WO2013133393A1

WO2013133393A1 - Ｖｅｇｆ遺伝子の発現抑制用一本鎖核酸分子

Info

Publication number: WO2013133393A1
Application number: PCT/JP2013/056374
Authority: WO
Inventors: 雅彦黒田; 正勝高梨; 後藤　浩; 徳彦池田; 明彦土田; 忠明大木; 智洋濱崎
Original assignee: 学校法人東京医科大学; 株式会社ボナック
Priority date: 2012-03-07
Filing date: 2013-03-07
Publication date: 2013-09-12

Abstract

　ＴＬＲ３の活性化を抑制し、且つ、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する新たな核酸分子を提供する。ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子であって、５'側から３'側にかけて、５'側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３'側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、前記内部領域（Ｚ）が、内部５'側領域（Ｘ）および内部３'側領域（Ｙ）が連結して構成され、前記５'側領域（Ｘｃ）が、前記内部５'側領域（Ｘ）と相補的であり、前記３'側領域（Ｙｃ）が、前記内部３'側領域（Ｙ）と相補的であり、前記内部領域（Ｚ）、前記５'側領域および前記３'側領域の少なくともいずれかが、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする分子とする。この一本鎖核酸分子によれば、ＴＬＲ３の活性化を抑制し、且つ、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制できる。

Description

ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制用一本鎖核酸分子

　本発明は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子、それを含む組成物およびその用途に関する。

　網膜色素上皮細胞下での脈絡膜新生血管（choroidal　neovasucularization：ＣＮＶ）の発生が原因となる加齢黄班変性症（Age-related　Macular　Degeneration：ＡＭＤ）について、血管内皮細胞増殖因子（vascular　endothelial　growth　factor：ＶＥＧＦ）の遺伝子発現の関与が報告されている。このため、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制は、前述のような脈絡膜新生血管の発生による各種疾患の治療に有効と考えられている。

　他方、遺伝子発現を抑制する技術として、ｓｉＲＮＡを用いたＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の利用が注目されている（非特許文献１）。ｓｉＲＮＡは、短い二本鎖のＲＮＡ分子であり、アンチセンス鎖に、ターゲット遺伝子の発現抑制を担う配列が配置されている。前述のＶＥＧＦ遺伝子に関しても、これをターゲットとするｓｉＲＮＡが報告されている（非特許文献２）。

　しかしながら、ｓｉＲＮＡを用いたＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制には、Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ３（以下、「ＴＬＲ３」という）の活性化による副作用の問題が明らかとなっている。ＴＬＲ３は、エンドソームレセプターであり、ウイルスの二重鎖ＲＮＡを認識することにより活性化され、ウイルスへの防御機能として、インターフェロン（ＩＦＮ）等のサイトカインおよびケモカイン等を生成する。具体的に、前記ＴＬＲ３のシグナル経路は、ＴＬＲ３のチロシンがリン酸化され、これによってＮＦ－κβおよびＩＲＦ３の活性化が誘導され、そして、サイトカイン等が生成する。前述のｓｉＲＮＡは、このＴＬＲ３を活性化してしまい、サイトカインを誘導する。ｓｉＲＮＡによるサイトカイン誘導は、ｓｉＲＮＡの配列に依存するものではなく、二本鎖の構造に依存することも明らかとなっているため、配列の設計を変更することによっても、この問題を解消することができない。

ファイアら（Ｆｉｒｅ，ｅｔ　ａｌ．）、Ｎａｔｕｒｅ　第３９１巻、ｐ．８０６－８１１、１９９８年Ｋｌｅｉｎｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ　第４５２巻、ｐ．５９１－５９８、２００８年

　そこで、本発明は、ＴＬＲ３の活性化を抑制し、且つ、ターゲットであるＶＥＧＦ遺伝子の発現の抑制する新たな核酸分子の提供を目的とする。

　前記目的を達成するために、本発明の一本鎖核酸分子は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する分子であって、
５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、
前記内部領域（Ｚ）が、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、
前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、
前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的であり、
前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つが、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする。

　本発明の組成物は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする。

　本発明の発現抑制方法は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする。

　本発明の疾患の治療方法は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現に起因する疾患の治療方法であって、前記本発明の一本鎖核酸分子を、患者に投与する工程を含み、前記一本鎖核酸分子が、前記発現抑制配列として、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。

　本発明のＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子によれば、ＴＬＲ３の活性化を抑制した状態で、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制が可能である。すなわち、本発明によれば、ＴＬＲ３のリン酸化によるＴＬＲ３シグナル経路の活性化を抑制できるため、結果的にＩＦＮ等のサイトカインの生成を抑制できる。このため、サイトカイン誘導による副作用を回避して、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制を実現できる。したがって、本発明は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子の発現が関与する疾患の治療において、ＴＬＲ３の活性化による副作用を抑制できるため、臨床医療における極めて有用な技術といえる。

　なお、本発明の一本鎖核酸分子の遺伝子の発現抑制効果は、ＲＮＡ干渉と同様の現象によるものと推測されるが、本発明における遺伝子発現抑制は、ＲＮＡ干渉に制限および限定されない。

図１は、本発明の一本鎖核酸分子の一例を示す模式図である。図２は、本発明の一本鎖核酸分子のその他の例を示す模式図である。図３は、本発明の一本鎖核酸分子のその他の例を示す模式図である。図４は、本発明の実施例１におけるリン酸化ＴＬＲ３タンパク質の発現を示す結果である。図５は、本発明の実施例１におけるＩＦＮタンパク質の発現量を示すグラフである。図６は、本発明の実施例１におけるＶＥＧＦタンパク質の発現量を示すグラフである。図７は、本発明の実施例２におけるＩＦＮタンパク質の発現量を示すグラフである。図８は、本発明の実施例２におけるＩＦＮ　ｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。

　本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。

１．ｓｓＮｃ分子
　本発明の一本鎖核酸分子は、前述のように、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子であって、
５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、
前記内部領域（Ｚ）が、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、
前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、
前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的であり、
前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つが、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする。

　本発明において、「ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制」は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を阻害することを意味する。前記抑制のメカニズムは、特に制限されず、例えば、ダウンレギュレーションまたはサイレンシングでもよい。ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子からの転写産物の生成量の減少、前記転写産物の活性の減少、ＶＥＧＦ遺伝子からの翻訳産物の生成量の減少、または前記翻訳産物の活性の減少等によって確認できる。前記タンパク質は、例えば、成熟タンパク質、または、プロセシングもしくは翻訳後修飾を受ける前の前駆体タンパク質があげられる。

　本発明の一本鎖核酸分子は、以下、本発明の「ｓｓＮｃ分子」ともいう。本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏまたはｉｎ　ｖｉｔｒｏにおいて、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制に使用できることから、「ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制用ｓｓＮｃ分子」または「ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制剤」ともいう。また、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、ＲＮＡ干渉により、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制できることから、「ＲＮＡ干渉用ｓｓＮｃ分子」、「ＲＮＡ干渉誘導分子」、「ＲＮＡ干渉剤」または「ＲＮＡ干渉誘導剤」ともいう。また、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、ＩＦＮ等のサイトカイン誘導等による副作用を抑制できる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、その５’末端と３’末端とが未連結であり、線状一本鎖核酸分子ということもできる。本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記内部領域（Ｚ）において、前記内部５’領域（Ｘ）と前記内部３’領域（Ｙ）が、直接的に連結されている。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的である。このため、５’側において、前記領域（Ｘｃ）が前記領域（Ｘ）に向かって折り返し、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能であり、また、３’側において、前記領域（Ｙｃ）が前記領域（Ｙ）に向かって折り返し、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが、自己アニーリングによって、二重鎖を形成可能である。本発明のｓｓＮｃ分子は、このように、分子内で二重鎖を形成可能であり、例えば、従来のＲＮＡ干渉に使用するｓｉＲＮＡのように、分離した２本の一本鎖ＲＮＡがアニーリングによって二本鎖ＲＮＡを形成するものとは、明らかに異なる構造である。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記発現抑制配列は、例えば、本発明のｓｓＮｃ分子が、ｉｎ　ｖｉｖｏまたはｉｎ　ｖｉｔｒｏで細胞内に導入された場合に、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する活性を示す配列である。前記発現抑制配列は、特に制限されず、適宜設定できる。前記発現抑制配列は、例えば、ｓｉＲＮＡによるＲＮＡ干渉に関与する配列を適宜適用できる。ＲＮＡ干渉は、一般に、長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が、細胞内において、Ｄｉｃｅｒにより、３’末端が突出した１９～２１塩基対程度の二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ：ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ　ＲＮＡ）に切断され、その一方の一本鎖ＲＮＡが標的ｍＲＮＡに結合して、前記ｍＲＮＡを分解することにより、前記ｍＲＮＡの翻訳を抑制する現象である。本発明は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子に対する前記ｓｉＲＮＡの一本鎖ＲＮＡの配列を、前記発現抑制配列として使用できる。

　なお、本発明は、ＶＥＧＦ遺伝子に対する前記発現抑制配列の配列情報がポイントではなく、前記発現抑制配列によるＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制活性を、例えば、細胞内で機能させるための核酸分子の構造に関する。したがって、本発明においては、例えば、出願時において公知となっている前記ｓｉＲＮＡの一本鎖ＲＮＡ配列の他、将来的に明らかとなる配列に関しても、前記発現抑制配列として利用できる。

　前記発現抑制配列は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子の所定領域に対して、９０％以上の相補性を有していることが好ましく、より好ましくは９５％、９６％、９７％であり、さらに好ましくは９８％、９９％であり、特に好ましくは１００％である。このような相補性を満たすことにより、例えば、オフターゲットを十分に軽減できる。

　本発明のｓｓＮｃ分子によるＶＥＧＦ遺伝子の発現の抑制は、例えば、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つに前記発現抑制配列を配置した構造をとることで、ＲＮＡ干渉またはＲＮＡ干渉に類似する現象（ＲＮＡ干渉様の現象）が生じることによると推測される。なお、本発明は、このメカニズムにより限定されない。本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、いわゆるｓｉＲＮＡのように、二本鎖の一本鎖ＲＮＡからなるｄｓＲＮＡとして、細胞等へ導入するものではなく、また、細胞内において、前記発現抑制配列の切り出しは、必ずしも必須ではない。このため、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、ＲＮＡ干渉様の機能を有するということもできる。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記発現抑制配列は、前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つに含まれる。本発明のｓｓＮｃ分子は、前記発現抑制配列を、例えば、１つ有してもよいし、２つ以上有してもよい。

　後者の場合、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、同じＶＥＧＦ遺伝子に対する同じ発現抑制配列を２つ以上有してもよいし、同じＶＥＧＦ遺伝子に対する異なる発現抑制配列を２つ以上有してもよい。本発明のｓｓＮｃ分子が、２つ以上の前記発現抑制配列を有する場合、各発現抑制配列の配置箇所は、特に制限されず、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）のいずれか一領域でもよいし、異なる領域でもよい。

　前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、前記内部５’領域（Ｘ）と前記内部３’領域（Ｙ）が連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｘｃ）との配列関係を示すために、「前記内部５’側領域（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成される」と表わすものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記３’側領域（Ｙｃ）とが、例えば、前記ｓｓＮｃ分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現抑制配列が配置されてもよい。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前記内部５’側領域（Ｘ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を有していればよく、具体的には、例えば、前記領域（Ｘ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、前記領域（Ｘ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的でもよいが、完全に相補的であることが好ましい。本発明のｓｓＮｃ分子において、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前記内部３’側領域（Ｙ）に相補的である。ここで、前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に相補的な配列を有していればよく、具体的には、例えば、前記領域（Ｙ）の全領域またはその部分領域に対して相補的な配列を含む、または、前記相補的な配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、前記領域（Ｙ）の相補的な前記全領域または相補的な前記部分領域に対して、例えば、完全に相補的でもよいし、１もしくは数塩基が非相補的でもよいが、完全に相補的であることが好ましい。前記１塩基若しくは数塩基は、例えば、１～３塩基、好ましくは１塩基または２塩基である。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが連結している形態があげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とは、例えば、直接連結してもよいし、間接的に連結してもよい。前者の場合、直接的な連結は、例えば、ホスホジエステル結合による連結があげられる。後者の場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが連結している形態があげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有してもよいし、いずれか一方を有してもよい。後者の場合、例えば、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有し、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有さない、つまり、前記領域（Ｙｃ）と前記領域（Ｙ）とが直接連結された形態があげられる。また、後者の場合、例えば、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に前記リンカー領域（Ｌｙ）を有し、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に前記リンカー領域（Ｌｘ）を有さない、つまり、前記領域（Ｘｃ）と前記領域（Ｘ）とが直接連結された形態があげられる。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、それぞれ、それ自体の領域内部において、自己アニーリングを生じない構造であることが好ましい。

　本発明のｓｓＮｃ分子について、前記リンカー領域を有さないｓｓＮｃ分子の一例を、図１の模式図に示す。図１（Ａ）は、前記ｓｓＮｃ分子について、５’側から３’側に向かって、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図１（Ｂ）は、前記ｓｓＮｃ分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図１（Ｂ）に示すように、前記ｓｓＮｃ分子は、前記５’側領域（Ｘｃ）が折り返し、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間で二重鎖が形成され、前記３’側領域（Ｙｃ）が折り返し、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間で二重鎖が形成される。図１は、あくまでも、各領域の連結順番および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ等は、これに制限されない。

　本発明のｓｓＮｃ分子について、前記リンカー領域を有するｓｓＮｃ分子の一例を、図２の模式図に示す。図２（Ａ）は、一例として、前記ｓｓＮｃ分子について、５’側から３’側に向かって、各領域の順序の概略を示す模式図であり、図２（Ｂ）は、前記ｓｓＮｃ分子が、前記分子内において二重鎖を形成している状態を示す模式図である。図２（Ｂ）に示すように、前記ｓｓＮｃ分子は、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）との間で、二重鎖が形成され、前記Ｌｘ領域および前記Ｌｙ領域が、ループ構造をとる。図２は、あくまでも、各領域の連結順番および二重鎖を形成する各領域の位置関係を示すものであり、例えば、各領域の長さ等は、これに制限されない。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）、前記内部５’側領域（Ｘ）、前記内部３’側領域（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、特に制限されず、例えば、以下の通りである。本発明において、「塩基数」は、例えば、「長さ」を意味し、「塩基長」ということもできる。

　前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｘ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的であることが好ましい。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的でもよい。

　また、前記５’側領域（Ｘｃ）は、前述のように、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｘｃ）は、例えば、前記領域（Ｘ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｘ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｘｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｘ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｘｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｘ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補的であることが好ましい。前記領域（Ｘ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｘ）における、５’末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域（セグメント）であることが好ましい。

　前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の全領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、前記領域（Ｙ）の５’末端から３’末端の全領域に相補的な塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補であることが好ましい。なお、これには制限されず、例えば、前述のように、１もしくは数塩基が非相補的でもよい。

　また、前記３’側領域（Ｙｃ）は、前述のように、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）の部分領域に相補的でもよい。この場合、前記領域（Ｙｃ）は、例えば、前記領域（Ｙ）の部分領域と同じ塩基長であり、すなわち、前記領域（Ｙ）よりも、１塩基以上短い塩基長の塩基配列からなることが好ましい。前記領域（Ｙｃ）は、より好ましくは、前記領域（Ｙ）の前記部分領域と同じ塩基長であり、且つ、前記領域（Ｙｃ）の全ての塩基が、前記領域（Ｙ）の前記部分領域の全ての塩基と相補的である、つまり、例えば、完全に相補であることが好ましい。前記領域（Ｙ）の前記部分領域は、例えば、前記領域（Ｙ）における、３’末端の塩基（１番目の塩基）から連続する塩基配列からなる領域（セグメント）であることが好ましい。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）との関係、前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）と、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）および前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）との関係は、例えば、下記式（１）および（２）の条件を満たす。
Ｚ＝Ｘ＋Ｙ　・・・（１）
Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ　・・・（２）

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）の長さの関係は、特に制限されず、例えば、下記式のいずれの条件を満たしてもよい。
Ｘ＝Ｙ　・・・（１９）
Ｘ＜Ｙ　・・・（２０）
Ｘ＞Ｙ　・・・（２１）

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の関係は、例えば、下記（ａ）～（ｄ）のいずれかの条件を満たす。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ　・・・（３）
Ｙ＝Ｙｃ　・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ　・・・（５）
Ｙ＞Ｙｃ　・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ　・・・（７）
Ｙ＞Ｙｃ　・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ　・・・（９）
Ｙ＝Ｙｃ　・・・（１０）

　前記（ａ）～（ｄ）において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差は、例えば、下記条件を満たすことが好ましい。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
Ｘ－Ｘｃ＝１～１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３　・・・（１１）
Ｙ－Ｙｃ＝０　・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
Ｘ－Ｘｃ＝０　・・・（１３）
Ｙ－Ｙｃ＝１～１０、好ましくは１、２、３または４、
より好ましくは１、２または３　・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
Ｘ－Ｘｃ＝１～１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２　・・・（１５）
Ｙ－Ｙｃ＝１～１０、好ましくは、１、２または３、
より好ましくは１または２　・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
Ｘ－Ｘｃ＝０　・・・（１７）
Ｙ－Ｙｃ＝０　・・・（１８）

　前記（ａ）～（ｄ）のｓｓＮｃ分子について、それぞれの構造の一例を、図３の模式図に示す。図３は、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）を含むｓｓＮｃであり、（Ａ）は、前記（ａ）のｓｓＮｃ分子、（Ｂ）は、前記（ｂ）のｓｓＮｃ分子、（Ｃ）は、前記（ｃ）のｓｓＮｃ分子、（Ｄ）は、前記（ｄ）のｓｓＮｃ分子の例である。図３において、点線は、自己アニーリングにより二重鎖を形成している状態を示す。図３のｓｓＮｃ分子は、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）を、前記式（２０）の「Ｘ＜Ｙ」として表わすが、これには制限されず、前述のように、前記式（１９）の「Ｘ＝Ｙ」でも、前記式（２１）の「Ｘ＞Ｙ」でもよい。また、図３は、あくまでも、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）との関係、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）との関係を示す模式図であり、例えば、各領域の長さ、形状等は、これには制限されず、また、リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）の有無も、これには制限されない。

　前記（ａ）～（ｃ）のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）、および、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が、それぞれ二重鎖を形成することによって、前記内部領域（Ｚ）において、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）のいずれともアライメントできない塩基を有する構造であり、二重鎖を形成しない塩基を有する構造ともいえる。前記内部領域（Ｚ）において、前記アライメントできない塩基（二重鎖を形成しない塩基ともいう）を、以下、「フリー塩基」という。図３において、前記フリー塩基の領域を、「Ｆ」で示す。前記領域（Ｆ）の塩基数は、特に制限されない。前記領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）は、例えば、前記（ａ）のｓｓＮｃ分子の場合、「Ｘ－Ｘｃ」の塩基数であり、前記（ｂ）のｓｓＮｃ分子の場合、「Ｙ－Ｙｃ」の塩基数であり、前記（ｃ）のｓｓＮｃ分子の場合、「Ｘ－Ｘｃ」の塩基数と「Ｙ－Ｙｃ」の塩基数との合計数である。

　他方、前記(ｄ)のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記内部領域（Ｚ）の全領域が、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）とアライメントする構造であり、前記内部領域（Ｚ）の全領域が二重鎖を形成する構造ともいえる。なお、前記（ｄ）のｓｓＮｃ分子において、前記５’側領域（Ｘｃ）の５’末端と前記３’側領域（Ｙｃ）の３’末端は、未連結である。

　本発明のｓｓＮｃ分子について、各領域の長さを以下に例示するが、本発明は、これには制限されない。本発明において、例えば、塩基数の数値範囲は、その範囲に属する正の整数を全て開示するものであり、例えば、「１～４塩基」との記載は、「１、２、３、４塩基」の全ての開示を意味する（以下、同様）。

　前記５’側領域（Ｘｃ）、前記３’側領域（Ｙｃ）、および前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基（Ｆ）の塩基数の合計は、例えば、前記内部領域（Ｚ）の塩基数となる。このため、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の長さは、例えば、前記内部領域（Ｚ）の長さ、前記フリー塩基の数（Ｆ）およびその位置に応じて、適宜決定できる。

　前記内部領域（Ｚ）の塩基数は、例えば、１９塩基以上である。前記塩基数の下限は、例えば、１９塩基であり、好ましくは２０塩基であり、より好ましくは２１塩基である。前記塩基数の上限は、例えば、５０塩基であり、好ましくは４０塩基であり、より好ましくは３０塩基である。前記内部領域（Ｚ）の塩基数の具体例は、例えば、１９塩基、２０塩基、２１塩基、２２塩基、２３塩基、２４塩基、２５塩基、２６塩基、２７塩基、２８塩基、２９塩基、または、３０塩基である。

　前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記内部領域（Ｚ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の塩基数は、例えば、１９～３０塩基であり、好ましくは、１９、２０または２１塩基である。前記内部領域（Ｚ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～３１塩基であり、好ましくは、１～２１塩基であり、より好ましくは、１～１１塩基であり、さらに好ましくは、１～７塩基である。

　前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１～２９塩基であり、好ましくは１～１１塩基であり、より好ましくは１～９塩基、１～７塩基であり、さらに好ましくは１～４塩基であり、特に好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９～３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは１～９塩基、１～７塩基であり、より好ましくは１～４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

　前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記５’側領域（Ｘｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは、１～７塩基である。

　前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１～２９塩基であり、好ましくは１～１１塩基であり、より好ましくは１～９塩基、１～７塩基であり、さらに好ましくは１～４塩基であり、特に好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。前記内部領域（Ｚ）または前記５’側領域（Ｘｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、例えば、このような塩基数が好ましい。具体例として、前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９～３０塩基（例えば、１９塩基）の場合、前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは１～９塩基、１～７塩基であり、より好ましくは１～４塩基であり、さらに好ましくは１塩基、２塩基、３塩基である。

　前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記３’側領域（Ｙｃ）は、例えば、前記発現抑制配列のみから構成される領域でもよいし、前記発現抑制配列を含む領域でもよい。前記発現抑制配列の長さは、例えば、前述の通りである。前記３’側領域（Ｙｃ）が前記発現抑制配列を含む場合、前記発現抑制配列の５’側および／または３’側に、さらに付加配列を有してもよい。前記付加配列の塩基数は、例えば、１～１１塩基であり、好ましくは、１～７塩基である。

　前述のように、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数は、例えば、前記式（２）の「Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ」で表わすことができる。具体例として、「Ｘｃ＋Ｙｃ」の塩基数は、例えば、前記内部領域（Ｚ）と同じ、または、前記内部領域（Ｚ）より小さい。後者の場合、「Ｚ－（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、１～１０、好ましくは１～４、より好ましくは１、２または３である。前記「Ｚ－（Ｘｃ＋Ｙｃ）」は、例えば、前記内部領域（Ｚ）における前記フリー塩基の領域（Ｆ）の塩基数（Ｆ）に相当する。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の長さは、特に制限されない。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましく、前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、前記内部３’側領域（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）とが二重鎖を形成可能な長さであることが好ましい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位が塩基を含む場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）のそれぞれの塩基数は、同じでも異なってもよく、また、その塩基配列も、同じでも異なってもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の塩基数は、その下限が、例えば、１塩基であり、好ましくは２塩基であり、より好ましくは３塩基であり、その上限が、例えば、１００塩基であり、好ましくは８０塩基であり、より好ましくは５０塩基である。前記各リンカー領域の塩基数は、具体例として、例えば、１～５０塩基、１～３０塩基、１～２０塩基、１～１０塩基、１～７塩基、１～４塩基等が例示できるが、これには制限されない。

　本発明のｓｓＮｃ分子の全長は、特に制限されない。本発明のｓｓＮｃ分子において、前記塩基数の合計（全長の塩基数）は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、その上限は、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。本発明のｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）およびリンカー領域（Ｌｙ）を除く塩基数の合計は、下限が、例えば、３８塩基であり、好ましくは４２塩基であり、より好ましくは５０塩基であり、さらに好ましくは５１塩基であり、特に好ましくは５２塩基であり、上限が、例えば、３００塩基であり、好ましくは２００塩基であり、より好ましくは１５０塩基であり、さらに好ましくは１００塩基であり、特に好ましくは８０塩基である。

　本発明のｓｓＮｃ分子の構成単位は、特に制限されず、例えば、ヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。前記ヌクレオチド残基は、例えば、修飾されていない非修飾ヌクレオチド残基および修飾された修飾ヌクレオチド残基があげられる。本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記修飾ヌクレオチド残基を含むことによって、ヌクレアーゼ耐性を向上し、安定性を向上可能である。また、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基の他に、さらに、非ヌクレオチド残基を含んでもよい。前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基の詳細は、後述する。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の構成単位は、それぞれ、前記ヌクレオチド残基が好ましい。前記各領域は、例えば、下記（１）～（３）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の構成単位は、特に制限されず、例えば、前記ヌクレオチド残基および前記非ヌクレオチド残基があげられる。前記リンカー領域は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記非ヌクレオチド残基のみから構成されてもよいし、前記ヌクレオチド残基と前記非ヌクレオチド残基から構成されてもよい。前記リンカー領域は、例えば、下記（１）～（７）の残基で構成される。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基

　本発明のｓｓＮｃ分子が、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の両方を有する場合、例えば、両方の構成単位が同じでもよいし、異なってもよい。具体例として、例えば、両方のリンカー領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基である形態、両方のリンカー領域の構成単位が前記非ヌクレオチド残基である形態、一方の領域の構成単位が前記ヌクレオチド残基であり、他方のリンカー領域の構成単位が非ヌクレオチド残基である形態等があげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記ヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子等があげられる。本発明のｓｓＮｃ分子において、前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾ヌクレオチド残基および前記修飾ヌクレオチド残基の両方でもよい。前記ｓｓＮｃ分子が、前記非修飾ヌクレオチド残基と前記修飾ヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。本発明のｓｓＮｃ分子が、前記非ヌクレオチド残基を含む場合、前記非ヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～８個、１～６個、１～４個、１、２または３個である。

　本発明のｓｓＮｃ分子において、前記ヌクレオチド残基は、例えば、リボヌクレオチド残基が好ましい。この場合、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、「ＲＮＡ分子」または「ｓｓＲＮＡ分子」ともいう。前記ｓｓＲＮＡ分子は、例えば、前記リボヌクレオチド残基のみから構成される分子、前記リボヌクレオチド残基の他に前記非ヌクレオチド残基を含む分子があげられる。前記ｓｓＲＮＡ分子において、前記リボヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記修飾リボヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非修飾リボヌクレオチド残基および前記修飾リボヌクレオチド残基の両方を含んでもよい。

　前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記修飾リボヌクレオチド残基を含む場合、前記修飾リボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。前記非修飾リボヌクレオチド残基に対する前記修飾リボヌクレオチド残基は、例えば、リボース残基がデオキシリボース残基に置換された前記デオキシリボヌクレオチド残基でもよい。前記ｓｓＲＮＡ分子が、例えば、前記非修飾リボヌクレオチド残基の他に前記デオキシリボヌクレオチド残基を含む場合、前記デオキシリボヌクレオチド残基の個数は、特に制限されず、例えば、「１もしくは数個」であり、具体的には、例えば、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、最も好ましくは１または２個である。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、標識物質を含み、前記標識物質で標識化されてもよい。前記標識物質は、特に制限されず、例えば、蛍光物質、色素、同位体等があげられる。前記標識物質は、例えば、ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３色素、Ｃｙ５色素等の蛍光団があげられ、前記色素は、例えば、Ａｌｅｘａ４８８等のＡｌｅｘａ色素等があげられる。前記同位体は、例えば、安定同位体および放射性同位体があげられ、好ましくは安定同位体である。前記安定同位体は、例えば、被ばくの危険性が少なく、専用の施設も不要であることから取り扱い性に優れ、また、コストも低減できる。また、前記安定同位体は、例えば、標識した化合物の物性変化がなく、トレーサーとしての性質にも優れる。前記安定同位体は、特に制限されず、例えば、^２Ｈ、^１３Ｃ、^１５Ｎ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３３Ｓ、^３４Ｓおよび^３６Ｓがあげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、前述のように、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制ができる。このため、本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子が原因となる疾患の治療剤として使用できる。本発明において、「治療」は、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。

　本発明のｓｓＮｃ分子の使用方法は、特に制限されず、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子を有する投与対象に、前記ｓｓＮｃ分子を投与すればよい。

　前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。前記細胞は、特に制限されず、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＣＯＳ細胞等の各種培養細胞、ＥＳ細胞、造血幹細胞等の幹細胞、初代培養細胞等の生体から単離した細胞等があげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子の使用に関しては、後述する本発明の組成物、発現抑制方法および治療方法等の記載を参照できる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、前述のように、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制可能であることから、例えば、医薬品、ならびに、医学および生命科学等の研究ツールとして有用である。

２．ヌクレオチド残基
　前記ヌクレオチド残基は、例えば、構成要素として、糖、塩基およびリン酸を含む。前記ヌクレオチド残基は、前述のように、例えば、リボヌクレオチド残基およびデオキシリボヌクレオチド残基があげられる。前記リボヌクレオチド残基は、例えば、糖としてリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびＵ（ウラシル）を有し、前記デオキシリボース残基は、例えば、糖としてデオキシリボース残基を有し、塩基として、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）およびチミン（Ｔ）を有する。

　前記ヌクレオチド残基は、未修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基があげられる。前記未修飾ヌクレオチド残基は、前記各構成要素が、例えば、天然に存在するものと同一または実質的に同一であり、好ましくは、人体において天然に存在するものと同一または実質的に同一である。

　前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基を修飾したヌクレオチド残基である。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記未修飾ヌクレオチド残基の構成要素のいずれが修飾されてもよい。本発明において、「修飾」は、例えば、前記構成要素の置換、付加および／または欠失、前記構成要素における原子および／または官能基の置換、付加および／または欠失であり、「改変」ということができる。前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、天然に存在するヌクレオチド残基、人工的に修飾したヌクレオチド残基等があげられる。前記天然由来の修飾ヌクレオチド残基は、例えば、リンバックら（Ｌｉｍｂａｃｈ　ｅｔ　ａｌ．、１９９４、Ｓｕｍｍａｒｙ：ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ　ｏｆ　ＲＮＡ、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．２２：２１８３～２１９６）を参照できる。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、前記ヌクレオチドの代替物の残基でもよい

　前記ヌクレオチド残基の修飾は、例えば、リボース－リン酸骨格（以下、リボリン酸骨格）の修飾があげられる。

　前記リボリン酸骨格において、例えば、リボース残基を修飾できる。前記リボース残基は、例えば、２’位炭素を修飾でき、具体的には、例えば、２’位炭素に結合する水酸基を、水素またはフルオロ等のハロゲンに置換できる。前記２’位炭素の水酸基を水素に置換することで、リボース残基をデオキシリボースに置換できる。前記リボース残基は、例えば、立体異性体に置換でき、例えば、アラビノース残基に置換してもよい。

　前記リボリン酸骨格は、例えば、非リボース残基および／または非リン酸を有する非リボリン酸骨格に置換してもよい。前記非リボリン酸骨格は、例えば、前記リボリン酸骨格の非荷電体があげられる。前記非リボリン酸骨格に置換された、前記ヌクレオチドの代替物は、例えば、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジン等があげられる。前記代替物は、この他に、例えば、人工核酸モノマー残基があげられる。具体例として、例えば、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、ＬＮＡ（Ｌｏｃｋｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）、ＥＮＡ（２’－Ｏ，４’－Ｃ－Ｅｔｈｙｌｅｎｅｂｒｉｄｇｅｄ　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄ）等があげられ、好ましくはＰＮＡである。

　前記リボリン酸骨格において、例えば、リン酸基を修飾できる。前記リボリン酸骨格において、糖残基に最も隣接するリン酸基は、αリン酸基と呼ばれる。前記αリン酸基は、負に荷電し、その電荷は、糖残基に非結合の２つの酸素原子にわたって、均一に分布している。前記αリン酸基における４つの酸素原子のうち、ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と非結合である２つの酸素原子は、以下、「非結合（ｎｏｎ－ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」ともいう。他方、前記ヌクレオチド残基間のホスホジエステル結合において、糖残基と結合している２つの酸素原子は、以下、「結合（ｌｉｎｋｉｎｇ）酸素」という。前記αリン酸基は、例えば、非荷電となる修飾、または、前記非結合酸素における電荷分布が非対称型となる修飾を行うことが好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記非結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｅ（セレン）、Ｂ（ホウ素）、Ｃ（炭素）、Ｈ（水素）、Ｎ（窒素）およびＯＲ（Ｒは、アルキル基またはアリール基）のいずれかの原子で置換でき、好ましくは、Ｓで置換される。前記非結合酸素は、例えば、両方が置換されていることが好ましく、より好ましくは、両方がＳで置換される。前記修飾リン酸基は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノホスフェートエステル、ホスホネート水素、ホスホロアミデート、アルキルまたはアリールホスホネート、およびホスホトリエステル等があげられ、中でも、前記２つの非結合酸素が両方ともＳで置換されているホスホロジチオエートが好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記結合酸素を置換してもよい。前記酸素は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｃ（炭素）およびＮ（窒素）のいずれかの原子で置換でき。前記修飾リン酸基は、例えば、Ｎで置換した架橋ホスホロアミデート、Ｓで置換した架橋ホスホロチオエート、およびＣで置換した架橋メチレンホスホネート等があげられる。前記結合酸素の置換は、例えば、本発明のｓｓＮｃ分子の５’末端ヌクレオチド残基および３’末端ヌクレオチド残基の少なくとも一方において行うことが好ましく、５’側の場合、Ｃによる置換が好ましく、３’側の場合、Ｎによる置換が好ましい。

　前記リン酸基は、例えば、前記リン非含有のリンカーに置換してもよい。前記リンカーは、例えば、シロキサン、カーボネート、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキサイドリンカー、スルホネート、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、およびメチレンオキシメチルイミノ等を含み、好ましくは、メチレンカルボニルアミノ基およびメチレンメチルイミノ基を含む。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、３’末端および５’末端の少なくとも一方のヌクレオチド残基が修飾されてもよい。前記修飾は、例えば、３’末端および５’末端のいずれか一方でもよいし、両方でもよい。前記修飾は、例えば、前述の通りであり、好ましくは、末端のリン酸基に行うことが好ましい。前記リン酸基は、例えば、全体を修飾してもよいし、前記リン酸基における１つ以上の原子を修飾してもよい。前者の場合、例えば、リン酸基全体の置換でもよいし、欠失でもよい。

　前記末端のヌクレオチド残基の修飾は、例えば、他の分子の付加があげられる。前記他の分子は、例えば、前述のような標識物質、保護基等の機能性分子があげられる。前記保護基は、例えば、Ｓ（硫黄）、Ｓｉ（ケイ素）、Ｂ（ホウ素）、エステル含有基等があげられる。前記標識物質等の機能性分子は、例えば、本発明のｓｓＮｃ分子の検出等に利用できる。

　前記他の分子は、例えば、前記ヌクレオチド残基のリン酸基に付加してもよいし、スペーサーを介して、前記リン酸基または前記糖残基に付加してもよい。前記スペーサーの末端原子は、例えば、前記リン酸基の前記結合酸素、または、糖残基のＯ、Ｎ、ＳもしくはＣに、付加または置換できる。前記糖残基の結合部位は、例えば、３’位のＣもしくは５’位のＣ、またはこれらに結合する原子が好ましい。前記スペーサーは、例えば、前記ＰＮＡ等のヌクレオチド代替物の末端原子に、付加または置換することもできる。

　前記スペーサーは、特に制限されず、例えば、－（ＣＨ_２）_ｎ－、－（ＣＨ_２）_ｎＮ－、－（ＣＨ_２）_ｎＯ－、－（ＣＨ_２）_ｎＳ－、Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、無塩基糖、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミド、およびモルホリノ等、ならびに、ビオチン試薬およびフルオレセイン試薬等を含んでもよい。前記式において、ｎは、正の整数であり、ｎ＝３または６が好ましい。

　前記末端に付加する分子は、これらの他に、例えば、色素、インターカレート剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サッフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性担体（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コール酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）およびペプチド複合体（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射線標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾール複合体、テトラアザマクロ環のＥｕ^３＋複合体）等があげられる。

　本発明のｓｓＮｃ分子は、前記５’末端が、例えば、リン酸基またはリン酸基アナログで修飾されてもよい。前記リン酸基は、例えば、５’一リン酸（(HO)₂(O)P-O-5’）、５’二リン酸（(HO)₂(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’三リン酸（(HO)₂(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’－グアノシンキャップ（７－メチル化または非メチル化、7m-G-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)PO-P(HO)(O)-O-5’）、５’－アデノシンキャップ（Ａｐｐｐ）、任意の修飾または非修飾ヌクレオチドキャップ構造（N-O-5’-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5’）、５’一チオリン酸（ホスホロチオエート：(HO)₂(S)P-O-5’）、５’一ジチオリン酸（ホスホロジチオエート：(HO)(HS)(S)P-O-5’）、５’－ホスホロチオール酸（(HO)₂(O)P-S-5’）、硫黄置換の一リン酸、二リン酸および三リン酸（例えば、５’－α－チオ三リン酸、５’－γ－チオ三リン酸等）、５’－ホスホルアミデート（(HO)₂(O)P-NH-5’、(HO)(NH₂)(O)P-O-5’）、５’－アルキルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、(OH)₂(O)P-5’-CH₂、Ｒはアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル等））、５’－アルキルエーテルホスホン酸（例えば、RP(OH)(O)-O-5’、Ｒはアルキルエーテル（例えば、メトキシメチル、エトキシメチル等））等があげられる。

　前記ヌクレオチド残基において、前記塩基は、特に制限されない。前記塩基は、例えば、天然の塩基でもよいし、非天然の塩基でもよい。前記塩基は、例えば、天然由来でもよいし、合成品でもよい。前記塩基は、例えば、一般的な塩基、その修飾アナログ等が使用できる。

　前記塩基は、例えば、アデニンおよびグアニン等のプリン塩基、シトシン、ウラシルおよびチミン等のピリミジン塩基があげられる。前記塩基は、この他に、イノシン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌバラリン（ｎｕｂｕｌａｒｉｎｅ）、イソグアニシン（ｉｓｏｇｕａｎｉｓｉｎｅ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎｅ）等があげられる。前記塩基は、例えば、２－アミノアデニン、６－メチル化プリン等のアルキル誘導体；２－プロピル化プリン等のアルキル誘導体；５－ハロウラシルおよび５－ハロシトシン；５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシン；６－アゾウラシル、６－アゾシトシンおよび６－アゾチミン；５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、５－ハロウラシル、５－（２－アミノプロピル）ウラシル、５－アミノアリルウラシル；８－ハロ化、アミノ化、チオール化、チオアルキル化、ヒドロキシル化および他の８－置換プリン；５－トリフルオロメチル化および他の５－置換ピリミジン；７－メチルグアニン；５－置換ピリミジン；６－アザピリミジン；Ｎ－２、Ｎ－６、およびＯ－６置換プリン（２－アミノプロピルアデニンを含む）；５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシン；ジヒドロウラシル；３－デアザ－５－アザシトシン；２－アミノプリン；５－アルキルウラシル；７－アルキルグアニン；５－アルキルシトシン；７－デアザアデニン；Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデニン；２，６－ジアミノプリン；５－アミノ－アリル－ウラシル；Ｎ３－メチルウラシル；置換１，２，４－トリアゾール；２－ピリジノン；５－ニトロインドール；３－ニトロピロール；５－メトキシウラシル；ウラシル－５－オキシ酢酸；５－メトキシカルボニルメチルウラシル；５－メチル－２－チオウラシル；５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウラシル；５－メチルアミノメチル－２－チオウラシル；３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウラシル；３－メチルシトシン；５－メチルシトシン；Ｎ４－アセチルシトシン；２－チオシトシン；Ｎ６－メチルアデニン；Ｎ６－イソペンチルアデニン；２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン；Ｎ－メチルグアニン；Ｏ－アルキル化塩基等があげられる。また、プリンおよびピリミジンは、例えば、米国特許第３，６８７，８０８号、「Ｃｏｎｃｉｓｅ　Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ　Ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、８５８～８５９頁、クロシュビッツジェーアイ（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ　Ｊ．Ｉ．）編、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ、１９９０、およびイングリッシュら（Ｅｎｇｌｉｓｃｈら）、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ　Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１、３０巻、ｐ．６１３に開示されるものが含まれる。

　前記修飾ヌクレオチド残基は、これらの他に、例えば、塩基を欠失する残基、すなわち、無塩基のリボリン酸骨格を含んでもよい。また、前記修飾ヌクレオチド残基は、例えば、米国仮出願第６０／４６５，６６５号（出願日：２００３年４月２５日）、および国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０４／０７０７０号（出願日：２００４年３月８日）に記載される残基が使用でき、本発明は、これらの文献を援用できる。

３．非ヌクレオチド残基
前記非ヌクレオチド残基は、特に制限されない。本発明のｓｓＮｃ分子は、例えば、前記非ヌクレオチド残基として、ピロリジン骨格またはピペリジン骨格を含む非ヌクレオチド構造を有してもよい。前記非ヌクレオチド残基は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）の少なくとも一方に有することが好ましい。前記非ヌクレオチド残基は、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）に有してもよいし、前記リンカー領域（Ｌｙ）に有してもよいし、両方の前記リンカー領域に有してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）は、例えば、同じでもよいし、異なってもよい。

　前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環を構成する炭素が、１個以上、置換されたピロリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ－２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素は、例えば、窒素、酸素、または硫黄で置換されてもよい。前記ピロリジン骨格は、例えば、ピロリジンの５員環内に、例えば、炭素－炭素二重結合、または、炭素－窒素二重結合を含んでもよい。前記ピロリジン骨格において、ピロリジンの５員環を構成する炭素および窒素は、例えば、水素基が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記ピロリジン骨格のいずれの基を介して、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と結合してもよく、好ましくは、前記５員環のいずれか一個の炭素原子と窒素であり、好ましくは、前記５員環の２位の炭素（Ｃ－２）と窒素である。前記ピロリジン骨格としては、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられる。前記プロリン骨格およびプロリノール骨格等は、例えば、生体内物質およびその還元体であるため、安全性にも優れる。

　前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環を構成する炭素が、１個以上、置換されたピペリジン誘導体の骨格でもよく、置換される場合、例えば、Ｃ－２の炭素以外の炭素原子であることが好ましい。前記炭素は、例えば、窒素、酸素、または硫黄で置換されてもよい。前記ピペリジン骨格は、例えば、ピペリジンの６員環内に、例えば、炭素－炭素二重結合、または、炭素－窒素二重結合を含んでもよい。前記ピペリジン骨格において、ピペリジンの６員環を構成する炭素および窒素は、例えば、水素基が結合してもよいし、後述するような置換基が結合してもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記ピペリジン骨格のいずれの基を介して、前記領域（Ｘ）および前記領域（Ｘｃ）と結合してもよく、好ましくは、前記６員環のいずれか一個の炭素原子と窒素であり、好ましくは、前記６員環の２位の炭素（Ｃ－２）と窒素である。前記リンカー領域（Ｌｙ）についても同様である。

　前記リンカー領域は、例えば、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基のみでもよいし、前記非ヌクレオチド構造からなる非ヌクレオチド残基と、ヌクレオチド残基とを含んでもよい。

　前記リンカー領域は、例えば、下記式（Ｉ）で表わされる。

前記式（Ｉ）中、
Ｘ^１およびＸ^２は、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨであり；
Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳであり；
Ｒ^３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基であり、
前記置換基は、ＯＨ、ＯＲ^４、ＮＨ_２、ＮＨＲ^４、ＮＲ^４Ｒ^５、ＳＨ、ＳＲ^４またはオキソ基（＝Ｏ）であり；
Ｒ^３が前記置換基の場合、置換基Ｒ^３は、１でも複数でも、存在しなくてもよく、複数の場合、同一でも異なってもよく；
Ｒ^４およびＲ^５は、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよく；
Ｌ^１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨもしくはＳＲ^ａで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｌ^２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖であり、ここで、アルキレン炭素原子上の水素原子は、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されても置換されていなくてもよく、または、
Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が、酸素原子で置換されたポリエーテル鎖であり、
ただし、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接せず；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基であり；
ｌは、１または２であり；
ｍは、０～３０の範囲の整数であり；
ｎは、０～３０の範囲の整数であり；
環Ａは、前記環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素、または硫黄で置換されてもよく、
前記環Ａ内に、炭素－炭素二重結合、または、炭素－窒素二重結合を含んでもよい。前記リンカー領域（Ｌｘ）が前記式（Ｉ）で表わされる場合、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合する。また、前記リンカー領域（Ｌｙ）が前記式（Ｉ）で表わされる場合、前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）は、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｙ）に結合する。ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよく、存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記構造（Ｉ)である。

　前記式（Ｉ）中、Ｘ^１およびＸ^２は、例えば、それぞれ独立して、Ｈ_２、Ｏ、ＳまたはＮＨである。前記式（Ｉ）中において、Ｘ^１がＨ_２であるとは、Ｘ^１が、Ｘ^１の結合する炭素原子とともに、ＣＨ_２（メチレン基）を形成することを意味する。Ｘ^２についても同様である。

　前記式（Ｉ）中、環Ａにおいて、ｌは、１または２である。ｌ＝１の場合、環Ａは、５員環であり、例えば、前記ピロリジン骨格である。前記ピロリジン骨格は、例えば、プロリン骨格、プロリノール骨格等があげられ、これらの二価の構造が例示できる。ｌ＝２の場合、環Ａは、６員環であり、例えば、前記ピペリジン骨格である。環Ａは、環Ａ上のＣ－２以外の１個の炭素原子が、窒素、酸素または硫黄で置換されてもよい。また、環Ａは、環Ａ内に、炭素－炭素二重結合または炭素－窒素二重結合を含んでもよい。環Ａは、例えば、Ｌ型およびＤ型のいずれでもよい。

　前記式（Ｉ）中、Ｙ^１およびＹ^２は、それぞれ独立して、単結合、ＣＨ_２、ＮＨ、ＯまたはＳである。

　前記式（Ｉ）中、Ｒ^３は、環Ａ上のＣ－３、Ｃ－４、Ｃ－５またはＣ－６に結合する水素原子または置換基である。前記置換基は、ＯＨ、ＯＲ^４、ＮＨ_２、ＮＨＲ^４、ＮＲ^４Ｒ^５、ＳＨ、ＳＲ^４またはオキソ基（＝Ｏ）である。Ｒ^３が前記置換基の場合、置換基Ｒ^３は、１でも複数でも、存在しなくてもよく、複数の場合、同一でも異なってもよい。Ｒ^４およびＲ^５は、置換基または保護基であり、同一でも異なってもよい。

　前記置換基は、例えば、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクリルアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリールアルキル、シリル、シリルオキシアルキル等があげられる。以下、同様である。

　前記保護基は、例えば、反応性の高い官能基を不活性に変換する官能基であり、公知の保護基等があげられる。前記保護基は、例えば、文献（J．　F．　W．　McOmie，　「Protecting　Groups　in　Organic　Chemistry」Prenum　Press，　London　and　New　York，　1973）の記載を援用できる。前記保護基は、特に制限されず、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基、ビス（２－アセトキシエチルオキシ）メチル（ＡＣＥ）基、トリイソプロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）基、１－（２－シアノエトキシ）エチル（ＣＥＥ）基、２－シアノエトキシメチル（ＣＥＭ）基およびトリルスルフォニルエトキシメチル（ＴＥＭ）基、ジメトキシトリチル（ＤＭＴｒ）等があげられる。Ｒ^３がＯＲ^４の場合、前記保護基は、特に制限されず、例えば、ＴＢＤＭＳ基、ＡＣＥ基、ＴＯＭ基、ＣＥＥ基、ＣＥＭ基およびＴＥＭ基等があげられる。この他にも、後述するシリル含有基等もあげられる。以下、同様である。

　前記式（Ｉ）中、Ｌ^１は、ｎ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ａ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ａ、ＮＲ^ａＲ^ｂ、ＳＨもしくはＳＲ^ａで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^１は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。前記ポリエーテル鎖は、例えば、ポリエチレングリコールである。なお、Ｙ^１が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、ＯＲ^１に結合するＬ^１の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^１がＯの場合、その酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^１の酸素原子とＬ^１の酸素原子は隣接しない。

　前記式（Ｉ）中、Ｌ^２は、ｍ個の原子からなるアルキレン鎖である。前記アルキレン炭素原子上の水素原子は、例えば、ＯＨ、ＯＲ^ｃ、ＮＨ_２、ＮＨＲ^ｃ、ＮＲ^ｃＲ^ｄ、ＳＨもしくはＳＲ^ｃで置換されてもよいし、置換されていなくてもよい。または、Ｌ^２は、前記アルキレン鎖の一つ以上の炭素原子が酸素原子で置換されたポリエーテル鎖でもよい。なお、Ｙ^２が、ＮＨ、ＯまたはＳの場合、Ｙ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、ＯＲ^２に結合するＬ^２の原子は炭素であり、酸素原子同士は隣接しない。つまり、例えば、Ｙ^２がＯの場合、その酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接せず、ＯＲ^２の酸素原子とＬ^２の酸素原子は隣接しない。

　Ｌ^１のｎおよびＬ^２のｍは、特に制限されず、それぞれ、下限は、例えば、０であり、上限も、特に制限されない。ｎおよびｍは、例えば、前記リンカー領域（Ｌｘ）の所望の長さに応じて、適宜設定できる。ｎおよびｍは、例えば、製造コストおよび収率等の点から、それぞれ、０～３０が好ましく、より好ましくは０～２０であり、さらに好ましくは０～１５である。ｎとｍは、同じでもよいし（ｎ＝ｍ）、異なってもよい。ｎ＋ｍは、例えば、０～３０であり、好ましくは０～２０であり、より好ましくは０～１５である。

　Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＲ^ｄは、それぞれ独立して、置換基または保護基があげられる。前記置換基および前記保護基は、例えば、前述と同様である。

　前記式（Ｉ）において、水素原子は、例えば、それぞれ独立して、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩ等のハロゲンに置換されてもよい。

　前記リンカー領域（Ｌｘ）が、前記式（Ｉ）で表わされる場合、前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）は、例えば、それぞれ、－ＯＲ^１－または－ＯＲ^２－を介して、前記リンカー領域（Ｌｘ）に結合する。ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、存在しても存在しなくてもよい。Ｒ^１およびＲ^２が存在する場合、Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、ヌクレオチド残基または前記式（Ｉ)の構造である。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記ヌクレオチド残基の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、ヌクレオチド残基Ｒ^１および／またはＲ^２を除く前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基と、前記ヌクレオチド残基とから形成される。Ｒ^１および／またはＲ^２が前記式（Ｉ）の構造の場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基が、２つ以上連結された構造となる。前記式（Ｉ）の構造は、例えば、１個、２個、３個または４個含んでもよい。このように、前記構造を複数含む場合、前記（Ｉ）の構造は、例えば、直接連結されてもよいし、前記ヌクレオチド残基を介して結合してもよい。他方、Ｒ^１およびＲ^２が存在しない場合、前記リンカー領域（Ｌｘ）は、例えば、前記式（Ｉ）の構造からなる前記非ヌクレオチド残基のみから形成される。また、前記リンカー領域（Ｌｙ）が、前記式（Ｉ）で表わされる場合、例えば、前記領域（Ｙｃ）、前記領域（Ｙ）および前記リンカー領域（Ｌｙ）について、前記リンカー領域（Ｌｘ）の説明を援用できる。

　前記領域（Ｘｃ）および前記領域（Ｘ）、ならびに、前記領域（Ｙｃ）および前記領域（Ｙ）と、前記－ＯＲ^１－および－ＯＲ^２－との結合の組合せは、特に制限されず、例えば、以下のいずれかの条件があげられる。
条件（１）
前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（２）
前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（３）
前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。
条件（４）
前記領域（Ｘｃ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記領域（Ｘ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合し、
前記領域（Ｙｃ）は、－ＯＲ^２－を介して、前記領域（Ｙ）は、－ＯＲ^１－を介して、前記式（Ｉ）の構造と結合する。

　前記式（Ｉ）の構造は、例えば、下記式（Ｉ－１）～式（Ｉ－９）が例示でき、下記式において、ｎおよびｍは、前記式（Ｉ）と同じである。下記式において、ｑは、０～１０の整数である。

　前記式（Ｉ－１）～（Ｉ－９）において、ｎ、ｍおよびｑは、特に制限されず、前述の通りである。具体例として、前記式（Ｉ－１）において、ｎ＝８、前記（Ｉ－２）において、ｎ＝３、前記式（Ｉ－３）において、ｎ＝４または８、前記（Ｉ－４）において、ｎ＝７または８、前記式（Ｉ－５）において、ｎ＝３およびｍ＝４、前記（Ｉ－６）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記式（Ｉ－７）において、ｎ＝８およびｍ＝４、前記（Ｉ－８）において、ｎ＝５およびｍ＝４、前記式（Ｉ－９）において、ｑ＝１およびｍ＝４があげられる。前記式（Ｉ－４）の一例（ｎ＝８）を、下記式（Ｉ－４ａ）に、前記式（Ｉ－８）の一例（ｎ＝５、ｍ＝４）を、下記式（Ｉ－８ａ）に示す。

　本発明において、「アルキル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキル基を含む。前記アルキルの炭素数は、特に制限されず、例えば、１～３０であり、好ましくは、１～６または１～４である。前記アルキル基は、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル等があげられる。好ましくは、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ぺンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル等があげられる。

　本発明において、「アルケニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルケニルを含む。前記アルケニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の二重結合を有するもの等があげられる。前記アルケニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２～８である。前記アルケニルは、例えば、ビニル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、１，３－ブタジエニル、３－メチル－２－ブテニル等があげられる。

　本発明において、「アルキニル」は、例えば、直鎖状または分枝状のアルキニルを含む。前記アルキニルは、前記アルキルにおいて、１個または複数の三重結合を有するもの等があげられる。前記アルキニルの炭素数は、特に制限されず、例えば、前記アルキルと同様であり、好ましくは２～８である。前記アルキニルは、例えば、エチニル、プロピニル、ブチニル等があげられる。前記アルキニルは、例えば、さらに、１個または複数の二重結合を有してもよい。

　本発明において、「アリール」は、例えば、単環芳香族炭化水素基および多環芳香族炭化水素基を含む。前記単環芳香族炭化水素基は、例えば、フェニル等があげられる。前記多環芳香族炭化水素基は、例えば、１－ナフチル、２－ナフチル、１－アントリル、２－アントリル、９－アントリル、１－フェナントリル、２－フェナントリル、３－フェナントリル、４－フェナントリル、９－フェナントリル等があげられる。好ましくは、例えば、フェニル、１－ナフチルおよび２－ナフチル等のナフチル等があげられる。

　本発明において、「ヘテロアリール」は、例えば、単環芳香族複素環式基および縮合芳香族複素環式基を含む。前記ヘテロアリールは、例えば、フリル（例：２－フリル、３－フリル）、チエニル（例：２－チエニル、３－チエニル）、ピロリル（例：１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル）、イミダゾリル（例：１－イミダゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル）、ピラゾリル（例：１－ピラゾリル、３－ピラゾリル、４－ピラゾリル）、トリアゾリル（例：１，２，４－トリアゾール－１－イル、１，２，４－トリアゾール－３－イル、１，２，４－トリアゾール－４－イル）、テトラゾリル（例：１－テトラゾリル、２－テトラゾリル、５－テトラゾリル）、オキサゾリル（例：２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、５－オキサゾリル）、イソキサゾリル（例：３－イソキサゾリル、４－イソキサゾリル、５－イソキサゾリル）、チアゾリル（例：２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル）、チアジアゾリル、イソチアゾリル（例：３－イソチアゾリル、４－イソチアゾリル、５－イソチアゾリル）、ピリジル（例：２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル）、ピリダジニル（例：３－ピリダジニル、４－ピリダジニル）、ピリミジニル（例：２－ピリミジニル、４－ピリミジニル、５－ピリミジニル）、フラザニル（例：３－フラザニル）、ピラジニル（例：２－ピラジニル）、オキサジアゾリル（例：１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）、ベンゾフリル（例：２－ベンゾ［ｂ］フリル、－ベンゾ［ｂ］フリル、４－ベンゾ［ｂ］フリル、５－ベンゾ［ｂ］フリル、６－ベンゾ［ｂ］フリル、７－ベンゾ［ｂ］フリル）、ベンゾチエニル（例：２－ベンゾ［ｂ］チエニル、３－ベンゾ［ｂ］チエニル、４－ベンゾ［ｂ］チエニル、５－ベンゾ［ｂ］チエニル、６－ベンゾ［ｂ］チエニル、７－ベンゾ［ｂ］チエニル）、ベンズイミダゾリル（例：１－ベンゾイミダゾリル、２－ベンゾイミダゾリル、４－ベンゾイミダゾリル、５－ベンゾイミダゾリル）、ジベンゾフリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリル（例：２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、６－キノキサリニル）、シンノリニル（例：３－シンノリニル、４－シンノリニル、５－シンノリニル、６－シンノリニル、７－シンノリニル、８－シンノリニル）、キナゾリル（例：２－キナゾリニル、４－キナゾリニル、５－キナゾリニル、６－キナゾリニル、７－キナゾリニル、８－キナゾリニル）、キノリル（例：２－キノリル、３－キノリル、４－キノリル、５－キノリル、６－キノリル、７－キノリル、８－キノリル）、フタラジニル（例：１－フタラジニル、５－フタラジニル、６－フタラジニル）、イソキノリル（例：１－イソキノリル、３－イソキノリル、４－イソキノリル、５－イソキノリル、６－イソキノリル、７－イソキノリル、８－イソキノリル）、プリル、プテリジニル（例：２－プテリジニル、４－プテリジニル、６－プテリジニル、７－プテリジニル）、カルバゾリル、フェナントリジニル、アクリジニル（例：１－アクリジニル、２－アクリジニル、３－アクリジニル、４－アクリジニル、９－アクリジニル）、インドリル（例：１－インドリル、２－インドリル、３－インドリル、４－インドリル、５－インドリル、６－インドリル、７－インドリル）、イソインドリル、フェナジニル（例：１－フェナジニル、２－フェナジニル）またはフェノチアジニル（例：１－フェノチアジニル、２－フェノチアジニル、３－フェノチアジニル、４－フェノチアジニル）等があげられる。

　本発明において、「シクロアルキル」は、例えば、環状飽和炭化水素基であり、炭素数は、例えば、３～１５である。前記シクロアルキルは、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、橋かけ環式炭化水素基、スピロ炭化水素基等があげられ、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、橋かけ環式炭化水素基等があげられる。

　本発明において、「橋かけ環式炭化水素基」は、例えば、ビシクロ［２．１．０］ペンチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチルおよびビシクロ［３．２．１］オクチル、トリシクロ［２．２．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．３．１］ノナン、１－アダマンチル、２－アダマンチル等があげられる。

　本発明において、「スピロ炭化水素基」は、例えば、スピロ［３．４］オクチル等があげられる。

　本発明において、「シクロアルケニル」は、例えば、環状の不飽和脂肪族炭化水素基を包み、炭素数は、例えば、３～７個である。前記基は、例えば、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル等があげられ、好ましくは、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等である。前記シクロアルケニルは、例えば、環中に不飽和結合を有する橋かけ環式炭化水素基およびスピロ炭化水素基も含む。

　本発明において、「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル、２－フェネチル、およびナフタレニルメチル等があげられ、「シクロアルキルアルキル」または「シクリルアルキル」は、例えば、シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル等があげられ、「ヒドロキシアルキル」は、例えば、ヒドロキシメチルおよび２－ヒドロキシエチル等があげられる。

　本発明において、「アルコキシ」は、前記アルキル－Ｏ－基を含み、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、およびｎ－ブトキシ等があげられ、「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチル等があげられ、「アミノアルキル」は、例えば、２－アミノエチル等があげられる。

　本発明において、「ヘテロシクリル」は、例えば、１－ピロリニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、１－ピロリジニル、２－ピロリジニル、３－ピロリジニル、ピロリジノン、１－イミダゾリニル、２－イミダゾリニル、４－イミダゾリニル、１－イミダゾリジニル、２－イミダゾリジニル、４－イミダゾリジニル、イミダゾリジノン、１－ピラゾリニル、３－ピラゾリニル、４－ピラゾリニル、１－ピラゾリジニル、３－ピラゾリジニル、４－ピラゾリジニル、ピペリジノン、ピペリジノ、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４－ピペリジニル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニル、ピペラジノン、２－モルホリニル、３－モルホリニル、モルホリノ、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル等があげられる。

　本発明において、「ヘテロシクリルアルキル」は、例えば、ピペリジニルメチル、ピペラジニルメチル等があげられ、「ヘテロシクリルアルケニル」は、例えば、２－ピペリジニルエテニル等があげられ、「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、ピリジルメチルおよびキノリン－３－イルメチル等があげられる。

　本発明において、「シリル」は、式Ｒ_３Ｓｉ－で表される基を含み、Ｒは、独立して、前記アルキル、アリールおよびシクロアルキルから選択でき、例えば、トリメチルシリル基、tert-ブチルジメチルシリル基等があげられ、「シリルオキシ」は、例えば、トリメチルシリルオキシ基等があげられ、「シリルオキシアルキル」は、例えば、トリメチルシリルオキシメチル等があげられる。

　本発明において、「アルキレン」は、例えば、メチレン、エチレン、およびプロピレン等があげられる。

　本発明において、前述した各種基は、置換されてもよい。前記置換基は、例えば、ヒドロキシ、カルボキシ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル（例：ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＦ_３、ＣＨ_２ＣＣｌ_３）、ニトロ、ニトロソ、シアノ、アルキル（例：メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチル）、アルケニル（例：ビニル）、アルキニル（例：エチニル）、シクロアルキル（例：シクロプロピル、アダマンチル）、シクロアルキルアルキル（例：シクロヘキシルメチル、アダマンチルメチル）、シクロアルケニル（例：シクロプロペニル）、アリール（例：フェニル、ナフチル）、アリールアルキル（例：ベンジル、フェネチル）、ヘテロアリール（例：ピリジル、フリル）、ヘテロアリールアルキル（例：ピリジルメチル）、ヘテロシクリル（例：ピペリジル）、ヘテロシクリルアルキル（例：モルホリルメチル）、アルコキシ（例：メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ）、ハロゲン化アルコキシ（例：ＯＣＦ_３）、アルケニルオキシ（例：ビニルオキシ、アリルオキシ）、アリールオキシ（例：フェニルオキシ）、アルキルオキシカルボニル（例：メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）、アリールアルキルオキシ（例：ベンジルオキシ）、アミノ［アルキルアミノ（例：メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ）、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ）、アリールアルキルアミノ（例：ベンジルアミノ、トリチルアミノ）、ヒドロキシアミノ］、アルキルアミノアルキル（例：ジエチルアミノメチル）、スルファモイル、オキソ等があげられる。

４．本発明のｓｓＮｃ分子の合成方法
　本発明のｓｓＮｃ分子の合成方法は、特に制限されず、従来公知の方法が採用できる。前記合成方法は、例えば、遺伝子工学的手法による合成法、化学合成法等があげられる。遺伝子工学的手法は、例えば、インビトロ転写合成法、ベクターを用いる方法、ＰＣＲカセットによる方法があげられる。前記ベクターは、特に制限されず、プラスミド等の非ウイルスベクター、ウイルスベクター等があげられる。前記化学合成法は、特に制限されず、例えば、ホスホロアミダイト法およびＨ－ホスホネート法等があげられる。前記化学合成法は、例えば、市販の自動核酸合成機を使用可能である。前記化学合成法は、一般に、アミダイトが使用される。前記アミダイトは、特に制限されず、市販のアミダイトとして、例えば、ＲＮＡ　Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ（２’－Ｏ－ＴＢＤＭＳｉ、商品名、三千里製薬）、ＡＣＥアミダイトおよびＴＯＭアミダイト、ＣＥＥアミダイト、ＣＥＭアミダイト、ＴＥＭアミダイト等があげられる。

５．組成物
　本発明の発現抑制用組成物は、前述のように、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制するための組成物であり、前記本発明のｓｓＮｃ分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明のｓｓＮｃ分子を含むことが特徴であり、その他の構成は、何ら制限されない。本発明の発現抑制用組成物は、例えば、発現抑制用試薬ということもできる。

　本発明によれば、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子が存在する対象に投与することで、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制を行うことができる。

　また、本発明の薬学的組成物は、前述のように、前記本発明のｓｓＮｃ分子を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、前記本発明のｓｓＮｃ分子を含むことが特徴であり、その他の構成は何ら制限されない。本発明の薬学的組成物は、例えば、医薬品ということもできる。

　本発明によれば、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子が原因となる疾患の患者に投与することで、前記遺伝子の発現を抑制し、前記疾患を治療できる。本発明において、「治療」は、前述のように、例えば、前記疾患の予防、疾患の改善、予後の改善の意味を含み、いずれでもよい。

　本発明において、治療の対象となる疾患は、特に制限されず、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子の発現が原因となる疾患があげられる。前記疾患は、例えば、加齢黄班変性症等の黄班変性症、糖尿病性網膜症、肺癌、大腸癌、胃癌、乳癌、脳腫瘍等があげられる。

　本発明の発現抑制用組成物および薬学的組成物（以下、組成物という）は、その使用方法は、特に制限されず、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子を有する投与対象に、前記ｓｓＮｃ分子を投与すればよい。

　前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象に応じて適宜決定できる。前記投与対象が培養細胞の場合、例えば、トランスフェクション試薬を使用する方法、エレクトロポレーション法等があげられる。

　本発明の組成物は、例えば、本発明のｓｓＮｃ分子のみを含んでもよいし、さらにその他の添加物を含んでもよい。前記添加物は、特に制限されず、例えば、薬学的に許容された添加物が好ましい。前記添加物の種類は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。

　本発明の組成物において、前記ｓｓＮｃ分子は、例えば、前記添加物と複合体を形成してもよい。前記添加物は、例えば、複合化剤ということもできる。前記複合体形成により、例えば、前記ｓｓＮｃ分子を効率よくデリバリーすることができる。前記ｓｓＮｃ分子と前記複合化剤との結合は、特に制限されず、例えば、非共有結合があげられる。前記複合体は、例えば、包接複合体があげられる。

　前記複合化剤は、特に制限されず、ポリマー、シクロデキストリン、アダマンチン等があげられる。前記シクロデキストリンは、例えば、線状シクロデキストリンコポリマー、線状酸化シクロデキストリンコポリマー等があげられる。

　前記添加剤は、この他に、例えば、担体、標的細胞への結合物質、縮合剤、融合剤、賦形剤等があげられる。

　前記担体は、例えば、高分子が好ましく、より好ましくは、生体高分子である。前記担体は、例えば、生分解性が好ましい。前記担体は、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、グロブリン等のタンパク質；例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸等の糖質；脂質等があげられる。前記担体は、例えば、合成ポリアミノ酸等の合成ポリマーも使用できる。前記ポリアミノ酸は、例えば、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸、スチレン－マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル－マレイン酸無水物コポリマー、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸）、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマー、又はポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ)等があげられる。

　前記結合物質は、例えば、甲状腺刺激ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントプロテインＡ、ムチン糖質、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビオチン、ネプロキシン（Ｎｅｐｒｏｘｉｎ)、ＲＧＤペプチド、ＲＤＧペプチド擬似体等があげられる。

　前記融合剤および縮合剤は、例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）等のポリアミノ鎖等があげられる。ＰＥＩは、例えば、直鎖状および分岐状のいずれでもよく、また、合成物および天然物のいずれでもよい。前記ＰＥＩは、例えば、アルキル置換されてもよいし、脂質置換されてもよい。また、前記融合剤は、この他に、例えば、ポリヒスチジン、ポリイミダゾール、ポリピリジン、ポリプロピレンイミン、メリチン、ポリアセタール物質（例えば、カチオン性ポリアセタール等）等が使用できる。前記融合剤は、例えば、αらせん構造を有してもよい。前記融合剤は、例えば、メリチン等の膜崩壊剤でもよい。

　本発明の組成物は、例えば、前記複合体の形成等について、米国特許第６，５０９，３２３号、米国特許公報第２００３／０００８８１８号、ＰＣＴ／ＵＳ０４／０７０７０号等を援用できる。

　前記添加剤は、この他に、例えば、両親媒性分子があげられる。前記両親媒性分子は、例えば、疎水性領域および親水性領域を有する分子である。前記分子は、例えば、ポリマーが好ましい。前記ポリマーは、例えば、二次構造を有するポリマーであり、反復性の二次構造を有するポリマーが好ましい。具体例としては、例えば、ポリペプチドが好ましく、より好ましくは、αらせん状ポリペプチド等である。

　前記両親媒性ポリマーは、例えば、２つ以上の両親媒性サブユニットを有するポリマーでもよい。前記サブユニットは、例えば、少なくとも１つの親水性基および１つの疎水性基を有する環状構造を有するサブユニットがあげられる。前記サブユニットは、例えば、コール酸等のステロイド、芳香族構造等を有してもよい。前記ポリマーは、例えば、芳香族サブユニット等の環状構造サブユニットとアミノ酸の両方を有してもよい。

６．発現抑制方法
　本発明の発現抑制方法は、前述のように、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する方法であって、前記本発明のｓｓＮｃ分子を使用することを特徴とする。本発明の発現抑制方法は、前記本発明のｓｓＮｃ分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。

　本発明の発現抑制方法において、前記遺伝子の発現抑制のメカニズムは、特に制限されず、例えば、ＲＮＡ干渉またはＲＮＡ干渉様の現象による発現抑制があげられる。ここで、本発明の発現抑制方法は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制するＲＮＡ干渉を誘導する方法であり、前記本発明のｓｓＮｃ分子を使用することを特徴とする発現誘導方法ともいえる。

　本発明の発現抑制方法は、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子が存在する対象に、前記ｓｓＮｃ分子を投与する工程を含む。前記投与工程により、例えば、前記投与対象に前記ｓｓＮｃ分子を接触させる。前記投与対象は、例えば、細胞、組織または器官があげられる。前記投与対象は、例えば、ヒト、ヒトを除く非ヒト哺乳類等の非ヒト動物があげられる。前記投与は、例えば、ｉｎ　ｖｉｖｏでもｉｎ　ｖｉｔｒｏでもよい。

　本発明の発現抑制方法は、例えば、前記ｓｓＮｃ分子を単独で投与してもよいし、前記ｓｓＮｃ分子を含む前記本発明の組成物を投与してもよい。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類に応じて適宜選択できる。

７．治療方法
　本発明の疾患の治療方法は、前述のように、前記本発明のｓｓＮｃ分子を、患者に投与する工程を含み、前記ｓｓＮｃ分子が、前記発現抑制配列として、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。本発明の治療方法は、前記本発明のｓｓＮｃ分子を使用することが特徴であって、その他の工程および条件は、何ら制限されない。

　本発明の治療方法は、例えば、前記本発明の発現抑制方法等を援用できる。前記投与方法は、特に制限されず、例えば、経口投与および非経口投与のいずれでもよい。

８．ｓｓＮｃ分子の使用
　本発明の使用は、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制のための、前記本発明のｓｓＮｃ分子の使用である。また、本発明の使用は、ＲＮＡ干渉の誘導のための、前記本発明のｓｓＮｃ分子の使用である。

　本発明の核酸分子は、ＶＥＧＦ遺伝子が原因となる疾患の治療に使用するための核酸分子であって、前記核酸分子は、前記本発明のｓｓＮｃ分子であり、前記ｓｓＮｃ分子が、前記発現抑制配列として、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする。

　以下、実施例等により、本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

（実施例１）ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＴＬＲ３タンパク質のリン酸化の抑制
　樹状細胞（ＤＣ）に、核酸分子としてｎｋＲＮＡ、ＰｎｋＲＮＡまたはｓｉＲＮＡをトランスフェクションし、リン酸化ＴＬＲ３タンパク質の検出ならびにＩＦＮタンパク質の検出を行った。

（１）核酸分子の調製
　実施例の核酸分子として、ｎｋＲＮＡ（ＮＫ－００６８）およびＰｎｋＲＮＡ（ＰＫ－００３１）、比較例の核酸分子として、ｓｉＲＮＡ（ＮＩ－００４１）を合成した。ＰｎｋＲＮＡにおいて、ＬｘおよびＬｙは、それぞれリンカー領域ＬｘおよびＬｙであり、それぞれ、Ｌ－プロリンジアミドアミダイトを用いて下記構造式とした。各配列において、下線部は、ヒトＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制配列である。
ｎｋＲＮＡ（配列番号１）
　5’-AACCUCACCAAGGCCAGCACUUCCCCACACCGGAAGUGCUGGCCUUGGUGAGGUUUCUUCGG-3’
ＰｎｋＲＮＡ（配列番号２）
　5’-AACCUCACCAAGGCCAGCACUUCC-Lx-GGAAGUGCUGGCCUUGGUGAGGUUUC-Ly-G-3’
ｓｉＲＮＡ
　5’-　ACCUCACCAAGGCCAGCACTT-3’　（配列番号３）
　3’-TTUGGAGUGGUUCCGGUCGUG　-5’　（配列番号４）

（２）リン酸化ＴＬＲ３タンパク質の検出
　ＧＭ－ＣＦＳを用いて、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ（メス、１０ｗ／０）の骨髄分化により、ＴＬＲ３タンパク質を発現する樹状細胞（ＤＣ）を調製した。１×１０^６個のＤＣに、２００ｎｍｏｌ/Ｌとなるように前記各核酸分子をトランスフェクションした。トランスフェクションは、市販の試薬（Ｈｉｐｅｒ　Ｆｅｃｔ、Ｑｉａｇｅｎ社）を用い、使用説明書に従った。トランスフェクションから１時間、回収した細胞を、ＴＮＥ緩衝液（Ｔｒｉｓ、ＥＤＴＡおよび界面活性剤ＮＰ－４０）を用いて、溶解した。そして、抗リン酸化ＴＬＲ３抗体（ＩＭＧＥＮＥＸ社）および抗ＴＬＲ３抗体（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ社）を用いて、ＴＬＲタンパク質のリン酸化をウェスタンブロッティングにより検出した。また、ポジティブコントロール（Ｐ（Ｉ：Ｃ））として、ＴＬＲ３リガンドを使用した。

　これらの結果を、図４に示す。図４に示すように、ｓｉＲＮＡは、ＴＬＲ３タンパク質のリン酸化を増加させたが、ｎｋＲＮＡおよびＰｎｋＲＮＡは、リン酸化を増加させなかった。

（３）ＤＣにおけるＩＦＮタンパク質の発現の検出
　１×１０^６個の前記ＤＣに、５０ｎｍｏｌ／Ｌまたは２００ｎｍｏｌ／Ｌとなるように前記各核酸分子をトランスフェクションした。トランスフェクションから２４時間後、ＥＬＩＳＡキットを用いて、培養上清におけるＩＦＮβタンパク質およびＩＦＮγタンパク質の発現量を測定した。

　これらの結果を、図５に示す。図５（Ａ）は、ＩＦＮβタンパク質の発現量を示すグラフであり、図５（Ｂ）は、ＩＦＮγタンパク質の発現量を示すグラフである。図５に示すように、ｎｋＲＮＡおよびＰｎｋＲＮＡによれば、ｓｉＲＮＡと比較して、ＩＦＮβタンパク質およびＩＦＮγタンパク質の発現量を著しく抑制できた。

（４）ＶＥＧＦタンパク質の発現抑制
　１×１０^６個の前記ＤＣに、５０ｎｍｏｌ／Ｌまたは２００ｎｍｏｌ／Ｌとなるように前記各核酸分子をトランスフェクションした。トランスフェクションから７２時間後、ＥＬＩＳＡにより、ＶＥＧＦタンパク質の発現量を測定した。また、前記各核酸分子における前記発現抑制配列を、機能しないスクランブル配列に置換したネガティブコントロール（ＮＣ）の核酸分子についても、同様に発現量を測定した。
ＮＣ　ｎｋＲＮＡ（配列番号９）
5’-AGGCACCCCAACCGCACUAAUUCCCCACACCGGAAUUAGUGCGGUUGGGGUGCCUUCUUCGG-3’
ＮＣ　ＰｎｋＲＮＡ（配列番号１０）
5’-AGGCACCCCAACCGCACUAAUUCC-Lx-GGAAUUAGUGCGGUUGGGGUGCCUUC-Ly-G-3’
ＮＣ　ｓｉＲＮＡ
5’-　GGCACCCCAACCGCACUAATT-3’　（配列番号１１）
3’-TTCCGUGGGGUUGGCGUGAUU　-5’　（配列番号１２）

　なお、コントロール１として、前記核酸分子および前記トランスフェクション試薬を添加していない細胞についても、ＶＥＧＦタンパク質の発現量をＥＬＩＳＡにより測定した（－）。また、コントロール２として、トランスフェクションにおいて、前記核酸分子を未添加とし、前記トランスフェクション試薬のみを添加した細胞についても、ＶＥＧＦタンパク質の発現量をＥＬＩＳＡにより測定した（ｍｏｃｋ）。

　これらの結果を、図６に示す。図６は、ＶＥＧＦタンパク質の発現量を示すグラフである。図６に示すように、ｎｋＲＮＡおよびＰｎｋＲＮＡによれば、ＶＥＧＦタンパク質の発現が抑制された。この結果から、ｎｋＲＮＡおよびＰｎｋＲＮＡによれば、ＴＬＲ３の活性化を抑制した状態で、ターゲットであるＶＥＧＦタンパク質の発現を抑制できることがわかった。

（実施例２）ｉｎ　ｖｉｖｏにおけるＩＦＮタンパク質の発現抑制
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ベントバルビタールを投与した後、眼から、前記実施例１の核酸分子（ｎｋＲＮＡ、ＰｎｋＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ）１μｇを投与した。２４時間後、眼を摘出し、血液を採取した。そして、眼から単離したトータルＲＮＡについて、ＩＦＮβおよびＩＦＮγのｍＲＮＡの発現量を測定した。ｍＲＮＡは、下記プライマーを用いた定量ＲＴ－ＰＣＲにより測定した。また、採取した血清について、ＩＦＮβおよびＩＦＮγのタンパク質を測定した。タンパク質は、ＩＦＮβタンパク質用のＥＬＩＳＡキット（ＰＢＬ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｌａｂ．社）、ＩＦＮγタンパク質用のＥＬＩＳＡキット（ｅＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ社）を使用した。
ＩＦＮβ用プライマーセット
　　5’-ccctatggagatgacggaga-3’　（配列番号５）
　　5’-acccagtgctggagaaattg-3’　（配列番号６）
ＩＦＮγ用プライマーセット
　　5’-gcgtcattgaatcacacctg-3’　（配列番号７）
　　5’-gacctgtgggttgttgacct-3’　（配列番号８）

　これらの結果を、図７および図８に示す。図７は、血清におけるＩＦＮタンパク質量を示すグラフであり、図８は、眼におけるＩＦＮのｍＲＮＡ発現量を示すグラフである。図７に示すように、ｓｉＲＮＡと比較して、ｎｋＲＮＡおよびＰｎｋＲＮＡによれば、ＩＦＮタンパク質の発現量が著しく抑制された。

　以上、実施形態を参照して本願発明を説明したが、本願発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本願発明の構成や詳細には、本願発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。

　この出願は、２０１２年３月７日に出願された日本出願特願２０１２－０５０９４７を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。

　本発明の一本鎖核酸分子によれば、ＴＬＲ３の活性化を抑制した状態で、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制が可能である。すなわち、本発明によれば、ＴＬＲ３のリン酸化によるＴＬＲ３シグナル経路の活性化を抑制できるため、結果的にＩＦＮ等のサイトカインの発現を抑制できる。このため、サイトカインによる副作用を回避して、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制を実現できる。したがって、本発明は、例えば、臨床医療において、副作用を抑制した核酸治療として極めて有用な技術といえる。

Claims

ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子であって、
５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、
前記内部領域（Ｚ）が、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、
前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、
前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的であり、
前記内部領域（Ｚ）、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の少なくとも一つが、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含むことを特徴とする一本鎖核酸分子。
前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とが連結している、請求項１記載の一本鎖核酸分子。
前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とが連結している、請求項１または２記載の一本鎖核酸分子。
前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とが連結し、
前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とが連結している、請求項１記載の一本鎖核酸分子。
前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記式（１）および（２）の条件を満たす、請求項１から４のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
　　Ｚ＝Ｘ＋Ｙ　　　・・・（１）
　　Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ　・・・（２）
前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記（ａ）～（ｄ）のいずれかの条件を満たす、請求項１から５のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（３）
　　　Ｙ＝Ｙｃ　・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（５）
　　　Ｙ＞Ｙｃ　・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
　　　Ｘ＞Ｘｃ　・・・（７）
　　　Ｙ＞Ｙｃ　・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
　　　Ｘ＝Ｘｃ　・・・（９）
　　　Ｙ＝Ｙｃ　・・・（１０）
前記（ａ）～（ｄ）において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差が、下記条件を満たす、請求項６記載の一本鎖核酸分子。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１、２または３　・・・（１１）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝０　　　　　　　・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝０　　　　　　　・・・（１３）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝１、２または３　・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝１、２または３　・・・（１５）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝１、２または３　・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
　　　Ｘ－Ｘｃ＝０　　　　　　　・・・（１７）
　　　Ｙ－Ｙｃ＝０　　　　　　　・・・（１８）
前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）が、１９塩基以上である、請求項１から７のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を含み、
前記発現抑制配列が、配列番号１３の塩基配列を含む、請求項８記載の一本鎖核酸分子。
GUGCUGGCCUUGGUGAGGU　（配列番号１３）
前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１～１１塩基である、請求項１から９のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１～１１塩基である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
ＲＮＡ分子である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
前記一本鎖核酸分子において、塩基数の合計が、５０塩基以上である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子。
ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
請求項１から１３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を含むことを特徴とする、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制用組成物。
ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する方法であって、
請求項１から１３のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を使用することを特徴とする、ＶＥＧＦ遺伝子の発現抑制方法。
ＶＥＧＦ遺伝子の発現に起因する疾患の治療方法であって、
請求項１から１７のいずれか一項に記載の一本鎖核酸分子を、患者に投与する工程を含み、
前記一本鎖核酸分子が、前記発現抑制配列として、ＶＥＧＦ遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする治療方法。