을 약화시키는 부작용을 초래하고(Neurology, 1991, 41, 202-205), 현재까지는 병의 진행을 막을 수 있는 약물은 개발되지 않은 실정이다. 파킨슨병의 정확한 원인은 알려지지 않았지만, 환경적인 독소, 유전적인 요인, 미토콘드리아의 기능 장애가 관련되어 있는 것으로 파악된다.
파킨슨병의 모델로서, 신경독소인 6-히드록시도파민(6-hydroxydopamine, 6-OHDA) 또는 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)이 주로 이용된다(Nat Rev Neurosci, 2001, 2(5), 325-334). 6-OHDA는 도파민 수송체(DAT)에 의해 흡수되고, 자유 라디칼(free radical)을 만들어낸다. MPTP는 파킨슨병에 관련된 도파민성 뉴런을 특정 표적으로 하기보다는 인간과 비인간영장류에서 도파민성 뉴런을 감소시키고, 성상교세포증을 일으키며, 뇌흑질 치밀부에서 소교세포를 활성화시켜(Nat Med, 1999, 5(12), 1403-1409), 파킨슨병의 전형적인 생화학적 또는 병리학적 증상을 야기한다(Neurosci, 2000, 16(2), 135-142).
전통의학에서 파킨슨병은 몸의 떨림, 무감각, 흐느적거림, 사지가 약해지는 증상 때문에 중풍(shaking palsy)이라고도 일컬어진다. 동아시아 전통 의학의 이론에 따르면, 파킨슨병의 가장 중요한 병리학적 특징은 기(Qi)의 침체와 혈액의 정지, 간-음(liver-Yin)의 부족과 콩팥-음(liver-Yin)의 부족, 및 기와 혈액 모두가 부족한 것이다(Behav Pharmacol, 2006, 17(5-6), 403-410).
파킨슨병의 치료를 위한 약물로서, 엘-도파(l-dopa) 제제, 도파민 수용체 작용제, 항콜린 약제, 엘데프릴(Eldepryl) 등이 알려져 있다. 그러나, 이들 약물들 대부분은 원인적인 치료가 아니라 증상을 조절하는 역할을 하는 것이며, 따라서 꾸준하게 지속적인 약물의 복용을 필요로 한다. 이러한 약물들의 장기 투여는 약물 부작용의 문제점을 야기하게 된다. 예를 들어, 항콜린 약제들은 자율 신경계 이상이나 정신기능의 이상 등이 나타날 수 있어 고령의 환자들에게 지속적으로 투여하는 것에 한계가 있다. 또한, 엘-도파 제제의 경우 장기간 동안의 복용에 따라 점차적으로 효과가 떨어지고, 몸이 뒤틀리고 손이나 발이 저절로 움직이는 이상운동이 생기는 등의 부작용이 발생하게 된다. 기타, 고주파를 이용한 신경자극술 즉, 고주파 파괴술 또는 심부 뇌자극술 등의 수술 치료도 행해지고 있으나, 침습적인 수술을 필요로 하고 또한 많은 비용이 소모되는 문제가 있다.
한편, 중국에는 많은 양의 식물 자원이 존재한다. 146,900종 이상의 식물 종이 중국에서 발견되었고, 이 중 22,500종 이상이 약용 식물로 밝혀졌으며(Fitoterapia, 2013, 84, 273-285), 현재 파킨슨병을 치료할 수 있는 약용 식물은 많은 연구가 진행중에 있으나 아직도 효과적인 천연물 치료제가 필요한 실정이다.
이에, 본 발명자들은 파킨슨병을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물을 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 조성물이 파킨슨병에 효능이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하기 위한 것이다.
또한, 본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용된 용어 '작약'은, 학명 'Paeonia lactiflora'로 일컬어지는 식물로서, 미나리아재비과에 속하는 여러해살이 쌍떡잎식물로 한국, 몽골 및 동시베리아 등에 분포한다. 꽃이 아름다워 원예용으로 쓰며, 뿌리는 진통, 복통, 월경통, 무월경, 토혈, 빈혈, 타박상 등의 약재로 쓰인다.
본 발명에서 사용된 용어 '천궁'은, 학명 'Ligusticum chuanxiong'으로 일컬어지는 식물로서, 미나리과에 속하는 쌍떡잎식물로 중국 원산이며 약용 식물로 재배한다. 진정, 진통, 강장 등에 효능이 있어 두통, 빈혈증, 부인병 등을 치료하는데 쓰인다.
본 발명에서 사용된 용어 '당귀'는, 학명 'Angelica gigas'로 일컬어지는 식물로서, 한국에서는 참당귀의 뿌리를 사용한다. 당귀의 효능은 피가 부족할 때 피를 생성해 주는 보혈작용이다. 약리학적으로 당귀는 관상동맥의 혈류량을 촉진시키고, 적혈구 생성을 왕성하게 한다.
본 발명에서 사용된 용어 '시호'는, 학명 'Bupleurum falcatum'으로 일컬어지는 식물로서, 쌍떡잎 식물 산형화목 미나리과의 여러해살이 풀로 북시호 또는 묏미나리라고도 한다. 뿌리에는 사포닌과 지방유 등이 함유되어 있어, 한방에서는 해열, 진통, 강장제나 호흡기, 소화기, 순환기 질환 치료 약재로 사용되고 있다.
본 발명에서 사용된 용어 '치자인'은, 학명 'Gardenia jasminoides'로 일컬어지는 식물로서, 꼭두서니과에 속하는 사철 푸른 떨기나무무로 양혈, 이뇨, 제번, 청열, 해독 효과가 있다.
본 발명에서 사용된 용어 '목단피'는 모란(Paeonia Suffruticosa)의 뿌리껍질로, 한의학에서 약재로 사용되고 있는 인체에 무해한 식물이다. 항염증, 항균 및 비만세포에서 히스타민 유리 억제 작용 등이 알려져 있다.
본 발명에서 사용된 용어 ‘곽향’은, 배초향(Agastache rugosa)의 지상부를 이용하여 만든 약재로, 한국에서만 쓰이며 복부창만, 식욕부진, 메스꺼움, 구토, 설사 등을 치료한다. 소화장애를 동반한 감기, 여름철 식체로 인한 구토, 설사, 구취, 옴이나 버짐 등에 효과가 있다.
본 발명의 곽향은 틸리아닌(tilianin)을 유효성분으로 포함하는 것일 수 있다.
상기‘틸리아닌(tilianin)’은 하기 화학식 1의 구조를 가진 플라보노이드로 곽향의 주요 성분중 하나이며 체내의 콜레스테롤 축적을 억제해 동맥경화를 개선하는 효과가 있다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2018005458-appb-I000001
구체적인 일 실험예에 있어서, 본 발명의 복합추출물(CGT II)을 HPLC 분석한 결과, 다른 복합 추출물(CGT, CGT I)과 비교하여 특이한 피크를 발견하였고, 추가 분석을 통해 해당 피크가 틸리아닌이라는 것을 확인하였다. 또한, 해당 틸리아닌이 곽향에는 함유되어 있으나 광곽향에는 함유되어 있지 않는 것을 확인하였다 (도 4 내지 6).
본 발명에서 사용된 용어 '정향'은, 학명 'Eugenia caryophyllata'로 일컬어지는 식물로서, 열대 상록성 아교목으로 몰루카 제도가 원산지이며 탄자니아의 잔지바르 섬, 인도네시아의 수마트라, 브라질, 말레이시아 등에서 생산된다. 구토, 위암, 복통, 소화불량과 성기능 증대, 잇몸염증 및 잇몸통증 등에 쓰인다.
본 발명에서 상기 곽향, 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자인, 목단피 및 정향은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용된 용어 '추출물'이란 상기 곽향, 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자인, 목단피 또는 정향으로부터 분리하여 얻은 물질을 의미하며, 당업계에서 공지된 통상적인 분획 용매, 예를 들어 물, 에탄올, 메탄올과 같은 C1-C4 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 부탄올 등) 등의 극성 용매, 및 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄 등의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 분리할 수 있다.
구체적으로 본 발명의 추출물은 곽향, 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자인, 목단피 또는 정향을 음건하여 세절한 것을 그 중량의 약 1 내지 10배, 바람직하게는 약 2 내지 5배 부피의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:0.2 내지 1:3의 혼합비를 갖는 혼합용매로 20℃ 내지 100℃, 바람직하게는 30℃ 내지 70℃의 추출 온도에서 약 1 시간 내지 2일, 바람직하게는 2 시간 내지 1일 동안 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 반복하여 추출물을 수득한 후, 감압여과하고 여과한 추출물을 혼합하여 회전진공농축기로 20℃ 내지 100℃, 바람직하게는 50℃ 내지 70℃에서 감압 농축하여 유기용매를 제거하여 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매에 따른 가용추출물인 조추출물을 얻을 수 있다.
또한, 극성 용매 가용추출물은 비극성 용매 가용성분 추출과정을 거친 수가용성 분획부에 약 1 내지 10배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 에탄올을 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 에탄올 가용성 분획부와 수가용성 분획부를 수득할 수 있으며, 용매 분획부를 회전 진공 농축기로 감압농축시켜 용매를 제거하여 각각의 추출물을 얻을 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 추출물은 수 가용 추출물 또는 에탄올 가용 추출물일 수 있고, 더욱 구체적으로는 30% 에탄올 추출물일 수 있다.
구체적인 일 실시예에 있어서, 본 발명에 따른 추출물은, 곽향, 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자인, 목단피, 정향의 혼합물 100g을 100℃에서 30% 에탄올로 환류 응축기를 이용하여 추출한 후, 필터를 이용하여 여과한 다음 감압 농축하고 동결 건조하여 에탄올 추출물 15.47g을 제조하였다(CGT II, 실시예 1).
본 발명에서 사용된 용어 '파킨슨' 질환은 뇌의 흑질(substantia nigra)에 분포하는 도파민의 신경세포가 점차 소실되어 발생하며 안정떨림, 경직, 운동완만 및 자세 불안정성이 특징적으로 나타나는 신경계의 만성 진행성 퇴행성 질환을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 '예방'은 상기 CGT II를 포함하는 조성물의 투여로 파킨슨 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 본 발명에서 사용되는 용어 '치료'는, 상기 CGT II를 포함하는 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 조성물은 곽향 및 정향 추출물의 첨가로 인해 파킨슨 병 개선 효과가 향상되는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
구체적인 일 실험예에서 상기 CGT II는 MPTP-유도 파킨슨병 모델 마우스에서 CGT 및 CGT I과 비교하여 우수한 행동능력의 향상 및 흑질 선조체 도파민성 세포를 보호 효과를 확인하였다(도 2 및 도 3).
따라서 본 발명의 한방혼합 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 항산화 효과 및 신경세포 보호 효과를 가지므로 파킨슨 질환 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있는 것을 알 수 있었다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용된 용어 '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 CGT II는 유효성분으로 1일 0.01 내지 500mg/kg으로, 바람직하게는 10 내지 100mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 한방혼합 추출물 또는 이의 분획물을 0.001 내지 50% 중량백분율로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
상기 추출물 및 파킨슨 질환의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용된 용어, '건강기능식품'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일쥬스 및 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 건강기능식품 조성물은 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 과자류, 피자, 라면, 껌류, 아이스크림류, 스프, 음료수, 차, 기능수, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 중 어느 하나의 형태일 수 있다.
또한 상기 건강기능식품 조성물은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, '식품첨가물'로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 '식품첨가물공전'에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류들을 들 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물을 제조하는 과정에서 음료를 포함한 식품에 첨가되는 본 발명에 따른 추출물은 필요에 따라 그 함량을 적절히 가감할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "개체"란, 파킨슨 질환이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 상기 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 파킨슨 질환이 발병하였거나 발병할 위험이 있는 개체에 상기 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 파킨슨의 예방, 치료, 또는 개선을 위한 조성물의 제조를 위한, 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물의 용도를 제공한다.
상기 조성물은 전술한 약학적 조성물 또는 건강기능식품 조성물일 수 있으며, 상기 추출물 및 파킨슨 질환의 정의는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 조성물은 MPTP에 의해 유도된 행동 장애를 개선시키고, 도파민성 뉴런의 손실을 회복시키므로 파킨슨병의 예방, 개선 및 치료에 우수한 효과가 있다.
도 1은 신경 세포주 SH-SY5Y에서 복합추출물의 투여에 의한 신경세포 보호 효과를 확인한 그래프이다.
도 2는 파킨슨 병 동물 모델에서 복합추출물 투여에 의한 행동능력 저하 억제 효과를 확인하기 위한 행동분석 결과를 나타낸 그래프이다. a) Rotarod test, b) Rearing test, c) Open field test.
도 3은 선조체(Striatum, ST) 및 흑질(Substantia nigra, SN)에서 에서 TH(Tyrosine Hydroxyase)의 면역조직화학 염색 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 복합추출물 CGT, CGT I 및 CGT II의 HPLC 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 CGT II 내 특이 피크의 확인을 위한 HPLC 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 곽향 및 광곽향에서 틸리아닌의 함유 확인을 위한 HPLC 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 파킨슨 질환 세포모델에서 곽향 및 틸리아닌의 신경보호효과를 나타낸 그래프이다; a) 곽향의 신경보호효과, b) 틸리아닌의 신경보호효과.
이하 본 발명을 하기 예에 의해 상세히 설명한다. 다만, 하기 예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 하기 예에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 곽향 첨가 30% 에탄올 복합추출물 ( CGT -II)의 제조
건조한 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자, 정향, 목단피 및 곽향을 6:4:4:3.2:1.6:6:1.6:6 비율로 324g으로 혼합한 후 환류추출기에 30% 에탄올 10배수와 함께 넣고 95℃에 가열하여 탕액이 끓기 시작하는 시점부터 4시간 동안 더 가열하였다. 가열을 중지하고 30분간 냉각시킨 다음, 상기 추출액을 여과지 2장을 사용하여 감압 여과한 후, 동결건조기를 사용하여 분말시료를 만들어 실험에 사용하였다.
비교예 1. 30% 에탄올 복합추출물 ( CGT )의 제조
건조한 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자 및 목단피를 6:4:4:3.2:1.6:1.6 비율로 324g으로 혼합한 후 환류 추출기에 30% 에탄올 10배수와 함께 넣고 95℃에 가열하여 탕액이 끓기 시작하는 시점부터 4시간 동안 더 가열 추출 하였다. 가열을 중지하고 30분간 냉각 시킨 다음, 상기 추출액을 여과지 2장을 사용하여 감압 여과한 후, 동결건조기를 사용하여 분말시료를 만들어 실험에 사용하였다.
비교예 2. 광곽향 첨가 30% 에탄올 복합추출물 ( CGT -I)의 제조
건조한 작약, 천궁, 당귀, 시호, 치자, 정향, 목단피 및 광곽향을 6:4:4:3.2:1.6:6:1.6:6 비율로 324g으로 혼합한 후 환류 추출기에 30% 에탄올 10배수로 95℃에 가열하여 탕액이 끓기 시작하는 시점부터 4시간 동안 더 가열하였다. 가열을 중지하고 30분간 냉각한다음, 상기 추출액을 여과지 2장을 사용하여 감압 여과한 후, 동결건조기를 사용하여 분말시료를 만들어 실험에 사용하였다.
실시예 2. SH - SY5Y 신경세포주의 준비
인간신경아세포종 SH-SY5Y cell은 10％ 소 태아 혈청 및 항생제 (Gibco-BRL, USA)가 함유된 dulbecco’s modified eagle’s medium (Hyclone, Thermo, USA) 배지 하에서 배양하였다. 배양기는 37℃ 온도를 유지했고 95％ 공기와 5％ CO2가 혼합된 기체가 계속 공급되어 세포 배양의 적절한 조건을 갖추었다. 세포는 96-웰 플레이트에 1x106이 되도록 실험 24시간 전에 배양하였다.
실시예 3. 동물
22-26g의 무게를 갖는 12주 된 수컷 C57BL/6 마우스(Central Lab. Animal Inc., Seoul Republic of Korea)를 이용하였다. 동물들은 NIH(NIH publication No.85-23, revised 1985)와 한국의료과학아카데미(KHUASP(SE)-14-052)의 가이드라인을 따라 12시간의 낮, 12시간의 밤의 사이클을 갖는 23 ± 1℃의 실내 온도에서 유지하였다.
생체 내 시험을 위해 마우스를 무작위적으로 5개의 그룹으로 나누었다: (1) 대조군 (n=6; 복강내 식염수 주사), (2) MPTP(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) (n=5; 복강내 30mg/kg/일 농도로 MPTP 주사) (3) CGT (n=5; 복강내 MPTP+CGT 주사), (4) CGT I (n=5; 복강내 MPTP+ CGT I 주사). (5) CGT II (n=5; 복강내 MPTP+ CGT II 주사)
실험예 1. 신경 세포주 SH - SY5Y에서 복합추출물의 6- 하이드록시도파민 독성에 의한 세포보호 활성 분석
6-하이드록시도파민 처리에 의한 신경세포 손상을 보호하는 효과를 확인하기 위하여, 실시예 2의 SH-SY5Y세포주를 이용하여 MTT reduction assay를 진행하였다. SH-SY5Y세포주가 배양되어있는 96-웰 플레이트에 각 복합추출물(CGT, CGT I, CGT II)을 녹인 DMSO를 30분간 처리한 후, 6-하이드록시도파민(6-OHDA) 200μM을 처리하였다. 6-OHDA 처리 24시간 후 96-웰 플레이트의 최종농도가 0.5 ㎎/㎖이 되도록 MTT 용액을 각 well에 넣었다. 배양기에서 2시간 동안 반응시키고 배지와 MTT 용액을 제거한 후 DMSO를 넣어 교반하였다. 완전히 용해되었을 때 마이크로 플레이트 리더 (Molecular device, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 UV 흡광도를 측정하였다.
측정된 흡광도 값은 다음 수학식 1을 이용하여 세포생존율(cell viability)을 계산하였다.
[수학식 1]
세포 생존율 (％)= [(대조군 O.D.- 시험군 O.D.)/대조군 O.D.]×100
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 신경독소인 6-OHDA의 존재 하에 CGT 또는 CGT I과 비교하여 CGT II가 각 농도에서 가장 우수한 세포생존율을 나타내었다. 이를 통해 본 발명의 조성물이 in vitro에서 신경세포 보호 활성을 가지는 것을 확인하였다.
실험예 2. MPTP 유도 파킨슨병 동물모델에서 복합추출물의 행동 능력 향상 효과
일반적으로, MPTP 주사 후 수분 이내에 도파민이 고갈되며, 강직, 경련 및 운동완서(bradykinesia)를 포함하는 심각한 파킨슨병의 증상이 나타난다. 먼저, 운동 기능성을 테스트하기 위해 하기와 같은 실험을 진행하였다.
2-1. rotarod test
이 실험은 돌아 가는 원으로 된 막대 위에서 달리는 시간을 측정하는 검사로서, 마우스 가 막대 위에서 달리다가 밑으로 떨어지는 시간을 측정하였다. 총 측정 시간은 480초로 측정하였으며 막대가 돌아가는 속도는 0에서 35rpm으로 점점 속도가 증가하도록 설정하여 측정하였다
2-2. rearing test
높이 20 cm, 원지름 12cm의 원통형 플라스틱 실린더에 실험동물을 넣고 카메라를 설치하여 5분 동안 촬영하였다. 실린더 벽면과 양측 앞발 모두 접촉하는 횟수를 기록하였다.
2-3. open field test
Open flied test는 실험동물의 보행 능력을 평가하기 위한 실험방법으로 실험동물이 activity cage 내 중앙 영역을 지나가는 횟수를 측정하였다.
Activity cage 규격은 40 Ⅹ 40 Ⅹ 30 ㎠ 으로 하얀 색상의 cage를 사용하였다. Activity cage 상에서 한 마리씩 5분간 실험동물의 자유로운 움직임을 카메라를 통해 촬영하였고 프로그램을 이용하여 촬영한 영상을 분석하여 움직인 거리를 수치화 하였다. 평가가 끝난 후 70% ethyl alcohol를 이용해 activity cage를 닦고 충분히 말린 후 다음 실험동물을 평가하였다.
행동 실험 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 세 종류의 행동실험 모두 정상군에 비해 MPTP 투여군의 행동능력이 감소한 것을 확인할 수 있었으며 CGT, CGT-I, CGT-II를 투여한 실험군은 rotarod test 및 rearing test에서 유의적인 행동능력의 회복 효과를 나타냈다. 특히, CGT-II는 모든 행동실험에서 대조군에 비해 유의적인 차이를 나타내는 동시에 CGT 및 CGT-I과 비교하여 가장 우수한 행동능력 회복효과를 나타내어 CGT-II의 우수한 파킨슨 질환의 치료효과를 확인할 수 있었다.
실험예 3. MPTP 유도 파킨슨병 동물모델의 흑질 및 선조체에서 복합추출물의 도파민성 세포 보호 효과
실시예 3에서 실시한 마지막 MPTP 주사 후, 7일 째 되는 날 마우스를 희생시키고, 경심관류로(transcardially) 0.2 M 인산 완충액에 들어있는 차가운 4% PFA(paraform aldehyde)를 뿌렸다. 각각의 뇌를 분리하여 4% PFA를 이용하여 4℃에서 하루 종일 고정시켰고, 동결 방지를 위해 30% 수크로스 용액에 담갔다. 냉동된 뇌는 동결박편제작기(CM1850; Leica, Germany)를 이용하여 40㎛ 절편으로 잘랐고, 사용할 때까지 4℃ 크라이오텍턴트(cryorotectant, 30% 에틸렌 글리콜, 30% 글리콜, 0.02M PB)에 보관하였다. 면역 조직 화학(Immunohistochemistry)에서, 뇌 절편을 PBS와 3% H2O2가 들어간 0.05 M PBS로 씻어내었고, 1% BSA와 표준 염소 혈청을 이용하여 블록킹하였다. 래빗 항-티로신 히드록실레이스(rabbit anti-tyrosine hydroxylase)에 TH(1:1000; Santa Cruz Biotechnology, CA, USA)를 넣고 하루 종일 실내 온도에서 인큐베이션하였다. 1시간 동안 비오틴(biotin)이 부착된 항-래빗(anti-rabbit) IgG(Vector Laboratories Inc., CA, USA)를 이용하여 뇌 조직을 인큐베이션한 후, 마지막으로 실내 온도에서 1시간 동안 ABC 시약(Vector Laboratories Inc., CA, USA)을 처리하였다. 퍼옥시다제(peroxidase) 활성을 1 M TBS(tris-buffered saline, pH7.5)에 0.02% 디아미노벤지딘(diaminobenzidine)과 0.003% 히드로겐 퍼옥시드(hydrogen peroxide)가 들어간 용액에서 2분 동안 인큐베이션했다. 절편을 젤라틴이 코팅된 슬라이드 위에 올리고, 건조하여 수분을 뺀 후, 커버슬립(coverslip)으로 덮었다. 명시야 현미경(BX51; Olympus, Japan)을 이용하여 선조체(striatum)와 흑질(substantia nigra)의 사진을 찍었다. 선조체에서 TH-면역양성반응(immunopositivity)은 Image Pro version 6.0 for Window(Media Cybernetics Inc., MD, USA)를 이용해 측정하였다. SN에서 TH-양성반응인 세포의 수를 세었다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 선조체에서 TH의 광학적 활성을 대조군과 비교했을 때, MPTP의 투여는 도파민성 섬유의 극적인 퇴화를 야기하였다. 하지만, CGT II의 투여는 MPTP에 의해 유발된 섬유의 손실을 보호하는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 다른 복합추출물(CGT 및 CGT I)과 비교하여 더욱 현저한 효과를 나타내었다.
흑질 또한 대조군과 비교하여 MPTP의 투여에 의해 손상된 뉴런을 확인할 수 있었으나 CGT II의 투여에 의해 신경 독성으로부터 뉴런 세포의 사멸을 보호하는 것을 확인할 수 있었다.
종합하면, CGT II는 흑질과 선조체의 도파민성 신경세포 소실을 억제하여 파킨슨 질환의 치료효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 4. 복합추출물 CGT , CGT -I, CGT -II의 성분 확인
4-1. 복합추출물의 검액 제조
구체적으로, 실시예 1 및 비교예 1, 2와 동일한 방법으로 제조한 30% 에탄올 복합추출물 0.1g을 Volumetric flask에 넣고 9 mL의 100% 메탄올을 넣어 60분간 초음파 추출한다. 초음파 추출 후 100% 메탄올로 10mL을 맞추고 60분간 magnetic stirrer로 잘 혼합해주고 0.2um PVDF(polyvinylidene difluoride) 필터로 여과하였다. 이 것을 검액 1로 하고, 동일한 방법으로 100% 메탄올 대신 70% 에탄올을 넣어 얻은 시약을 검액 2로 한다.
4-2. 복합추출물의 성분 HPLC 패턴 분석
30% 에탄올로 추출한 복합추출물의 성분에 대하여 HPLC(고속 액체 크로마토그래피, high-performance liquid chromatography)를 수행하였다.
복합추출물의 정성분석에 사용되는 표준물질은 게니포시드(Geniposide)(치자), 패오니플로린(Paeoniflorin)(작약), 틸리아닌(Tilianin)(곽향), 패오놀(Paeonol)(목단피), 유게놀(Eugenol)(정향), 사이코사포닌(Saikosaponin A)(시호), 리구스틸라이드(Ligustilide)(천궁), 데쿠르신(Decursin)(당귀)이다. 표준 저장용액은 틸리아닌을 제외한 표준품 게니포시드(Geniposide)부터 데쿠르신(Decursin)까지 메탄올에 용해시켜 차례대로 0.15mg/mL, 0.15mg/mL, 0.1mg/mL, 0.25mg/mL, 0.1mg/mL, 0.5mg/mL, 0.15mg/mL의 농도로 하였다. 틸리아닌은 70% 에탄올에 녹여 60분간 초음파 추출 후 잘 용해시킨 다음 최종농도 0.05mg/mL 로 하여 정량 분석하였다.
시료는 30℃에서 YMC Pack Pro C18 (250 x 4.6 mm, 5um)(Kyoto, 일본)으로 분리하였다. 검출 파장은 UV 210 nm (사이코사포닌 A, 리구스틸라이드) 및 230 nm(게니포시드, 패오니플로린, 틸리아닌, 패오놀, 유게놀, 데쿠르신)이다. 이동상은 (A) 아세토나이트릴(acetonitrile), (B) 물로 표 1의 gradient 조건으로 구성하여, 유속 1.0 mL/분으로 하였다.
Figure PCTKR2018005458-appb-T000001
그 결과 도 4에 나타낸 바와 같이, 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II)에서 타 복합추출물 (CGT, CGT-I)과 차별되게 Retention Time (RT) 31분에서 특이 Peak가 검출되었다. PDA (Photodiode Array) detector를 통하여 spectrum을 확인한 결과, CGT-II 혼합추출물의 고유 특이 Peak는 CGT 및 CGT-I 혼합추출물에서는 발견되지 않았다.
실험예 5. 복합추출물 ( CGT -II)의 특이 Peak 유래생약 확인
5-1. 복합추출물 ( CGT -II) 및 단일 생약 추출물 ( 곽향 ) 검액 제조
실시예 1과 동일한 추출법으로 제조한 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 및 30% 에탄올 단일생약추출물 (곽향)을 실험예 4-1의 검액 2 제조법에 따라 검액을 제조하였다.
5-2. 복합추출물 ( CGT -II) 및 단일 생약 추출물 ( 곽향 ) 구성성분 HPLC 분석
30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 에서 검출되는 특이 Peak의 유래를 확인하기 위해서 HPLC(고속 액체 크로마토그래피, high-performance liquid chromatography)를 수행하였다.
실험예 4-2의 방법과 동일하게 틸리아닌을 70% 에탄올에 넣어 잘 용해한 다음 0.05mg/mL 최종농도로 하여 표준액으로 하였고, 실험예 5-1과 동일하게 제조한 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 및 30% 에탄올 단일생약 추출물 (곽향) 검액을 함께 분석하였다.
그 결과 도 5에 나타난 바와 같이, 복합추출물 (CGT-II)에서 검출된 특이 Peak의 RT가 Tilianin 및 30% 에탄올 단일 생약 추출물 (곽향)에서도 동일하다는 것을 확인하였다.
또한, PDA (Photodiode Array) detector를 통하여 spectrum을 검사한 결과, 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II)의 특이 Peak가 곽향에서 유래되는 Tilianin 성분임을 확인하였다.
실험예 6. 광곽향에서의 Tilianin 함유 여부 확인
6-1. 30% 에탄올 복합추출물 ( CGT -II) 및 단일생약 추출물 ( 곽향 , 광곽향 ) 검액 제조
구체적으로, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 제조한 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 및 단일생약추출물 0.1g 각각을 Volumetric flask에 넣고 9 mL의 70% 에탄올을 넣어 60분간 초음파 추출한다. 초음파 추출후 70% 에탄올로 10mL을 맞추고 60분간 magnetic stirrer로 잘 혼합해주고 0.2um PVDF(polyvinylidene difluoride) 필터로 여과하였다. 이 것을 검액으로 한다.
6-2. 30% 에탄올 복합추출물 ( CGT -II) 및 단일생약 추출물 ( 곽향 , 광곽향 ) 구성성분 HPLC 분석
30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 에서 검출되는 틸리아닌의 함유 유무를 광곽향에서 확인하기 위해서 HPLC(고속 액체 크로마토그래피, high-performance liquid chromatography)를 수행하였다.
실험예 4-2의 방법과 동일하게 틸리아닌을 70% 에탄올에 넣어 잘 용해한 다음 0.05mg/mL 최종농도로 하여 표준액으로 하였고, 실험예 5-1과 동일하게 제조한 30% 에탄올 혼합추출물 (CGT-II) 및 30% 에탄올 단일생약 추출물 (곽향, 광곽향) 검액을 함께 분석하였다.
그 결과 도 6에 나타난 바와 같이, 30% 에탄올 복합추출물 (CGT-II) 및 30% 에탄올 단일 생약추출물 (곽향)에서 검출된 틸리아닌이 30% 에탄올 단일생약추출물 (광곽향)에서 확인되지 않았다.
실험예 7. 파킨슨병 세포모델에서 곽향 및 틸리아닌의 신경보호 효과
6-하이드록시도파민 처리에 의한 곽향추출물 (30% 에탄올) 및 틸리아닌의 신경세포 손상을 보호하는 효과를 확인하기 위하여, 실시예 2의 SH-SY5Y세포주를 이용하여 MTT reduction assay를 진행하였다. SH-SY5Y세포주가 배양되어있는 96-웰 플레이트에 곽향추출물 및 틸리아닌을 녹인 DMSO를 단독 혹은 30분간 처리한 후, 6-하이드록시도파민(6-OHDA) 200μM을 처리하였다. 6-OHDA 처리 24시간 후 96-웰 플레이트의 최종농도가 0.5 ㎎/㎖이 되도록 MTT 용액을 각 well에 넣었다. 배양기에서 2시간 동안 반응시키고 배지와 MTT 용액을 제거한 후 DMSO를 넣어 교반하였다. 완전히 용해되었을 때 마이크로 플레이트 리더 (Molecular device, USA)를 이용하여 540 ㎚에서 UV 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 신경독소인 6-OHDA의 존재 하에 50 ug/ml의 곽향 및 1 uM의 틸리아닌 농도에서 가장 우수한 세포생존율을 나타내었다. 이를 통해 본 발명 조성물의 활성성분이 곽향의 틸리아닌이 in vitro에서 신경세포 보호 활성을 가지는 것을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 곽향은 틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서. 상기 조성물은 곽향 및 정향 추출물의 첨가로 인해 파킨슨 병 치료 효과가 향상되는 것을 특징으로 하는 것인, 약학적 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1-C4 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 약학적 조성물.
  5. 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 곽향은 틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 것인, 건강기능식품 조성물.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서. 상기 조성물은 곽향 및 정향 추출물의 첨가로 인해 파킨슨 병 개선 효과가 향상되는 것을 특징으로 하는 것인, 건강기능식품 조성물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1-C4 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 건강기능식품 조성물.
  9. 작약(Paeonia lactiflora), 천궁(Ligusticum chuanxiong), 당귀(Angelica gigas), 시호(Bupleurum falcatum), 치자인(Gardenia jasminoides), 목단피(Paeonia suffruticosa), 곽향(Agastachis Herba) 및 정향(Eugenia caryophyllata)으로 구성되는 복합 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료방법.
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