WO2014000722A1 - Device for biochemically marking tissues and cell cultures and the use thereof - Google Patents

Device for biochemically marking tissues and cell cultures and the use thereof Download PDF

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WO2014000722A1
WO2014000722A1 PCT/DE2013/000310 DE2013000310W WO2014000722A1 WO 2014000722 A1 WO2014000722 A1 WO 2014000722A1 DE 2013000310 W DE2013000310 W DE 2013000310W WO 2014000722 A1 WO2014000722 A1 WO 2014000722A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
tub
trough
cell cultures
tissues
tilting
Prior art date
Application number
PCT/DE2013/000310
Other languages
German (de)
French (fr)
Inventor
Markus Cremer
Karl-Heinz Beyer
Original Assignee
Forschungszentrum Jülich GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Forschungszentrum Jülich GmbH filed Critical Forschungszentrum Jülich GmbH
Publication of WO2014000722A1 publication Critical patent/WO2014000722A1/en

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Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N1/31—Apparatus therefor
    • G01N1/312—Apparatus therefor for samples mounted on planar substrates

Definitions

  • the invention relates to a device for biochemical labeling of tissues and cell cultures and their use.
  • the tissue samples or the brain slices are applied to slides, which are usually mounted vertically in holding devices. In this case, several slides can be fixed with samples in a holder.
  • solutions are, for example, buffer solutions, dye solutions or solutions which contain radioactive markers which are brought into contact with the tissue samples, for example brain slices. This work is done manually.
  • the core of the device consists of a tub for receiving tissues, which is equipped with means for tilting the tub.
  • the tissues are preferably on slides.
  • the means for tilting the tub may be a tilting table or a rack which receives the tub.
  • the means for tilting the tub are equipped with a motor which allows tilting of the tub.
  • the lines are each in connection with storage containers, which store liquids for the respective process steps.
  • storage containers which store liquids for the respective process steps.
  • n reservoirs which receive the necessary solutions, n being able to assume, for example, a value of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12. Accordingly, the same number n is provided on lines that connect the tub with the reservoirs.
  • valves are provided which allows regulation of the inflow of liquids.
  • the valves may be positioned in the conduit, at the reservoirs and / or at the entrances to the trough.
  • the pumps are not required, but advantageous because it can be well dosed. Through the dosage, currents in the tub can be better controlled.
  • the inlet channel is arranged substantially perpendicular to the liquid flow, which is passed into the trough. It is preferably arranged to direct the liquid from the reservoirs into the side region of the trough so that the liquid flow does not run directly over the cuts and any shearing forces that may occur are reduced.
  • cover plate over the slides that can prevent evaporation of liquid.
  • a liquid discharge is further attached, for example in the form of a drain valve, which is preferably located on the opposite side of the tub lines.
  • the tub is on a tempering, which is located on the means for tilting the tub.
  • the tempering can also be integrated in the bottom of the tub.
  • the tempering element may be a metal block or a metal plate.
  • the tempering element can be equipped with cooling and heating coils, which are connected via lines with thermostats. In this case, different thermostats can be operated independently of each other in the tempering, which are connected to different thermostats that keep different temperatures constant.
  • the temperature control coils are connected via lines with valves to the respective thermostat, so that optionally different temperature control circuits can be activated.
  • a temperature control for example, water, a water-glycerin mixture or commercially available coolant into consideration.
  • a cover plate for example made of Plexiglas, which protects the tissue samples or sections from external influences and prevents evaporation of the liquids used during the exposure time, can be located above the tub.
  • a lifting device can be mounted above the trough, which allows the insertion and removal of tissues or slides with tissues, brain slices or cell cultures in order to protect the possibly unfixed examination material from damage by the liquid jet.
  • the lifting device can be, for example, a plate or a grid on which the samples are located and which are connected with cables or chains which can be conveyed up and down by means of a motor via a thread.
  • the device according to the invention can be equipped with a blower or fan, which allows drying of the marked samples.
  • the means for tilting the tub, the valves that regulate the flow of liquids from the reservoirs, the drain valve and the thermostats or individual components from this group are connected to a controller, in which the respective timing of the influx of liquids from each container , the timing of the tilting of the tub, and the time course of the temperature of the heating element is programmed and the opening and closing of valves and the tilt angle of the tub, as well as the heating of the thermostats for the different temperature control circuits and / or opening or closing of Valves of the temperature control circuits or the drain valve controls.
  • a controller in which the respective timing of the influx of liquids from each container , the timing of the tilting of the tub, and the time course of the temperature of the heating element is programmed and the opening and closing of valves and the tilt angle of the tub, as well as the heating of the thermostats for the different temperature control circuits and / or opening or closing of Valves of the temperature control circuits or the drain valve controls.
  • the storage containers are filled with the necessary liquids.
  • These may be buffers, aqueous solutions, solutions of radiolabels, dyes and other liquids which may be contacted with the tissue or cell samples according to the time sequence.
  • Tissue samples are placed on microscope slides in the tub.
  • the tissue samples may be any type of cryostat or paraffin / microtome sections, in particular one Layer thickness in one to two-digit ⁇ range, for example, brain slices act.
  • large brain slices such as cuts of human or monkey brains can be introduced into the tub.
  • smaller brain slices such as mice, can also be used as the examination object.
  • the tissue samples are then in accordance with the Test course with changing liquids from the reservoirs acted upon. This can be done by placing the samples in the tub and then opening valves for the supply of liquid from a reservoir so that the samples are flooded.
  • the flooding can be done via a feed channel, which receives the liquid and the tub at the side areas supplies, so that the tissue sections are not affected by currents.
  • the inlet channel ends at a small distance from the wall of the tub, so that the liquid can run both laterally and over the front edge of the inlet channel into the tub.
  • the tissue to be marked can be spared, since the liquids do not strike the tissue frontally.
  • the empty tub can be filled by opening a valve for the supply of a liquid from a reservoir, and then the slides with tissue or brain slices, which are located on a plate, can be lowered from above into the tub until with the liquid submitted are covered.
  • This has the advantage that the surface of the tissue samples is not attacked by the flowing liquid.
  • the liquid is discharged via the liquid outlet.
  • the tilting device is raised at an angle to the horizontal and opened a possibly existing valve at the drain.
  • the slides with the tissue samples are previously lifted out of the tub again. This has the advantage that the surface of the tissue samples is not attacked by the flowing liquid. Furthermore, the lifted tissue samples can be dried by a fan before being reinserted into the tub.
  • the process is then repeated by means of a control unit after the programmed time sequence with liquids from different storage containers.
  • Various process steps can be carried out at different temperatures, as described for example in the special part of the description.
  • temperature ranges between see 4 ° C and 60 ° C, especially 4 ° C to 37 ° C, called.
  • Typical temperatures used are 22 ° C or 4 ° C.
  • the temperature of the heating element can be changed by switching on and off the supply of various fluid circuits of the thermostats as preprogrammed.
  • a saving of radioactive ligands for example tritium [3 H] -labeled neurotransmitters
  • a saving of radioactive ligands for example tritium [3 H] -labeled neurotransmitters, can be achieved by a reduced main incubation volume.
  • the user-independent incubation steps lead to error-free compliance with times for different process sections.
  • the temperature conditions are optimized and automatic control and logging of the process is possible.
  • the device can be used with all sub-combinations of the disclosed device features for the biochemical labeling of tissues and cell cultures.
  • the figures show the device according to the invention in a schematic form.
  • FIG. 5 shows a device according to the invention with lifting device
  • FIG. 6 shows a device according to the invention with lifting device before or after
  • FIG. 1 shows a device according to the invention.
  • reference numeral 1 denotes a trough in which slides 2, 2a, 2b are received, on which are located
  • the trough 1 is located on a means for tilting the trough 3. Between the means for tilting the trough 3 and the trough 1, a tempering 4 is positioned, on which the trough 1 is.
  • the tempering 4 is connected via lines 5, 5 a with thermostats 6, 6a in combination, which keeps the tempering 4 isothermally by means of a liquid circuit.
  • the tub 1 is connected via lines 7, 7a, 7b, 7c with reservoirs 8, 8a, 8b, 8c in combination, which supply them with necessary for the marking liquids.
  • pumps 9, 9a, 9b, 9c are mounted, which allow a supply of the liquid from the reservoirs 8, 8a, 8b, 8c.
  • the means for tilting the tub 3, the thermostats 6, 6a, and the pumps 9, 9a, 9b, 9c are connected to a control unit 10 in connection, which deliver control signals for the respective process steps.
  • a control unit 10 On the tub 1 is a liquid outlet 11 with a line 12 which leads into a collecting container 13.
  • FIG. 2 shows an inflow channel 18, via which the liquids from the storage containers 8 can be filled into the trough 1.
  • the bold line 19 indicates a flowed liquid covering the slides 2, 2a, 2b ....
  • FIG. 4 shows how the liquid in the trough 1 is discharged through the line 12 into the collecting container 13.
  • the means for tilting the tub 3 in the tilted state In this case, the means for tilting the tub 3 in the tilted state.
  • the fan 16 is in a lateral arrangement to the tub 1 and the plate for receiving slides 14 is located in a lifting device 20 with lifting means 21, which are in communication with a motor 22.
  • FIG. 6 shows the device according to FIG. 5 in a position in which the plate for picking up microscope slides 14 is lifted out by means of the lifting device 20.
  • Step 1 slides 2. 2a, 2b .... with cuts are placed in the tub 1.
  • Step 2 Water bath (tempering 4) is turned on and heats the tub 1 by means of the thermostat 6 a to room temperature (22 ° C).
  • Step 3 Pump 9 is turned on and pumps buffer (VIK) from the reservoir 8 to the cuts.
  • the inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
  • Step 4 Set incubation time is running, eg. B. 15 min.
  • Step 5 The means for tilting the tub 3 is turned on.
  • the tub 1 with the cuts is tilted to 45 °.
  • the VIK buffer passes through the liquid drain 1 1 and the hose 12 into the collecting container thirteenth
  • Step 6 The means for tilting the tub 3 moves back again.
  • Step 7 The pump 9a (HIK) is turned on and pumps buffer (HIK) from reservoir 8a to the cuts.
  • the inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
  • Step 8 The set incubation time runs, eg 60 min.
  • Step 9 The means for tilting the tub 3 is turned on. The tub 1 with the cuts is tilted to 45 °. The HIK buffer overflows the liquid drain 1 1 out.
  • Step 10 The means for tilting the tub 3 moves back again. Start / end of the washing steps:
  • Step 1 1 The water bath 6a is turned on and heats the tub 1 by means of the thermostat 6b to 4 ° C.
  • Step 12 The wash buffer supply pump 9b is turned on and pumps (pre-cooled) buffer onto the cuts.
  • the inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
  • Step 13 The set incubation time is running, e.g. 5 min.
  • Step 14 The means for tilting the tub 3 is turned on.
  • the tub 1 with the cuts is tilted to 45 °.
  • the buffer goes beyond the liquid drain 1 1 out.
  • Step 15 The means for tilting the tub 3 moves back again.
  • Step: 16 to 19: Repeat from step 1 1-15 > 2nd wash step.
  • Step 20 Step 12: The pump 9c (distilled water) is turned on and pumps (precooled) dist. Water from container 8c on the cuts.
  • the inlet channel 18 swirls the water, so that no liquid jet reaches the cuts.
  • Step 21 Set incubation time running, e.g. 2 sec.
  • Step 22 The means for tilting the tub 3 is turned on.
  • the tub 1 with the cuts is tilted to 45 °.
  • the water goes beyond the liquid outlet 11.
  • Step 23 Acoustic signal, so that the tub 1 can be placed with the cuts under the fan 16.
  • the cover plate 15 of the tub can also be raised by motor control and the fan is controlled directly. Operation of the control unit

Abstract

The invention relates to a device for biochemically marking tissues and cell cultures and the use thereof. The device as per the invention comprises a tub (1) for receiving tissue segments or cell cultures, which tub is located on means for tilting the tub (3) and is connected via supply lines (7) to storage containers (8) from which solutions for biochemically marking the tissues and cell cultures can be drawn. The solutions are fed into the tub (1) in a determined sequence by means of a control unit (10) in order to treat the tissues or cell cultures. After treatment with a solution, the tub (1) is tilted and emptied. The next solution is then fed into the tub (1).

Description

B e s c h r e i b u n g  Description
Vorrichtung zur biochemischen Markierung von Geweben und Zellkulturen Device for biochemical labeling of tissues and cell cultures
und deren Verwendung  and their use
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur biochemischen Markierung von Geweben und Zellkulturen und deren Verwendung. The invention relates to a device for biochemical labeling of tissues and cell cultures and their use.
In der medizinischen und biologischen Forschung werden nach dem Stand der Technik Ver- fahren zur biochemischen Markierung von Geweben aber auch von Zellkulturen eingesetzt. Bekannte Methoden sind die Autoradiographie, die in-situ-Hybridisierung oder die Immun- histochemie. Bei diesen Verfahren werden Gewebe mit unterschiedlichen Mitteln markiert. So findet eine radioaktive Markierung von Neurotransmittern statt, die an Rezeptoren anbinden oder radioaktive Sonden werden zur Markierung von Genabschnitten eingesetzt. Weiter- hin können mit Farbstoff oder radioaktiv markierte Antikörper eingesetzt werden. Anwendungen finden sich auch in der Histologie. Grundsätzlich kann jedes Gewebe untersucht werden, besonders interessant ist die Untersuchung von Hirnschnitten. In medical and biological research, state-of-the-art methods are used for biochemical labeling of tissues but also of cell cultures. Known methods are autoradiography, in situ hybridization or immunohistochemistry. In these procedures, tissues are labeled by different means. Thus, a radioactive labeling of neurotransmitters takes place, which bind to receptors or radioactive probes are used to label gene segments. Furthermore, with dye or radioactively labeled antibodies can be used. Applications are also found in histology. Basically, any tissue can be examined, particularly interesting is the investigation of brain slices.
Bei den nach dem Stand der Technik verwendeten Verfahren werden die Gewebeproben oder die Hirnschnitte auf Objektträger aufgebracht, die meist senkrecht in Haltevorrichtungen befestigt werden. Dabei können mehrere Objektträger mit Proben in einer Halterung fixiert werden. In the methods used in the prior art, the tissue samples or the brain slices are applied to slides, which are usually mounted vertically in holding devices. In this case, several slides can be fixed with samples in a holder.
Diese Proben werden dann, je nach eingesetzten Verfahren, in einer bestimmten Reihenfolge in verschiedene Gefäße mit Lösungen gegeben, die auf sie einwirken. Bei den Lösungen handelt es sich beispielsweise um Pufferlösungen, Farbstofflösungen oder um Lösungen, die radioaktive Marker enthalten, die mit den Gewebeproben, beispielsweise Gehirnschnitten, in Kontakt gebracht werden. Diese Arbeiten werden manuell ausgeführt.  These samples are then placed, depending on the method used, in a specific sequence in different vessels with solutions that act on them. The solutions are, for example, buffer solutions, dye solutions or solutions which contain radioactive markers which are brought into contact with the tissue samples, for example brain slices. This work is done manually.
Bei der Vorgehensweise nach dem Stand der Technik besteht die Schwierigkeit, dass die durch eine Person durchgeführten Handlungen an eine streng vorgegebene Reihenfolge und Genauigkeit in der Durchführung gebunden sind, wobei es im Rahmen der Fehlergenauigkeit zu Abweichungen in der Durchführung kommen kann. Weiterhin werden bei dieser Vorgehensweise große Mengen an besonders wertvollen und teuren Stoffen gebraucht, was sehr hohe Kosten verursacht. Beispielsweise sind radioaktive Marker hochpreisige Substanzen, aber auch andere für die Prozesse notwendige Stoffe müssen aufwendig hergestellt werden und sind sehr teuer. Es besteht daher der Bedarf die Verfahren möglichst präzise reproduzierbar durchzuführen und teure Stoffe sparsam einzusetzen. In the prior art approach, there is the difficulty that the actions performed by a person are bound to a strictly predetermined order and accuracy in performance, and that deviations in performance may occur in the context of error accuracy. Furthermore, this procedure requires large amounts of particularly valuable and expensive materials, which is very high costs caused. For example, radioactive markers are high-priced substances, but also other substances necessary for the processes have to be produced in a complicated manner and are very expensive. There is therefore a need to carry out the processes as precisely reproducible as possible and to use expensive materials sparingly.
Es ist daher die Aufgabe der Erfindung eine Vorrichtung zur Durchführung von biochemischen Markierungen von Geweben, insbesondere von Gehirnschnitten oder Zellkulturen zu schaffen, mit der die Markierungsarbeiten hochpräzise und reproduzierbar durchgeführt werden können und die eine Einsparung von teurem Material, wie radioaktiven Markern und anderen wertvollen Lösungen ermöglicht. It is therefore the object of the invention to provide a device for carrying out biochemical markings of tissues, in particular brain sections or cell cultures, with which the marking work can be carried out with high precision and reproducibility and the saving of expensive material, such as radioactive markers and other valuable solutions allows.
Mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung ist eine hochpräzise und reproduzierbare Durchführung von biochemischen Markierungsexperimenten möglich, die nicht vom manuellen Geschick des Experimentators abhängig ist, und es werden -gegenüber der manuellen Prozessie- rung - bis zu 60% der Kosten für Wertstoffe, wie beispielsweise radioaktive Marker, Antikörper oder Farblösungen, gegenüber dem manuellen Prozess eingespart. Die Temperaturbedingungen werden optimiert. Eine automatische Steuerung und Protokollierung wird ermöglicht. With the device according to the invention, a highly precise and reproducible performance of biochemical labeling experiments is possible, which does not depend on the manual skills of the experimenter, and up to 60% of the costs for valuable substances, such as radioactive markers, in contrast to manual processing. Antibodies or color solutions, compared to the manual process saved. The temperature conditions are optimized. Automatic control and logging is possible.
Ausgehend vom Oberbegriff des Anspruchs 1 wird die Aufgabe erfindungsgemäß gelöst mit den im kennzeichnenden Teil des Anspruchs 1 angegebenen Merkmalen. Starting from the preamble of claim 1, the object is achieved by the features specified in the characterizing part of claim 1.
Im Folgenden soll die Erfindung in ihrer allgemeinen Form beschrieben werden. In the following, the invention will be described in its general form.
Das Kernstück der Vorrichtung besteht aus einer Wanne zur Aufnahme von Geweben, die mit Mitteln zum Kippen der Wanne ausgestattet ist. Die Gewebe befinden sich vorzugsweise auf Objektträgern. The core of the device consists of a tub for receiving tissues, which is equipped with means for tilting the tub. The tissues are preferably on slides.
Bei den Mitteln zum Kippen der Wanne kann es sich um einen Kipptisch oder um ein Gestell handeln, welches die Wanne aufnimmt.  The means for tilting the tub may be a tilting table or a rack which receives the tub.
Die Mittel zum Kippen der Wanne sind mit einem Motor ausgestattet, welcher ein Kippen der Wanne ermöglicht.  The means for tilting the tub are equipped with a motor which allows tilting of the tub.
In die Wanne münden Leitungen ein, die sie mit verschiedenen Flüssigkeiten versorgen. Die Leitungen stehen jeweils mit Vorratsbehältern in Verbindung, die Flüssigkeiten für die jeweiligen Verfahrensschritte bevorraten. Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung sind mindestens zwei Vorratsbehälter vorgesehen. Dabei ist ein Vorratsbehälter mit einer Lösung für die Markierung gefüllt und der andere mit einer Waschlösung. Je nach gewähltem Verfahren müssen n Vorratsbehälter vorhanden sein, die die notwendigen Lösungen aufnehmen, n kann dabei beispielsweise einen Wert von 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 oder 12 annehmen. Entsprechend ist auch die gleiche Anzahl n an Leitungen vorgesehen, die die Wanne mit den Vorratsbehältern verbinden. Into the tub leads enter, which supply them with different liquids. The lines are each in connection with storage containers, which store liquids for the respective process steps. In the device according to the invention are provided at least two reservoir. One reservoir is filled with one solution for the mark and the other with a wash solution. Depending on the method chosen, there must be n reservoirs which receive the necessary solutions, n being able to assume, for example, a value of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 or 12. Accordingly, the same number n is provided on lines that connect the tub with the reservoirs.
Dabei sind Ventile vorgesehen, die eine Regulierung des Zustroms von Flüssigkeiten ermöglicht. Die Ventile können in der Leitung, an den Vorratsbehältern und/oder an den Eingängen zu der Wanne positioniert sein.  In this case, valves are provided which allows regulation of the inflow of liquids. The valves may be positioned in the conduit, at the reservoirs and / or at the entrances to the trough.
In einer bevorzugten Ausführungsform befinden sich an den Leitungen Pumpen, die die Lösungen in den Vorratsbehältern definiert fördern. In a preferred embodiment, there are pumps on the lines, which promote the solutions defined in the reservoirs.
Wenn die Vorratsbehälter oberhalb der Wanne angeordnet sind, sind die Pumpen nicht erforderlich, jedoch vorteilhaft, da gut dosiert werden kann. Durch die Dosierung können auch Strömungen in der Wanne besser kontrolliert werden.  If the storage containers are arranged above the tub, the pumps are not required, but advantageous because it can be well dosed. Through the dosage, currents in the tub can be better controlled.
Vorteilhaft befindet sich in der Position, an der die Leitungen für die Zufuhr von Flüssigkeiten in die Wanne eintreten, eine Zulaufrinne, die die jeweilig zugeführte Flüssigkeit aufnimmt und eine ruhige Zufuhr der Flüssigkeit auf die Objektträger ermöglicht, so dass die Gewebeschnitte nicht beschädigt oder beeinträchtigt werden. Zu diesem Zweck ist es vorteilhaft, wenn die Zulaufrinne im Wesentlichen senkrecht zu dem Flüssigkeitsstrom, der in die Wanne geleitet wird, angeordnet ist. Sie ist vorzugsweise so angeordnet, dass sie die Flüssigkeit aus den Vorratsbehältern in den Seitenbereich der Wanne leitet, so dass der Flüssigkeitsstrom nicht direkt über die Schnitte läuft und möglicherweise auftretende Scherkräfte verringert werden. Advantageously, in the position where the liquid supply lines enter the trough, there is a feed trough which receives the respective supplied liquid and allows a smooth supply of liquid to the slides so that the tissue sections are not damaged or compromised , For this purpose, it is advantageous if the inlet channel is arranged substantially perpendicular to the liquid flow, which is passed into the trough. It is preferably arranged to direct the liquid from the reservoirs into the side region of the trough so that the liquid flow does not run directly over the cuts and any shearing forces that may occur are reduced.
Weiterhin kann sich über den Objektträgern eine Abdeckplatte befinden, die ein Verdunsten von Flüssigkeit verhindern kann.  Furthermore, there may be a cover plate over the slides that can prevent evaporation of liquid.
An der Wanne ist weiterhin ein Flüssigkeitsablass beispielsweise in Form eines Ablassventils angebracht, das sich vorzugsweise auf der den Leitungen gegenüberliegenden Seite der Wanne befindet. In einer bevorzugten Ausfuhrungsform steht die Wanne auf einem Temperierelement, welches sich auf dem Mittel zum Kippen der Wanne befindet. Das Temperierelement kann auch im Boden der Wanne integriert sein. Bei dem Temperierelement kann es sich um einen Metallblock bzw. eine Metallplatte handeln. Das Temperierelement kann mit Kühl- und Heizschlangen ausgestattet sein, die über Leitungen mit Thermostaten in Verbindung stehen. Dabei können in dem Temperierelement verschiedene unabhängig voneinander betreibbare Temperierschlangen vorliegen, die an verschiedenen Thermostaten angeschlossen sind, die unterschiedliche Temperaturen konstant halten. Die Temperierschlangen sind über Leitungen mit Ventilen mit dem jeweiligen Thermostaten verbunden, so dass wahlweise verschiedene Temperierkreisläufe aktiviert werden können. Als Temperiermittel kommen beispielsweise Wasser, ein Wasser-Glyceringemisch oder handelsübliche Kühlmittel in Betracht. On the tub, a liquid discharge is further attached, for example in the form of a drain valve, which is preferably located on the opposite side of the tub lines. In a preferred embodiment, the tub is on a tempering, which is located on the means for tilting the tub. The tempering can also be integrated in the bottom of the tub. The tempering element may be a metal block or a metal plate. The tempering element can be equipped with cooling and heating coils, which are connected via lines with thermostats. In this case, different thermostats can be operated independently of each other in the tempering, which are connected to different thermostats that keep different temperatures constant. The temperature control coils are connected via lines with valves to the respective thermostat, so that optionally different temperature control circuits can be activated. As a temperature control, for example, water, a water-glycerin mixture or commercially available coolant into consideration.
Über der Wanne kann sich eine Abdeckplatte, beispielsweise aus Plexiglas, befinden, die die Gewebeproben oder Schnitte vor äußeren Einwirkungen schützt und ein Verdunsten der eingesetzten Flüssigkeiten während der Einwirkdauer verhindert. A cover plate, for example made of Plexiglas, which protects the tissue samples or sections from external influences and prevents evaporation of the liquids used during the exposure time, can be located above the tub.
Vorteilhaft kann über der Wanne eine Hebevorrichtung angebracht sein, die ein Einbringen und Herausnehmen von Geweben bzw. Objektträgern mit Geweben, Hirnschnitten oder Zellkulturen ermöglicht, um das eventuell unfixierte Untersuchungsmaterial vor Beschädigungen durch den Flüssigkeitsstrahl zu schützen. Die Hebevorrichtung kann beispielsweise eine Platte oder ein Gitter sein, auf der sich die Proben befinden und die mit Seilen oder Ket- ten verbunden sind, die mittels eines Motors über ein Gewinde hoch und herunter gefördert werden kann. Advantageously, a lifting device can be mounted above the trough, which allows the insertion and removal of tissues or slides with tissues, brain slices or cell cultures in order to protect the possibly unfixed examination material from damage by the liquid jet. The lifting device can be, for example, a plate or a grid on which the samples are located and which are connected with cables or chains which can be conveyed up and down by means of a motor via a thread.
Weiterhin kann die erfindungsgemäße Vorrichtung mit einem Gebläse bzw. Ventilator ausgestattet sein, welcher ein Trocknen der markierten Proben ermöglicht.  Furthermore, the device according to the invention can be equipped with a blower or fan, which allows drying of the marked samples.
Die Mittel zum Kippen der Wanne, die Ventile, die den Zustrom von Flüssigkeiten aus den Vorratsbehältern regeln, das Ablassventil sowie die Thermostaten oder einzelne Komponenten aus dieser Gruppe sind an eine Steuerung angeschlossen, in der der jeweilige zeitliche Ablauf des Zustromes von Flüssigkeiten aus jedem Behälter, der zeitliche Ablauf der Kippung der Wanne, sowie der zeitliche Verlauf der Temperierung des Heizelements programmiert ist und die das Öffnen und Schließen von Ventilen und den Kippwinkel der Wanne, sowie die Beheizung der Thermostaten für die verschiedenen Temperierkreisläufe und/oder Öffnung bzw. Schließung von Ventilen der Temperierkreisläufe oder des Ablassventils steuert. Damit kann jedes gewünschte Verfahren automatisiert durchgeführt werden. The means for tilting the tub, the valves that regulate the flow of liquids from the reservoirs, the drain valve and the thermostats or individual components from this group are connected to a controller, in which the respective timing of the influx of liquids from each container , the timing of the tilting of the tub, and the time course of the temperature of the heating element is programmed and the opening and closing of valves and the tilt angle of the tub, as well as the heating of the thermostats for the different temperature control circuits and / or opening or closing of Valves of the temperature control circuits or the drain valve controls. Thus, any desired method can be carried out automatically.
Bei Betrieb werden die Vorratsbehälter mit den notwendigen Flüssigkeiten befüllt. Dabei kann es sich um Puffer, wässrige Lösungen, Lösungen von Radiomarkern, Farbstoffen und anderen Flüssigkeiten handeln, die entsprechend der zeitlichen Abfolge mit den Gewebeoder Zellproben in Kontakt gebracht werden können. During operation, the storage containers are filled with the necessary liquids. These may be buffers, aqueous solutions, solutions of radiolabels, dyes and other liquids which may be contacted with the tissue or cell samples according to the time sequence.
In die Wanne werden Gewebeproben auf Objektträgern gelegt. Bei den Gewebeproben kann es sich um jedwede Art von Cryostat- oder Paraffin-/Mikrotomschnitten, insbesondere einer Schichtdicke im ein- bis zweistelligen μιη-Bereich, beispielsweise Hirnschnitte, handeln. Insbesondere große Hirnschnitte, wie Schnitte von Human- oder Affengehirnen können in die Wanne eingebracht werden. Es können jedoch auch kleinere Gehirnschnitte, wie beispielsweise von Mäusen, als Untersuchungsobjekt eingesetzt werden. Die Gewebeproben werden dann gemäß dem
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Versuchsverlauf mit wechselnden Flüssigkeiten aus den Vorratsbehältern beaufschlagt. Das kann geschehen, indem die Proben in der Wanne vorgelegt werden und anschließend Ventile für die Zuleitungen der Flüssigkeit aus einem Vorratsbehälter geöffnet werden, so dass die Proben geflutet werden. Die Flutung kann über eine Zulaufrinne erfolgen, die die Flüssigkeit aufnimmt und der Wanne an deren Seitenbereichen zuführt, so dass die Gewebeschnitte nicht durch Strömungen beeinträchtigt werden. Vorzugsweise endet die Zulaufrinne in einem geringen Abstand von der Wand der Wanne, so dass die Flüssigkeit sowohl seitlich als auch über die Vorderkante der Zulaufrinne in die Wanne laufen kann. Durch diese Maßnahmen kann das zu markierende Gewebe geschont werden, da die Flüssigkeiten nicht frontal auf das Gewebe auftreffen. Tissue samples are placed on microscope slides in the tub. The tissue samples may be any type of cryostat or paraffin / microtome sections, in particular one Layer thickness in one to two-digit μιη range, for example, brain slices act. In particular, large brain slices, such as cuts of human or monkey brains can be introduced into the tub. However, smaller brain slices, such as mice, can also be used as the examination object. The tissue samples are then in accordance with the
Figure imgf000007_0001
Test course with changing liquids from the reservoirs acted upon. This can be done by placing the samples in the tub and then opening valves for the supply of liquid from a reservoir so that the samples are flooded. The flooding can be done via a feed channel, which receives the liquid and the tub at the side areas supplies, so that the tissue sections are not affected by currents. Preferably, the inlet channel ends at a small distance from the wall of the tub, so that the liquid can run both laterally and over the front edge of the inlet channel into the tub. Through these measures, the tissue to be marked can be spared, since the liquids do not strike the tissue frontally.
Alternativ kann die leere Wanne durch Öffnen eines Ventils für die Zufuhr einer Flüssigkeit aus einem Vorratsbehälter gefüllt werden, und anschließend können die Objektträger mit Gewebe- bzw. Hirnschnitten, die sich auf einer Platte befinden, von oben in die Wanne herabgelassen werden, bis sie mit der vorgelegten Flüssigkeit bedeckt sind. Das hat den Vorteil, dass die Oberfläche der Gewebeproben durch die strömende Flüssigkeit nicht angegriffen wird. Alternatively, the empty tub can be filled by opening a valve for the supply of a liquid from a reservoir, and then the slides with tissue or brain slices, which are located on a plate, can be lowered from above into the tub until with the liquid submitted are covered. This has the advantage that the surface of the tissue samples is not attacked by the flowing liquid.
Nach einer vorgegebenen Einwirkzeit wird die Flüssigkeit über den Flüssigkeitsablass abgeführt. Dazu wird die Kippvorrichtung in einem Winkel zur Horizontalen angehoben und ein ggf. vorhandenes Ventil an dem Ablass geöffnet. In einer vorteilhaften Ausgestaltung werden die Objektträger mit den Gewebeproben zuvor wieder aus der Wanne herausgehoben. Das hat den Vorteil, dass die Oberfläche der Gewebeproben durch die strömende Flüssigkeit nicht angegriffen wird. Weiterhin können die herausgehobenen Gewebeproben durch einen Ventilator getrocknet werden, bevor sie wieder in die Wanne eingeführt werden.  After a predetermined exposure time, the liquid is discharged via the liquid outlet. For this purpose, the tilting device is raised at an angle to the horizontal and opened a possibly existing valve at the drain. In an advantageous embodiment, the slides with the tissue samples are previously lifted out of the tub again. This has the advantage that the surface of the tissue samples is not attacked by the flowing liquid. Furthermore, the lifted tissue samples can be dried by a fan before being reinserted into the tub.
Der Prozess wird dann mittels einer Steuereinheit nach der programmierten Zeitfolge mit Flüssigkeiten aus verschiedenen Vorratsbehältern wiederholt. Verschiedene Prozessschritte können bei unterschiedlichen Temperaturen durchgeführt werden, wie sie beispielsweise im speziellen Beschreibungsteil beschrieben sind. Beispielhaft können Temperaturbereiche zwi- sehen 4°C und 60°C, insbesondere 4°C bis 37°C, genannt werden. Typische zum Einsatz kommende Temperaturen sind 22°C oder 4°C. The process is then repeated by means of a control unit after the programmed time sequence with liquids from different storage containers. Various process steps can be carried out at different temperatures, as described for example in the special part of the description. By way of example, temperature ranges between see 4 ° C and 60 ° C, especially 4 ° C to 37 ° C, called. Typical temperatures used are 22 ° C or 4 ° C.
Während den verschiedenen Befüllungszyklen kann die Temperatur des Heizelements durch Zu- und Abschalten der Zufuhr verschiedener Flüssigkeitskreisläufe der Thermostaten, wie vorprogrammiert, geändert werden.  During the various filling cycles, the temperature of the heating element can be changed by switching on and off the supply of various fluid circuits of the thermostats as preprogrammed.
Durch den Betrieb mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann eine Einsparung radioaktiver Liganden, beispielsweise Tritium [3 H] -markierte Neurotransmitter, durch ein reduziertes Hauptinkubationsvolumen erzielt werden. Die benutzerunabhängigen Inkubationsschritte führen zu einem fehlerfreien Einhalten von Zeiten für verschiedene Verfahrensabschnitte. Die Temperaturbedingungen sind optimiert und es ist eine automatische Steuerung und Protokollierung des Verfahrens möglich. By operation with the device of the invention, a saving of radioactive ligands, for example tritium [3 H] -labeled neurotransmitters, can be achieved by a reduced main incubation volume. The user-independent incubation steps lead to error-free compliance with times for different process sections. The temperature conditions are optimized and automatic control and logging of the process is possible.
Erfindungsgemäß kann die Vorrichtung mit allen Unterkombinationen der offenbarten Vor- richtungsmerkmale für die biochemische Markierung von Geweben und Zellkulturen verwendet werden. According to the invention, the device can be used with all sub-combinations of the disclosed device features for the biochemical labeling of tissues and cell cultures.
Spezieller Beschreibungsteil: Special description part:
Im Folgenden wird die erfindungsgemäße Vorrichtung an Hand von Beispielen beschrieben, ohne dass diese Beispiele einschränkend auszulegen sind. In the following, the device according to the invention will be described by means of examples without these examples being interpreted restrictively.
Die Figuren zeigen die erfindungsgemäße Vorrichtung in schematischer Form. The figures show the device according to the invention in a schematic form.
Es zeigen die Figuren: The figures show:
Fig.1 : eine erfindungsgemäße Vorrichtung  1 shows a device according to the invention
Fig.2: eine erfindungsgemäße Vorrichtung in der Seitenansicht  2 shows a device according to the invention in side view
Fig.3: eine erfindungsgemäße Vorrichtung während des Einfüllens von Pufferflüssig- keit  3 shows a device according to the invention during the filling of buffer liquid
Fig.4: eine erfindungsgemäße Vorrichtung in Kippstellung  4 shows a device according to the invention in tilted position
Fig.5: eine erfindungsgemäße Vorrichtung mit Hebevorrichtung  5 shows a device according to the invention with lifting device
Fig.6: eine erfindungsgemäße Vorrichtung mit Hebevorrichtung vor oder nach der 6 shows a device according to the invention with lifting device before or after
Markierung von Proben. In Figur 1 ist eine erfindungsgemäße Vorrichtung dargestellt. In ihr bezeichnet das Bezugszeichen 1 eine Wanne, in der Objektträger 2, 2a, 2b aufgenommen sind, auf denen sichMarking of samples. FIG. 1 shows a device according to the invention. In it, reference numeral 1 denotes a trough in which slides 2, 2a, 2b are received, on which are located
Gewebeschnitte oder Zellkulturen befinden. Die Wanne 1 befindet sich auf einem Mittel zum Kippen der Wanne 3. Zwischen dem Mittel zum Kippen der Wanne 3 und der Wanne 1 ist ein Temperierelement 4 positioniert, auf dem die Wanne 1 steht. Das Temperierelement 4 steht über Leitungen 5, 5 a mit Thermostaten 6, 6a in Verbindung, die das Temperierelement 4 mittels eines Flüssigkeitskreislaufes isotherm hält. Die Wanne 1 steht über Leitungen 7, 7a, 7b, 7c mit Vorratsbehältern 8, 8a, 8b, 8c in Verbindung, die sie mit für die Markierung notwendigen Flüssigkeiten versorgen. An den Leitungen 7, 7a, 7b, 7c sind Pumpen 9, 9a, 9b, 9c angebracht, die eine Zufuhr der Flüssigkeit aus den Vorratsbehältern 8, 8a, 8b, 8c ermöglichen. Das Mittel zum Kippen der Wanne 3, die Thermostaten 6, 6a, und die Pumpen 9, 9a, 9b, 9c stehen mit einer Steuereinheit 10 in Verbindung, die für die jeweiligen Verfahrensschritte Steuersignale abgeben. An der Wanne 1 befindet sich ein Flüssigkeitsablass 11 mit einer Leitung 12, die in einen Auffangbehälter 13 führt. Tissue sections or cell cultures. The trough 1 is located on a means for tilting the trough 3. Between the means for tilting the trough 3 and the trough 1, a tempering 4 is positioned, on which the trough 1 is. The tempering 4 is connected via lines 5, 5 a with thermostats 6, 6a in combination, which keeps the tempering 4 isothermally by means of a liquid circuit. The tub 1 is connected via lines 7, 7a, 7b, 7c with reservoirs 8, 8a, 8b, 8c in combination, which supply them with necessary for the marking liquids. On the lines 7, 7a, 7b, 7c pumps 9, 9a, 9b, 9c are mounted, which allow a supply of the liquid from the reservoirs 8, 8a, 8b, 8c. The means for tilting the tub 3, the thermostats 6, 6a, and the pumps 9, 9a, 9b, 9c are connected to a control unit 10 in connection, which deliver control signals for the respective process steps. On the tub 1 is a liquid outlet 11 with a line 12 which leads into a collecting container 13.
In Figur 2 haben gleiche Vorrichtungsmerkmale dieselben Bezugszeichen. In ihr ist in der Wanne 1 eine Platte zur Aufnahme der Objektträger 14 dargestellt. Über der Wanne 1 befindet sich eine Abdeckplatte 15. Oberhalb der Wanne ist ein Ventilator 16 angebracht. Die gestrichelten Linien bezeichnen Steuerleitungen 17 für das Kippen des Mittels zum Kippen der Wanne 17a, für das Öffnen und Verschließen des Ablassventils 17b, für das Regulieren der Thermostaten 17c, 17d und für das Öffnen und Schließen der Ventile bzw. Pumpen 17e und für die Regulierung der Zufuhr der Flüssigkeiten 17f . Das Bezugszeichen 18 beziffert eine Zulaufrinne. In Figur 3 wird eine Zulaufrinne 18 dargestellt, über die die Flüssigkeiten aus den Vorratsbehältern 8 in die Wanne 1 eingefüllt werden können. Die fett gedruckte Linie 19 bezeichnet eine geströmte Flüssigkeit, welche die Objektträger 2, 2a, 2b.... bedeckt. In Figure 2, like device features have the same reference numerals. In her in the tub 1, a plate for receiving the slide 14 is shown. Above the tub 1 is a cover plate 15. Above the tub, a fan 16 is mounted. The dashed lines indicate control lines 17 for tilting the means for tilting the tub 17a, for opening and closing the drain valve 17b, for regulating the thermostats 17c, 17d and for opening and closing the valves 17e and for regulation the supply of liquids 17f. The reference numeral 18 numbers an inlet channel. FIG. 3 shows an inflow channel 18, via which the liquids from the storage containers 8 can be filled into the trough 1. The bold line 19 indicates a flowed liquid covering the slides 2, 2a, 2b ....
In Figur 4 ist dargestellt, wie die sich in der Wanne 1 befindliche Flüssigkeit durch die Lei- tung 12 in den Auffangbehälter 13 abgelassen wird. Dabei ist das Mittel zum Kippen der Wanne 3 in gekipptem Zustand. In Figur 5 befindet sich der Ventilator 16 in seitlicher Anordnung zur Wanne 1 und die Platte zur Aufnahme von Objektträgern 14 befindet sich in einer Hebevorrichtung 20 mit Hebemitteln 21, die mit einem Motor 22 in Verbindung stehen. FIG. 4 shows how the liquid in the trough 1 is discharged through the line 12 into the collecting container 13. In this case, the means for tilting the tub 3 in the tilted state. In Figure 5, the fan 16 is in a lateral arrangement to the tub 1 and the plate for receiving slides 14 is located in a lifting device 20 with lifting means 21, which are in communication with a motor 22.
Figur 6 zeigt die Vorrichtung gemäß Figur 5 in einer Position, in der die Platte zur Aufnahme von Objektträgern 14 mittels der Hebevorrichtung 20 herausgehoben ist. FIG. 6 shows the device according to FIG. 5 in a position in which the plate for picking up microscope slides 14 is lifted out by means of the lifting device 20.
Beispiel: Example:
Die Arbeitsweise der erfindungsgemäßen Vorrichtung wird an folgendem Ablauf, der in der Steuerung programmiert ist, beispielhaft dargestellt.  The operation of the device according to the invention is exemplified by the following procedure programmed in the controller.
Start/Ende der Vorinkubation (VIK): Start / end of preincubation (VIK):
• Schritt 1 : Objektträger 2. 2a, 2b.... mit Schnitten werden in die Wanne 1 gelegt.  • Step 1: slides 2. 2a, 2b .... with cuts are placed in the tub 1.
Schritt 2: Wasserbad (Temperierelement 4) wird eingeschaltet und heizt die Wanne 1 mittels des Thermostaten 6a auf Raumtemperatur (22°C).  Step 2: Water bath (tempering 4) is turned on and heats the tub 1 by means of the thermostat 6 a to room temperature (22 ° C).
• Schritt 3 : Pumpe 9 wird eingeschaltet und pumpt Puffer (VIK) aus dem Vorratsbehälter 8 auf die Schnitte.  • Step 3: Pump 9 is turned on and pumps buffer (VIK) from the reservoir 8 to the cuts.
Die Zulaufrinne 18 verwirbelt den Puffer, damit kein Flüssigkeitsstrahl auf die Schnitte gelangt.  The inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
• Schritt 4: Eingestellte Inkubationszeit läuft, z. B. 15 min.  • Step 4: Set incubation time is running, eg. B. 15 min.
• Schritt 5: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 wird eingeschaltet. Die Wanne 1 mit den Schnitten wird auf 45° gekippt. Der VIK-Puffer läuft über den Flüssigkeitsablass 1 1 und den Schlauch 12 in den Auffangbehälter 13.  Step 5: The means for tilting the tub 3 is turned on. The tub 1 with the cuts is tilted to 45 °. The VIK buffer passes through the liquid drain 1 1 and the hose 12 into the collecting container thirteenth
• Schritt 6: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 fährt wieder zurück.  • Step 6: The means for tilting the tub 3 moves back again.
Start/Ende der Hauptinkubation (ΉΙΚ): Start / end of main incubation (ΉΙΚ):
• Schritt 7: Die Pumpe 9a (HIK) wird eingeschaltet und pumpt Puffer (HIK) aus Vorratsbehälter 8a auf die Schnitte.  Step 7: The pump 9a (HIK) is turned on and pumps buffer (HIK) from reservoir 8a to the cuts.
Die Zulaufrinne 18 verwirbelt den Puffer, damit kein Flüssigkeitsstrahl auf die Schnitte gelangt.  The inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
• Schritt 8: Die eingestellte Inkubationszeit läuft, z.B. 60 min. Schritt 9: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 wird eingeschaltet. Die Wanne 1 mit den Schnitten wird auf 45° gekippt. Der HIK-Puffer läuft über den Flüssigkeitsablass 1 1 hinaus. • Step 8: The set incubation time runs, eg 60 min. Step 9: The means for tilting the tub 3 is turned on. The tub 1 with the cuts is tilted to 45 °. The HIK buffer overflows the liquid drain 1 1 out.
Schritt 10: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 fährt wieder zurück. Start/Ende der Waschschritte:  Step 10: The means for tilting the tub 3 moves back again. Start / end of the washing steps:
Schritt 1 1 : Das Wasserbad 6a wird eingeschaltet und heizt die Wanne 1 mittels des Thermostaten 6b auf 4°C.  Step 1 1: The water bath 6a is turned on and heats the tub 1 by means of the thermostat 6b to 4 ° C.
Schritt 12: Die Pumpe 9b für die Zufuhr von Waschpuffer wird eingeschaltet und pumpt (vorgekühlten) Puffer auf die Schnitte.  Step 12: The wash buffer supply pump 9b is turned on and pumps (pre-cooled) buffer onto the cuts.
Die Zulaufrinne 18 verwirbelt den Puffer, damit kein Flüssigkeitsstrahl auf die Schnitte gelangt.  The inlet channel 18 swirls the buffer, so that no liquid jet reaches the cuts.
Schritt 13: Die eingestellte Inkubationszeit läuft, z.B. 5 min.  Step 13: The set incubation time is running, e.g. 5 min.
Schritt 14: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 wird eingeschaltet. Die Wanne 1 mit den Schnitten wird auf 45° gekippt. Der Puffer läuft über den Flüssigkeitsablass 1 1 hinaus.  Step 14: The means for tilting the tub 3 is turned on. The tub 1 with the cuts is tilted to 45 °. The buffer goes beyond the liquid drain 1 1 out.
Schritt 15: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 fährt wieder zurück.  Step 15: The means for tilting the tub 3 moves back again.
Schritt: 16 bis 19: Wiederholung von Schritt 1 1-15 => 2. Waschschritt. Step: 16 to 19: Repeat from step 1 1-15 => 2nd wash step.
Start/Ende der Waschung mit dest. Wasser: Start / end of the wash with dest. Water:
Schritt 20: Schritt 12: Die Pumpe 9c (dest. Wasser) wird eingeschaltet und pumpt (vorgekühltes) dest. Wasser aus Behälter 8c auf die Schnitte.  Step 20: Step 12: The pump 9c (distilled water) is turned on and pumps (precooled) dist. Water from container 8c on the cuts.
Die Zulaufrinne 18 verwirbelt das Wasser, damit kein Flüssigkeitsstrahl auf die Schnitte gelangt. The inlet channel 18 swirls the water, so that no liquid jet reaches the cuts.
Schritt 21 : Eingestellte Inkubationszeit läuft, z.B. 2 sec.  Step 21: Set incubation time running, e.g. 2 sec.
Schritt 22: Das Mittel zum Kippen der Wanne 3 wird eingeschaltet. Die Wanne 1 mit den Schnitten wird auf 45° gekippt. Das Wasser läuft über den Flüssigkeitsablass 11 hinaus.  Step 22: The means for tilting the tub 3 is turned on. The tub 1 with the cuts is tilted to 45 °. The water goes beyond the liquid outlet 11.
Schritt 23: Akustisches Signal, damit die Wanne 1 mit den Schnitten unter den Ventilator 16 gestellt werden kann. Optional kann die Abdeckplatte 15 der Wanne auch per Motorsteuerung angehoben werden und der Ventilator wird direkt angesteuert. Arbeitsweise der Steuereinheit Step 23: Acoustic signal, so that the tub 1 can be placed with the cuts under the fan 16. Optionally, the cover plate 15 of the tub can also be raised by motor control and the fan is controlled directly. Operation of the control unit
• Es werden (Steuerungs-) Impulse zu bestimmten Zeitpunkten abgegeben, z. B.„Ein => Start Motor".  • (control) impulses are delivered at certain times, eg. Eg "On => Start Engine".
• Moderne Komponenten (z. B. Labor-Pumpen oder Kipptisch) verfugen bereits über Schnittstellen, die mit der„Labview"-Software angesteuert bzw. ausgelesen werden können. • Modern components (eg laboratory pumps or tilting tables) already have interfaces that can be controlled or read out with the "Labview" software.
Nachfolgend ein Beispiel für die Steuerung der verschiedenen Komponenten: Here is an example of controlling the various components:
Start: Ende: Ende: Start: Ende: Start: Start: usw. VIK VIK VIK HIK HIK WaWaschen schen Start: End: End: Start: End: Start: Start: etc. VIK VIK VIK HIK HIK WaWashing
Pumpe 9 X  Pump 9 X
(VIK) VIK- Puffer (VIK) VIK buffer
läuft  running
rein  purely
Pumpe X  Pump X
9a HIK-9a HIK-
(HIK) Puffer (HIK) buffer
läuft rein  runs in
Pumpe X  Pump X
9b Wasch-9b washing
(WaPuffer schen) läuft (Wa buffer off)
rein  purely
Pumpe  pump
9c 9c
(Dest.)  (Dest.)
KippX X KippX X
motor VIK- HIK- heben 3 Puffer Puffer motor VIK- HIK- lift 3 buffer buffers
läuft ab läuft ab  runs off expires
KippX X  KippX X
motor Wanne Wanne engine tub tub
senken 3 zurück in zurück in lower 3 back in back in
AusAusgangsgangsposition position  Off output gear position
TempeX X  TempeX X
ratur ture
6b: 6b:
4°C 4 ° C
TempeX X X X TempeX X X X
ratur ture
6a: 6a:
22°C 22 ° C
Zeitach0 min 15 min 15 min 15 min 75 min 75 min 75 min usw. se 5 sec 10 sec 10 sec 15 sec 20 sec Time 10 minutes 15 minutes 15 minutes 15 minutes 75 minutes 75 minutes 75 minutes etc. 5 seconds 10 seconds 10 seconds 15 seconds 20 seconds

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e Patent claims
1. Vorrichtung zur biochemischen Markierung von Geweben oder Zellkulturen mit 1. Device for biochemical labeling of tissues or cell cultures with
- einer Wanne (1),  - a tub (1),
- Mitteln zum Kippen der Wanne (3),  - means for tilting the tub (3),
- einem Flüssigkeitsablass (1 1), der sich an der Wanne (1) befindet,  a liquid outlet (11) located at the trough (1),
- mindestens zwei Vorratsbehältern (8, 8a),  at least two storage containers (8, 8a),
- Leitungen (7, 7a), die die Vorratsbehälter (8, 8a) und die Wanne 1 verbinden, - lines (7, 7a) which connect the storage containers (8, 8a) and the trough 1,
- Pumpen und/oder Ventile (9, 9a,), die eine Regulierung des Zustroms von Flüssigkeit von den Vorratsbehältern (8, 8a) zu der Wanne (1) ermöglichen sowie mit - Pumps and / or valves (9, 9a,), which allow a regulation of the inflow of liquid from the storage containers (8, 8a) to the trough (1) and with
- einer Steuereinheit (10), welche die Mittel zum Kippen der Wanne (3) und die Pumpen und/oder Ventile (9, 9a) ansteuert.  - A control unit (10) which controls the means for tilting the tub (3) and the pumps and / or valves (9, 9a).
2. Vorrichtung nach Anspruch 1 2. Apparatus according to claim 1
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass die Wanne (1) mit einem Temperierelement (4) in Kontakt steht oder es beinhaltet.  that the trough (1) is in contact with or contains a tempering element (4).
3. Vorrichtung nach Anspruch 2, 3. Apparatus according to claim 2,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass das Temperierelement (4) mit mindestens einem Thermostaten (6) in Verbindung steht.  the temperature control element (4) is connected to at least one thermostat (6).
4. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, 4. Device according to one of claims 1 to 3,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass an der Position der Wanne (1), in die die Zuleitungen (7, 7a...) münden, eine Zulaufrinne (18) angebracht ist.  that at the position of the trough (1) into which the supply lines (7, 7a ...) open, an inlet channel (18) is mounted.
5. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, 5. Device according to one of claims 1 to 4,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass sie eine Platte zur Aufnahme von Objektträgern (14) besitzt.  in that it has a plate for holding slides (14).
6. Vorrichtung nach Anspruch 5, 6. Apparatus according to claim 5,
dadurch gekennzeichnet, dass sie über eine Hebevorrichtung (20) mit Hebemitteln (21) verfügt, die die Platte zur Aufnahme der Objektträger (14) heben kann. characterized, in that it has a lifting device (20) with lifting means (21) which can lift the plate for receiving the slides (14).
7. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, 7. Device according to one of claims 1 to 6,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass sich über der Wanne (1) eine Abdeckplatte (15) befindet.  in that there is a cover plate (15) above the trough (1).
8. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, 8. Device according to one of claims 1 to 7,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass sie über einen Ventilator (16) verfugt, der ein Trocknen von Proben ermöglicht.  that it has a fan (16), which allows drying of samples.
9. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, 9. Device according to one of claims 1 to 8,
dadurch gekennzeichnet,  characterized,
dass sich der Flüssigkeitsablass (1 1) an der Seite der Wanne (1) befindet, die dem Eintritt der Leitungen (7, 7a) gegenüber liegt.  in that the liquid outlet (11) is located on the side of the trough (1) facing the inlet of the pipes (7, 7a).
10. Verwendung der Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur biochemischen Markierung von Geweben und Zellkulturen. 10. Use of the device according to one of claims 1 to 9 for the biochemical labeling of tissues and cell cultures.
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