WO2013128736A1 - Composition for inhibiting angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet light - Google Patents

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WO2013128736A1
WO2013128736A1 PCT/JP2012/080939 JP2012080939W WO2013128736A1 WO 2013128736 A1 WO2013128736 A1 WO 2013128736A1 JP 2012080939 W JP2012080939 W JP 2012080939W WO 2013128736 A1 WO2013128736 A1 WO 2013128736A1
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methionine
composition
angiogenesis
exposure
skin
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洋介 東條
華代 高瀬
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株式会社資生堂
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for inhibiting angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. .
  • UV-A long-wavelength ultraviolet rays
  • UV-B medium-wavelength ultraviolet rays
  • UV-C short-wavelength ultraviolet rays
  • Non-patent Document 1 Examples of diseases involving ultraviolet exposure and angiogenesis include skin cancer and rosacea (Patent Document 1).
  • collagen production promoting compositions Conventionally, collagen production promoting compositions, hyaluronic acid production promoting compositions, matrix-degrading enzyme (MMP) production inhibiting compositions, etc. have been used to suppress and / or improve the deterioration of skin conditions, particularly wrinkle formation.
  • MMP matrix-degrading enzyme
  • these compositions cannot suppress angiogenesis, they cannot suppress the deterioration of the skin condition accompanying angiogenesis promoted by ultraviolet exposure. Therefore, there is a need to develop a composition that can be used on a daily basis and that suppresses the deterioration of skin conditions accompanied by angiogenesis that is promoted by UV exposure, particularly wrinkle formation.
  • the present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. provide.
  • the ultraviolet light may be UV-B.
  • the angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF).
  • THBS thrombospondin
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • the THBS may be THBS1.
  • the VEGF may be VEGF-A.
  • composition of the present invention may be used as a skin external preparation.
  • the external preparation for skin may be a cosmetic product.
  • the external preparation for skin may be a wrinkle inhibitor.
  • the external preparation for skin may be used as a pharmaceutical for skin diseases.
  • the skin disease may be at least one disease selected from the group consisting of skin cancer, rosacea and the like.
  • composition of the present invention may be used as food.
  • the present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof.
  • the skin disease may be at least one disease selected from the group consisting of skin cancer, rosacea and the like.
  • a composition for suppressing angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet rays comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and a derivative and / or salt thereof,
  • an external preparation for skin and a medicinal product for skin diseases including a therapeutic agent for skin diseases and a prophylactic agent for skin diseases.
  • the ultraviolet light may be UV-B.
  • the angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF).
  • THBS thrombospondin
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • the THBS may be THBS1.
  • the VEGF may be VEGF-A.
  • the present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof.
  • a cosmetic method is provided for preventing deterioration of skin conditions associated with angiogenesis promoted by UV exposure, comprising a step of administering.
  • a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof.
  • the ultraviolet light may be UV-B.
  • the angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF).
  • THBS thrombospondin
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • the THBS may be THBS1.
  • the VEGF may be VEGF-A.
  • deterioration of skin condition refers to the occurrence and / or enhancement of skin troubles including wrinkles.
  • wrinkle is a kind of skin trouble, and the pattern created by the linear depression of the skin surface is concentrated in a specific area and has irregularities in size and arrangement. The state to do.
  • angiogenesis refers to a phenomenon in which a new blood vessel is formed from an existing blood vessel.
  • vascular endothelial growth factor is a growth factor that induces the proliferation of vascular endothelial cells, the production of physiologically active substances from the endothelial cells, and the like. Acts as an activator.
  • the VEGF family includes VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, PLGF-1 and PLGF-2.
  • VEGF-A and VEGF-B have isoforms.
  • thrombospondin refers to a secreted protein that associates with an extracellular matrix and exhibits various biological functions.
  • the thrombospondin (THBS) family includes THBS1, THBS2, THBS3, THBS4.
  • the THBS1 and THBS2 have functions as inhibitors of angiogenesis and angiogenesis, and in normal skin, they are mainly present in the basement membrane region between the dermis and epidermis.
  • the expression levels of THBS and VEGF include THBS and VEGF mRNA in keratinocytes, as well as THBS and VEGF transcriptional activities in keratinocytes.
  • the amount of THBS and VEGF mRNA in the keratinocytes is measured by methods including, but not limited to, RT-PCR, Northern blotting and other solid-phase hybrid formation methods.
  • the transcriptional activity of THBS and VEGF in the keratinocytes is that chloramphenicol acetyltransferase (CAT), ⁇ -galactosidase (LacZ), luciferase (Luc), green fluorescent protein (GFP) and other reporter proteins are THBS and VEGF. It is typically measured by temporarily or permanently introducing a construct driven by the gene expression control region of the keratinocyte.
  • the expression level of THBS and VEGF may be determined as an absolute value standardized by the number of cells or the total protein amount at the time of measurement.
  • the expression levels of THBS and VEGF per container after culturing under test treatment conditions are It may be expressed as a relative value based on the expression levels of THBS and VEGF in the keratinocytes before treatment.
  • the expression levels of THBS and VEGF are the same as those in the case where the same number of cells are seeded in a plurality of the same containers, for example, wells, dishes, flasks, etc. May be standardized by the expression level of the control gene.
  • the control gene includes a so-called housekeeping gene, but is not limited thereto, and can be found by means such as a gene expression array chip.
  • housekeeping genes include, but are not limited to, 28S rRNA, 18S rRNA, glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (G3PDH), ⁇ -actin and the like.
  • Angiogenesis may be evaluated based on the vascular area quantified by methods well known to those skilled in the art.
  • immunohistochemical staining may be performed using a commercially available antibody.
  • the antibody may be any antibody that specifically recognizes blood vessels, and includes, but is not limited to, an anti-pan-endothelial cell antigen monoclonal antibody (catalog number 550563, Nippon Becton Dickinson Co., Ltd.).
  • the vessel area may be quantified using commercially available services, software, and the like.
  • the service may be an angiogenesis kit image analysis service (Kurashiki Boseki Co., Ltd.).
  • the software fair may be angiogenesis kit quantitative software (Kurashiki Boseki Co., Ltd.), image analysis software (IPLab software version 4.0, Solution Systems Co., Ltd.), or the like.
  • the angiogenesis may be evaluated depending on whether the blood vessel area before the test treatment is compared with the blood vessel area after the test treatment or the blood vessel area of each experimental group after the test treatment is compared.
  • the angiogenesis may be evaluated using an index other than the blood vessel area, or may be evaluated by combining the blood vessel area and another index.
  • the statistical processing of the expression level of THBS and VEGF and the statistical processing of the blood vessel area can be performed using methods well known to those skilled in the art.
  • the “salt” of D-methionine is any salt including a metal salt, an amine salt and the like, provided that the effect of suppressing angiogenesis promoted by UV exposure of D-methionine is not impaired.
  • the metal salt may include an alkali metal salt, an alkaline earth metal salt, and the like.
  • the amine salt may include a triethylamine salt, a benzylamine salt, or the like.
  • the “derivative” of D-methionine means that the D-methionine molecule is an amino group or a carboxyl group on the condition that the effect of suppressing angiogenesis promoted by UV exposure of D-methionine is not impaired. Or a side chain that is covalently bonded to any atomic group.
  • Any of the atomic groups includes a protecting group such as an N-phenylacetyl group or a 4,4′-dimethoxytrityl (DMT) group, and a biopolymer such as a protein, peptide, sugar, lipid, nucleic acid, or the like.
  • Synthetic polymers such as polystyrene, polyethylene, polyvinyl, and polyester, and functional groups such as ester groups, but are not limited thereto.
  • the ester group may include, for example, methyl ester, ethyl ester, other aliphatic esters, or aromatic esters.
  • Amino acids have L-isomers and D-isomers as optical isomers, but natural proteins are L-amino acids with peptide bonds, and only L-amino acids are used with the exception of bacterial cell walls. Therefore, it has been considered that mammals including humans have only L-amino acids and use only L-amino acids.
  • D-amino acids are used as a starting material for antibiotics produced by bacteria, and when L-amino acids and D-amino acid mixtures obtained in equal amounts when amino acids are chemically synthesized are L-
  • L-amino acids and D-amino acid mixtures obtained in equal amounts when amino acids are chemically synthesized are L-
  • D-amino acid is used as it is as a DL-amino acid mixture in order to save the cost of fractionating only amino acids.
  • only D-amino acids are used industrially as a substance having physiological activity.
  • D-serine is localized in the cerebrum and hippocampus and has been shown to be a regulator of NMDA receptors in the brain.
  • D-aspartate is localized in the testis and pineal gland and has been shown to be involved in the regulation of hormone secretion (Japanese Patent Laid-Open No. 2005-3558).
  • D-methionine has been shown to suppress the induction of IL-8 expression upon UV exposure (Japanese Patent Application No. 2010-222654).
  • it has not been known that D-methionine can suppress angiogenesis during UV exposure by increasing THBS1 expression and decreasing VEGF-A expression. It was. Therefore, a composition for inhibiting angiogenesis that is promoted by UV exposure, comprising D-methionine of the present invention is a novel invention.
  • the D-methionine of the present invention has the effect of increasing the expression of THBS1 and decreasing the expression of VEGF-A in keratinocytes at a concentration of 100 ⁇ M, as shown in the following examples. Further, D-methionine of the present invention has an effect of suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays when a 0.15% solution is applied to mice. Therefore, the amount of D-methionine contained in the composition of the present invention may be any content, provided that this concentration of D-methionine is delivered to cells of living skin tissue.
  • the content of D-methionine may be in the range from 0.0000015% by mass to 50% by mass or the maximum mass concentration that can be blended in the total composition of the present invention. . That is, when the composition is an external preparation, the content of methionine is preferably 0.000003% by mass to 30% by mass, and most preferably 0.00003% by mass to 3% by mass.
  • the content of D-methionine may be in the range of 0.0000001 wt% to 100 wt%.
  • the content of D-methionine is preferably 0.000001 to 80% by weight, and most preferably 0.00001 to 60% by weight.
  • the lower limit of the daily intake of D-methionine contained in the composition of the present invention may be 0.01 ng per kg body weight, preferably 0.1 ng, more preferably 1 ng.
  • the topical skin preparation of the present invention can be prepared using only D-methionine, a salt of D-methionine and / or a derivative capable of releasing D-methionine in vivo by a drug metabolizing enzyme or the like as an active ingredient.
  • other components used for external preparations for skin such as cosmetics and pharmaceuticals including quasi-drugs can be appropriately blended as necessary, as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • the other components include oils, surfactants, powders, coloring materials, water, alcohols, thickeners, chelating agents, silicones, antioxidants, ultraviolet absorbers, and humectants. , Fragrances, various medicinal ingredients, preservatives, pH adjusters, neutralizers and the like.
  • the external preparation for skin of the present invention may be any one as long as it is used for conventional cosmetics and wrinkle inhibitors, such as ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bath preparations, etc., and the dosage form is not particularly limited.
  • the pharmaceutical product of the present invention has angiogenesis that is promoted by UV exposure of D-methionine.
  • one or more kinds of pharmaceutically acceptable additives are further included on the condition that the suppressing effect is not impaired.
  • the additives include diluents and swelling agents, binders and adhesives, lubricants, glidants, plasticizers, disintegrants, carrier solvents, buffering agents, colorants, fragrances, Including, but not limited to, sweeteners, preservatives and stabilizers, adsorbents, and other pharmaceutical additives known to those skilled in the art.
  • the food of the present invention has angiogenesis that is promoted by UV exposure of D-methionine. It may contain a seasoning, a coloring agent, a preservative, and other ingredients that are acceptable as food, provided that the suppressing effect is not impaired.
  • the food of the present invention is, for example, candy, cookies, miso, French dressing, mayonnaise, French bread, soy sauce, yogurt, sprinkle, seasoning / natto sauce, natto, moromi black vinegar, etc. Either may be sufficient and it is not limited to the said illustration.
  • the graph which shows the expression level of THBS1 mRNA The graph which shows the expression level of mRNA of VEGF-A.
  • the cells were obtained using a commercially available serum-free medium (Define Keratinocyte-SFM, Gibco, Life Technologies Japan Co., Ltd.) (hereinafter referred to as “basic medium”) at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated water vapor atmosphere. For 1 day. Thereafter, the cells were cultured for 1 day in 2 mL of a basic medium supplemented with 100 ⁇ M L- or D-methionine (hereinafter referred to as “L-methionine added group” and “D-methionine added group”). As a control, a basic medium (hereinafter referred to as “PBS-added group”) to which phosphate buffered saline (PBS) was added instead of L- and D-methionine was used.
  • PBS-added group phosphate buffered saline
  • UV-B Ultraviolet irradiation
  • a self-made ultraviolet exposure device ultraviolet light
  • the test was carried out by irradiating UV light of 280 nm to 320 nm at 30 mJ / cm 2 from the top of 40 cm of the culture plate with the lid removed.
  • the amount of ultraviolet rays was measured using UV RADIOMETER UVR-3036 / S (Topcon Co., Ltd.).
  • the cells irradiated with ultraviolet rays were cultured for 16 hours at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated water vapor atmosphere.
  • LightCycler registered trademark
  • FastStart DNA Master PLUS SYBR Green I catalog number 03 515 885 001, Roche Diagnostics Inc.
  • a pair of forward and reverse primers consisting of the nucleotide sequences listed in SEQ ID NOs: 1 and 2 and SEQ ID NOs: 3 and 4 Each was used.
  • a pair of forward and reverse primers consisting of the nucleotide sequences listed in SEQ ID NOs: 5 and 6 was used.
  • PCR reaction conditions were 95 ° C, 15 minutes once, 95 ° C, 15 seconds, 65 ° C, 20 seconds and 72 ° C, 20 seconds, 42 times.
  • the expression levels of THBS1 and VEGF-A mRNA were measured using LightCycler Software Ver. 3.5 (Roche Diagnostics Inc.) and standardized with the expression level of G3PDH mRNA.
  • FIG. 1 is a graph showing the expression level of THBS1 mRNA. Each error bar represents the standard error of the value of one experiment in which the expression level of mRNA in three wells under the same conditions was determined. The expression level of THBS1 mRNA in the D-methionine addition group increased compared to the PBS addition group.
  • FIG. 2 is a graph showing the expression level of VEGF-A mRNA. Each error bar represents the standard error of the value of one experiment in which the expression level of mRNA in three wells under the same conditions was determined. The p value was calculated by Student's t test. In the figure, “**” has a p value of less than 1%, “*” in the figure has a p value of less than 5%, and “+” in the figure has a p value of 10 Indicates less than%.
  • the expression level of VEGF-A mRNA in the L-methionine addition group and the D-methionine addition group was statistically significantly lower than that in the PBS addition group.
  • UV-B Ultraviolet rays
  • the irradiation dose at the start was 36 mJ / cm 2 / time
  • the irradiation dose after the second week gradually increased
  • the irradiation dose at the 10th week was 216 mJ / cm 2 / time.
  • the total irradiation dose was 4.6 J / cm 2 .
  • the amount of ultraviolet irradiation was measured using UV RADIOMETER UVR-3036 / S (Topcon Co., Ltd.).
  • angiogenesis After the completion of ultraviolet irradiation, a sliced section was prepared and immunohistochemical staining was performed. Thin section preparation and immunohistochemical staining were performed according to standard methods well known to those skilled in the art. In the immunohistochemical staining, an anti-pan endothelial cell antigen monoclonal antibody (catalog number 550563, Nippon Becton Dickinson Co., Ltd.) was used. In order to evaluate angiogenesis, the blood vessel area in the tissue image taken under the microscope observation was quantified using image analysis software (IPLab software version 4.0, Solution Systems Co., Ltd.).
  • FIG. 3 is a photograph showing the effect of D-methionine on angiogenesis after UV irradiation.
  • the mouse epidermis was compared with the experimental group (hereinafter referred to as “ultraviolet non-irradiation conditions”) in which ultraviolet rays were not irradiated and D-methionine was not applied (hereinafter referred to as “ultraviolet rays”). It was thick in the experimental group (hereinafter referred to as “D-methionine application conditions”) of UV irradiation and D-methionine application.
  • angiogenesis in the dermis was lower under the D-methionine application condition than under the ultraviolet irradiation condition.
  • FIG. 4 is a graph showing the blood vessel area of 200 ⁇ m directly under the epidermis after ultraviolet irradiation.
  • the error bars for each experimental condition indicate the standard deviation of the measured values of the experimental results repeated 4-5 times under the same conditions.
  • the asterisk (*) indicates that the p-value is less than 5%
  • the asterisk (***) is less than 0.1%.
  • Vessel area ([mu] m 2) is in the ultraviolet non-irradiation conditions was about 900 .mu.m 2
  • the ultraviolet irradiation conditions was about 2300Myuemu 2
  • the D- methionine coating conditions was about 1600 .mu.m 2. From the above results, it was shown that D-methionine statistically significantly suppressed angiogenesis promoted by UV exposure.
  • D-methionine increased the expression level of THBS1 mRNA after UV irradiation, and statistically significantly decreased the expression level of VEGF-A mRNA.
  • D-methionine also suppressed angiogenesis upon exposure to ultraviolet light. Therefore, it was suggested that the composition containing D-methionine of the present invention can suppress the deterioration of the skin condition accompanied by angiogenesis promoted by UV exposure, particularly wrinkle formation.
  • Formulation Example 1 (Emulsion formulation) (Composition) Compounding amount (% by mass) D-methionine 0.42 Behenyl alcohol 0.2 Cetanol 0.5 Glycerin mono fatty acid ester 1.8 Hardened castor oil POE (60) 1.0 White petrolatum 2.0 Liquid paraffin 10.0 Isopropyl myristate 3.0 Methyl polysiloxane (6cs) 1.5 Concentrated glycerin 13.0 Dipropylene glycol 2.0 Carboxyvinyl polymer 0.25 Sodium hyaluronate 0.005 Potassium hydroxide Appropriate amount of lactic acid Appropriate amount of sodium edetate Appropriate amount of ethyl paraben Appropriate amount of purified water Residue 100.000
  • Formulation Example 2 (Patch) (Composition) Compounding amount (% by mass) D-methionine 0.3 Polyacrylic acid 3.0 Sodium polyacrylate 2.5 Gelatin 0.5 Sodium carboxymethylcellulose 4.0 Polyvinyl alcohol 0.3 Concentrated glycerin 14.0 1,3-butylene glycol 12.0 Aluminum hydroxide 0.1 Sodium edetate 0.03 Methylparaben 0.1 Purified water residue 100.00
  • Formulation Example 3 (tablet) (Composition) Formulation amount (mg / tablet) D-methionine 360.5 Lactose 102.4 Carboxymethylcellulose calcium 29.9 Hydroxypropylcellulose 6.8 Magnesium stearate 5.2 Crystalline cellulose 10.2 515.0
  • Formulation Example 4 (tablet) (Composition) Formulation amount (mg / tablet) Sucrose ester 70 Crystalline cellulose 74 Methylcellulose 36 Glycerin 25 D-methionine 475 N-acetylglucosamine 200 Hyaluronic acid 150 Vitamin E 30 Vitamin B6 20 Vitamin B2 10 ⁇ -Lipoic acid 20 Coenzyme Q10 40 Ceramide (konjac extract) 50 L-proline 300 1500
  • Formulation Example 5 (soft capsule) (Composition) Blending amount (mg / 1 capsule) Edible soybean oil 530 Eucommia extract 50 Carrot extract 50 D-methionine 100 Royal Jelly 50 Maca 30 GABA 30 Beeslow 60 Gelatin 375 Glycerin 120 Glycerin fatty acid ester 105 1500
  • Formulation Example 6 soft capsule (Composition) Blending amount (mg / 1 capsule) Brown rice germ oil 659 D-methionine 500 Resveratrol 1 Lotus germ extract 100 Elastin 180 DNA 30 Folic acid 30 1500
  • Formulation Example 7 (granule) (Composition) Blending amount (mg / pack) D-methionine 400 Vitamin C 100 Soy isoflavone 250 Reduced lactose 300 Soybean oligosaccharide 36 Erythritol 36 Dextrin 30 Fragrance 24 Citric acid 24 1200
  • Formulation Example 8 (Drink) (Composition) Compounding amount (in g / 60 mL) Eucommia extract 1.6 Carrot extract 1.6 D-methionine 1.6 Reduced maltose starch syrup 28 Erythritol 8 Citric acid 2 Fragrance 1.3 N-acetylglucosamine 1 Hyaluronic acid Na 0.5 Vitamin E 0.3 Vitamin B6 0.2 Vitamin B2 0.1 ⁇ -Lipoic acid 0.2 Coenzyme Q10 1.2 Ceramide (konjac extract) 0.4 L-proline 2 Purified water residue 60
  • rice bran that produces a large amount of D-methionine may be used.
  • it can be selected by quantifying D-methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, D-methionine or a salt thereof may be added to commercially available miso.
  • Formulation Example 12 (French dressing) (Composition) Blending amount (g) Salad oil 27.0 Vinegar 30.0 Sodium chloride 0.9 D-methionine 1.1 Pepper 1.0 60.0
  • Formulation Example 13 (mayonnaise) (Composition) Blending amount (g) Salad oil 134.0 Vinegar 5 Sodium chloride 0.9 D-methionine 1 Yolk 18 Sugar 0.2 Pepper 0.9 160.0
  • Production method of Formulation Example 13 (mayonnaise) Add vinegar, sodium chloride, D-methionine and pepper to egg yolk (room temperature), and stir well with a whisk. Stirring is continued while adding salad oil little by little to make an emulsion. Finally add sugar and stir.
  • Formulation Example 14 (French bread) (Composition) Blending amount (g) Powerful powder 140 Soft flour 60 Sodium chloride 3 Sugar 6 D-methionine 2 Dry yeast 4 Lukewarm water 128 343
  • Production method of Formulation Example 14 (French bread) Pre-fermented with 1 g of sugar and dry yeast in lukewarm water. Place flour, flour, sodium chloride, 5 g sugar and D-methionine in a bowl, and pre-fermented yeast. After kneading sufficiently, it is made into a sphere and subjected to primary fermentation at 30 ° C. The dough is kneaded again, rested, shaped into a suitable shape, and finally fermented using an electronic fermenter. Bake in a 220 ° C oven for 30 minutes.
  • D-methionine is added to commercially available soy sauce and stirred well. Further, instead of adding D-methionine or a salt thereof, soy sauce may be brewed using koji that produces a large amount of D-methionine. In order to obtain the rice bran, the rice bran can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, a salt of D-methionine may be added to commercially available soy sauce.
  • Formulation Example 16 (yogurt) (Composition) Blending amount (g) Milk 880 L. Bulgaricus 50 S. Thermophilus 50 D-methionine 20 1000
  • Production Method of Formulation Example 16 Fermentation is performed at 40 ° C to 45 ° C.
  • Other commercially available inoculum may be used, and D-methionine may be added to commercially available yogurt.
  • D-methionine or a salt thereof a bacterium that produces a large amount of D-methionine may be used. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, a salt of D-methionine may be added to commercially available yogurt.
  • Formulation Example 17 (sprinkle) (Composition) Blending amount (g) D-methionine 50 Paste 15 L-glutamic acid Na 10 Sodium chloride 2 Roasted sesame 10 Crusher Clause 10 Sugar 1 Soy sauce 2 100
  • Formulation Example 18 (Seasoning and natto sauce) (Composition) Blending amount (g) Commercial natto sauce 9 D-methionine 1 10
  • natto may be made using bacteria that produce a large amount of D-methionine. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying D-methionine by the method described in JP-A-2008-185558.
  • Formulation Example 20 (Moromi black vinegar) (Composition) Blending amount (g) Commercially available moromi black vinegar 900 D-methionine 100 1000
  • Production method 20 (Moromi black vinegar) Instead of adding D-methionine or its salt to commercially available vinegar or black vinegar, you can make vinegar, black vinegar or moromi using bacteria that produce a lot of D-methionine Good. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558.
  • Formulation Example 21 (cream) (Composition) Compounding amount (% by mass) Liquid paraffin 3 Vaseline 1 Dimethylpolysiloxane 1 Stearyl alcohol 1.8 Behenyl alcohol 1.6 Glycerin 8 Dipropylene glycol 5 Macadamia nut oil 2 Hardened oil 3 Squalane 6 Stearic acid 2 Cholesteryl hydroxystearate 0.5 Cetyl 2-ethylhexanoate 4 Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.5 Self-emulsifying glyceryl monostearate 3 Potassium hydroxide 0.15 Sodium hexametaphosphate 0.05 Trimethylglycine 2 ⁇ -tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester 1 Tocopherol acetate 0.1 D-methionine 4 Paraben appropriate amount edetate trisodium 0.05 4-t-butyl-4′-methoxydibenzoylmethane 0.05 Diparamethoxycinnamic acid mono-2-
  • Formulation Example 22 (Body Cream) (Composition) Compounding amount (% by mass) Dimethylpolysiloxane 3 Decamethylcyclopentasiloxane 13 Dodecamethylcyclohexasiloxane 12 Polyoxyethylene methylpolysiloxane copolymer 1 Ethanol 2 Isopropanol 1 Glycerin 3 Dipropylene glycol 5 Polyethylene glycol 6000 5 Sodium hexametaphosphate 0.05 Tocopherol acetate 0.1 D-methionine 3 Fennel extract 0.1 Hamelis extract 0.1 Carrot extract 0.1 L-menthol appropriate amount paraoxybenzoate appropriate amount edetate trisodium 0.05 Dimorpholinopyridazinone 0.01 Methyl bis (trimethylsiloxy) trimethoxycinnamate Silyl isopentyl 0.1 Yellow iron oxide Appropriate amount Cobalt titanate Appropriate amount Dimethyl distearyl ammonium hectorite 1.5 Polyvin
  • Formulation Example 23 (gel agent) (Composition) Compounding amount (% by mass) Dimethylpolysiloxane 5 Glycerin 2 1,3-butylene glycol 5 Polyethylene glycol 1500 3 Polyethylene glycol 20000 3 Cetyl octanoate 3 Citric acid 0.01 Sodium citrate 0.1 Sodium hexametaphosphate 0.1 Dipotassium glycyrrhizinate 0.1 D-methionine 2 Tocopherol acetate 0.1 Ogon Extract 0.1 Yukinoshita extract 0.1 Edetate trisodium 0.1 Xanthan gum 0.3 Acrylic acid / methacrylic acid alkyl copolymer (Pemulene TR-2) 0.05 Agar powder 1.5 Phenoxyethanol Appropriate amount Dibutylhydroxytoluene Appropriate amount of purified water Residue 100.00
  • Formulation Example 24 (Peel-off mask) (Composition) Compounding amount (% by mass) Ethanol 10 1,3-butylene glycol 6 Polyethylene glycol 4000 2 Olive oil 1 Macadamia nut oil 1 Phytosteryl hydroxystearate 0.05 Lactic acid 0.05 Sodium lactate 0.1 L-ascorbic acid sulfate disodium salt 0.1 ⁇ -tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester 0.1 D-methionine 4 Fish collagen 0.1 Sodium chondroitin sulfate 0.1 Sodium carboxymethylcellulose 0.2 Polyvinyl alcohol 12 Paraoxybenzoic acid ester 100.00
  • Formulation Example 25 Composition
  • Compounding amount (% by mass) Glycerin 1 1,3-butylene glycol 8
  • Xylit 2 Polyethylene glycol 1500 2 Rosemary oil 0.01 Sage oil 0.1
  • Citric acid 0.02 Sodium citrate 0.08
  • Sodium hexametaphosphate 0.01 Hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin 0.1
  • D-methionine 0.5 Birch extract 0.1
  • Lavender oil 0.01 Xanthan gum 0.05
  • Carboxyvinyl polymer 0.15 P-Hydroxybenzoate appropriate amount purified water remaining 100.00
  • Formulation Example 26 (Emulsion) (Composition) Compounding amount (% by mass) Liquid paraffin 7 Vaseline 3 Decamethylcyclopentasiloxane 2 Behenyl alcohol 1.5 Glycerin 5 Dipropylene glycol 7 Polyethylene glycol 1500 2 Jojoba oil 1 Isostearic acid 0.5 Stearic acid 0.5 Behenic acid 0.5 Tetra-2-ethylhexanoic acid pentaerythrit 3 Cetyl 2-ethylhexanoate 3 Glycerol monostearate 1 Polyoxyethylene glyceryl monostearate 1 Potassium hydroxide 0.1 Sodium hexametaphosphate 0.05 Stearyl glycyrrhetinate 0.05 D-methionine 1 Royal Jelly Extract 0.1 Yeast extract 0.1 Tocopherol acetate 0.1 Acetylated sodium hyaluronate 0.1 Edetate trisodium 0.05 4-t-butyl-4′-methoxydi
  • Formulation Example 27 (milky lotion) (Composition) Compounding amount (% by mass) Dimethylpolysiloxane 2 Behenyl alcohol 1 Batyl alcohol 0.5 Glycerin 5 1,3-butylene glycol 7 Erythritol 2 Hardened oil 3 Squalane 6 Tetra-2-ethylhexanoic acid pentaerythrit slit 2 Polyoxyethylene glyceryl isostearate 1 Polyoxyethylene glyceryl monostearate 1 D-methionine 0.3 Potassium hydroxide appropriate amount Sodium hexametaphosphate 0.05 Phenoxyethanol appropriate amount carboxyvinyl polymer 0.1 Purified water residue 100.00
  • Formulation Example 28 Composition
  • Compounding amount (% by mass) Ethyl alcohol 5
  • Glycerin 1 1,3-butylene glycol 5
  • Polyoxyethylene polyoxypropylene decyl tetradecyl ether 0.2
  • Trimethylglycine 1
  • Sodium polyaspartate 0.1
  • ⁇ -tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester
  • Thiotaurine 0.1
  • D-methionine 4 EDTA3 sodium
  • Carboxyvinyl polymer 0.05 Potassium hydroxide 0.02
  • Phenoxyethanol appropriate amount perfume appropriate amount purified water remaining 100.00
  • Formulation Example 29 Composition
  • Ethanol 10 Dipropylene glycol 1 Polyethylene glycol 1000 1 Polyoxyethylene methyl glucoside 1 Jojoba oil 0.01 Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 0.1 Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.2 Polyglyceryl diisostearate 0.15 N-stearoyl-L-glutamate sodium 0.1 Citric acid 0.05 Sodium citrate 0.2 Potassium hydroxide 0.4 Dipotassium glycyrrhizinate 0.1 Arginine hydrochloride 0.1 L-ascorbic acid 2-glucoside 2 D-methionine 0.5 Edetate trisodium 0.05 2-Ethylhexyl paramethoxycinnamate 0.01 Dibutylhydroxytoluene Appropriate amount Paraben Appropriate amount Deep sea water 3 Perfume Appropriate amount of purified water 100.00
  • Formulation Example 30 (Aerosol urea external preparation stock solution) (Composition) Compounding amount (% by mass) Ethanol 15.0 Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 50 1.5 Diphenhydramine 1.0 Jibcaine 2.0 Tocopherol acetate 0.5 D-methionine 0.1 Isostearic acid 0.1 1,3-butylene glycol 3.0 Polyethylene glycol 400 3.0 Camphor 0.05 Urea 20.0 Purified water residue 100.00
  • Formulation Example 31 (Aerosol urea propellant) (Composition) Compounding amount (% by mass) Aerosol urea external preparation stock solution 65.0 Dimethyl ether 35.0 100.00
  • Formulation Example 31 (Aerosol Urea Propellant) Filling Method
  • An aerosol urea preparation is prepared by filling an inner surface Teflon (registered trademark) coated pressure-resistant aerosol aluminum can with an aerosol urea external preparation stock solution and dimethyl ether.

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Abstract

[Problem] To develop a composition, which can be used daily, for inhibiting deterioration in skin condition, particularly the formation of wrinkles, associated with angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet light. [Solution] The present invention provides a composition for inhibiting angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet light, said composition containing one or more types of compounds selected from a group comprising D-methionine, and a derivative and/or a salt thereof. The ultraviolet light may be UV-B. The angiogenesis may be inhibited by increased expression of thrombospondins (THBS) and/or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The composition may be an external skin preparation, a cosmetic, a wrinkle inhibitor, a drug for skin diseases, or a food.

Description

紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物Composition for inhibiting angiogenesis promoted by UV exposure
　本発明は、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物に関する。 The present invention relates to a composition for inhibiting angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. .
　紫外線は、約３２０ｎｍより長い長波長域紫外線（ＵＶ－Ａ）と、約３２０～約２８０ｎｍの中波長域紫外線（ＵＶ－Ｂ）と、約２８０ｎｍより短い短波長域紫外線（ＵＶ－Ｃ）とに分類される。このうちＵＶ－Ｃはオゾン層に吸収されるので地上に達する太陽光には含まれない。ＵＶ－Ａはオゾン層に吸収されず、ＵＶ－Ｂはオゾン層に部分的にしか吸収されないため、両方とも地上に達する太陽光に含まれる。しかし、皮膚傷害の主な原因はＵＶ－Ｂであると考えられている。ＵＶ－Ｂは、ＵＶ－Ａと比較して１０００分の１の光量で皮膚傷害を起こすためである。 Ultraviolet rays are classified into long-wavelength ultraviolet rays (UV-A) longer than about 320 nm, medium-wavelength ultraviolet rays (UV-B) of about 320 to about 280 nm, and short-wavelength ultraviolet rays (UV-C) shorter than about 280 nm. being classified. Of these, UV-C is not contained in the sunlight reaching the ground because it is absorbed by the ozone layer. Since UV-A is not absorbed by the ozone layer and UV-B is only partially absorbed by the ozone layer, both are included in the sunlight reaching the ground. However, the main cause of skin injury is believed to be UV-B. This is because UV-B causes skin injury with a light amount of 1/1000 compared with UV-A.
　これまで、紫外線がマウスに長期間照射されると、シワ形成が促進することが知られている。また、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制することによって、皮膚状態の悪化、特に、シワ形成を抑制できることが報告されている（非特許文献１）。なお、紫外線曝露及び血管新生が関与する疾患には、皮膚がん、酒さ等が挙げられる（特許文献１）。 Until now, it has been known that when ultraviolet rays are irradiated to a mouse for a long time, wrinkle formation is promoted. It has also been reported that deterioration of skin condition, particularly wrinkle formation can be suppressed by suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays (Non-patent Document 1). Examples of diseases involving ultraviolet exposure and angiogenesis include skin cancer and rosacea (Patent Document 1).
特表第２０１１－５１４８９１号公開公報Special table 2011-514891 publication gazette
　従来、皮膚状態の悪化、特に、シワ形成の抑制及び／又は改善のために、コラーゲン産生促進組成物、ヒアルロン酸産生促進組成物、マトリクス分解酵素（ＭＭＰ）産生抑制組成物等が用いられてきた。しかし、これらの組成物は、血管新生を抑制することができないため、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化を抑制できない。そこで、日常的に使用でき、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化、特にシワ形成を抑制するための組成物を開発する必要がある。 Conventionally, collagen production promoting compositions, hyaluronic acid production promoting compositions, matrix-degrading enzyme (MMP) production inhibiting compositions, etc. have been used to suppress and / or improve the deterioration of skin conditions, particularly wrinkle formation. . However, since these compositions cannot suppress angiogenesis, they cannot suppress the deterioration of the skin condition accompanying angiogenesis promoted by ultraviolet exposure. Therefore, there is a need to develop a composition that can be used on a daily basis and that suppresses the deterioration of skin conditions accompanied by angiogenesis that is promoted by UV exposure, particularly wrinkle formation.
　本発明は、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を提供する。 The present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. provide.
　本発明の組成物において、前記紫外線はＵＶ－Ｂの場合がある。 In the composition of the present invention, the ultraviolet light may be UV-B.
　本発明の組成物において、前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ－Ａの場合がある。 In the composition of the present invention, the angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The THBS may be THBS1. The VEGF may be VEGF-A.
　本発明の組成物は皮膚外用剤として用いられる場合がある。 The composition of the present invention may be used as a skin external preparation.
　本発明の組成物において、前記皮膚外用剤は化粧品の場合がある。 In the composition of the present invention, the external preparation for skin may be a cosmetic product.
　本発明の組成物において、前記皮膚外用剤はシワ抑制剤の場合がある。 In the composition of the present invention, the external preparation for skin may be a wrinkle inhibitor.
　本発明の組成物において、前記皮膚外用剤は皮膚疾患用医薬品として用いられる場合がある。 In the composition of the present invention, the external preparation for skin may be used as a pharmaceutical for skin diseases.
　本発明の組成物において、前記皮膚疾患は、皮膚がん、酒さ等からなる群から選択される少なくとも１つの疾患の場合がある。 In the composition of the present invention, the skin disease may be at least one disease selected from the group consisting of skin cancer, rosacea and the like.
　本発明の組成物は食品として用いられる場合がある。 The composition of the present invention may be used as food.
　本発明は、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を投与するステップを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚疾患を治療及び／又は予防する方法を提供する。前記皮膚疾患は、皮膚がん、酒さ等からなる群から選択される少なくとも１つの疾患の場合がある。前記方法において、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は、皮膚外用剤と、皮膚疾患用治療剤及び皮膚疾患用予防剤を含む皮膚疾患用医薬品との場合がある。前記紫外線はＵＶ－Ｂの場合がある。前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ－Ａの場合がある。 The present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. A method of treating and / or preventing skin diseases associated with angiogenesis promoted by UV exposure, comprising the step of administering. The skin disease may be at least one disease selected from the group consisting of skin cancer, rosacea and the like. In the method, a composition for suppressing angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and a derivative and / or salt thereof, In some cases, an external preparation for skin and a medicinal product for skin diseases including a therapeutic agent for skin diseases and a prophylactic agent for skin diseases. The ultraviolet light may be UV-B. The angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The THBS may be THBS1. The VEGF may be VEGF-A.
　本発明は、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物を投与するステップを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化を防止するための美容方法を提供する。前記美容方法において、Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は、化粧品、シワ抑制剤を含む皮膚外用剤と、食品との場合がある。前記紫外線はＵＶ－Ｂの場合がある。前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制される場合がある。前記ＴＨＢＳはＴＨＢＳ１の場合がある。前記ＶＥＧＦはＶＥＧＦ－Ａの場合がある。 The present invention provides a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. A cosmetic method is provided for preventing deterioration of skin conditions associated with angiogenesis promoted by UV exposure, comprising a step of administering. In the cosmetic method, a composition for suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof. May be cosmetics, skin external preparations containing wrinkle inhibitors and foods. The ultraviolet light may be UV-B. The angiogenesis may be suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The THBS may be THBS1. The VEGF may be VEGF-A.
　本明細書において「皮膚状態の悪化」とは、シワを含む皮膚のトラブルの発生及び／又は亢進をいう。 In this specification, “deterioration of skin condition” refers to the occurrence and / or enhancement of skin troubles including wrinkles.
　本明細書において「シワ」とは、肌のトラブルの一種であって、皮表の線状陥没が作り出す紋様が、特定の領域に集中して、かつ、大きさ及び配列の不規則性をもって存在する状態を指す。 In this specification, “wrinkle” is a kind of skin trouble, and the pattern created by the linear depression of the skin surface is concentrated in a specific area and has irregularities in size and arrangement. The state to do.
　本明細書において「血管新生」とは、新たな血管が既存の血管から形成される現象をいう。 In this specification, “angiogenesis” refers to a phenomenon in which a new blood vessel is formed from an existing blood vessel.
　本明細書において「血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）」とは、血管内皮細胞の増殖、前記内皮細胞からの生理活性物質産生の誘導等を行う増殖因子であって、脈管形成及び血管新生のアクチベーターとして作用する。ＶＥＧＦファミリーには、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＶＥＧＦ－Ｅ、ＰＬＧＦ－１及びＰＬＧＦ－２が含まれる。また、ＶＥＧＦ－Ａ及びＶＥＧＦ－Ｂには、アイソフォームが存在する。 In this specification, “vascular endothelial growth factor (VEGF)” is a growth factor that induces the proliferation of vascular endothelial cells, the production of physiologically active substances from the endothelial cells, and the like. Acts as an activator. The VEGF family includes VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, PLGF-1 and PLGF-2. In addition, VEGF-A and VEGF-B have isoforms.
　本明細書において「トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）」とは、細胞外マトリックスと会合し、さまざまな生物学的機能を発揮する分泌タンパク質をいう。トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）ファミリーには、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ３、ＴＨＢＳ４が含まれる。前記ＴＨＢＳ１及びＴＨＢＳ２は、脈管形成及び血管新生のインヒビターとしての機能を有し、正常な皮膚では、主に真皮－表皮間の基底膜領域に存在する。 As used herein, “thrombospondin (THBS)” refers to a secreted protein that associates with an extracellular matrix and exhibits various biological functions. The thrombospondin (THBS) family includes THBS1, THBS2, THBS3, THBS4. The THBS1 and THBS2 have functions as inhibitors of angiogenesis and angiogenesis, and in normal skin, they are mainly present in the basement membrane region between the dermis and epidermis.
　本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦのｍＲＮＡの量の他、角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの転写活性を含む。前記角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦのｍＲＮＡの量は、ＲＴ－ＰＣＲ法、ノザンブロット法その他の固相雑種形成法を含むがこれらに限定されない方法によって測定される。前記角化細胞におけるＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの転写活性は、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、緑蛍光タンパク質（ＧＦＰ）その他のレポータータンパク質が、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの遺伝子発現制御領域によって駆動されるコンストラクトを角化細胞に一時的又は永続的に導入することによって測定されるのが典型的である。 In the present invention, the expression levels of THBS and VEGF include THBS and VEGF mRNA in keratinocytes, as well as THBS and VEGF transcriptional activities in keratinocytes. The amount of THBS and VEGF mRNA in the keratinocytes is measured by methods including, but not limited to, RT-PCR, Northern blotting and other solid-phase hybrid formation methods. The transcriptional activity of THBS and VEGF in the keratinocytes is that chloramphenicol acetyltransferase (CAT), β-galactosidase (LacZ), luciferase (Luc), green fluorescent protein (GFP) and other reporter proteins are THBS and VEGF. It is typically measured by temporarily or permanently introducing a construct driven by the gene expression control region of the keratinocyte.
　本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、測定するときの細胞の数又は全タンパク量によって標準化された絶対値として決定される場合がある。あるいは、同じ数の細胞が、複数の同一容器、例えば、ウェル、ディッシュ、フラスコ等に播種される場合には、被験処理条件における培養後の容器１つあたりのＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、被験処理前の前記角化細胞のＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量を基準とする相対値で表される場合がある。さらに、本発明において、ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量は、同じ数の細胞が、複数の同一容器、例えば、ウェル、ディッシュ、フラスコ等に播種される場合には、同一条件で処理された容器１つあたりの対照遺伝子の発現量で標準化される場合がある。前記対照遺伝子は、いわゆるハウスキーピング遺伝子を含むが、これらに限らず、例えば遺伝子発現アレイチップ等の手段で見つけることができる。本発明において、ハウスキーピング遺伝子は、２８ＳｒＲＮＡ、１８ＳｒＲＮＡ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）、β－アクチン等を含むが、これらに限定されない。 In the present invention, the expression level of THBS and VEGF may be determined as an absolute value standardized by the number of cells or the total protein amount at the time of measurement. Alternatively, when the same number of cells are seeded in a plurality of the same containers, for example, wells, dishes, flasks, etc., the expression levels of THBS and VEGF per container after culturing under test treatment conditions are It may be expressed as a relative value based on the expression levels of THBS and VEGF in the keratinocytes before treatment. Furthermore, in the present invention, the expression levels of THBS and VEGF are the same as those in the case where the same number of cells are seeded in a plurality of the same containers, for example, wells, dishes, flasks, etc. May be standardized by the expression level of the control gene. The control gene includes a so-called housekeeping gene, but is not limited thereto, and can be found by means such as a gene expression array chip. In the present invention, housekeeping genes include, but are not limited to, 28S rRNA, 18S rRNA, glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (G3PDH), β-actin and the like.
　血管新生は、当業者に周知な方法で定量された血管面積に基づいて評価される場合がある。前記血管面積が定量される場合には、免疫組織化学染色が市販の抗体を用いて行われる場合がある。前記抗体は血管を特異的に認識する抗体であればよく、抗汎内皮細胞抗原モノクローナル抗体（カタログ番号５５０５６３、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を含むが、これに限定されない。前記血管面積は、商業的に利用可能なサービス、ソフトフェア等を用いて定量される場合がある。例えば、前記サービスは、血管新生キット画像解析サービス（倉敷紡績株式会社）の場合がある。前記ソフトフェアは、血管新生キット定量ソフトウェア（倉敷紡績株式会社）、画像解析ソフトフェア（ＩＰＬａｂソフトフェア　バージョン４．０、株式会社　ソリューション　システムズ）等の場合がある。前記血管新生は、被験処理前の血管面積と、被験処理後の血管面積とを比較するか、被験処理後の各実験群の血管面積それぞれを比較するかによって評価される場合がある。前記血管新生は、血管面積以外の他の指標を用いて評価されてもかまわないし、血管面積と他の指標とを組み合わせて評価されてもかまわない。 Angiogenesis may be evaluated based on the vascular area quantified by methods well known to those skilled in the art. When the blood vessel area is quantified, immunohistochemical staining may be performed using a commercially available antibody. The antibody may be any antibody that specifically recognizes blood vessels, and includes, but is not limited to, an anti-pan-endothelial cell antigen monoclonal antibody (catalog number 550563, Nippon Becton Dickinson Co., Ltd.). The vessel area may be quantified using commercially available services, software, and the like. For example, the service may be an angiogenesis kit image analysis service (Kurashiki Boseki Co., Ltd.). The software fair may be angiogenesis kit quantitative software (Kurashiki Boseki Co., Ltd.), image analysis software (IPLab software version 4.0, Solution Systems Co., Ltd.), or the like. The angiogenesis may be evaluated depending on whether the blood vessel area before the test treatment is compared with the blood vessel area after the test treatment or the blood vessel area of each experimental group after the test treatment is compared. The angiogenesis may be evaluated using an index other than the blood vessel area, or may be evaluated by combining the blood vessel area and another index.
　ＴＨＢＳ及びＶＥＧＦの発現量の統計処理と、血管面積の統計処理とは、当業者に周知な方法を用いて行うことができる。 The statistical processing of the expression level of THBS and VEGF and the statistical processing of the blood vessel area can be performed using methods well known to those skilled in the art.
　本明細書においてＤ－メチオニンの「塩」とは、Ｄ－メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、金属塩、アミン塩等を含むいずれかの塩をいう。前記金属塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等を含む場合がある。前記アミン塩は、トリエチルアミン塩、ベンジルアミン塩等を含む場合がある。 In the present specification, the “salt” of D-methionine is any salt including a metal salt, an amine salt and the like, provided that the effect of suppressing angiogenesis promoted by UV exposure of D-methionine is not impaired. Say. The metal salt may include an alkali metal salt, an alkaline earth metal salt, and the like. The amine salt may include a triethylamine salt, a benzylamine salt, or the like.
　本明細書においてＤ－メチオニンの「誘導体」とは、Ｄ－メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、Ｄ－メチオニン分子が、アミノ基か、カルボキシル基か、側鎖かにおいて、いずれかの原子団と共有結合したものを指す。前記いずれかの原子団は、Ｎ－フェニルアセチル基、４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基等のような保護基と、タンパク質、ペプチド、糖、脂質、核酸等のような生体高分子と、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリビニル、ポリエステル等のような合成高分子と、エステル基等のような官能基とを含むがこれらに限定されない。前記エステル基は、例えば、メチルエステル、エチルエステルその他の脂肪族エステルか、芳香族エステルかを含む場合がある。 In the present specification, the “derivative” of D-methionine means that the D-methionine molecule is an amino group or a carboxyl group on the condition that the effect of suppressing angiogenesis promoted by UV exposure of D-methionine is not impaired. Or a side chain that is covalently bonded to any atomic group. Any of the atomic groups includes a protecting group such as an N-phenylacetyl group or a 4,4′-dimethoxytrityl (DMT) group, and a biopolymer such as a protein, peptide, sugar, lipid, nucleic acid, or the like. Synthetic polymers such as polystyrene, polyethylene, polyvinyl, and polyester, and functional groups such as ester groups, but are not limited thereto. The ester group may include, for example, methyl ester, ethyl ester, other aliphatic esters, or aromatic esters.
　アミノ酸には光学異性体としてＬ－体とＤ－体とがあるが、天然のタンパク質はＬ－アミノ酸がペプチド結合したものであり、細菌の細胞壁などの例外を除きＬ－アミノ酸のみが利用されていることから、ヒトを始めとする哺乳類にはＬ－アミノ酸のみが存在し、Ｌ－アミノ酸のみを利用していると考えられてきた。（木野内忠稔ら、蛋白質　核酸　酵素、５０：４５３－４６０　（２００５）、レーニンジャーの新生化学［上］第２版　ｐｐ１３２－１４７　（１９９３）　廣川書店、ハーパー・生化学　原書２２版　ｐｐ２１－３０（１９９１）　丸善）したがって、従前より、学術的にも産業的にもアミノ酸としてはＬ－アミノ酸のみが専ら使用されてきた。 Amino acids have L-isomers and D-isomers as optical isomers, but natural proteins are L-amino acids with peptide bonds, and only L-amino acids are used with the exception of bacterial cell walls. Therefore, it has been considered that mammals including humans have only L-amino acids and use only L-amino acids. (Tadaaki Kinouchi et al., Protein Nucleic Acid Enzyme, 50: 453-460 (2005), Reininger's Shinsei Kagaku [Up] 2nd edition, pp132-147 (1993) Sasakawa Shoten, Harper Biochemistry, 22nd edition pp21-30 ( 1991) Maruzen) Therefore, from the past, only L-amino acids have been exclusively used as amino acids, both academically and industrially.
　例外的にＤ－アミノ酸が使用されるケースとしては、細菌に産生させる抗生物質の原料として使用する場合、およびアミノ酸を化学合成した際に等量得られるＬ－アミノ酸とＤ－アミノ酸混合物からＬ－アミノ酸のみを分取するコストを省くために、そのままＤＬ－アミノ酸混合物としてＤ－アミノ酸を使用している食品添加物の例がある。しかし、生理活性を有する物質として、Ｄ－アミノ酸だけを産業的に使用している例は従来なかった。 Exceptionally, D-amino acids are used as a starting material for antibiotics produced by bacteria, and when L-amino acids and D-amino acid mixtures obtained in equal amounts when amino acids are chemically synthesized are L- There is an example of a food additive in which D-amino acid is used as it is as a DL-amino acid mixture in order to save the cost of fractionating only amino acids. However, there has been no example in which only D-amino acids are used industrially as a substance having physiological activity.
　これまで、Ｄ－セリンは大脳、海馬に局在し、脳内のＮＭＤＡ受容体の調節因子であることが明らかにされている。また、Ｄ－アスパラギン酸は精巣や松果体に局在が認められ、ホルモン分泌の制御に関与していることが示されている（特開２００５－３５５８号公報）。さらに、Ｄ－メチオニンは、紫外線曝露時のＩＬ－８の発現誘導を抑制することが示されている（特願２０１０－２２２６５４号明細書）。しかし、以下の実施例に示すように、Ｄ－メチオニンが、ＴＨＢＳ１の発現を増大させ、ＶＥＧＦ－Ａの発現を低下させることによって紫外線曝露時の血管新生を抑制するできることはこれまで知られていなかった。したがって、本発明のＤ－メチオニンを含む、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物は新規発明である。 So far, D-serine is localized in the cerebrum and hippocampus and has been shown to be a regulator of NMDA receptors in the brain. In addition, D-aspartate is localized in the testis and pineal gland and has been shown to be involved in the regulation of hormone secretion (Japanese Patent Laid-Open No. 2005-3558). Furthermore, D-methionine has been shown to suppress the induction of IL-8 expression upon UV exposure (Japanese Patent Application No. 2010-222654). However, as shown in the Examples below, it has not been known that D-methionine can suppress angiogenesis during UV exposure by increasing THBS1 expression and decreasing VEGF-A expression. It was. Therefore, a composition for inhibiting angiogenesis that is promoted by UV exposure, comprising D-methionine of the present invention is a novel invention.
　近年、ｄｄＹマウスに１０ｍＭのＤ－アミノ酸水溶液を２週間自由摂取させた後、各器官でＤ－アミノ酸濃度を測定したところ、松果体では松果体１腺あたり３－１０００ｐｍｏｌであり、脳組織では湿重量１グラムあたり２－５００ｎｍｏｌであることが報告された（Ｍｏｒｉｋａｗａ，Ａ．ら、Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄｓ，３２：１３－２０（２００７））。これに基づいて、以下に説明する本発明の組成物に含まれるＤ－メチオニンの１日摂取量の下限が算出された。 In recent years, ddY mice were allowed to freely take a 10 mM D-amino acid aqueous solution for 2 weeks, and then the D-amino acid concentration was measured in each organ. As a result, the pineal gland showed 3-1000 pmol per gland. Reported 2-500 nmol per gram wet weight (Morikawa, A. et al., Amino Acids, 32: 13-20 (2007)). Based on this, the lower limit of the daily intake of D-methionine contained in the composition of the present invention described below was calculated.
　本発明のＤ－メチオニンは、以下の実施例に示すとおり、角化細胞に対して１００μＭの濃度でＴＨＢＳ１の発現を増大させ、ＶＥＧＦ－Ａの発現を低下する効果を有する。また本発明のＤ－メチオニンは、マウスに対して０．１５％溶液の塗布で、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を有する。したがって、本発明の組成物に含まれるＤ－メチオニンの量は、この濃度のＤ－メチオニンが生体皮膚組織の細胞に送達されることを条件として、いかなる含有量であってもかまわない。本発明の組成物が外用剤の場合におけるＤ－メチオニンの含有量は、本発明の組成物全量中０．０００００１５質量％から５０質量％か配合可能な最大質量濃度かまでの範囲であればよい。すなわち前記組成物が外用剤の場合におけるメチオニンの含有量は、０．０００００３質量％～３０質量％が好ましく、０．００００３質量％～３質量％が最も好ましい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ－メチオニンの含有量は、０．００００００１重量％～１００重量％の範囲であればよい。本発明の組成物が内服剤の場合におけるＤ－メチオニンの含有量は、０．０００００１重量％～８０重量％が好ましく、０．００００１重量％～６０重量％であることが最も好ましい。なお、本発明の組成物に含まれるＤ－メチオニンの一日摂取量の下限は、体重１ｋｇあたり０．０１ｎｇであればよく、０．１ｎｇが好ましく、１ｎｇがより好ましい。 The D-methionine of the present invention has the effect of increasing the expression of THBS1 and decreasing the expression of VEGF-A in keratinocytes at a concentration of 100 μM, as shown in the following examples. Further, D-methionine of the present invention has an effect of suppressing angiogenesis that is promoted by exposure to ultraviolet rays when a 0.15% solution is applied to mice. Therefore, the amount of D-methionine contained in the composition of the present invention may be any content, provided that this concentration of D-methionine is delivered to cells of living skin tissue. In the case where the composition of the present invention is an external preparation, the content of D-methionine may be in the range from 0.0000015% by mass to 50% by mass or the maximum mass concentration that can be blended in the total composition of the present invention. . That is, when the composition is an external preparation, the content of methionine is preferably 0.000003% by mass to 30% by mass, and most preferably 0.00003% by mass to 3% by mass. When the composition of the present invention is an internal preparation, the content of D-methionine may be in the range of 0.0000001 wt% to 100 wt%. When the composition of the present invention is an internal preparation, the content of D-methionine is preferably 0.000001 to 80% by weight, and most preferably 0.00001 to 60% by weight. The lower limit of the daily intake of D-methionine contained in the composition of the present invention may be 0.01 ng per kg body weight, preferably 0.1 ng, more preferably 1 ng.
　本発明の皮膚外用剤は、有効成分として、Ｄ－メチオニン、Ｄ－メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ－メチオニンを放出できる誘導体のみを使用して調製することも可能であるが、通常本発明の効果を損なわない範囲で、医薬部外品を含む化粧品や医薬品等の皮膚外用剤等に用いられる他の成分を、必要に応じて適宜配合することができる。前記他の成分（任意配合成分）としては、例えば、油、界面活性剤、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等が挙げられる。 The topical skin preparation of the present invention can be prepared using only D-methionine, a salt of D-methionine and / or a derivative capable of releasing D-methionine in vivo by a drug metabolizing enzyme or the like as an active ingredient. However, other components used for external preparations for skin such as cosmetics and pharmaceuticals including quasi-drugs can be appropriately blended as necessary, as long as the effects of the present invention are not impaired. Examples of the other components (optional ingredients) include oils, surfactants, powders, coloring materials, water, alcohols, thickeners, chelating agents, silicones, antioxidants, ultraviolet absorbers, and humectants. , Fragrances, various medicinal ingredients, preservatives, pH adjusters, neutralizers and the like.
　本発明の皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来の化粧品及びシワ抑制剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。 The external preparation for skin of the present invention may be any one as long as it is used for conventional cosmetics and wrinkle inhibitors, such as ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bath preparations, etc., and the dosage form is not particularly limited.
　本発明の医薬品は、Ｄ－メチオニン、Ｄ－メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ－メチオニンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ－メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、さらに１種類又は２種類以上の薬学的に許容される添加物を含む場合がある。前記添加物は、希釈剤及び膨張剤と、結合剤及び接着剤と、滑剤と、流動促進剤と、可塑剤と、崩壊剤と、担体溶媒と、緩衝剤と、着色料と、香料と、甘味料と、防腐剤及び安定化剤と、吸着剤と、当業者に知られたその他の医薬品添加剤とを含むが、これらに限定されない。 In addition to D-methionine, a salt of D-methionine and / or a derivative capable of releasing D-methionine by a drug metabolizing enzyme or the like in vivo, the pharmaceutical product of the present invention has angiogenesis that is promoted by UV exposure of D-methionine. There is a case where one or more kinds of pharmaceutically acceptable additives are further included on the condition that the suppressing effect is not impaired. The additives include diluents and swelling agents, binders and adhesives, lubricants, glidants, plasticizers, disintegrants, carrier solvents, buffering agents, colorants, fragrances, Including, but not limited to, sweeteners, preservatives and stabilizers, adsorbents, and other pharmaceutical additives known to those skilled in the art.
　本発明の食品は、Ｄ－メチオニン、Ｄ－メチオニンの塩及び／又は生体内で薬物代謝酵素その他によってＤ－メチオニンを放出できる誘導体に加えて、Ｄ－メチオニンの紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制する効果を損なわないことを条件として、調味料、着色料、保存料その他の食品として許容される成分を含む場合がある。 In addition to D-methionine, a salt of D-methionine and / or a derivative capable of releasing D-methionine in vivo by a drug metabolizing enzyme or the like, the food of the present invention has angiogenesis that is promoted by UV exposure of D-methionine. It may contain a seasoning, a coloring agent, a preservative, and other ingredients that are acceptable as food, provided that the suppressing effect is not impaired.
　本発明の食品は、例えば、キャンディー、クッキー、味噌、フレンチドレッシング、マヨネーズ、フランスパン、醤油、ヨーグルト、ふりかけ、調味料・納豆のたれ、納豆、もろみ黒酢等、従来食品に用いるものであればいずれでもよく、前記例示に限定されるものでない。 The food of the present invention is, for example, candy, cookies, miso, French dressing, mayonnaise, French bread, soy sauce, yogurt, sprinkle, seasoning / natto sauce, natto, moromi black vinegar, etc. Either may be sufficient and it is not limited to the said illustration.
　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。 All documents mentioned in this specification are incorporated herein by reference in their entirety.
ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を示すグラフ。The graph which shows the expression level of THBS1 mRNA. ＶＥＧＦ－ＡのｍＲＮＡの発現量を示すグラフ。The graph which shows the expression level of mRNA of VEGF-A. 紫外線照射後の血管新生に対するＤ－メチオニンの効果を示す写真。A photograph showing the effect of D-methionine on angiogenesis after ultraviolet irradiation. 紫外線照射後の表皮直下２００μｍの血管面積を示すグラフ。The graph which shows the blood vessel area of 200 micrometers just under the epidermis after ultraviolet irradiation.
　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。 The embodiments of the present invention described below are for illustrative purposes only and are not intended to limit the technical scope of the present invention. The technical scope of the present invention is limited only by the appended claims. Modifications of the present invention, for example, addition, deletion, and replacement of the configuration requirements of the present invention can be made on the condition that the gist of the present invention is not deviated.
　以下の実施例は、アメリカ国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ））のガイドラインに従って資生堂リサーチセンターの倫理委員会によって承認された後に実施された。 The following examples were conducted after approval by the Ethics Committee of Shiseido Research Center according to the guidelines of the National Institutes of Health (NIH).
　Ｌ－及びＤ－メチオニンによる紫外線照射時のＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ－Ａの発現量の変化
　１．材料及び方法
　（１）細胞培養
　細胞は、市販のヒト新生児表皮角化細胞（Ｃｒｙｏ　ＮＨＥＫ－Ｎｅｏ、三光純薬）が用いられた。前記細胞は１ｘ１０5個／ウェルとなるように市販の培養プレート（カタログ番号３５３０４６、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に播種された。前記細胞は、市販の無血清培地（Ｄｅｆｉｎｅｄ　Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ－ＳＦＭ、Ｇｉｂｃｏ、ライフテクノロジーズジャパン株式会社）（以下、「基本培地」という。）を用いて、３７°Ｃ、５％ＣＯ2及び飽和水蒸気雰囲気下で１日間培養された。その後、前記細胞は、１００μＭのＬ－又はＤ－メチオニンが添加された基本培地（以下、「Ｌ－メチオニン添加群」及び「Ｄ－メチオニン添加群」という。）２ｍＬで１日間培養された。対照としては、Ｌ－及びＤ－メチオニンの代わりにリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が添加された基本培地（以下、「ＰＢＳ添加群」という。）が用いられた。 Changes in the expression levels of THBS1 and VEGF-A during UV irradiation with L- and D-methionine Materials and Methods (1) Cell culture As cells, commercially available human neonatal epidermal keratinocytes (Cryo NHEK-Neo, Sanko Junyaku) were used. The cells were seeded on a commercially available culture plate (catalog number 353046, Nippon Becton Dickinson Co., Ltd.) at 1 × 10 5 cells / well. The cells were obtained using a commercially available serum-free medium (Define Keratinocyte-SFM, Gibco, Life Technologies Japan Co., Ltd.) (hereinafter referred to as “basic medium”) at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated water vapor atmosphere. For 1 day. Thereafter, the cells were cultured for 1 day in 2 mL of a basic medium supplemented with 100 μM L- or D-methionine (hereinafter referred to as “L-methionine added group” and “D-methionine added group”). As a control, a basic medium (hereinafter referred to as “PBS-added group”) to which phosphate buffered saline (PBS) was added instead of L- and D-methionine was used.
　（２）ｉｎ　ｖｉｔｒｏ紫外線の照射
　紫外線（ＵＶ―Ｂ）照射は、自作の紫外光露光装置（紫外線蛍光灯、東芝メディカルサプライ　ＴＯＲＥＸ　ＦＬ２０Ｓ－Ｅ－３０／ＤＭＲ、２本）を用いて、培養プレートの蓋を除去した状態で該培養プレートの４０ｃｍ上部から２８０ｎｍないし３２０ｎｍの紫外線を３０ｍＪ／ｃｍ2で照射して実施された。紫外線量はＵＶ　ＲＡＤＩＯＭＥＴＥＲ　ＵＶＲ－３０３６／Ｓ（株式会社トプコン）を用いて測定された。紫外線照射された細胞は、３７°Ｃ、５％ＣＯ2及び飽和水蒸気雰囲気下で１６時間培養された。 (2) Irradiation of in vitro ultraviolet rays Ultraviolet (UV-B) irradiation is performed using a self-made ultraviolet exposure device (ultraviolet fluorescent lamp, Toshiba Medical Supply TOREX FL20S-E-30 / DMR, 2 tubes). The test was carried out by irradiating UV light of 280 nm to 320 nm at 30 mJ / cm 2 from the top of 40 cm of the culture plate with the lid removed. The amount of ultraviolet rays was measured using UV RADIOMETER UVR-3036 / S (Topcon Co., Ltd.). The cells irradiated with ultraviolet rays were cultured for 16 hours at 37 ° C., 5% CO 2 and saturated water vapor atmosphere.
　（３）ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ－Ａの発現量の定量
　培地はアスピレーターで除去され、各ウェルそれぞれが、ＰＢＳ　２ｍＬで２回洗浄された。ＲＮＡがＲＮｅａｓｙ　Ｐｒｏｔｅｃｔ　Ｋｉｔ（７４１０４、株式会社キアゲン）を用いて各ウェルの細胞それぞれから製造者の指示に従って抽出された。ｃＤＮＡが定法に従って作成され、定量リアルタイムＰＣＲで用いられた。前記定量リアルタイムＰＣＲには、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）ＦａｓｔＳｔａｒｔ　ＤＮＡ　ＭａｓｔｅｒPLUS　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ（カタログ番号０３　５１５　８８５　００１、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）が用いられた。ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ－Ａから転写されたｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡの断片を増幅するために、配列番号１及び２と、配列番号３及び４とに列挙されるヌクレオチド配列からなる順方向及び逆方向プライマーの対それぞれが用いられた。Ｇ３ＰＤＨから転写されたｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡの断片を増幅するために、配列番号５及び６に列挙されるヌクレオチド配列からなる順方向及び逆方向プライマーの対が用いられた。ＰＣＲの反応条件は、９５°Ｃ、１５分間を１回と、９５°Ｃ、１５秒間、６５°Ｃ、２０秒間及び７２°Ｃ、２０秒間を４２回とであった。ＴＨＢＳ１及びＶＥＧＦ－ＡのｍＲＮＡの発現量は、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ　Ｖｅｒ．３．５（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）で解析され、Ｇ３ＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で標準化された。 (3) Quantification of expression levels of THBS1 and VEGF-A The medium was removed with an aspirator, and each well was washed twice with 2 mL of PBS. RNA was extracted from each cell in each well using the RNeasy Protect Kit (74104, Qiagen) according to the manufacturer's instructions. cDNA was prepared according to a standard method and used in quantitative real-time PCR. For the quantitative real-time PCR, LightCycler (registered trademark) FastStart DNA Master PLUS SYBR Green I (catalog number 03 515 885 001, Roche Diagnostics Inc.) was used. In order to amplify a fragment of cDNA derived from mRNA transcribed from THBS1 and VEGF-A, a pair of forward and reverse primers consisting of the nucleotide sequences listed in SEQ ID NOs: 1 and 2 and SEQ ID NOs: 3 and 4 Each was used. In order to amplify a fragment of cDNA derived from mRNA transcribed from G3PDH, a pair of forward and reverse primers consisting of the nucleotide sequences listed in SEQ ID NOs: 5 and 6 was used. PCR reaction conditions were 95 ° C, 15 minutes once, 95 ° C, 15 seconds, 65 ° C, 20 seconds and 72 ° C, 20 seconds, 42 times. The expression levels of THBS1 and VEGF-A mRNA were measured using LightCycler Software Ver. 3.5 (Roche Diagnostics Inc.) and standardized with the expression level of G3PDH mRNA.
　２．結果
　（１）ＴＨＢＳ１の発現
　図１は、ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。誤差棒それぞれは、同一条件のウェル３個のｍＲＮＡの発現量を決定した実験１回の値の標準誤差を示す。Ｄ－メチオニン添加群のＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量は、ＰＢＳ添加群と比較して増大した。 2. Results (1) Expression of THBS1 FIG. 1 is a graph showing the expression level of THBS1 mRNA. Each error bar represents the standard error of the value of one experiment in which the expression level of mRNA in three wells under the same conditions was determined. The expression level of THBS1 mRNA in the D-methionine addition group increased compared to the PBS addition group.
　（２）　ＶＥＧＦ－Ａの発現
　図２は、ＶＥＧＦ－ＡのｍＲＮＡの発現量を示すグラフである。誤差棒それぞれは、同一条件のウェル３個のｍＲＮＡの発現量を決定した実験１回の値の標準誤差を示す。ｐ値は、スチューデントｔ検定で算出された。図中の「＊＊」の記載はｐ値が１％未満であり、図中の「＊」の記載はｐ値が５％未満であり、図中の「＋」の記載はｐ値が１０％未満であることを示す。Ｌ－メチオニン添加群及びＤ－メチオニン添加群のＶＥＧＦ－ＡのｍＲＮＡの発現量は、ＰＢＳ添加群と比較して統計的に有意に低下した。 (2) Expression of VEGF-A FIG. 2 is a graph showing the expression level of VEGF-A mRNA. Each error bar represents the standard error of the value of one experiment in which the expression level of mRNA in three wells under the same conditions was determined. The p value was calculated by Student's t test. In the figure, “**” has a p value of less than 1%, “*” in the figure has a p value of less than 5%, and “+” in the figure has a p value of 10 Indicates less than%. The expression level of VEGF-A mRNA in the L-methionine addition group and the D-methionine addition group was statistically significantly lower than that in the PBS addition group.
　紫外線照射時のＤ－メチオニン塗布による血管新生の変化
　１．材料及び方法
　（１）実験動物
　５週齢の雄・雌性ＨＲ－１ヘアレスマウス（株式会社星野試験動物飼育所）が用いられた。 Changes in angiogenesis by application of D-methionine during UV irradiation Materials and Methods (1) Experimental Animals 5-week-old male / female HR-1 hairless mice (Hoshino Test Animal Breeding Co., Ltd.) were used.
　（２）ｉｎ　ｖｉｖｏ紫外線の照射
　紫外線（ＵＶ－Ｂ）は、シュワルツらの方法（Ｈａｒａｔａｋｅ　Ａ．ｅｔ　ａｌ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０８：７６９－７７５，１９９７．）を一部変更して、紫外線を繰り返し照射する方法（Ｎａｇａｎｕｍａ　Ｍ．ｅｔ　ａｌ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．２５：２９－３５，２００１．Ｓｃｈｗａｒｔｚ　Ｅ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．９１：１５８－１６１，１９８８．）に準じて照射された。簡潔には、前記ＵＶ－Ｂは、自作の紫外光露光装置（紫外線蛍光灯、東芝メディカルサプライ　ＴＯＲＥＸ　ＦＬ２０Ｓ－Ｅ－３０／ＤＭＲ、２本）を用いて、前記マウスの背部に週３回、１０週間照射された。開始時の照射量は３６ｍＪ／ｃｍ2／回であり、２週目以降の照射量は徐々に増大し、１０週目の照射量は２１６ｍＪ／ｃｍ2／回であった。総照射量は４．６Ｊ／ｃｍ2であった。紫外線照射量はＵＶ　ＲＡＤＩＯＭＥＴＥＲ　ＵＶＲ－３０３６／Ｓ（株式会社トプコン）を用いて測定された。 (2) Irradiation of ultraviolet rays in vivo Ultraviolet rays (UV-B) are produced by partially changing the method of Schwartz et al. (Haratake A. et al. J. Invest. Dermatol. 108: 769-775, 1997). Was repeated according to the method (Naganuma M. et al. J. Dermatol. Sci. 25: 29-35, 2001. Schwartz E. J. Invest. Dermatol. 91: 158-161, 1988.). . Briefly, the UV-B is produced on the back of the mouse 3 times a week using a self-made ultraviolet light exposure apparatus (ultraviolet fluorescent lamp, Toshiba Medical Supply TOREX FL20S-E-30 / DMR, 2 tubes). Irradiated for a week. The irradiation dose at the start was 36 mJ / cm 2 / time, the irradiation dose after the second week gradually increased, and the irradiation dose at the 10th week was 216 mJ / cm 2 / time. The total irradiation dose was 4.6 J / cm 2 . The amount of ultraviolet irradiation was measured using UV RADIOMETER UVR-3036 / S (Topcon Co., Ltd.).
　（３）Ｄ－メチオニンの塗布
　Ｄ－メチオニンの塗布の実験群では、０．１５％のＤ－メチオニンが、１回あたり１００μＬ、１日１回、週５日、１０週間、紫外線照射部に塗布された。 (3) Application of D-methionine In the experimental group of application of D-methionine, 0.15% of D-methionine was applied to the UV irradiation part at 100 μL per time, once a day, 5 days a week, 10 weeks. It was done.
　（４）血管新生の評価
　紫外線照射の終了後、薄切切片が作製され、免疫組織化学染色が行われた。薄切切片の作製及び免疫組織化学染色は、当業者に周知の標準的な方法に従って行われた。前記免疫組織化学染色では、抗汎内皮細胞抗原モノクローナル抗体（カタログ番号５５０５６３、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）が用いられた。血管新生を評価するために、顕微鏡観察下で撮影した組織画像中の血管面積が、画像解析ソフトフェア（ＩＰＬａｂソフトフェア　バージョン４．０、株式会社　ソリューション　システムズ）を用いて定量された。 (4) Evaluation of angiogenesis After the completion of ultraviolet irradiation, a sliced section was prepared and immunohistochemical staining was performed. Thin section preparation and immunohistochemical staining were performed according to standard methods well known to those skilled in the art. In the immunohistochemical staining, an anti-pan endothelial cell antigen monoclonal antibody (catalog number 550563, Nippon Becton Dickinson Co., Ltd.) was used. In order to evaluate angiogenesis, the blood vessel area in the tissue image taken under the microscope observation was quantified using image analysis software (IPLab software version 4.0, Solution Systems Co., Ltd.).
　２．結果
　（１）皮膚状態の観察
　図３は、紫外線照射後の血管新生に対するＤ－メチオニンの効果を示す写真である。マウスの表皮は、紫外線非照射かつＤ－メチオニン非塗布の実験群（以下、「紫外線非照射条件」という。）と比較して、紫外線照射かつＤ－メチオニン非塗布の実験群（以下、「紫外線照射条件」という。）と、紫外線照射かつＤ－メチオニン塗布の実験群（以下、「Ｄ－メチオニン塗布条件」という。）とでは厚かった。また真皮での血管新生は、紫外線照射条件と比較して、Ｄ－メチオニン塗布条件では低かった。 2. Results (1) Observation of skin condition FIG. 3 is a photograph showing the effect of D-methionine on angiogenesis after UV irradiation. The mouse epidermis was compared with the experimental group (hereinafter referred to as “ultraviolet non-irradiation conditions”) in which ultraviolet rays were not irradiated and D-methionine was not applied (hereinafter referred to as “ultraviolet rays”). It was thick in the experimental group (hereinafter referred to as “D-methionine application conditions”) of UV irradiation and D-methionine application. In addition, angiogenesis in the dermis was lower under the D-methionine application condition than under the ultraviolet irradiation condition.
　（２）血管面積の定量
　図４は、紫外線照射後の表皮直下２００μｍの血管面積を示すグラフである。各実験条件の誤差棒は同一条件で４－５回繰り返した実験結果の測定値の標準偏差を示す。また、スチューデントｔ検定において、アステリスク（＊）はｐ値が５％未満であり、アステリスク（＊＊＊）は０．１％未満であることを示す。血管面積（μｍ2）は、紫外線非照射条件では約９００μｍ2であり、紫外線照射条件では約２３００μｍ2であり、Ｄ－メチオニン塗布条件では約１６００μｍ2であった。以上の結果から、Ｄ－メチオニンは、紫外線曝露によって促進される血管新生を統計的に有意に抑制することが示された。 (2) Quantification of Blood Vessel Area FIG. 4 is a graph showing the blood vessel area of 200 μm directly under the epidermis after ultraviolet irradiation. The error bars for each experimental condition indicate the standard deviation of the measured values of the experimental results repeated 4-5 times under the same conditions. In the student t-test, the asterisk (*) indicates that the p-value is less than 5%, and the asterisk (***) is less than 0.1%. Vessel area ([mu] m 2) is in the ultraviolet non-irradiation conditions was about 900 .mu.m 2, the ultraviolet irradiation conditions was about 2300Myuemu 2, the D- methionine coating conditions was about 1600 .mu.m 2. From the above results, it was shown that D-methionine statistically significantly suppressed angiogenesis promoted by UV exposure.
　結論
　本実施例の実験結果から、Ｄ－メチオニンは、紫外線照射後、ＴＨＢＳ１のｍＲＮＡの発現量を増大させ、ＶＥＧＦ－ＡのｍＲＮＡの発現量を統計的に有意に低下した。また、Ｄ－メチオニンは紫外線曝露時の血管新生を抑制した。そこで本発明のＤ－メチオニンを含む組成物は、紫外線曝露によって促進される血管新生をともなう皮膚状態の悪化、特にシワ形成を抑制できることが示唆された。 Conclusion From the experimental results of this Example, D-methionine increased the expression level of THBS1 mRNA after UV irradiation, and statistically significantly decreased the expression level of VEGF-A mRNA. D-methionine also suppressed angiogenesis upon exposure to ultraviolet light. Therefore, it was suggested that the composition containing D-methionine of the present invention can suppress the deterioration of the skin condition accompanied by angiogenesis promoted by UV exposure, particularly wrinkle formation.
　配合例１（乳液製剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　０．４２
ベヘニルアルコール　　　　　　　　　　　　０．２
セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
グリセリンモノ脂肪酸エステル　　　　　　　１．８
硬化ヒマシ油ＰＯＥ（６０）　　　　　　　　１．０
白色ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　２．０
流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　１０．０
ミリスチン酸イソプロピル　　　　　　　　　３．０
メチルポリシロキサン（６ｃｓ）　　　　　　１．５
濃グリセリン　　　　　　　　　　　　　　１３．０
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　２．０
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　０．２５
ヒアルロン酸ナトリウム　　　　　　　　　　０．００５
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　適量
乳酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
エデト酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　適量
エチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．０００ Formulation Example 1 (Emulsion formulation)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
D-methionine 0.42
Behenyl alcohol 0.2
Cetanol 0.5
Glycerin mono fatty acid ester 1.8
Hardened castor oil POE (60) 1.0
White petrolatum 2.0
Liquid paraffin 10.0
Isopropyl myristate 3.0
Methyl polysiloxane (6cs) 1.5
Concentrated glycerin 13.0
Dipropylene glycol 2.0
Carboxyvinyl polymer 0.25
Sodium hyaluronate 0.005
Potassium hydroxide Appropriate amount of lactic acid Appropriate amount of sodium edetate Appropriate amount of ethyl paraben Appropriate amount of purified water Residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.000
　配合例２（貼付剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
ポリアクリル酸　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
ポリアクリル酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　２．５
ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　４．０
ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　０．３
濃グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　１４．０
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　１２．０
水酸化アルミニウム　　　　　　　　　　　　　　　０．１
エデト酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　０．０３
メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 2 (Patch)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
D-methionine 0.3
Polyacrylic acid 3.0
Sodium polyacrylate 2.5
Gelatin 0.5
Sodium carboxymethylcellulose 4.0
Polyvinyl alcohol 0.3
Concentrated glycerin 14.0
1,3-butylene glycol 12.0
Aluminum hydroxide 0.1
Sodium edetate 0.03
Methylparaben 0.1
Purified water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例３（錠剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　配合量（ｍｇ／１錠中）
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　３６０．５
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０２．４
カルボキシメチルセルロースカルシウム　　　　　　２９．９
ヒドロキシプロピルセルロース　　　　　　　　　　　６．８
ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　５．２
結晶セルロース　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．２
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５１５．０ Formulation Example 3 (tablet)
(Composition) Formulation amount (mg / tablet)
D-methionine 360.5
Lactose 102.4
Carboxymethylcellulose calcium 29.9
Hydroxypropylcellulose 6.8
Magnesium stearate 5.2
Crystalline cellulose 10.2
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
515.0
　配合例４（錠剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　配合量（ｍｇ／１錠中）
ショ糖エステル　　　　　　　　　　　　　　　　７０
結晶セルロース　　　　　　　　　　　　　　　　７４
メチルセルロース　　　　　　　　　　　　　　　３６
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　４７５
Ｎ－アセチルグルコサミン　　　　　　　　　　２００
ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　１５０
ビタミンＥ　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
ビタミンＢ６　　　　　　　　　　　　　　　　　２０
ビタミンＢ２　　　　　　　　　　　　　　　　　１０
α－リポ酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０
コエンザイムＱ１０　　　　　　　　　　　　　　４０
セラミド（コンニャク抽出物）　　　　　　　　　５０
Ｌ－プロリン　　　　　　　　　　　　　　　　３００
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５００ Formulation Example 4 (tablet)
(Composition) Formulation amount (mg / tablet)
Sucrose ester 70
Crystalline cellulose 74
Methylcellulose 36
Glycerin 25
D-methionine 475
N-acetylglucosamine 200
Hyaluronic acid 150
Vitamin E 30
Vitamin B6 20
Vitamin B2 10
α-Lipoic acid 20
Coenzyme Q10 40
Ceramide (konjac extract) 50
L-proline 300
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1500
　配合例５（ソフトカプセル）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（ｍｇ／１カプセル中）
食用大豆油　　　　　　　　　　　　　　　　５３０
トチュウエキス　　　　　　　　　　　　　　　５０
ニンジンエキス　　　　　　　　　　　　　　　５０
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　１００
ローヤルゼリー　　　　　　　　　　　　　　　５０
マカ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
ＧＡＢＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
ミツロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０
ゼラチン　　　　　　　　　　　　　　　　　３７５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　１２０
グリセリン脂肪酸エステル　　　　　　　　　１０５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５００ Formulation Example 5 (soft capsule)
(Composition) Blending amount (mg / 1 capsule)
Edible soybean oil 530
Eucommia extract 50
Carrot extract 50
D-methionine 100
Royal Jelly 50
Maca 30
GABA 30
Beeslow 60
Gelatin 375
Glycerin 120
Glycerin fatty acid ester 105
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1500
　配合例６（ソフトカプセル）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（ｍｇ／１カプセル中）
玄米胚芽油　　　　　　　　　　　　　　　　６５９
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　５００
レスベラトロール　　　　　　　　　　　　　　　１
ハス胚芽エキス　　　　　　　　　　　　　　１００
エラスチン　　　　　　　　　　　　　　　　１８０
ＤＮＡ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
葉酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５００ Formulation Example 6 (soft capsule)
(Composition) Blending amount (mg / 1 capsule)
Brown rice germ oil 659
D-methionine 500
Resveratrol 1
Lotus germ extract 100
Elastin 180
DNA 30
Folic acid 30
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1500
　配合例７（顆粒）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（ｍｇ／１包中）
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　４００
ビタミンＣ　　　　　　　　　　　　　　　１００
大豆イソフラボン　　　　　　　　　　　　２５０
還元乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　３００
大豆オリゴ糖　　　　　　　　　　　　　　　３６
エリスリトール　　　　　　　　　　　　　　３６
デキストリン　　　　　　　　　　　　　　　３０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２４
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　２４
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２００ Formulation Example 7 (granule)
(Composition) Blending amount (mg / pack)
D-methionine 400
Vitamin C 100
Soy isoflavone 250
Reduced lactose 300
Soybean oligosaccharide 36
Erythritol 36
Dextrin 30
Fragrance 24
Citric acid 24
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1200
　配合例８（ドリンク）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（ｇ／６０ｍＬ中）
トチュウエキス　　　　　　　　　　　　　　　１．６
ニンジンエキス　　　　　　　　　　　　　　　１．６
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　１．６
還元麦芽糖水飴　　　　　　　　　　　　　　２８
エリスリトール　　　　　　　　　　　　　　　８
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．３
Ｎ－アセチルグルコサミン　　　　　　　　　　１
ヒアルロン酸Ｎａ　　　　　　　　　　　　　　０．５
ビタミンＥ　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
ビタミンＢ６　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
ビタミンＢ２　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
α－リポ酸　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
コエンザイムＱ１０　　　　　　　　　　　　　１．２
セラミド（コンニャク抽出物）　　　　　　　　０．４
Ｌ－プロリン　　　　　　　　　　　　　　　　２
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０ Formulation Example 8 (Drink)
(Composition) Compounding amount (in g / 60 mL)
Eucommia extract 1.6
Carrot extract 1.6
D-methionine 1.6
Reduced maltose starch syrup 28
Erythritol 8
Citric acid 2
Fragrance 1.3
N-acetylglucosamine 1
Hyaluronic acid Na 0.5
Vitamin E 0.3
Vitamin B6 0.2
Vitamin B2 0.1
α-Lipoic acid 0.2
Coenzyme Q10 1.2
Ceramide (konjac extract) 0.4
L-proline 2
Purified water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
60
　配合例９（キャンディー）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（重量％）
砂糖　　　　　　　　　　　　　　　　　５０
水飴　　　　　　　　　　　　　　　　　４８
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　１
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ Formulation Example 9 (candy)
(Composition) Compounding amount (% by weight)
Sugar 50
Minamata 48
D-methionine 1
Fragrance 1
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100
　配合例１０（クッキー）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（重量％）
薄力粉　　　　　　　　　　　　　　　　　４５．０
バター　　　　　　　　　　　　　　　　　１７．５
グラニュー糖　　　　　　　　　　　　　　２０．０
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　４．０
卵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２．５
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．０ Formulation Example 10 (Cookie)
(Composition) Compounding amount (% by weight)
Soft flour 45.0
Butter 17.5
Granulated sugar 20.0
D-methionine 4.0
Egg 12.5
Fragrance 1.0
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.0
　配合例１０（クッキー）の製造方法
　バターを撹拌しながらグラニュー糖を徐々に添加し、卵、Ｄ－メチオニン及び香料を添加して撹拌する。十分に混合した後、均一に振るった薄力粉を加えて低速で撹拌し、塊状で冷蔵庫で寝かせる。その後、成型し１７０°Ｃ、１５分間焼成しクッキーとする。 Production Method of Formulation Example 10 (Cookie) Grain sugar is gradually added while stirring butter, and eggs, D-methionine and flavor are added and stirred. After mixing well, add the weakly shaken flour, stir at low speed, and let it sleep in the refrigerator in bulk. Thereafter, it is molded and baked at 170 ° C. for 15 minutes to obtain a cookie.
　配合例１１（味噌）
　（組成物）　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
大豆　　　　　　　　　　　　　　　１０００
米麹　　　　　　　　　　　　　　　１０００
塩　　　　　　　　　　　　　　　　　４２０
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　１５８
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　４０００ Formulation Example 11 (Miso)
(Composition) Blending amount (g)
Soybean 1000
Rice bran 1000
Salt 420
D-methionine 158
Water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
4000
　配合例１１（味噌）の製造方法
　米こうじと塩とをよく混ぜ合わせる。洗浄した大豆を３倍量の水に一晩つけた後に水を切り、新しい水を加えながら煮込み、ざるにあける。煮汁（種水）を集め、Ｄ－メチオニンを１０％ｗ／ｖとなるように溶解する。煮あがった豆を直ちにすりつぶし、塩を混ぜた米麹を加えて、上記のＤ－メチオニンを溶解した種水を足しながら粘土程の固さになるまでむらなく混ぜ合わせる。団子状に丸めたものを桶に隙間のない様に隅々まで、しっかりと詰め込み、表面を平らにしてラップで覆い密封する。３箇月後に容器を移し変え、表面を平らにしてラップで覆う。なお、Ｄ－メチオニンを種水に加える代わりに、Ｄ－メチオニンを多く産生する米麹を用いてもよい。前記米麹を得るには、特開２００８－１８５５５８に記載の方法でＤ－メチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販の味噌にＤ－メチオニン又はその塩を加えてもよい。 Production method of Formulation Example 11 (Miso) Rice koji and salt are mixed well. After soaking the washed soybeans in 3 times the amount of water overnight, drain the water, boil it with fresh water, and pour it into the sardine. Boiled soup (seed water) is collected and D-methionine is dissolved to 10% w / v. Grind the boiled beans immediately, add the rice bran mixed with salt, and add the seed water in which the above D-methionine is dissolved, and mix evenly until it is as hard as clay. Pack the rolled-up dumplings into the corners without any gaps, flatten the surface, cover with wraps and seal. After 3 months, transfer the container, flatten the surface and cover with wrap. Instead of adding D-methionine to the seed water, rice bran that produces a large amount of D-methionine may be used. In order to obtain the rice bran, it can be selected by quantifying D-methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, D-methionine or a salt thereof may be added to commercially available miso.
　配合例１２（フレンチドレッシング）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
サラダ油　　　　　　　　　　　　　　２７．０
酢　　　　　　　　　　　　　　　　　３０．０
塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　０．９
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　１．１
胡椒　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０．０ Formulation Example 12 (French dressing)
(Composition) Blending amount (g)
Salad oil 27.0
Vinegar 30.0
Sodium chloride 0.9
D-methionine 1.1
Pepper 1.0
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
60.0
　配合例１２（フレンチドレッシング）の製造方法
　酢に塩化ナトリウム及びメチオニンを加えた後に、よく攪拌して溶解する。サラダ油を加えて、よく攪拌し胡椒を加える。 Production Method of Formulation Example 12 (French Dressing) After adding sodium chloride and methionine to vinegar, dissolve well by stirring. Add salad oil, stir well and add pepper.
　配合例１３（マヨネーズ）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
サラダ油　　　　　　　　　　　　　１３４．０
酢　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　０．９
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　１
卵黄　　　　　　　　　　　　　　　　１８
砂糖　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
胡椒　　　　　　　　　　　　　　　　　０．９
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１６０．０ Formulation Example 13 (mayonnaise)
(Composition) Blending amount (g)
Salad oil 134.0
Vinegar 5
Sodium chloride 0.9
D-methionine 1
Yolk 18
Sugar 0.2
Pepper 0.9
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
160.0
　配合例１３（マヨネーズ）の製造方法
　卵黄（室温）に酢、塩化ナトリウム、Ｄ－メチオニン及び胡椒を加えて、泡立て器で十分に攪拌する。サラダ油を少しずつ加えながら攪拌を継続してエマルジョンにする。最後に砂糖を加えて攪拌する。 Production method of Formulation Example 13 (mayonnaise) Add vinegar, sodium chloride, D-methionine and pepper to egg yolk (room temperature), and stir well with a whisk. Stirring is continued while adding salad oil little by little to make an emulsion. Finally add sugar and stir.
　配合例１４（フランスパン）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
強力粉　　　　　　　　　　　　　　　１４０
薄力粉　　　　　　　　　　　　　　　　６０
塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　３
砂糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　６
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　２
ドライイースト　　　　　　　　　　　　　４
ぬるま湯　　　　　　　　　　　　　　１２８
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　３４３ Formulation Example 14 (French bread)
(Composition) Blending amount (g)
Powerful powder 140
Soft flour 60
Sodium chloride 3
Sugar 6
D-methionine 2
Dry yeast 4
Lukewarm water 128
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
343
　配合例１４（フランスパン）の製造方法
　ぬるま湯に砂糖１ｇ及びドライイーストを入れて予備発酵させる。強力粉、薄力粉、塩化ナトリウム、砂糖５ｇ及びＤ－メチオニンをボウルに入れ、その中に予備発酵させたイーストを入れる。十分捏ねた後に球状にして３０°Ｃで一次発酵させる。生地を再度捏ねてから休ませた後に適当な形に整形して電子発酵機を用いて最終発酵させる。クープを入れて２２０°Ｃのオーブンで３０分間焼く。 Production method of Formulation Example 14 (French bread) Pre-fermented with 1 g of sugar and dry yeast in lukewarm water. Place flour, flour, sodium chloride, 5 g sugar and D-methionine in a bowl, and pre-fermented yeast. After kneading sufficiently, it is made into a sphere and subjected to primary fermentation at 30 ° C. The dough is kneaded again, rested, shaped into a suitable shape, and finally fermented using an electronic fermenter. Bake in a 220 ° C oven for 30 minutes.
　配合例１５（醤油）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
市販の醤油　　　　　　　　　　　　　　９８０
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　２０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０００ Formulation Example 15 (soy sauce)
(Composition) Blending amount (g)
Commercial soy sauce 980
D-methionine 20
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1000
　配合例１５（醤油）の製造方法
　市販の醤油にＤ－メチオニンを加えてよく攪拌する。また、Ｄ－メチオニンやその塩を加える代わりに、Ｄ－メチオニンを多く産生する麹を用いて醤油を醸造してもよい。前記米麹を得るには、特開２００８－１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販の醤油にＤ－メチオニンの塩を加えてもよい。 Production Method of Formulation Example 15 (soy sauce) D-methionine is added to commercially available soy sauce and stirred well. Further, instead of adding D-methionine or a salt thereof, soy sauce may be brewed using koji that produces a large amount of D-methionine. In order to obtain the rice bran, the rice bran can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, a salt of D-methionine may be added to commercially available soy sauce.
　配合例１６（ヨーグルト）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
牛乳　　　　　　　　　　　　　　　　　８８０
Ｌ．ブルガリカス菌　　　　　　　　　　　５０
Ｓ．サーモフィルス菌　　　　　　　　　　５０
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　２０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０００ Formulation Example 16 (yogurt)
(Composition) Blending amount (g)
Milk 880
L. Bulgaricus 50
S. Thermophilus 50
D-methionine 20
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1000
　配合例１６（ヨーグルト）の製造方法
　４０°Ｃ～４５°Ｃで発酵させる。他の市販の種菌を用いてもよく、市販のヨーグルトにＤ－メチオニンを加えてもよい。また、Ｄ－メチオニンやその塩を加える代わりに、Ｄ－メチオニンを多く産生する菌を用いてもよい。前記菌を得るには、特開２００８－１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。また、市販のヨーグルトにＤ－メチオニンの塩を加えてもよい。 Production Method of Formulation Example 16 (yogurt) Fermentation is performed at 40 ° C to 45 ° C. Other commercially available inoculum may be used, and D-methionine may be added to commercially available yogurt. Further, instead of adding D-methionine or a salt thereof, a bacterium that produces a large amount of D-methionine may be used. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558. Further, a salt of D-methionine may be added to commercially available yogurt.
　配合例１７（ふりかけ）
　（組成物）　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　５０
のり　　　　　　　　　　　　　　　　１５
Ｌ－グルタミン酸Ｎａ　　　　　　　　１０
塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　２
煎りごま　　　　　　　　　　　　　　１０
さば削り節　　　　　　　　　　　　　１０
砂糖　　　　　　　　　　　　　　　　　１
醤油　　　　　　　　　　　　　　　　　２
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ Formulation Example 17 (sprinkle)
(Composition) Blending amount (g)
D-methionine 50
Paste 15
L-glutamic acid Na 10
Sodium chloride 2
Roasted sesame 10
Crusher Clause 10
Sugar 1
Soy sauce 2
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100
　配合例１８（調味料・納豆のたれ）
　（組成物）　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
市販の納豆のたれ　　　　　　　　　　９
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１０ Formulation Example 18 (Seasoning and natto sauce)
(Composition) Blending amount (g)
Commercial natto sauce 9
D-methionine 1
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
10
　配合例１９（納豆）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　配合量（ｇ）
市販の納豆　　　　　　　　　　　　　　１９．９
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０ Formulation Example 19 (Natto)
(Composition) Blending amount (g)
Commercial natto 19.9
D-methionine 0.1
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
20
　配合例１９（納豆）の製造方法
　市販の納豆にＤ－メチオニン又はその塩を加える代わりに、Ｄ－メチオニンを多く産生する菌を用いて納豆を作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８－１８５５５８に記載の方法でＤ－メチオニンを定量することにより選抜することができる。 Production Method of Formulation Example 19 (Natto) Instead of adding D-methionine or a salt thereof to commercially available natto, natto may be made using bacteria that produce a large amount of D-methionine. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying D-methionine by the method described in JP-A-2008-185558.
　配合例２０（もろみ黒酢）
　（組成物）　　　　　　　　　配合量（ｇ）
市販のもろみ黒酢　　　　　　　　　９００
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　１００
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　１０００ Formulation Example 20 (Moromi black vinegar)
(Composition) Blending amount (g)
Commercially available moromi black vinegar 900
D-methionine 100
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
1000
　配合例２０（もろみ黒酢）の製造方法
　市販の酢、黒酢にＤ－メチオニン又はその塩を加える代わりに、Ｄ－メチオニンを多く産生する菌を用いて酢、黒酢、もろみを作ってもよい。前記菌を得るには、特開２００８－１８５５５８に記載の方法でメチオニンを定量することにより選抜することができる。 Production method 20 (Moromi black vinegar) Instead of adding D-methionine or its salt to commercially available vinegar or black vinegar, you can make vinegar, black vinegar or moromi using bacteria that produce a lot of D-methionine Good. In order to obtain the bacterium, it can be selected by quantifying methionine by the method described in JP-A-2008-185558.
　配合例２１（クリーム）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
ジメチルポリシロキサン　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．８
ベヘニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．６
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
マカデミアナッツ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
硬化油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６
ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
ヒドロキシステアリン酸コレステリル　　　　　　　　　　　　０．５
２－エチルヘキサン酸セチル　　　　　　　　　　　　　　　　４
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　０．５
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン　　　　　　　　　　　３
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
トリメチルグリシン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
α－トコフェロール　２－Ｌ－アスコルビン酸
　　　　　　　　　　　　　　　リン酸ジエステルカリウム　　１
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４
パラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
エデト酸３ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
４－ｔ－ブチル－４’－メトキシジベンゾイルメタン　　　　　０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ－２－エチルヘキサン酸グリセリル　０．０５
色剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 21 (cream)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Liquid paraffin 3
Vaseline 1
Dimethylpolysiloxane 1
Stearyl alcohol 1.8
Behenyl alcohol 1.6
Glycerin 8
Dipropylene glycol 5
Macadamia nut oil 2
Hardened oil 3
Squalane 6
Stearic acid 2
Cholesteryl hydroxystearate 0.5
Cetyl 2-ethylhexanoate 4
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.5
Self-emulsifying glyceryl monostearate 3
Potassium hydroxide 0.15
Sodium hexametaphosphate 0.05
Trimethylglycine 2
α-tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester 1
Tocopherol acetate 0.1
D-methionine 4
Paraben appropriate amount edetate trisodium 0.05
4-t-butyl-4′-methoxydibenzoylmethane 0.05
Diparamethoxycinnamic acid mono-2-ethylhexanoate glyceryl 0.05
Colorant Appropriate amount Carboxyvinyl polymer 0.05
Purified water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２２（ボディー用クリーム）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
デカメチルシクロペンタシロキサン　　　　　　　　　　　　１３
ドデカメチルシクロヘキサシロキサン　　　　　　　　　　　１２
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体　　　　　１
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
イソプロパノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
ポリエチレングリコール６０００　　　　　　　　　　　　　　５
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
ウイキョウエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ハマメリスエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ニンジンエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｌ－メントール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
パラオキシ安息香酸エステル　　　　　　　　　　　　　　　　適量
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
ジモルホリノピリダジノン　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキシ）
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　シリルイソペンチル　０．１
黄酸化鉄　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
チタン酸コバルト　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト　　　　　　　１．５
ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ヒドロキシエチルセルロース　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
トリメチルシロキシケイ酸　　　　　　　　　　　　　　　　　２
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 22 (Body Cream)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Dimethylpolysiloxane 3
Decamethylcyclopentasiloxane 13
Dodecamethylcyclohexasiloxane 12
Polyoxyethylene methylpolysiloxane copolymer 1
Ethanol 2
Isopropanol 1
Glycerin 3
Dipropylene glycol 5
Polyethylene glycol 6000 5
Sodium hexametaphosphate 0.05
Tocopherol acetate 0.1
D-methionine 3
Fennel extract 0.1
Hamelis extract 0.1
Carrot extract 0.1
L-menthol appropriate amount paraoxybenzoate appropriate amount edetate trisodium 0.05
Dimorpholinopyridazinone 0.01
Methyl bis (trimethylsiloxy) trimethoxycinnamate
Silyl isopentyl 0.1
Yellow iron oxide Appropriate amount Cobalt titanate Appropriate amount Dimethyl distearyl ammonium hectorite 1.5
Polyvinyl alcohol 0.1
Hydroxyethyl cellulose 0.1
Trimethylsiloxysilicic acid 2
Perfume Appropriate amount of purified water
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２３（ジェル剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　５
ポリエチレングリコール１５００　　　　　　　　　　　　　　３
ポリエチレングリコール２００００　　　　　　　　　　　　　３
オクタン酸セチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
グリチルリチン酸ジカリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
オウゴンエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ユキノシタエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
キサンタンガム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
アクリル酸・メタクリル酸
　　　　　　アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ－２）　　　　０．０５
寒天末　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５
フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ジブチルヒドロキシトルエン　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 23 (gel agent)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Dimethylpolysiloxane 5
Glycerin 2
1,3-butylene glycol 5
Polyethylene glycol 1500 3
Polyethylene glycol 20000 3
Cetyl octanoate 3
Citric acid 0.01
Sodium citrate 0.1
Sodium hexametaphosphate 0.1
Dipotassium glycyrrhizinate 0.1
D-methionine 2
Tocopherol acetate 0.1
Ogon Extract 0.1
Yukinoshita extract 0.1
Edetate trisodium 0.1
Xanthan gum 0.3
Acrylic acid / methacrylic acid alkyl copolymer (Pemulene TR-2) 0.05
Agar powder 1.5
Phenoxyethanol Appropriate amount Dibutylhydroxytoluene Appropriate amount of purified water Residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２４（ピールオフマスク）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　６
ポリエチレングリコール４０００　　　　　　　　　　　　　　２
オリーブ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
マカデミアナッツ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル　　　　　　　　　　　０．０５
乳酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
乳酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｌ－アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム　　　　　　　　０．１
α－トコフェロール　２－Ｌ－アスコルビン酸
　　　　　　　　　　　　　　　リン酸ジエステルカリウム　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４
魚コラーゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
コンドロイチン硫酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　　　　　　０．２
ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　１２
パラオキシ安息香酸エステル　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 24 (Peel-off mask)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Ethanol 10
1,3-butylene glycol 6
Polyethylene glycol 4000 2
Olive oil 1
Macadamia nut oil 1
Phytosteryl hydroxystearate 0.05
Lactic acid 0.05
Sodium lactate 0.1
L-ascorbic acid sulfate disodium salt 0.1
α-tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester 0.1
D-methionine 4
Fish collagen 0.1
Sodium chondroitin sulfate 0.1
Sodium carboxymethylcellulose 0.2
Polyvinyl alcohol 12
Paraoxybenzoic acid ester
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２５（含浸マスク）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　８
キシリット　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
ポリエチレングリコール１５００　　　　　　　　２
ローズマリー油　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
セージ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２
クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　０．０８
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　０．０１
ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
バーチエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ラベンダー油　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
キサンタンガム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　０．１５
パラオキシ安息香酸エステル　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 25 (impregnation mask)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Glycerin 1
1,3-butylene glycol 8
Xylit 2
Polyethylene glycol 1500 2
Rosemary oil 0.01
Sage oil 0.1
Citric acid 0.02
Sodium citrate 0.08
Sodium hexametaphosphate 0.01
Hydroxypropyl-β-cyclodextrin 0.1
D-methionine 0.5
Birch extract 0.1
Lavender oil 0.01
Xanthan gum 0.05
Carboxyvinyl polymer 0.15
P-Hydroxybenzoate appropriate amount purified water remaining
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２６（乳液）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
デカメチルシクロペンタシロキサン　　　　　　　　　　２
ベヘニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　７
ポリエチレングリコール１５００　　　　　　　　　　　２
ホホバ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
イソステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ベヘニン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
テトラ２－エチルヘキサン酸ペンタエリスリット　　　　３
２－エチルヘキサン酸セチル　　　　　　　　　　　　　３
モノステアリン酸グリセリン　　　　　　　　　　　　　１
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン　　　　１
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　０．０５
グリチルレチン酸ステアリル　　　　　　　　　　　　　０．０５
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
ローヤルゼリーエキス　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム　　　　　　　　　　０．１
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
４－ｔ－ブチル－４’－メトキシジベンゾイルメタン　　０．１
パラメトキシ桂皮酸２－エチルヘキシル　　　　　　　　０．１
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　０．１５
パラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 26 (Emulsion)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Liquid paraffin 7
Vaseline 3
Decamethylcyclopentasiloxane 2
Behenyl alcohol 1.5
Glycerin 5
Dipropylene glycol 7
Polyethylene glycol 1500 2
Jojoba oil 1
Isostearic acid 0.5
Stearic acid 0.5
Behenic acid 0.5
Tetra-2-ethylhexanoic acid pentaerythrit 3
Cetyl 2-ethylhexanoate 3
Glycerol monostearate 1
Polyoxyethylene glyceryl monostearate 1
Potassium hydroxide 0.1
Sodium hexametaphosphate 0.05
Stearyl glycyrrhetinate 0.05
D-methionine 1
Royal Jelly Extract 0.1
Yeast extract 0.1
Tocopherol acetate 0.1
Acetylated sodium hyaluronate 0.1
Edetate trisodium 0.05
4-t-butyl-4′-methoxydibenzoylmethane 0.1
2-Ethylhexyl paramethoxycinnamate 0.1
Carboxyvinyl polymer 0.15
Paraben Appropriate perfume Appropriate purified water Residual
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２７（乳液）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
ジメチルポリシロキサン　　　　　　　　　　　　　　２
ベヘニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　１
バチルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　７
エリスリトール　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
硬化油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６
テトラ２－エチルヘキサン酸ペンタエリスリット　　　２
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル　　　１
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン　　　１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　０．０５
フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　適量
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　０．１
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 27 (milky lotion)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Dimethylpolysiloxane 2
Behenyl alcohol 1
Batyl alcohol 0.5
Glycerin 5
1,3-butylene glycol 7
Erythritol 2
Hardened oil 3
Squalane 6
Tetra-2-ethylhexanoic acid pentaerythrit slit 2
Polyoxyethylene glyceryl isostearate 1
Polyoxyethylene glyceryl monostearate 1
D-methionine 0.3
Potassium hydroxide appropriate amount Sodium hexametaphosphate 0.05
Phenoxyethanol appropriate amount carboxyvinyl polymer 0.1
Purified water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２８（化粧水）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
エチルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　５
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン
　　　　　　　　　　　　　デシルテトラデシルエーテル　　　０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．０３
トリメチルグリシン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１
ポリアスパラギン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　０．１
α－トコフェロール　２－Ｌ－アスコルビン酸
　　　　　　　　　　　　　　　リン酸ジエステルカリウム　　０．１
チオタウリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４
ＥＤＴＡ３ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０２
フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 28 (lotion)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Ethyl alcohol 5
Glycerin 1
1,3-butylene glycol 5
Polyoxyethylene polyoxypropylene decyl tetradecyl ether 0.2
Sodium hexametaphosphate 0.03
Trimethylglycine 1
Sodium polyaspartate 0.1
α-tocopherol 2-L-ascorbic acid potassium phosphate diester 0.1
Thiotaurine 0.1
D-methionine 4
EDTA3 sodium 0.1
Carboxyvinyl polymer 0.05
Potassium hydroxide 0.02
Phenoxyethanol appropriate amount perfume appropriate amount purified water remaining
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例２９（化粧水）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　１
ポリエチレングリコール１０００　　　　　　　　　　１
ポリオキシエチレンメチルグルコシド　　　　　　　　１
ホホバ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
トリ２－エチルヘキサン酸グリセリル　　　　　　　　０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油　　　　　　　　　　０．２
ジイソステアリン酸ポリグリセリル　　　　　　　　　０．１５
Ｎ－ステアロイル－Ｌ－グルタミン酸ナトリウム　　　０．１
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．４
グリチルリチン酸ジカリウム　　　　　　　　　　　　０．１
塩酸アルギニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
Ｌ－アスコルビン酸　２－グルコシド　　　　　　　　２
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
パラメトキシ桂皮酸２－エチルヘキシル　　　　　　　０．０１
ジブチルヒドロキシトルエン　　　　　　　　　　　　適量
パラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
海洋深層水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 29 (lotion)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Ethanol 10
Dipropylene glycol 1
Polyethylene glycol 1000 1
Polyoxyethylene methyl glucoside 1
Jojoba oil 0.01
Glyceryl tri-2-ethylhexanoate 0.1
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 0.2
Polyglyceryl diisostearate 0.15
N-stearoyl-L-glutamate sodium 0.1
Citric acid 0.05
Sodium citrate 0.2
Potassium hydroxide 0.4
Dipotassium glycyrrhizinate 0.1
Arginine hydrochloride 0.1
L-ascorbic acid 2-glucoside 2
D-methionine 0.5
Edetate trisodium 0.05
2-Ethylhexyl paramethoxycinnamate 0.01
Dibutylhydroxytoluene Appropriate amount Paraben Appropriate amount Deep sea water 3
Perfume Appropriate amount of purified water
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例３０（エアゾール尿素外用剤原液）
　（組成物）　　　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０　　　　　１．５
ジフェンヒドラミン　　　　　　　　　　　　　１．０
ジブカイン　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　０．５
Ｄ－メチオニン　　　　　　　　　　　　　　　０．１
イソステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　０．１
１，３－ブチレングリコール　　　　　　　　　３．０
ポリエチレングリコール４００　　　　　　　　３．０
カンフル　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
尿素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．０
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 30 (Aerosol urea external preparation stock solution)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Ethanol 15.0
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil 50 1.5
Diphenhydramine 1.0
Jibcaine 2.0
Tocopherol acetate 0.5
D-methionine 0.1
Isostearic acid 0.1
1,3-butylene glycol 3.0
Polyethylene glycol 400 3.0
Camphor 0.05
Urea 20.0
Purified water residue
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）
　（組成物）　　　　　　　　　　　配合量（質量％）
エアゾール尿素外用剤原液　　　　　　　６５．０
ジメチルエーテル　　　　　　　　　　　３５．０
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００ Formulation Example 31 (Aerosol urea propellant)
(Composition) Compounding amount (% by mass)
Aerosol urea external preparation stock solution 65.0
Dimethyl ether 35.0
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
100.00
　配合例３１（エアゾール尿素噴射剤）の充填方法
　エアゾール尿素外用剤原液及びジメチルエーテルを内面テフロン（登録商標）コート処理耐圧エアゾールアルミ缶に充填してエアゾール剤を調製する。 Formulation Example 31 (Aerosol Urea Propellant) Filling Method An aerosol urea preparation is prepared by filling an inner surface Teflon (registered trademark) coated pressure-resistant aerosol aluminum can with an aerosol urea external preparation stock solution and dimethyl ether.

Claims (9)

  1. 　Ｄ－メチオニンと、その誘導体及び／又は塩とからなる群から選択される１種類又は２種類以上の化合物を含むことを特徴とする、紫外線曝露によって促進される血管新生を抑制するための組成物。 A composition for suppressing angiogenesis promoted by exposure to ultraviolet rays, comprising one or more compounds selected from the group consisting of D-methionine and derivatives and / or salts thereof .
  2. 　前記紫外線はＵＶ－Ｂであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。 The composition according to claim 1, wherein the ultraviolet ray is UV-B.
  3. 　前記血管新生は、トロンボスポンジン（ＴＨＢＳ）の発現増大、及び／又は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の発現低下によって抑制されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。 The composition according to claim 1 or 2, wherein the angiogenesis is suppressed by increased expression of thrombospondin (THBS) and / or decreased expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). .
  4. 　皮膚外用剤として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the composition is used as an external preparation for skin.
  5. 　化粧品であることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。 The composition according to claim 4, wherein the composition is a cosmetic.
  6. 　シワ抑制剤であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。 The composition according to claim 5, which is a wrinkle inhibitor.
  7. 　皮膚疾患用医薬品として用いられることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。 The composition according to claim 4, which is used as a pharmaceutical for skin diseases.
  8. 　前記皮膚疾患は、皮膚がん、及び、酒さからなる群から選択される少なくとも１つの疾患であることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。 The composition according to claim 7, wherein the skin disease is at least one disease selected from the group consisting of skin cancer and rosacea.
  9. 　食品として用いられることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the composition is used as food.
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