WO2015190710A1 - 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법 - Google Patents

인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2015190710A1
WO2015190710A1 PCT/KR2015/004741 KR2015004741W WO2015190710A1 WO 2015190710 A1 WO2015190710 A1 WO 2015190710A1 KR 2015004741 W KR2015004741 W KR 2015004741W WO 2015190710 A1 WO2015190710 A1 WO 2015190710A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
insulin
cells
producing cells
differentiation
glucosamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2015/004741
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
이학모
박경수
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SNU R&DB Foundation
Original Assignee
SNU R&DB Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SNU R&DB Foundation filed Critical SNU R&DB Foundation
Publication of WO2015190710A1 publication Critical patent/WO2015190710A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells

Definitions

  • the present invention relates to a medium composition for inducing differentiation into insulin-producing cells containing glucosamine, a method for inducing differentiation into insulin-producing cells using the medium composition, and a cell therapeutic agent for treating diabetes comprising the insulin-producing cells prepared by the method. It is about.
  • Diabetes mellitus is a disease characterized by chronic hyperglycemia as the most important characteristic, and prolonged social and economic burden by causing complications such as delayed wound healing, neurological disease, renal failure, heart disease and retinal disease caused by microvascular damage.
  • diabetes has been used in the clinic for a long time.
  • insulin fortification therapy which repeatedly administers insufficient insulin in diabetic patients, has been used in the clinic for a long time.
  • the treatment is inconvenient to administer insulin repeatedly several times a day, the reality is that it can not prevent the complications of diabetes.
  • Type 1 diabetes mellitus is caused by the destruction of insulin-producing cells of their own immune cells, which occurs because of insufficient insulin-producing cells to control blood sugar.
  • Type 2 diabetes is caused by various organs, tissues, and cells in the body having resistance to insulin. Eventually, hyperglycemia results in impaired function and loss of insulin producing cells, leading to poor blood sugar control. As a result, diabetes mellitus with high blood sugar and complications are caused.
  • pancreatic islet transplantation studies are being conducted.
  • patients receiving pancreatic islet transplantation have a discomfort to take immunomodulators for a lifetime. Not only does it decrease over time at 62.5% within a year, but there is also a shortage of donors compared to the number of patients requiring islet transplantation.
  • bone marrow cells can be easily obtained from peripheral blood after administration of bone marrow cell mobilization factors such as G-CSF and AMD3100 in addition to bone marrow puncture method (Yeoh JS et al. 2007), and various damaged tissues. Studies have been published that may contribute to the regeneration of (Badiavas EV et al. 2003, Secco M et al. 2008).
  • the present inventors have completed the present invention by confirming that, as a result of efforts to develop a new cell therapy for diabetic treatment, it is possible to effectively induce differentiation into insulin-producing cells by controlling glucose metabolism using glucosamine.
  • An object of the present invention is to provide a medium composition for inducing differentiation into insulin producing cells containing glucosamine.
  • Still another object of the present invention is to provide a method of inducing differentiation into insulin producing cells using the medium composition.
  • Still another object of the present invention is to provide a cell therapeutic agent for treating diabetes, or a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, comprising insulin-producing cells prepared by the above method.
  • the present invention provides a medium composition for inducing differentiation into insulin producing cells containing glucosamine.
  • the present invention also provides a method of inducing differentiation into insulin producing cells, comprising culturing the cells in the medium composition.
  • the present invention also provides a cell therapeutic agent for treating diabetes, or a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, comprising insulin-producing cells prepared by the above method.
  • Glucosamine according to the present invention can effectively induce differentiation into insulin-producing cells through the regulation of glucose metabolism. Induction of differentiation into insulin-producing cells using glucosamine as described above is safe because it excludes genetic manipulation, and it is inexpensive because it does not require expensive compounds or growth factors with unclear mechanisms, and it is inexpensive. It can be made has the advantage of minimizing the contamination, degeneration, etc. of cells that are problematic during in vitro manipulation.
  • FIG. 1 is a diagram showing the results of confirming the differentiation of bone marrow cells into insulin-producing cells through the immunostaining method.
  • Figure 2 is a diagram showing the results confirmed by the real-time PCR for the differentiation of bone marrow cells into insulin-producing cells by glucosamine in vitro.
  • Figure 3 is a diagram showing the result of confirming the differentiation of glucosamine-sensitized bone marrow cells to insulin-producing cells by immunofluorescence staining method.
  • FIG. 4 is a diagram showing the results obtained by immunofluorescence staining the differentiation of peripheral blood-derived bone marrow cells into insulin-producing cells by glucosamine.
  • Figure 5 is a diagram showing the effect of glycemic control upon transplantation of bone marrow cells starched by glucosamine in a diabetic animal model.
  • the present invention provides a medium composition for inducing differentiation into insulin producing cells containing glucosamine.
  • culture media refers to a medium that can support the induction of differentiation and survival of insulin-producing cells in vitro, and includes all conventional media used in the art suitable for culturing cells.
  • the medium and the culture conditions may be selected according to the type of the cell
  • the medium used for the culture is preferably a cell culture minimum medium (CCMM), and generally a carbon source, a nitrogen source and a trace element component are used.
  • CCMM cell culture minimum medium
  • Such cell culture minimal media include, for example, Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), Minimal Essential Medium (MEM), Basic Medium Eagle (BME), RPMI1640, F-10, F-12, ⁇ Minimal Essential Medium.
  • the medium also includes penicillin, streptomycin, gentamicin ( antibiotics, such as gentamicin).
  • the medium may further include differentiation inducing substances into one or more known insulin producing cells.
  • Glucosamine according to the present invention can effectively induce differentiation into insulin-producing cells through the regulation of glucose metabolism. Induction of differentiation into insulin-producing cells using glucosamine as described above is safe because it excludes genetic manipulation, and it is inexpensive because it does not require expensive compounds or growth factors with unclear mechanisms, and it is inexpensive and in a short period of time. It can be made has the advantage of minimizing the contamination, degeneration, etc. of cells that are problematic during in vitro manipulation.
  • the present invention also provides a method of inducing differentiation into insulin producing cells, comprising culturing the cells in the medium composition.
  • the cells include, but are not limited to, bone marrow cells or adult stem cells.
  • the adult stem cells include those derived from one or more selected from the group consisting of bone marrow, umbilical cord blood, blood, skin, fat, and placenta, and may preferably be derived from bone marrow or umbilical cord blood, but are not limited thereto.
  • the present invention provides a cell therapy agent for treating diabetes, including insulin-producing cells produced by the above method.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, including insulin-producing cells produced by the above method.
  • the diabetes includes type 1 diabetes or type 2 diabetes.
  • cell therapeutic agent is a medicine (US FDA regulation) used for the purpose of treatment, diagnosis, and prevention of cells and tissues prepared by isolation, culture, and special chewing from humans. It refers to a medicine used for the purpose of treatment, diagnosis, and prevention through a series of actions such as proliferating, selecting, or otherwise changing the biological characteristics of a living autologous, allogeneic, or heterologous cell in vitro.
  • composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions may be used in the form of oral dosage forms, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., according to conventional methods, respectively.
  • Suitable formulations known in the art are preferably those disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations are prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc. It is prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the term "administration" means providing a subject with any of the compositions of the present invention in any suitable manner.
  • Preferred dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention vary depending on the condition and weight of the individual, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect. The dosage depends on the type of disease, severity, activity of the drug, sensitivity to the drug, time of administration, route and rate of administration, duration of treatment, factors including the drug being used simultaneously and other well known factors in the medical field. Can be determined.
  • chimeric mice were prepared. More specifically, donor bone marrow cells were obtained from transgenic mice (B6-tg (Ins2-luc / EGFP / TK) 300êt / J) expressing various genes (EGFP, Luciferase, etc.) under the control of the insulin promoter, and receiving the recipient mice. Normal C57BL / 6 mice were used. First, the femur and tibia of 8-12 week old transgenic mice (B6-tg (Ins2-luc / EGFP / TK) 300êt / J) were isolated and flushed with PBS to secure bone marrow cells, followed by hemolysis solution (BD Pharmingen).
  • B6-tg Ins2-luc / EGFP / TK 300nnie / J
  • Erythrocytes were removed using and diluted in PBS to a concentration of 5x10 7 / ml.
  • 0.1 ml of bone marrow cells prepared through the above procedure was injected through the microvein of 1,000 CGy-irradiated C57BL / 6 mice 18 hours before transplantation.
  • 150 mg / kg of streptozotocin was injected intraperitoneally into chimeric mice transplanted with bone marrow cells derived from the transgenic mice to induce diabetes.
  • EGFP-expressing cells could not be observed in pancreatic and adipose tissues of normal chimeric mice not receiving STZ, but EGFP was detected in pancreas and adipose tissues of mice induced with diabetes through STZ administration. Expressing cells were observed.
  • Bone marrow cells were prepared from normal C57BL / 6 mice or transgenic mice in the same manner as in Example 1. The bone marrow cells were suspended at a concentration of 5x10 6 cells / ml using DMEM medium (standard medium) containing 5.5 mM glucose, 2% FBS and 1% antibiotic, and the cells were dispensed into 6-well plates that inhibited cell adhesion.
  • DMEM medium standard medium
  • a cell culture incubator for suspension culture was evaluated.
  • the shaker mounted in the cell culture incubator for suspension culture was allowed to continuously shake at 30 to 60 rpm.
  • the presence or absence of insulin-producing cells is a factor that promotes beta-cell differentiation (neurogenin 3, PDX-1, MafA) that produces insulin by separating RNA from the cells and performing real-time PCR according to a conventionally known method.
  • Ptf1a was confirmed by analyzing the expression level. The results are shown in FIG.
  • Example 2 Based on the results of Example 2, to determine whether the myeloid cells suspended in glucosamine-added culture can be differentiated into insulin-producing cells, normal C57BL / 6 mice or transgenic mice in the same manner as in Example 1 above. Bone marrow cells were prepared from. Using a standard medium added with 10 mM glucosamine, the bone marrow cells were suspended at a concentration of 5 ⁇ 10 6 cells / ml, and cultured for 9 days in the same manner as the suspension culture method shown in Example 2. In the case of the control group was cultured under the same conditions using a standard medium containing no glucosamine. After culturing, cells were obtained and EGFP, insulin, and PDX-1 expression was confirmed by immunofluorescence staining to confirm the appearance of insulin-producing cells (left of FIG. 3).
  • EGFP is expressed when exposing myeloid cells from transgenic mice to glucosamine (top left in FIG. 3), and insulin and PDX when myeloid cells from normal C57BL / 6 mice are exposed to glucosamine. Expression of -1 was observed (bottom left of FIG. 2).
  • the bone marrow cells suspended in culture for 3 days or more exposed to glucosamine the bone marrow cells were completely differentiated into insulin-producing cells, and the insulin secretion increased with time (right of FIG. 3).
  • glucosamine regulates the metabolism of bone marrow cells and controls differentiation switching so that they can be differentiated into insulin-producing cells, and insulin production even if glucosamine is removed after 3 days of exposure to glucosamine It was confirmed that differentiation into cells was completed completely.
  • the differentiation into insulin-producing cells was evaluated in the same manner as in Example 3.
  • normal C57BL / 6 mice were injected subcutaneously with 250 ⁇ g / kg of G-CSF once a day for 4 days, and after the last G-CSF injection, they were peripherally injected through the abdominal vein. Blood was obtained. The obtained peripheral blood was subjected to red blood cell removal, and then suspended in culture for 3 days in a standard medium to which 10 mM glucosamine was added. The peripheral blood was recovered and the remaining glucosamine was removed by PBS.
  • control group was cultured under the same conditions using a standard medium containing no glucosamine.
  • the cells were resuspended in RPMI1640 medium containing 11 mM glucose, 10% FBS, and 1% antibiotics, and then transferred to a 6 well plate for adhesion culture and further cultured for 3 days.
  • the presence of insulin producing cells was confirmed by immunofluorescence staining in the same manner as in Example 3. The results are shown in FIG.
  • starch-derived bone marrow cells were transplanted into diabetic model mice to determine whether glucosamine can be fully differentiated in vivo. More specifically, starch myeloid cells were cultured for 3 days using a standard medium containing 10 mM glucosamine, washed with PBS, and prepared in the same manner as in Example 1 to induce diabetes in mice, and 3 days The mice were then implanted with 2 ⁇ 10 6 starched bone marrow cells per subject through the microvein. In the case of the control group, cells cultured under the same conditions were transplanted using a standard medium containing no glucosamine. Blood glucose was monitored for 30 days after transplantation. The results are shown in FIG.
  • the control group transplanted with the cells cultured in the medium without glucosamine could not confirm the change in blood glucose due to the transplantation of the cells over the entire period of the experiment, but the cells that had been starved with the glucosamine were transplanted.
  • the experimental group confirmed that the blood glucose was lowered up to 12 days after 5 days after transplantation. Through the above results, it was confirmed that glucosamine-based myeloid cells were completely differentiated into insulin-separated cells in vivo to regulate blood glucose levels.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물, 상기 배지 조성물을 이용한 인슐린 생산세포로의 분화 유도 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제에 관한 것이다. 본 발명에 따른 글루코사민은 당대사 조절을 통하여 인슐린 생산세포로의 분화를 효과적으로 유도할 수 있다. 상기와 같이 글루코사민을 이용하여 인슐린 생산 세포로의 분화를 유도할 경우, 유전자 조작을 배제하기 때문에 안전하며, 기전이 명확하지 않은 고가의 화합물 또는 성장인자를 필요로 하지 않아 비용이 저렴하고, 단기간 내에 이루어질 수 있어 생체 외 조작 시에 문제되는 세포의 오염, 변성 등을 최소화할 수 있는 장점을 가지고 있다.

Description

인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법
본 발명은 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물, 상기 배지 조성물을 이용한 인슐린 생산세포로의 분화 유도 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제에 관한 것이다.
당뇨병은 만성적인 고혈당을 가장 중요한 특징으로 하는 질환으로 장기화되면 미세혈관 손상에 기인한 창상치유 지연, 신경질환, 신부전증, 심장질환 망막질환 등의 합병증을 유발하여 사회적 경제적 부담을 가중시키는 질환이다. 현재까지 당뇨병을 완치시킬 수 있는 치료법은 없으며 당뇨 환자에서 부족한 인슐린을 반복적으로 투여하는 인슐린 강화요법이 오랜 기간 임상에서 활용되어 왔다. 그러나 상기 치료법은 하루에도 수 차례 반복해서 인슐린을 투여해야 하는 불편함이 있으며, 당뇨의 합병증을 막을 수 없는 것이 현실이다.
당뇨병은 그 원인에 따라 크게 두 가지 형태(제1형, 제2형)로 구분된다. 제 1형 당뇨병은 자신의 면역세포가 인슐린 생산세포를 파괴하여 발생하는 당뇨병으로, 인슐린 생산세포가 부족하여 혈당을 조절하지 못하기 때문에 발생한다. 제 2형 당뇨병은 다양한 원인에 의하여 신체 내 장기/조직/세포 등이 인슐린에 대한 저항성을 갖는 것에 기인하는 것으로 결국에는 고혈당에 의한 인슐린 생산세포의 기능저하 및 소실로 혈당의 조절이 원활하지 않게 되고 결과적으로 고혈당을 보이는 당뇨병 증상과 함께 그에 따른 합병증이 유발되게 된다.
이렇듯 인슐린을 생산하는 세포의 소실에 따른 당뇨병의 치료수단으로 동종 혹은 이종 유래의 췌도 세포 이식연구가 진행되고 있으나 췌도 이식을 받은 환자의 경우 평생 동안 면역조절제를 복용해야 하는 불편함이 있으며 그 성공률이 1년 이내 62.5%에서 시간이 경과함에 따라 감소할 뿐만 아니라, 췌도 이식이 요구되는 환자 수에 비하여 공여자의 수가 턱없이 부족한 상황이다.
부족한 췌도 공여자에 대한 또 다른 대안으로 줄기세포로부터 인슐린을 생산하는 세포를 분화/증식시켜 환자에 이식함으로써 당뇨병을 치료하고자 하는 연구가 진행되고 있으나 성과가 미미한 상황이다. 실제 부족한 췌도를 대체할 목적으로 생체 외에서 배아줄기세포, 역분화 줄기세포 등 다양한 세포를 이용하여 인슐린을 생산하는 세포로 분화시킨 후 이식함으로써 당뇨병을 치료하고자 하는 연구가 활발하게 진행되고 있으나 분화기전이 여전히 모호하고, 분화된 세포의 경우 증식이 일어나지 않는 현상을 고려할 때 당뇨병 치료에 필요한 양의 세포를 얻기 위해서는 천문학적 비용이 소요될 것으로 예상됨에도 불구하고 효율이 매우 낮고 안전성에 대한 우려로 인하여 임상적용이 불가능한 상황이다 (Zhang D et al. 2009).
한편, 안전성에 대한 우려를 불식시킬 수 있는 수단으로 성체줄기세포가 제시되고 있다. 특히 골수세포는 골수천자 방법 이외에도 G-CSF, AMD3100 등의 골수세포 동원인자를 투여하여 혈중으로 유리시킨 뒤 말초혈액으로부터 용이하게 획득할 수 있을 뿐만 아니라 (Yeoh JS et al. 2007), 다양한 손상조직의 재생에 기여할 수 있다는 연구결과들이 발표되고 있다 (Badiavas EV et al. 2003, Secco M et al. 2008).
이에 본 발명자들은 새로운 당뇨병 치료용 세포치료제를 개발하기 위해 노력한 결과, 글루코사민을 이용한 당대사 조절을 통해 인슐린 생산세포로의 분화를 효과적으로 유도할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 배지 조성물을 이용한 인슐린 생산세포로의 분화 유도 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제, 또는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인슐린 생산세포로의 분화를 유도하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제, 또는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 글루코사민은 당대사 조절을 통하여 인슐린 생산세포로의 분화를 효과적으로 유도할 수 있다. 상기와 같이 글루코사민을 이용하여 인슐린 생산 세포로의 분화를 유도할 경우, 유전자 조작을 배제하기 때문에 안전하며, 기전이 명확하지 않은 고가의 화합물 또는 성장인자를 필요로 하지 않아 비용이 저렴하고, 단기간 내에 이루어질 수 있어 생체 외 조작 시에 문제되는 세포의 오염, 변성 등을 최소화할 수 있는 장점을 가지고 있다.
도 1은 골수세포의 인슐린 생산세포로의 분화를 면역염색법을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 생체 외에서 글루코사민에 의한 골수세포의 인슐린 생산세포로의 전분화를 real-time PCR을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 글루코사민이 감작된 골수세포의 인슐린 생산세포로의 분화를 면역형광염색법을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 글루코사민에 의한 말초혈액 유래 골수세포의 인슐린 생산세포로의 분화를 면역형광염색법을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 당뇨병 동물모델에서 글루코사민에 의해 전분화된 골수세포 이식 시 혈당 조절 효과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명은 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물을 제공한다.
본 발명에서 있어서, “배지(culture media)"는 생체 외에서 인슐린 생산세포로의 분화 유도 및 생존을 지지할 수 있게 하는 배지를 의미하고, 세포의 배양에 적절한 당 분야에서 사용되는 통상의 배지를 모두 포함한다. 세포의 종류에 따라 배지와 배양 조건을 선택할 수 있다. 배양에 사용되는 배지는 바람직하게는 세포 배양 최소 배지(cell culture minimum medium: CCMM)로, 일반적으로 탄소원, 질소원 및 미량원소 성분을 포함한다. 이런 세포 배양 최소 배지에는 예들 들어, DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium), MEM(Minimal essential Medium), BME(Basal Medium Eagle), RPMI1640, F-10, F-12, αMEM(α Minimal essential Medium), GMEM(Glasgow's Minimal essential Medium), Iscove's Modified Dulbecco's Medium등이 있으나, 이로 제한되지 않는다. 또한 상기 배지는 페니실린(penicillin), 스트렙토마이신 (streptomycin), 겐타마이신(gentamicin) 등의 항생제를 포함할 수 있다.
상기 배지에는 글루코사민 외에 기존에 알려진 하나 이상의 인슐린 생산세포로의 분화 유도 물질이 더 포함될 수 있다.
본 발명에 따른 글루코사민은 당대사 조절을 통하여 인슐린 생산세포로의 분화를 효과적으로 유도할 수 있다. 상기와 같이 글루코사민을 이용하여 인슐린 생산 세포로의 분화를 유도할 경우, 유전자 조작을 배제하기 때문에 안전하며, 기전이 명확하지 않은 고가의 화합물 또는 성장인자를 필요로하지 않아 비용이 저렴하고, 단기간 내에 이루어질 수 있어 생체 외 조작 시에 문제되는 세포의 오염, 변성 등을 최소화할 수 있는 장점을 가지고 있다.
또한, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인슐린 생산세포로의 분화를 유도하는 방법을 제공한다.
상기 세포는 골수세포 또는 성체줄기세포를 포함하며, 이에 제한되지 않는다.
상기 성체줄기세포는 골수, 제대혈, 혈액, 피부, 지방 및 태반으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로부터 유래된 것을 포함하며, 바람직하게는 골수 또는 제대혈로부터 유래될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 당뇨병은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병을 포함한다.
본 발명에 있어서, "세포치료제"는 사람으로부터 분리, 배양 및 특수한 저작을 통해 제조된 세포 및 조직으로 치료, 진단 및 예방의 목적으로 사용되는 의약품(미국 FDA규정)으로서, 세포 혹은 조직의 기능을 복원시키기 위하여 살아있는 자가, 동종, 또는 이종세포를 체외에서 증식, 선별하거나 다른 방법으로 세포의 생물학적 특성을 변화시키는 등의 일련의 행위를 통하여 치료, 진단 및 예방의 목적으로 사용되는 의약품을 지칭한다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글라이콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글라이콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 상기 투여량은 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예들은 본 발명을 더욱 쉽게 이해할 수 있도록 예시하는 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 골수세포 유래의 인슐린 생산세포의 확인
골수세포가 인슐린 생산세포로 분화될 수 있는지를 확인하기 위하여, 카이메라 마우스를 제조하였다. 보다 구체적으로, 공여 골수세포는 인슐린 프로모터의 조절 하에 다양한 유전자(EGFP, Luciferase 등)를 발현하는 형질전환 마우스(B6-tg(Ins2-luc/EGFP/TK) 300kauf/J)로부터 수득하였으며, 수혜 마우스로는 정상 C57BL/6 마우스를 이용하였다. 먼저, 8~12주령 형질전환 마우스(B6-tg(Ins2-luc/EGFP/TK) 300kauf/J)의 대퇴골과 경골을 분리하고 PBS로 플러싱하여 골수세포를 확보한 뒤, 용혈 용액(BD Pharmingen)을 이용하여 적혈구를 제거하고, 5x107/ml의 농도가 되도록 PBS에 희석하였다. 이식 18시간 전에 1,000 cGy의 방사선을 조사받은 C57BL/6 마우스의 미정맥을 통해 상기 과정을 통해 준비된 골수세포를 0.1 ml 주입하였다. 이식 4주 뒤 상기 형질전환 마우스 유래의 골수 세포가 이식된 키메라 마우스에 150 mg/kg의 스트렙토조토신(streptozotocin, STZ, Sigma)을 복강 내로 투여하여 당뇨를 유발하였다. STZ 투여 7일 후에 혈당을 측정하여 450 mg/dl 이상의 혈당 수치를 보이는 개체를 당뇨가 유발된 마우스로 분류하고, 그로부터 3일 후 부검하여 췌장 및 지방 조직을 확보하였다. 상기 조직에서 EGFP를 발현하는 세포의 출현 여부를 공지된 방법인 면역염색법을 통해 확인하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, STZ를 투여받지 않은 정상 키메라 마우스의 췌장 및 지방조직에서는 EGFP를 발현하는 세포를 관찰할 수 없었으나, STZ 투여를 통해 당뇨가 유발된 마우스의 췌장 및 지방조직에서 EGFP를 발현하는 세포가 관찰되었다.
한편, 추가 4주 동안의 관찰 결과 혈당의 감소는 확인할 수 없었으며, 이를 통해 골수세포가 인슐린 생산세포로 분화될 수 있으며 그 원인이 고혈당에 기인한 것임을 확인하였다.
실시예 2. 생체 외에서 골수세포의 당대사 조절을 이용한 인슐린 생산세포로의 전분화
실시예 1에서와 동일한 방법으로 정상 C57BL/6 마우스 혹은 형질전환 마우스로부터 골수세포를 준비하였다. 5.5 mM 글루코오스, 2% FBS 및 1% 항생제가 포함된 DMEM 배지(표준배지)를 이용하여 상기 골수세포를 5x106 cells/ml의 농도로 부유하였으며, 이를 세포의 부착이 저해된 6 웰 플레이트에 분주하고, 각각의 웰에 다양한 농도의 글루코오스(0, 5, 10, 15 mM), 프럭토오스(5, 10, 15 mM), 피루베이트(5, 10, 15 mM), 자일로오스(5, 10, 20 mM), 자일리톨(5, 10, 15 mM) 또는 글루코사민(5, 10, 15 mM)을 처리한 후, 부유배양용 세포 배양 인큐베이터에서 3, 6 및 9일간 배양하면서 인슐린 생산세포가 출현하는지 여부를 평가하였다. 배양 시에는 부유배양용 세포배양 인큐베이터에 장착된 쉐이커가 30~60 rpm으로 계속하여 흔들어 줄 수 있도록 하였다. 인슐린 생산세포의 출현 여부는 상기 세포로부터 RNA를 분리한 후, 종래 공지된 방법에 따라 real-time PCR을 수행하여 인슐린을 생산하는 베타세포 분화를 촉진하는 인자들(neurogenin 3, PDX-1, MafA, Ptf1a)의 발현 정도를 분석함으로써 확인하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
다양한 농도의 글루코오스, 프럭토오스, 피루베이트, 자일로오스 또는 자일리톨을 첨가한 실험군에서는 인슐린 생산세포로의 분화를 촉진하는 인자의 발현 변화를 확인할 수 없었을 뿐만 아니라 인슐린 생산세포의 출현을 확인할 수 없었다. 반면 도 2에 나타낸 바와 같이, 글루코사민을 첨가한 실험군의 경우 글루코사민의 농도 및 배양시간의 경과에 따라 인슐린 생산세포 분화를 촉진하는 neurogenin 3, PDX-1, MafA, Ptf1a의 발현이 증가함을 확인하였다.
실시예 3. 글루코사민이 감작된 골수세포의 인슐린 생산세포 분화
상기 실시예 2의 결과를 바탕으로 글루코사민을 첨가하여 부유배양한 골수세포가 인슐린 생산세포로 분화될 수 있는지를 확인하기 위하여, 상기 실시예 1에서와 동일한 방법으로 정상 C57BL/6 마우스 혹은 형질전환 마우스로부터 골수세포를 준비하였다. 10 mM 글루코사민이 첨가된 표준배지를 이용하여, 상기 골수세포를 5x106 cells/ml의 농도로 부유하고, 상기 실시예 2에서 제시된 부유배양 방법과 동일하게 9일간 배양하였다. 대조군의 경우 글루코사민이 포함되지 않은 표준배지를 이용하여 동일한 조건으로 배양하였다. 배양 후 세포를 수득하고, 인슐린 생산세포의 출현여부를 확인하기 위하여 면역형광염색법을 통해 EGFP, insulin, PDX-1 발현을 확인하였다(도 3의 좌).
다음으로 부유배양 3, 6, 9일에 세포를 회수하고 PBS로 세척하여 남아있는 글루코사민을 제거한 후, 이를 11 mM 글루코오스, 10% FBS, 1% 항생제가 함유되어있는 RPMI1640 배지로 재부유 한 뒤, 부착배양용 6 웰 플레이트에 옮겨 3일간 추가배양 하였다. 부착배양된 세포가 인슐린을 분비하는지를 확인하기 위해, 배양 상층액 중에 존재하는 인슐린을 ELISA 방법을 통해 정량하였다(도 3의 우).
이상의 실험 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 형질전환 마우스 유래의 골수세포를 글루코사민에 노출시킬 경우 EGFP가 발현되고(도 3의 좌측상단), 정상 C57BL/6 마우스 유래의 골수세포를 글루코사민에 노출시킬 경우 insulin 및 PDX-1의 발현이 나타남(도 2의 좌측하단)을 확인하였다. 또한, 글루코사민에 노출되어 3일 이상 부유된 골수세포를 부착배양 하였을 때 골수세포가 인슐린을 생산하는 세포로 완전분화되어 인슐린 분비량이 시간에 따라 증가함(도 3의 우)을 확인하였다.
상기 결과를 통하여, 글루코사민이 골수세포의 당대사를 조절하며 인슐린을 생산할 수 있는 세포로 전분화될 수 있도록 분화스위칭을 조절하는 역할을 하며, 글루코사민에 3일 이상 노출된 후 글루코사민을 제거하더라도 인슐린 생산세포로의 분화가 완전하게 이루어짐을 확인하였다.
실시예 4. 말초혈액 유래 골수유래 세포의 인슐린 생산세포로의 분화
말초혈액에서 분리한 골수유래 세포가 글루코사민에 의해 인슐린 생산세포로 분화될 수 있는지를 확인하기 위하여, 상기 실시예 3과 동일한 방법으로 인슐린 생산세포로의 분화여부를 평가하였다. 먼저, 말초혈액으로 동원된 골수세포를 얻기 위하여 정상 C57BL/6 마우스에 250 μg/kg의 G-CSF를 1일 1회 4일간 피하 주사하고, 마지막 G-CSF를 주사한 후 복대정맥을 통하여 말초혈액을 확보하였다. 확보된 말초혈액은 적혈구 제거과정을 거친 후, 10 mM 글루코사민이 첨가된 표준배지로 3일간 부유배양하였으며, 이를 회수하고 PBS로 남아있는 글루코사민을 제거하였다. 대조군의 경우 글루코사민이 포함되지 않은 표준배지를 이용하여 동일한 조건으로 배양하였다. 상기 세포를 11 mM 글루코오스, 10% FBS, 1% 항생제가 함유된 RPMI1640 배지로 재부유 한 뒤, 부착배양용 6 웰 플레이트에 옮겨 3일간 추가배양 하였다. 인슐린 생산세포의 출현여부는 상기 실시예 3에서와 동일한 방법으로 면역형광염색법을 통하여 확인하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다
도 4에 나타낸 바와 같이, insulin 및 PDX-1의 발현을 통해 상기 실시예 3의 결과와 마찬가지로 말초혈액으로부터 분리한 골수유래 세포 역시 글루코사민에 의해 인슐린을 생산하는 세포로 완전분화됨을 확인하였다.
실시예 5. 전분화된 골수세포의 이식을 통한 인슐린 생산세포로의 완전분화 유도 및 혈당 조절 효과 검증
상기 실시예 3과 4의 결과를 바탕으로 글루코사민을 이용하여 전분화된 골수세포가 생체 내에서 완전분화될 수 있는지를 확인하고자 당뇨병 모델 마우스에 상기 전분화된 골수세포를 이식하였다. 보다 구체적으로, 전분화된 골수 세포는 10 mM 글루코사민을 함유하는 표준배지를 이용하여 3일간 배양한 뒤 PBS로 세척하여 준비하고, 실시예 1에서와 동일한 방법으로 마우스에 당뇨를 유발시키고, 3일 후 마우스의 미정맥을 통하여 개체당 2x106개의 전분화된 골수 세포를 이식하였다. 대조군의 경우 글루코사민이 포함되지 않은 표준배지를 이용하여 동일한 조건으로 배양한 세포를 이식하였다. 이식 후 30일간 혈당을 모니터링 하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 글루코사민이 첨가되지 않은 배지에서 배양된 세포를 이식한 대조군에서는 실험 전 기간에 걸쳐 세포의 이식에 의한 혈당 변화를 확인할 수 없었으나, 글루코사민에 의해 전분화된 세포를 이식 받은 실험군에서는 이식 후 5일을 기점으로 12일까지 혈당이 저하됨을 확인하였다. 상기 결과를 통하여, 글루코사민을 이용하여 전분화된 골수 세포가 생체 내에서 인슐린 분리세포로 완전 분화되어 혈당을 조절할 수 있음을 확인하였다.

Claims (7)

  1. 글루코사민을 포함하는 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 배지 조성물.
  2. 제1항의 배지 조성물에서 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 인슐린 생산세포로의 분화를 유도하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 세포는 골수세포 또는 성체줄기세포인 것을 특징으로 하는, 인슐린 생산세포로의 분화를 유도하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 성체줄기세포는 골수, 제대혈, 혈액, 피부, 지방 및 태반으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 인슐린 생산세포로의 분화를 유도하는 방법.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 인슐린 생산세포.
  6. 제5항의 인슐린 생산세포를 포함하는 당뇨병 치료용 세포 치료제.
  7. 제6항에 있어서, 상기 당뇨병은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병인 것을 특징으로 하는, 세포 치료제.
PCT/KR2015/004741 2014-06-12 2015-05-12 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법 Ceased WO2015190710A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20140071583A KR101496804B1 (ko) 2014-06-12 2014-06-12 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법
KR10-2014-0071583 2014-06-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015190710A1 true WO2015190710A1 (ko) 2015-12-17

Family

ID=53025768

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2015/004741 Ceased WO2015190710A1 (ko) 2014-06-12 2015-05-12 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101496804B1 (ko)
WO (1) WO2015190710A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102148425B1 (ko) * 2020-01-09 2020-08-26 서울대학교산학협력단 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 조성물 및 이의 이용

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100679642B1 (ko) * 2005-11-16 2007-02-06 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100679642B1 (ko) * 2005-11-16 2007-02-06 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BALKAN, B. ET AL.: "Glucosamine inhibits glucokinase in vitro and produces a glucose-specific impairment of in vivo insulin secretion in rats", DIABETES, vol. 43, no. 10, October 1994 (1994-10-01), pages 1173 - 1179 *
NELSON, BA . ET AL.: "High glucose and glucosamine induce insulin resistance via different mechanisms in 3T3-L1 adipocytes", DIABETES, vol. 49, June 2000 (2000-06-01), pages 981 - 991, XP055242642 *
OH, SH. ET AL.: "Adult bone marrow-derived cells transdifferentiating into insulin-producing cells for the treatment of type I diabetes", LABORATORY INVESTIGATION, vol. 84, 2004, pages 607 - 617, XP008146969 *
TANG, DQ. ET AL.: "In vivo and In vitro characterization of insulin-producing cells obtained from murine bone marrow", DIABETES, vol. 53, July 2004 (2004-07-01), pages 1721 - 1732, XP003004042 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR101496804B1 (ko) 2015-03-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101524079B1 (ko) 엑소솜을 이용한 성체 유래 세포로부터 인슐린 생산세포로의 분화 유도 방법
Mahla Stem cells applications in regenerative medicine and disease therapeutics
Beer et al. Centroacinar cells: At the center of pancreas regeneration
Holterman et al. Molecular regulation of satellite cell function
McCullagh et al. Coaxing stem cells for skeletal muscle repair
Tang et al. Advances in genetically modified neural stem cell therapy for central nervous system injury and neurological diseases
WO2012111997A2 (en) Cell therapy composition for preventing or treating immune disease comprising mesenchymal stem cells and immunoregulatory t-cells as active ingredient
El-Tahawy et al. Effect of platelet rich plasma (PRP) injection on the endocrine pancreas of the experimentally induced diabetes in male albino rats: a histological and immunohistochemical study
US20060247195A1 (en) Method of altering cell properties by administering rna
Yu et al. Mobilizing endogenous stem cells for retinal repair
Schmeer et al. Cell-replacement therapy and neural repair in the retina
WO2017131352A1 (ko) 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 함유하는 베이지 지방세포 분화 유도용 조성물
Tsupykov et al. Long‐term fate of grafted hippocampal neural progenitor cells following ischemic injury
CN106701669A (zh) 临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途
US9089550B2 (en) Combined islet transplantation using pancreatic islets and adipose tissue derived stem cells
WO2017078439A1 (ko) 췌장소도세포 및 엘라스틴 유사 인공 세포외 기질을 포함하는 당뇨병 치료용 약학적 조성물
KR101496804B1 (ko) 인슐린 생산세포로의 분화 및 이용방법
Dietrich et al. Trophic effects of adipose derived stem cells on Langerhans islets viability
WO2021141452A1 (ko) 인슐린 생산세포로의 분화 유도용 조성물 및 이의 이용
EP2061874B1 (en) Fused mesenchymal stem cells useful for the treatment of diabetes and methods thereof
CN110302398A (zh) 一种含有Atoh7和/或Pou4f的组合物、其制备方法及医药用途
KR101177273B1 (ko) 췌도세포의 배양시 그의 생존률 또는 기능을 증진시키는방법
Dong et al. A concise review of the orofacial mesenchymal stromal cells as a novel therapy for neurological diseases and injuries
Timmer et al. A novel strategy for intrastriatal dopaminergic cell transplantation: Sequential “nest” grafting influences survival and behavioral recovery in a rat model of Parkinson's disease
KR101789475B1 (ko) 편도 유래 중간엽 줄기세포 또는 이의 조정 배지를 포함하는 골다공증 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15806644

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 15806644

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1