WO2014100874A1 - Composição nematotóxica de efeito sinérgico, uso de composição nematotóxica de efeito sinérgico - Google Patents
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Definitions
- Patent Descriptive Report "NEMATOTOXIC SYNERGIC EFFECT COMPOSITION, USE OF SYNERGIC NEMATOTOXIC COMPOSITION"
- the present invention is in the context of green chemistry and relates generally to compositions used for agricultural pest control and, in a particular embodiment, to compositions useful in combating nematodes.
- gall nematodes are among the most harmful pests in areas of intensive agriculture for important crops such as coffee, sugar cane, soybeans, beans, tobacco, fruit and vegetables. Damage caused by these phytopathogens includes the formation of galls that cause imbalance in the absorption of water and nutrients from the soil, making plants much more sensitive to any environmental modification or pest and pathogen attack.
- resistant varieties are a recommended way to control pests and diseases, but the number of resistant cultivars is limited as well as the genetic diversity related to this resistance (Dufour et al., 2003; Ferraz & Freitas, 2000).
- Integrated pest management is a targeted strategy, but it requires rigorous planning, intensive crop management, more time and may cost more than pesticides (Gentz, 2010).
- the most widely used control strategy is centered on the massive use of synthetic nematicides which result in compromised natural environment and public health (Abad, et al., 2008).
- the use of natural nematotoxic plant compounds constitutes a strategy for the control of this phytonematoid.
- the present invention provides a viable alternative to the use of environmentally harmful nematotoxic compounds which may harm human health.
- This alternative is embodied by a nematotoxic nematode control composition which can be used on plants, plant parts and soil.
- the respective technology comes from unexpected results obtained from experiments with extracts of the plant Canavalia ensiformis resulting in an unprecedented nematotoxic composition comprising a specific combination of substances naturally found in the extract.
- the present invention provides a composition comprising a specific combination of naturally occurring substances that act synergistically in controlling nematodes in plants.
- the synergistic nematotoxic composition of the present invention comprises as active compounds:
- Embodiments of the present composition include solutions, emulsions, wettable powders, suspensions, powders, dusts, pastes, soluble powders, granules, suspension-emulsion concentrates, natural and synthetic materials impregnated with active compounds and microencapsulations in polymeric substances. Additionally, the composition of the invention may further comprise formulation ingredients including, among them, liquid carriers / liquid solvents and / or solid carriers and / or surfactants and / or tackifiers and / or colorants
- a second embodiment of the respective invention relates to the use of the synergistic nematotoxic composition for controlling nematodes in plants.
- Figure 1 Effect of aqueous extracts of antagonist plant seeds on (J2) M. incognita. Bars represent the percentage of live nematodes after 48 hours of exposure. Concentration of 1mg of each extract to a final volume of 0.3ml_ and 100 second stage juveniles was used in the triplicate bioassay using distilled water as negative control.
- FIG. 2 Effect of 0.5mg (0.5mg / 0.3ml final vol) of external (DECe) and internal (DICe) dialysates on M. incognita J2.
- the bars represent the percentage of dead nematodes.
- Controls were performed with distilled water (dH2O), bovine serum albumin (BSA) and C. ensiformis aqueous raw extract (ECACe).
- Recovery test performed for certification of the nematicidal effect.
- FIG. 3- Effect of the preheated (50 ° C) C. ensiformis DE against M. incognita J2 demonstrating the thermal stability of the analyzed fraction.
- the bioassay was performed in triplicate and the bars represent the percentage of dead nematodes. Distilled water was used as a negative control. Recovery test performed for certification of the nematicidal effect.
- Figure 4 Effect of 500pg (500 pg / 0.3mL) of C. ensiformis DE on free-living saprophytic nematodes (VL) and M. incognita J2.
- the bars represent the percentage of dead nematodes.
- the bioassay controls have M. incognita nematodes (VL) and J2 immersed separately in distilled water.
- Figure 5 Test of hemolytic activity using bovine blood (A) or purified red blood cells (B) incubated with different concentrations of C. ensiformis external dialysate solubilized in PBS. Hemolytic activity measurements were monitored spectrophotometrically using wavelengths of 567 nm. Distilled water (100% hemolysis) and PBS were used as positive and negative controls.
- FIG. 6 Effect of C. ensiformis external dialysate (DE) on M. incognita J2 in a greenhouse simulating field conditions.
- the bars symbolize the number of egg masses found in tomato roots after treatments.
- the experiment was conducted in quintuplicate with distilled water and commercial nematicide being used as negative and positive controls respectively.
- Figure 7 - Optical microscopy (A) J2 before the addition of DE-200x. (B) Intestinal region of J2 before the addition of DE - 400x. (C) J2 24 hours after addition of DE - 200x. (D) J2 intestinal region after the addition of DE - 400x.
- B - Evaluation of the effect of different commercial compounds and their compositions after the recovery test using distilled water.
- C + positive control (extract) 2: palmitic acid; 3: S-carboxymethylcysteine; 4: transconcitic acid; 5: glucose.
- the present invention is the result of research carried out to detect possible natural nematotoxic compounds present in plant extracts. Such compounds are an alternative in substitution for nematotoxic synthetic agents that cause damage to nature and man.
- the nematotoxic composition described in the invention was generated from unexpected results obtained when performing nematotoxicity bioassays using as active compounds some substances detected in the plant extract. The results of these bioassays proved that there was an unexpected synergistic nematotoxic effect from combinations of these active compounds.
- the present invention describes a synergistic nematotoxic composition
- a synergistic nematotoxic composition comprising as active compounds:
- the nematotoxic composition described in this invention may alternatively comprise formulation ingredients.
- Said composition with or without the presence of formulation ingredients may be in the form of solutions, emulsions, wettable powders, suspensions, powders, dusts, pastes, soluble powders, granules, emulsion suspension concentrates, natural and synthetic materials impregnated with active compounds and microencapsulations in polymeric substances.
- composition ingredients which may be used as formulation ingredients include, but are not limited to, liquid carriers / liquid solvents and / or solid carriers and / or surfactants and / or tackifiers and / or coloring agents. If the formulation ingredient used is water, auxiliary solvents such as organic solvents may also be employed.
- Suitable liquid carriers / solvents for use in the present invention include, but are not limited to, aromatic solvents, chlorinated aromatic solvents or chlorinated aliphatic hydrocarbons, aliphatic hydrocarbons, petroleum fractions, mineral oils, vegetable oils, alcohols and their ethers and esters, ketones, strongly polar solvents and water.
- the aromatic solvents used in the invention are selected from xylene, toluene or alkylnaphthalenes.
- chlorinated aromatic solvents or chlorinated aliphatic hydrocarbons are used in the composition of the present invention, they are preferably selected from chlorobenzene, chloroethylene or dichloromethane.
- Aliphatic hydrocarbons are preferably selected from cyclohexane or paraffins. In the alternative case of use of alcohols these are preferably selected from ethanol, propanol, butanol or glycol.
- ketones are used they are preferably selected from propanone, methyl ethyl ketone, methyl isobutyl ketone or cyclohexanone.
- Strongly polar solvents are preferably selected from dimethylformamide and dimethyl sulfoxide.
- Suitable solid carriers for use in the present invention include, but are not limited to, ammonium salts, ground natural minerals and ground synthetic minerals.
- the ground natural minerals are selected from kaolin, clays, talc, chalk, quartz, attapulgite, montmorillonite and diatomaceous earth.
- ground synthetic minerals they are preferably selected from silica, alumina and silicates.
- Suitable solid carriers are used when the nematotoxic composition of the present invention is presented in granule form. These suitable solid carriers are preferably selected from crushed natural rocks, synthetic granules and granules of organic material.
- surfactants may be employed as formulation ingredients for the composition of the present invention.
- the respective surfactants are selected from emulsifiers and / or dispersants and / or foams.
- Different emulsifiers / foaming agents may be used in the nematotoxic composition of the present invention including cationic, nonionic emulsifiers and anionic emulsifiers.
- nonionic and anionic emulsifiers these are preferably selected from polyoxyethylene fatty esters, polyoxyethylene fatty ethers, alkyl sulfonates, alkyl sulfates, aryl sulfonates, and protein hydrolysates.
- dispersants are used as surfactants in the present invention, they are preferably selected from methylcellulose and lignin sulfite scrap.
- formulation ingredients may also alternatively be employed in the composition of the present invention.
- Such ingredients include, but are not limited to, tackifiers such as carboxymethylcellulose and natural and synthetic polymers in the form of powders, granules or latex, such as gum arabic, polyvinyl alcohol and polyvinyl acetate.
- Other ingredients that may also be employed as formulation ingredients are vegetable and mineral oils, natural phospholipids such as cephalines and lecithins, and synthetic phospholipids.
- the nematotoxic composition of the present invention may also contain as a formulation ingredient dyes such as inorganic pigments such as iron oxide, titanium oxide and prussian blue and organic dyes such as alizarin dyes, azo dyes and metallic phthalocyanine dyes.
- Residual nutrients such as salts of iron, manganese, boron, copper, cobalt, molybdenum and zinc may alternatively be used as formulation ingredients in the composition of the present invention.
- the synergistic effect nematotoxic composition may further comprise other active compounds. These other active compounds, when used, are selected from insecticides, attractants, sterilizing agents, bactericides, acaricides, nematicides, fungicides, growth regulating substances, herbicides and safeners.
- the synergistic nematotoxic composition is an aqueous composition comprising the active compounds.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid and transconcitic acid at concentrations of 0.25 g / l each.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid and glucose at concentrations of 0.25 g / l each.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid, transconcitic acid and glucose at concentrations of 0.17 g / l each.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid, transconcitic acid and S-carboxymethylcysteine at concentrations of 0.17 g / l each.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid, glucose and S-carboxymethylcysteine at concentrations of 0.17 g / l each.
- the nematotoxic composition is an aqueous composition containing palmitic acid, glucose, S-carboxymethylcysteine and transconcitic acid at concentrations of 0.125 g / l each.
- object of the present invention is the use of the synergistic effect nematotoxic composition described above for the control of nematodes in plants. Particularly, said use occurs by applying the composition of the invention to the plant and / or plant parts and / or soil.
- synergistic nematotoxic composition of the present invention to the plant, and / or parts of the plant and / or soil may be accomplished directly or by allowing the compounds to act upon their vicinity, environment or storage space by common treatment methods such as, eg by dipping, spraying, evaporating, misting, scattering, etc.
- common treatment methods such as, eg by dipping, spraying, evaporating, misting, scattering, etc.
- the use of the synergistic nematotoxic composition described herein is for the control of Meloigogyne incognita.
- aqueous extracts obtained from antagonistic plant seeds were tested in bioassays for the detection of effective compounds against second stage juveniles (J2). unknown.
- Canavalia ensiformis a plant of the Leguminosae family, originating from Central America, exhibited the highest nematicidal activity (85%) (Fig. 1).
- Fractionation of this material by dialysis resulted in the separation of molecules smaller than 3.5 kDa (external dialysate - DE) and larger than 3.5 kDa (internal dialysate - D1).
- the ND presented the most promising results compared to the Dl, such as: a) higher nematotoxic activity (Fig.
- compositions containing combinations of active compounds were tested by performing in vitro bioassays against M. incognita juveniles.
- the active compounds used in the experiments were obtained commercially.
- compositions tested were:
- compositions b), e), f), g), h), and i) unexpectedly showed synergistic nematotoxic effect with respect to nematode stoppage as compared to the sum of the results obtained. individually for each active compound. These comparisons are shown in Tables 2 to 7 below:
- Composition S- 0.17 (out of 99.32
- Nematotoxic compositions a), c), d) whose in vitro test results are also shown in Figures 10A and 10B and did not show significant synergistic nematotoxic effect.
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Abstract
A presente invenção se refere genericamente a composições utilizadas para controle de pragas agrícolas e, em uma modalidade particular, a composições utilizáveis no combate a nematoides. A invenção apresenta uma alternativa viável ao uso dos compostos nematotóxicos danosos ao meio ambiente e que podem prejudicar a saúde humana. Esta alternativa é concretizada através de uma composição nematotóxica para o controle de nematoides e que pode ser utilizada em plantas, parte de plantas e no solo. A respectiva tecnologia advém de resultados inesperados obtidos a partir de experimentos realizados com extratos da planta Canavalia ensiformis resultando em uma composição nematotóxica inédita compreendendo uma combinação específica de substâncias naturalmente encontradas no extrato e que atuam sinergicamente.
Description
Relatório Descritivo de Patente de Invenção: "COMPOSIÇÃO NEMATOTOXICA DE EFEITO SINÉRGICO, USO DE COMPOSIÇÃO NEMATOTOXICA DE EFEITO SINÉRGICO"
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção se enquadra no contexto da química verde e se refere genericamente a composições utilizadas para controle de pragas agrícolas e, em uma modalidade particular, a composições utilizáveis no combate a nematoides.
DESCRIÇÃO DO ESTADO DA TÉCNICA
Dentro do conceito de sustentabilidade, a química ambiental e/ou química verde tem avançado no sentido de introduzir processos e produtos para a substituição de tecnologias poluidoras. A utilização de matérias-primas de origem vegetal e/ou substâncias idênticas àquelas encontradas na natureza e a sua incorporação em processos/produtos ecologicamente corretos tem se mostrado uma tendência mundial principalmente em países que apresentam grande disponibilidade de biomassa.
No Brasil, os nematoides das galhas figuram entre as pragas mais prejucidiais em áreas de agricultura intensiva para importantes culturas, como café, cana-de-açúcar, soja, feijão, fumo, frutíferas e olerícolas. Os danos causados por esses fitopatógenos incluem a formação das galhas que ocasionam o desequilíbrio na absorção de água e nutrientes do solo, tornando as plantas muito mais sensíveis a qualquer modificação ambiental ou ao ataque de pragas e patógenos. Nematoides do género Meloidogyne spp. são endoparasitas sedentários obrigatórios de várias plantas. Os hospedeiros compreendem mais de 3.000 espécies vegetais. As perdas anuais relacionadas à ação desses organismos se aproximam de US$ 150 bilhões de dólares, das quais 95% estão associadas aos nematoide Meloigogyne incógnita, M. javanica, M. arenaria e M. hapla (Abad, et al., 2008; Bakhetia et al., 2005). Nesse contexto, o M .incógnita destaca-se como a espécie mais expressiva quanto às perdas económicas (Huang et al., 2006).
As estratégias utilizadas para o controle desse fitoparasita consistem: na rotação de culturas, no uso de variedades resistentes, no manejo integrado de pragas e, principalmente na aplicação de defensivos agrícolas sintéticos (Chitwood, 2002). O uso de plantas antagonistas em esquemas de rotação de culturas é uma alternativa, porém com redução na produtividade e nos lucros do agricultor (Dufour et al., 2003; Ferraz & Freitas, 2000). A utilização de variedades resistentes é uma maneira recomendável para controlar pragas e doenças, mas o número de cultivares resistentes é limitado bem como a diversidade genética relacionada a esta resistência (Dufour et al., 2003; Ferraz & Freitas, 2000). O manejo integrado de pragas é uma estratégia almejada, porém necessita de planejamento rigoroso, de gestão intensiva da cultura, de maior dispêndio de tempo e pode ter custos superiores ao uso de defensivos agrícolas (Gentz, 2010). A estratégia de controle mais utilizada está centrada no uso massivo de nematicidas sintéticos os quais resultam no comprometimento do ambiente natural e da saúde pública (Abad, et al., 2008). Nesse âmbito, o emprego de compostos vegetais nematotóxicos naturais (Newman et al., 2003) constitui-se em uma estratégia para o controle desse fitonematoide.
Avanços significativos na área de metabolômica de plantas, e a integração desta com a genômica, a transcriptômica, a proteômica e a bioinformática, têm oferecido novas possibilidades para explorar e entender complexas interações em sistemas biológicos (Weckwerth, 2009; Shulaev, 2008; Weckwerth, 2008; Huang, et al., 2008; Roessner et al., 2006; Roessner et al., 2001 ). Estudos sobre a ação de extratos obtidos a partir de sementes de plantas antagonistas demonstraram efeitos nematicida e nematostático bastante efetivos. Esses efeitos têm sido relacionados à presença de metabólitos secundários, tais como alcalóides, terpenos, taninos, flavonóides e glicosídeos (Chitwood, 2002; Ferraz & Freitas, 2000).
Assim, é de extrema relevância a busca por substâncias químicas naturais inovadoras que possuam ampla diversidade estrutural e biológica (Newman et al., 2003; Kirkpatrick, 2002), visando à obtenção de novos produtos nematotóxicos eficazes e ambientalmente seguros. Neste caso, as plantas
são fontes de mais de 100.000 produtos naturais de pequena massa molecular, conhecidos como compostos vegetais ou metabólitos (Clardy, 2004; Dixon, 2001). Nos vegetais, estes compostos podem estar associados à diferenciação celular, à regulação do crescimento, à mediação das interações entre plantas e outros organismos e, principalmente à proteção da planta (Dobson, 2004).
Dentro deste contexto, a presente invenção apresenta uma alternativa viável ao uso dos compostos nematotóxicos danosos ao meio ambiente e que podem prejudicar a saúde humana. Esta alternativa é concretizada através de uma composição nematotóxica para o controle de nematoides e que pode ser utilizada em plantas, parte de plantas e no solo. A respectiva tecnologia advém de resultados inesperados obtidos a partir de experimentos realizados com extratos da planta Canavalia ensiformis resultando em uma composição nematotóxica inédita compreendendo uma combinação específica de substâncias naturalmente encontradas no extrato.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção apresenta uma composição compreendendo uma combinação específica de substâncias encontradas naturalmente e que atuam sinergicamente no controle de nematoides em plantas.
A composição nematotóxica sinérgica da presente invenção compreende, como compostos ativos:
• ácido palmítico,
• ácido trans-aconítico e/ou glicose e,
opcionalmente,
· S-carboximetilcisteína
Entre as formas de apresentação da presente composição são incluídas soluções, emulsões, pós umectáveis, suspensões, pós, poeiras, pastas, pós solúveis, grânulos, concentrados de suspensão-emulsão, materiais naturais e sintéticos impregnados com compostos ativos e microencapsulações em substâncias poliméricas. Adicionalmente, a composição da invenção pode, ainda, compreender ingredientes de formulação incluindo, entre os mesmos,
veículos líquidos/solventes líquidos e/ou veículos sólidos e/ou surfactantes e/ou agentes de pegajosidade e/ou corantes
Uma segunda concretização da respectiva invenção se refere ao uso da composição nematotóxica sinérgica para o controle de nematoides em plantas.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
Figura 1 - Efeito dos extratos crus aquosos de sementes de plantas antagonistas sobre (J2) de M. incógnita. As barras representam a percentagem de nematoides vivos após 48 horas de exposição. Concentração de 1mg de cada extrato para um volume final de 0,3ml_ e 100 juvenis de segundo estádio foi utilizada no bioensaio conduzido em triplicata tendo água destilada como controle negativo.
Figura 2 - Efeito de 0,5mg (0,5mg/0,3ml vol. final) dos dialisados externo (DECe) e interno (DICe) sobre J2 de M. incógnita. As barras representam a percentagem de nematoides mortos. Controles foram realizados com água destilada (dH2O), albumina sérica bovina (BSA) e extrato cru aquoso de C. ensiformis (ECACe). Ensaio de recuperação realizado para certificação do efeito nematicida.
Figura 3- Efeito do DE de C. ensiformis pré- aquecido (50° C) contra J2 de M. incógnita demonstrando a estabilidade térmica da fração analisada. O bioensaio foi realizado em triplicata e as barras representam o percentual de nematoides mortos. Água destilada foi usada como controle negativo. Ensaio de recuperação realizado para certificação do efeito nematicida.
Figura 4 - Efeito de 500pg (500 pg/0,3mL) do DE de C. ensiformis sobre nematoides saprofíticos de vida livre (VL) e J2 de M. incógnita. As barras representam o percentual de nematoides mortos. Os controles do bioensaio possuem nematoides (VL) e J2 de M. incógnita imersos separadamente em água destilada.
Figura 5 - Teste de atividade hemolítica utilizando sangue bovino (A) ou hemácias purificadas (B) incubados com distintas concentrações de dialisado externo de C. ensiformis solubilizados em PBS. As medidas de atividade hemolítica foram monitoradas espectrofotometricamente usando
comprimentos de onda de 567 nm. Água destilada (100% hemólise) e PBS foram utilizados como controles positivo e negativo.
Figura 6 - Efeito do dialisado externo (DE) de C. ensiformis sobre J2 de M. incógnita em casa de vegetação simulando condições de campo. As barras simbolizam o número de massas de ovos encontradas nas raízes de tomateiro após os tratamentos. O experimento foi conduzido em quintuplicata com água destilada e o nematicida comercial sendo utilizados como controles negativo e positivo respectivamente.
Figura 7 - Microscopia óptica: (A) J2 antes da adição do DE- 200x. (B) Região intestinal de J2 antes da adição do DE - 400x. (C) J2 24 horas após adição do DE - 200x. (D) Região intestinal de J2 após a adição do DE - 400x.
Figura 8 - (A) - Cromatograma do dialisado externo (DE) de C. ensiformis (λ = 216 nm) exibindo um perfil com 22 picos. (B) - Bioensaio mostrando as frações ativas contra J2 de M. incógnita (1 , 3, 6, 17 e 18) após 48 horas de exposição. (C) - Ensaio de recuperação certificando o efeito nematicida das frações 1 , 3 e 18 e nematostático das frações 6 e 17.
Figure 9 - (A) - Bioensaio mostrando o efeito dos compostos comerciais sobre juvenis de segundo estádio de M. incógnita após 48 horas de exposição. 1- Controle dH20, 2- DECe, 3- Glicose 10%, 4- Glicose 20%, 5- D-Pinitol (80ug), 6- D-Pinitol (150ug), 7-L-canavanina (80ug), 8-L-canavanina (150ug), 9- Ácido palmítico (80ug), 10- Ácido palmítico (150ug), 1 1- Ácido cítrico (80ug), 12- Ácido cítrico (150ug), 13- Ácido málico (80ug), 14-Ácido málico (150ug), 15- Ácido cis-aconítico (80ug), 16- Ácido cis-aconítico (150ug), 17- Ácido trans-aconítico (80ug), 18- Ácido trans-aconítico ( 50ug), 19- 50mM Tris/HCI pH 8, 20- 50mM Ácido acético pH 5, 21- L-fenilalanina (80ug), 22- L-fenilalanina (150ug), 23 L-metionina (80ug), 24- L-metionina (150ug), 25- L-triptofano (80ug), 26- L-triptofano (150ug), 27- S- carboximetilcisteína (80ug), 28- S-carboximetilcisteína (150ug), 29- Zantotoxina (80ug), 30- Zantotoxina (150ug) e 31- Glicose 20% + L- canavanina (150 ug). B - Avaliação do efeito dos diferentes compostos comerciais após o ensaio de recuperação utilizando água destilada.
Figura 10 - (A) - Bioensaio mostrando o efeito dos compostos comerciais e suas composições sobre juvenis de segundo estádio de M. incógnita (J2) após 48horas de exposição. C+ controle positivo (extrato); C-:controle negativo (água); 2: ácido palmítico; 3:S-carboximetilcisteína; 4: ácido trans- aconítico; 5: glicose. Concentrações das composições: 2+3, 2+4, 2+5, 3+4, 3+5 = 0,25 g/L (cada composto ativo da composição); 2+3+4, 2+3+5, 2+4+5 = 0,17 g/L cada composto ativo da composição; 2+3+4+5 = 0,125 g/L cada composto ativo da composição. (B) - Avaliação do efeito dos diferentes compostos comerciais e suas composições após o ensaio de recuperação utilizando água destilada. C+ controle positivo (extrato); 2: ácido palmítico; 3:S-carboximetilcisteína; 4: ácido trans-aconítico; 5: glicose. Concentrações das composições: 2+3, 2+4, 2+5, 3+4, 3+5 = 0,25 g/L (cada composto ativo da composição); 2+3+4, 2+3+5, 2+4+5 = 0,17 g/L cada composto ativo da composição; 2+3+4+5 = 0,125 g/L cada composto ativo da composição.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção é resultante de trabalhos de pesquisa realizados no intuito de detectar possíveis compostos nematotóxicos naturais presentes em extratos de plantas. Tais compostos constituem uma alternativa na substituição a agentes sintéticos nematotóxicos que provocam danos à natureza e ao homem. A composição nematotóxica descrita na invenção foi gerada a partir de resultados não esperados obtidos quando da realização de bioensaios de nematotoxicidade utilizando como compostos ativos algumas substâncias detectadas no extrato de plantas. Os resultados destes bioensaios comprovaram a existência de um efeito nematotóxico sinérgico inesperado a partir de combinações entre estes compostos ativos.
Neste contexto, a presente invenção descreve uma composição nematotóxica de efeito sinérgico compreendendo como compostos ativos:
• ácido palmítico,
• ácido trans-aconítico e/ou glicose e,
opcionalmente,
• S-carboximetilcisteína
A composição nematotóxica descrita nesta invenção pode, alternativamente, compreender ingredientes de formulação. A referida composição com ou sem a presença de ingredientes de formulação pode se apresentar na forma de soluções, emulsões, pós umectáveis, suspensões, pós, poeiras, pastas, pós solúveis, grânulos, concentrados de suspensão-emulsão, materiais naturais e sintéticos impregnados com os compostos ativos e microencapsulações em substâncias poliméricas.
Entre os compostos que podem ser utilizados como ingredientes de formulação são incluídos, entre outros, veículos líquidos/solventes líquidos e/ou veículos sólidos e/ou surfactantes e/ou agentes de pegajosidade e/ou corantes. Se o ingrediente de formulação utilizado for água, também é possível empregar solventes auxiliares como, por exemplo, solventes orgânicos.
Entre os veículos líquidos/ solventes líquidos adequados para uso na presente invenção podem-se citar, entre outros, solventes aromáticos, solventes aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados, hidrocarbonetos alifáticos, frações de petróleo, óleos minerais, óleos vegetais, álcoois e seus éteres e ésteres, cetonas, solventes fortemente polares e água.
Preferencialmente, os solventes aromáticos utilizados na invenção são selecionados dentre xileno, tolueno ou alquilnaftalenos. No caso da utilização de solventes aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados na composição da presente invenção, estes são preferencialmente selecionados dentre clorobenzeno, cloroetileno ou diclorometano. Hidrocarbonetos alifáticos são preferencialmente selecionados dentre ciclohexano ou parafinas. No caso alternativo de utilização de álcoois estes são selecionados preferencialmente dentre etanol, propanol, butanol ou glicol. Para o caso da utilização de cetonas estas são preferencialmente selecionadas dentre propanona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclohexanona. Solventes fortemente polares são preferencialmente selecionados dentre dimetilformamida e sulfóxido de dimetila.
Entre os veículos sólidos adequados para uso na presente invenção podem- se citar, entre outros, sais de amónio, minerais naturais moídos e minerais sintéticos moídos.
Preferencialmente, quando utilizados como veículos sólidos, os minerais naturais moídos são selecionados dentre caulins, argilas, talco, giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita e terra diatomácea. Quando da utilização de minerais sintéticos moídos, estes são preferencialmente selecionados dentre sílica, alumina e silicatos. Veículos sólidos adequados são utilizados quando a composição nematotóxica da presente invenção é apresentada na forma de grânulos. Estes veículos sólidos adequados são selecionados, preferencialmente, dentre rochas naturais trituradas, grânulos sintéticos e grânulos de material orgânico.
Alternativamente, surfactantes podem ser empregados como ingredientes de formulação para a composição da presente invenção. Os respectivos surfactantes são selecionados dentre emulsificantes e/ou dispersantes e/ou formadores de espuma. Diferentes emulsificantes/formadores de espuma podem ser utilizados na composição nematotóxica da presente invenção incluindo emulsificantes catiônicos, não iónicos e emulsificantes aniônicos. Quando da utilização de emulsificantes nâo iónicos e aniônicos, estes são preferencialmente selecionados dentre ésteres graxos de polioxietileno, éteres graxos de polioxietileno, alquil sulfonatos, alquil sulfatos, aril sulfonatos, e hidrolisados de proteína. No caso da utilização de dispersantes como surfactantes na presente invenção, estes são selecionados preferencialmente dentre metilcelulose e refugo de lignina sulfito.
Outros ingredientes de formulação também podem, alternativamente, ser empregados na composição da presente invenção. Esses ingredientes incluem, entre outros, agentes de pegajosidade como, por exemplo, carboximetilcelulose e polímeros naturais e sintéticos na forma de pós, grânulos ou látex, como goma arábica, álcool polivinílico e acetato de polivinila. Outros ingredientes também passíveis de serem empregados como ingredientes de formulação são óleos minerais e vegetais, fosfolipídios naturais, como cefalinas e lecitinas, e fosfolipídios sintéticos.
Alternativamente, a composição nematotóxica da presente invenção pode também conter como ingrediente de formulação, corantes tais como pigmentos inorgânicos, como, por exemplo, óxido de ferro, óxido de titânio e azul da prússia e corantes orgânicos como, por exemplo, corantes de alizarina, corantes azo e corantes de ftalocianina metálica. Nutrientes residuais como, por exemplo, sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, molibdênio e zinco também podem, alternativamente, ser utilizados como ingredientes de formulação na composição da presente invenção.
Em uma concretização alternativa da presente invenção a composição nematotóxica de efeito sinérgico pode, ainda, compreender outros compostos ativos. Estes outros compostos ativos quando utilizados, são selecionados dentre inseticidas, atratores, agentes esterilizadores, bactericidas, acaricidas, nematicidas, fungicidas, substâncias reguladoras do crescimento, herbicidas e compostos protetores de herbicidas (safeners). Em outra concretização alternativa da presente invenção, a composição nematotóxica sinérgica é uma composição aquosa compreendendo os compostos ativos. Em uma composição particular preferencial da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico e ácido trans-aconítico nas concentrações de 0,25 g/L cada. Em uma segunda composição particular preferencial da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico e glicose nas concentrações de 0,25 g/L cada. Em uma terceira composição particular preferencial da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico, ácido trans-aconítico e glicose nas concentrações de 0,17 g/L cada. Em uma quarta composição particular preferencial da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico, ácido trans-aconítico e S-carboximetilcisteína nas concentrações de 0,17 g/L cada. Em uma quinta composição particular preferencial da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico, glicose e S-carboximetilcisteína nas concentrações de 0,17 g/L cada. Em uma sexta concretização preferencial
98
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da presente invenção, a composição nematotóxica é uma composição aquosa contendo ácido palmítico, glicose, S-carboximetilcisteína e ácido trans-aconítico nas concentrações de 0, 125 g/L cada.
Também objeto da presente invenção é o uso, da composição nematotóxica de efeito sinérgico descrita anteriormente, para o controle de nematoides em plantas. Particularmente, o referido uso ocorre através da aplicação da composição da invenção na planta e/ou partes da planta e/ou no solo.
A aplicação da composição nematotóxica sinérgica da presente invenção na planta, e/ou partes da planta e/ou no solo pode ser realizada diretamente ou deixando-se os compostos agirem sobre suas vizinhanças, ambiente ou espaço de armazenamento pelos métodos de tratamento comuns como, por exemplo, por imersão, pulverização, evaporação, névoa, espalhamento, etc. Em uma concretização especial da presente invenção o uso da composição nematotóxica de efeito sinérgico descrita neste documento é para o controle de Meloigogyne incógnita.
Experimentos realizados e resultados obtidos:
Inicialmente, extratos aquosos obtidos a partir de sementes de plantas antagonistas foram testados em bioensaios visando à detecção de compostos efetivos contra juvenis de segundo estádio (J2) de . incógnita. Dentre os extratos testados, Canavalia ensiformis, planta da família Leguminosae, originária da América Central, exibiu a mais alta atividade nematicida (85%) (Fig. 1 ). O fracionamento desse material por diálise resultou na separação de moléculas menores que 3,5 kDa (dialisado externo - DE) e maiores que 3,5 kDa (dialisado interno - Dl). Nesse caso, o DE apresentou os resultados mais promissores comparados com o Dl, tais como: a) maior atividade nematotóxica (Fig. 2); b) estabilidade térmica (Fig. 3); c) alta especificidade contra J2 de M. incógnita (Tabela 1 ), d) ausência de atividade contra os fungos (fitopatogênicos Colletotrichum gloeosporioides acesso 1915, Fusarium solani acesso 1624, Macrophomina phaseolina acesso 1496 e Phytophthora tabacum), bactéria (Bacillus subtilis) e larva de inseto (Antonomus grandis e Spodoptera frugiperda) (Tabela 1 ); e) inexistência de atividade contra nematoide de vida livre (Fig. 4); ausência de
efeito citotóxico adverso em células vermelhas de mamíferos (Fig. 5) e g) redução acima de 80% das massas de ovos de M. incógnita em bioensaios conduzidos em casa de vegetação usando plantas de tomate (Fig. 6). Adicionalmente, a visualização por microscopia óptica do efeito causado pelo (s) composto (s) presente (s) no DE de C. ensiformis sobre J2 de M. incógnita revelou a ruptura da anatomina normal (Fig. 7 - A, B, C e D) com a formação de vários vacúolos ao longo do corpo retezado do nematoide. As alterações sugerem a desestruturação de tecidos do intestino do fitoparasita. Tabela 1 - Resultados obtidos nos ensaios de especificidade conduzidos in vitro. . utilizando concentrações diferentes de DE de C. ensiformis contra fungo, bactéria, larvas de inseto e nematoide. Os bioensaios foram realizados em triplicata. A = Fungo, B = Bactéria, C = Larvas de inseto e D = Nematoide.
Patógeno μg de DE de C. ensiformis Atividade
/Bioensaio
•*Colletotrichiim gloeosporioides 250,500, 1000 iDÓcao- Completa ausência de halo
tFusarium solatii 250, 500, 1000 Inócuo - Completa ausência de halo
AMacrophonana phaseoUne 250, 500, 1000 Inócuo - Completa ausência de halo
'Baálhis suMlis 250, 500, 1000 Inócuo - Completa ausência de halo
cA/illiononmsgratidis (Lam) 1000 Inócuo- Desenvolvimento normal
cSpodoptera /higiperda (larva) 1000 Inócuo- Desenvolvimento normal
'Nematoide SaprofMco 500 Inócuo
"Meloidogineincogniia 500 Nemancida A purificação do DE via HPLC utilizando colunas de fase reversa C18 permitiu a separação de três frações nematicidas e duas nematostáticas. Todas as etapas foram monitoradas por bioensaios para a avaliação da atividade nematotóxica (Fig. 8 A, B e C). As frações ativas foram analisadas por Metabolite profiling utilizando-se as técnicas de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS), cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS) e ressonância magnética nuclear (1 H RMN). Os dados gerados por essas tecnologias somados a uma
vasta pesquisa na literatura permitiram a identificação de nove compostos com ação nematotóxica.
Neste contexto, compostos produzidos comercialmente com funções biológicas identificadas após pesquisa na literatura e presentes nas frações nematotóxicas de C. ensiformis foram testados em bioensaio contra juvenis de M. incógnita (Fig. 9A) Solução de glicose contendo 10% (P/V) foi capaz de paralisar a maioria dos nematoides após um período de exposição de 48 horas (Fig. 9A). Depois do ensaio de recuperação, 87% dos J2 restabeleceram a mobilidade confirmando a atividade nematostática para a concentração de glicose aplicada (Fig. 9B). No entanto, soluções de glicose contendo de 20% (P/V) exibiram um efeito nematicida matando mais de 90 % dos J2 após 48 horas de exposição (Fig. 9B). O carboidrato vegetal D- pinitol não exibiu nenhum efeito tóxico após 48 horas de exposição contra J2 de M. incógnita usando concentrações de 80pg/300pL e 150pg/300pl_ respectivamente (Fig. 9A). Similarmente, o amino ácido não protéico L- canavanina também não apresentou nenhuma atividade nematotóxica para concentração de 80pg/300pL após 48 horas de exposição (Fig. 9A). Contudo, quando aumentada à concentração para 150pg/300pL, 25% dos juvenis permaneceram paralisados após o ensaio de recuperação confirmando uma discreta atividade nematicida (Fig. 9B). Dentre os ácidos orgânicos málico, cítrico, cis-aconítico, trans-aconítico e palmítico somente os dois últimos foram capazes de paralizar 90 e 98% dos J2 de M. incógnita para concentração de 80pg/300 L após 48 horas de exposição (Fig. 9A). Os demais ácidos orgânicos paralizaram um percentual muito baixo de J2 para essa mesma concentração e tempo de exposição (Fig. 9A). Para concentração de 150pg/300pL o ácido trans-aconítico apresentou atividade nematicida de 98% enquanto os ácidos málico, cítrico e cis-aconítico exibiram um efeito nematicida de apenas 18, 25 e 40% após o ensaio de recuperação (Fig. 9B). Por outro lado, o ácido palmítico demonstrou um efeito nematostático para ambas as concentrações avaliadas com 90% dos J2 recuperando a mobilidade após o teste de recuperação (Fig. 9B). Estes resultados mostram claramente um efeito dose dependente dos ácidos
orgânicos testados. Os amino ácidos L-fenilalanina e L-triptofano não foram capazes de afetar os J2 utilizando as concentrações de 80pg/300pL e 150pg/300pL respectivamente (Fig. 9A). Inversamente, o composto S- carboximetilcisteína paralisou ao redor de 90% dos juvenis após 48 horas de exposição para ambas as concentrações 80pg/300pL e 50pg/300pL (Figura 9A). Ensaio de recuperação confirmou o efeito nematostático com a maioria dos J2 recobrando a movimentação (Fig. 9B). Xantotoxina paralisou 87% dos J2 após 48 horas de exposição tanto para a concentração de 80pg/300pL quanto para a de 150pg/300pL (Fig. 9A). Os J2 submetidos ao ensaio de recuperação utilizando ambas as concentrações não recuperaram a mobilidade confirmando o efeito nematicida (Fig. 9B).
Visando obter uma composição nematotóxica a partir dos compostos com atividade nematotóxica detectados nos experimentos anteriores, os compostos glicose (5), ácido trans-aconítico (4), S-carboximetilcisteína (3) e ácido palmítico (2) foram testados através da realização de experimentos in vitro em diferentes combinações. Apesar da xantotoxina demonstrar ação nematicida, a mesma não foi selecionada para os referidos testes devido ao elevado custo e a dificuldade da sua síntese química.
As composições contendo combinações de compostos ativos foram testadas através da realização de bioensaios in vitro contra juvenis de M. incógnita. Os compostos ativos utilizados nos experimentos realizados foram obtidos comercialmente.
As composições testadas foram:
a) glicose + S-carboximetilcisteína (0,25 g/L de cada composto) b) glicose + ácido palmítico (0,25 g/L de cada composto)
c) S-carboximetilcisteína + ácido palmítico (0,25 g/L de cada composto) d) S-carboximetilcisteína + ácido trans-aconítico (0,25 g/L de cada composto)
e) ácido palmítico + ácido trans-aconítico (0,25 g/L de cada composto) f) glicose + S-carboximetilcisteína + ácido palmítico (0, 17 g/L de cada composto)
g) glicose + ácido palmítico + ácido trans-aconítico (0, 17 g/L de cada composto)
h) S-carboximetilcisteína + ácido trans-aconítico + ácido palmítico (0, 17 g/L de cada composto)
i) glicose + S-carboximetilcisteína + ácido trans-aconítico + ácido palmítico (0,125 g/L de cada composto)
Os resultados obtidos através dos testes realizados com as composições a) a i) são mostrados nas Figuras 10 (A) e (B) e comentados a seguir.
Como pode ser observado através da Figura 10A, as composições b), e), f), g), h) e i) apresentaram, inesperadamente, efeito nematotoxico sinérgico no que se refere à paralisação dos nematoides quando comparada com a soma dos resultados obtidos individualmente por cada composto ativo. As referidas comparações são mostradas nas Tabelas 2 a 7 a seguir:
Tabela 2 - Efeito nematotoxico sinérgico obtido após testes com a composição b
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
Glicose 0,25 0,71
Ácido palmítico 0,25 33,86
Composição glicose + 0,25 (de cada 76,27
ácido palmítico composto)
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotoxico sinérgico obtido pela composição b) correspondeu a um efeito nematostático.
Tabela 3 - Efeito nematotoxico sinérgico obtido após testes com a composição c
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
Ácido trans-aconítico 0,25 27,08
Ácido palmítico 0,25 33,86 Composição glicose + 0,25 (de cada 99,05
ácido palmítico composto)
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotóxico sinérgico obtido pela composição e) foi um efeito nematostático.
Tabela 4 - Efeito nematotóxico sinérgico obtido após testes com a composição f
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
Glicose 0, 17 0
Ácido palmítico 0, 17 7,66
S-carboximetilcisteína 0, 17 43,03
Composição glicose + ácido 0, 17 (de cada 98,61
palmítico + S- composto)
carboximetilcisteína
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotóxico sinérgico obtido pela composição f) foi um efeito nematostático
Tabela 5 - Efeito nematotóxico sinérgico obtido após testes com a composição g
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
Glicose 0, 17 0
Ácido palmítico 0, 17 7,66
Ácido trans-aconítico 0,17 1 1 , 12
Composição glicose + 0,17 (de cada 60,2
ácido palmítico + ácido composto)
trans-aconítico
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotoxico sinérgico obtido pela composição g) foi um efeito nematostático
Tabela 6 - Efeito nematotoxico sinérgico obtido após testes com a composição h
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
S-carboximetilcisteína 0, 17 43,03
Ácido palmítico 0,17 7,66
Ácido trans-aconítico 0, 17 11 ,12
Composição S- 0,17 (de cada 99,32
carboximetilcisteína + composto)
ácido palmítico + ácido
trans-aconítico
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotoxico sinérgico obtido pela composição h) foi um efeito nematostático
Tabela 7 - Efeito nematotoxico sinérgico obtido após testes com a composição 1
Composto ativo ou Concentração (g/L) % nematoides composição paralisados
S-carboximetilcisteína 0,125 <43,03
Glicose 0,125 0
Ácido trans-aconítico 0,125 < 11 , 12
Ácido palmítico 0,125 <7,66
Composição S- 0,125 (de cada 100
carboximetilcisteína + composto)
ácido palmítico + ácido
trans-aconítico + glicose
A análise dos resultados obtidos nos ensaios de recuperação e mostrados na Figura 10B mostra que o efeito nematotóxico sinérgico obtido pela composição i) foi um efeito nematostático
As composições nematotóxicas a), c), d) cujos resultados dos ensaios in vitro são também mostrados nas Figuras 10A e 10B e não apresentaram efeito nematotóxico sinérgico significativo.
Claims
RÈINVIDICAÇÕES . Composição nematotóxica de efeito sinérgico caracterizada pelo fato de que compreende como compostos ativos:
· ácido palmítico,
• ácido trans-aconítico e/ou glicose e,
opcionalmente,
• S-carboximetilcisteína.
2. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de que compreende ingredientes de formulação.
3. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com as reivindicações 1 ou 2 caracterizada pelo fato de que se apresenta na forma de soluções, emulsões, pós umectáveis, suspensões, pós, poeiras, pastas, pós solúveis, grânulos, concentrados de suspensão-emulsão, materiais naturais e sintéticos impregnados com os compostos ativos e microencapsulações em substâncias poliméricas.
4. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores caracterizada pelo fato de que os ingredientes de formulação são veículos líquidos/solventes líquidos e/ou veículos sólidos e/ou surfactantes e/ou agentes de pegajosidade e/ou corantes.
5. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 4 caracterizada pelo fato de que os veículos líquidos/solventes líquidos são selecionados dentre solventes aromáticos, solventes aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados, hidrocarbonetos alifáticos, frações de petróleo, óleos minerais, óleos vegetais, álcoois e seus éteres e ésteres, cetonas, solventes fortemente polares e água.
6. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que os solventes aromáticos são selecionados dentre xileno, tolueno ou alquilnaftalenos
7. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que os solventes aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados são selecionados dentre clorobenzeno, cloroetileno ou diclorometano.
8. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que os hidrocarbonetos alifáticos são selecionados dentre ciclohexano ou parafinas.
9. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que os álcoois são selecionados dentre etanol, propanol, butanol ou glicol.
10. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que as cetonas são selecionadas dentre propanona, metil etil cetona, metil isobutil cetona ou ciclohexanona.
1 1 . Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 5 caracterizada pelo fato de que os solventes fortemente polares são selecionados dentre dimetilformamida e sulfóxido de dimetila.
12. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 1 1 caracterizada pelo fato de que os veículos sólidos são selecionados dentre sais de amónio, minerais naturais moídos e minerais sintéticos moídos.
13. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 12 caracterizada pelo fato de que os minerais naturais moídos são selecionados dentre caulins, argilas, talco, giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita e terra diatomácea.
14. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 12 caracterizada pelo fato de que os minerais sintéticos moídos são selecionados dentre sílica, alumina e silicatos.
15. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 11 caracterizada pelo fato de que os veículos sólidos para grânulos são selecionados dentre rochas naturais trituradas, grânulos sintéticos e grânulos de material orgânico.
16. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 15 caracterizada pelo fato de que os surfactantes são emulsificantes e/ou dispersantes e/ou formadores de espuma.
17. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 16 caracterizada pelo fato de que os emulsificantes são selecionados dentre emulsificantes catiônicos, não iónicos e aniônicos
18. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 7 caracterizada pelo fato de que os emulsificantes não iónicos e aniônicos são selecionados dentre ésteres graxos de polioxietileno, éteres graxos de polioxietileno, alquil sulfonatos, alquil sulfatos, aril sulfonatos, e hidrolisados de proteína
19. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 16 caracterizada pelo fato de que os dispersantes são selecionados dentre metilcelulose e refugo de lignina sulfito.
20. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 19 caracterizada pelo fato de que os agentes de pegajosidade são selecionados dentre carboximetilcelulose , polímeros naturais e polímeros sintéticos
21. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 20 caracterizada pelo fato de que os corantes são selecionados dentre pigmentos inorgânicos e corantes orgânicos
22. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores caracterizada pelo fato de que compreende outros compostos ativos.
23. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 22 caracterizada pelo fato de que os outros compostos ativos são selecionados dentre inseticidas, atratores, agentes esterilizadores,
bactericidas, acaricidas, nematicidas, fungicidas, substâncias reguladoras do crescimento, herbicidas e compostos protetores de herbicidas (safeners).
24. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição aquosa.
25. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico e ácido trans-aconítico nas concentrações de 0,25 g/L cada.
26. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico e glicose nas concentrações de 0,25 g/L cada.
27. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico, ácido trans-aconítico e glicose nas concentrações de 0, 17 g/L cada.
28. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico, ácido trans-aconítico e S-carboximetilcisteína nas concentrações de 0, 17 g/L cada.
29. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico, glicose e S-carboximetilcisteína nas concentrações de 0, 17 g/L cada.
30. Composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 24 caracterizada pelo fato de que a composição aquosa contém ácido palmítico, ácido trans-aconítico, glicose e S- carboximetilcisteína nas concentrações de 0, 25 g/L cada.
31 . Uso de composição nematotóxica de efeito sinérgico definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 30 caraterizado pelo fato de que é para controlar nematoides em plantas.
32. Uso de composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 31 caracterizada pelo fato de que é aplicado na planta e/ou partes da planta e/ou no solo.
33. Uso de composição nematotóxica de efeito sinérgico de acordo com a reivindicação 31 ou 32 caracterizado pelo fato de que é para controlar
Meloigogyne incógnita.
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