WO2014121781A1 - Method for visually ruling out acute diseases using colour-marked proteins - Google Patents

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WO2014121781A1
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fabp
color
antibody
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PCT/DE2014/000058
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Jan ENGELS
Reinhard Renneberg
Dietmar Fuchs
Viola BERKLING
Johannes Fredericus Carolus GLATZ
Serge VELESCO
Mary Yik Ping LAM
Timothy H RAINER
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RENNEBERG, Max
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    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/475—Assays involving growth factors

Definitions

  • AMI acute myocardial infarction
  • myocardial infarction So in 540 000 cases an AMI must be safely excluded.
  • Acute diseases such as heart attacks (acute myocardial infarction, AMI) or viral diseases are usually detected in addition to the symptoms by immunoassays.
  • a heart attack is diagnosed directly by detection in the immuno-sandwich assay of fatty acid binding protein (FABP) or by troponins:
  • FBP fatty acid binding protein
  • a competitive virus test detects the virus, e.g. on the neopterin secretion of macrophages.
  • the capture antibody is bound to nitrocellulose, the detector AK is color-coded with nano-gold or latex particles.
  • Evidence is preceded by a competitive level with protein-coupled neopterin.
  • C-reactive protein CRP is detected.
  • the object is to provide a device by means of which the determination or the exclusion of acute clinical conditions is possible.
  • the object is especially to provide a device with the help of which the determination or the safe exclusion of eg cardiac conditions such as an acute myocardial infarction is possible.
  • a further object is to provide a device which, with the aid of a universal color code or signal, also enables non-medical personnel to make clear decisions as to whether an acute heart condition exists like a heart attack and there is an urgent need for action.
  • a further object is to provide a device which enables the rapid diagnosis of many people with suspected cardiac infarction or similar disorders and can safely rule out an infarct in the majority of cases with unclear chest pain. The object is achieved by the device according to claim 1. Further possible embodiments emerge from the subclaims, the description, the drawings and the examples. Essence of the invention
  • the test strip according to the invention carries antibodies for the detection of molecules, in particular high molecular weight molecules, in a blood sample whose (increased) occurrence in the blood correlates with different states.
  • Particularly preferred according to the invention is the detection of molecules with the aid of which, for example, a heart attack can be specifically detected or excluded or differentiated from other clinical situations.
  • the detection of certain molecules is visualized via a direct or indirect color indication, which results from the complex formation of labeled antibodies or other substances with the bound molecules.
  • a two-color system is used, e.g. the colors red and green are used.
  • test strip according to the invention is a "lateral-flow” detection assay, which can also be referred to as "traffic light” or immuno-nano-traffic light test (INA test, immuno-nano-light test, or visual immuno-traffic light test) ,
  • Traffic lights are signaling devices at intersections, pedestrian crossings and other places, with the help of which traffic flow is regulated.
  • the first traffic lights were installed in London in 1868; meanwhile, they are used in almost every city worldwide. Traffic lights regulate traffic by using light in standard colors (red, green). Typically, the colors mean:
  • the globally known signal effect in road traffic is also suitable for developing a corresponding signal effect in certain medical indications.
  • the invention is advantageous because even medically unskilled or even non-reading personnel can judge the patient status on the basis of this universal code.
  • the invention is also advantageous because the simultaneous control of large crowds is possible.
  • the following is based on a traffic light test which uses red and green-labeled antibodies as signal-generating substances that are used for the detection of a heart attack (AMI).
  • the signaling substances may also be of a different nature, wherein these are colored, fluorescent, luminescent, visual, radioactive, enzymatic and electrically generated.
  • As scavengers for specific molecules not only antibodies but also other molecules such as e.g. Nucleotides such as DNA or RNA are used.
  • FOG. 2A gold-labeled (red) detection antibodies to heart-specific FABP are preferably used (FIG. 2A).
  • FOG. 2B To obtain a green signal, FABP molecules are preferably bound to the surface of colored latex particles (green) or FDA crystals (green fluorescence) (Figure 2B).
  • FDA crystals are fluorescein-diacetate (microcrystalline fluorescein diacetate) crystals, which are normally encapsulated in nanometer-thick polyelectrolytic layers (Chan et al., 2008) and carry specific biomolecules on the outside.
  • aptamers can also be used for the detection of antigens or antibodies.
  • DNA or RNA nucleotides can be used as aptamers, with DNA aptamers being particularly preferred.
  • the aptamers may be labeled with gold, with fluorescent, luminescent or radioactive material, or with enzymes.
  • the aptamers bind specifically to FABP or nonspecifically to immunoglobulins, analogous to the specificity of the antibodies described above.
  • the labeling of the aptamers is analogous to the labeling of antibodies or other biomolecules.
  • the invention is also suitable for reliably excluding a virus or bacterial infection (FIG. 3A) or diagnosing it (FIG. 3B).
  • a typical substance with an indication of an acute viral infection is neopterin. Antibodies to this substance are preferably used for the detection of viral infections.
  • CRP C-reactive protein
  • Antibodies to this substance are preferably used for the detection of bacterial infections. It is essential to the invention that antibodies, aptamers or other capture molecules of different specificities, each having a different color or comparable marker, be used for detection.
  • the invention preferably relates to a device for determining the cause of pathological conditions, the device comprising absorptively bound antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules and antibodies immobilized on the device in accordance with the binding of said antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules the base of its mark in a viewing window is to visually perceive a specific signal which, in accordance with the molecules bound to the immobilized antibodies, may be a red or green signal, as in a traffic light.
  • the test strip according to the invention for determining the cause of pathological conditions consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad is characterized in that
  • Antibody, aptamer or other capture molecule are arranged one behind the other, wherein the antigen and the antibody, aptamer or other capture molecule are marked differently colored the color separation region immobilized specific antigens of the pathological state for binding free unbound
  • the viewing window comprises immobilized antibodies against the correspondingly specific antigens of the pathological condition.
  • the test strip according to the invention comprises an application field, a color separation region, a viewing window and a suction pad.
  • the application field is used to apply the sample.
  • the color separation region can consist of a carrier material, eg bovine serum albumin (BSA), on which in a preferred embodiment FABP antigens are immobilized. These serve to facilitate free FABP specific catcher molecules such as antibodies to bind. However, it is also possible that other molecules are immobilized on the support material, eg, antibodies that can recognize and bind antigens.
  • the selector field is obscured by an opaque material; thus, bound antibodies with a label can not be seen and thus confused.
  • anti-FABP scavenger molecules also called scavenger antibodies
  • scavenger antibodies are immobilized, to which the antibodies bind with bound FABP.
  • the capture antibodies may have different specificities, it being preferred if capture antibodies with two different specificities are present.
  • Preferably z anti-rabbit antibodies and anti-neopterin antibodies, preferably mouse-generated, which very particularly preferably together can be used as catcher antibodies. The latter embodiment is particularly advantageous for the exclusion of viral infections.
  • the suction pad causes a capillary force which pulls the sample and antibodies, antigens and / or other biomolecules from the application field across the separation field and viewing window ( Figures 2 and 3). Between the application field and the separation field there is a zone in which antibodies, antigens and / or other biomolecules, e.g.
  • nanogold-labeled (ROT) anti-FABP detector antibodies are co-applied with latex-labeled or FDA-crystal FABP molecules (GREEN) adsorptively, ie not solidly.
  • ROT nanogold-labeled
  • GREEN FDA-crystal FABP molecules
  • the color is detected in the viewing window of a test strip according to the invention (FIG. 4, lateral flow assay).
  • the detection by means of the test strip functions as set out below, described by way of example for the exclusion and diagnosis of an acute myocardial infarction.
  • the test strip according to the invention can also be used for the detection of an acute viral or bacterial infection.
  • the sample is applied to the application field. If FABP molecules are present in the sample, they are very specifically bound with high affinity by the gold-labeled (red) detection antibodies (FIG. 6A). Are not FABP molecules in the If blood is present, nanoparticle-labeled detection antibodies are free, recognize the FABP antigens in the hidden separation field of the test strip, and bind to them, ie they are de facto intercepted. There are no gold-labeled antibodies to the immobilized anti-FABP scavenger antibodies immobilized in the visible field of the test strip. Since latex-labeled particles or FDA crystals with bound FABP are present, these complexes bind to the capture antibodies. As a result, green-labeled molecules are bound in the visible field ( Figure 2A) and a green color or green fluorescence is seen in the window of the test strip ( Figure 4). In this case, a heart attack can be ruled out.
  • red detection antibodies FIG. 6A
  • small amounts of antigen here FABP, which are in the range or only slightly above the threshold for healthy (10 ng FABP / ml) are not detected by a staining.
  • at least one catcher substance is visibly or covertly applied or immobilized as a threshold affinity catcher (SAF), in a concentration which is the normal value of the analyte of a healthy animal to be determined , an environmental sample or other specified value, these capture substances being spatially arranged on the test strip, that this reaction of the detection reaction proceeds as a threshold upstream and thus only values above the threshold in the detection reaction are visible (for detailed execution, reference is made to EP1327886).
  • the test strip according to the invention for the determination of FABP consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad is characterized in that
  • the color separation region comprises immobilized FABP antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
  • the viewing window comprises immobilized antibodies to FABP.
  • the test is constructed in the same way as in the example with FABP (see above).
  • neopterin molecules are the crucial biomarkers that determine infection as well as infection.
  • the gold nanoparticles are bound with anti-neopterin antibodies. If there is now an infection and the neopterin concentration in the sample is increased, then they bind to the gold-bound antibodies. As in the example above, these can no longer bind in the separation field, but in the viewing window immobilized antibodies resulting in a red signal.
  • the test strip according to the invention for the determination of neopterin consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad, is characterized in that
  • An absorptively bound color-coded antibody, aptamer or other capture molecule are arranged against neopterin, wherein the antigen and the antibody, the aptamer or the other capture molecule are labeled differently colored
  • the color separation region comprises immobilized neopterin antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
  • the viewing window comprises immobilized antibodies to neopterin
  • 1-3 drops of whole blood are added to the receiving funnel.
  • the blood passes through a blood separator membrane that restrains red blood cells.
  • the test can also be performed without a separator, but then with plasma or serum.
  • the blood, serum, plasma contains in the case of an acute infarction increased amounts of the protein FABP (acute infarction).
  • nano-gold labeled (ROT) anti-FABP detector antibodies are adsorbed separately with latex labeled or FDA crystal FABP molecules (GREEN), ie not solid. applied.
  • FDA nanocrystal complexes are colorless in this state, the green fluorescence is achieved only by DMSO and NaOH in the test field.
  • a third zone which is visually obscured in the assay, carries a "divider,” tightly bound protein, or the membrane itself, which is conjugated to FABP molecules, so its surface is completely covered with FABP.
  • a fourth, visible, zone (field of view) in the test window carries tightly bound anti-FABP capture antibodies.
  • the FABP detector-antibody-gold complexes (ROT) bind to these in the case of an increased FABP value in the sample, but not the FABP latex or FABP-FDA crystal complexes (GREEN or GREEN FLUORESCENT).
  • ROT FABP detector-antibody-gold complexes
  • GREEN or GREEN FLUORESCENT the FABP latex or FABP-FDA crystal complexes
  • FABP antigen
  • the detector antibodies bind the FABP and move together by capillary force to the third zone / membrane or separation field (hidden, invisible).
  • the nanogold-labeled detector antibodies bind completely in zone 3 at the separation area.
  • Example 2 Exclusion of a viral infection
  • 1-3 drops of whole blood are added to the receiving funnel.
  • the blood passes through a blood separator membrane that restrains red blood cells.
  • the test can also be performed without a separator, but then with plasma or serum.
  • the colorless plasma / serum contains in the case of a viral infection increased amounts of the low molecular weight macrophage signaling substance Neopterin.
  • nanogold-labeled (RED) neopterin antibodies are separately adsorbed with latex-labeled or FDA nanocrystal (GREEN) neopterin molecules; not firmly applied.
  • a third zone which is visually obscured in the assay, carries neopterin molecules tightly bound to a carrier molecule (e.g., BSA or the membrane itself).
  • a carrier molecule e.g., BSA or the membrane itself.
  • a fourth, visible, zone in the viewing window carries firmly immobilized anti-neopterin antibodies. They bind with high affinity to the antigen, in this case neopterin.
  • the GREEN latex or FDA
  • Neopterin antigens bind. It lights up GREEN in the viewing window.
  • a high amount of low molecular weight antigen (neopterin, formed as a signal substance of macrophages) is present in this case in whole blood, serum or plasma.
  • the anti-neopterin antibody-conjugated nanogold particles bind with the neopterin of the sample and move by capillary force to the third zone / membrane (obscured, invisible) and pass through the neopterin antigen separation field immobilized on the membrane or separation body.
  • the anti-neopterin antibodies bind the neopterin-antibody-gold-conjugated complexes (RED). Unbound gold-antibody complexes and neopterin-labeled green nanoparticles are absorbed by the suction pad.
  • FIGS. 9A, B and C the conjugations of nanoparticles with color A (left-conjugated) and color B (right-conjugated) can be seen on the conjugation pads.
  • Figures 10 A, B and C show the side view of the construction of the conjugation pads again with color A and B separated and together in a test. After addition of the antigen (FIGS. 11A, B and C) or without antigen (FIGS.
  • the results are in the respective separation region (left line, if it exists) and viewing window (right line, if they are) because there is) to see.
  • the two-color system according to the invention makes it possible, in the case of added antigen, to see the color A in the viewing window area and to see the color B in the viewing window area without antigen.
  • FIG. 1 A and B DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1 A and B:
  • FIG. 2 A, B and C are identical to FIG. 2 A, B and C:
  • a color separation area which can bind a color accordingly and in the area of the viewing window specific antibodies for binding a signal color.
  • a suction pad which provides the capillary force.
  • FIG. 3 A, B and C are identical to FIG. 3 A, B and C:
  • a color separation area which can bind a color accordingly as well as in the area of the viewing window specific antibodies for binding a Signal color.
  • a suction pad which provides the capillary force.
  • NanoGold-labeled (R) neopterin antibodies bind to neopterin molecules in the separation area.
  • Latex or FDA crystal-labeled (G) neopterin molecules bind to the capture antibody immobilized on the test strip and a green color appears.
  • neopterin antigens If many neopterin antigens are present in the blood, they bind to the neopterin-labeled nanogold particles (R), which bind to the anti-neopterin antibody immobilized on the test strip, and a red color appears.
  • R neopterin-labeled nanogold particles
  • G crystal-labeled antigens are not bound and washed out.
  • FIG. 4 is a diagrammatic representation of FIG. 4
  • test strip Representation of the test strip according to the invention. If a green color appears, an acute myocardial infarction or viral infection can be ruled out.
  • FIG. 5 is a diagrammatic representation of FIG. 5
  • FIGS. 6A and B Gold labeled antibodies with bound FABP antigens.
  • FIG. 7 is a diagrammatic representation of FIG. 7
  • FIG. 8 is a diagrammatic representation of FIG. 8
  • FIGS. 9A, B and C Representation of the principle of detection of FABP antigens by gold-labeled antibodies
  • FIGS. 10A, B and C are identical to FIGS. 10A, B and C:
  • FIGS. 11A, B and C are identical to FIGS. 11A, B and C:
  • FIGS. 12A, B and C are identical to FIGS. 12A, B and C:

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Abstract

The invention relates to a system for ruling out acute conditions, especially acute myocardial infarctions (AMI) or viral infections, by means of a lateral flow immunoassay which uses the universal signalling colours, as on a traffic light, to show or reliably rule out the presence of a particular acute condition, which is indicated by two different signals/colours.

Description

Verfahren zum visualisierten Ausschluss akuter Erkrankungen mittels farbmarkierter Proteine  Method for the visualized exclusion of acute diseases by means of color-marked proteins
Einleitung introduction
In der klinischen Praxis und Notfallmedizin besteht neben der direkten Diagnose von Erkrankungen (Einschlussprinzip) häufig der Bedarf am sicheren Ausschluss von Erkrankungen. In clinical practice and emergency medicine, in addition to the direct diagnosis of diseases (inclusion principle), there is often a need for the safe exclusion of diseases.
Beispielsweise gibt es rund 600 000 Fälle mit unklaren Brustbein-Schmerzen jährlich in Deutschland und dabei liegt in nur etwa 10% der Fälle ein Akuter Myocard-Infarkt (AMI) bzw. Herzinfarkt vor. Es muss also in 540 000 Fällen ein AMI sicher ausgeschlossen werden.  For example, there are approximately 600 000 cases with unclear sternum pain annually in Germany and there is in only about 10% of cases an acute myocardial infarction (AMI) or myocardial infarction. So in 540 000 cases an AMI must be safely excluded.
Beim Ausbruch von SARS in Hong Kong wurden Tausende von Menschen in Krankenhäusern isoliert, die eigentlich virusfrei waren, aber darauf nicht schnell getestet werden konnten. Einige infizierten sich dann an SARS im Hospital und starben. Ein Ausschluss-Schnelltest wäre hier lebensrettend gewesen. Bei der Grenzkontrolle in HK hätte man mit einem Virus-Ausschluss-Schnelltest nur virusfreie Reisende einreisen lassen. Da eine Pandemie jederzeit erwartet wird, ist das Thema, vor allem auch in anderen Megastädten hochaktuell.  At the SARS outbreak in Hong Kong, thousands of people were isolated in hospitals that were actually virus-free but could not be tested quickly. Some then became infected with SARS at the hospital and died. An exclusion quick test would have been lifesaving here. At the border control in HK one would have let in a virus exclusion rapid test only virus-free travelers. Since a pandemic is expected at any time, the topic is highly topical, especially in other megacities.
Stand der Technik State of the art
Akute Erkrankungen wie Herzinfarkte (Akuter Myocard-Infarkt, AMI) oder Viruserkrankungen werden in der Regel zusätzlich zu den Symptomen durch Immuntests nachgewiesen. Acute diseases such as heart attacks (acute myocardial infarction, AMI) or viral diseases are usually detected in addition to the symptoms by immunoassays.
Die gegenwärtigen Immuno-Teststreifen (lateral-flow rapid tests) verwenden zumeist nanogoldmarkierte, latexmarkierte oder anders gelabelte Detektor-Antikörper (Ak). Sie zeigen bei der Ausbildung eines nitrocellulose-gebundenen Komplexes (aus Fänger-Ak:Antigen:Detektor-Ak-Label) einen zumeist visuell sichtbaren ROTEN oder BLAUEN Punkt (dot) oder Strich (line) (Fig. 1A und B).  Current immuno-test strips (lateral-flow rapid tests) mostly use nano-labeled, latex-labeled or otherwise labeled detector antibodies (Ak). They show in the formation of a nitrocellulose-bound complex (from catcher Ak: antigen: detector Ak label) a mostly visually visible RED or BLUE dot or line (FIGS. 1A and B).
Ein Herzinfarkt wird beispielsweise direkt durch den Nachweis im Immuno- Sandwichtest von Fettsäure-Bindungsprotein (FABP) oder von Troponinen diagnostiziert:  For example, a heart attack is diagnosed directly by detection in the immuno-sandwich assay of fatty acid binding protein (FABP) or by troponins:
„ROT" bedeutet im Testfenster:„AMI". Alle Tests haben noch einen Kontroll-Bereich, wo ein Punkt oder Strich anzeigt, dass der Test prinzipiell aktiv ist (Fig. 1 B). "RED" in the test window means "AMI". All tests still have a control area where a dot or dash indicates that the test is in principle active (Figure 1B).
Der sichere Ausschluss eines Infarktes („negativ") wird bisher in Immuntests nicht direkt angezeigt. Das ROT erscheint dann nicht auf dem Testfeld, wobei oft jedoch trotzdem eine rötliche Färbung erscheint, die als„positiv" missverstanden werden kann.  The safe exclusion of an infarct ("negative") is not displayed directly in immunoassays, so the RED does not appear on the test field, but often a reddish hue appears, which can be misunderstood as "positive".
Im Falle des Verdachts auf eine mögliche akute Virusinfektionen stellt sich das Problem ähnlich dar. Ein kompetitiver Virus-Test weist das Virus z.B. über die Neopterin-Ausschüttung der Makrophagen nach. Hier wird der Fänger-Antikörper an Nitrocellulose gebunden, der Detektor-AK wird mit Nano-Gold oder Latexpartikeln farblich markiert. Dem Nachweis geht noch eine Konkurrenz-Stufe mit an Proteingekoppeltem Neopterin voraus. Auch dieser Test zeigt nur das Vorhandensein von Viren an, nicht das Fehlen. Auch bei akuten bakteriellen Infektionen stellt sich das Problem ähnlich dar. Hier wird C-reaktives Protein (CRP) nachgewiesen.  In case of suspected acute viral infections, the problem is similar. A competitive virus test detects the virus, e.g. on the neopterin secretion of macrophages. Here, the capture antibody is bound to nitrocellulose, the detector AK is color-coded with nano-gold or latex particles. Evidence is preceded by a competitive level with protein-coupled neopterin. Again, this test only indicates the presence of viruses, not the absence. Even in acute bacterial infections, the problem is similar. Here, C-reactive protein (CRP) is detected.
Es gibt gegenwärtig keinen einzigen kommerziellen Ausschluss-Immunotest. Der Trend dazu wird aber von Medizinern besonders in der Notaufnahme von Krankenhäusern begrüsst. Daher ist es eine neue Denkrichtung in der Notfall- Analytik. Ziel und Aufgabe der Erfindung There is currently no single commercial exclusion immunoassay. However, the trend is welcomed by doctors, especially in the emergency department of hospitals. Therefore, it is a new mindset in emergency analytics. Aim and object of the invention
Somit besteht die Aufgabe, eine Vorrichtung bereitzustellen, mit deren Hilfe die Bestimmung bzw. der Ausschluss von akuten klinischen Zuständen möglich ist. Besonders besteht die Aufgabe, eine Vorrichtung bereitzustellen, mit deren Hilfe die Bestimmung bzw. der sichere Ausschluss von z.B. Herzzuständen wie eines akuten Herzinfarkts möglich ist. Es besteht weiterhin die Aufgabe, eine Vorrichtung bereitzustellen, die mit Hilfe eines universellen Farbcodes oder Signals auch nichtmedizinischem Personal klare Entscheidungen ermöglicht, ob ein akuter Herzzustand wie ein Herzinfarkt besteht und dringender Handlungsbedarf besteht. Es besteht weiterhin die Aufgabe, eine Vorrichtung bereitzustellen, die die schnelle Diagnose von vielen Menschen mit Verdacht auf Herzinfarkt oder vergleichbare Störungen ermöglichen und einen Infarkt in der Mehrzahl der Fälle mit unklarem Brustschmerz sicher ausschließen können. Die Aufgabe wird durch die Vorrichtung gemäß Anspruch 1 gelöst. Weitere mögliche Ausführungsformen ergeben sich aus den Unteransprüchen, der Beschreibung, den Zeichnungen und den Beispielen. Wesen der Erfindung Thus, the object is to provide a device by means of which the determination or the exclusion of acute clinical conditions is possible. The object is especially to provide a device with the help of which the determination or the safe exclusion of eg cardiac conditions such as an acute myocardial infarction is possible. A further object is to provide a device which, with the aid of a universal color code or signal, also enables non-medical personnel to make clear decisions as to whether an acute heart condition exists like a heart attack and there is an urgent need for action. A further object is to provide a device which enables the rapid diagnosis of many people with suspected cardiac infarction or similar disorders and can safely rule out an infarct in the majority of cases with unclear chest pain. The object is achieved by the device according to claim 1. Further possible embodiments emerge from the subclaims, the description, the drawings and the examples. Essence of the invention
Es hat sich überraschend herausgestellt, dass die Aufgabe durch einen "Lateral- Flow" Teststreifen (lateral flow dipstick) gelöst wird, der verschieden markierte Fängermoleküle wie z.B. Antikörper zur Detektion umfasst. Der erfindungsgemäße Teststreifen trägt Antikörper zur Detektion von Molekülen, besonders hochmolekularen Molekülen, in einer Blutprobe, deren (erhöhtes) Vorkommen im Blut mit verschiedenen Zuständen korreliert. Besonders bevorzugt ist dabei gemäß der Erfindung die Detektion von Molekülen, mit deren Hilfe sich beispielsweise ein Herzinfarkt gezielt nachweisen bzw. ausschließen oder von anderen klinischen Situationen unterscheiden lässt. Die Detektion bestimmter Moleküle wird über eine direkte oder indirekte Farbindikation visualisiert, die durch die Komplexbildung von markierten Antikörpern oder anderen Substanzen mit den gebundenen Molekülen entsteht. Gemäß der Erfindung werden entsprechend der Indikation wie bei einer Verkehrsampel ein zweifarben System verwendet, welches z.B. die Farben rot und grün verwendet. It has surprisingly been found that the object is achieved by a "lateral-flow dipstick", the differently labeled capture molecules such as. Antibody for detection comprises. The test strip according to the invention carries antibodies for the detection of molecules, in particular high molecular weight molecules, in a blood sample whose (increased) occurrence in the blood correlates with different states. Particularly preferred according to the invention is the detection of molecules with the aid of which, for example, a heart attack can be specifically detected or excluded or differentiated from other clinical situations. The detection of certain molecules is visualized via a direct or indirect color indication, which results from the complex formation of labeled antibodies or other substances with the bound molecules. According to the invention, according to the indication as in a traffic light, a two-color system is used, e.g. the colors red and green are used.
Der erfindungsgemäße Teststreifen ist ein "Lateral-Flow" Detektionsassay, der auch als "Traffic-Light" oder Immuno-Nano-Ampel-Test (INA-Test, Immuno-NanoAmpel- Test, oder Visual Immuno-Traffic Light Test) bezeichnet werden kann.  The test strip according to the invention is a "lateral-flow" detection assay, which can also be referred to as "traffic light" or immuno-nano-traffic light test (INA test, immuno-nano-light test, or visual immuno-traffic light test) ,
Ampeln sind Signalvorrichtungen an Straßenkreuzungen, Fußgängerüberwegen und anderen Plätzen, mit deren Hilfe der Verkehrsfluss geregelt wird. Die ersten Ampeln wurden 1868 in London installiert; mittlerweise werden sie in fast jeder Stadt weltweit genutzt. Ampeln regulieren den Verkehr, indem sie Licht in Standardfarben (rot, grün) verwenden. Typischerweise bedeuten die Farben: Traffic lights are signaling devices at intersections, pedestrian crossings and other places, with the help of which traffic flow is regulated. The first traffic lights were installed in London in 1868; meanwhile, they are used in almost every city worldwide. Traffic lights regulate traffic by using light in standard colors (red, green). Typically, the colors mean:
• Grünes Leuchten, dass der Verkehr in einer bestimmten Richtung sicher weiter verfolgt werden kann: FREIE FAHRT bzw. FREIES ÜBERQUEREN • Green light so that traffic can be safely traced in a certain direction: FREE DRIVING or FREE CROSSING
DER FAHRBAHN! THE RAILWAY!
• Rotes Licht verbietet dem Verkehr die Weiterfahrt und Fußgängern das Überqueren: WARNUNG, STOP! Die weltweit bekannte Signalwirkung im Straßenverkehr eignet sich überraschenderweise auch, um bei bestimmten medizinischen Indikationen eine entsprechende Signalwirkung zu entfalten. Die Erfindung ist vorteilhaft, weil damit auch medizinisch wenig vorgebildetes oder gar leseunkundiges Personal auf der Basis dieses universellen Codes den Patientenstatus beurteilen kann. Die Erfindung ist weiterhin vorteilhaft, weil die simultane Kontrolle großer Menschenmengen möglich ist. • Red light forbids traffic to continue driving and pedestrians to cross: WARNING, STOP! Surprisingly, the globally known signal effect in road traffic is also suitable for developing a corresponding signal effect in certain medical indications. The invention is advantageous because even medically unskilled or even non-reading personnel can judge the patient status on the basis of this universal code. The invention is also advantageous because the simultaneous control of large crowds is possible.
Als Beispiel in Übertragung dieses Systems auf einen "Lateral-Flow" Teststreifen für die Detektion eines Herzinfarkts (AMI) bedeuten die Farben: As an example, when translating this system to a "lateral flow" heart attack detection (AMI) test strip, the colors mean:
• grüner Punkt/Linie (oder Signal): "Kein Herzinfarkt ... Vorwärts, Bewegung und keine Sorge" · roter Punkt/Linie (oder Signal): "Akuter Herzinfarkt liegt vor, sofort Arzt oder Ambulanz rufen." • green dot / line (or signal): "No heart attack ... forward, movement and do not worry" · red dot / line (or signal): "Acute myocardial infarction is present, call doctor or ambulance immediately."
Des Weiteren wird im Folgenden von einem Traffic Light Test ausgegangen welcher Rot sowie Grün markierte Antikörper als Signal generierende Substanzen verwendet, die für die Erkennung eines Herzinfarkts (AMI) genutzt werden. Dabei ist anzumerken, dass die signalgebenden Substanzen auch anderer Natur sein können, wobei diese farbig, fluoreszierend, lumineszierend, visuell, radioaktiv, enzymatisch sowie elektrisch erzeugt werden. Als Fänger für spezifische Moleküle können nicht nur Antikörper sondern auch andere Moleküle wie z.B. Nukleotide wie DNA oder RNA verwendet werden. Furthermore, the following is based on a traffic light test which uses red and green-labeled antibodies as signal-generating substances that are used for the detection of a heart attack (AMI). It should be noted that the signaling substances may also be of a different nature, wherein these are colored, fluorescent, luminescent, visual, radioactive, enzymatic and electrically generated. As scavengers for specific molecules not only antibodies but also other molecules such as e.g. Nucleotides such as DNA or RNA are used.
Um ein rotes Signal zu erhalten, werden bevorzugt Gold markierte (rote) Detektions- Antikörper gegen herztypisches FABP verwendet (Fig. 2A). Um ein grünes Signal zu erhalten, werden bevorzugt FABP-Moleküle an die Oberfläche von farbigen Latex-Partikeln (grün) oder FDA-Kristallen (grüne Fluoreszenz) gebunden (Fig. 2B). FDA-Kristalle sind Fluorescein-Diazetat-Kristalle (engl, microcrystalline fluorescein diacetate), die normalerweise in polyelektrolytische Schichten in Nanometerdicke eingekapselt sind (Chan et al., 2008) und auf der Außenseite spezifische Biomoleküle tragen. Nach der Bindung der FDA-Kristalle und Waschen wird durch Zugabe von DMSO und NaOH die Kapsel und das farblose Kristall aufgelöst, wobei Fluorescein freigesetzt wird, worauf ein intensiv grünes Leuchten (Fluoreszenz) zu detektieren ist. Ein FDA Kristall von 50 nm Durchmesser setzt etwa 2 Millionen Fluoreszenzmoleküle frei (Fig. 7). In einer möglichen Ausführungsform können auch Aptamere zur Detektion von Antigenen oder Antikörpern verwendet werden. In der vorliegenden Erfindung können DNA- oder RNA-Nukleotide als Aptamere verwendet werden, dabei sind DNA-Aptamere besonders bevorzugt. Die Aptamere können mit Gold, mit fluoreszenten, lumineszenten oder radioaktivem Material, oder auch mit Enzymen markiert sein. To obtain a red signal, gold-labeled (red) detection antibodies to heart-specific FABP are preferably used (FIG. 2A). To obtain a green signal, FABP molecules are preferably bound to the surface of colored latex particles (green) or FDA crystals (green fluorescence) (Figure 2B). FDA crystals are fluorescein-diacetate (microcrystalline fluorescein diacetate) crystals, which are normally encapsulated in nanometer-thick polyelectrolytic layers (Chan et al., 2008) and carry specific biomolecules on the outside. After binding the FDA crystals and washing, the capsule and the colorless crystal are dissolved by addition of DMSO and NaOH, releasing fluorescein, whereupon an intense green glow (fluorescence) is to be detected. An FDA crystal of 50 nm diameter releases about 2 million fluorescent molecules (Figure 7). In one possible embodiment, aptamers can also be used for the detection of antigens or antibodies. In the present invention, DNA or RNA nucleotides can be used as aptamers, with DNA aptamers being particularly preferred. The aptamers may be labeled with gold, with fluorescent, luminescent or radioactive material, or with enzymes.
Entsprechend der Erfindung binden die Aptamere spezifisch an FABP oder unspezifisch an Immunglobuline, analog zu der Spezifität der oben beschriebenen Antikörper. Die Markierung der Aptamere erfolgt analog zu der Markierung der Antikörper oder anderer Biomoleküle.  According to the invention, the aptamers bind specifically to FABP or nonspecifically to immunoglobulins, analogous to the specificity of the antibodies described above. The labeling of the aptamers is analogous to the labeling of antibodies or other biomolecules.
Es ist auch möglich und im Sinne der Erfindung, mit dem erfinderischen Teststreifen Substanzen oder Antikörper zu detektieren, die für eine Virus- oder eine bakterielle Infektion charakteristisch sind. Die z.B. mit Gold markierten Antikörper sind dann für die entsprechenden Antigene spezifisch. Mit anderen Worten ist die Erfindung auch geeignet, eine Virus- oder bakterielle Infektion sicher auszuschließen (Fig. 3A) bzw. zu diagnostizieren (Fig. 3B). It is also possible and within the meaning of the invention to detect with the inventive test strip substances or antibodies that are characteristic of a virus or a bacterial infection. The e.g. Gold-labeled antibodies are then specific for the corresponding antigens. In other words, the invention is also suitable for reliably excluding a virus or bacterial infection (FIG. 3A) or diagnosing it (FIG. 3B).
Eine typische Substanz mit Hinweis auf eine akute virale Infektion ist dabei Neopterin. Antikörper gegen diese Substanz werden bevorzugt für die Detektion von Virusinfektionen verwendet. A typical substance with an indication of an acute viral infection is neopterin. Antibodies to this substance are preferably used for the detection of viral infections.
Eine typische Substanz mit Hinweis auf eine bakterielle Infektion ist CRP (c-reaktives Protein). Antikörper gegen diese Substanz werden bevorzugt für die Detektion von bakteriellen Infektionen verwendet. Erfindungswesentlich ist, dass Antikörper, Aptamere oder andere Fängermoleküle verschiedener Spezifitäten mit jeweils verschiedener farblicher oder vergleichbarer Markierung zur Detektion verwendet werden. A typical substance with evidence of a bacterial infection is CRP (c-reactive protein). Antibodies to this substance are preferably used for the detection of bacterial infections. It is essential to the invention that antibodies, aptamers or other capture molecules of different specificities, each having a different color or comparable marker, be used for detection.
Die Erfindung bezieht sich vorzugsweise auf eine Vorrichtung zur Bestimmung der Ursache von pathologischen Zuständen, wobei die Vorrichtung absorptiv gebundene Antikörper, Antigene, Aptamere oder andere Biomoleküle umfasst und entsprechend der Bindung der besagten Antikörper, Antigene, Aptamere oder anderer Biomoleküle auf der Vorrichtung immobilisierte Antikörper auf der Basis ihrer Markierung in einem Sichtfenster ein spezifisches Signal visuell wahrzunehmen ist, das entsprechend der an die immobilisierten Antikörper gebundenen Moleküle wie bei einer Ampel ein rotes oder grünes Signal sein kann. In einer bevorzugten Ausführungsform ist der erfindungsgemäße Teststreifen zur Bestimmung der Ursache von pathologischen Zuständen bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, The invention preferably relates to a device for determining the cause of pathological conditions, the device comprising absorptively bound antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules and antibodies immobilized on the device in accordance with the binding of said antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules the base of its mark in a viewing window is to visually perceive a specific signal which, in accordance with the molecules bound to the immobilized antibodies, may be a red or green signal, as in a traffic light. In a preferred embodiment, the test strip according to the invention for determining the cause of pathological conditions consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad is characterized in that
- dass auf dem Applikationsfeld ein absorptiv gebundenes farblich markiertes Antigen und ein absorptiv gebundener farblich markierter - that on the application field an absorptively bound color-coded antigen and a absorptively bound color-coded
Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül hintereinander angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind der Farbtrennbereich immobilisierte spezifische Antigene des pathologischen Zustande zum Binden freier nicht gebundenerAntibody, aptamer or other capture molecule are arranged one behind the other, wherein the antigen and the antibody, aptamer or other capture molecule are marked differently colored the color separation region immobilized specific antigens of the pathological state for binding free unbound
Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst undIncludes antibodies, aptamers or other capture molecules and
- das Sichtfenster immobilisierte Antikörper gegen die entsprechend spezifischen Antigene des pathologischen Zustands umfasst Der erfindungsgemäße Teststreifen umfasst ein Applikationsfeld, einen Farb- Trennbereich, ein Sichtfenster und ein Saugpad. Das Applikationsfeld dient zum Auftragen der Probe. Der Farb-Trennbereich kann aus einem Trägermaterial, z.B. bovines Serumalbumin (BSA) bestehen, auf welchem in einer bevorzugten Ausführungsform FABP-Antigene immobilisiert sind. Diese dienen dazu, freie FABP- spezifische Fängermoleküle wie z.B. Antikörper zu binden. Es ist jedoch auch möglich, dass andere Moleküle auf dem Trägermaterial immobilisiert sind, z.B. Antikörper, die Antigene erkennen und binden können. Das Selektorfeld ist durch ein undurchsichtiges Material verdeckt; somit können gebundene Antikörper mit einer Markierung nicht gesehen und so verwechselt werden. the viewing window comprises immobilized antibodies against the correspondingly specific antigens of the pathological condition. The test strip according to the invention comprises an application field, a color separation region, a viewing window and a suction pad. The application field is used to apply the sample. The color separation region can consist of a carrier material, eg bovine serum albumin (BSA), on which in a preferred embodiment FABP antigens are immobilized. These serve to facilitate free FABP specific catcher molecules such as antibodies to bind. However, it is also possible that other molecules are immobilized on the support material, eg, antibodies that can recognize and bind antigens. The selector field is obscured by an opaque material; thus, bound antibodies with a label can not be seen and thus confused.
In dem Sichtfenster sind in einer bevorzugten Ausführungsform Anti-FABP-Fänger- Moleküle, im Weiteren auch Fängerantikörper genannt, immobilisiert, an welche die Antikörper mit gebundenem FABP binden. Es können jedoch auch andere Antikörper als Fängerantikörper verwendet werden. Dabei können die Fängerantikörper verschiedene Spezifitäten haben, wobei es bevorzugt ist, wenn Fängerantikörper mit zwei verschiedenen Spezifitäten vorhanden sind. Bevorzugt sind z. B. antiKaninchen-Antikörper und anti-Neopterin-Antikörper, vorzugsweise Maus-generiert, die ganz besonders bevorzugt zusammen als Fängerantikörper eingesetzt werden können. Die letztgenannte Ausführungsform ist besonders vorteilhaft für den Ausschluss von Virusinfektionen. In the viewing window, in a preferred embodiment, anti-FABP scavenger molecules, also called scavenger antibodies, are immobilized, to which the antibodies bind with bound FABP. However, other antibodies than capture antibodies can be used. The capture antibodies may have different specificities, it being preferred if capture antibodies with two different specificities are present. Preferably z. For example, anti-rabbit antibodies and anti-neopterin antibodies, preferably mouse-generated, which very particularly preferably together can be used as catcher antibodies. The latter embodiment is particularly advantageous for the exclusion of viral infections.
Das Saugpad bewirkt eine Kapillarkraft, welche die Probe und Antikörper, Antigene und/oder andere Biomoleküle vom Applikationsfeld über das Trennungsfeld und Sichtfenster zieht (Fig. 2 und 3). Zwischen Applikationsfeld und Trennungsfeld befindet sich eine Zone, in welcher Antikörper, Antigene und/oder andere Biomoleküle, also z.B. für die Detektion von FABP-Molekülen Nanogold-gelabelte (ROT) anti-FABP-Detektor-Antikörper gemeinsam mit Latex gelabelten oder FDA- Kristall-FABP-Molekülen (GRÜN) adsorptiv, also nicht fest, aufgetragen sind. Mit anderen Worten wird die Färbung im Sichtfenster eines erfindungsgemäßen Teststreifens (Fig. 4, lateral flow assay) detektiert. Dabei funktioniert die Detektion mittels des Teststreifens wie im Folgenden dargelegt, beispielhaft beschrieben für Ausschluss und Diagnose eines akuten Herzinfarkte. Der erfindungsgemäße Teststreifen kann auch zur Detektion einer akuten Virus- oder bakteriellen Infektion verwendet werden. The suction pad causes a capillary force which pulls the sample and antibodies, antigens and / or other biomolecules from the application field across the separation field and viewing window (Figures 2 and 3). Between the application field and the separation field there is a zone in which antibodies, antigens and / or other biomolecules, e.g. For the detection of FABP molecules, nanogold-labeled (ROT) anti-FABP detector antibodies are co-applied with latex-labeled or FDA-crystal FABP molecules (GREEN) adsorptively, ie not solidly. In other words, the color is detected in the viewing window of a test strip according to the invention (FIG. 4, lateral flow assay). In this case, the detection by means of the test strip functions as set out below, described by way of example for the exclusion and diagnosis of an acute myocardial infarction. The test strip according to the invention can also be used for the detection of an acute viral or bacterial infection.
Die Probe wird auf das Applikationsfeld aufgetragen. Sind FABP-Moleküle in der Probe vorhanden, werden sie von den Gold markierten (rote) Detektions-Antikörpern sehr spezifisch mit hoher Affinität gebunden (Fig. 6A). Sind keine FABP-Moleküle im untersuchten Blut vorhanden, sind Nanogold markierte Detektions-Antikörper frei, erkennen in dem verdeckten Trennfeld des Teststreifens die FABP-Antigene, und binden an diese, werden also de facto abgefangen. Es gelangen keine Gold markierten Antikörper zu den immobilisierten anti-FABP-Fänger-Antikörpern, die im sichtbaren Feld des Teststreifens immobilisiert sind. Da Latex markierte Partikel oder FDA-Kristalle mit gebundenem FABP vorhanden sind, binden diese Komplexe an die Fängerantikörper. Dadurch sind grün markierte Moleküle in dem sichtbaren Feld gebunden (Fig. 2A) und es wird eine Grünfärbung oder grüne Fluoreszenz in dem Fenster des Teststreifens erkennbar (Fig. 4). In diesem Fall kann ein Herzinfarkt ausgeschlossen werden. The sample is applied to the application field. If FABP molecules are present in the sample, they are very specifically bound with high affinity by the gold-labeled (red) detection antibodies (FIG. 6A). Are not FABP molecules in the If blood is present, nanoparticle-labeled detection antibodies are free, recognize the FABP antigens in the hidden separation field of the test strip, and bind to them, ie they are de facto intercepted. There are no gold-labeled antibodies to the immobilized anti-FABP scavenger antibodies immobilized in the visible field of the test strip. Since latex-labeled particles or FDA crystals with bound FABP are present, these complexes bind to the capture antibodies. As a result, green-labeled molecules are bound in the visible field (Figure 2A) and a green color or green fluorescence is seen in the window of the test strip (Figure 4). In this case, a heart attack can be ruled out.
Sind FABP-Moleküle dagegen vorhanden, werden sie von den Nanogold markierten (roten) Detektions-Antikörpern erkannt und gebunden. Diese Komplexe werden nicht mehr von den FABP-Antigenen im Trennfeld erkannt und gebunden und gelangen zu den Fängerantikörpern, die im sichtbaren Feld des Teststreifens immobilisiert sind. Hier konkurrieren sie mit den Komplexen aus Latex markierten oder FDA-Kristall- Antikörpern um die Bindung an die Fängerantikörper, wobei die Komplexe aus Gold markierten (roten) Detektions-Antikörpern und FABP-Molekülen aufgrund ihrer spezifischen Größe schneller bei den Fängerantikörpern antreffen und diese so blockieren. Damit binden in diesem Fall die letztgenannten Komplexe an die Fängerantikörper im sichtbaren Teil des Teststreifens (Fig. 2). Damit sind rotmarkierte Antikörper in dem sichtbaren Feld gebunden (Fig. 2C), und es wird eine Rotfärbung in dem Fenster des Teststreifens erkennbar (Fig. 4). In diesem Fall ist ein Herzinfarkt sehr wahrscheinlich und der Patient muss dringend in entsprechende Behandlung überwiesen werden. In contrast, when FABP molecules are present, they are recognized and bound by the nanogold (red) detection antibodies. These complexes are no longer recognized and bound by the FABP antigens in the separation field and reach the capture antibodies immobilized in the visible field of the test strip. Here, they compete with the complexes of latex-tagged or FDA-crystal antibodies for binding to the capture antibodies, and the complexes of gold-labeled (red) detection antibodies and FABP molecules, because of their specific size, more rapidly catch the capture antibodies and so on To block. In this case, the latter complexes bind to the capture antibodies in the visible part of the test strip (FIG. 2). Thus, red-labeled antibodies are bound in the visible field (Figure 2C), and a red coloration is seen in the window of the test strip (Figure 4). In this case, a heart attack is very likely and the patient must urgently be referred to appropriate treatment.
In einer möglichen Ausführungsform der Erfindung werden geringe Mengen an Antigen, hier FABP, die im Bereich oder nur leicht über dem Schwellenwert für Gesunde liegen (10 ng FABP/ml) nicht durch eine Färbung detektiert. Dazu ist auf dem Teststreifen zwischen Probeaufnahmezone und Nachweiszone mindestens eine Fängersubstanz als Schwellen-Affinitäts-Fänger (SAF engl, treshold affinity catcher) sichtbar oder verdeckt aufgebracht bzw. immobilisiert, und zwar in einer Konzentration, die den Normalwert des zu bestimmenden Analyten eines gesunden Lebewesens, einer Umweltprobe oder eines anderen festgelegten Werts eliminiert, wobei diese Fängersubstanzen auf dem Teststreifen räumlich so angeordnet sind, dass diese Reaktion der Nachweisreaktion als Schwelle vorgelagert abläuft und somit erst Werte über dem Schwellenwert in der Nachweisreaktion sichtbar werden (zur detaillierten Ausführung wird auf EP1327886 verwiesen). In einer bevorzugten Ausführungsform wird der erfindungsgemäße Teststreifen zur Bestimmung von FABP bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, In one possible embodiment of the invention, small amounts of antigen, here FABP, which are in the range or only slightly above the threshold for healthy (10 ng FABP / ml) are not detected by a staining. For this purpose, on the test strip between sample receiving zone and detection zone, at least one catcher substance is visibly or covertly applied or immobilized as a threshold affinity catcher (SAF), in a concentration which is the normal value of the analyte of a healthy animal to be determined , an environmental sample or other specified value, these capture substances being spatially arranged on the test strip, that this reaction of the detection reaction proceeds as a threshold upstream and thus only values above the threshold in the detection reaction are visible (for detailed execution, reference is made to EP1327886). In a preferred embodiment, the test strip according to the invention for the determination of FABP consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad is characterized in that
- dass auf dem Applikationsfeld hintereinander angeordnet, getrennt durch ein unbehandeltes Konjugationspad  - That on the application field arranged one behind the other, separated by an untreated conjugation pad
- ein absorptiv gebundenes farblich markiertes FABP Antigen und an absorptively bound color-coded FABP antigen and
- ein absorptiv gebundener farblich markierter Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül gegen FABP angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, das Aptamer oder das andere Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind - An absorptively bound color-coded antibody, aptamer or other capture molecule against FABP are arranged, wherein the antigen and the antibody, the aptamer or the other capture molecule are marked differently colored
- der Farbtrennbereich immobilisierte FABP Antigene zum Binden freier nicht gebundener Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst  the color separation region comprises immobilized FABP antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
- und das Sichtfenster immobilisierte Antikörper gegen FABP umfasst.  and the viewing window comprises immobilized antibodies to FABP.
Ist die Vorrichtung zur Detektion einer Virusinfektion vorgesehen, ist der Test in gleicher weise aufgebaut wie beim Beispiel mit FABP (Siehe oben). Jedoch sind im Falle einer Virusinfektion Neopterin Moleküle die entscheidenden Biomarker, welche zwischen Infektion sowie nicht Infektion bestimmen. Im folgenden Aufbau sind die Gold Nanopartikel mit Anti- Neopterin Antikörpern gebunden. Liegt nun eine Infektion vor und die Neopterin Konzentration in der Probe ist erhöht, so binden diese an die Gold gebundenen Antikörper. Wie im Beispiel oben können diese nicht mehr im Trennfeld, sondern im Sichtfenster immobilisierten Antikörper binden was ein rotes Signal ergibt. Liegt kein Neopterin vor so binden die Gold Nanopartikel an die immobilisierten Neopterin Antigene im Farb-Trennbereich und die Neopterin gebundenen Grünen Latex oder FDA Partikel binden an die Fänger Antikörper im Sichtfenster Bereich, was ein grünes Signal erzeugt. In einer bevorzugten Ausführungsform zur Detektion einer Virusinfektion ist der erfindungsgemäße Teststreifen zur Bestimmung von Neopterin bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, If the device is intended to detect a viral infection, the test is constructed in the same way as in the example with FABP (see above). However, in the case of viral infection, neopterin molecules are the crucial biomarkers that determine infection as well as infection. In the following structure, the gold nanoparticles are bound with anti-neopterin antibodies. If there is now an infection and the neopterin concentration in the sample is increased, then they bind to the gold-bound antibodies. As in the example above, these can no longer bind in the separation field, but in the viewing window immobilized antibodies resulting in a red signal. If no neopterin is present, the gold nanoparticles bind to the immobilized neopterin antigens in the color-separating region and the neopterin-bound green latex or FDA particles bind to the capture antibodies in the viewing window region, producing a green signal. In a preferred embodiment for the detection of a viral infection, the test strip according to the invention for the determination of neopterin, consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad, is characterized in that
- dass auf dem Applikationsfeld hintereinander angeordnet, getrennt durch ein unbehandeltes Konjugationspad  - That on the application field arranged one behind the other, separated by an untreated conjugation pad
- ein absorptiv gebundenes farblich markiertes Neopterin Antigen und an absorptively bound color - labeled neopterin antigen and
- ein absorptiv gebundener farblich markierter Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül gegen Neopterin angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, das Aptamer oder das andere Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind - An absorptively bound color-coded antibody, aptamer or other capture molecule are arranged against neopterin, wherein the antigen and the antibody, the aptamer or the other capture molecule are labeled differently colored
- der Farbtrennbereich immobilisierte Neopterin Antigene zum Binden freier nicht gebundener Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst  the color separation region comprises immobilized neopterin antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
- und das Sichtfenster immobiliserte Antikörper gegen Neopterin umfasst  and the viewing window comprises immobilized antibodies to neopterin
Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung an Beispielen verdeutlicht, welche konkrete Ausführungsformen offenbaren, jedoch nicht beschränkend für den Schutzumfang der Erfindung sein sollen. Für einen Fachmann naheliegende Abwandlungen und Änderungen der Erfindung fallen dementsprechend unter den Schutzumfang der Patentansprüche. In the following, the present invention is illustrated by examples which disclose concrete embodiments, but are not intended to be limiting of the scope of the invention. Variations and changes of the invention which are obvious to a person skilled in the art are accordingly covered by the scope of the patent claims.
Ausführungsbeispiele (am Herzinfarkt-Ausschluss- und Virus-Ausschluss-Test erläutert) Exemplary Embodiments (explained in the case of the heart attack exclusion and virus exclusion test)
Beispiel 1: Herzinfakt-Ausschluss  Example 1: Cardiac infarction exclusion
Es werden 1-3 Tropfen Vollblut in den Aufnahmetrichter gegeben. Das Blut passiert eine Blut-Separator-Membran, die rote Blutkörperchen zurückhält. Der Test kann auch ohne Separator ausgeführt werden, dann aber mit Plasma oder Serum.  1-3 drops of whole blood are added to the receiving funnel. The blood passes through a blood separator membrane that restrains red blood cells. The test can also be performed without a separator, but then with plasma or serum.
Das Blut, Serum, Plasma enthält im Falle eines akuten Infarktes erhöhte Mengen des Proteines FABP (akuter Infarkt). The blood, serum, plasma contains in the case of an acute infarction increased amounts of the protein FABP (acute infarction).
Auf einer zweiten Membranzone oder einer zweiten Membran (Konjugat-Membran) sind Nanogold-gelabelte (ROT) anti-FABP-Detektor-Antikörper getrennt mit Latex gelabelten oder FDA-Kristall-FABP-Molekülen (GRÜN) adsorptiv, d.h. nicht fest, aufgetragen. FDA-Nanokristall-Komplexe sind in diesem Zustand farblos, die grüne Fluoreszenz wird erst durch DMSO- und NaOH im Testfeld erreicht. On a second membrane zone or membrane (conjugate membrane), nano-gold labeled (ROT) anti-FABP detector antibodies are adsorbed separately with latex labeled or FDA crystal FABP molecules (GREEN), ie not solid. applied. FDA nanocrystal complexes are colorless in this state, the green fluorescence is achieved only by DMSO and NaOH in the test field.
Eine dritte Zone (Trennfeld), die im Test visuell verdeckt wird, trägt einen„Trenner", fest gebundenes Protein oder die Membran selbst, welche mit FABP-Molekülen konjugiert ist. Seine Oberfläche ist somit vollständig mit FABP bedeckt. A third zone (separation field), which is visually obscured in the assay, carries a "divider," tightly bound protein, or the membrane itself, which is conjugated to FABP molecules, so its surface is completely covered with FABP.
Eine vierte, sichtbare, Zone (Sichtfeld) im Testfenster trägt fest gebundene anti- FABP-Fänger-Antikörper. An diese binden die FABP-Detektor-Antikörper-Gold- Komplexe (ROT) im Falle eines erhöten FABP-Wertes in der Probe, jedoch nicht die FABP-Latex- oder FABP-FDA-Kristall-Komplexe (GRÜN bzw. GRÜNFLUORESZENT). Bei Verwendung von Nanokristallen wird nach Erreichen der Komponenten des Sichtfenster-Bereiches hier ein Tropfen DMSO/NaOH zugegeben, wodurch die farblosen Kristalle zu fluoreszent-grünen Substanzen gewandelt werden. Fall 1: AMI (Einschluss eines Herzinfarktes)  A fourth, visible, zone (field of view) in the test window carries tightly bound anti-FABP capture antibodies. The FABP detector-antibody-gold complexes (ROT) bind to these in the case of an increased FABP value in the sample, but not the FABP latex or FABP-FDA crystal complexes (GREEN or GREEN FLUORESCENT). When using nanocrystals, a drop of DMSO / NaOH is added after reaching the components of the viewing window area, whereby the colorless crystals are converted to fluorescent green substances. Case 1: AMI (Inclusion of a heart attack)
Eine hohe Menge an Antigen (FABP) liegt bei AMI im Vollblut, Serum oder Plasma vor.  High levels of antigen (FABP) are present in AMI in whole blood, serum or plasma.
Die Detektor-Antikörper binden das FABP und bewegen sich gemeinsam durch Kapillarkraft zur dritten Zone/Membran bzw. Trennfeld (verdeckt, nicht sichtbar).  The detector antibodies bind the FABP and move together by capillary force to the third zone / membrane or separation field (hidden, invisible).
Da alle Antikörper mit FABP abgesättigt sind, binden sie nicht am Trennfeld und bewegen sich weiter zur vierten Zone bzw. Sichtfenster. Dort bindet der FABP- Detektor-Nanogold-Komplex an die Fänger-Antikörper(Fig. 2C). Since all antibodies are saturated with FABP, they do not bind to the separation field and move on to the fourth zone or viewing window. There, the FABP detector nanogold complex binds to the capture antibody (Figure 2C).
Ergebnis: Roter Punkt (oder Strich).„Achtung! Akuter Herzinfarkt!" Fall 2: kein AMI, sicherer Ausschluss eines Herzinfarktes Result: Red dot (or dash). "Attention! Acute myocardial infarction! "Case 2: no AMI, safe exclusion of a heart attack
Es liegt eine nur sehr geringe normale Konzentration von FABP im Blut, Serum oder Plasma vor.  There is a very low normal concentration of FABP in the blood, serum or plasma.
Die Nanogold-gelabelten Detektor-Antikörper (ROT) binden sich vollständig in Zone 3 am Trennbereich.  The nanogold-labeled detector antibodies (ROT) bind completely in zone 3 at the separation area.
Die Latex- oder FDA-Kristall-FABP-Komplexe (GRÜN) können nun gut ohne Konkurrenz in Zone 4 an die Fänger- Antikörper binden (Fig. 2B). The latex or FDA crystal FABP complexes (GREEN) can now bind well to the capture antibodies without competition in zone 4 (Figure 2B).
Ergebnis: Grüner Punkt (oder Strich). „Gute Nachricht: Akuter Infarkt ausgeschlossen!" Result: Green dot (or dash). "Good news: Acute infarction excluded!"
Auf diese Weise erscheinen klare Signale im Sichtfenster: „GRÜN! Alles okay: Sicherer Ausschluss AMI!" In this way, clear signals appear in the viewing window: "GREEN! Everything's okay: safe exclusion AMI! "
„ROT! Gefahr: AMI!" "RED! Danger: AMI! "
Beispiel 2: Ausschluss einer Virusinfektion Example 2: Exclusion of a viral infection
Fall 1: Keine akute Virusinfektion (Auschluss) Case 1: No acute viral infection (exclusion)
Es werden 1-3 Tropfen Vollblut in den Aufnahmetrichter gegeben. Das Blut passiert eine Blut-Separator-Membran, die rote Blutkörperchen zurückhält. Der Test kann auch ohne Separator ausgeführt werden, dann aber mit Plasma oder Serum.  1-3 drops of whole blood are added to the receiving funnel. The blood passes through a blood separator membrane that restrains red blood cells. The test can also be performed without a separator, but then with plasma or serum.
Das farblose Plasma/Serum enthält im Falle einer Virusinfektion erhöhte Mengen der niedermolekularen Makrophagen-Signal-Substanz Neopterin. The colorless plasma / serum contains in the case of a viral infection increased amounts of the low molecular weight macrophage signaling substance Neopterin.
Auf einer zweiten Membranzone oder zweiten Membran (Konjugat-Membran) sind Nanogold-gelabelte (ROT) Neopterin-Antikörper getrennt mit Latex gelabelten oder FDA-Nanokristall (GRÜN) Neopterin Molekülen adsorptiv, d.h. nicht fest, aufgetragen.  On a second membrane zone or second membrane (conjugate membrane), nanogold-labeled (RED) neopterin antibodies are separately adsorbed with latex-labeled or FDA nanocrystal (GREEN) neopterin molecules; not firmly applied.
Eine dritten Zone, die im Test visuell verdeckt wird, trägt fest an einem Trägermolekül (z.B. BSA oder die Membran selbst) gebundene Neopterin Moleküle. A third zone, which is visually obscured in the assay, carries neopterin molecules tightly bound to a carrier molecule (e.g., BSA or the membrane itself).
Eine vierte, sichtbare, Zone im Sichtfenster trägt fest immobilisierte anti-Neopterin Antikörper . Sie binden mit hoher Affinität zum Antigen, in diesem Fall Neopterin. Hier binden sich die GRÜN (Latex oder FDA) gelabelten Neopterin Antigene. Im Sichtfenster leuchtet es GRÜN auf. A fourth, visible, zone in the viewing window carries firmly immobilized anti-neopterin antibodies. They bind with high affinity to the antigen, in this case neopterin. Here, the GREEN (latex or FDA) labeled Neopterin antigens bind. It lights up GREEN in the viewing window.
Fall 2: Einschluss eines akuten Virusinfektes Case 2: Inclusion of an acute viral infection
Eine hohe Menge an niedermolekularem Antigen (Neopterin, als Signalsubstanz von Makrophagen gebildet) liegt in diesem Falle im Vollblut, Serum oder Plasma vor. Die Anti-Neopterin-Antikörper konjugierten Nanogoldpartikel (ROT) binden mit dem Neopterin der Probe und bewegen sich durch Kapillarkraft zur dritten Zone/Membran (verdeckt, nicht sichtbar) und passieren das auf der Membran oder Trennkörper immobilisierte Neopterin Antigen Trennfeld.  A high amount of low molecular weight antigen (neopterin, formed as a signal substance of macrophages) is present in this case in whole blood, serum or plasma. The anti-neopterin antibody-conjugated nanogold particles (ROT) bind with the neopterin of the sample and move by capillary force to the third zone / membrane (obscured, invisible) and pass through the neopterin antigen separation field immobilized on the membrane or separation body.
Im Bereich des Sichtfensters binden die anti-Neopterin- Antikörper die Neopterin- Antikörper-goldkonjugierten Komplexe (ROT). Ungebundene Gold-Antikörper- Komplexe sowie die mit Neopterin gelabelten grünen Nanopartikel werden vom Saugpad aufgesaugt.  In the area of the viewing window, the anti-neopterin antibodies bind the neopterin-antibody-gold-conjugated complexes (RED). Unbound gold-antibody complexes and neopterin-labeled green nanoparticles are absorbed by the suction pad.
Das Sichtfenster zeigt deutlich ROT: "Virus-Infekt!" Funktionsfähigkeit der Erfindung The window clearly shows RED: "virus infection!" Functionality of the invention
Die hier beschriebene Erfindung wurde durch weitere Forschung geprüft sowie ordentlich im Rahmen des Möglichen durchgeführt. Es wurde ein verschieden farbiges Nanopartikel mit jeweils spezifischen Antikörpern sowie Antigen konjugiert, welche auf unterschiedliche Konjugations Felder aufgetragen wurden. Des Weiteren wurden auf dem Trennfeld das spezifische hier verwendete Antigen sowie die spezifischen Antikörper im Sichtfenster Bereich immobilisiert. In den Figuren 9 A, B und C sind jeweils die Konjugationen von Nanopartikeln mit Farbe A (links konjugiert) sowie Farbe B (rechts konjugiert) auf den Konjugations-Pads zu sehen. Die Figuren 10 A, B und C zeigen die Seitenansicht des Aufbaus der Konjugations-Pads wiederum mit Farbe A und B getrennt sowie zusammen in einem Test. Nach Hinzugeben des Antigens (Figuren 11 A, B und C) bzw. ohne Antigen (Figuren 12 A, B und C) sind die Resultate im jeweiligen Trennbereich (linke Linie, wenn sie denn vorhanden ist) sowie Sichtfenster (rechte Linie, wenn sie denn vorhanden ist) zu sehen. Das erfindungsgemäße zweifarbige System ermöglicht, im Falle von hinzu gegebenem Antigen die Farbe A im Sichtfenster Bereich zu sehen und ohne Antigen die Farbe B im Sichtfenster Bereich zu sehen. The invention described here has been tested by further research and properly performed as far as possible. It was a different colored nanoparticles each with specific antibodies and antigen conjugated, which were applied to different conjugation fields. Furthermore, the specific antigen used here as well as the specific antibodies were immobilized on the separation field in the viewing window area. In FIGS. 9A, B and C, the conjugations of nanoparticles with color A (left-conjugated) and color B (right-conjugated) can be seen on the conjugation pads. Figures 10 A, B and C show the side view of the construction of the conjugation pads again with color A and B separated and together in a test. After addition of the antigen (FIGS. 11A, B and C) or without antigen (FIGS. 12A, B and C), the results are in the respective separation region (left line, if it exists) and viewing window (right line, if they are) because there is) to see. The two-color system according to the invention makes it possible, in the case of added antigen, to see the color A in the viewing window area and to see the color B in the viewing window area without antigen.
Beschreibung der Figuren Figur 1 A und B: DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1 A and B:
A) Schematische Darstellung des Stands der Technik. Antikörper mit gebundenen FABP-Molekülen binden an Fänger Antikörper  A) Schematic representation of the prior art. Antibodies with bound FABP molecules bind to capture antibodies
B) Schematische Darstellung des Stands der Technik, Blick von oben mit zwei roten Signal Linien.  B) Schematic representation of the state of the art, view from above with two red signal lines.
Figur 2 A, B und C: FIG. 2 A, B and C:
Schematische Darstellung der Erfindung zum Ausschluss eines akuten HerzinfarktsSchematic representation of the invention for the exclusion of acute myocardial infarction
A) Aufbau des zwei signalfarbigen Schnelltests zum Ausschluss eines akuten Herzinfarkts mit seperatem Konjugations-Pad mit grünen und roten Nanopartikeln jeweils konjugiert mit spezifischen Antikörpern sowie Antigen. Im mittleren Bereich befindet sich ein Farb-Trennbereich, welcher entsprechend eine Farbe binden kann sowie im Bereich des Sichtfensters spezifische Antikörper zum Binden einer Signalfarbe. Am Ende des Aufbaus befindet sich ein Saugpad, welches für die Kapillarkraft sorgt. A) Set-up of the two high-speed rapid color signal to exclude an acute myocardial infarction with a separate conjugation pad with green and red nanoparticles each conjugated with specific antibodies and antigen. In the middle area there is a color separation area, which can bind a color accordingly and in the area of the viewing window specific antibodies for binding a signal color. At the end of the structure there is a suction pad, which provides the capillary force.
B) Befinden sich keine FABP-Antigene im Blut, binden hoch FABP-spezifische Gold markierte (R) Antikörper an FABP-Antigene im Trennbereich. Die Latex- oder FDA- Kristall-markierten (G) Antigene binden an auf dem Teststreifen immobilisierte Fänger-Antikörper und es erscheint eine grüne Färbung.  B) If there are no FABP antigens in the blood, high FABP-specific gold-labeled (R) antibodies bind to FABP antigens in the separation region. The latex or FDA crystal-labeled (G) antigens bind to capture antibody immobilized on the test strip and a green color appears.
C) Befinden sich FABP-Antigene im Blut, binden die hoch FABP-spezifischen Goldmarkierten (R) Antikörper diese Antigene. Die Gold markierten Antikörper binden an die auf dem Teststreifen immobilisierte Fänger-Antikörper und es erscheint eine rote Färbung. Die Latex- oder FDA-Kristall-markierten (G) Antigene werden nicht gebunden und ausgewaschen.  C) If FABP antigens are present in the blood, the high FABP-specific gold-labeled (R) antibodies bind these antigens. The gold-labeled antibodies bind to the capture antibody immobilized on the test strip and a red color appears. The latex or FDA crystal-labeled (G) antigens are not bound and washed out.
Figur 3 A, B und C: FIG. 3 A, B and C:
Schematische Darstellung der Erfindung zum Ausschluss einer akuten Virusinfektion A) Aufbau des zwei signalfarbigen Schnelltests zum Ausschluss einer akuten Schematic representation of the invention for the exclusion of an acute viral infection A) Construction of the two rapid signal test to exclude acute
Virusinfektion mit seperatem Konjugations-Pad mit grünen und roten Nanopartikeln jeweils konjugiert mit spezifischen Antikörpern sowie Antigen. Im mittlerem Bereich befindet sich ein Farb-Trennbereich, welcher entsprechend eine Farbe binden kann sowie im Bereich des Sichtfensters spezifische Antikörper zum Binden einer Signalfarbe. Am Ende des Aufbaus befindet sich ein Saugpad, welches für die Kapillarkraft sorgt. Viral infection with separate conjugation pad with green and red nanoparticles each conjugated with specific antibodies and antigen. In the middle area there is a color separation area, which can bind a color accordingly as well as in the area of the viewing window specific antibodies for binding a Signal color. At the end of the structure there is a suction pad, which provides the capillary force.
B) Befinden sich keine Neopterin-Antigene im Blut, binden NanoGold markierte (R) Neopterin-Antikörper an Neopterin-Moleküle im Trennbereich. Latex- oder FDA- Kristall-markierte (G) Neopterin-Moleküle binden an die auf dem Teststreifen immobilisierten Fänger-Antikörper und es erscheint eine grüne Färbung.  B) If there are no neopterin antigens in the blood, NanoGold-labeled (R) neopterin antibodies bind to neopterin molecules in the separation area. Latex or FDA crystal-labeled (G) neopterin molecules bind to the capture antibody immobilized on the test strip and a green color appears.
C) Befinden sich viele Neopterin-Antigene im Blut, binden diese an die Neopterin- Antikörper markierten Nanogold-Partikel (R), welche an die auf dem Teststreifen immobilisierten anti-Neopterin-Antikörper binden, und es erscheint eine rote Färbung. Die Latex- oder FDA-Kristall-markierten (G) Antigene werden nicht gebunden und ausgewaschen.  C) If many neopterin antigens are present in the blood, they bind to the neopterin-labeled nanogold particles (R), which bind to the anti-neopterin antibody immobilized on the test strip, and a red color appears. The latex or FDA crystal-labeled (G) antigens are not bound and washed out.
Figur 4: FIG. 4:
Darstellung des erfindungsgemäßen Teststreifens. Erscheint eine grüne Färbung, kann ein akuter Herzinfarkt bzw. eine Virusinfektion ausgeschlossen werden.  Representation of the test strip according to the invention. If a green color appears, an acute myocardial infarction or viral infection can be ruled out.
Erscheint eine rote Färbung, ist ein akuter Herzinfarkt bzw. eine Virusinfektion indiziert. If a red color appears, an acute myocardial infarction or virus infection is indicated.
Figur 5: FIG. 5:
Gold markierte Antikörper mit gebundenen FABP-Antigenen. Figur 6 A und B: Gold labeled antibodies with bound FABP antigens. FIGS. 6A and B:
A) Gold markierte Antikörper mit gebundenen FABP-Antigenen gebunden an Fänger Antikörper  A) Gold-labeled antibodies with bound FABP antigens bound to capture antibodies
B) Latex markierte FABP-Moleküle, gebunden an die Fängerantikörper auf dem Teststreifen B) Latex labeled FABP molecules bound to the capture antibodies on the test strip
Figur 7: FIG. 7:
Darstellung des Prinzips der Detektion mit FDA-markiertem FABP, gebunden an die Fängerantikörper auf dem Teststreifen  Representation of the principle of detection with FDA-labeled FABP bound to the capture antibodies on the test strip
Figur 8: FIG. 8:
Darstellung des Prinzips der Detektion von FABP-Antigenen durch Gold markierte Antikörper Figur 9 A, B und C: Representation of the principle of detection of FABP antigens by gold-labeled antibodies FIGS. 9A, B and C:
A) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A  A) Top view with conjugated pad with nanoparticles color A
B) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe B  B) Top view with conjugated pad with nanoparticles color B
C) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A und B  C) Top view with conjugated pad with nanoparticles A and B color
Figur 10 A, B und C: FIGS. 10A, B and C:
A) Seitenansicht mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A  A) Side view with conjugated pad with nanoparticles color A
B) Seitenansicht mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe B  B) Side view with conjugated pad with nanoparticles color B
C) Seitenansicht mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A und B  C) Side view with conjugated pad with nanoparticles color A and B
Figur 11 A, B und C: FIGS. 11A, B and C:
A) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A nach Hinzugeben des Antigens und keiner Signal Linie im Sichtfenster sowie Trennfeld Bereich  A) Top view of conjugated pad with nanoparticles of color A after adding the antigen and no signal line in the viewing window as well as the separation field area
B) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe B nach Hinzugeben des Antigens und Signal Linie im Sichtfenster Bereich B) View from above with conjugated pad with nanoparticles color B after adding the antigen and signal line in the viewing window area
C) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A und B nach Hinzugeben des Antigens und Signal Linie Farbe B im Sichtfenster Bereich sowie Farbe A im Saugpad C) Top view with conjugated pad with nanoparticles A and B after adding the antigen and signal line B in the viewing window area and color A in the suction pad
Figur 12 A, B und C: FIGS. 12A, B and C:
A) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe A ohne Hinzugeben des Antigens und Signal Linie im Sichtfenster Bereich.  A) View from above with conjugated pad with nanoparticles color A without adding the antigen and signal line in the viewing window area.
B) Ansicht von oben mit konjugiertem Päd mit Nanopartikeln Farbe B ohne Hinzugeben des Antigens und Signal Linie im Trennungsfeld Bereich.  B) top view conjugated päd with nanoparticles color B without adding the antigen and signal line in the separation field area.
C) Ansicht von oben mit konjugiertem päd mit Nanopartikeln Farbe A und B ohne hinzugeben des Antigens und Signal Linie Farbe B im Trennfeld sowie Farbe A im Sichtfenster Bereich.  C) top view with conjugated pad with nanoparticles color A and B without adding the antigen and signal line color B in the separation field as well as color A in the viewing window area.

Claims

Patentansprüche claims
1. Vorrichtung zur Bestimmung der Ursache von pathologischen Zuständen, wobei die Vorrichtung absorptiv gebundene Antikörper, Antigene, Aptamere oder andere Biomoleküle umfasst und entsprechend der Bindung der besagten Antikörper, Antigene, Aptamere oder anderer Biomoleküle an auf der Vorrichtung immobilisierte Antikörper auf der Basis ihrer Markierung in einem Sichtfenster ein spezifisches Farbsignal visuell wahrzunehmen ist, das entsprechend der an die immobilisierten Antikörper gebundenen Moleküle wie bei einer Ampel ein rotes oder grünes Signal sein kann.  1. A device for determining the cause of pathological conditions, the device comprising absorptively bound antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules and according to the binding of said antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules to antibodies immobilized on the device on the basis of their label In a viewing window, a specific color signal is to be perceived visually, which may be a red or green signal, as in the case of a traffic light, according to the molecules bound to the immobilized antibodies.
2. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 , wobei die Vorrichtung weiterhin ein Applikationsfeld zum Auftragen der Probe, ein verdecktes Trennfeld zum Binden freier Antikörper, Antigene, Aptamere oder anderer Biomoleküle, und ein Saugpad zum Bewirken von Kapillarkräften umfasst. The device of claim 1, wherein the device further comprises an application field for applying the sample, a hidden separation field for binding free antibodies, antigens, aptamers or other biomolecules, and a suction pad for effecting capillary forces.
3. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei die immobilisierten Antikörper gegen FABP gerichtet sind und die Vorrichtung weiterhin absorptiv gebundener FABP- oder FABP-Derivat-Moleküle umfasst, die mit Latex- oder FDA-Molekülen markiert sind. The device of claim 1 or 2, wherein the immobilized antibodies are directed against FABP and the device further comprises absorptively bound FABP or FABP derivative molecules labeled with latex or FDA molecules.
4. Vorrichtung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei ein absorptiv gebundener Antikörper gegen FABP gerichtet ist und bei Vorhandensein von FABP ein entsprechender Komplex aus dem Antikörper und FABP entsteht. 4. Device according to one of claims 1 to 3, wherein an absorptively bound antibody is directed against FABP and in the presence of FABP a corresponding complex of the antibody and FABP is formed.
5. Vorrichtung gemäß Anspruch 4, wobei der absorptiv gebundene Antikörper NanoGold markiert ist. The device of claim 4, wherein the absorptively bound antibody is NanoGold labeled.
6. Vorrichtung gemäß Anspruch 4 oder 5, wobei bei Bindung des Komplexes aus FABP-spezifischem Antikörper und FABP an die immobilisierten Antikörper im Sichtfenster ein rotes Farbsignal ausgegeben wird. 6. The device according to claim 4 or 5, wherein upon binding of the complex of FABP-specific antibody and FABP to the immobilized antibody in the viewing window, a red color signal is output.
7. Vorrichtung gemäß Anspruch 3, wobei bei fehlender Bindung des FABP- spezifischen Antikörpers durch Bindung der FABP- oder FABP-Derivat- Moleküle, die mit Latex- oder FDA-Molekülen markiert sind, an die immobilisierten Antikörper im Sichtfenster ein grünes Farbsignal ausgegeben wird. 7. The device according to claim 3, wherein in the absence of binding of the FABP-specific antibody by binding of the FABP or FABP derivative molecules which are labeled with latex or FDA molecules to the immobilized antibody in the viewing window a green color signal is output.
8. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei die immobilisierten Antikörper mindestens zwei Spezifitäten umfassen. 8. The device according to claim 1 or 2, wherein the immobilized antibodies comprise at least two specificities.
9. Vorrichtung gemäß Anspruch 8, wobei eine Spezifität der immobilisierten Antikörper gegen Neopterin gerichtet ist. 9. The device according to claim 8, wherein a specificity of the immobilized antibodies is directed against neopterin.
10. Vorrichtung gemäß Anspruch 8 oder 9, wobei die absorptiv gebundenen Moleküle NanoGold markierte Neopterin-Moleküle umfassen und bei ihrer Bindung an immobilisierte Antikörper im Sichtfenster ein rotes Farbsignal ausgegeben wird. 10. The device according to claim 8 or 9, wherein the absorptively bound molecules comprise nanoGold-labeled neopterin molecules and when they are bound to immobilized antibodies in the viewing window, a red color signal is output.
11. Vorrichtung gemäß einem der Ansprüche 8, 9 oder 10, wobei die absorptiv gebunden Moleküle Latex- oder FDA-markierte Antikörper umfassen und bei ihrer Bindung an immobilisierte Antikörper im Sichtfenster ein grünes Farbsignal ausgegeben wird. 11. The device according to any one of claims 8, 9 or 10, wherein the absorptively bound molecules comprise latex or FDA-labeled antibodies and when they are bound to immobilized antibodies in the viewing window, a green color signal is output.
12. Teststreifen zur Bestimmung der Ursache von pathologischen Zuständen bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, 12. test strip for determining the cause of pathological conditions consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad, characterized
- dass auf dem Applikationsfeld ein absorptiv gebundenes farblich markiertes Antigen und ein absorptiv gebundener farblich markierter Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül hintereinander angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind der Farbtrennbereich immobilisierte spezifische Antigene des pathologischen Zustande zum Binden freier nicht gebundener Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst und that an absorptively bound color - labeled antigen and an absorptively bound color - labeled antibody, aptamer or another capture molecule are arranged one behind the other in the application field, wherein the antigen and the antibody, aptamer or another capture molecule are marked in different colors the color separation region immobilized specific antigens of the includes pathological conditions for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules and
- das Sichtfenster immobilisierte Antikörper gegen die entsprechend spezifischen Antigene des pathologischen Zustands umfasst the viewing window comprises immobilized antibodies to the corresponding specific pathological state antigens
13. Teststreifen gemäß Anspruch 12 zur Bestimmung von FABP bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, 13. A test strip according to claim 12 for the determination of FABP consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad, characterized
- dass auf dem Applikationsfeld hintereinander angeordnet, getrennt durch ein unbehandeltes Konjugationspad  - That on the application field arranged one behind the other, separated by an untreated conjugation pad
- ein absorptiv gebundenes farblich markiertes FABP Antigen und an absorptively bound color-coded FABP antigen and
- ein absorptiv gebundener farblich markierter Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül gegen FABP angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, das Aptamer oder das andere Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind - An absorptively bound color-coded antibody, aptamer or other capture molecule against FABP are arranged, wherein the antigen and the antibody, the aptamer or the other capture molecule are marked differently colored
- der Farbtrennbereich immobilisierte FABP Antigene zum Binden freier nicht gebundener Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst  the color separation region comprises immobilized FABP antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
- und das Sichtfenster immobilisierte Antikörper gegen FABP umfasst.  and the viewing window comprises immobilized antibodies to FABP.
14. Teststreifen gemäß Anspruch 12 zur Bestimmung von Neopterin bestehend aus einem Applikationsfeld zum Auftragen der zu analysierenden Probe, einem Farbtrennbereich, einem Sichtfenster und einem Saugpad, dadurch gekennzeichnet, 14. Test strip according to claim 12 for the determination of neopterin consisting of an application field for applying the sample to be analyzed, a color separation region, a viewing window and a suction pad, characterized
- dass auf dem Applikationsfeld hintereinander angeordnet, getrennt durch ein unbehandeltes Konjugationspad  - That on the application field arranged one behind the other, separated by an untreated conjugation pad
- ein absorptiv gebundenes farblich markiertes Neopterin Antigen und an absorptively bound color - labeled neopterin antigen and
- ein absorptiv gebundener farblich markierter Antikörper, Aptamer oder ein anderes Fängermolekül gegen Neopterin angeordnet sind, wobei das Antigen und der Antikörper, das Aptamer oder das andere Fängermolekül unterschiedlich farbig markiert sind - An absorptively bound color-coded antibody, aptamer or other capture molecule are arranged against neopterin, wherein the antigen and the antibody, the aptamer or the other capture molecule are labeled differently colored
- der Farbtrennbereich immobilisierte Neopterin Antigene zum Binden freier nicht gebundener Antikörper, Aptamere oder anderer Fängermoleküle umfasst  the color separation region comprises immobilized neopterin antigens for binding free unbound antibodies, aptamers or other capture molecules
- und das Sichtfenster immobiliserte Antikörper gegen Neopterin umfasst  and the viewing window comprises immobilized antibodies to neopterin
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