WO2014069692A1 - 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 - Google Patents

선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 Download PDF

Info

Publication number
WO2014069692A1
WO2014069692A1 PCT/KR2012/009065 KR2012009065W WO2014069692A1 WO 2014069692 A1 WO2014069692 A1 WO 2014069692A1 KR 2012009065 W KR2012009065 W KR 2012009065W WO 2014069692 A1 WO2014069692 A1 WO 2014069692A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
composition
extract
kidney cancer
present
renal cancer
Prior art date
Application number
PCT/KR2012/009065
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
황성연
정경채
Original Assignee
주식회사 한국전통의학연구소
사단법인 경북청정약용작물클러스터사업단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 한국전통의학연구소, 사단법인 경북청정약용작물클러스터사업단 filed Critical 주식회사 한국전통의학연구소
Priority to PCT/KR2012/009065 priority Critical patent/WO2014069692A1/ko
Publication of WO2014069692A1 publication Critical patent/WO2014069692A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a novel use of the mussel extract. Specifically, the present invention relates to a therapeutic composition and a functional food containing a capillary extract as an active ingredient exhibiting excellent prophylactic or therapeutic efficacy against kidney cancer.
  • the kidney is an important urinary system that has the role of excreting waste products in vitro by filtering blood to produce urine. At the same time, it is also an important endocrine organ that produces hormones such as angiotensin, which regulates blood pressure, and erythropoietin, a red blood cell hematopoietic factor. Renal tumors include kidney cell cancer in adults, Wilms' tumor in children, and sarcoma as a rare tumor, but the most common malignancy below Renal cell cancer, a tumor, is called kidney cancer. The incidence of renal cancer is about 2.5 per 100,000 population, and male to female ratio is 2 to 3: 1. Among urological malignancies, there are many tumors following prostate cancer and bladder cancer.
  • kidney cancer Genetic factors are also known as risk factors for kidney cancer, but generally include smoking and excessive fat intake. It is also known that the incidence of such tumors is high in patients undergoing long-term dialysis. In kidney cancer, when the tumor has a maximum diameter of 5 cm or less, some subjective symptoms rarely occur and are often found by CT scan or the like at the time of examination. Larger tumors may include hematuria, abdominal tumors, and pain. In addition, systemic symptoms may cause fever, weight loss, anemia and the like, and rarely, endocrine factors may cause erythrocytosis, hypertension, hypercalcemia, and the like.
  • vein veins of the abdominal body surface or venous varicose veins occur due to the progression of kidney cancer into the inferior vena cava.
  • About 20% of kidney cancers are found from lung or bone metastases.
  • tumors tend to spread in veins, and metastasis to other organs is likely to occur.
  • VHL von-Hippel-Lindau
  • the main treatment for kidney cancer is surgical therapy. Regardless of the timing of the disease, extraction of the kidneys or partial extraction of the kidneys is the most common where possible, and even if there is metastasis, surgical removal of the kidneys may be considered.
  • Arterial embolization of the renal artery may be used as a method other than the surgical therapy. This method may be performed prior to surgery in cases where it is impossible to extract or when a large tumor is removed.
  • Recent advances in burn diagnostics have led to early detection of renal cancer, even at very small sizes, resulting in more than 90% healing in early cancer. However, since the therapeutic results of large tumors larger than 5 cm or tumors with metastases are poor (the 5-year survival rate of all renal cell carcinomas is about 50 to 60%), the importance of early detection is recognized.
  • Inulae Flos is a flower of perennial Inula Japonica Thunb. Belonging to the Asteraceae.
  • the diameter is 10-15 mm and has a spherical shape. It is composed of several guns and arranged in a tile shape. It has an unusual smell, tastes sweet and bitter behind.
  • Antidiabetic effects have been reported in scientific studies on condensed extracts (Shan JJ, et al., Anti-diabetic and hypolipidemic effects of aqueous-extract from the flower of Inula japonica in alloxan-induced diabetic mice, Biol. Pharm , Bull., 29, pp 455-459, 2006).
  • Lilac is a medicinal plant traditionally used for the origin of the flowers of Inula japonica Thunberg or Inula britannica Linne.
  • the plant contains about 44% of inulin and contains sterols, fats and essential oils.
  • the essential oils contain allantolactone and isoalanantolactone, quercetin, isoquercetin, caffeic acid, and cholorgenic acid), taraxasterol, and many other types of sterols.
  • oriental medicine the ablation of the abdomen has an earthy effect, expectoration, releasing bronchial spasms, and diuretic effect, resulting in phlegm, gastrointestinal nerve disorders, chest swelling, indigestion, It is widely used for hiccups.
  • Limpning has immunity, anti-inflammatory and antimicrobial activity, and has been used for viral diseases such as hepatitis.
  • various physiological activities have been reported along with the study of volatile components of sunning. Park et al. Reported anticancer activity against colorectal cancer, breast cancer and cervical cancer from Geumbulcho (1. Cha, MR, Kim, JY, Hwang, JH, Park, HR (2006) Cytotoxic activity of the Inula japonica extracts against several human cancer cell line sinvitro.Kor. J. Pharmacogn. 37, 130-135.
  • Qin et al. described four substances with anticancer activity against tumor cell lines (A549, LOVO, CEM, MDA-MB-435).
  • Liquor is also licensed to be used as a limited raw material for foods in the food industry, and can be used as a "raw material” in the manufacture of teas, beverages, liquor, and spices, the composition of which is one of the ingredients.
  • a limited raw material in the manufacture of teas, beverages, liquor, and spices, the composition of which is one of the ingredients.
  • the industrial safety is very high for the use of the safety and regulation as a functional food raw material.
  • the present inventors completed the present invention by confirming that the extracts can effectively kill renal cancer cells during the study of the herbal medicines for the reduction.
  • the present invention provides a composition for the prevention and treatment of kidney cancer comprising the active ingredient extracted from the organic solvent. It is preferable that the said organic solvent is ethanol.
  • the present invention provides a functional food for preventing kidney cancer, containing as a active ingredient a ethanol extract of the ethanol containing a food supplement acceptable food supplement.
  • the present invention provides a composition for the prevention and treatment of kidney cancer containing the ethanol extract of the sun as an active ingredient.
  • the composition of the present invention comprises a capsular extract as an active ingredient, and may further include a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
  • the ethanol extract is preferably extracted at 50 ° C. for 24 hours, wherein the ethanol extract is more preferably dried and concentrated at 45 ° C. under reduced pressure, and the ethanol Is most preferably 95%.
  • the kidney cancer is preferably renal cell cancer.
  • the mucin extract of the present invention is possible at any site of mucus, but is preferably extracted from a flower.
  • the extraction solution may be obtained by extraction with water or an organic solvent, and examples of the organic solvent may include lower alcohols, acetone, chloroform, methylene chloride, ether, ethyl acetate, and hexane.
  • Lower alcohols include methanol, ethanol, propanol and butanol, with ethanol being most preferred.
  • the sun dried product or powder 1 to 5 times, preferably 3 times, 95% ethanol is added to the sun dried product or powder and 10 to 100 hours, preferably 15 at a temperature of 20 to 100 ° C, preferably 40 to 60 ° C.
  • the extract for 24 hours and then filtered to prepare a ethanol extract of the sunning.
  • the filtrate obtained by filtering the extract may be concentrated under reduced pressure.
  • the extraction process may be repeated two or more times as necessary, and the extract obtained after filtration may be lyophilized or dried under reduced pressure to obtain a powder form.
  • the "pharmaceutically acceptable carrier” is a pharmaceutically acceptable substance such as a liquid or solid filler, diluent, excipient or solvent which serves to transport the active ingredient from one organ or part of the body to another organ or part of the body. , Composition or vehicle.
  • the composition for treating kidney cancer of the present invention may be prepared as a medicament by adding one or more pharmaceutically acceptable carriers together with the active ingredient.
  • the carrier may include, but is not limited to, saline, buffered saline, water, glycerol and ethanol, and any suitable agent known in the art (Remingtons's Pharmaceutical Science (Recent Edition), Mack Publishing Company, Easton PA) may be used. .
  • Formulations for pharmacizing the extract of the present invention can be administered orally during clinical administration and can be used in the form of general pharmaceutical formulations, when formulated, commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants And diluents such as surfactants or excipients.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc.
  • liquid preparations for oral use include suspensions, solvents, emulsions, and syrups.
  • various excipients may be included, such as wetting sweeteners, fragrances, preservatives and the like.
  • the herbal medicine that may be added to the composition of the present invention may be any pharmaceutically acceptable herbal medicine, for example, Angelica tenuissimae Radix, Gastrodiae Rhizoma, Bapleuri Radix, Angelica ( Angelicae gigantis Radix, Persicae Semen, Cinnamomi Ramulus, Rhubarb (Rhei Rhizoma), Licorice (Glycyrrhizae Radix), Cnidii Rhizoma, Aurantii nobilis Pericarpium, Taxa (Alismatis Rhizoma) Coptidis Rhizoma, Scutellariae Radix, Hoelen, Peeoniae Radix, Atractylodis Rhizoma alba, Phellodendri Cortex, Gardeniae Fructus, Pinelliae Tuber, Ramulu Set (Uncaria) Uncus, Ponciri Fructus, Ginseng, Gingseng, Liriopis Tuber, Poly
  • composition of the present invention may be administered in various parenteral formulations during actual clinical administration, and solid preparations include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like.
  • solid preparations include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like.
  • excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included.
  • preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • calcium or vitamin D 3 may be added to enhance the efficacy of the treatment.
  • Such compositions may be presented in unit-dose (single) or multi-dose (several) containers, such as sealed ampoules and vials, and immediately before use, sterile liquid carriers such as injectable water. Can be stored under freeze-drying conditions requiring only the addition of. Immediate injection solutions and suspensions can be prepared from sterile powders, granules and tablets.
  • the formulations of the present invention can be applied differently depending on the age, sex, condition of the subject, the absorption of the active ingredient in the body, the inactivation rate and excretion rate, the drug used in combination.
  • the invention also includes formulations of dosage units.
  • the formulations are present in individual dosage forms, such as tablets, coated tablets, capsules, pills, suppositories, and ampoules, wherein the amount of active compound in the drug corresponds to the fraction or multiple of the individual dosage.
  • Dosage units may contain, for example, one, two, three or four times the individual dosage, or 1/2, 1/3 or 1/4 times.
  • the individual dosages preferably contain an amount in which the active compound is administered at one time, which usually corresponds to all, 1/2, 1/3 or 1/4 times the daily dosage.
  • extract refers to an active ingredient isolated from natural products.
  • the extract may be obtained by an extraction process using water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof, and includes an extract, a dry powder thereof, or any form formulated using the same.
  • the ethanol extract of the ablation killed 90.1% of ACHN kidney cancer cells at 100 ⁇ g / ml and the IC 50 (half maximal inhibitory concentration) was 38.8 ⁇ g / ml.
  • the above results demonstrate that the mussel extract of the present invention has excellent killing activity of ACHN renal cancer cells, and further has renal cancer treatment and prophylactic activity.
  • prevention means any action that inhibits or delays the development of kidney cancer by administration of the composition.
  • treatment means any action that improves or advantageously changes the symptoms of kidney cancer by administration of the composition.
  • the sundae extract in the present invention can be extracted and used using water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof. Preferably it is extracted using an organic solvent, in particular ethanol.
  • the extracted solution can be used directly or can be concentrated and / or dried.
  • methanol, ethanol, isopropanol, butanol, ethylene, acetone, hexane, ether, chloroform, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, N, N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), 1,3-butylene glycol, propylene glycol, or a mixed solvent thereof may be used and extracted by room temperature or warming under conditions where the active ingredient of the herbal medicine is not destroyed or minimized.
  • the degree of extraction and loss of the active ingredient of the drug may vary, so select an appropriate organic solvent.
  • the extraction method is not particularly limited, and examples thereof include cold needle extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, and the like.
  • Filtration is a process of removing the suspended solid particles from the extract, it may be used to filter the particles using cotton, nylon or the like, or may be used, such as ultrafiltration, cryofiltration, centrifugal separation, but is not limited thereto.
  • Concentration of the extract may be used, such as concentrated under reduced pressure, reverse osmosis concentration.
  • the drying step after concentration includes freeze drying, vacuum drying, hot air drying, spray drying, reduced pressure drying, foam drying, high frequency drying, infrared drying, and the like. If desired, a process of grinding the final dried extract may be added.
  • the extract can perform an additional fractionation process.
  • the extract is suspended in distilled water to obtain a nonpolar solvent soluble layer by extraction and separation with a nonpolar organic solvent such as hexane, ether, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, or a mixed solvent thereof. It can be used by concentrating and / or drying it.
  • a nonpolar organic solvent such as hexane, ether, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, or a mixed solvent thereof. It can be used by concentrating and / or drying it.
  • the term "pharmaceutically acceptable salts” means salts derived from pharmacologically or physiologically acceptable inorganic acids, organic acids and bases.
  • suitable acid include hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, fumaric acid, maleic acid, phosphoric acid, glycolic acid, lactic acid, salicylic acid, succinic acid, toluene-p-sulfonic acid, tartaric acid, acetic acid, citric acid, methanesulfonic acid, Formic acid, benzoic acid, malonic acid, naphthalene-2-sulfonic acid, benzenesulfonic acid, and the like.
  • Salts derived from suitable bases may include alkali metals such as sodium, alkaline earth metals such as magnesium, ammonium and the like.
  • the pharmaceutical composition for preventing and treating kidney cancer diseases of the present invention comprises 0.1 to 50% by weight of the extract or compound based on the total weight of the composition.
  • the composition does not increase the efficacy, but may include additional ingredients that are commonly used in the pharmaceutical composition to improve the smell, taste, time and the like.
  • the composition adds inorganic and organic additives such as vitamins B1, B2, B6, C, E, niacin, carnitine, betaine, folate pantothenic acid, biotin, zinc, iron, calcium, chromium, magnesium, and mixtures thereof. It can be included as.
  • the composition may include a substance having a therapeutic activity against kidney cancer used alone or used in the past.
  • the term "patient” refers to humans, horses, sheep, pigs, goats, and camels having a disease caused by kidney cancer and its direct and indirect causes, and whose symptoms may be improved by administering the composition of the present invention. Means animals such as nutrition, dogs.
  • a composition comprising the extract of the invention, the above-mentioned kidney cancer can be effectively prevented and treated.
  • the composition of the present invention can be administered in parallel with existing kidney cancer treatments.
  • the term "administration” means introducing a predetermined substance into a patient by any suitable method, and the route of administration of the composition of the present invention is oral or parenteral via any general route as long as the target tissue can be reached. May be administered.
  • the composition may be administered by any device in which the active agent may migrate to the target cell.
  • composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level refers to a patient's sexually transmitted disease, age, severity, and drug activity.
  • the compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. It may be single or multiple doses.
  • the method of administering the composition comprising the extract or compound prepared according to the preparation method of the present invention is preferably oral administration or intravenous administration.
  • the effective dose is oral administration, it is usually 1 to 1 time per adult. 500 mg / kg is preferred, and in the case of intravenous administration, 1 to 100 mg / kg is preferred, and may be administered 2-3 times a day.
  • Dosage levels for a particular patient may vary depending on sex, age, attenuation state, diet, time of administration, method of administration, drug mixture, the condition of the patient and the extent of the onset of neurological disease.
  • the present invention provides a functional food for preventing kidney cancer, containing as a active ingredient a ethanol extract of the ethanol containing a food supplement acceptable food supplement.
  • Functional food of the present invention preferably contains 0.1 to 5% by weight, more preferably 1% by weight of the ethanol extract relative to the total weight.
  • Functional food of the present invention is not particularly limited in the formulation, for example, dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, ice cream, Various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, etc., and includes all of the health food in the usual sense.
  • “functional food” means a food manufactured and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body according to Act No. 6767 of the Health Functional Food Act, and “functional” refers to the structure of the human body And ingestion for the purpose of obtaining nutrients for function or for obtaining useful effects in health uses such as physiological actions.
  • the present invention As a result of injecting the extract of the present invention into ACHN kidney cancer cells, it was confirmed that ACHN kidney cancer cells die (see FIG. 1 ). Therefore, it can be seen that the sundae extract has a renal cancer therapeutic effect.
  • the present invention was completed by preparing a functional food for preventing kidney cancer, which contains the abalone extract as an active ingredient (see Preparation Example 2 ).
  • the ablation extract of the present invention inhibits the growth of kidney cancer cells and induces apoptosis. Therefore, the composition for treating renal cancer according to the present invention will be very effective in the treatment of renal cancer patients.
  • ACHN cells which are human kidney cancer cells
  • the Alamar Blue assay is a modified form of the MTT assay, in which a specific enzyme degrades a living cell and then measures the fluorescence intensity of the product as the compound breaks down to determine the relative number of living cells after treatment. I am an experimental method. It will be described in more detail below.
  • ACHN cells a kidney cancer cell line used in the present invention, were distributed from Korean Cell Line Bank (KCLB) and used for experiments. Specifically, ACHN kidney cancer cells (Minimum essential medium) containing 10% FBS (fetal bovine serum, fetal bovine serum) (Welgene) and 25 mM HEPES (4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid) Subcultured in medium.
  • FBS fetal bovine serum, fetal bovine serum
  • HEPES 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic acid
  • the retrofit extract extracted in Example 1 confirmed the effect of inhibiting growth against ACHN cells, which are kidney cancer cells. Specifically, 6.0 x 10 per well in a 96 well plate 3 Seeds of dog ACHN kidney cancer cells and incubated for 24 hours, the mucosa dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) When the ethanol extract was treated at concentrations of 0 to 100 ⁇ g / ml (specifically, concentrations of 0, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 ⁇ g / ml, respectively) for 48 hours, the degree of inhibition of cell growth was confirmed. (Table 1 and FIG. 1).
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the mucination used in the present invention was widely used as a medicinal herb, so it was judged that there would be no problem in stability, but the oral administration and the intraperitoneal administration were performed by conducting toxicological tests.
  • Acute toxicity test was performed using 6-week-old SPF SD rats. Two animals per group were suspended orally administered at a dose of 5 g / kg in suspension of the capillary extract of Example 1 of the present invention in 0.5% methylcellulose solution, respectively. After administration of the test substance, mortality, clinical symptoms, and changes in body weight were observed. Hematological and hematological examinations were performed. Necropsy was performed to observe abdominal and thoracic organ abnormalities.
  • the present inventors have confirmed that the superior effect of renal extract treatment of kidney extract through the above embodiment was prepared as a kidney cancer treatment containing a natural extract as an active ingredient as follows.
  • the preparation of the following therapeutic agents can be used for the application of not only a therapeutic agent but also a prepared food.
  • the present inventors have confirmed that the sensitized extract is excellent in the renal cancer treatment activity through the above embodiment to prepare a functional food containing it as an active ingredient as follows.
  • Chewing gum was prepared using a conventional method using the composition and content of 20% of gum base, 76.36 to 76.76% of sugar, 0.24 to 0.64% of pear extract, fruit 1%, and 2% of water.
  • Candy was prepared by the conventional method using the composition and content of 50-60% of sugar, 39.26-49.66% of starch syrup, 0.24-0.64% of bokbok extract, and 0.1% of orange flavor.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

본 발명은 선복화 추출물의 신규한 용도에 관한 것으로 신장암에 대해 탁월한 예방 또는 치료 효능을 나타내는 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 치료용 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다. 본 발명의 선복화 추출물은 신장암 세포의 성장을 억제하고 세포사멸을 유도하는 효과가 있어 신장암 치료 및 예방에 효과적으로 사용할 수 있다.

Description

선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
본 발명은 선복화 추출물의 신규한 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 신장암에 대해 탁월한 예방 또는 치료 효능을 나타내는 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 치료용 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다.
현대인의 주요 질환 중에서, 암의 치료방법과 진단방법에 관한 연구는 발병빈도가 높은 폐암, 간암, 위암 등을 중심으로 진행되고 있다.
신장은 혈액을 여과하여 소변을 생성함으로써 생체 내의 노폐물을 체외로 배설하는 역할을 갖는 중요한 비뇨기계 기관이다. 또한, 동시에 혈압을 조절하는 안지오텐신, 적혈구 조혈 인자인 에리스로포이에틴 등의 호르몬을 생산하는 중요한 내분비 기관이기도 하다. 신장에 발생하는 종양에는, 성인에게서 발생하는 신세포암(kindney cell cancer)과 소아에게서 발생하는 윌름스(Wilms) 종양, 및 보기 드문 종양으로서 육종(sarcoma)이 있지만, 이하에서는 가장 발생률이 높은 악성 종양인 신세포암을 신장암이라고 부른다. 신장암의 발생 빈도는 인구 10만명당 2.5명 정도이고, 남녀비는 2 내지 3:1로 남성에게 많은 경향이 있다. 비뇨기과계 악성 종양 중에서는, 전립선암, 방광암에 이어서 많은 종양이다.
신장암의 위험 인자로서는 유전학적 요인도 알려져 있지만, 일반적으로는 흡연, 과도한 지방 섭취 등을 들 수 있다. 또한, 장기간 투석을 받고 있는 환자에게서 상기 종양의 발생률이 높은 것으로 알려져 있다. 신장암에서는 종양의 최대 직경이 5 ㎝ 이하인 경우에는 어떠한 자각 증상이 있는 경우가 드물고, 검진시의 CT 스캔 등에 의해 발견되는 경우가 많다. 크기가 큰 종양에서는 혈뇨, 복부 종양, 동통 등이 나타날 수 있다. 또한, 전신적 증상으로서 발열, 체중 감소, 빈혈 등을 초래하는 경우가 있으며, 드물게는 내분비 인자에 의해 적혈구 증다증이나 고혈압, 고칼슘혈증 등이 발생되는 경우가 있다. 한편, 신장암의 하대정맥 내로의 진전에 의해 복부 체표의 정맥의 노장(怒張)이나 정소 정맥류가 발생하는 경우가 있다. 신장암의 약 2할은, 폐나 골 전이로부터 발견된다. 신장암에서는 정맥 중에 종양이 확산되는 경향이 강하고, 다른 장기로의 전이가 발생하기 쉽다.
신장암의 검사법으로서는 초음파 검사, CT 검사, 혈관 조영 검사 등이 있지만, 특이적인 생화학 마커는 알려져 있지 않기 때문에 기기를 이용한 검진이 필요로 된다. 또한, 신장암은 병리학적으로 몇 개의 분류가 가능하지만, 그 중 약 90 ％를 차지하는 투명 세포형 신장암의 발생 원인은 암 억제 유전자인 VHL(von-Hippel-Lindau) 유전자의 결손인 것으로 알려져 있다. VHL 유전자의 결손은 HIF-α/VHF의 회합 장해를 통해 저산소 유도 유전자군의 전사 활성화를 초래하여, VEGF, TGFβ 등의 유전자의 발현 증강이 발생한다고 알려져 있다.
신장암의 주 치료법은 외과 요법이다. 병의 시기에 관계없이, 적출할 수 있는 경우에는 신장의 적출, 또는 신장의 부분적 적출이 가장 일반적이며, 만일 전이가 있다 하더라도 신장의 외과적 적출이 고려되는 경우가 있다. 외과 요법 이외의 방법으로서는 신동맥의 동맥색전술이 있으며, 이 방법은 적출이 불가능한 경우나, 큰 종양을 적출하는 경우에, 수술에 앞서서 시행되는 경우가 있다. 최근 화상 진단 기술의 발전에 의해 신장암은 매우 작은 크기여도 조기에 발견되도록 되어, 초기 암에서의 치료에서는 90％ 이상이 치유된다. 그러나, 5 ㎝ 이상의 큰 종양이나 전이가 있는 종양의 치료 성과는 빈약하기 때문에(신장 세포암 전체의 5년 생존율은 약 50 내지 60％), 조기 발견의 중요성이 인식되고 있다.
한편, 선복화(Inulae Flos)는 국화과에 속하는 다년생인 금불초(Inula Japonica Thunb.)의 꽃이다. 지름은 10~15 ㎜이고 구형의 모양을 가지고 있다. 여러 개의 총포로 이루어져 기와 모양으로 배열되어 있다. 특이한 냄새가 있고, 맛은 달콤하고 뒤에는 쓰다. 금불초 지상부에는 세스퀴테르펜 락톤(Sesquiterpene lactone)계의 크산타놀라이드(Xanthanolide), 이눌리신(inulicin), 데아세틸이눌리신(deacetylinulicine), 비겔로빈(bigelovin), 에르골라이드(ergolide), 2,3-디하이드로아로마티신(2,3-dihydroaromaticin) 등을 가지고 있으며, 플라보노이드 계의 파툴레틴7-Ο-(6''-이소부티릴)글루코사이드[patuletin 7-Ο-(6''-isobutyryl) glucoside], 이소라미네틴 3-글루코사이드(isorhaminetin 3-glucoside), 파툴리트린(patulitrin) 등을 가지고 있다(정보섭 및 신민교 저, 도해향약 (생약)대사전, 영림사, pp 1054-1056, 1998). 선복화 추출물에 대한 과학적인 연구결과로서는 항당뇨병 효능이 보고되었다(Shan JJ, et al., Anti-diabetic and hypolipidemic effects of aqueous-extract from the flower of Inula japonica in alloxan-induced diabetic mice, Biol. Pharm, Bull., 29, pp 455-459, 2006).
선복화는 전통적으로 약용으로 사용된 식물이며, 금불초(Inula japonica Thunberg) 또는 구아선복화(Inula britannica Linne)의 꽃을 기원으로 하고 있다. 이 식물에는 이눌린이 44% 정도 함유되어 있으며, 스테롤, 지방과 정유가 함유되어 있다. 정유의 성분에 알란토락톤(alantolactone)과 이소알란토락톤(isoalantolactone)이 함유되어 있으며, 쿠에르세틴(quercetin), 이소쿠에르세틴(isoquercetin), 카페산(caffeic acid), 콜로르겐산(cholorgenic acid), 타락사스테롤(taraxasterol) 등 많은 종류의 스테롤이 함유되어 있다. 한의학에서는 선복화가 진토(鎭吐)작용, 거담(祛痰) 작용을 가지고 있으며, 기관지 경련을 풀어주고, 이뇨 작용이 있어, 가래가 나오는 증상이나 위장신경기능 문란증, 흉복부 창만, 소화불량, 딸국질 등에 널리 사용한다.
선복화는 면역, 항염, 항균 활성을 가지고 있으며, 간염과 같은 바이러스 질환에도 사용되어 왔다. 한편 선복화의 휘발성 성분 연구와 더불어 다양한 생리활성에 대해 보고되었다. 박 등은 금불초로부터 대장암, 유방암 및 자궁경부암에 대한 항암활성을 보고하였으며(1. Cha, M. R., Kim, J. Y., Hwang, J. H., Park, H. R. (2006) Cytotoxic activity of the Inula japonica extracts against several human cancer cell line sinvitro. Kor.J.Pharmacogn.37, 130-135.), 퀸(Qin) 등은 종양 세포주(A549, LOVO, CEM, MDA-MB-435)에 대하여 항암작용을 지닌 4개의 물질을 분리했다(1. Qin, J. J., Jin, H. Z., Fu, J. J., Hu, X. J., Zhu, Y., Yan, S. K., Zhang, W. D. (2009) Japonicones A-D, bioactive dimeric sesquiterpenes from Inula japonica Thunb..Bioorg.Med.Chem.Lett.19, 710-713.). 또한 유 등은 항 우울 효과가 있는 플라보놀을 분리하였다(Yu, N. J., Zhao, Y. M., Zhang, Y. Z., Li, Y. F. (2006) Japonicins A and B from the flowers of Inulajaponica.J.AsianNat.Prod.Res.8,385-390). 또한 장 등은 금불초로부터 안트라닐산 유도체들을 분리하였다(1. Qin, J. J., Jin, H. Z., Fu, J. J., Hu, X. J., Zhu, Y., Shen, Y. H., Yan, S. K., Zhang, W. D. (2008) Anthranilic acid derivatives from Inula japonica. Chin.Chem.Lett.19, 556-558.).
또한, 선복화는 식품공전 상 식품의 제한적 사용 원료로서 사용할 수 있도록 허가되어 있어, 제품의 구성 원료가 선복화 한 가지인 다류, 음료수, 주류 및 향신료 제조 시에는 "원료"로 사용할 수 있으며, 다른 원료와 혼합시에는 "제한적 사용 원료"에 속하여, 50% 미만까지 원료에 배합하여 사용할 수 있다. 따라서, 선복화의 안전성과 규정이 기능성 식품 원료로 사용하는데 있어 산업적 유용성이 매우 크다고 할 수 있다.
그러나, 선복화의 신장암 관련 질환과 관련하여 상기 문헌 어디에도 개시되거나 공개된 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 선복화에 대한 생약 연구를 하던 중, 선복화 추출물이 신장암 세포를 효과적으로 사멸시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 치료용 조성물 및 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 선복화를 유기용매로 추출한 유효성분을 포함하는 신장암 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 상기 유기 용매는 에탄올인 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 선복화 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 예방용 기능성 식품을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 선복화 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 활성성분으로서 선복화 추출물을 포함하며, 추가적으로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 발명의 신장암 예방 및 치료용 조성물에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 50℃에서 24시간 동안 추출되는 것이 바람직하고, 이때 상기 에탄올 추출물은 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축되는 것이 보다 바람직하며, 상기 에탄올은 95%인 것이 가장 바람직하다.
또한, 본 발명의 신장암 예방 및 치료용 조성물에 있어서, 상기 신장암은 신세포암(kindney cell cancer)인 것이 바람직하다.
본 발명의 선복화 추출물은 선복화의 어느 부위에서도 가능하지만, 바람직하게는 꽃으로부터 추출되는 것이 바람직하다. 그리고 추출용액은 물 또는 유기용매로 추출하여 얻을 수 있는데, 유기용매로는 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 헥산 등을 예시할 수 있다. 저급알콜로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 예시할 수 있으며, 에탄올이 가장 바람직하다.
구체적으로, 선복화 건조물 또는 분말에 1 내지 5 배, 바람직하게는 3배의 95% 에탄올을 첨가하고 20 내지 100℃, 바람직하게는 40 내지 60℃의 온도에서 10 내지 100시간, 바람직하게는 15 내지 40시간, 더욱 바람직하게는 24시간 동안 추출한 후 여과하여 선복화의 에탄올 추출물을 제조할 수 있다. 바람직하게는 상기 추출액을 여과하여 얻어진 여액을 감압농축하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법들에서 추출 공정은 필요에 따라 2회 이상 반복하여 실시할 수 있으며, 여과 후 얻어진 추출물을 동결 건조 또는 감압건조시켜 분말 형태로 만들 수도 있다.
상기 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 신체의 한 기관 또는 부분으로부터 신체의 다른 기관 또는 부분으로 활성 성분을 수송하는 역할을 하는 액체 또는 고체 충진제, 희석제, 부형제 또는 용매와 같은 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 운반체(vehicle)를 의미한다.
본 발명의 신장암 치료용 조성물은 유효성분과 함께 추가로 약제학적으로 허용되는 1종 이상의 담체를 첨가하여 약제로 제조할 수 있다. 상기 담체로는 식염수, 완충 식염수, 물, 글리세롤 및 에탄올 등이 있으나 이에 한정되지 않으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제(Remingtons's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)를 모두 사용 가능하다.
본 발명의 선복화 추출물을 약제화하기 위한 제제는 임상 투여시에 경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물에 추가될 수 있는 생약재는 약학적으로 허용되는 임의의 생약재일 수 있으며, 예를 들면, 고본(Angelicae tenuissimae Radix), 천마(Gastrodiae Rhizoma), 시호(Bapleuri Radix), 당귀(Angelicae gigantis Radix), 도인(Persicae Semen), 계지(Cinnamomi Ramulus), 대황(Rhei Rhizoma), 감초(Glycyrrhizae Radix), 천궁(Cnidii Rhizoma), 진피(Aurantii nobilis Pericarpium), 택사(Alismatis Rhizoma), 황련(Coptidis Rhizoma), 황금(Scutellariae Radix), 복령(Hoelen), 작약(Paeoniae Radix), 백출(Atractylodis Rhizoma alba), 황백(Phellodendri Cortex), 치자(Gardeniae Fructus), 반하(Pinelliae Tuber), 조구등(Uncaria Ramuluset Uncus), 지실(Ponciri Fructus), 인삼(Gingseng), 맥문동(Liriopis Tuber), 원지(Polygalae Radix), 석창포(Acori graminei Rhizoma), 창출(Atractylodis Rhizoma alba), 감국(Chrysanthemi Flos), 방풍(Ledebouriellae Radix), 생강(Zingiberis Rhizoma crudus), 망초(Natrii sulfas), 대조(Zizyphi Fructus), 단삼(Salviae Radix), 목단피(Mautan Radicis Cortex), 지황(Rehmanniae Radix), 박하(Menthae Herba), 산약(Dioscoreae Rhizoma), 저령(Polyporus), 하수오(Polygonimultiflori Radix), 구자(Allii tuberosi Semen), 결명자(Cassiae Semen), 구기자(Lycii Fructus), 독활(Araliae cordatae Radix), 두충(Eucommiae Cortex), 선복화(Hedyotis Herba), 삼백초(Saururus Herba), 인진(Artemisiaecapillaris Herba), 지모(Anemarrhenae Rhizoma), 홍화(Carthami Flos), 황기(Astragali Radix), 석송자(Lycopodium), 은행잎(Ginkgonis Folium), 황정(Polygonati Rhizoma), 연자육(Nelumbinis Semen), 용골(Fossilia ossis Mastodi), 지골피(Lycii radicis Cortex), 우슬(Achyranthis Radix), 숙지황(Rehmanniae Radix preparata), 흑임자(Perillae Semen), 백자인(Thujae Semen), 맥아(Hordei Fructus germinatus), 토사자(Cuscutae Semen), 파극천(Morindae Radix), 해송(Pini koraiensis Radix) 등을 단독으로 또는 배합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 실제 임상 투여시에 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 구체적으로, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 또한 치료제의 효능 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3를 첨가할 수 있다. 이러한 조성물은 단위-용량(1회분) 또는 다중-용량(수 회분) 용기, 예를 들면, 밀봉된 앰풀 및 바이알에 제시될 수 있고, 사용 직전에 멸균성 액상 담체, 예를 들면, 주사용 수의 부가 만을 요구하는 동결-건조 조건 하에 저장할 수 있다. 즉석의 주사 용제 및 현탁제는 멸균성 산제, 과립제 및 정제로부터 제조할 수 있다.
본 발명의 제제는 대상의 연령, 성별, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 병용되는 약물에 따라 달리 적용될 수 있다. 본 발명은 또한 투약 단위의 제형들을 포함한다. 제형은 개별 투약 형태, 예를 들면 정제, 피복 정제, 캡슐제, 환제, 좌약 및 앰플제로 존재하고, 약제 중 유효 화합물의 함량은 개별 투약량의 분율 또는 배수에 해당한다. 투약 단위는, 예를 들면 개별 투여량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투여량은 바람직하기로는 유효 화합물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명에서 용어, "추출물(extract)"은 천연물로부터 분리된 활성성분을 의미한다. 추출물은 물, 유기용매, 또는 이의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있으며, 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다.
본 발명의 구체적인 실시에서, 선복화의 에탄올 추출물은 ACHN 신장암 세포를 100 ㎍/㎖에서 90.1% 사멸시키고, IC50(half maximal inhibitory concentration)은 38.8 ㎍/㎖이었다. 상기 결과는 본 발명의 선복화 추출물이 우수한 ACHN 신장암 세포의 사멸 활성을 가지며, 나아가 신장암 치료 및 예방 활성을 가진다는 것을 입증하는 것이다.
본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여로 신장암 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여로 신장암의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 선복화 추출물은 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 유기 용매, 특히 에탄올을 사용하여 추출한다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
추출액의 농축에는 감압농축, 역삼투압 농축 등의 방법이 사용될 수 있다. 농축 후 건조 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다.
또한, 상기 추출물은 추가의 분획 공정을 수행할 수 있다. 바람직하게는 상기 추출물을 증류수에 현탁시켜 비극성 유기 용매, 예를 들어, 헥산, 에테로, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이드 또는 이들의 혼합 용매로 비극성용매 가용층을 추출, 분리하여 수득하도록 하고, 이를 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한 염"이란 약리학적 또는 생리학적으로 허용되는 무기산, 유기산 및 염기로부터 유도된 염을 의미한다. 적합산 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 포함할 수 있다. 적합한 염기로부터 유도된 염은 알칼리 금속, 예들 들어, 나트륨, 알칼리토금속, 예들 들어, 마그네슘, 암모늄 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 신장암 질환 예방 및 치료용 약학조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다. 또한, 상기 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약재 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가성분을 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 비타민 B1, B2, B6, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘, 이들의 혼합물 등의 무기, 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 단독 사용하거나 기존 사용되어진 신장암에 대한 치료 활성을 가지는 물질을 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어, "환자"는 신장암 및 이의 직, 간접적 원인에 의해 유발된 질환을 가지고, 본 발명의 조성물을 투여에 의하여 증상이 호전될 수 있는 인간과 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개 등의 동물을 의미한다. 본 발명의 선복화 추출물을 포함하는 조성물을 환자에게 투여함으로써, 상기에서 언급한 신장암을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물을 기존의 신장암 치료제와 병행하여 투여할 수 있다.
본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 용어, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성병, 연령, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 추출물 또는 화합물을 포함하는 조성물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하고, 일반적으로 그 유효 용량은 경구투여인 경우에는 보통 성인을 기준으로 1회에 1 내지 500 ㎎/㎏이 바람직하며, 정맥투여인 경우에는 1 내지 100 ㎎/㎏이 바람직하며, 하루 2-3 회 투여될 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 선복화상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 약제혼합, 환자의 상태 및 신경 질환의 발병 정도에 따라 변화될 수 있다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 선복화 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 예방용 기능성 식품을 제공한다.
본 발명의 기능성 식품은 에탄올 추출물을 총중량에 대해 0.1 내지 5중량% 포함하는 것이 바람직하며, 1중량%로 포함하는 것이 더욱 바람직하다. 본 발명의 기능성 식품은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바는 없으며, 예를 들어 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명에서는 ACHN 신장암 세포에 본 발명의 선복화 추출물을 투입한 결과, ACHN 신장암 세포가 사멸하는 것을 확인하였다(도 1 참조). 따라서, 선복화 추출물이 신장암 치료 효과가 있다는 것을 새롭게 알 수 있다. 이에, 본 발명에서는 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 예방용 기능성 식품을 제조함으로써 본 발명을 완성하였다(제조예 2 참조)
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 선복화 추출물은 신장암 세포의 성장을 억제하고 세포사멸을 유도한다. 따라서 본 발명에 따른 신장암 치료용 조성물은 신장암 환자의 치료에 매우 효과적일 것이다.
도 1은 인간 신장암 세포인 ACHN 세포에서 선복화의 도입이 신장암 세포의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위한 Alamar Blue 분석 결과이고, 이때 X축은 선복화 추출물의 농도이고, Y축은 생존한 인간 신장암 세포의 생존율을 나타낸다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
<실시예 1> 선복화 추출물의 제조
서울 약재상에서 구입한 선복화(중국산) 3 ㎏을 실온에서 5일간 건조하고 분쇄하였다. 상기 분쇄된 선복화를 95% 에탄올(ethanol) 30 ℓ에 침지시키고 50℃에서 24시간 동안 추출하였다. 이것을 여과지를 통하여 여과한 후 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축하여 총 추출물 321 g을 수득하고, -20℃에서 보관하였다.
<실시예 2> 선복화 추출물이 신장암 세포의 성장에 미치는 영향
상기 실시예 1에서 추출한 선복화 추출물이 신장암 세포의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 인간 신장암 세포인 ACHN 세포에 선복화의 에탄올 추출물을 48시간 처리하고 Alamar Blue 분석을 시행하였다. Alamar Blue 분석은 MTT 분석의 변형된 형태인데, 특정 효소에 의해서 분해되는 화합물을 살아있는 세포에 처리한 후 화합물이 분해되면서 나오는 생성물의 형광 세기를 측정함으로써 약물을 처리한 후 살아있는 세포의 상대적인 숫자를 알아내는 실험방법이다. 하기에서 보다 상세히 설명한다.
<2-1> 인간 신장암 세포주의 준비 및 처리
본 발명에 사용된 신장암 세포주인 ACHN 세포는 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)으로부터 분양받아 실험에 이용하였다. 구체적으로, ACHN 신장암 세포를 10% FBS(fetal bovine serum, 소태아혈청)(Welgene)와 25 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)를 포함하는 MEM(Minimum essential medium) 배지에서 계대배양하였다.
<2-2> ACHN 신장암 세포의 세포 성장 억제 측정
상기 실시예 1에서 추출한 선복화 추출물이 신장암 세포인 ACHN 세포에 대하여 성장을 억제시키는 효과를 확인하였다. 구체적으로, 96 웰 플레이트에 각 웰 당 6.0 X 103 개의 ACHN 신장암 세포를 주입(seeding)하고 24시간 동안 배양한 후, DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 녹인 상기 선복화 에탄올 추출물을 각각 0 내지 100 ㎍/㎖ 농도(구체적으로, 각각 0, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100 ㎍/㎖ 농도)로 48시간 동안 처리하였을 때, 세포 성장을 저해하는 정도를 확인하였다(표 1 및 도 1). 각 농도의 추출물을 처리한 후, 96-웰 플레이트에서 각 웰에 채워진 0.2 ㎖의 세포 배양액에 20 ㎕의 Alamar Blue 시약을 첨가한 후 플레이트를 인큐베이터에서 2시간 동안 배양하였다. 각 웰의 세포를 고르게 반응시키기 위하여 플레이트를 천천히 흔들고, 544 ㎚의 파장에서 조사광을 조사하면서 590 ㎚에서 형광의 세기를 형광광도계(Fluorescence Microplate Reader; Molecular Devices Corp.)로 측정하였고, 신장암 세포의 생존율을 도 1에 나타내었다.
표 1
선복화 농도 신장암 세포 생존율 (평균) 표준편차
0 ㎍/㎖ 1.000 0.000
3.125 ㎍/㎖ 1.122 0.046
6.25 ㎍/㎖ 1.106 0.019
12.5 ㎍/㎖ 0.899 0.068
25 ㎍/㎖ 0.665 0.012
50 ㎍/㎖ 0.414 0.051
100 ㎍/㎖ 0.099 0.006
그 결과, 표 1 및 도 1에서 나타난 바와 같이, 선복화의 처리 농도가 높을수록 신장암 세포의 성장이 감소하였으며, 이로부터 선복화가 신장암 치료 효과를 가짐을 알 수 있었다. 즉, 12.5 ㎍/㎖에서 10.1%, 25 ㎍/㎖에서 33.5%, 50 ㎍/㎖에서 58.6%, 100 ㎍/㎖에서 90.1%로 신장암 세포를 사멸시켰다. 아울러, IC50(half maximal inhibitory concentration)은 38.8 ㎍/㎖로 측정되었다. 상기 표 1에서 선복화를 처리하지 않은 대조군의 신장암 세포의 생존율 수를 1을 기준으로 하여 각각의 선복화 처리 농도에 따른 48시간 후의 신장암 세포의 상대적 세포수를 기재하였다. 이와 같이, 본 발명의 선복화 추출물은 우수한 ACHN 세포 사멸 활성을 가지며, 나아가 신장암 치료 및 예방 활성을 가진다는 것을 입증한다.
<실시예 3> 선복화 추출물에 의한 급성독성 시험
본 발명에 이용된 선복화는 널리 약재로 이용되고 있어서 안정성에 문제가 없을 것으로 판단하였으나, 경구 투여시 및 복강내 투여시의 독성 실험을 수행하여 이를 확인하고자 하였다.
6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 본 발명의 실시예 1의 선복화 추출물을 각각 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 5 g/㎏의 용량으로 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.
시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과 선복화 추출물은 모두 랫트에서 5 g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소치사량 (LD50)은 5 g/㎏이상인 안전한 물질로 판단되었다.
<제조예 1> 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 치료제의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 선복화 추출물의 신장암 치료 효능이 뛰어남을 확인하여 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 치료제를 하기와 같이 제조하였다. 또한, 하기 치료제의 제조예는 치료제 뿐만 아니라 선복화 식품의 제조에도 응용하여 사용될 수 있다.
<1-1> 선복화 추출물을 함유하는 연질캅셀(soft gelatin capsules)
선복화 추출물 20%, 비타민 C 4.5%, 비타민 D3 0.001%, 황산망간0.1%, 밀납10%, 팜유25%, 홍화씨유30.399%
<1-2> 선복화 추출물을 함유하는 정맥주사용 제제의 제조
선복화 추출물0.2%, 만니톨0.3%, 생리식염수9.5%
<1-3> 선복화 추출물을 함유하는 정제(tablet)
선복화 추출물 35%, 비타민 C 10%, 비타민 D3 0.001%, 황산망간 0.1%, 결정셀룰로오즈 25.0%, 유당 17.999%, 스테아린산마그네슘 2%
<제조예 2> 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 선복화 추출물이 신장암 치료 활성이 뛰어남을 확인하여 이를 유효성분으로 함유하는 기능성 식품을 하기와 같이 제조하였다.
<2-1> 음료의 제조
꿀 522 ㎎, 치옥토산아미드 5 ㎎, 니코틴산아미드 10 ㎎, 염산리보플라빈나트륨 3 ㎎, 염산피리독신 2 ㎎, 이노시톨 30 ㎎, 오르트산 50 ㎎, 선복화 추출물 0.48 ~ 1.28 ㎎, 물 200 ㎖의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<2-2> 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %, 설탕 76.36 ~ 76.76 %, 선복화 추출물 0.24 ~ 0.64 %, 후르츠향 1 %, 물 2 %의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
<2-3> 캔디의 제조
설탕 50 ~ 60 %, 물엿 39.26 ~ 49.66 %, 선복화 추출물 0.24 ~ 0.64 %, 오렌지향 0.1 %의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
<2-4> 비스켓의 제조
박력1급 88 ㎏, 중력1급 76.4 ㎏, 정백당 16.5 ㎏, 식염 2.5 ㎏, 포도당 2.7 ㎏, 팜쇼트닝 40.5 ㎏, 암모 5.3 ㎏, 중조 0.6 ㎏, 중아황산나트륨 0.55 ㎏, 쌀가루 5.0 ㎏, 비타민 B1 0.003 ㎏, 비타민 B2 0.003 ㎏, 밀크향 0.16 ㎏, 물 71.1 ㎏, 전지분유 4 ㎏, 대용분유 1 ㎏, 제일인산칼슘 0.1 ㎏, 살포염 1 ㎏, 분무유 25 ㎏, 선복화 추출물 0.2 ~ 0.5 ㎏의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 비스켓을 제조하였다.
<2-5> 아이스크림의 제조
유지방 10.0 %, 무지유고형분 10.8 %, 설탕 12.0 %, 물엿 3.0 %, 유화안정제(스팬, span) 0.5 %, 향료(스트로베리) 0.15 %, 물 63.31 ~ 62.91 %, 선복화 추출물 0.24 ~ 0.64 %의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 아이스크림을 제조하였다.
<2-6> 쵸코렛의 제조
설탕 34.36 ~ 34.76 %, 코코아 버터 34 %, 코코아 매스 15 %, 코코아 파우다 15 %, 레시틴 0.5 %, 바닐라향 0.5 %, 선복화 추출물 0.24 ~ 0.64 %의 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 초코렛을 제조하였다.
한편, 본 발명의 구체적 범위는 상기 기술한 실시예 보다는 특허청구범위에 의하여 한정지어지며, 특허청구 범위의 의미와 범위 및 그 등가적 개념으로 도출되는 모든 변경 및 변형된 형태를 본 발명의 범위로 포함하여 해석하여야 한다.

Claims (7)

  1. 선복화를 유기 용매로 추출한 유효성분을 포함하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 유기 용매는 에탄올인 것을 특징으로하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 에탄올로 추출한 유효성분은 50℃에서 24시간 동안 추출되는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축되는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  5. 제 1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  6. 제 1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신장암은 신세포암(kindney cell cancer)인 것을 특징으로 하는 신장암 예방 및 치료용 조성물.
  7. 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 선복화 추출물을 유효성분으로 함유하는 신장암 예방용 기능성 식품.
PCT/KR2012/009065 2012-10-31 2012-10-31 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 WO2014069692A1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2012/009065 WO2014069692A1 (ko) 2012-10-31 2012-10-31 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2012/009065 WO2014069692A1 (ko) 2012-10-31 2012-10-31 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014069692A1 true WO2014069692A1 (ko) 2014-05-08

Family

ID=50627582

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2012/009065 WO2014069692A1 (ko) 2012-10-31 2012-10-31 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2014069692A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220010644A (ko) * 2020-07-16 2022-01-26 스타링포스 주식회사 2α-하이드록시유데스마-4,11(13)-디엔-8β,12-올라이드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040052881A1 (en) * 2001-02-21 2004-03-18 Chi-Tang Ho Compositions and methods for cancer prevention and treatment derived from Inula britannica
KR20120020637A (ko) * 2010-08-30 2012-03-08 주식회사한국전통의학연구소 선복화를 포함하는 전립선암 치료용 조성물
KR20120092271A (ko) * 2011-02-11 2012-08-21 주식회사한국전통의학연구소 선복화 추출물을 포함하는 뇌암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120109785A (ko) * 2011-03-28 2012-10-09 주식회사한국전통의학연구소 선복화 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040052881A1 (en) * 2001-02-21 2004-03-18 Chi-Tang Ho Compositions and methods for cancer prevention and treatment derived from Inula britannica
KR20120020637A (ko) * 2010-08-30 2012-03-08 주식회사한국전통의학연구소 선복화를 포함하는 전립선암 치료용 조성물
KR20120092271A (ko) * 2011-02-11 2012-08-21 주식회사한국전통의학연구소 선복화 추출물을 포함하는 뇌암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120109785A (ko) * 2011-03-28 2012-10-09 주식회사한국전통의학연구소 선복화 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RAFI. M. M. ET AL.: "A sesquiterpenelactone from Inula britannica induces anti-tumor effects dependent on Bcl-2 phosphorylation", ANTICANCER RESEARCH, vol. 25, 2005, pages 313 - 318 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220010644A (ko) * 2020-07-16 2022-01-26 스타링포스 주식회사 2α-하이드록시유데스마-4,11(13)-디엔-8β,12-올라이드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102463930B1 (ko) 2020-07-16 2022-11-10 스타링포스 주식회사 2α-하이드록시유데스마-4,11(13)-디엔-8β,12-올라이드를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2012134169A2 (ko) 조각인 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2012134252A2 (ko) 마자인 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120109785A (ko) 선복화 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014069692A1 (ko) 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2012134250A2 (ko) 감송향 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 화장료 조성물
KR102054437B1 (ko) 조각인 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120122437A (ko) 선복화 추출물을 포함하는 췌장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2013147340A1 (ko) 유향 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014069695A1 (ko) 유향 추출물을 포함하는 췌장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2012134167A2 (ko) 비파엽 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120109790A (ko) 유향 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120122413A (ko) 선복화 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014069686A1 (ko) 괄루근 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014069689A1 (ko) 목향 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2012134251A2 (ko) 감송향 추출물을 포함하는 췌장암 치료용 조성물 및 화장료 조성물
WO2014069691A1 (ko) 사상자 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120111122A (ko) 대계근 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014069690A1 (ko) 백화사설초 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014077433A1 (ko) 조각인 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2012134164A2 (ko) 관동화 추출물을 포함하는 폐암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120122404A (ko) 괄루근 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR20120111121A (ko) 구절초 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
WO2014077437A1 (ko) 흑축 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품
KR101385658B1 (ko) 익지인 추출물을 포함하는 전립선암 치료용 조성물 및 기능성 식품
KR20120122415A (ko) 오배자 추출물을 포함하는 신장암 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12887737

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12887737

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1