WO2018065649A1 - Uso de un material para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular - Google Patents

Uso de un material para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular Download PDF

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WO2018065649A1
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Pablo Aitor Postigo Resa
Diego MEGIAS VÁZQUEZ
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Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Centro Nacional de Investigaciones Oncologicas CNIO
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Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
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    • G01L—MEASURING FORCE, STRESS, TORQUE, WORK, MECHANICAL POWER, MECHANICAL EFFICIENCY, OR FLUID PRESSURE
    • G01L3/00—Measuring torque, work, mechanical power, or mechanical efficiency, in general
    • G—PHYSICS
    • G02—OPTICS
    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B5/00—Optical elements other than lenses
    • G02B5/20—Filters
    • G02B5/26—Reflecting filters

Definitions

  • the present invention relates to the use of a material comprising a coating capable of reflecting totally or partially and selectively light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the regions of the electromagnetic spectrum of VIS, IR and UV, and a VIS light-transparent substrate, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel, particularly a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel that are used in optical microscopy.
  • the invention could be framed in the field of sample analysis and characterization techniques, particularly by optical microscopy.
  • the automatic focus of an image in optical microscopy is done by measuring the light reflected on a transparent slide or cover, when an IR light is used as a source of illumination, where the detection of the reflected light is performed in parallel to the lighting system .
  • the problem of poor stability / sharpness of the automatically focused image appears, for example, when oil immersion targets are used whose refractive index is similar to that of the coverslip or that of the specimen holder commonly a glass, quartz or transparent plastic material and, therefore, the light that is reflected is small.
  • US201003381 1 describes a microscope autofocus system that corrects the image of a sample along the optical path using a beam splitter.
  • US2011017902 describes an autofocus system and its operating procedure to achieve greater speed and robustness in the measurement of biological samples by microscopy.
  • the microscope autofocus system is based on correcting the images of the samples along the optical path;
  • the high speed of measurement of the autofocus system is achieved by making a pattern with light on the sample and measuring, with a space detector, at least two reflection patterns of said pattern.
  • WO2013063096 describes a multifunction autofocus system based on focusing the sample image with the help of a positioning by reflection and corrections of astigmatism and chromatic aberration along the z axis, that is, to correct the images of the samples along of the optical path.
  • the present invention relates to the use of a material comprising a coating capable of reflecting totally or partially and selectively light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the regions of the visible electromagnetic spectrum, IR and UV, and a light-transparent substrate VIS, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel, particularly a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel that are used in optical microscopy.
  • the coverslip, sample holder or cell culture vessel of the present invention reflects totally or partially and selectively light of wavelengths between 350 and 800, corresponding to the regions of the visible, IR and UV electromagnetic spectrum, said coating It can reflect the light emitted by the autofocus system of an optical microscope, so that the stability and sharpness of the automatically focused image is corrected by an autofocus system in an optical microscope. It should be noted that this improvement in sharpness, stability and image quality is also obtained when immersion oil targets are used.
  • the coverslip of the present invention reflects UV light, that is, it blocks the passage of UV light therethrough. This fact gives it an advantage when analyzing biological samples that deteriorate under UV light.
  • a material that is also capable of transmitting the fluorescence of a biological sample for example, a sample of human tissue, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel has special interest in optical microscopy of fluorescence.
  • the first aspect of the present invention relates to the use (from here the use of the invention) of a material comprising a substrate and a coating characterized in that
  • the index of refraction of the material of said coating is greater than the index of refraction of the material of said substrate
  • said coating has a thickness of less than 1 ⁇
  • said coating is capable of reflecting totally or partially and selectively, light of wavelengths between 350 nm and 800 nm, corresponding to the regions of the visible, IR and UV electromagnetic spectrum, for the manufacture of a coverslip, a sample holder or a cell culture vessel.
  • cell culture vessel is understood as that vessel in which a cell culture can be prepared.
  • examples of such containers are a Petri dish, or a multi-well plate.
  • the coating is deposited on both sides of the substrate. In this way, if one face is damaged or dirty, the other could be used.
  • the coating is a thin sheet of tantalum oxide between 25 nm and 200 nm thick. More preferably, the thin sheet of tantalum oxide has a thickness between 75 nm and 125 nm.
  • substrate transparent to visible light is understood as that substrate formed by a material capable of transmitting light corresponding to a range of wavelengths of the electromagnetic spectrum between 350 nm and 800 nm.
  • the transparent support is selected from a glass, quartz or a polymeric composition and a copoimer.
  • transparent polymers examples include polydimethylsioxane (PD S), polymethylmethacrylate (PM A), hydroxy-etii-methacrylate (HE A) or negative photosensitive epoxy resin comprising 8 epoxy groups (SU8).
  • PD S polydimethylsioxane
  • PM A polymethylmethacrylate
  • HE A hydroxy-etii-methacrylate
  • SU8 negative photosensitive epoxy resin comprising 8 epoxy groups
  • transparent copoiimers that can be used as a substrate are styrene and polymethipentene (PMP) based copoiimers.
  • the coverslip, the sample holder or the cell culture vessel are used in optical microscopy, whereby the cell culture vessel must be of adequate size in order to be located in the viewing area of an optical microscope.
  • the coverslip, the sample holder or the cell culture vessel reflect the light of the autofocus system of an optical microscope and said light of the autofocus system strikes the surface of said coverslip, said sample holder or said cell culture vessel , on the face that comprises the coating.
  • the angle of incidence depends on the numerical aperture of the target.
  • the coverslip, the sample holder or the cell culture vessel reflects the light of the autofocus system of an optical microscope and said light of the autofocus system strikes at any angle and with any objective on the surface of said coverslip, said sample holder or said cell culture vessel, on the face comprising the coating.
  • an autofocus system of an optical microscope that focuses an image of a microscope by measuring or detecting the reflection of an incident light from a lighting system on a plate comprising a sample or a plate covering a sample, where the measurement or detection of the reflected light is carried out in parallel to the lighting system.
  • incident light of the autofocus system refers to that light emitting an LED light or a laser system that is part of an autofocus system of an optical microscope in the range of the electromagnetic spectrum corresponding to wavelengths ⁇ between 350 nm and 800 nm.
  • refractive index in particular at the interface between the coating and the substrate, there is a change in refractive index that also offers advantages in optical microscopy systems, in particular in total internal reflection fluorescence microscopy (in English, Total infernal refiection fluorescence microscopy or TIRFM), in inclined thin illumination microscopy (in English Highly inciined thin illumination or HILO), as well as in nanoscopy techniques, that is to say of nanometric resolution microscopy as the state depletion based system! (in English Ground state depletion and single-molecule return or GSDI) or Emission depletion by stimulation (in English stimuiated emission depletion or STED).
  • TIRFM Total internal reflection fluorescence microscopy
  • TIRFM Total infernal refiection fluorescence microscopy
  • HILO Highly inciined thin illumination
  • nanoscopy techniques that is to say of nanometric resolution microscopy as the state depletion based system! (in English Ground state depletion and single-molecule return or
  • the change in the index of refraction that occurs at the interface between the coating and the substrate in the present invention allows the optimization of the light path in the TIRFM and HILO microscopes.
  • the change in refractive index that occurs at the interface between the coating and the substrate in the present invention results in an improvement in light reflection incident using the GSDi and STED nanometer resolution microscopes resulting in higher resolution.
  • Another aspect of the present invention relates to a material (hereinafter the material of the invention) comprising a coating formed by a thin sheet of tantalum oxide between 25 nm and 200 nm thick and a substrate transparent to the visible light, where the coating is deposited on at least one of the faces of said substrate.
  • the coating is deposited on both sides of said substrate.
  • the thin sheet of tantalum oxide of the material of the invention has a thickness between 75 nm and 125 nm.
  • Example of autofocus routine and microscope scheme equipped with infrared light focusing system (a) Example of autofocus routine and (b) Example scheme of microscope equipped with infrared light focusing system.
  • FIG. 3 Light reflection images with or without the use of the coating on dry and immersion targets.
  • FIG. 4 Images acquired with a 20X objective of immersion in oil for 3 markers (blue green and red) that emit along the visible.
  • FIG. 5 Light transmission curve of a coating designed to reflect ultraviolet radiation
  • FIG. 1a shows an example of autofocus routine, where the autofocus system comprises the following elements: (a) Target situation with the focused sample
  • FIG. 1b shows an example scheme of a microscope equipped with an infrared light focusing system comprising the following elements.
  • Immersion medium oil, water or air
  • the samples are composed of glass plates (slides) coated with tantalum oxide and whose refractive index is around 2 and is transparent over a wide region of the visible spectrum.
  • the coating is a thin film deposited by sputtering. Each sample has a different thickness.
  • 5 depositions have been made on 5 glass plates with 5 different thicknesses, which are 100 nm (1), 75 nm (2), 50 nm (3), 25 nm (4) and 200 nm (5), to illustrate the effect of the thickness of the coating on the sharpness of the image observed by optical microscopy.
  • Images 1 to 5 correspond to the thicknesses 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm and 200 nm, respectively.
  • Image 0 corresponds to an uncoated glass plate.
  • FIG. 2 shows a cross-section of samples 1 to 5.
  • FIG. 2a corresponds to the light reflection at 488 nm and FIG. 2b at 833 nm on each of the two faces.
  • the FlG. 3 shows images of light reflection with or without the use of the coating on dry and immersion targets, in both cases there is a clear increase in said reflection.
  • the FlG. 4 shows images acquired with a 20X objective of immersion in oil for 3 markers (blue green and red) that emit along the visible. An improvement of the image quality is observed thanks to the improvement of autofocus.
  • the FlG. 5 shows the light transmission curve designed to reflect ultraviolet radiation. In the FlG. 5 it is observed how the passage of ultraviolet light is blocked.

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Abstract

La presente invención se refiere al uso de un material que comprende un recubrimiento capaz de reflejar luz de una longitud de onda de entre 350 nm y 850 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del VIS, IR y UV, y un sustrato transparente a la luz VIS, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular, particularmente un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular que se utilizan en microscopía óptica.

Description

¡PACION DE UN CUBREOBJETOS, UN
PORTAMUESTRAS O UN RECIPIENTE DE CULTIVO CELULAR
DESCRIPCIÓN
La presente invención se refiere al uso de un material que comprende un recubrimiento capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del VIS, del IR y del UV, y un sustrato transparente a la luz VIS, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular, particularmente un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular que se utilizan en microscopía óptica.
Por tanto, la invención se podría encuadrar en el sector de las técnicas de análisis y caracterización de muestras, particularmente por microscopía óptica.
ESTADO DE LA TÉCNICA
Normalmente, el enfoque automático de una imagen en microscopía óptica se realiza midiendo la luz reflejada sobre un portamuestras o cubreobjetos transparente, cuando se utiliza una luz IR como fuente de iluminación, donde la detección de la luz reflejada se realiza en paralelo al sistema de iluminación. El problema de escasa estabilidad/nitidez de la imagen enfocada automáticamente aparece, por ejemplo, cuando se utilizan objetivos de inmersión de aceite cuyo índice de refracción es similar al del cubreobjetos o el del portamuestras comúnmente un material de vidrio, cuarzo o un material plástico transparente y, por tanto, la luz que se refleja es pequeña.
En la bibliografía se pueden encontrar diferentes formas de mejorar la estabilidad/nitidez de la imagen enfocada automáticamente en un microscopio óptico.
Por ejemplo, US201003381 1 describe un sistema de autoenfoque del microscopio que corrige la imagen de una muestra a lo largo del camino óptico utilizando un divisor de haz. US2011017902 describe sistema de autoenfoque y su procedimiento de operación para alcanzar una mayor velocidad y una robustez en las medidas de muestras biológicas por microscopía. El sistema de autoenfoque del microscopio se basa en corregir las imágenes de las muestras a lo largo del camino óptico; la alta velocidad de medida del sistema de autoenfoque se alcanza realizando un patrón con luz sobre la muestra y midiendo, con un detector espacial, al menos dos patrones de reflexión de dicho patrón.
WO2013063096 describe un sistema de enfoque automático multifunción basado en enfocar la imagen de la muestra con la ayuda de un posicionamiento por reflexión y correcciones de astigmatismo y aberración cromática a lo largo del eje z, es decir, corregir las imágenes de las muestras a lo largo del camino óptico.
Dichos sistemas son complicados y costosos, por lo que es necesario desarrollar nuevos sistemas que ayuden a mejorar la estabilidad/nitidez de las imágenes obtenidas por microscopía óptica.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere ai uso de un material que comprende un recubrimiento capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV, y un sustrato transparente a la luz VIS, para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular, particularmente un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular que se utilizan en microscopía óptica.
Como el cubreobjetos, portamuestras o recipiente de cultivo celular de la presente invención refleja total o parcialmente y de forma selectiva luz de longitudes de onda entre 350 y 800, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV, dicho recubrimiento puede reflejar la luz que emite el sistema de autoenfoque de un microscopio óptico, por lo que se corrige la estabilidad y nitidez de la imagen enfocada automáticamente mediante un sistema autoenfoque en un microscopio óptico. Cabe señalar que esta mejora de la nitidez, la estabilidad y la calidad de la imagen se obtiene también cuando se utilizan objetivos de aceite de inmersión.
El cubreobjetos de la presente invención refleja luz UV, es decir, bloquea el paso de la luz UV a su través. Este hecho le confiere una ventaja a la hora de analizar muestras biológicas que se deterioran bajo luz UV.
El uso de un material que además es capaz de transmitir la fluorescencia de una muestra biológica, por ejemplo, una muestra de tejido humano, para la fabricación de un cubreobjetos, un porta muestras o un recipiente de cultivo celular tiene especial interés en microscopía óptica de fluorescencia.
Por tanto, el primer aspecto de la presente invención se refiere al uso (a partir de aquí el uso de la invención) de un material que comprende un sustrato y un recubrimiento caracterizado por que
» dicho sustrato es transparente a la luz visible,
® el índice de refracción del material de dicho recubrimiento es mayor que el índice de refracción del material de dicho sustrato,
® dicho recubrimiento está depositado sobre ai menos una cara del sustrato,
» dicho recubrimiento tiene un espesor inferior a 1 μπι, y
• dicho recubrimiento es capaz de reflejar total o parcialmente y de forma selectiva, luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm, correspondientes a las regiones del espectro electromagnético del visible, del IR y del UV, para la fabricación de un cubreobjetos, un porta muestras o un recipiente de cultivo celular.
En la presente invención se entiende por "recipiente de cultivo celular" como aquel recipiente en los que se puede preparar un cultivo celular. Ejemplos de dichos recipientes son una placa Petri, o una placa de pocilios múltiples. En una realización preferida de ¡a presente invención, el recubrimiento está depositado sobre ambas caras del sustrato. De este modo, si una cara se estropea o se ensucia, se podría utilizar la otra.
En otra realización preferida de ia invención, el recubrimiento es una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm. Más preferiblemente, la lámina delgada de óxido de tantalio tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm. En ia presente invención se entiende por "sustrato transparente a la luz visible" como aquel sustrato formado por un material capaz de transmitir la luz correspondiente a un rango de longitudes de onda del espectro electromagnético de entre 350 nm y 800 nm.
En otra realización preferida, el soporte transparente se selecciona de entre un vidrio, cuarzo o una composición poiimérica y un copoiímero.
Ejemplos de polímeros transparentes susceptibles de ser utilizados como sustrato son polidimetilsiioxano (PD S), polimetiimetacriiato (PM A), hidroxi-etii-metacriiato (HE A) ó resina epoxi fotosensible negativa que comprende 8 grupos epoxi (SU8).
Ejemplos de copoiímeros transparentes susceptibles de ser utilizados como sustrato son copoiímeros basados en estireno y poiimetiipenteno (PMP).
En una realización preferida, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular se utilizan en microscopía óptica, por lo que el recipiente de cultivo celular debe tener el tamaño adecuado para poder situarse en la zona de visuaiización de un microscopio óptico.
En otra realización preferida, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular reflejan la luz del sistema de autoenfoque de un microscopio óptico y dicha luz del sistema de autoenfoque incide sobre ia superficie de dicho cubreobjetos, dicho portamuestras o dicho recipiente de cultivo celular, por la cara que comprende el recubrimiento. El ángulo de incidencia depende de la apertura numérica del objetivo. En ¡a presente invención, el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular refleja la luz del sistema de autoenfoque de un microscopio óptico y dicha luz del sistema de autoenfoque incide a cualquier ángulo y con cualquier objetivo sobre la superficie de dicho cubreobjetos, dicho portamuestras o dicho recipiente de cultivo celular, por la cara que comprende el recubrimiento.
En la presente invención, se entiende por "enfocar automáticamente" al uso de un sistema de autoenfoque de un microscopio óptico que enfoca una imagen de un microscopio mediante la medida o detección de la reflexión de una luz incidente procedente de un sistema de iluminación sobre una placa que comprende a una muestra o una placa que cubre una muestra, donde la medida o detección de la luz reflejada se realiza en paralelo al sistema de iluminación.
El término "luz incidente del sistema de autoenfoque" se refiere a aquella luz que emite una luz LED o un sistema láser que forma parte de un sistema de enfoque automático de un microscopio óptico en el rango del espectro electromagnético correspondiente a unas longitudes de onda λ de entre 350 nm y 800 nm.
En la presente invención, concretamente en la interfaz entre el recubrimiento y el sustrato se produce un cambio de índice de refracción que también ofrece ventajas en sistemas de microscopía óptica, en concreto en microscopía de fluorescencia de reflexión interna total (en inglés, Total infernal refiection fluorescence microscopy o TIRFM), en la microscopía de iluminación delgada inclinada (en inglés Highly inciined thin illumination o HILO), así como en técnicas de nanoscopía, es decir de microscopía de resolución nanométrica como el sistema por depleción del estado basa! (en inglés Ground state depletion and single-molecule return o GSDI ) o Depleción de emisión por estimulación (en inglés stimuiated emission depletion o STED).
El cambio en el índice de refracción que se produce en el interfaz entre el recubrimiento y el sustrato en la presente invención permite la optimización de la ruta lumínica en los microscopios TIRFM e HILO.
El cambio de índice de refracción que se produce en la interfaz entre el recubrimiento y el sustrato en la presente invención produce una mejora de la reflexión de la luz incidente que utilizan los microscopios de resolución nanométrica GSDi y STED resultando en una mayor resolución.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un material (a partir de aquí el material de la invención) que comprende un recubrimiento formado por una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm y un sustrato transparente a la luz visible, donde el recubrimiento está depositado sobre ai menos una de las caras de dicho sustrato. En una realización preferida del material de la invención, el recubrimiento está depositado sobre ambas caras de dicho sustrato.
En otra realización preferida del material de la invención, la lámina delgada de óxido de tantalio del material de la invención tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para ios expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS F¡G. 1. Ejemplo de rutina de autoenfoque y esquema de microscopio equipado con sistema de enfoque de luz infrarroja, (a) Ejemplo de rutina de autoenfoque y (b) Esquema ejemplo de microscopio equipado con sistema de enfoque por luz infrarroja.
F¡G. 2. Sección transversal de las muestras 1 a 5 obtenida por reflexión óptica en un microscopio confocal.
FIG. 3. Imágenes de reflexión de la luz con o sin el empleo del recubrimiento en objetivos secos y de inmersión. FIG, 4, Imágenes adquiridas con un objetivo de 20X de inmersión en aceite para 3 marcadores (azul verde y rojo) que emiten a lo largo del visible.
FIG. 5. Curva de transmisión de luz de un recubrimiento diseñado para reflejar la radiación ultravioleta
EJEMPLOS
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por ios inventores, que pone de manifiesto la efectividad del producto de la invención.
La FIG. 1a muestra un ejemplo de rutina de autoenfoque, donde el sistema de autoenfoque comprende ios siguientes elementos: (a) Situación del objetivo con la muestra enfocada
1 Plano de foco
2 Objetivo
3 Distancia del cubreobjetos al piano de foco (b) Perdida del piano de enfoque
1 Posición de foco (desenfocada)
2 Cubreobjetos
(c) Corrección de posición del objetivo y enfoque
1 Láser o Led de enfoque
2 Movimiento de objetivo
(d) Mecanismo de recuperación de enfoque
1 Muestra
2 Distancia del cubreobjetos ai piano de foco
La FIG. 1 b muestra un esquema ejemplo de microscopio equipado con sistema de enfoque por luz infrarroja que comprende ios siguientes elementos.
1 Medio de montaje 2 Muestra
3 ¡nterfaz entre muestra y cubreobjetos
4 Cubreobjetos
5 Medio de inmersión (aceite, agua o aire)
6 Objetivo
7 Sistema de autoenfoque
8 Luz infrarroja
9 Led o láser
10 Cámara ccd en línea
1 1 Cámara del Microscopio para toma de imagen
Las muestras están compuestas por placas de vidrio (portaobjetos) recubiertas con óxido de tantalio y cuyo índice de refracción está alrededor de 2 y es transparente en una amplia región del espectro visible. El recubrimiento es una película delgada depositada por pulverización catódica. Cada muestra tiene un espesor diferente.
Se han realizado 5 deposiciones sobre 5 placas de vidrio con 5 espesores diferentes, que son 100 nm (1), 75 nm (2), 50 nm (3), 25 nm (4) y 200 nm (5), para ilustrar el efecto del espesor del recubrimiento sobre la nitidez de la imagen observada por microscopía óptica.
Se han realizado medidas de transmisión óptica en un microscopio confocal de cada una de las muestras de 1 a 5 preparadas. Las imágenes 1 a 5 corresponden a ios espesores 100 nm, 75 nm, 50 nm, 25 nm y 200 nm, respectivamente. La imagen 0 corresponde a una placa de vidrio sin recubrimiento.
La FIG. 2 muestra a sección transversal de las muestras 1 a 5. La FIG. 2a corresponde al reflejo de la luz en 488 nm y la FIG. 2b en 833 nm en cada una de ¡as dos caras.
En las muestras de 1 a 5 se obtuvo una mejora del enfoque automático independientemente de la magnificación del objetivo utilizado con o sin aceite de inmersión. En general es deseable que la luz de color verde, típica de la fluorescencia, se refleje con poca intensidad, por lo que en este caso el mejor espesor del recubrimiento corresponde ai caso numero 1 (100 nm de espesor).
La FlG. 3 muestra imágenes de reflexión de la luz con o sin el empleo del recubrimiento en objetivos secos y de inmersión, en ambos casos se produce un aumento claro de dicha reflexión.
La FlG. 4 muestra imágenes adquiridas con un objetivo de 20X de inmersión en aceite para 3 marcadores (azul verde y rojo) que emiten a lo largo del visible. Se observa una mejora de la calidad de imagen gracias a la mejora de autoenfoque.
La FlG. 5 muestra la curva de transmisión de luz diseñado para reflejar la radiación ultravioleta. En la FlG. 5 se observa cómo se bloquea el paso de la luz ultravioleta.

Claims

1 , Uso de un materia! que comprende un sustrato y un recubrimiento caracterizado por que
® dicho sustrato es transparente a !a luz visible,
• el Indice de refracción de! material de dicho recubrimiento es mayor que el índice de refracción del material de dícho sustrato,
• dicho recubrimiento está depositado sobre al menos una cara del sustrato, ® dicho recubrimiento tiene un espesor inferior a 1 μπη, y
» dicho recubrimiento es capaz de reflejar tota! o parcialmente y de forma selectiva, luz de longitudes de onda entre 350 nm y 800 nm,
para la fabricación de un cubreobjetos, un portamuestras o un recipiente de cultivo celular.
2. Uso según la reivindicación 1 , donde el recubrimiento está depositado sobre ambas caras del sustrato.
3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde el recubrimiento es una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm.
4. Uso según la reivindicación 3, donde la lámina delgada de óxido de tantalio tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el soporte transparente a la luz visible se selecciona de entre un vidrio, cuarzo, una composición poiimérica y un copolímero.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular se utilizan en microscopía óptica.
7. Uso según la reivindicación 6, donde el cubreobjetos, el portamuestras o el recipiente de cultivo celular refleja la luz de! sistema de autoenfoque de un microscopio óptico y donde dicha luz del sistema de autoenfoque incide sobre la superficie de dicho cubreobjetos, dicho portamuestras o dicho recipiente de cultivo celular, por la cara que comprende el recubrimiento.
8. Material que comprende un recubrimiento formado por una lámina delgada de óxido de tantalio de espesor de entre 25 nm y 200 nm y un sustrato transparente a la ¡uz visible, donde el recubrimiento está depositado sobre al menos una de las caras de dicho sustrato.
9. Materia! según la reivindicación 8, donde el recubrimiento está depositado sobre ambas caras de dicho sustrato.
10. Material según cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9, donde ¡a lámina delgada de óxido de tantalio tiene un espesor de entre 75 nm y 125 nm.
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