WO2015156286A1 - 等電点電気泳動器具および等電点電気泳動方法 - Google Patents

等電点電気泳動器具および等電点電気泳動方法 Download PDF

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英樹 木下
祥之 石田
豊 鵜沼
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis

Definitions

  • the present invention relates to an isoelectric focusing technique (IEF), and more particularly, to a technique for reducing the influence of ionic impurities contained in a sample.
  • IEF isoelectric focusing technique
  • Isoelectric focusing is known as one of the analysis techniques for biomolecule samples. In isoelectric focusing, when a sample contains a large amount of ionic impurities, the ionic impurities are deposited on the electrode, the migration is disturbed, and a clear migration result cannot be obtained.
  • a sample extracted from the living body contains a lot of ionic impurities (salts).
  • the sample in order to dissolve a hardly soluble biomolecule, the sample may be dissolved in a solvent containing a salt.
  • the sample is desalted before isoelectric focusing, or, as described in Patent Document 1, is moistened with water between the electrode and the gel during isoelectric focusing.
  • the filter paper is sandwiched, and ionic impurities are adsorbed on the filter paper.
  • FIG. 7 is a side sectional view of the isoelectric focusing device 9 according to the prior art.
  • the isoelectric focusing instrument 9 includes a gel 2, an electrode 3, an electrode 4, a filter paper 7 and a filter paper 8 in which a pH gradient is formed, and the filter paper 7 is interposed between the gel 2 and the electrode 3.
  • a filter paper 8 is sandwiched between the electrodes 4. Therefore, the current flows through a path of electrode 3 -filter paper 7 -gel 2 -filter paper 8 -electrode 4. Therefore, the sample may flow out from the gel 2 to the filter paper 7 or the filter paper 8 by electrophoresis.
  • the gel part in contact with the filter paper is equipotential, the sample that has flowed out to the filter paper 7 or the filter paper 8 diffuses into the filter paper 7 or the filter paper 8, and part of the sample enters the gel 2 again.
  • the isoelectric point of the portion of the gel where the filter paper 7 or the filter paper 8 is in contact becomes flat as shown in FIG. 7B, and the separation range is narrowed.
  • the process of installing and removing the filter papers 7 and 8 is complicated, and the gel 2 may be damaged when the filter papers 7 and 8 are removed from the gel 2.
  • the present invention has been made in view of the above problems, and in isoelectric focusing, to prevent ionic impurities from accumulating on the electrode in contact with the gel and to obtain a clear electrophoretic result.
  • the main purpose is to provide this technology.
  • an isoelectric focusing instrument includes a gel in which a pH gradient is formed along a specific direction, and the gel in the specific direction.
  • FIG. 1 is a side sectional view schematically showing a schematic configuration of an isoelectric focusing device according to an embodiment of the present invention. It is a top view which shows typically the variation of the solvent holding
  • the isoelectric focusing device includes a gel in which a pH gradient is formed along a specific direction, and a first voltage applying a voltage along the specific direction to the gel.
  • a second electrode, and the first electrode is in contact with the gel, and further includes a solvent holding unit that holds the solvent and contacts the solvent with the first electrode and the gel. .
  • the first electrode is in contact with the gel, and the solvent holding unit is contacting the solvent with the first electrode and the gel.
  • the ionic contaminant which moved to the vicinity of the 1st electrode which is contacting the gel can be diffused in the said solvent, and it can prevent that an ionic contaminant accumulates on the 1st electrode.
  • the influence which an ionic contaminant has on isoelectric focusing can be suppressed, and a clear electrophoretic result can be obtained.
  • FIG. 1 is a side sectional view schematically showing a schematic configuration of an isoelectric focusing instrument 1 according to an embodiment (Embodiment 1) of the present invention.
  • the isoelectric focusing instrument 1 includes a gel 2, a first electrode 4, a second electrode 3, a solvent holding unit 6, and a solvent holding unit 5.
  • the gel 2 is not particularly limited as long as a pH gradient is formed along a specific direction, and a known gel generally used in isoelectric focusing can be used.
  • An IPG (Immobilized pH gradient) immobilized by an acrylamide derivative, a tube gel having a pH gradient formed by an ampholite, or the like can be used.
  • the shape of the gel 2 is not particularly limited, but in the present embodiment, the gel 2 is a plate-like gel whose longitudinal direction is the direction of the pH gradient.
  • a gel 2 for example, a commercially available IPG gel can be used.
  • One of the first electrode 4 and the second electrode 3 is an anode and the other is a cathode.
  • the material of the first and second electrodes is not particularly limited, and may be, for example, a metal such as platinum, gold, silver, or copper, or carbon.
  • the first electrode 4 and the second electrode 3 are in contact with the gel 2 (for example, the plate surface of the gel 2), and a voltage is applied to the gel 2 along the direction of the pH gradient of the gel 2. Electrode.
  • the solvent holding unit 6 holds the solvent in contact with the first electrode 4 and the gel 2. Further, the solvent holding unit 5 holds the solvent so as to contact the second electrode 3 and the gel 2.
  • the “solvent” is not particularly limited as long as it is a solvent capable of dissolving ionic impurities (for example, salt), and may be an aqueous solvent or an organic solvent.
  • the solvent may contain an additive (for example, glycerol) for increasing the viscosity.
  • Conducting isoelectric focusing using the isoelectric focusing instrument 1 by introducing a sample into the gel 2 and applying a voltage to the gel 2 using the first electrode 4 and the second electrode 3 Can do. Since a gel 2 has a pH gradient, when a voltage is applied between the first electrode 4 and the second electrode 3, each component (eg, protein) in the sample has its isoelectric point. To the position in the gel 2 corresponding to.
  • the sample may contain ionic impurities.
  • a sample extracted from the living body contains a large amount of ionic contaminants (salts).
  • the sample in order to dissolve a hardly soluble biomolecule, the sample may be dissolved in a solvent containing a salt.
  • this ionic contaminant moves to the vicinity of the first electrode 4 or the second electrode 3 by electrophoresis and deposits on the first electrode 4 or the second electrode 3, the migration is disturbed and clear migration is performed. The result is not obtained.
  • the solvent holding unit 6 brings the solvent into contact with the first electrode 4, the ionic impurities moved to the vicinity of the first electrode 4 diffuse into the solvent. Thereby, it is possible to prevent ionic impurities from being deposited on the first electrode 4. Thereby, the influence which an ionic contaminant has on isoelectric focusing can be suppressed, and a clear electrophoretic result can be obtained.
  • maintenance part 5 also has the same effect.
  • the first electrode 4 and the second electrode 3 are in direct contact with the gel 2. Therefore, the current flows through the path of the second electrode 3 -gel 2 -first electrode 4 without passing through the solvent holding parts 5 and 6. Therefore, the sample in the gel 2 hardly flows out from the gel 2 to the solvent holding portion 5 or 6 by electrophoresis. Therefore, unlike the technique described in Patent Document 1, the separation range is not narrowed, and the isoelectric spot can be detected clearly up to the vicinity of the electrode.
  • maintenance part 6 is the 2nd electrode 3 with respect to the plane A perpendicular
  • the solvent is held in a region opposite to the second electrode 3 with respect to the plane A.
  • the outer edges of the first electrode 4 and the second electrode side 3 of the solvent holding unit 6 are both on the plane A, and the solvent that dissolves ionic impurities is It is completely excluded from between the electrodes of the first and second electrodes.
  • the solvent that dissolves the ionic impurities is held between the first electrode 4 and the second electrode 3. Thereby, it is possible to suppress the ionic contaminants dissolved in the solvent from moving again toward the first electrode 4 and to further suppress the influence of the ionic contaminants on the isoelectric focusing. . Moreover, the solvent holding
  • the first electrode 4 is sandwiched between the gel 2 and the solvent holding unit 6. Thereby, the ionic impurities moved to the vicinity of the first electrode 4 can be successfully diffused into the solvent held by the solvent holding unit 6. Moreover, the solvent holding
  • FIG. 2 is a plan view schematically showing a variation of the solvent holding unit 6 in the present embodiment.
  • FIG. 2 shows the structure by which the groove
  • the solvent can be successfully held by forming the groove 6 a for holding the solvent on the surface of the solvent holding unit 6 that faces the first electrode 4 and the gel 2.
  • FIG. 2 (b) shows a configuration in which a porous body 6b that holds the solvent is provided on the surface of the solvent holding portion 6 that faces the first electrode 4 and the gel 2.
  • the solvent can be successfully held by providing the porous body 6b that holds the solvent on the surface of the solvent holding unit 6 that faces the first electrode 4 and the gel 2.
  • it can suppress that a solvent moves from the solvent holding
  • the porous body 6b is not particularly limited as long as it can hold a solvent, and may be, for example, a porous resin or a fiber.
  • the fiber for example, filter paper may be used.
  • FIG. 2 shows a configuration in which a plurality of fine grooves 6 c are provided on the surface of the solvent holding unit 6 that faces the first electrode 4 and the gel 2.
  • the plurality of fine grooves 6c may be fine grooves as used in capillary electrophoresis in one embodiment.
  • the solvent since the solvent is held in the fine groove 6c, the solvent moves from the solvent holding portion 6 to the gel 2 due to capillary action, and the gel 2 swells, thereby adversely affecting isoelectric focusing. Can be suppressed.
  • the shape of the plurality of fine grooves provided on the surface of the solvent holding unit 6 facing the first electrode 4 and the gel 2 is a stripe shape.
  • the form is not limited to this, and it may be a concentric fine groove 6d as shown in FIG. 2D, or a lattice-like fine groove 6e as shown in FIG. There may be. Note that the amount of the solvent retained can be increased by providing the lattice-like fine grooves 6e as shown in FIG.
  • the solvent holding unit 6 may be removable from the isoelectric focusing device 1.
  • the solvent holding part is removed, and the ionic contaminants are removed from the isoelectric focusing instrument 1. can do. Thereby, the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • maintenance part 6 in this embodiment is not pinched
  • the solvent holding unit 5 may also be removable from the isoelectric focusing device 1.
  • Isoelectric focusing method In the isoelectric focusing method according to the present embodiment, a voltage is applied between the introduction step of introducing a sample into the gel 2 of the isoelectric focusing instrument 1 and the first electrode 4 and the second electrode 3. And an electrophoresis step of performing isoelectric focusing.
  • the method for introducing the sample is not particularly limited, and a known method can be used.
  • a known method can be used.
  • conditions for applying the voltage are not particularly limited, and for example, conditions generally used in the isoelectric focusing method may be used.
  • the solvent holding unit 6 is connected to the isoelectric focusing instrument 1.
  • a pre-electrophoresis step that is removed from the substrate may further be included.
  • the solvent holding unit 6 can be removed, and the ionic contaminants can be removed from the isoelectric focusing instrument 1. Thereby, the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • the value of the current flowing between the first electrode 4 and the second electrode 3 decreases, and then the solvent holding unit 6 is It is preferable to remove from the electrophoretic electrophoresis instrument 1.
  • the value of the current flowing between the first electrode 4 and the second electrode 3 serves as an index of the amount of ionic impurities in the gel 2. For this reason, the value of the current flowing between the first electrode 4 and the second electrode 3 is decreased, and after most of the ionic impurities existing in the gel 2 are dissolved in the solvent, the solvent holding unit 6 is removed. By doing so, ionic impurities can be sufficiently removed from the isoelectric focusing instrument 1. Thereby, the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • the solvent holding unit 5 may be removed in addition to the solvent holding unit 6 or instead of the solvent holding unit 6.
  • the solvent holding unit 6 and the solvent holding unit 5 are provided to bring the solvent into contact with each of the first electrode 4 and the second electrode 3, and the first electrode 4 and the second electrode are provided.
  • the present invention is not limited to this, and one of the solvent holding unit 6 and the solvent holding unit 5 may be omitted.
  • a part of the solvent holding unit 6 is perpendicular to the pH gradient direction of the gel 2 and the second electrode 3 side of the plane A including the outer edge of the first electrode 4 on the second electrode 3 side.
  • the electrode 3 side region may also be disposed, and a part of the solvent may be held in the region on the second electrode 3 side with respect to the plane A. That is, from another viewpoint, the outer edges of the first electrode 4 and the second electrode side 3 in the solvent holding unit 6 may not be on the same plane.
  • a part of the solvent holding part 5 is perpendicular to the pH gradient direction of the gel 2 and includes a first electrode 4 with respect to a plane including the outer edge of the second electrode 3 on the first electrode 4 side. You may arrange
  • the first electrode 4 may be embedded in the solvent holding unit 6. That is, the first electrode 4 only needs to be in contact with both the gel 2 and the solvent holding unit 6, and does not need to be sandwiched between the gel 2 and the solvent holding unit 6.
  • the second electrode 3 may be embedded in the solvent holding unit 5 in the same manner. That is, the second electrode 3 only needs to be in contact with both the gel 2 and the solvent holding unit 5, and does not need to be sandwiched between the gel 2 and the solvent holding unit 5.
  • the isoelectric focusing device includes a gel in which a pH gradient is formed along a specific direction, and a voltage along the specific direction with respect to the gel.
  • a first and second electrodes to be applied, the first electrode being in contact with the gel, holding the solvent, and bringing the solvent into contact with the first electrode and the gel Is further provided.
  • the first electrode is in contact with the gel, and the solvent holding unit is contacting the solvent with the first electrode and the gel.
  • the ionic contaminant which moved to the vicinity of the 1st electrode which is contacting the gel can be diffused in the said solvent, and it can prevent that an ionic contaminant accumulates on the 1st electrode.
  • the influence which an ionic contaminant has on isoelectric focusing can be suppressed, and a clear electrophoretic result can be obtained.
  • the solvent holding unit is perpendicular to the specific direction and includes a plane including the outer edge on the second electrode side of the first electrode.
  • the solvent may be held in a region opposite to the second electrode.
  • the solvent that dissolves the ionic impurities is held outside the first and second electrodes. Thereby, it is possible to suppress the ionic contaminants dissolved in the solvent from moving again in the electrode direction, and to further suppress the influence of the ionic contaminants on the isoelectric focusing. In addition, since there is no gel portion that is equipotential by contacting the filter paper between the first and second electrodes, the separation range is not narrowed.
  • the outer edge of the first electrode and the second electrode side in the solvent holding part may be on the same plane.
  • the solvent that dissolves the ionic impurities is completely excluded from between the electrodes of the first and second electrodes. Therefore, it is possible to suppress the ionic contaminants dissolved in the solvent from moving again in the electrode direction, and to further suppress the influence of the ionic contaminants on the isoelectric focusing.
  • the gel and the solvent holding part may sandwich the first electrode.
  • the ionic contaminants that have moved to the vicinity of the first electrode can be successfully diffused into the solvent held by the solvent holding unit.
  • a groove for holding the solvent is formed on the surface of the solvent holding portion facing the first electrode and the gel. It may be formed.
  • the solvent holding unit can successfully hold the solvent.
  • the groove may be composed of a plurality of fine grooves.
  • the porous body that holds the solution is provided on the surface of the solvent holding portion that faces the first electrode and the gel. It may be provided.
  • the porous body may be filter paper.
  • the solvent holding unit can be configured easily and inexpensively.
  • the solvent holding unit may be removable from the isoelectric focusing instrument.
  • the solvent holding unit can be removed from the isoelectric focusing instrument, after the ionic impurities are sufficiently dissolved in the solvent, the solvent holding unit is removed and the isoelectric focusing is performed. Ionic impurities can be removed from within the instrument. Thereby, the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • the gel is a plate-like gel whose longitudinal direction is the specific direction, and the first electrode is the gel It may be in contact with the plate surface.
  • a voltage is applied between the first and second electrodes and the introduction step of introducing the sample into the gel in the isoelectric focusing instrument of the first to tenth aspects. And an electrophoresis step of performing isoelectric focusing.
  • the solvent is retained after the voltage is applied between the first and second electrodes.
  • You may further include the pre-electrophoresis process which removes a part from the said isoelectric focusing instrument.
  • the solvent holding unit can be removed and the ionic contaminants can be removed from the isoelectric focusing instrument.
  • the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • the first and second electrodes are applied with a predetermined voltage applied between the first and second electrodes. After the value of the current flowing therebetween decreases, the solvent holding unit may be removed from the isoelectric focusing instrument.
  • the value of the current flowing between the first and second electrodes serves as an index of the amount of ionic impurities in the gel. For this reason, the current value flowing between the first and second electrodes decreases, and after removing most of the ionic contaminants present in the gel in the solvent, the isoelectric current is removed. Ionic contaminants can be sufficiently removed from the point electrophoresis instrument. Thereby, the influence with respect to isoelectric focusing of an ionic impurity can further be suppressed, and a clearer electrophoresis result can be obtained.
  • Example 1 Isoelectric focusing was performed using an isoelectric focusing instrument 1 as shown in FIG.
  • gel 2 a swollen IPG gel in which a pH gradient was formed in the range of pH 4 to 7 was used.
  • 2 ⁇ g of MLL labeled with IC-5 (mouse liver sample) was mixed with urea, thiourea, 3- (3-cholamidepropyl) dimethylamino-1-propanosulfonate (CHAPS), dithiothreitol (DTT), amphoteric electrolyte ( A solution in which 80 mM NaCl was added as a salt to a solution containing Amphoryte) was used.
  • As the solvent holding units 5 and 6 filter paper moistened with distilled water was used.
  • Step 1 a voltage indicated by a broken line 5 in FIG. 5 was applied between the first electrode 4 and the second electrode 3. That is, as Step 1, a constant voltage of 200 V was applied for 5 minutes. Subsequently, as Step 2, a voltage was applied while changing nonlinearly to 1000 V for 5 minutes. Subsequently, as Step 3, a constant voltage of 1000 V was applied for 5 minutes. Subsequently, as Step 4, a voltage was applied while linearly changing to 7000 V for 10 minutes. Subsequently, as Step 5, a constant voltage of 7000 V was applied for 10 minutes.
  • the gel 2 subjected to isoelectric focusing was subjected to SDS equilibration, and second-dimensional electrophoresis was performed using a 10% polyacrylamide gel.
  • the obtained gel was imaged with a fluorescence image scanner (Tyhoon: GE Health Care) to visualize the spots.
  • Example 1 Isoelectric focusing was performed in the same manner as in Example 1 except that the isoelectric focusing instrument 10 as shown in FIG. Next, in the same manner as in Example 1, second-dimensional electrophoresis and imaging were performed.
  • Example 2 In Example 1, isoelectric focusing was performed in the same manner as in Example 1 except that preliminary electrophoresis was performed before Step 1.
  • step A a constant voltage of 200 V was applied for 5 minutes.
  • Step B a voltage was applied while changing nonlinearly to 1000 V for 5 minutes.
  • Step C a constant voltage of 1000 V was applied for 5 minutes. Thereafter, the solvent holders 5 and 6 were removed from the isoelectric focusing device 1 and steps 1 to 5 were performed.
  • FIG. 5 is a graph comparing current value changes in isoelectric focusing according to Examples 1 and 2 and Comparative Example 1.
  • a broken line 1 indicates a change in the current value in the first embodiment.
  • a broken line 2 indicates a change in current value in Comparative Example 1.
  • a broken line 3 indicates a change in the current value in steps 1 to 5 of the second embodiment.
  • a broken line 4 indicates changes in the current value in steps A to C of the second embodiment.
  • a broken line 5 indicates a change in voltage in steps 1 to 5 of Examples 1 and 2 and Comparative Example 1.
  • FIG. 6 shows a photograph of the result of two-dimensional electrophoresis in Comparative Example 1.
  • FIG. 6B shows a photograph of the result of two-dimensional electrophoresis in Example 1.
  • FIG. 6C shows a photograph of the result of two-dimensional electrophoresis in Example 2.
  • Example 2 As can be seen by comparing (b) and (c) in FIG. 6, the resolution (focusing) of the spot is further improved in Example 2 compared to Example 1, and a clearer result is obtained. It was. Further, as can be seen from the comparison between the broken line 1 and the broken line 3, unlike Example 1, in Example 2, almost no current flowed from the initial stage to the middle stage (Steps 1 to 3). This is because the pre-electrophoresis in Example 2 (steps A to C, broken line 4) is completed after the current value is reduced to a value close to zero. It is shown that most of was dissolved and removed in the solvent.
  • the present invention can be used in the field of manufacturing analytical equipment such as biomolecules and the field of analysis of biomolecules.

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Abstract

　等電点電気泳動において、ゲルに接触している電極にイオン性夾雑物が堆積することを防止して、クリアな泳動結果を得ること。等電点電気泳動器具（１）は、ｐＨ勾配が形成されているゲル（２）と、ゲル（２）に対し電圧を印加する第一および第二の電極（４、３）と、を備え、第一の電極（４）はゲル（２）に接触しており、溶媒を保持するとともに溶媒を第一の電極（４）およびゲル（２）に接触させる溶媒保持部（６）をさらに備えている。

Description

等電点電気泳動器具および等電点電気泳動方法
　本発明は、等電点電気泳動技術（ＩＥＦ：Isoelectric focusing）に関するものであり、詳細には、サンプルに含まれるイオン性夾雑物の影響を低減する技術に関するものである。
　生体分子サンプルの分析技術の一つとして、等電点電気泳動が知られている。等電点電気泳動では、サンプルにイオン性夾雑物が多く含まれている場合、イオン性夾雑物が電極に堆積して、泳動が乱れ、クリアな泳動結果が得られないという問題が生じ得る。
　特に、生体内から抽出したサンプルには、イオン性夾雑物（塩）が多く含まれる。また、難溶性の生体分子を溶解させるために塩を含んだ溶媒に溶解させてサンプルとする場合もある。
　そのため、等電点電気泳動を行う前にサンプルの脱塩処理を行うことや、特許文献１に記載のように、等電点電気泳動の際に、電極とゲルとの間に水で湿らせたろ紙を挟み、ろ紙にイオン性夾雑物を吸着させること等が行われる。
日本国公開特許公報「特開２０１１－３３５４６号公報（２０１１年２月１７日公開）」
　しかしながら、脱塩処理は煩雑である。また、特許文献１のように、電極とゲルとの間に水で湿らせたろ紙を挟んで等電点電気泳動を行った場合、当該ろ紙が等電点電気泳動に次の様な悪影響を及ぼす場合がある。
　図７の（ａ）は、従来技術に係る等電点電気泳動器具９の側方断面図である。等電点電気泳動器具９は、ｐＨ勾配が形成されたゲル２、電極３、電極４、ろ紙７およびろ紙８を備えており、ゲル２と電極３との間にろ紙７が、ゲル２と電極４との間にろ紙８が挟まれている。そのため、電流は、電極３－ろ紙７－ゲル２－ろ紙８－電極４という経路で流れる。ゆえに、電気泳動によって、サンプルが、ゲル２からろ紙７またはろ紙８に流出する場合がある。ろ紙に接するゲル部は等電位になるため、ろ紙７またはろ紙８に流出したサンプルは、ろ紙７またはろ紙８中に拡散し、一部は、再度ゲル２に入る。これによって、ゲルにおけるろ紙７またはろ紙８が接触している部位の等電点が、図７の（ｂ）に示すようにフラットになり、分離範囲が狭くなってしまう。また、ろ紙７、８を設置および除去する工程も煩雑であり、ろ紙７、８をゲル２から除去する際にゲル２を破損するおそれもある。
　これに対し、図７の（ｃ）に示す等電点電気泳動器具１０のように、ゲル２に直接電極３および電極４が接触している構成では、電流が、電極３－ゲル２－電極４という経路で流れるため、電気泳動によって、サンプルがゲル２からろ紙等に流出することはない。また、ろ紙の設置および除去も不要である。しかしながら、等電点電気泳動器具１０の構成では、サンプルに含まれたイオン性夾雑物が電極に堆積して、クリアな泳動結果が得られない場合がある。
　本発明は、上記課題に鑑みてなされたものであり、等電点電気泳動において、ゲルに接触している電極にイオン性夾雑物が堆積することを防止して、クリアな泳動結果を得るための技術を提供することを主たる目的とする。
　上記の課題を解決するために、本発明の一態様に係る等電点電気泳動器具は、特定の方向に沿ってｐＨ勾配が形成されているゲルと、該ゲルに対し、該特定の方向に沿って電圧を印加する第一および第二の電極と、を備え、第一の電極は、該ゲルに接触しており、溶媒を保持するとともに、該溶媒を第一の電極および該ゲルに接触させる溶媒保持部をさらに備えている。
　本発明の一態様によれば、等電点電気泳動において、ゲルに接触している電極にイオン性夾雑物が堆積することを防止して、クリアな泳動結果を得ることができる。
本発明の一実施形態に係る等電点電気泳動器具の概略構成を模式的に示す側方断面図である。 本発明の一実施形態における溶媒保持部のバリエーションを模式的に示す平面図である。 本発明の他の実施形態に係る等電点電気泳動器具の概略構成を模式的に示す側方断面図である。 本発明のさらに他の実施形態に係る等電点電気泳動器具の概略構成を模式的に示す側方断面図である。 実施例および比較例に係る等電点電気泳動における電流値の変化を比較するグラフである。 実施例および比較例に係る等電点電気泳動を含む二次元電気泳動の結果を比較する図である。 （ａ）は、従来技術に係る等電点電気泳動器具の側方断面図を示し、（ｂ）は、従来技術に係る等電点電気泳動器具を用いた等電点電気泳動における電位分布のグラフを示し、（ｃ）は、従来技術に係る他の等電点電気泳動器具の側方断面図を示す。
　本発明の態様１に係る等電点電気泳動器具は、特定の方向に沿ってｐＨ勾配が形成されているゲルと、該ゲルに対し、該特定の方向に沿って電圧を印加する第一および第二の電極と、を備え、第一の電極は、該ゲルに接触しており、溶媒を保持するとともに、該溶媒を第一の電極および該ゲルに接触させる溶媒保持部をさらに備えている。
　上記の構成によれば、第一の電極はゲルに接触しており、溶媒保持部が溶媒を第一の電極およびゲルに接触させている。これにより、ゲルに接触している第一の電極近傍に移動したイオン性夾雑物を当該溶媒に拡散させて、第一の電極にイオン性夾雑物が堆積することを防止することができる。これにより、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響を抑制して、クリアな泳動結果を得ることができる。
　〔実施形態１〕
　（等電点電気泳動器具）
　図１は、本発明の一実施形態（実施形態１）に係る等電点電気泳動器具１の概略構成を模式的に示す側方断面図である。等電点電気泳動器具１は、ゲル２、第一の電極４、第二の電極３、溶媒保持部６および溶媒保持部５を備えている。
　ゲル２としては、特定の方向に沿ってｐＨ勾配が形成されているものであれば特に限定されず、等電点電気泳動において一般的に用いられている公知のゲルを用いることができ、例えば、アクリルアミド誘導体によって形成されるＩＰＧ（Immobilized pH gradient、固定化ｐＨ勾配）ゲルや、アンフォライトによってｐＨ勾配が形成されたチューブゲル等を用いることができる。
　ゲル２の形状は特に限定されないが、本実施形態では、長手方向が、ｐＨ勾配の方向である板状のゲルである。このようなゲル２としては、例えば、市販のＩＰＧゲルを用いることができる。
　第一の電極４および第二の電極３は、何れか一方が陽極であり他方が陰極である。第一および第二の電極の素材は特に限定されないが、例えば、白金、金、銀、銅等の金属や、カーボン等であり得る。第一の電極４および第二の電極３は、ゲル２（例えば、ゲル２の板面）に接触しており、ゲル２に対して、ゲル２のｐＨ勾配の方向に沿って電圧を印加するための電極となる。
　溶媒保持部６は、溶媒を、第一の電極４およびゲル２に接触させるように保持するものである。また、溶媒保持部５は、溶媒を、第二の電極３およびゲル２に接触させるように保持するものである。
　「溶媒」は、イオン性夾雑物（例えば、塩）を溶解することができる溶媒であれば特に限定されず、水系の溶媒または有機溶媒であり得る。また、溶媒には、粘度を高めるための添加剤（例えば、グリセロール）が含まれていてもよい。
　ゲル２にサンプルを導入し、第一の電極４および第二の電極３を用いてゲル２に電圧を印加することにより、等電点電気泳動器具１を用いて等電点電気泳動を行うことができる。ゲル２にはｐＨ勾配が形成されているため、第一の電極４および第二の電極３の間に電圧が印加されると、サンプル中の各成分（例えば、タンパク質）は、その等電点に対応するゲル２中の位置に泳動される。
　このとき、サンプル中には、イオン性夾雑物が含まれていることがある。例えば、生体内から抽出したサンプルには、イオン性夾雑物（塩）が多く含まれる。また、難溶性の生体分子を溶解させるために塩を含んだ溶媒に溶解させてサンプルとする場合もある。このイオン性夾雑物が、電気泳動によって、第一の電極４または第二の電極３の近傍まで移動し、第一の電極４または第二の電極３に堆積すると、泳動が乱れ、クリアな泳動結果が得られない。
　ここで、本実施形態によれば、溶媒保持部６が、溶媒を第一の電極４に接触させるため、第一の電極４近傍に移動したイオン性夾雑物は当該溶媒に拡散する。これにより、第一の電極４にイオン性夾雑物が堆積することを防止することができる。これにより、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響を抑制して、クリアな泳動結果を得ることができる。また、溶媒保持部５も同様の効果を奏する。
　なお、等電点電気泳動器具１では、第一の電極４および第二の電極３は、ゲル２に直接接触している。そのため、電流は、溶媒保持部５および６を介さずに、第二の電極３－ゲル２－第一の電極４という経路で流れる。ゆえに、電気泳動によって、ゲル２中のサンプルが、ゲル２から溶媒保持部５または６に流出することは殆ど生じない。ゆえに、特許文献１に記載の技術のように分離範囲が狭まることがなく、電極近傍まで等電点スポットをクリアに検出することができる。
　また、本実施形態において、溶媒保持部６は、ゲル２のｐＨ勾配の方向に垂直かつ第一の電極４における第二の電極３側の外縁を含む平面Ａに対して、第二の電極３とは反対側の領域内に配置されており、平面Ａに対して、第二の電極３とは反対側の領域内において溶媒を保持している。
　これを、別の観点からみれば、第一の電極４、および、溶媒保持部６における第二の電極側３の外縁がともに平面Ａ上にあり、イオン性夾雑物を溶解する溶媒は、第一および第二の電極の電極間から完全に排除されている。
　これにより、イオン性夾雑物を溶解する溶媒は、第一の電極４および第二の電極３の電極間外において保持される。これにより、溶媒中に溶解したイオン性夾雑物が、再度、第一の電極４方向に移動することを抑制し、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響をさらに抑制することができる。また、溶媒保持部５も同様の効果を奏する。
　また、本実施形態では、ゲル２と溶媒保持部６とで第一の電極４を挟んでいる。これにより、第一の電極４近傍に移動したイオン性夾雑物を、溶媒保持部６が保持する溶媒に首尾よく拡散させることができる。また、溶媒保持部５も同様の効果を奏する。
　（溶媒保持部）
　図２は、本実施形態における溶媒保持部６のバリエーションを模式的に示す平面図である。
　図２の（ａ）は、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に溝６ａが設けられている構成を示す。このように、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に、溶媒を保持するための溝６ａが形成されていることによって、溶媒を首尾よく保持することができる。
　図２の（ｂ）は、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に、溶媒を保持する多孔質体６ｂが設けられている構成を示す。このように、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に、溶媒を保持する多孔質体６ｂが設けられていることによって、溶媒を首尾よく保持することができる。また、毛管現象によって溶媒保持部６からゲル２へ溶媒が移動してゲル２が膨らみ、等電点電気泳動に悪影響を与えることを抑制することができる。
　なお、溶媒保持部６全体を多孔質体６ｂで構成してもよい。また、多孔質体６ｂとしては、溶媒を保持し得るものであれば特に限定されないが、例えば、多孔質樹脂または繊維であり得る。繊維としては、例えば、ろ紙であってもよい。多孔質体６ｂをろ紙とすることで、簡易かつ安価に溶媒保持部６を構成することができる。
　図２の（ｃ）は、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に複数の微細な溝６ｃが設けられている構成を示す。複数の微細な溝６ｃは、一実施形態において、キャピラリ電気泳動において使用されるような微細な溝であり得る。このように、溶媒が微細な溝６ｃ中に保持されていることによって、毛管現象によって溶媒保持部６からゲル２へ溶媒が移動してゲル２が膨らみ、等電点電気泳動に悪影響を与えることを抑制することができる。
　なお、図２の（ｃ）に示す構成では、溶媒保持部６における第一の電極４およびゲル２に対向する面に設けられる複数の微細な溝の形状は、ストライプ状であるが、本実施形態はこれに限定されず、図２の（ｄ）に示すような同心円状の微細な溝６ｄであってもよいし、図２の（ｅ）に示すような格子状の微細な溝６ｅであってもよい。なお、図２の（ｅ）に示すような格子状の微細な溝６ｅを設けることにより、溶媒の保持量を増加させることができる。
　また、溶媒保持部６は、等電点電気泳動器具１から取り外し可能であってもよい。これにより、等電点電気泳動を行っているとき、イオン性夾雑物が十分に溶媒に溶解した後に、溶媒保持部を取り外して、等電点電気泳動器具１内から、イオン性夾雑物を除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。なお、本実施形態における溶媒保持部６は、特許文献１に記載のろ紙とは異なり、電極とゲルとの間に挟まれているものではないため、電極とゲルとの間の位置関係をずらすことなく、取り外すことができる。
　溶媒保持部５のバリエーションについては、溶媒保持部６のバリエーションと同様であるため、説明を省略する。また、溶媒保持部５も、等電点電気泳動器具１から取り外し可能であってもよい。
　（等電点電気泳動方法）
　本実施形態に係る等電点電気泳動方法は、等電点電気泳動器具１のゲル２にサンプルを導入する導入工程と、第一の電極４および第二の電極３の間に電圧を印加して等電点電気泳動を行う泳動工程と、を包含する。
　サンプルの導入方法は、特に限定されず、公知の方法を用いることができる。なお、ゲル２としてＩＰＧゲルを用いる場合には、サンプルの導入の前に、ゲル２を膨潤させておくことが好ましい。
　また、電圧印加の条件も特に限定されず、例えば、等電点電気泳動方法において一般的に使用される条件を用いればよい。
　なお、一実施形態において、導入工程の後、泳動工程の前に、第一の電極４および第二の電極３の間に電圧を印加した後に、溶媒保持部６を等電点電気泳動器具１から取り外す予備泳動工程をさらに包含してもよい。これにより、予備泳動工程において、イオン性夾雑物が溶媒に溶解した後に、溶媒保持部６を取り外して、等電点電気泳動器具１内から、イオン性夾雑物を除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。
　特に、第一の電極４および第二の電極３の間に電圧を印加した後において第一の電極４および第二の電極３の間に流れる電流値が減少した後に、溶媒保持部６を等電点電気泳動器具１から取り外すことが好ましい。第一の電極４および第二の電極３の間に流れる電流値は、ゲル２中のイオン性夾雑物の量の指標となる。そのため、第一の電極４および第二の電極３の間に流れる電流値が減少し、ゲル２中に存在したイオン性夾雑物の多くが溶媒中に溶解した後に、溶媒保持部６を取り外すようにすることで、等電点電気泳動器具１内から、イオン性夾雑物を十分に除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。
　なお、予備泳動工程において、溶媒保持部６に加えて、または、溶媒保持部６の代わりに溶媒保持部５を取り外すようにしてもよい。
　（変形例）
　なお、本実施形態では、第一の電極４および第二の電極３のそれぞれに溶媒を接触させる溶媒保持部６および溶媒保持部５が設けられており、第一の電極４および第二の電極３の両方がゲル２に接触しているが、本発明はこれに限定されず、溶媒保持部６および溶媒保持部５のうちの一方は、省略してもよい。
　〔実施形態２〕
　本発明の他の実施形態について、図３に基づいて説明すれば、以下のとおりである。なお、説明の便宜上、前記実施形態にて説明した部材と同じ機能を有する部材については、同じ符号を付記し、その説明を省略する。
　図３に示すように、溶媒保持部６の一部が、ゲル２のｐＨ勾配の方向に垂直かつ第一の電極４における第二の電極３側の外縁を含む平面Ａに対して、第二の電極３側の領域内にも配置されていてもよく、平面Ａに対して、第二の電極３側の領域内においても一部の溶媒を保持しているものであってもよい。すなわち、別の観点からみれば、第一の電極４、および、溶媒保持部６における第二の電極側３の外縁は同一平面上になくともよい。
　このような構成であっても、ゲル２に接触している第一の電極４近傍に移動したイオン性夾雑物を溶媒に拡散させて、第一の電極４にイオン性夾雑物が堆積することを防止することができる。これにより、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響を抑制して、クリアな泳動結果を得ることができる。
　また、同様に、溶媒保持部５の一部が、ゲル２のｐＨ勾配の方向に垂直かつ第二の電極３における第一の電極４側の外縁を含む平面に対して、第一の電極４側の領域内にも配置されていてもよい。
　〔実施形態３〕
　本発明のさらに他の実施形態について、図４に基づいて説明すれば、以下のとおりである。なお、説明の便宜上、前記実施形態にて説明した部材と同じ機能を有する部材については、同じ符号を付記し、その説明を省略する。
　図４に示すように、第一の電極４は、溶媒保持部６に埋め込まれていてもよい。すなわち、第一の電極４は、ゲル２および溶媒保持部６の両方に接触していればよく、ゲル２と溶媒保持部６とに挟まれている必要は無い。
　このような構成であっても、ゲル２に接触している第一の電極４近傍に移動したイオン性夾雑物を溶媒に拡散させて、第一の電極４にイオン性夾雑物が堆積することを防止することができる。これにより、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響を抑制して、クリアな泳動結果を得ることができる。
　なお、第二の電極３も、同様に、溶媒保持部５に埋め込まれていてもよい。すなわち、第二の電極３は、ゲル２および溶媒保持部５の両方に接触していればよく、ゲル２と溶媒保持部５とに挟まれている必要は無い。
　（まとめ）
　以上の様に、本発明の態様１に係る等電点電気泳動器具は、特定の方向に沿ってｐＨ勾配が形成されているゲルと、該ゲルに対し、該特定の方向に沿って電圧を印加する第一および第二の電極と、を備え、第一の電極は、該ゲルに接触しており、溶媒を保持するとともに、該溶媒を第一の電極および該ゲルに接触させる溶媒保持部をさらに備えている。
　上記の構成によれば、第一の電極はゲルに接触しており、溶媒保持部が溶媒を第一の電極およびゲルに接触させている。これにより、ゲルに接触している第一の電極近傍に移動したイオン性夾雑物を当該溶媒に拡散させて、第一の電極にイオン性夾雑物が堆積することを防止することができる。これにより、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響を抑制して、クリアな泳動結果を得ることができる。
　本発明の態様２に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１において、上記溶媒保持部は、上記特定の方向に垂直かつ第一の電極における第二の電極側の外縁を含む平面に対して第二の電極とは反対側の領域内において上記溶媒を保持していてもよい。
　上記の構成によれば、イオン性夾雑物を溶解する溶媒は、第一および第二の電極の電極間外において保持される。これにより、溶媒中に溶解したイオン性夾雑物が、再度、電極方向に移動することを抑制し、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響をさらに抑制することができる。また、第一および第二の電極の間に、ろ紙が接して等電位になるゲル部がないため、分離範囲が狭くなることがない。
　本発明の態様３に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１または２において、第一の電極および上記溶媒保持部における第二の電極側の外縁が同一平面上にあってもよい。
　上記の構成によれば、イオン性夾雑物を溶解する溶媒は、第一および第二の電極の電極間から完全に排除される。これにより、溶媒中に溶解したイオン性夾雑物が、再度、電極方向に移動することを抑制し、イオン性夾雑物が等電点電気泳動に及ぼす影響をさらに抑制することができる。
　本発明の態様４に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１～３において、上記ゲルと上記溶媒保持部とで第一の電極を挟んでいてもよい。
　上記の構成によれば、第一の電極近傍に移動したイオン性夾雑物を、溶媒保持部が保持する溶媒に首尾よく拡散させることができる。
　本発明の態様５に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１～４において、上記溶媒保持部における第一の電極および上記ゲルに対向する面には、上記溶媒を保持するための溝が形成されていてもよい。
　上記の構成によれば、溶媒保持部は、溶媒を首尾よく保持することができる。
　本発明の態様６に係る等電点電気泳動器具では、上記態様５において、上記溝が、複数の微細な溝から構成されていてもよい。
　上記の構成によれば、溶媒が微細な溝中に保持されていることによって、毛管現象によって溶媒保持部からゲルへ溶媒が移動してゲルが膨らむことを抑制することができる。
　本発明の態様７に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１～４において、上記溶媒保持部における第一の電極および上記ゲルに対向する面には、上記溶液を保持する多孔質体が設けられていてもよい。
　上記の構成によれば、溶媒が多孔質体中に保持されていることによって、毛管現象によって溶媒保持部からゲルへ溶媒が移動してゲルが膨らむことを抑制することができる。
　本発明の態様８に係る等電点電気泳動器具では、上記態様７において、上記多孔質体が、ろ紙であってもよい。
　上記の構成によれば、簡易かつ安価に溶媒保持部を構成することができる。
　本発明の態様９に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１～８において、上記溶媒保持部は、当該等電点電気泳動器具から取り外し可能であってもよい。
　上記の構成によれば、溶媒保持部を、等電点電気泳動器具から取り外すことができるため、イオン性夾雑物が十分に溶媒に溶解した後に、溶媒保持部を取り外して、等電点電気泳動器具内から、イオン性夾雑物を除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。
　本発明の態様１０に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１～９において、上記ゲルは、長手方向が上記特定の方向である板状のゲルであり、第一の電極は、上記ゲルの板面に接触していてもよい。
　上記の構成によれば、ゲルとして、市販のＩＰＧゲルを首尾よく用いることができる。
　本発明の態様１１に係る等電点電気泳動方法では、態様１～１０の等電点電気泳動器具における上記ゲルにサンプルを導入する導入工程と、第一および第二の電極間に電圧を印加して等電点電気泳動を行う泳動工程と、を包含する。
　上記の構成によれば、態様１～１０の等電点電気泳動器具と同等の効果を奏する。
　本発明の態様１２に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１１において、上記導入工程の後、上記泳動工程の前に、第一および第二の電極間に電圧を印加した後に上記溶媒保持部を上記等電点電気泳動器具から取り外す予備泳動工程をさらに包含してもよい。
　上記の構成によれば、予備泳動工程において、イオン性夾雑物が溶媒に溶解した後に、溶媒保持部を取り外して、等電点電気泳動器具内から、イオン性夾雑物を除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。
　本発明の態様１３に係る等電点電気泳動器具では、上記態様１２において、上記予備泳動工程では、第一および第二の電極間に所定の電圧を印加した状態において第一および第二の電極間に流れる電流値が減少した後に、上記溶媒保持部を上記等電点電気泳動器具から取り外してもよい。
　上記の構成によれば、第一および第二の電極間に流れる電流値は、ゲル中のイオン性夾雑物の量の指標となる。そのため、第一および第二の電極間に流れる電流値が減少し、ゲル中に存在したイオン性夾雑物の多くが溶媒中に溶解した後に、溶媒保持部を取り外すようにすることで、等電点電気泳動器具内から、イオン性夾雑物を十分に除去することができる。これにより、イオン性夾雑物の等電点電気泳動に対する影響をさらに抑制して、よりクリアな泳動結果を得ることができる。
　本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。さらに、各実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を組み合わせることにより、新しい技術的特徴を形成することができる。
　（実施例１）
　図１に示すような等電点電気泳動器具１を用いて等電点電気泳動を行った。ゲル２としては、ｐＨ４～７の範囲でｐＨ勾配が形成されている膨潤されたＩＰＧゲルを用いた。サンプルとしては、ＩＣ－５によって標識されたＭＬＬ（マウス肝臓サンプル）２μｇを尿素、チオ尿素、３－（３－ｃｈｏｌａｍｉｄｅｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ－１－ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ（ＣＨＡＰＳ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、両性電解質（Ａｍｐｈｏｌｙｔｅ）を含む溶液に、塩として８０ｍＭ　ＮａＣｌを加えた溶解させたものを用いた。溶媒保持部５、６としては、蒸留水によって湿らせたろ紙を用いた。
　等電点電気泳動では、図５の折れ線５に示す電圧を第一の電極４と第二の電極３との間に印加した。すなわち、ステップ１として、５分間、２００Ｖの定電圧を印加した。続いて、ステップ２として、５分間、１０００Ｖまで非線形に変化させながら電圧を印加した。続いて、ステップ３として、５分間、１０００Ｖの定電圧を印加した。続いて、ステップ４として、１０分間、７０００Ｖまで線形に変化させながら電圧を印加した。続いて、ステップ５として、１０分間、７０００Ｖの定電圧を印加した。
　次いで、等電点電気泳動が行われたゲル２をＳＤＳ平衡化し、１０％ポリアクリルアミドゲルを用いて二次元目の電気泳動を行った。得られたゲルを蛍光イメージスキャナー（Ｔｙｈｏｏｎ：ＧＥ　ヘスルケア社）で撮像し、スポットを可視化した。
　（比較例１）
　図７の（ｃ）に示すような等電点電気泳動器具１０を用いたこと以外は、実施例１と同様に等電点電気泳動を行った。次いで、実施例１と同様に二次元目の電気泳動および撮像を行った。
　（実施例２）
　実施例１において、ステップ１の前に予備泳動を行ったこと以外は、実施例１と同様に等電点電気泳動を行った。予備泳動では、ステップＡとして、５分間、２００Ｖの定電圧を印加した。続いて、ステップＢとして、５分間、１０００Ｖまで非線形に変化させながら電圧を印加した。続いて、ステップＣとして、５分間、１０００Ｖの定電圧を印加した。その後、溶媒保持部５、６を等電点電気泳動器具１から取り外し、ステップ１～５を行った。
　次いで、実施例１と同様に二次元目の電気泳動および撮像を行った。
　（結果）
　図５は、実施例１、２および比較例１に係る等電点電気泳動における電流値の変化を比較するグラフである。折れ線１は、実施例１における電流値の変化を示す。折れ線２は、比較例１における電流値の変化を示す。折れ線３は、実施例２のステップ１～５における電流値の変化を示す。折れ線４は、実施例２のステップＡ～Ｃにおける電流値の変化を示す。折れ線５は、実施例１、２および比較例１のステップ１～５における電圧の変化を示す。
　図６の（ａ）は、比較例１における二次元電気泳動の結果の写真を示す。図６の（ｂ）は、実施例１における二次元電気泳動の結果の写真を示す。図６の（ｃ）は、実施例２における二次元電気泳動の結果の写真を示す。
　図６の（ａ）と（ｂ）とを比較すれば分かるように、実施例１では、比較例１に比べて、スポットの分解能（集束）が格段に向上しており、よりクリアな結果が得られた。
　図６の（ｂ）と（ｃ）とを比較すれば分かるように、実施例２では、実施例１に比べて、スポットの分解能（集束）がさらに向上しており、よりクリアな結果が得られた。また、折れ線１と折れ線３とを比較すれば分かるように、実施例２では、実施例１とは異なり、泳動初期～中期（ステップ１～３）において殆ど電流が流れていなかった。これは、実施例２の予備泳動（ステップＡ～Ｃ　折れ線４）が、電流値が０に近いところまで減少してから終了していることから、予備泳動において、ゲル２中のイオン性夾雑物の大部分が、溶媒内に溶解して除去されたことを示している。
　本発明は、生体分子等の分析機器の製造分野および生体分子等の分析分野において利用可能である。
　１　　　等電点電気泳動器具
　２　　　ゲル
　３　　　第二の電極
　４　　　第一の電極
　５　　　溶媒保持部
　６　　　溶媒保持部

Claims (13)

  1. 　特定の方向に沿ってｐＨ勾配が形成されているゲルと、
    　該ゲルに対し、該特定の方向に沿って電圧を印加する第一および第二の電極と、を備え、
    　第一の電極は、該ゲルに接触しており、
    　溶媒を保持するとともに、該溶媒を第一の電極および該ゲルに接触させる溶媒保持部をさらに備えていることを特徴とする等電点電気泳動器具。
  2. 　上記溶媒保持部は、上記特定の方向に垂直かつ第一の電極における第二の電極側の外縁を含む平面に対して第二の電極とは反対側の領域内において上記溶媒を保持していることを特徴とする請求項１に記載の等電点電気泳動器具。
  3. 　第一の電極および上記溶媒保持部における第二の電極側の外縁が同一平面上にあることを特徴とする請求項１または２に記載の等電点電気泳動器具。
  4. 　上記ゲルと上記溶媒保持部とで第一の電極を挟んでいることを特徴とする請求項１～３の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具。
  5. 　上記溶媒保持部における第一の電極および上記ゲルに対向する面には、上記溶媒を保持するための溝が形成されていることを特徴とする請求項１～４の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具。
  6. 　上記溝が、複数の微細な溝から構成されることを特徴とする請求項５に記載の等電点電気泳動器具。
  7. 　上記溶媒保持部における第一の電極および上記ゲルに対向する面には、上記溶媒を保持する多孔質体が設けられていることを特徴とする請求項１～４の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具。
  8. 　上記多孔質体が、ろ紙であることを特徴とする請求項７に記載の等電点電気泳動器具。
  9. 　上記溶媒保持部は、当該等電点電気泳動器具から取り外し可能であることを特徴とする請求項１～８の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具。
  10. 　上記ゲルは、長手方向が上記特定の方向である板状のゲルであり、
    　第一の電極は、上記ゲルの板面に接触していることを特徴とする請求項１～９の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具。
  11. 　請求項１～１０の何れか一項に記載の等電点電気泳動器具における上記ゲルにサンプルを導入する導入工程と、
    　第一および第二の電極間に電圧を印加して等電点電気泳動を行う泳動工程と、を包含することを特徴とする等電点電気泳動方法。
  12. 　上記導入工程の後、上記泳動工程の前に、第一および第二の電極間に電圧を印加した後に上記溶媒保持部を上記等電点電気泳動器具から取り外す予備泳動工程をさらに包含することを特徴とする請求項１１に記載の等電点電気泳動方法。
  13. 　上記予備泳動工程では、第一および第二の電極間に所定の電圧を印加した状態において第一および第二の電極間に流れる電流値が減少した後に、上記溶媒保持部を上記等電点電気泳動器具から取り外すことを特徴とする請求項１２に記載の等電点電気泳動方法。
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