WO2013110845A1 - Extracto de romero y su uso en alimentación animal - Google Patents

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WO2013110845A1
WO2013110845A1 PCT/ES2013/070034 ES2013070034W WO2013110845A1 WO 2013110845 A1 WO2013110845 A1 WO 2013110845A1 ES 2013070034 W ES2013070034 W ES 2013070034W WO 2013110845 A1 WO2013110845 A1 WO 2013110845A1
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extract
meat
feed
rosemary
carnosol
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PCT/ES2013/070034
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French (fr)
Inventor
María José JORDÁN BUESO
José Antonio SOTOMAYOR SÁNCHEZ
Julián CASTILLO SÁNCHEZ
Obdulio BENAVENTE-GARCÍA GARCÍA
Sancho José BAÑÓN ARIAS
Original Assignee
Universidad De Murcia
Nutrafur, S.A.
Instituto Murciano De Investigacion Y Desarrollo Agrario Y Alimentario (Imida)
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    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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Definitions

  • the invention belongs to the agri-food sector, in the field of the production of meat raw materials. More specifically, the invention relates to a rosemary extract and its use, as a supplement, in the production of animal feed. BACKGROUND OF THE INVENTION
  • vitamin E is the dietary supplement most frequently used in animal nutrition for this purpose, due to its proven antioxidant activity on meat, although it does not act on altering or pathogenic bacteria that proliferate in this matrix.
  • Rosemary extract in general, is already included in the positive lists of animal feed additives, in fact, its sale in this industry requires specific registration. The introduction of rosemary extracts in animal feed has been addressed by various researchers, although it has not yet been resolved.
  • the main technical problem lies in optimizing certain factors, including: the minimum effective dose of extract, the ideal stage of its administration (pregnancy, lactation, bait), and the concentration ratios between active ingredients, in order to achieve adequate transmission of antioxidant components, in active concentrations, to the food products derived therefrom; as well as improving the quality and safety of meat, with the consequent benefit to public health.
  • the authors of the present invention have shown that the concentration of carnosol in the extract typified of rosemary, must at least equal, and even exceed, that of carnosic acid.
  • Meat from animals fed with feed supplemented by the extract of the present invention has a greater antimicrobial and antioxidant capacity than meat from animals fed with non-supplemented feed, so the extract improves its quality and increases its commercial life.
  • Figure 1 Antioxidant status of the externus abdominis muscle of Segure ⁇ o lamb
  • Figure 2 Anti-radical capacity (IC50) of the externus abdominis muscle of Segure ⁇ o lamb.
  • Figure 3 Antioxidant status of deltoideus muscle in Segure ⁇ o lamb.
  • Figure 9 Smell scores of raw lamb meat (arbitrary sensory scale established by trained panel) in raw meat exposed under retail conditions.
  • Figure 10 Fresh loin of lamb not supplemented (left), supplemented with 640 mg / kg (center) or 980 mg / kg of active compounds (right), after 1 1 days of exposure in retail conditions.
  • the subject of the invention is a rosemary extract comprising diterpenes carnosic acid and carnosol with a concentration ratio [carnosic acid] / [carnosol] between 0.7 and 1 .2.
  • rosemary extract in animal feed is also an object of the invention.
  • Diterpenes carnosic acid and its derivative, lactone carnosol are components present in the liposoluble polyphenolic fraction of rosemary leaf, the one with the highest antioxidant capacity.
  • the works of the authors of the present invention support the high antioxidant capacity of these components in vitro.
  • the in vivo experiments carried out by them reveal the important role of lactone carnosol to ensure a greater transfer of these components and their metabolites, and thus ensure relevant results.
  • a plant extract from dehydrated rosemary leaf, both deacetylated and whole, comprising diterpenes carnosic acid and carnosol with a concentration ratio [carnosic acid] / [carnosol] between 0.7 and 1 .2.
  • the concentration ratio is 1.
  • the extract of the invention in addition to the active ingredients, may include other additional components, qualitatively common to other rosemary extracts, such as monoterpenes, other diterpenes, triterpenes, ursolic acid, flavonoids, other phenols, fibers, and other characteristic components of any plant type leaf material.
  • the extract of the invention allows to increase the endogenous preservation capacity of animal meat, conferring it with antioxidant and antimicrobial properties.
  • the minimum concentration of diterpenes present in the extract of the present invention (the sum of the weight of both active ingredients, carnosic acid and carnosol, with respect to the total weight of the extract) is between 25 and 35%. .
  • Another aspect of the invention contemplates the use of the extract of the invention in animal feed.
  • the use of the extract of the invention in the manufacture of a feed for animal feed is contemplated.
  • the importance of the relationship between the concentration of carnosic acid and carnosol in the rosemary extract to be added in the feed for animal feed is essential to ensure a correct bioavailability of both components and thus ensure the effective improvement of the quality and shelf life of the meat.
  • the feed supplemented with the extract is intended for feeding ruminants.
  • administration of the feed supplemented with the extract of the invention is carried out during the bait period.
  • the choice of the bait period to administer the extract is solely for economic reasons (the extract makes the price of feed more expensive) and logistics (it should only be introduced into the feed of lamb bait, since there is also growth feed and for mothers ).
  • the extension of the extract to the three types of feed (adults, growth and bait) is equally possible and adequate, although it would make the diet more expensive and could hardly improve the results obtained.
  • the feed supplemented with the extract of the invention is intended for the bait of lambs of light and heavy breeds, with a live slaughter weight that can range between 26 ⁇ 3 Kg.
  • the concentration of extract to be added to the feed must be in the range of 2700 to 4000 ppm, to achieve adequate effectiveness. Under these conditions, the minimum concentration of the sum of the two active ingredients present in the feed is between 600-900 ppm.
  • the diet of the lambs during the bait stage should be supplemented with an amount of rosemary extract that provides a total of 640-980 mg of diterpenes (carnosic acid and carnosol in equal parts) per kg of fattening feed. The way to supply it is ad libitum.
  • the antioxidant and antimicrobial activity of the extract has been demonstrated by the authors of the present invention first in vivo, by monitoring active compounds of rosemary in fluids and tissues, and then proving its effectiveness as endogenous preservatives in fresh and cooked meat subjected to retail conditions.
  • Another method of the invention contemplates a method for obtaining the plant extract of the invention comprising the following steps:
  • solid-liquid separation is effected by filter-press or basket centrifuge separation.
  • the organic solution obtained containing the active ingredients is taken to a stirred tank and mixed with a specific amount of water, until a weight-to-weight ratio is reached with respect to the extraction solvent between 20 and 50%, preferably 40%,
  • the medium thus formed is slowly stirred for a period between 1 and 4 hours, at room temperature, for the precipitation of a crystalline solid,
  • the crystalline solid that precipitates is filtered, by means of a basket or centrifugal filter press, and washed with water in a weight-volume ratio in the range 1: 5 - 1: 8, at a temperature in the range 70 - 90 e C.
  • the product Once the product has dried (with a humidity of less than 2%), it is discharged to obtain the rosemary extract.
  • the solid extract obtained by the process of the invention is added as another additive in the mixer, and then proceeds as in other procedures usually performed in the state of the art: mixes with the feed at a temperature below 65 e C; granulation is carried out at 70-75 e C and 2 kg of steam, the relative humidity of the final product being less than 1 1%.
  • Example 1 Antioxidant capacity of the extract of the invention in lamb muscle
  • the FRAP method (reducing capacity against Fe + 3 defined by Benzie and Strain (1996) and modified by Descalzo et al., ("Antioxidant) was used to measure the antioxidant and anti-radiation capacities, shown by the above-mentioned methanolic extracts. status and odor profile in fresh beef from pasture or grain-fed cattle ". Meat Sci. 2007, 75, 299-307) and DPPH free radical inhibitory capacity» described by Brand-Willians et al., ("Use of free radical method to evaluate antioxidant activit. Lebensm.-Wiss. Technol. 1995, 28, 25-30).
  • Figure 1 shows the reducing capacity (versus Fe + 3) of the metabolites from the intake of the two extracts of rosemary P1 and P2 added to the diet of the Segure ⁇ o lamb during the entire bait period.
  • This same behavior was detected for the anti-radiation capacity, measured against the DPPH radical ”; in this case the IC50 values of the methanolic extracts of the P1 diet were lower than those of P2. ( Figure 2).
  • the samples analyzed were fresh meat medallions (longissimus dorsi muscle) 1.5 cm thick packed in a polystyrene tray covered by a low oxygen permeability plastic (8-12 cm 3 m "2 0 2 for 24h) in which Inside, a modified atmosphere of ordinary use was introduced to pack red meat (70% oxygen and 30% carbon dioxide)
  • the samples were exposed for 0, 1, 7 or 14 days in commercial exhibitors at a temperature of 2 e C and illuminated with white light at 1600 Ix.
  • Fat oxidation was measured as an index of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) (mg malondialdehyde kg ⁇ 1 ), determined by colorimetry (Unicam UV2 spectrophotometer) according to the method of Botsoglou et al. (1994) ("f ⁇ apid, sensitive, and specific thiobarbituric acid methods for measuring lipid peroxidation in animal tissue, food, and feedstuff samples". Journal of Agriculture! And Food Chemistry, 42, 1931-1937).
  • TBARS thiobarbituric acid reactive substances
  • the general bacterial load was established by counts (log ufe g "1 ) of total mesophilic aerobes and psychrophilic bacteria (ISO 4833, 2003, International Organization for Standardization Publications. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of microorganisms. Colony-count technique at 30 degrees C. ⁇ www.iso.org>) The samples were aseptically manipulated in a laminar flow hood (Bio-ll-A Telstar, Terrasa, Barcelona, Spain) and homogenized in sterile bags with water of peptone (Oxoid Ltd. CM0087.
  • Sensory evaluation was performed by quantitative descriptive sensory analysis (ISO Standard 4121, 2003. Sensory analysis Methodology. Evaluation of food products by methods using scales. International Organization for Standardization Publications. ⁇ www.iso.org>) using 8 panelists selected and trained in accordance with ISO 8586-1 (1993). Sensory analysis Methodology. General guidance for the selection and training and monitoring of assesors. Part 1. Selected assessors. International Organization for Standardization
  • the scale used was from 1 (minimum) to 5 (maximum).
  • the analyzes were performed in a standardized tasting room.
  • the effect of the two treatments applied (lamb diet and storage time) with possible effect on fragmented lamb meat was established by multiple analysis of variance.
  • the effect of both treatments was established simultaneously to calculate the possible extension of the commercial life of the meat.
  • the treatment affected the dependent variables (quality parameters) when their average values were different according to the calculations established in the Scheefe means homogeneity test for a probability lower than 95% (P ⁇ 0, 05).
  • the different mean values of the same variable were represented in the tables with different letters in the form of superscripts. The average values were ordered from highest to lowest in groups identified with letters from the letter a (highest average value) onwards.
  • Figures 6, 7, 8 and 9 show some results that demonstrate the efficacy of the extracts tested, mainly reflected in: - Strong reduction of lipid oxidation.
  • Figure 7 shows values of angle hue (rad) in raw meat exposed under retail conditions.
  • a greater angle H * indicates greater browning or brown color typical of aged meat, produced by oxidation of muscle myoglobin, while a smaller Hue angle means a greater redness of the meat.
  • Freshly packaged meat presented a characteristic red color regardless of the diet of the lambs.
  • the P1 diet stabilized the red color of the meat better than the P2 diet and control on day 7, while both diets, both the P1 diet and the P2 diet, delayed the browning of the meat similarly on day 14, therefore, rosemary extract P1 was the most effective antioxidant treatment.
  • Figure 8 shows counts of total psychrophilic bacteria (Log cfu / g) in raw meat exposed under retail conditions.
  • a higher count of psychrophilic bacteria means a greater total load of altering bacteria capable of growing in the meat at refrigeration temperature and therefore worse microbiological quality of the meat.
  • the bacterial load was similar in freshly packaged meat regardless of the diet of the lambs. Both the P1 diet and the P2 diet inhibited the growth of altering bacteria in a similar manner on days 7 and 14, therefore, rosemary extracts P1 and P2 had a similar antimicrobial effect.
  • Figure 9 shows odor scores of raw lamb meat (arbitrary sensory scale established by trained panel) in raw meat exposed under retail conditions.
  • a higher note of serum odor indicates a greater freshness of fresh meat. This characteristic smell is lost progressively due to the appearance of stale or unpleasant odors due to the oxidation of raw meat.
  • the smell of freshly packaged meat was similar regardless of the diet of the lambs. Both the P1 diet and the P2 diet similarly delayed the deterioration of the odor of altering bacteria on days 7 and 14, therefore, rosemary extracts P1 and P2 had a similar sensory effect.
  • the 980 ppm dose was somewhat more effective than the 600 ppm dose.
  • the administration of 980 ppm increased the commercial life of raw meat from 1 to 14 days, compared with 640 ppm of P1 rosemary extract.
  • figures 10 and 11 show graphically how the supplementation of lambs with rosemary extract P1 significantly delays the deterioration of the color of the meat, the main parameter that limits the commercial life of fragmented raw red meat, such as meat of lamb. b) Cooked minced meat.
  • the samples analyzed were cooked hamburgers (made with all the muscles of the leg), packaged in trays of polystyrene and covered with oxygen permeable film. The samples were exposed for 0, 2 or 4 days at 2 e C and 1640 lux in commercial exhibitors.
  • the extraction process was carried out on a batch of 3000 kilos of dehydrated rosemary leaf, using ethanol as an extraction solvent, in a proportion of leaf weight / solvent volume of 1: 10 (1000 kilos of leaf: 10,000 liters of ethanol).
  • the extraction conditions were: temperature 60 e C and extraction time 100 minutes. After extraction, solid-liquid separation was performed in a basket centrifuge.
  • the organic solution containing the active ingredients was taken to a stirred tank and a specific amount of water was added, until a weight-to-weight ratio with respect to the extraction solvent of 40% was reached.
  • the amount of water added to the ethanol solution obtained was 6500 liters, thus obtaining a mixture of about 16,500 liters, of ethanol-water ratios (61: 39).
  • the precipitated solid was filtered by filter press, using polypropylene fabrics as filter media. This solid was subsequently washed in a tank with about 250 liters of deionized water (1: 8 ratio), at a temperature of 85 e C.
  • the washed solid was filtered again using a filter press. It was unloaded for drying in a vacuum oven. The drying temperature started at 45 e C and an ascending temperature gradient was performed, reaching 80 e C as the final temperature. Once the product was dry (humidity below 2%), it was unloaded, obtaining 31 kilos of rosemary extract.
  • the chromatographic analysis of the extract obtained had the following results: carnosic acid, 13.3%; carnosol, 16.7% (carnosic acid / carnosol ratio: 0.796 ⁇ 0.8), total concentration of assets, 30%.
  • Example 4 Method of manufacturing a feed of lamb bait using the rosemary extract of the invention
  • Rosemary extract (30% purity) was used with proportions (0.8) in carnosic acid: carnosol at a concentration of 2700 ppm - assuming that the degradation of diterpenes after feed manufacturing does not exceed 20%, to ensure a 640 ppm richness in diterpenes - to feed the lamb during the entire bait period.
  • the solid extract was added as another additive in the mixer. It was then mixed with the feed at a temperature of 60 e C.
  • the granulation was carried out at 73 e C and 2 kg of steam.
  • the relative humidity of the final product obtained was 1 1%.

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Abstract

La presente invención se refiere a un extracto vegetal procedente de hoja de romero que comprende los diterpenos ácido carnósico y carnosol con una relación de concentraciones (ácido carnósico)/(carnosol) compredida entre 0.7 y 1.2. Asimismo, se refiere al empleo de dicho extracto en la fabricación de un pienso para alimentación animal, así como al pienso suplementado con dicho extracto. Finalmente, se contempla el método de obtención del extracto vegetal de la invención.

Description

EXTRACTO DE ROMERO Y SU USO EN ALIMENTACIÓN ANIMAL
CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención pertenece al sector de la agroalimentación, en el campo de la producción de materias primas cárnicas. Más concretamente, la invención se refiere a un extracto de romero y su empleo, como suplemento, en la elaboración de piensos para alimentación animal. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La Legislación Alimentaria no permite el uso de aditivos conservantes en la carne cruda fragmentada, y, por tanto, una de las opciones para mejorar su capacidad de conservación pasa por la incorporación de sustancias activas no consideradas aditivos a través de la dieta animal. Este hecho, junto con la creciente demanda por los consumidores de alimentos más seguros y naturales, ha fomentado el interés por incorporar antioxidantes naturales a la carne a través de la dieta animal, tanto para mejorar las características productivas de los animales {O'Connell, J.E.; Fox, P.F. "Significance and applications of phenolic compounds in the production and quality of milk and dairy producís: a review". International Dairy Journal. 2001. 1 1, 3:
103- 120; Ronchi, B.; Nardone, A. Contribution of organic farming to increase sustainability of Mediterranean small ruminants livestock systems. Livestock Production Science. 2003. 80, 1, 17-31; Sancho, P. et al. "Microbiological characterization of food residues for animal feeding". Waste Management. 2004. 24, 9, 919-926; Mahgoub, O. et al. "The use of a concéntrate containing Meskit (pods and date palm by-products to replace commercial concéntrate in diets of Omani sheep. Animal Feed Science and Technology". 2005. 120, 1-2, 33-41; Pinacho, A. et al. "Study of drying systems for the utilization of biodegradable municipal solid wastes as animal feed". Waste Management. 2006. 26,5: 495-503; Schmidt, Ty B et al. "The Effects of Nutritional Management on Carcass Merit of Beef Cattle and on
Sensory Properties of Beef". Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice. 2007. 23, 1:151-163; Vázquez-Añón et al. "Effects of Feeding a Dietary Antioxidant in Diets with Oxidized Fat on Lactation Performance and Antioxidant Status of the Cow. Journal of Dairy Science. 2008. 91 (8): 3165-3172; Trenzado, CE.; et al "Antioxidant defenses and hematological adjustments in crowded/uncrowded rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) fed on diets with different levéis of antioxidant vitamins and HUFA. Comparative Biochemistry and Physiology. 2009. 149: 440-447; Karami, M.; et al. "Effects of dietary antioxidants on the quality, fatty acid profile, and lipid oxidation of longissimus muscle in Kacang goat with aging time". Meat Science. 2011. 88 :102-108; Liu, H.et al "Influence of chestnut tannins on welfare, carcass characteristics, meat quality, and lipid oxidation in rabbits under high ambient temperature". Meat Science. 2012. 90:164-169) como para transmitir las cualidades derivadas de dichos componentes a las producciones de carne {Botsoglou et al. "The effect of feeding rosmary, orégano, saffon and a- tocopheryl acétate on hen performance and oxidative stability of eggs" S. Afr. J. An. Sci. 2005, 35, 143- 151; Moñino et al. "Polyphenolic transmission to Segureño lamb meat from ewes diet supplemented with the distillate from rosemary (fíosmarinus officinalis) leaves". J. Agrie. Food Chem. 2008, 56, 3363-3367; Descalzo, A.M. et al. "Antioxidant status and odour profile in fresh beef from pasture or grain-fed cattle". Meat Science. 2007. 75, 299-307; Nieto, G. et al. "Dietary administration of ewe diets with a distillate from rosemary leaves (fíosmarinus officinalis L): Influence on lamb meat quality" Meat Science, 2010. 84, 23-29; Trefan, L. et al. "Meta-analysis of the effects of dietary vitamin E supplementation on α-tocopherol concentration and lipid oxidation in pork". Meat Science. 2011. 87: 305-314).
Así, se ha ensayado la suplementación de la dieta con diferentes principios activos, como ácido ascórbico, carotenos, tocoferoles, así como plantas aromático- medicinales, que aportan a la dieta compuestos activos antioxidantes y/o antimicrobianos capaces de aumentar la estabilidad oxidativa y microbiológica de la carne sin emplear aditivos {Bou, fí. et al. "Influence of dietary fat source, alpha- tocopherol, and ascorbic acid supplementation on sensory quality of dark chicken meat". Poultry Science. 2001. 80, 6, 800-807; Moñino et ai, 2008; Nieto et ai, 2010). Entre todos ellos, la vitamina E es el suplemento dietético utilizado con mayor frecuencia en nutrición animal para este fin, debido a su probada actividad antioxidante sobre la carne, aunque no actúa sobre bacterias alterantes o patógenas que proliferan en esta matriz. El extracto de romero, de forma general, ya está incluido en las listas positivas de aditivos de alimentación animal, de hecho, su venta en esta industria requiere de registro específico. La introducción de extractos de romero en el pienso animal ha sido abordada por diversos investigadores, aunque aún no ha sido resuelta. El principal problema técnico radica en optimizar ciertos factores, entre los que se incluyen: la dosis mínima efectiva de extracto, la etapa idónea de su administración (gestación, lactación, cebo), y las relaciones de concentración entre principios activos, con el fin de conseguir una adecuada transmisión de componentes antioxidantes, en concentraciones activas, a los productos alimenticios que de ellas se derivan; así como mejorar la calidad y seguridad de la carne, con el consiguiente beneficio para la salud pública.
El empleo de subproductos de romero como suplemento en la alimentación de pequeños rumiantes ha proporcionado resultados desiguales (Moñino et al., 2008, Jordán et al., 2010, Nieto et al., 2010). Un dato importante a considerar es la variabilidad en la composición química de estos extractos dependiendo de su tipo genético, procedencia geográfica, estacionalidad {Jordán, M. J. et al. "Chemical intraspecific variability and chemotypes determination of fíosmarinus Officinalis L. in the Región of Murcia". 28th International Horticultura! Congress. Lisbon 2010)) y/o tecnología de extracción aplicada. En la bibliografía científica se encuentran algunos trabajos exitosos sobre tratamientos dietéticos con hoja destilada de romero (Meto et al., 2010; Nieto, G. et al. 2011. Effects in ewe diet of rosemary by- product on lipid oxidation and the eating quality of cooked lamb under retail display conditions Food Chemistry 124: 1423-1429) y otros en los que el efecto de extractos de romero comerciales es nulo {Haaka, L et al. "Effect of dietary rosemary and a-tocopheryl acétate on the oxidative stability of raw and cooked pork following oxidized linseed oil administration". Meat Science. 2008. 78, 239-247).
El éxito de un extracto depende enormemente de la biodisponibilidad de sus principios activos tras el metabolismo animal, la cual debe ser demostrada para poder atribuir un posible efecto beneficioso. La composición y la relación de concentración entre estos componentes son cruciales a la hora de asegurar resultados concluyentes. Hasta la fecha no existen datos fehacientes acerca del efecto de las proporciones entre principios activos de los extractos de romero empleados en alimentación animal.
Sería por tanto necesario disponer de un extracto estandarizado de romero, cuya composición fuera conocida e invariable, para ser adicionado en el pienso de pequeños rumiantes, en la dosis mínima efectiva y durante el periodo fisiológico animal requerido, asegurando así resultados de mejora de calidad y conservación de la carne fresca y cocinada.
Hasta la fecha, los extractos empleados a nivel comercial contienen dosis elevadas de ácido carnósico, no prestando atención a la mayor o menor presencia de carnosol en ellos.
Ahora, tras un importante trabajo de investigación, los autores de la presente invención han demostrado que la concentración de carnosol en el extracto tipificado de romero, debe al menos igualar, e incluso superar, la del ácido carnósico.
Así, en base a los resultados de sus investigaciones, los autores de la presente invención han obtenido un extracto procedente de la hoja destilada de romero, donde los principios activos (ácido carnósico y carnosol) están presentes en un ratio de concentración conocido cercano a 1 .
La carne procedente de animales alimentados con pienso suplementado por el extracto de la presente invención posee una mayor capacidad antimicrobiana y antioxidante que la carne procedente de animales alimentados con pienso no suplementado, por lo que el extracto mejora su calidad e incrementa su vida comercial.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1 : Estatus antioxidante del músculo externus abdominis de cordero Segureño
Figura 2: Capacidad antirradicalaria (IC50) del músculo externus abdominis de cordero Segureño. Figura 3: Estatus antioxidante del músculo deltoideus en cordero Segureño.
Figura 4. Capacidad antirradicalaria (IC50) del músculo Deltoideus de cordero Segureño.
Figura 5. Estatus antioxidante del hígado de cordero Segureño.
Figura 6. Valores de oxidación de los lípidos expresados como TBARS (mg MDA / kg) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor
Figura 7. Valores de ángulo hue (rad) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor
Figura 8. Recuentos de bacterias psicrófilas totales (Log ufc/g) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor
Figura 9. Puntuaciones de olor a carne cruda de cordero (escala sensorial arbitraria establecida mediante panel entrenado) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor.
Figura 10. Lomo fresco de cordero no suplementado (izquierda), suplementado con 640 mg/kg (centro) ó 980 mg/kg de compuestos activos (derecha), tras 1 1 días de exposición en condiciones de venta al por menor.
Figura 11. Lomo fresco de cordero no suplementado (izquierda), suplementado con 640 mg/kg (centro) ó 980 mg/kg de compuestos activos (derecha), tras 14 días de exposición en condiciones de venta al por menor.
OBJETO DE LA INVENCIÓN
Es objeto de la invención un extracto de romero que comprende los diterpenos ácido carnósico y carnosol con una relación de concentraciones [ácido carnósico] / [carnosol] comprendida entre 0.7 y 1 .2.
Es asimismo objeto de la invención el empleo del extracto de romero en alimentación animal.
Es también objeto de la invención el empleo del extracto en la fabricación de un pienso para alimentación animal.
Es finalmente objeto de la invención el método para la obtención del extracto de romero de la invención. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los diterpenos ácido carnósico y su derivado, la lactona carnosol, son componentes presentes en la fracción polifenolica liposoluble de la hoja de romero, la de mayor capacidad antioxidante. Los trabajos de los autores de la presente invención avalan la elevada capacidad antioxidante de estos componentes in vitro. Además, a diferencia de lo publicado hasta la fecha, los experimentos in vivo llevados a cabo por ellos revelan el importante papel de la lactona carnosol para asegurar una mayor transferencia de estos componentes y sus metabolitos, y de esta forma asegurar resultados relevantes.
Así, en un aspecto principal de la invención se contempla un extracto vegetal (extracto de la invención) procedente de hoja de romero deshidratada, tanto desacetilada como entera, que comprende los diterpenos ácido carnósico y carnosol con una relación de concentraciones [ácido carnósico]/[carnosol] comprendida entre 0.7 y 1 .2. En realizaciones preferidas, la relación de concentraciones es 1 .
El extracto de la invención, además de los principios activos, puede incluir otros componentes adicionales, comunes cualitativamente a otros extractos de romero, tales como monoterpenos, otros diterpenos, triterpenos, acido ursólico, flavonoides, otros fenoles, fibras, y otros componentes característicos de cualquier material vegetal tipo hoja.
El extracto de la invención permite incrementar la capacidad de conservación endógena de la carne animal, confiriéndola propiedades antioxidantes y antimicrobianas.
En una realización preferida, la concentración mínima de diterpenos presente en el extracto de la presente invención (la suma del peso de ambos principios activos, ácido carnósico y carnosol, con respecto al peso total del extracto) está comprendido entre un 25 y un 35%.
En otro aspecto principal de la invención se contempla el empleo del extracto de la invención en alimentación animal.
La suplementación de la dieta animal con extracto de romero en las condiciones indicadas proporciona cantidades de ácido carnósico y carnosol adecuadas para incrementar la capacidad de conservación de la carne.
En otra realización principal, se contempla el empleo del extracto de la invención en la fabricación de un pienso para alimentación animal. La importancia de la relación entre la concentración de ácido carnósico y carnosol en el extracto de romero a adicionar en el pienso para alimentación animal es fundamental para asegurar una correcta biodisponibilidad de ambos componentes y asegurar así la mejora efectiva de la calidad y vida útil de la carne. De forma particular, el pienso suplementado con el extracto está destinado a la alimentación de rumiantes.
En realizaciones preferidas, la administración del pienso suplementado con el extracto de la invención se lleva a cabo durante el periodo de cebo. La elección del periodo de cebo para administrar el extracto es únicamente por cuestiones económicas (el extracto encarece el precio del pienso) y logística (sólo habría que introducirlos en el pienso de cebo de los corderos, ya que también hay pienso de crecimiento y para madres). La extensión del extracto a los tres tipos de pienso (adultos, crecimiento y cebo) es igualmente posible y adecuado, aunque encarecería la alimentación y difícilmente podría mejorar los resultados obtenidos.
En una realización particular, el pienso suplementado con el extracto de la invención se destina al cebo de corderos de razas ligeras y pesadas, con un peso vivo de sacrificio que puede oscilar entre 26 ± 3 Kg.
La concentración de extracto a adicionar al pienso ha de estar en el rango de 2700 a 4000 ppm, para conseguir una adecuada efectividad. En estas condiciones, la concentración mínima de la suma de los dos principios activos presentes en el pienso se encuentra comprendida entre 600-900 ppm. La dieta de los corderos durante la etapa de cebo debe ser suplementada con una cantidad de extracto de romero que proporcione un total de 640-980 mg de diterpenos (ácido carnósico y carnosol a partes iguales) por kg de pienso de engorde. La forma de suministrarlo es ad libitum.
La actividad antioxidante y antimicrobiana del extracto ha sido demostrada por los autores de la presente invención primero in vivo, mediante el seguimiento de compuestos activos del romero en fluidos y tejidos, para después acreditar su efectividad como conservantes endógenos en la carne fresca y cocinada sometida a condiciones de venta al por menor.
El ratio de concentración (0.7-1 .2) entre ambos diterpenos incrementa la biodisponibilidad de los principios activos del extracto de romero, los cuales se acumulan en el tejido muscular, lo que supone, a) Para la carne fresca de cordero:
- Mejoras en el estatus antioxidante de la carne y el hígado de los corderos.
Fuerte reducción de la oxidación de los lípidos en la carne cruda hiperoxigenada.
- Considerable reducción de los recuentos de mesófilos totales y psicrófilos totales.
- Moderado retraso del deterioro de color del magro y de la grasa.
- Moderado retraso del deterioro de la pérdida de olor propio.
- Prevención de la aparición de olor rancio. b) Para la carne cocinada:
Fuerte reducción de la oxidación de los lípidos.
- Retraso del deterioro del olor y sabor.
Retraso de la aparición de rancidez.
Disminución del olor y sabor a recalentado.
Fuerte prevención de la aparición de olor rancio. En otro aspecto principal de la invención se contempla un método para la obtención del extracto vegetal de la invención que comprende los siguientes pasos:
- Obtención de una hoja de romero deshidratada,
- Extracción sólido-líquido empleando un disolvente orgánico de entre metanol, etanol, acetona o acetato de etilo, con una relación peso/volumen comprendida entre 1 :8 y 1 :12, a una temperatura comprendida entre 50eC y la temperatura de reflujo de cada disolvente, durante un tiempo comprendido entre 45 y 120 minutos. En realizaciones particulares, la separación sólido-líquido se efectúa mediante separación con filtro-prensa o centrífuga de cesto.
- Tras la separación sólido-líquido, la disolución orgánica obtenida conteniendo los ingredientes activos se lleva a un tanque agitado y se mezcla con una cantidad específica de agua, hasta alcanzar una proporción peso-peso respecto del disolvente de extracción situada entre el 20 y el 50%, preferiblemente el 40 %,
El medio así conformado se agita lentamente durante un periodo comprendido entre 1 y 4 horas, a temperatura ambiente, para la precipitación de un sólido cristalino,
- El sólido cristalino que precipita se filtra, mediante un filtro prensa o centrífuga de cesto, y se lava con agua en una proporción peso-volumen comprendida en el rango 1 : 5 - 1 : 8, a una temperatura situada en el rango 70 - 90 eC.
- El sólido así lavado se filtra, mediante filtro prensa o centrífuga, y se seca en estufa de vacío a una temperatura situada en el rango 45-80eC.
Una vez seco el producto (con una humedad inferior al 2%), se descarga para la obtención del extracto de romero.
Para la fabricación del pienso suplementado con el extracto de la invención, el extracto sólido obtenido mediante el procedimiento de la invención se añade como un aditivo más en la mezcladora, y seguidamente se procede como en otros procedimientos realizados habitualmente en el estado de la técnica: se mezcla con el pienso a una temperatura inferior a los 65 eC; se efectúa la granulación a 70-75 eC y 2 kg de vapor, siendo la humedad relativa del producto final inferior al 1 1 %.
EJEMPLOS
Ejemplo 1 . Capacidad antioxidante del extracto de la invención en músculo de cordero
Materiales y métodos
Para el desarrollo de la experimentación se analizaron muestras de carne procedentes de dos músculos con diferente demanda metabólica y contenido en grasa intramuscular, Musculus externus abdominis y Musculus deltoideus, para de esta forma asegurar los beneficios del extracto con proporciones 1 :1 frente al 2:1 en los diferentes cortes de carne ofertados al consumidor.
La extracción de los metabolitos transferidos al músculo del cordero se realizó mediante extracción con Soxhlet empleando metanol como agente extractante, siguiendo la metodología publicada por Moñino et al. (" Polyphenolic transmission to Segureño lamb meat from ewes diet supplemented with the distillate from rosemary (Rosmarinus officinalis) leaves". J. Agrie. Food Chem. 2008, 56, 3363-3367).
Para la medición de las capacidades antioxidantes y antirradicalarias, mostradas por los extractos metanólicos anteriormente citados, se utilizaron el método FRAP (capacidad reductora frente al Fe+3 definido por Benzie y Strain (1996) y modificado por Descalzo et al., ("Antioxidant status and odour profile in fresh beef from pasture or grain-fed cattle". Meat Sci. 2007, 75, 299-307) y la capacidad inhibidora del radical libre DPPH» descrita por Brand-Willians et al., ("Use of free radical method to evalúate antioxidant activit . Lebensm.-Wiss. Technol. 1995, 28, 25-30).
Resultados
En la Figura 1 se representa la capacidad reductora (frente al Fe+3) de los metabolitos procedentes de la ingesta de los dos extractos de romero P1 y P2 adicionados a la dieta del cordero Segureño durante todo el periodo de cebo. Tal y como se muestra, la capacidad antioxidante de las muestras {Musculus externus abdominis) procedentes del extracto con iguales proporciones entre el ácido carnósico y el carnosol superaron en gran medida (p< 0.05) a las provenientes de los extractos tradicionalmente empleados, en los que el ácido carnósico dobla su concentración con respecto al carnosol (2:1 ) y a las muestras denominadas control (piensos sin aditivos antioxidantes procedentes del romero). Este mismo comportamiento se detectó para la capacidad antirradicalaria, medida frente al radical DPPH»; en este caso los valores IC50 de los extractos metanólicos de la dieta P1 fueron menores que los de P2. (Figura 2).
En relación a los valores obtenidos para las muestras procedentes del Musculus deltoideus, de nuevo se confirmó lo definido anteriormente, tanto la capacidad antioxidante como la antirradicalaria de estas matrices mejoraron significativamente con el empleo del extracto P1 frente al P2 y al grupo control (Figuras 3 y 4).
Otro parámetro que justifica las mejoras inducidas por la adición del extracto de romero con proporción 1 :1 en diterpenos (P1 ), sobre el bienestar animal, fue el aumento de la capacidad antioxidante del hígado de los corderos con respecto al extracto más comercializado (P2) y al grupo conocido como control negativo (C) (Figura 5).
El estudio de la transmisión de estos componentes a dos músculos con diferente actividad metabólica {Musculus deltoideus y Musculus obliquus externus abdominis) mostró que al introducir estos extractos únicamente durante el periodo de cebo ya se mejoró el estatus antioxidante de la carne de cordero.
Ejemplo 2. Actividad conservante endógena de la carne en condiciones de venta al por menor. a) Carne cruda fragmentada
Las muestras analizadas fueron medallones de carne fresca (músculo longissimus dorsi) de 1 ,5 cm de grosor envasados en bandeja de poliestireno cubierta por un plástico de baja permeabilidad al oxígeno (8-12 cm3 m"2 02 por 24h) en cuyo interior se introdujo una atmósfera modificada de uso ordinario para envasar carne roja (70% oxígeno y 30% dióxido de carbono). Las muestras fueron expuestas durante 0, 1 , 7 ó 14 días en expositores comerciales a una temperatura de 2eC e iluminadas con luz blanca a 1600 Ix.
La oxidación de la grasa se midió como índice de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) (mg malondialdehído kg~1), determinado por colorimetría (espectrofotómetro Unicam UV2) según el método de Botsoglou et al. (1994)("fíapid, sensitive, and specific thiobarbituric acid methods for measuring lipid peroxidation in animal tissue, food, and feedstuff samples". Journal of Agricultura! and Food Chemistry, 42, 1931-1937).
La carga bacteriana general se estableció mediante recuentos (log ufe g"1) de aerobios mesófilos totales y bacterias psicrofilas (ISO 4833, 2003, International Organization for Standardization Publications. Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of microorganisms. Colony- count technique at 30 degrees C. <www.iso.org>). Las muestras fueron manipuladas asépticamente en una campana de flujo laminar (Bio-ll-A Telstar, Terrasa, Barcelona, España) y homogeneizadas en bolsas estériles con agua de peptona (Oxoid Ltd. CM0087. Basingstoke, Hampshire, Reino Unido) empleando un mezclador tipo Masticator (IUL Instruments, GMBH, Kónigswinter, Alemania). El medio de cultivo empleado fue PCA (Oxoid CM0325). La incubación se realizó una estufa de cultivo modelo 207 (Selecta, Abrera, Barcelona, España).
El color objetivo se midió por reflectancia con un colorímetro CR400 R-200/08 C roma Meter II (Minolta, Milton Keynes, Reino Unido) Los resultados se expresaron en unidades CIELAB como saturación o ángulo Hue (H* = tg"1 (b*/a*)).
La evaluación sensorial se realizó mediante análisis sensorial descriptivo cuantitativo (Norma ISO 4121, 2003. Sensory analysis Methodology. Evaluation of food products by methods using scales. International Organization for Standardization Publications. <www.iso.org>) utilizando 8 panelistas seleccionados y entrenados de acuerdo con la Norma ISO 8586-1 (1993). Sensory analysis Methodology. General guidance for the selection and training and monitoring of assesors. Part 1. Selected assessors. International Organization for Standardization
Publications. www.iso.org). La escala utilizada fue de 1 (mínimo) a 5 (máximo). Los análisis se realizaron en una sala de catas normalizada.
El efecto de los dos tratamientos aplicados (dieta de los corderos y el tiempo de almacenamiento) con posible efecto sobre la carne de cordero fragmentada se estableció mediante análisis múltiple de la varianza. El efecto de ambos tratamientos se estableció simultáneamente para calcular la posible extensión de la vida comercial de la carne. Desde un punto de vista estadístico, el tratamiento afectaba a las variables dependientes (parámetros de calidad) cuando sus valores medios eran diferentes según los cálculos establecidos en el test de homogeneidad de medias de Scheefe para una probabilidad inferior al 95% (P<0,05). Los valores medios diferentes de una misma variable fueron representados en las tablas con letras diferentes en forma de superíndices. Los valores medios fueron ordenados de mayor a menor en grupos identificados con letras desde la letra a (mayor valor medio) en adelante.
En las figuras 6, 7, 8 y 9 y se muestran algunos resultados que demuestran la eficacia de los extractos testados, principalmente reflejados en: - Fuerte reducción de la oxidación de los lípidos.
- Considerable reducción de la carga microbiológica total.
Retraso en el deterioro de color del magro y de la grasa.
- Moderado retraso del deterioro de la pérdida de olor propio.
Prevención de la aparición de olor rancio.
En la figura 6 se muestran valores medios de oxidación de los lípidos expresados como TBARS (mg MDA kg"1) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor. Una mayor concentración de MDA indica cuantitativamente mayor formación de aldehidos y otros compuestos tipo carbonilo que no están presentes en la carne fresca y que se van formando progresivamente por oxidación lipídica de la carne durante el almacenamiento de la misma. La oxidación de lípidos fue similar en la carne recién envasada con independencia de la dieta de los corderos. Tanto la dieta P1 , como la dieta P2 retrasaron la oxidación de lípidos con respecto al control en los días 7 y 14. En cambio, la dieta P1 inhibió la oxidación de lípidos con mayor efectividad que la dieta P2 en el día 14, cuando la carne presentaba mayor oxidación de los lípidos, por tanto, el extracto de romero P1 fuer el tratamiento antioxidante más eficaz. En la figura 7 se muestran valores de ángulo hue (rad) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor. Un mayor ángulo H* indica mayor pardeamiento o color marrón típico de la carne envejecida, producido por oxidación de la mioglobina muscular, mientras que un menor ángulo Hue significa un mayor enrojecimiento de la carne. La carne recién envasada presentó un color rojo característico con independencia de la dieta de los corderos. La dieta P1 estabilizó el color rojo de la carne mejor que la dieta P2 y control en el día 7, mientras ambas dietas, tanto la dieta P1 , como la dieta P2, retrasaron el pardeamiento de la carne de forma similar en el día 14, por tanto, el extracto de romero P1 fue el tratamiento antioxidante más eficaz.
En la figura 8 se muestran recuentos de bacterias psicrófilas totales (Log ufc/g) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor. Un mayor recuento de bacterias psicrófilas significa mayor carga total de bacterias alterantes capaces de crecer en la carne a temperatura de refrigeración y por tanto peor calidad microbiológica de la carne. La carga bacteriana fue similar en la carne recién envasada con independencia de la dieta de los corderos. Tanto la dieta P1 , como la dieta P2, inhibieron el crecimiento de bacterias alterantes de forma similar en los días 7 y 14, por tanto, los extractos de romero P1 y P2 presentaron un efecto antimicrobiano similar.
En la figura 9 se muestran puntuaciones de olor a carne cruda de cordero (escala sensorial arbitraria establecida mediante panel entrenado) en carne cruda expuesta en condiciones de venta al por menor. Una mayor nota de olor propio a suero indica una mayor frescura de la carne fresca. Este olor característico se pierde progresivamente por la aparición de olores rancios o desagradables debido a la oxidación de la carne cruda. El olor propio de la carne recién envasada fue similar con independencia de la dieta de los corderos. Tanto la dieta P1 , como la dieta P2, retrasaron de forma similar el deterioro del olor propio de bacterias alterantes en los días 7 y 14, por tanto, los extractos de romero P1 y P2 presentaron un efecto sensorial similar.
Efecto de la dosis de principios activos
Un estudio sensorial complementario estableció el efecto de la concentración de extracto de romero P1 (0, 640 ó 980 mg de suma de principios activos ácido carnósico+carnosol) por kg de pienso sobre la calidad de la carne. La carne fue envasada y expuesta en condiciones de venta al por menor de acuerdo con la metodología descrita anteriormente.
Tabla 1. Efecto de la dosis de extracto de romero P1 sobre el color y el olor de la carne cruda.
Figure imgf000016_0001
Medias con diferentes superíndices son estadísticamente diferentes para P<0,05 (Test de homogeneidad de medias de Scheefe) en función del tratamiento con extracto de romero P1 y el tiempo de almacenamiento. Las letras en forma de superíndices clasifican de menor a mayor un total de 12 valores medios (3 dietas x 4 tiempos de almacenamiento diferentes). Los resultados más relevantes alcanzados fueron los siguientes:
- Clara estabilización de color durante más tiempo. Tomando como referencia el tratamiento control, ambas dosis fueron efectivas para preservar el enrojecimiento de la carne a partir del día 7 de almacenamiento.
Cuantitativamente, la dosis de 980 ppm fue algo más efectiva que la dosis de 600 ppm.
- Menor pérdida de olor propio. Tomando como referencia el tratamiento control, ambas dosis fueron efectivas para preservar el olor propio de la carne a partir del día 1 1 de almacenamiento. Cuantitativamente, la dosis de
980 ppm fue algo más efectiva que la dosis de 600 ppm.
Prevención de la aparición de olor rancio. Tomando como referencia el tratamiento control, ambas dosis fueron efectivas para prevenir la rancidez de la carne a partir del día 7 de almacenamiento. Cuantitativamente, la dosis de 980 ppm fue algo más efectiva que la dosis de 600 ppm.
La administración de 980 ppm incrementó de 1 1 a 14 días la vida comercial de la carne cruda, comparado con 640 ppm de extracto de romero P1 .
A título informativo, las figuras 10 y 11 muestran gráficamente como la suplementacion de los corderos con extracto de romero P1 retrasa considerablemente el deterioro del color de la carne, el principal parámetro que limita la vida comercial de la carne roja cruda fragmentada, como la carne de cordero. b) Carne picada cocinada.
Así mismo, estudios complementarios realizados por los autores de la invención demostraron que la suplementacion de los corderos con extracto de romero durante el periodo de cebo aumenta también la capacidad de conservación de las hamburguesas cocinadas de cordero en condiciones de venta al por menor
(catering y restauración).
En este caso, las muestras analizadas fueron hamburguesas cocinadas (elaboradas con todos los músculos de la pierna), envasadas en bandejas de poliestireno y cubiertas con film permeable al oxígeno. Las muestras fueron expuestas durante 0, 2 ó 4 días a 2eC y 1640 lux en expositores comerciales.
Los resultados más relevantes alcanzados fueron los siguientes (ver tabla 2):
- Fuerte reducción de la oxidación de los lípidos en carne cocinada.
- No afecta al color de la carne cocinada.
- Retraso del deterioro del olor y sabor a carne cocinada de cordero.
- Retraso de la aparición de rancidez.
- Disminución del olor y sabor a recalentado.
- Fuerte prevención de la aparición de olor rancio.
Tabla 2. Efecto de la dosis de extracto de romero P1 sobre el color y el olor de la carne cruda.
Figure imgf000018_0001
Medias con diferentes superíndices son diferentes para P<0,05 (Test de Scheefe) en función del tratamiento con extracto de romero P1 y el tiempo de exposición. Ejemplo 3. Método específico de obtención de extractos de romero con una relación específica entre los activos ácido carnósico v carnosol.
El proceso de extracción se realizó sobre un lote de 3000 kilos de hoja de romero deshidratada y desaceitada, mediante el uso de etanol como disolvente de extracción, en una proporción peso de hoja/volumen de disolvente de 1 :10 (1000 kilos de hoja: 10.000 litros de etanol).
Las condiciones de extracción fueron: temperatura 60eC y tiempo de extracción 100 minutos. Después de la extracción, se realizó la separación sólido-líquido en una centrífuga de cesto.
Tras la separación sólido-líquido, la disolución orgánica conteniendo los ingredientes activos se llevó a un tanque agitado y se le adicionó una cantidad específica de agua, hasta alcanzar una proporción peso-peso respecto del disolvente de extracción del 40 %.
La cantidad de agua adicionada a la disolución etanólica obtenida fue de 6500 litros, obteniéndose así una mezcla de unos 16.500 litros, de proporciones etanol- agua (61 :39).
La mezcla se mantuvo en agitación durante 3 horas a temperatura ambiente. Se produjo la precipitación (cristalización) de un sólido verdoso-amarillento.
El sólido precipitado se filtró mediante filtro-prensa, empleando como medio filtrante telas de polipropileno. Este sólido se lavó posteriormente en un depósito con unos 250 litros de agua desionizada (ratio 1 :8), a una temperatura de 85eC.
El sólido lavado se filtró de nuevo empleando un filtro prensa. Se descargó para su secado en una estufa de vacío. La temperatura de secado se inició en 45eC y se realizó un gradiente ascendente de temperatura, hasta llegar a los 80eC como temperatura final. Una vez seco el producto (humedad inferior al 2%), se descargó, obteniéndose 31 kilos de extracto de romero. El análisis cromatográfico del extracto obtenido tuvo los siguientes resultados: ácido carnósico, 13,3%; carnosol, 16,7% (ratio ácido carnósico / carnosol: 0,796 ~ 0,8), concentración total de activos, 30%.
Ejemplo 4. Método de fabricación de un pienso de cebo de corderos empleando el extracto de romero de la invención
Se empleó el extracto de romero (30% de pureza) con proporciones (0.8) en ácido carnósico :carnosol a una concentración de 2700 ppm -suponiendo que la degradación de los diterpenos tras la fabricación del pienso no supera el 20%, para asegurar una riqueza de 640 ppm en diterpenos- para alimentar al cordero durante todo el periodo de cebo.
El extracto sólido se añadió como un aditivo más en la mezcladora. Seguidamente se mezcló con el pienso a una temperatura de 60eC.
La granulación se efectuó a 73 eC y 2 kg de vapor. La humedad relativa del producto final obtenido fue del 1 1 %.

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Extracto vegetal procedente de hoja de romero que comprende los diterpenos ácido carnósico y carnosol con una relación de concentraciones [ácido carnósico] / [carnosol] comprendida entre 0.7 y 1 .2.
2. Extracto vegetal, según la reivindicación 1 , donde la relación de concentraciones [ácido carnósico] / [carnosol] es 1 .
3. Extracto vegetal, según las reivindicaciones 1 ó 2, donde la suma del peso del ácido carnósico y del carnosol, con respecto al peso total del extracto, está comprendida entre un 25 y un 35%.
4. Extracto vegetal, según la reivindicación 1 , para su empleo en alimentación animal.
5. Empleo del extracto vegetal de la reivindicación 1 en la fabricación de un pienso para alimentación animal.
6. Empleo, según la reivindicación 5 donde el pienso está destinado al cebo de rumiantes.
7. Empleo, según la reivindicación 6 donde el rumiante es un cordero.
8. Empleo, según la reivindicación 7 donde el extracto se encuentra en el pienso a una concentración mínima comprendida entre 2700 y 4000 ppm.
9. Pienso para alimentación animal suplementado con un extracto vegetal de romero, según las reivindicaciones 1 -4.
10. Método para la obtención del extracto vegetal de la reivindicación 1 que comprende:
a. Obtención de una hoja de romero deshidratada,
b. Extracción sólido-líquido de la hoja obtenida empleando un disolvente orgánico de entre: metanol, etanol, acetona o acetato de etilo, con una relación peso/volumen comprendida entre 1 :8 y 1 :12, a una temperatura comprendida entre 50eC y la temperatura de reflujo de cada disolvente, durante un tiempo comprendido entre 45 y 120 minutos,
c. Mezcla de la disolución orgánica obtenida en b) con agua hasta alcanzar una proporción peso-peso respecto del disolvente de extracción situada entre el 20 y el 50%.
d. Agitación de la mezcla obtenida en c) durante un periodo comprendido entre 1 y 4 horas a temperatura ambiente para la precipitación de un sólido cristalino,
e. Filtrado y lavado del sólido obtenido en d) con agua en una proporción peso-volumen comprendida entre 1 :5 y 1 :8, a una temperatura comprendida entre 70-90eC,
f. Filtrado del sólido lavado en e) y secado a una temperatura comprendida entre 45-80eC.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2083190T3 (es) * 1991-09-20 1996-04-01 Norac Technologies Inc Composiciones antioxidantes de oleorresina y un proceso para su produccion.
WO2001024636A1 (en) * 1999-10-05 2001-04-12 Kemin Industries, Inc. Process for improving human and animal health
EP1930019A1 (en) * 2006-11-24 2008-06-11 DSMIP Assets B.V. Rosemary extracts, dietary and pharmaceutical compositions containing them and their uses
WO2011047321A1 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Naturex S.A. Extract of rosmarinus officinalis l. leaves for pharmaceutical applications

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2083190T3 (es) * 1991-09-20 1996-04-01 Norac Technologies Inc Composiciones antioxidantes de oleorresina y un proceso para su produccion.
WO2001024636A1 (en) * 1999-10-05 2001-04-12 Kemin Industries, Inc. Process for improving human and animal health
EP1930019A1 (en) * 2006-11-24 2008-06-11 DSMIP Assets B.V. Rosemary extracts, dietary and pharmaceutical compositions containing them and their uses
WO2011047321A1 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Naturex S.A. Extract of rosmarinus officinalis l. leaves for pharmaceutical applications

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JORDAN, M. J. ET AL.: "Introduction of distillate rosemary leaves into the diet of the Murciano-Granadina goat: transfer of polyphenolic compounds to goats' milk and the plasma of suckling goat kids.", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 58, no. 14, 28 July 2010 (2010-07-28), pages 8265 - 8270, XP055078724 *
KANITHAPORN PUANGSOMBAT ET AL.: "Inhibition of heterocyclic amine formation in beef patties by ethanolic extracts of rosemary.", JOURNAL OF FOOD SCIENCE, vol. 75, no. 2, 2010, pages T40 - T47, XP055078728 *
MONINO, I. ET AL.: "Polyphenolic transmission to Segureno lamb meat from ewes' diet supplemented with the distillate from rosemary (Rosmarinus officinalis) leaves.", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 56, no. 9, May 2008 (2008-05-01), pages 3363 - 3367, XP055078726 *
NIETO, G. ET AL.: "Dietary administration of ewe diets with a distillate from rosemary leaves (Rosmarinus officinalis L.): influence on lamb meat quality.", MEAT SCIENCE, vol. 84, no. 1, 2010, pages 23 - 29, XP026683998 *

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