WO2012165810A2 - 오고닌을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

오고닌을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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권옥경
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    • A61P11/06—Antiasthmatics

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating asthma, which contains ogonin as an active ingredient.
  • Asthma is a bronchial hypersensitivity reaction to various irritants that come in when you breathe. Cough and dyspnea with wheezing due to inflammation and swelling of the bronchial mucosa and narrowing of the bronchus The disease appears as. Bronchial asthma treatments are largely classified into a controller and a relief. Inhaled glucocorticosteroids, anti-allergic drugs, and long acting bronchodilators are used to prevent exacerbation of asthma in the long term.
  • the symptom relief agent is to use a bronchodilator, which is used to urgently relieve symptoms such as acute asthma attack or bronchial infarction.
  • Blockbuster drugs such as GSK's Advair / Seretide, Merck's Singulair, Beringer Ingelheim's Spiriva and AstraZeneca's Symbicort This seems to be a big part of the asthma treatment.
  • sales of some drugs will likely inevitably decline in the face of generic competition due to patent expiration.
  • competition for generic launches and new drug launches will intensify.
  • Asthma an allergic inflammatory disease affecting the world's population 1, is a representative allergic disease that continues to increase with the rate of environmental pollution.
  • the present invention provides a method for treating asthma, comprising administering a pharmaceutically effective amount of Wogonin represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to an individual with asthma.
  • the present invention provides a prophylactic or therapeutic use of the ogonin represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, this invention is demonstrated in detail.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating asthma, which contains as an active ingredient wogonin represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the mouse inflammatory model administered with the ogonin of Preparation Example 1 (agonine) according to the present invention is characterized by asthma as compared to the control group not administered the ogonin, which is an asthma induction group (OVA) Airway hypersensitivity, inflammatory cell count in bronchoalveolar lavage fluid and serum IgE antibody concentrations were significantly decreased, and interleukin-4CIL-4), interleukin-6 IL-6) and interleukin secreted from Th2 cells in lungs
  • OVA asthma induction group
  • the serum IgE antibody concentration was asthmatic induction group (23139.51 ⁇ 484.45 ng) /) Significantly decreased in the group that received the ogonin of the present invention (19418.52 ⁇ 1332.101 ng / mO), and the concentration of IgE antibody in the bronchoalveolar lavage fluid was increased in the asthma-induced group (19.02 ⁇ 2.43 ng /). Compared with the ogonine administered group (12.10 ⁇ 1.87 ng /) of the present invention was found to decrease significantly (see Tables 2, 3 and 3, 4).
  • lymphocytes, mast cells, eosinophils, and activated macrophages were increased in bronchoalveolar lavage.
  • Asthma is commonly referred to as airway inflammatory disease, and many of the inflammatory cells have been reported to be activated and secrete various mediators. KJ, et al., Am J Respir Crit Care Med, 1998; 158: 565-72).
  • eosinophils are cells that are mainly involved in cellular mediated immunity by infiltrating tissues, spread throughout the spleen and respiratory tract, and contain inflammatory proteins, which directly damage airway epithelial cells, and cause airway hypersensitivity. It is known to play an important role in the development of asthma by causing degranulation of mast cells.
  • the number of eosinophils was 71.75 ⁇ 4.63 in the asthma-induced group, while that of the ogonin-administered group of the present invention was reduced to 32.24 ⁇ 8.84 (see Table 4 and FIG. 5).
  • Th2-cells are activated to secrete Th2 cytokine factor interleukin-4, 6, 13UL-4, 6, 13), and these cytokines are allergic airways. It causes inflammation.
  • IL-4 and IL- 13 is known to stimulate B-cells to increase production of IgE and IL-6 to amplify inflammatory reactions (Wills-Karp M, et al., Science 1998; 282: 2258-2261).
  • the expression of IL-4, IL-6 and IL-13 was compared to the asthma-inducing group. In the group treated with nin, 26.14%, 16.64% and 23.30% decreased, respectively, and administration of ogonin to asthma-induced mice resulted in inhibition of Th2 cytokines (Table 5 and FIGS. 6 and 7). Reference).
  • the inflammation index around the bronchioles was confirmed as 3.60 ⁇ 0.22 in the asthma induction group, the ogonin of the present invention In the group to be administered, it was significantly decreased to 1.00 ⁇ 0.28, and around the blood vessels, it was significantly decreased to 1.40 ⁇ 0.22 in the group which received the ogonin of the present invention compared to the asthma induction group (3.80 ⁇ 0.18). (See Table 7 and Figures 9 and 10). From this, it can be seen that the ogonin of the present invention can be usefully used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of asthma.
  • the present invention includes not only the ogonin compound represented by Formula 1, but also pharmaceutically acceptable salts thereof, and possible solvates, hydrates, racemates, or stereoisomers that can be prepared therefrom.
  • the ogonin compound represented by Formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • non-toxic organic acids such as canioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • These pharmaceutically toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromine Rhoidide, iodide, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate , Succinate, suverate, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4fdaoate, nucleic acid-1, 6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitro benzoate , Hydroxybene Zoate , Mesoxybenzo
  • the acid addition salts according to the present invention are prepared in a conventional manner, for example, by dissolving a compound of formula 1 in an excess of aqueous acid solution, which salt is a miscible organic solvent such as methane, ethane, acetone or acetonitrile. It can be prepared by precipitation using.
  • the same amount of the ogonin compound represented by the formula (1) and the aqueous acid solution or alcohol may be heated, and then the mixture is evaporated to dryness or the precipitated salt may be produced by suction filtration.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • Alkali or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving the compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the non-soluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salts.
  • the composition containing the ogonin compound of the present invention, preferably containing 0.1 to 50% by weight relative to the total weight of the composition is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of a medicament.
  • compositions according to the invention are formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, oral preparations, suppositories and sterile injectable solutions, respectively, according to conventional methods. Can be used.
  • Carriers, excipients, and diluents that may be included in the compositions of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbbi, manny, xili, erysri, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin , kalseum phosphate, calcium silicate, selreul rose, methyl saelreul rose, microcrystalline selreul Ross, polyvinyl an pyrrolidone, water, methyl hydroxybenzoate, "profile include the hydroxy-benzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations and suppositories.
  • Non-aqueous solvents and suspending agents include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate . Can be used.
  • compositions of the present invention can be administered orally or parenterally, parenterally Any may be used, and systemic or topical administration is possible, but systemic administration is more preferable, and intravenous administration is most preferred.
  • compositions of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the severity of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the composition of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 0.03 g / kg, preferably 0.001 to 8 mg / kg per day. Administration may be once a day or may be divided several times.
  • the dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the present invention provides a health food composition for preventing or improving asthma containing an ogonin represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient:
  • the health food composition containing the ogonin represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient is preferably bronchial asthma, allergic asthma, atopic type asthma, viatopy type Asthma, exercise-induced asthma, aspirin asthma, psychogenic asthma, alveolar asthma and the like can be usefully used as a health food composition for the prevention or improvement.
  • the ogonin of the present invention represented by the formula (1) is in vivo (in vivo) 1 Reduces airway hypersensitivity as a cause of asthma, inhibits the production of free radicals in the airways, inhibits inflammatory cell infiltration in bronchus, and inhibits egg albumin, especially IgE production in serum and bronchial alveolar lavage And, since the effect of inhibiting the expression of Th2 cytokines in the lungs is excellent, it can be usefully used as a health food composition for preventing and improving asthma (see Table 1-7 and Figures 1-10).
  • the ogonin according to the present invention may be added to the health supplements such as foods and beverages for the purpose of preventing and improving asthma. There is no particular limitation on the kind of food.
  • Examples of foods to which the above substances may be added include dairy products, including drinks, meats, sausages, breads, biscuits, rice cakes, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, 3 ⁇ 4, ice cream Soups, beverages, alcoholic beverages and vitamin complexes, dairy products and dairy products, and all functional foods in the usual sense.
  • the ogonin compound represented by the general formula (1) of the present invention may be added to a food as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the combined amount of the active ingredient can be suitably determined depending on the purpose of use (prevention or improvement).
  • the amount of the compound in the health food can be added to 0.1 to 90 parts by weight of the total food weight.
  • the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.
  • the health functional beverage composition of the present invention as an essential ingredient in the ratio indicated
  • various flavors or natural carbohydrates may be included as additional ingredients.
  • natural carbohydrates examples include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And sugars such as polysaccharides such as conventional sugars such as dextrin, cyclodextrin, and the like, and xylyl, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents tauumatin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 compositions of the present invention.
  • the ogonin compound of the present invention may contain various nutrients, vitamins and minerals (electrolytes). ), Flavors such as synthetic and natural flavors, colorants and enhancers (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, Glycerin, alcohol, carbonation agent used in carbonated beverages, etc.
  • the ogonin compound of the present invention may be used for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages.
  • the present invention provides a method for treating asthma comprising administering to a subject with asthma a pharmaceutically effective amount of Wogonin or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by Formula 1 below. to provide:
  • the pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat the disease at a reasonable benefit or risk ratio applicable to the medical treatment, which means the type of disease, the activity of the severity drug, the sensitivity to the drug, and the time of administration. It may be determined by the route of administration and the rate of release, duration of treatment, factors including drug use, and other factors well known in the medical field.
  • the ogonin of the present invention reduces airway hypersensitivity, which is a cause of asthma in vivo, inhibits the production of free radicals in the airways, and inhibits inflammatory cell infiltration in bronchus, Inhibits egg albumin, especially IgE production in bronchoalveolar lavage fluid, and inhibits the expression of Th2 cytokines in the lung, and thus may be useful for treating asthma.
  • the present invention provides a use for the prevention or treatment of asthma of the ogonin represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the ogonin of the present invention reduces airway hypersensitivity, which is a problem as a cause of asthma in vivo, inhibits the production of free radicals in the airways, and inhibits inflammatory cell infiltration in bronchus, Since egg albumin in bronchial alveolar lavage fluid, in particular, inhibits the production of IgE, and inhibits the expression of Th2 cytokines in the lung, it can be usefully used as an active ingredient in the composition for preventing or treating asthma.
  • the ogonin of the present invention reduces airway hypersensitivity, which is a cause of asthma in vivo, inhibits the production of free radicals in the airways, and inhibits inflammatory cell infiltration in bronchus, Egg albumin in the bronchoalveolar lavage fluid, in particular, IgE inhibits the production, and the effect of suppressing the expression of Th2 cytokines in the lungs can be useful as a composition for preventing, treating and improving asthma.
  • Figure 1 is a graph showing the weight change of the mouse, in order to confirm the weight loss inhibitory effect of the mouse due to the administration of the ogonin according to the present invention.
  • Figure 2 is a graph showing the Penh value, in order to confirm the effect of inhibiting airway hypersensitivity due to the administration of the ogonin according to the present invention.
  • Figure 3 is a graph showing the total IgE concentration in serum in order to confirm the effect of reducing the concentration of IgE in serum due to the administration of the ogonin of the present invention.
  • Figure 4 is a graph showing the total IgE concentration in bronchoalveolar lavage fluid to confirm the effect of reducing the concentration of IgE in bronchoalveolar lavage fluid due to the administration of the ogonin of the present invention.
  • 5 is to determine the effect of reducing the number of inflammatory cells in the alveolar lavage due to the administration of the ogonin of the present invention, the total number of inflammatory cells, the number of eosinophils, the number of other inflammatory cells A graph representing.
  • Figure 6 shows the expression level of IL-4, IL-13, MMP-9 and IL-6 in order to confirm the inhibitory effect of Th2 cytokine expression in bronchoalveolar lavage fluid due to the administration of the ogonin of the present invention The fluorescence plot shown.
  • Figure 7 shows the effect of the administration of the ogonin of the present invention, IL-4, IL ⁇ 6, IL-13 and ⁇ P-9 for the normal control, in order to confirm the inhibitory effect of Th2 cytokine expression in bronchoalveolar lavage fluid
  • Figure 8 is a graph showing the DCF fluorescence for the normal control group to confirm the effect of reducing the degree of active oxygen generation due to the administration of the ogonin of the present invention.
  • Figure 9 is a photograph showing the degree of inflammation around the bronchioles and blood vessels, in order to confirm the inhibitory effect of the ogonin administration of the present invention.
  • Figure 10 is a graph showing the inflammation level around the bronchioles and blood vessels in order to confirm the effect of reducing the inflammation level around the bronchioles and perivascular vessels of the present invention. [Best form for implementation of the invention]
  • step 2 160 g of the ethyl acetate fraction obtained in step 2 was used in a silica gel column using 30 / l (v / v) to 5 / l (v / v) chloroform / methyl alcohol as a gradient elution solvent. Chromatography was carried out, and the ogonin-containing fraction of the obtained fraction was induced in a crystal of methyl alcohol so as to obtain a compound (5.6 g) represented by Chemical Formula 1 of the present invention. The analysis was performed. As a result, the compound represented by Chemical Formula 1 was identified as wogonin.
  • mice of about 20 g were used as experimental animals, and after one week of decubitus period, the animals were prepared without any abnormalities on basic physical examination.
  • 200 ⁇ l of phosphate buffer (pH 7.4) suspended in 2 mg of aluminum hydroxide (A8222, Sigma, St. Louis, M0) and egg white albumin 20 ' g (A5503, Sigma, St. Louis, M0) at 2 week intervals was sensitized by injection into the abdominal cavity.
  • egg white albumin (0VA)
  • egg white albumin was inhaled for 30 minutes using an ultrasonic nebulizer.
  • the body weight of the normal control group was 21.60 ⁇ 0.25 g, but the asthma induction group showed a significant weight loss of 19.72 ⁇ 0.53 g, whereas the texametasone group (21.04 ⁇ 0.35 g), the montelukast group (21.08 ⁇ 0.36 g), In the Ogonin-administered group (21. ⁇ 2 ⁇ 0.43 g), all the drug-administered groups were able to confirm weight recovery close to the normal control group (see FIG. 1).
  • Statistical analysis
  • Airway hypersensitivity due to the occurrence of asthma of the ogonin is a numerical value that reflects the mathematically calculated airway obstruction by measuring airway resistance using a single chamber plethysmography (All Medicus, Seoul) Enhanced pause (Penh) was measured and evaluated. Penh was measured for 3 minutes after inhalation of PBS using ultrasonic nebulizer for 3 minutes after measuring the basal value under normal respiration. Thereafter, histamine metacholine (A2251, Sigma, St. Louis, M0), which is used in the general method of diagnosing bronchial asthma, was inhaled at a concentration of 12, 25, and 50 g / ml, followed by Penh. Values were measured, and the results were expressed as percentage increase of Penh after intake of each concentration of detacholine, and the baseline Penh (saline challenge) was expressed as 100%. The results are shown in Table 1 and FIG. 2.
  • NC Normal group
  • OVA Control
  • the concentration of IgE correlated with the severity of asthma was measured by immunoassay of the concentration of IgE in serum and bronchoalveolar lavage fluid.
  • Serum and bronchoalveolar lavage fluid from each group was dissolved in 96-well plate (ELISA plate) in egg white albumin (OVA) in 0.1 M NaHC03 buffer at pH 8.3 at a concentration of 20 g / m and coated overnight at 4 ° C. After suppressing nonspecific reaction with PBS containing 1% bovine serum albumin, serum samples were diluted 1: 400 and reacted at room temperature for 2 hours.
  • anti-mouse IgE monoclonal antibody was diluted 300-fold and reacted for 2 hours, followed by HRP-conjugated goat anti-rat IgG polyclonal A (HRP-conjugated goat ant i-rat IgG polyclonal). A) was 4,000 times dilute and reacted for 1 hour at actual silver and then washed. Color development was reflected by 3.3'5.5'-tetramethylbenzaidine substrate, and the spectral absorbance was measured at 650 nm. IgE results in serum are shown in Table 2 and FIG. 3, and IgE results in bronchial alveolar lavage fluid are shown in Table 3 and FIG. 4.
  • the concentration of IgE antibody in the bronchoalveolar lavage fluid was 12.10 ⁇ 1.87 ng / in the group administered the ogonin of the present invention compared to the asthma induction group (19.02 ⁇ 2.43 ng / m £) The significance was not verified but was decreased. From this, it can be seen that the ogonin according to the present invention can be useful for treating asthma because it suppresses the IgE concentration associated with asthma.
  • the total number of inflammatory cells was 19.24 ⁇ 1.22 in the normal control group, 524.30 ⁇ 43.22 in the asthma induction group, 89.24 ⁇ 6.98 in the dexamethasone administration group (Comparative Group 1), and the montelukast administration group (Comparative Group 2). 167.68 ⁇ 8.80, in the ogonin-administered group of the present invention (Preparation Example 1) to 172.52 ⁇ 29.29 significantly decreased in all the drug administration group compared to the asthma induction group. In addition, the number of other inflammatory cells was significantly reduced to 140.28 ⁇ 26.24.
  • eosinophils known to play an important role was 0.00 ⁇ 0.00 in the normal control group, 71.75 ⁇ 4.63 in the asthma induction group, 8.24 ⁇ 1.31 in the dexamethasone group (Comparative Group 1), and 27.88 ⁇ in the montelukast group (Comparative Group 2). 2.80, 32.24 ⁇ 8.84 in the ogonine-administered group of the present invention (Example 1) was significantly reduced in all the drug-treated group compared to the asthma induction group.
  • the ogonin of the present invention not only reduces inflammatory cells associated with asthma, but also reduces the number of eosinophils, which have a great effect on asthma, and thus can be useful for treating asthma.
  • Example 4 Cytokine mRNA Analysis
  • cytokine mRNA associated with asthma was measured and analyzed. Trizol in the lungs extracted to analyze the expression levels of Th2 cytokines interleukin-4 (IL-4), interleukin (IL-6) and interleukin (IL-13) in the supernatant of bronchial alveolar lavage fluid taken from each group. RNA was isolated using (Invitrogen) to perform reverse transcriptase polymerase chain reaction (quantitative RT-PCR, Pr omega, WI) to evaluate the lowest expression level as 1 The inhibitory effect was measured by evaluating the relative densitometric value (RDV). The results are shown in Table 5 and FIGS. 6 and 7.
  • the expression of Th2 cytokines IL ⁇ 4, IL-6 and IL-13 in the supernatant of bronchoalveolar lavage fluid contained the ogonins of Comparative Groups 1 and 2 and the present invention as compared to the asthma induction group.
  • the drug administration group to reduce all, in particular, in the group administered the ogonin of Preparation Example 1 of the present invention showed the most excellent inhibitory effect. From this, it can be seen that the ogonin of the present invention can be useful in treating asthma because it reduces the concentration of the Th2 cytokine factors IL-4, IL-6, and IL-13 associated with asthma.
  • Inflammation index 1 is when inflammatory cells are observed intermittently.
  • Inflammation index 2 is when one or two or three thin layers of inflammatory cells are observed around the bronchus.
  • Inflammation index 3 was evaluated when five or less inflammatory cell layers were observed in two or three layers around most bronchus.
  • Inflammation index 4 was evaluated when five or more thick inflammatory cell layers were observed around most bronchus. The results are shown in Table 7 and FIGS. 9 and 10.
  • NC Normal Control
  • OVA Asthma Induction Group
  • Comparative Group 2 (Monte) 2.25 ⁇ 0.22 2.50 ⁇ 0.25
  • many inflammatory cells including eosinophils, were infiltrated around the bronchioles, and hyperproliferated epithelial cells and thickened bronchial smooth muscle were also identified.
  • the drug-administered group significantly reduced infiltration of inflammatory cells.
  • the asthma induction group had an inflammatory index around the bronchioles of 3.60 ⁇ 0.22, but the comparative group l (DEXA) 1.75 ⁇ 0.19, Comparative Group 2 (Monte) was 2.25 ⁇ 0.22 and the Ogonin administration group of Preparation Example 1 of the present invention was 1.00 ⁇ 0.28 all significantly decreased compared to the asthma induction group.
  • the inflammation index around the blood vessels was 3.80 ⁇ 0.18 in the asthma induction group
  • Comparative Group 1 is 1.50 ⁇ 0.22
  • Comparative Group 2 is 2.50 ⁇ 0.25
  • the Ogonin administration group of Preparation Example 1 of the present invention 1,40 All ⁇ 0.22 were found to be significantly decreased compared to the asthma induction group.
  • the ogonin of the present invention is excellent in reducing the inflammatory cells consisting of eosinophils, neutrophils and macrophages in the bronchus antigens can be found that it can be useful in the treatment of asthma.
  • the ogonin of the present invention not only reduces airway hypersensitivity which is a problem as a cause of asthma, inhibits the generation of free radicals in the airways, and inhibits inflammatory cell infiltration in the bronchus, It can be useful as a composition for preventing, treating and improving asthma because it has an excellent effect of inhibiting egg albumin, especially IgE production in serum and bronchoalveolar lavage fluid, and inhibiting expression of Th2 cytokines in the lung.
  • Talc 10 rag The above ingredients are combined and layered in airtight powder to prepare a powder.
  • Magnesium stearate 2 mg Tablets are prepared by mixing the above components and then tableting according to the conventional method for preparing tablets.
  • Magnesium stearate 2 rag Mix the above ingredients according to a conventional capsule preparation method and layer on gelatin capsul It is delivered to prepare a capsule.
  • pH Adjuster Proportions Prepared at the above ingredient content per ampoule (2 ml) according to the conventional method for preparing injectables.
  • Vitamin A Acetate 70 Vitamin E 1.0 rag
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixtures described above is a relatively suitable composition for health foods in a preferred embodiment, but the composition ratio may be arbitrarily modified, according to the conventional health food production method described above After mixing the components, granules are prepared and can be used for preparing the health food composition according to a conventional method.
  • Preparation Example 3 Preparation of Healthy Drinks
  • composition ratio is a relatively suitable composition for the preferred beverage in a preferred embodiment, the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.
  • Chewing 3 ⁇ 4 was prepared using conventional methods using the composition and content of 2% water.
  • ogonine 0.5 to 5 parts by weight of ogonine is added to 100 parts by weight of flour, and the mixture is Bread, cakes, cookies, crackers and noodles were used to produce health foods.
  • ogonin 5-10 parts by weight of ogonin was added to 100 parts by weight of milk, and the milk was used to prepare various dairy products such as butter and ice cream.
  • Brown rice, barley, sesame rice, and yulmu were alphanized by a known method to distribute the dried one, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the black beans, black sesame seeds, and sesame seeds were also steamed and dried by a known method, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the grains and seeds prepared above and the ogonin of the present invention were prepared by combining the following ratios. Brown Rice 30%

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Abstract

본 발명은 오고닌을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 오고닌은 생체내(in vivo)에서 천식 발생의 원인으로 문제가 되는 기도과민성을 경감시키고, 기도 내 활성 산소 발생량을 억제시키며, 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라, 혈청과 기관지 폐포 세척액 내의 난 알부민, 특히 IgE 생성을 억제하고, 폐에서 Th2 사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 우수하므로 천식 예방, 치료 또는 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
오고닌을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물 【기술분야】
본 발명은 오고닌을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
천식이란 숨 쉴 때 들어오는 여러 가지 자극 물질에 대한 기관지의 과민반 웅으로， 기관지를 비롯한 기도점막에 염증이 생겨 부어오르며 기관지가 좁아져서 천명 (쌕쌕거리는 호흡음)을 동반한 기침과 호흡곤란이 발작적으로 나타나는 질환이 다. 기관지 천식치료제로는 크게 조절제 (controller) 및 증상완화제 (Reliever) 로 구분되고 있다. 상기 조절제로는 흡입용 스테로이드계 약물 (Inhaled glucocorticosteroids), 항알레르기성 약물 (Anti—al lergic drug) , 지속성 기관지 확장제 (Long acting bronchodi lators)등이 장기적으로 천식의 악화를 방지하는데 이용되고 있다. 상기 증상완화제로는 기관지 확장제를 사용하는데， 급성천식 발작 이나 기관지 경색 등의 증상을 시급히 완화할 때 이용되고 있다. 어느 경우든지 가 벼운 천식 질환의 증상을 완화하는데는 큰 문제가 없으나， 중기나 말기의 천식을 치료하는데 상당한 문제점이 있고, 고용량의 흡입용 스테로이드계 약물 사용시의 심각한 부작용 또는 사용불편에 대한 문제가 대두 되고 있다. ' 천식질환의 특성상 장기간 약물복용이 불가피하지만 종래의 스테로이드제 나 평활근 이완제와 같은 천식치료제들은 면역능 저하， 감염, 심장에 대한 작용 등 의 많은 부작용을 나타내는 문제점이 있다. 따라서， 종래의 약물이 갖는 부작용을 해소할 수 있고, 근원적 병상의 개선 또는 치료 효과를 갖는 새로운 천식치료제 약 물 개발이 시급히 요구되고 있다.
'
현재 천식 치료제로 현재 장기， 속성형 β2—효능제 또는 코르티코스테로이 드 (corticosteroids) 계열의 흡입제가 단지 증상완화를 위해 사용되고 있으므로 보 다 근원적 천식 치료를 위해 새로운 작용점에 근거한 부작용이 적은 신약 개발이 필요하다. 최근, 전 세계적으로 근본적인 알레르기 치료의 일환으로써 면역 조절제를 통한 치료가 시도되고 있다. 상기 면역 조절제를 통한 치료 방법은 알레르기 환자 에게서 흔히 보이는 과도한 Th2 면역에 의해 억제되어 있는 Thl 면역반웅을 활성화 시키고, IgE를 감소시키는 것이 핵심이다. 그 예로 2003년 8월에 시판에 들어간 anti-IgE 항체를 이용한 천식 치료제인 졸레어가 있으며， 그 외에도 Thl 면역반웅 을 강력하게 활성화시키는 것으로 알려진 박테리아의 특정 DNA인 CpG 0DN(oligodeoxy- nucleotide)이에 대한 임상 시험이 현재 진행 중이다. 이외에도 알레르기 질환에서 특징적으로 나타나는 특히， 면역체계의 블균형 때문에 생산되는 다양한 종류의 사이토카인， 케모카인 등에 대한 항체를 이용한 제품개발이 시도되 고 있다. 현재 천식 /C0PD 치료제 부문에서 GSK의 애드바이어 /세레타이드 (Advair/Seretide), 머크의 싱규레이어 (Singulair)， 베링거인겔하임의 스피리바 (Spiriva), 아스트라제네카의 심비코트 (Symbicort) 등의 블록버스터급의 약물이 천 식 치료 부분에서 큰 비중을 차지하고 있는 것으로 보인다. 그러나, 일부 치료제의 경우 특허만료로 인한 제너릭 경쟁에 직면해 매출 감소가 불가피할 전망이며 시장의 성장과 함께 제너릭 출시 경쟁 및 신약 출시 경 쟁이 심화 될 것으로 예상된다. 세계 인구 1 가 앓고 있는 알레르기성 염증질환인 천식은 환경오염 속도에 따라 꾸준히 증가하고 있는 대표적 알레르기성 질환으로， 미국 국립 심폐혈관연구 소와 유럽 호흡기 학회에 의하면， 천식에 관한 연간 비용은 미국에서 161억 달레 EU에서 163억 달러로 예측된다. 천식질환의 특성상 장기간 약물복용이 불가피하지 만， 종래의 스테로이드제나 평활근 이완제와 같은 천식치료제들은 면역능 저하， 감 염， 삼장에 대한 작용 등의 많은 부작용을 나타내고 있다. 따라서， 약물의 부작용 이 거의 없고， 근원적 병상 개선 또는 치료 효과를 갖는 새로운 약물 개발이 시급 히 요구되므로 종래의 약물이 갖는 부작용을 해소할 수 있는 천식치료제의 개발이 필요하다. 현재, 식물유래 추출물을 대상으로 한 천식 치료 효과를 나타내는 논문 및 특허건이 많이 보고되고 있는 실정이다. 종래의 천식의 예방 및 치료용 조성물로는 대한민국 공개특허 제 2008- 023570호에서는 단삼 (Salvia miltiorrhiza BUNGE)의 조추출물， 극성용매 가용추출 물 또는 비극성용매 가용추출물을 휴효성분으로 함유하는 천식 및 알러지성 질환용 조성물을 개시되어 있고， 대한민국 공개특허 제 2004-097820호 알파 리포산을 유효 성분으로 함유하는 천식 예방 및 치료용 조성물을 개시하고 있다. 또한, 대한민국 공개특허 제 2010-062450호에서는 캐피어 그레인 (Kefir grain)에서 분리한 균주인 클루베라마이세스 (Kluyveromyces marxianus)를 함유하는 알러지, 염증 또는 천식 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있는 등 다양한 종류의 추출물, 화합물 또는 균주 등이 천식을 치료하고자 연구되고 있으나, 천식의 치료에 유용한 신규 치료제의 개발이 여전히 요구되고 있는 실정이다. 이에 본 발명자들은 천연물 유래의 새로운 천식 치료제를 개발하기 위하여 연구하던 중 황금으로부터 분리한 플라보노이드 화합물인. 오고닌 (wogonin) 화합물 이 생체내 (in vivo)에서 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량을 억 제시키며, 기관지 내 염증세포 침윤을 억제하여 천식의 예방， 치료 또는 개선용 조 성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】 "
본 발명의 목적은 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분 으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한， 본 발명의 목적은 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염올 유 효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 개 용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
나아가, 본 발명의 목적은 약학적으로 유효한 양의 오고닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 천식에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식 치료방법을 제공하는 것이다. '
또한， 본 발명의 목적은 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 천 식 예방 또는 치료 용도를 제공하는데 있다.
【기술적 해결방법】
상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000007_0001
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의.상기 화학식 1로 표시되는 오고 닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 천식에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식 치료방법을 제공한다.
또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 천식 예방 또는 치료 용도를 제공한다. 이하, 본 발명을 상세하게 설명한다. 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으 로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물 을 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000008_0001
구체적으로， 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 바람직하게는 기관지성 천식, 알러지성 천식, 아토피형 천식, 비아토피형 천식, 운동유발 천식， 아스피린 천식， 심인성 천식， 폐포성 천식 등의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 상기 오고닌은 황금으로부터 추출하여 사용하거나， 유기합 성 분야에서 당업자에게 알려진 방법을 통해 제조하거나， 상업적으로 판매되는 것 을 사용할 수 있으나， 이에 한정되지 않으며， 바람직하게는 황금 (Scutellariae Radix)으로부터 분리 및 동정하여 얻은 것을 사용할 수 있다. 본 발명에 따른 상기 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여， 난백 알부민올 항원으로 유발한 BALB/c 마우스를 기도 염증 모델을 사용하였는데ᅳ BALB/c마우스는 기관지 천식에 있어서 발병기전과 새로운 약물의 효능연구에 보편 적으로 사용되고 있고， 난백알부민 항원에 대한 반응이 우수한 특성이 있다 (헤르 즈 U, et al., Immunol Cell Biol, 74， 209-15, 1996) . 또한， 상기 마우스 염증 모 델은 폐의 호산구성 염증 및 기도 과민 반웅이라는 두 가지 측면에 있어서, 사람에 서의 기관지 천식과 유사하여 약물에 대한 반웅 연구도 다양하게 진행되고 있다 (이 동근, 소아과：제 46권， 제 10호， 952-957, 2003).
본 발명에 따른 제조예 1(오고닌)의 오고닌을 투여한 상기 마우스 염증 모 델은 천식 유도군 (OVA)인 오고닌을 투여하지 않은 대조군에 비해， 천식의 특징 중 기도 과민성， 기관지 폐포 세척액 내 염증세포의 수 및 혈청 내 IgE 항체의 농도가 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났고, 폐의 Th2 세포에서 분비되는 인터루킨- 4CIL-4), 인터루킨 -6 IL-6) 및 인터루킨 (IL-13)을 포함하는 Th2싸이토카인의 발현 또한， 우수하게 억제되었으며， 활성 산소 발생량을 억제될 뿐만 아니라 기도 점막 내 염증 세포의 침윤을 감소되는 효과를 나타내었다. 구체적으로， 메타콜린을 흡입시켜 폐활량이 줄어드는 정도를 알아보는 검사 로 천식 위험 여부를 확인할 수 있는 기도과민성을， 메타콜린 농도 증가에 따른 펜 (Penh) 수치로 측정한 결과， 천식 유도군 (OVA)에서는 펜 (Penh) 수치가 급격히 증가 하는 반면， 본 발명의 오고닌을 투여한 군에서는 펜 (Penh) 수치가 1.7059 - 2.6055 로 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다 (표 1 및 도 2 참조). 또한， IgE는 기관지 천식에서 증요한 역할을 하는데， 알레르겐에 감작이 되 면 특이 IgE항체가 형성되어 혈중에 존재하거나 비만세포， 호염구 세포 표면에 부 착하게 된다. 특이 알레르겐에 다시 노출되면 이 알레르겐이 비만세포에 붙어 있는 IgE에 결합되면서 많은 염증매개 물질이 분비되어 기도 염증 및 기관지 수축을 일 으킨다. 이전 연구들에서 혈중 IgE 농도가 기관지 천식의 중증도와 상관관계가 있 음이 보고됨에 따라 (Noah TL, et al. , Clin Immunol 2000;97:43-49) 기관지 천식 발생에 igE의 중요성이 인식되고 있다. 이에， 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에 대하여, 혈청 및 기관지 폐포 세척액 내의 IgE 항체의 농도를 측정한 결과， 혈청 내 IgE 항체 농도는 오고닌을 투여하지 않은 천식 유도군 (23139.51 ±484.45 ng/ )에 비해 본 발명의 오고닌을 투여한 군 (19418.52 ±1332.101 ng/mO에서는 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났 고， 기관지 폐포 세척액 내의 IgE 항체 농도는 천식 유도군 (19.02 ±2.43 ng/ )에 비해 본 발명의 오고닌을 투여한 군 (12.10±1.87 ng/ )에서는 유의성 있게 감소하 는 것으로 나타났다 (표 2， 3 및 도 3, 4 참조). 나아가， 최근, 천식환자들에게서 기관지 폐포 세척술을 수행하여 기도 염증 을 확인한 결과, 기관지 폐포 세척에는 림프구, 비만세포， 호산구， 활성화된 대식 세포 등이 증가해 있음이 확인되었다. 이에， 천식이 기도 염증 질환이라고 일반화 되고, 여러 염증 세포들이 대부분 활성화되어 각종 매개물질들을 분비하여 유발하 는 것으로 보고된 바， 염증세포의 감소는 천식의 치료와 관련이 있는 것으로 알려 져 있다 (Haley KJ, et al. , Am J Respir Crit Care Med, 1998;158:565-72). 이에， 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에 대하여， 염증세포 (대식세포， 비만세포， 호산구， 림프구)의 수를 측정한 결과, 천식 유도군 (524.30±43.22)과 대 비하여， 본 발명의 오고닌을 투여한 군 (172.52±29.29)에서 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다. 상기 염증세포 중에서， 특히 호산구는 조직에 침투하여 세포성 매개 면역에 주로 관여하는 세포로，비장 및 호흡기 등에 걸쳐 퍼져 있고, 염증성 단백질을 함유 하고 있어， 기도상피세포에 직접 손상을 주고， 기도과민성을 증가시키며 비만세포 의 탈 과립을 유발하여 천식 발병에 중요한 역할올 하는 것으로 알려져있다. 호산 구의 수는 천식 유도군에서 71.75 ±4.63인 반면， 본 발명의 오고닌을 투여한 군에 서는 32.24±8.84로 감소하는 것으로 나타났다 (표 4 및 도 5 참조). 또한， 항원제시세포에 의해 항원이 Th2세포에 제시되면， Th2-세포가 활성화 되어 Th2 싸이토카인 인자인 인터루킨 -4， 6, 13UL-4, 6， 13)등을 분비하고, 이들 싸이토카인이 알레르기성 기도 염증을 유발시키는 역할을 한다. 특히， IL-4 및 IL- 13은 B-세포를 자극하여 IgE의 생산을 증가시키고， IL-6은 염증반웅을 증폭시키는 것으로 알려져 있다 (Wills-Karp M, et al . , Science 1998;282:2258-2261). 이에, 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에 대하여， 폐에서 싸이토카인의 발현 정도를 분석 한 결과， IL-4, IL-6 및 IL-13의 발현은 천식 유도군에 비해 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에서 각각 26.14%, 16.64% 및 23.30% 감소하는 것 으로 나타나， 오고닌을 천식이 유도된 마우스에 투여한 결과， Th2싸이토카인을 억 제하는 것으로 나타났다 (표 5 및 도 6, 7 참조). 나아가 ; 다른 염증질환과 마찬가지로， 천식에서도 산화적 스트레스가 증가 되어 있으며, 대식세포와 호산구에서 활성산소물질을 생성한다. 산화적 스트레스의 증가는 중증도와 관련이 있으며， 염증반웅을 더욱 증가시키고， 스테로이드에 대한 반웅을 감소시키는 것으로 알려져 있다. 이에 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에 대하여， 활성 산소 발생 억제 효과를 측정한 결과， 본 발명의 오고닌을 투여한 군에서 천식 유도군에 대비하여 볼때， 68.42%감소하는 것으로 나타났다 (표 6 및 도 8 참조). 또한， 항원 야기 후， 기관지에서는 호산구， 호중구 및 대식세뇨로 이루어진 염증성 세포의 침윤이 관찰된다 (Oh SW, et al., J,. Immunol 2002;168:1992-2000). 이에， 본 발명에 따른 오고닌을 투여한 군에 대하여， 기도 점막내 염증세포 침윤도 를 평가한 결과， 천식 유도군에서는 세기관지 주변의 염증 지수가 3.60±0.22로 확 인되었으나， 본 발명의 오고닌을 투여한 군에서는 1.00±0.28로 유의성 있게 감소 하는 것으로 나타났고, 혈관 주변에서는 천식 유도군 (3.80±0.18)에 비해 본 발명 의 오고닌을 투여한 군에서는 1.40±0.22로 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다 (표 7 및 도 9， 10 참조). 이로부터, 본 발명의 오고닌은 천식의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있음올 확인할 수 있다. 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 오고닌 화합물뿐만 아니라， 이의 약학 적으로 허용되는 염, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물， 수화물， 라세미체， 또는 입체이성질체를 모두 포함한다. 본 발명의 화학식 1로 표시되는 오고닌 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며， 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산부가염은 염산， 질산, 인산， 황산， 브름화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트， 하이드록시 알카노에이트 및 알 칸디오에이트, 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로 부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트， 피로설페이트， 바이설 페이트， 설파이트， 바이설파이트， 니트레이트， 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페 이트, 디하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브 로마이드， 아이오다이드， 플루오라이드, 아세테이트， 프로피오네이트， 데카노에이 트, 카프릴레이트， 아크릴레이트, 포메이트， 이소부티레이트， 카프레이트, 헵타노 에이트， 프로피올레이트， 옥살레이트， 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바 케이트， 푸마레이트， 말리에이트, 부틴 -1，4ᅳ다오에이트, 핵산 -1， 6-디오에이트， 벤 조에이트, 클로로벤조에이트， 메틸벤조에이트， 디니트로 벤조에이트， 하이드톡시벤 조에이트， 메특시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트， 벤젠설포네이트， 를루 엔설포네이트， 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트 , 페닐아세테이트 , 페닐프 로피오네이트， 페닐부티레이트， 시트레이트， 락테이트， 하이드록시부티레이트 글 리콜레이트， 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-
1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다. 본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면， 화학식 1의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고， 이 염을 수흔화성 유기 용매， 예를 들면 메탄 을， 에탄을， 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동량의 화학식 1로 표시되는 오고닌 화합물 및 산 수용액 또는 알코을을 가 열하고, 이어서 이 흔합물을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시 켜 제조할 수도 있다. 또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알 칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산 화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고， 비 용해 화합물 염을 여과 하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슘 염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 상기 본 발명의 오고닌 화합물을 포함하는 조성물은, 조성물 총 중량에 대 하여 상기 조성물을 0.1 내지 50 중량 %로 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 약학적 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담 체， 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은， 각각 통상의 방법에 따라 산제 , 과립제， 정제， 캡슬제， 현탁액， 에멀견, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형， 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화 하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함 될 수 있는 담체， 부형제 및 회석제로는 락토즈， 덱스트로즈， 수크로스， 솔비를, 만니를， 자일리를， 에리스리를， 말티틀, 전분， 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴， 칼슴 포스페이트, 칼슘 실리케이트， 셀를로즈， 메틸 샐를로즈， 미정질 셀를로스, 폴리비닐 피를리돈， 물, 메틸히드록시벤조에이트， '프로필히드록시벤조에이트， 탈크， 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 층진제, 증량제， 결합제, 습윤제, 붕해 제, 계면활성제 등의 회석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제， 환제， 산제, 과립제， 캡슐제 등이 포함되며， 이러한 고형제제 는 본 발명의 조성물에 '적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분， 탄산칼슘 (calcium carbonate), 슈크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose)， 젤라틴 등을 섞 어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트， 탈크 같은 윤활 제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제, 유제, 시럽제 등 이 해당되는데 흔히 사용되는 단순회석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제， 예를 들면 습윤제, 감미제 방향제 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제， 현탁제， 유제， 동결건조 제제， 좌제가 포함된다. 비수성용제， 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴 리에틸렌 글리콜， 을리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가 능한 에스테르 등이.사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골， 트원 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세를젤라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며， 비경구 투여법 이라면 어느 것이나 사용 가능하고， 전신 투여 또는 국소 투여가 가능하나, 전신 투여가 더 바람직하며， 정맥 내 투여가 가장 바람직하다 .
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중， 질병의 정도， 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서， 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 0.03 g/kg으로， 바람직하게는 0.001 내지 8 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루 에 한번 투여할 수도 있고， 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한， 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000015_0001
구체적으로， 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 건강식품 조성물은 바람직하게는 기관지성 천식， 알러지성 천식， 아토피형 천식， 비아토피형 천식， 운동유발 천식， 아스피린 천식， 심인성 천식, 폐포성 천식 등의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 본 발명의 오고닌은 생체 내 실험 (in vivo)에서 1 천식 발생의 원인으로 문제가 되는 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량을 억제시키며， 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라， 혈청과 기 관지 폐포 세척액 내의 난 알부민， 특히 IgE 생성을 억제하고， 폐에서 Th2 사이토 카인의 발현을 억제하는 효과가 우수하므로 천식 예방 및 개선용 건강식품 조성물 로 유용하게 사용될 수 있다 (표 1~7 및 도 1~10 참조). 본 발명에 따른 오고닌은 천식 예방 및 개선용을 목적으로, 상기 오고닌 화 합물을 식품， 음료 등의 건강보조 식품에 첨가할 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식 품의 예로는 드링크제， 육류， 소시지， 빵， 비스킷， 떡, 초콜릿, 캔디류， 스낵류, 과자류， 피자， 라면， 기타 면류， ¾류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스 프, 음료수， 알코올 음료 및 비타민 복합제， 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 본 발명의 화학식 1로 표시되는 오고닌 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고， 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 흔합량은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로， 건강식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식 품 중량의 0.1 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며， 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상 기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다 ; 본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같 이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드， 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사 카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드， 예를 들어 덱스트 린， 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리를， 소르비를， 에리트리를 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린， 아 스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상기 외에 본 발명의 오고닌 화합물은 여러 가지 영양제， 비타민, 광물 (전 해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제， 안정화제， 방부제， 글리세린， 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 오고닌 화합물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 황금으로부터 분리된 오고닌 화합물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 나아가， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 하기 화학식 1로 표시되는 오고 닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 천식에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식 치료방법올 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000018_0001
상기 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또 는 위험 비율로 질환을 치료하기에 층분한 양을 의미하며， 이는 개체의 질환의 종 류， 중증도 약물의 활성, 약물에 대한 민감도， 투여시간， 투여 경로 및 배출비율， 치료기간， 동시에 사용돠는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요 소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 오고닌은 생체내 (in vivo)에서 천식 발생의 원인으로 문제가 되 는 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량을 억제시키며， 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라， 혈청과 기관지 폐포 세척액 내의 난 알부민， 특히 IgE 생성을 억제하고， 폐에서 Th2사이토카인의 발현을 억제하는 효과를 나타 내므로， 천식의 치료방법에 유용하게 사용될 수 있다.
또한， 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 천식 예방 또는 치료 용도를 제공한다:
[화학식 1]
Figure imgf000018_0002
본 발명의 오고닌은 생체내 (in vivo)에서 천식 발생의 원인으로 문제가 되 는 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량올 억제시키며， 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라， 혈청과 기관지 폐포 세척액 내의 난 알부민， 특히 IgE 생성을 억제하고， 폐에서 Th2사이토카인의 발현을 억제하는 효과를 나타 내므로， 천식 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
【유리한 효과】
본 발명의 오고닌은 생체내 (in vivo)에서 천식 발생의 원인으로 문제가 되 는 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량을 억제시키며， 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라， 혈청과 기관지 폐포 세척액 내의 난 알부민， 특히 IgE 생성을 억제하고， 폐에서 Th2사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 우수 하므로 천식 예방， 치료 및 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 본 발명에 따른 오고닌의 투여로 인한, 마우스의 체중 감소 억제 효 과를 확인하기 위하여， 마우스의 몸무게 변화를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 오고닌의 투여로 인한， 기도과민성 억제 효과를 확 인하기 위하여， Penh수치를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 오고닌의 투여로 인한 혈청 내의 IgE농도의 감소 효과를 확인하기 위하여, 혈청 내 총 IgE농도를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 오고닌의 투여로 인한 기관지 폐포 세척액 내의 IgE농도 감소 효과를 확인하기 위하여， 기관지 폐포 세척액 내의 총 IgE 농도를 나타낸 그 래프이다.
도 5는 본 발명의 오고닌의 투여로 인한 폐포 세척액 내의 염증세포 수의 감소 효과를 확인하기 위하여， 총 염증세포수， 호산구의 수, 그 외 염증세포의 수 를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 오고닌의 투여로 인한, 기관지 폐포 세척액 내의 Th2 싸 이토카인의 발현 억제 효과를 확인하기 위하여, IL-4, IL-13, MMP-9 및 IL-6의 발 현 정도를 나타낸 형광도면이다.
도 7은 본 발명의 오고닌의 투여로 인한， 기관지 폐포 세척액 내의 Th2 싸 이토카인의 발현 억제 효과를 확인하기 위하여, 정상 대조군에 대한 IL-4, ILᅳ 6， IL-13 및 匪 P-9의 상대 밀도 수치를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 오고닌의 투여로 인한, 활성 산소 발생 정도 감소 효과를 를 나확인하기 위하여, 정상대조군에 대한 DCF 형광도를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 오고닌의 투여로 인한， 염증 억제 효과를 확인하기 위하 여, 세기관지 및 혈관 주위의 염증 정도를 나타낸 사진이다.
도 10은 본 발명의 세기관지 주위 및 혈관 주위의 염증 수치 감소 효과를 확인하기 위하여， 세기관지 및 혈관 주위의 염증 수치를 나타낸 그래프이다. 【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
이하， 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
하기 실시예는 본 발명을 설명하는 것일 뿐， 이에 한정되지 않는다.
<제조예 1>오고닌의 제조
단계 1: 황금 추출물의 제조
건조된 황금을 세절한 후， 3.0 kg에 30 L의 메틸 알코올을 가하여 상온에서 추출한후 이를 4희 반복하여 메틸 알코을 추출물 300 g 을 수득하였다. ' 단계 2: 황금 분획물의 제조
상기 단계 1의 메틸 알코올 추출물을 물에 분산시키고， n_핵산， 에틸아세테 이트를 이용하고, 순차적으로 분획하여 n-핵산 분획물 13.8 g, 에틸아세테이트 분 획물 167 g 및 물 분획물 119.2 g을 얻었다. 단계 3: 오고 화합물의 분리 및 동정
상기 단계 2에서 수득한 에틸아세테이트 분획물 160 g 을 30/l(v/v) 내지 5/l(v/v)의 클로로포름 /메틸 알코을 (chloroform/methyl alcohol)을 기울기 용출용 매로 이용하여 실리카 겔 컬럼크로마토그래피를 수행하고, 얻은 분획 중 오고닌 함 유분획을 메틸 알코올 용매상태에서 결정을 유도하여 본 발명의 화학식 1로 표시되 는 화합물 (5.6 g)을 얻었으며, 구조분석을 위하여 NMR 분석 및 질량분석을 수행하 였다. 그 결과 하기 화학식 1로 표시되는 화합물은 오고닌 (Wogonin)으로 확인되었 다.
[화학식 1]
Figure imgf000021_0001
화합물명 ： Wogonin
분자식 ： C15H1005
분자량 ： 284.26
1H匿 (300 MHz, DMS0-d6) δ 6.98 (1Η, s, H-3), 6.31 (1H, s, H-6), 8.07 (1H, m, H-2' ), 7.60 (1H, m, H-3' ), 7.60 (1H, m, H-4' ), 7.60 (1H, m, H-5' ) 8.07 (1H, m, H-3' ), 3.89 (3H, s, 0CH3).
13C NMR (300 MHz, DMS0-d6) δ 164.40 (C-2)-, 104.64 (C-3), 182.01 (04)，
156.21 (C-5) , 157.34 (C-7), 99.12 (C_6), 127.76 (C-8), 149.59 (C-9), 103.74 (010)， 130.72 (C-Γ ), 126.36 (C-2' ), 129.22 (C-3' ), 131.46 (C-4' ), 129.22 (C-5' ), 126.36 (06' ), 61.03 (C~0Me).
참고문헌 : Planta Medica-vol .60, 493-494 (1994). 실험동물 및 기관지천식 유도:
본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여 평균 체중
20 g 내외의 6주령 Balb/c 암컷 생쥐를 실험동물로 사용하고， 1 주 간의 적웅기간 을 가진 후에 기본적인 신체검사상에서 이상이 관찰되지 않는 동물을 대상으로 준 비하였다. 2 주 간격으로 2 mg의 수산화알루미늄 (A8222, Sigma, St. Louis, M0)과 난 백알부민 20' g(A5503, Sigma, St. Louis, M0)을 현탁한 인산완층용액 (pH 7.4) 200 μΐ을 복강에 주입하여 감작시켰다. 첫 번째 난백알부민 (0VA) 복강투여 후, 28 일부터 30일까지 \ 난백알부민을 초음파분무기를 이용하여 30분간 흡입시켰다. 마지막 항원 투여 후 24 시간 뒤에 기도과민성을 측정하였고 48 시간 뒤에 치사량의 펜토바비탈 (엔토발, 한림제약주식회사)을 투여한 뒤 체중을 측정하고， 기 관지 절개를 실시하여 총 1.2 의 생리식염수로 기관지폐포세척을 실시한 뒤 검체 를 수거하였다. 정상 대조군 (NC)으로 난백알부민을 투여, 흡입하지 않은 군， 천식 유도군 (0VA)으로 난백알부민을 투여, 홉입하여 기관지 천식을 유도한 군， 비교군 (DEXA)으로 난백알부민 흡입 1시간 전에 덱사메타손 (dexamethasone; 3 mg/kg, P0 ： D4902, Sigma, St. Louis, M0)을 경구투여한 군, 비교군 (Monte)으로 난백알부민 흡 입 1시간전에 몬테루카스트 (montelukast; 30 mg/kg, P0)를 경구투여한 군， 실험군 (Wogonin)으로 난백알부민 흡입 1시간전에 상기 실시예 1의 Wogonin (30 mg/kg P0) 을 경구투여한 군으로 실험을 진행하였으며 각 군당 5마리의 흰쥐를 사용하였다. 정상 대조군의 체중은 21.60±0.25 g 이었으나 천식 유도군은 19.72±0.53 g으로 현저한 체중감소를 보이는데 반해 텍사메타손 투여군 (21.04±0.35 g), 몬테 루카스트 투여군 (21.08±0.36 g), 본 발명의 오고닌 투여군 (21.§2±0.43 g)으로 약 물 투여군은 모두 정상 대조군에 가까운 체중회복을 확인할 수 있었다 (도 1 참조). 통계분석
모든 측정값은 평균士오차로 표시하였으며, 여러 변수에 따른 평균값과 표 준오차 (mean土 S.E.)을 계산하였고, 각 집단간의 비교는 SPSS 10.0 을 이용하여 만- 휘트니 iKMann-whitney U) 검정을 수행하여 분석하였다. 통계적으로 p 값이 0.05 미만인 경우에 유의적 차이가 있다고 판정하였다.
<실시예 1> 기도과민성의 측정
본 발명에 따른 오고닌의 천식 발생에 의한 기도과민성 여부는 단일 챔버 체적변동 측정기 (Mie chamber plethysmography; All Medicus, Seoul)를 이용하여 기도 저항을 측정하여 수학적으로 계산된 기도의 폐색을 반영하는 수치인 enhanced pause(Penh)를 측정하여 평가하였다. 펜 (Penh)의 측정은 정상 호흡 상태에서 기저 값을 측정한 후 PBS를 초음파분무기를 이용하여 3분간 흡입시킨 후 3분간 측정하였 다. 이후， 기관지 천식을 진단하는 일반적인 방법에서 사용되는 히스타민제 메타콜 린 (A2251, Sigma, St. Louis, M0)을 12， 25, 50 g/ml 의 농도로 점차 증가시키면 서 흡입시킨 후 펜 (Penh) 수치를 측정하였고, 결과 수치는 각 농도의 데타콜린 흡 입 후 Penh의 증가 백분율로 표현하고， 기저 Penh(saline challenge)은 100%로 표 시하였다. 그 결과를 하기 표 1 및 도 2에 나타내었다.
【표 1】
Penh수치 0 mg/ml 12.5 mg/ml 25 mg/ml 50 mg/ml 제조예 1 0.4261±0.0069 1.7059±0.3028 2.0166±0.2248 2.6055±0.2280
(오고닌)
정상군 (NC) 0.4206±0.0217 0.5970±0.1024 0.6336±0.0682 0.6639±0.0682 대조군 (OVA) 0.6299±0.0617 2.2917±0.3070 6.8642±0.8313 9.1854±1.6230
비교군 1 0.6486±0.1526 1.6750±0.0820 1.9963±0.1577 2.7864±0.4293 (DEXA)
비교군 2 0.4525±0.0313 1.5249±0.2432 2.1006±0.4758 2.3576±0.1741 (Monte)
상기 표 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이， 정상 대조군에서는 메타콜린 농도 증가에 따른 완만한 펜 (penh) 수치 증가를 확인하였으나, 천식 유도군에서는 유의 성 있게 급격한 펜 (penh) 수치의 증가를 확인할 수 있었다. 반면, 상기 비교군 1， 2 및 실시예 1의 약물 투여군 (덱사메타손 투여군, 몬 테루카스트 투여군, 오고닌 투여군)에서는 메타콜린 농도에 상관없이 천식군보다 유의하게 감소 되었으며, 이러한 차이는 저농도의 메타콜린 보다는 고농도의 메타 콜린을 흡입시켰을 때 더욱 뚜렷한 차이를 나타내었다. 이로부터， 본 발명에 따른 오고닌은 천식의 원인인 기도과민성을 억제하므 로 천식 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있다.
<실시예 2> 혈청과 기관지 폐포 세척액 내의 IgE측정
본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여 천식의 중증 도와 상관관계가 있는 IgE의 농도 측정을 혈청과 기관지 폐포 세척액 내 IgE의 농 도를 면역효소법을 이용하여 측정하였다. 각 군에서 채취한 혈청 및 기관지 폐포 세척액을 96-웰 플레이트 (ELISA 플 레이트)에 난백알부민 (OVA)을 20 g/m의 농도로 pH 8.3의 0.1 M NaHC03 완충액에 녹여 4 °C에서 밤샘 코팅시킨 후， 1% 소혈청 알부민이 함유된 PBS로 비특이반웅을 억제 시킨 후， 혈청 검체를 1:400으로 희석하여 실온에서 2시간 동안 반웅시켰다. 잘 세척한 후 항-마우스 IgE 단일클론성 항체를 300배 희석하여 2시간 반웅 시킨 후 과산화효소가 결합 된 HRP-결합 염소 항 -래트 IgG 다중클로성 A(HRP- conjugated goat ant i -rat IgG polyclonal A)를 4000배 회석하여 실은에서 1시간 반웅시킨 후 세척하였다. 발색은 3.3'5.5'-테트라메틸벤자이딘 기질로 반웅시킨 후， 650 nm에서 분광 흡광도를 측정하였다. 혈청 내의 IgE 결과를 하기 표 2 및 도 3에 나타내었고， 기 관지 폐포 세척액 내의 IgE 결과를 하기 표 3 및 도 4에 나타내었다.
【표 2】
Figure imgf000025_0001
표 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이， 본 발명에 따른 혈청 내의 IgE 항체의 농도를 측정한 결과, 혈청 내 IgE 항체 농도는 천식 유도군 (0VA)(23139.51±484.45 ng/m«에 비해 본 발명의 오고닌을 투여한 군 (제조예 1)에서는 19418.52± 1332.101 ng/ 로 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다.
【표 3】
Figure imgf000026_0001
또한， 표 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이， 기관지 폐포 세척액 내의 IgE 항 체 농도는 천식 유도군 (19.02±2.43 ng/m£)에 비해 본 발명의 오고닌을 투여한 군 에서는 12.10±1.87 ng/ ^로 유의성은 검증되지 않았으나 감소하는 양상을 나타내 었다. - 이로부터， 본 발명에 따른 오고닌은 천식과 관련 있는 IgE농도를 억제하므 로 천식 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있다.
<실시예 3>기관지 폐포 세척액 내 염증세포 분석
본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여 천식과 관련 이 있는 염증 세포 수의 증감을 측정하였다. 각 군의 기관지 폐포 세척액을 회수 한 즉시 트리판 블루 (Trypan blue)로 염색하여 죽은 세포를 제외한 총 세포수를 혈구계산반 (hemocytometer)을 이용하여 계산한 다음 싸이토스핀 (Cytospin) Π로 표본 도말 후， 디프-퀵 (Dif f-Quick) 염색 (Sysmex, Switzerland)을 수행하여 호산구와 그 외의 염증세포를 감별 계산하였다. 그 결과를 하기 표 4 및 도 5에 나타내었다.
【표 4]
Figure imgf000027_0001
표 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이， 총 염증세포의 수는 정상 대조군에서 19.24±1.22, 천식 유도군에서 524.30±43.22， 덱사메타손 투여군 (비교군 1)에서 89.24±6.98， 몬테루카스트 투여군 (비교군 2)에서 167.68±8.80, 본 발명의 오고닌 투여군 (제조예 1)에서 172.52±29.29로 천식 유도군에 비해 약물투여군에서 모두 유의성 있게 감소하였다. 또한， 그 외의 염증세포 수는 140.28±26.24로 유의성 있게 감소하였다. 특히， 조직에 침투하여 세포성 매개 면역에 주로 관여하는 세포로써， 세포, 비장 및 호흡기 등에 걸쳐 퍼져있고， 염증성 단백질을 함유하고 있어, 천식 발병에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 호산구의 수는 정상 대조군에서 0.00±0.00, 천 식 유도군에서 71.75±4.63， 덱사메타손 투여군 (비교군 1)에서 8.24±1.31， 몬테루 카스트 투여군 (비교군 2)은 27.88±2.80， 본 발명의 오고닌 투여군 (실시예 1)에서 32.24±8.84로 천식 유도군에 비해 약물 투여군에서 모두 유의성 있게 감소하였다. 이로부터， 본 발명의 오고닌은 천식과 관련 있^ 염증 세포를 감소시킬 뿐 만 아니라， 특히 천식에 큰 영향을 주는 호산구의 수를 감소시키므로 천식 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있다. <실시예 4>싸이토카인 mRNA분석
본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여 천식과 관련 이 있는 싸이토카인 mRNA를 측정하여 분석하였다. 각 군별로 취한 기관지 폐포 세척액의 상층액에서 Th2 싸이토카인인 인터 루킨 -4(IL— 4)， 인터루킨 (IL-6) 및 인터루킨 (IL-13)의 발현 정도를 분석하기 위하여 적출된 폐장에서 트리졸 (Invitrogen)을 이용하여 RNA를 분리하여 역전사 중합효 소 연쇄반웅 (reverse transcriptase polymerase chain reaction, quantitative RT- PCR, Pr omega, WI)을 수행하여 발현수준이 가장 낮은 경우를 1이라고 평가하였을 때의 상대 값 (relative densitometric value, RDV)으로 평가하여 억제효과를 측정 하였다. 그 결과는 하기 표 5 및 도 6， 7에 나타내었다.
【표 5】
상대 밀도 수치 (relative densitometric value, RDV)(%)
(NC ： NC = 100%)
IL-4 IL-6 IL-13 제조예 1 118.11±29.80 106.87±10.47 143.68±14.08
(오고닌)
정상대조군 100.00±7.86 100.0 t9.02 100.00±12.28
(NC)
천식 유도군 159.91±14.87 128.20±6.51 187.35±7.49
(OVA)
비교군 1 139.60±13.34 121.37±6.78 176.55±16.13
(DEXA)
비교군 2 138.86±19.52 112.39±7.16 157.67±16.60
(Monte)
표 5에 나타낸 바와 같이 , 기관지 폐포 세척액의 상층액에서 Th2 싸이토카 인인 ILᅳ 4， IL-6 및 IL-13의 발현은 천식 유도군에 비해 비교군 1, 2 및 본 발명의 오고닌을 포함하는 약물 투여군에서 모두 감소하였으나， 특히， 본 발명의 제조예 1 의 오고닌을 투여한 군에서 가장 뛰어난 억제효과를 나타내었다. 이로부터, 본 발명의 오고닌은 천식과 관련 있는 Th2 싸이토카인 인자인 IL-4, IL-6, 및 IL-13의 농도를 감소시키므로 천식 치료에 유용하게 사용될 수 있 음을 확인할 수 있다. <실시예 5>활성 산소 생성량 (Reactive oxygen species) 측정
산화적 스트레스의 증가는 스테로이드에 대한 반웅을 감소시키는 것으로 알 려져 있다. 이에 본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여 다 른 염증질환과 마찬가지로， 천식에서도 나타나는 활성산소의 생성량 측정하였다. 각 군의 일부 기관지 폐포 세척액을 인산완층식염수 (PBS)로 세척한 뒤， 10 μΜ의 형광시약의 일종인 2， 7-디클로로플루오르세인 디아세테이트 (2,7- Dichlorofluorescein diacetate; DCFH-DA, 35845, Sigma, ， St. Louis, MO 를 첨가 하여 10 분간 상온 암실에서 방치한 뒤 분광형광측정기를 이용하여 측정하였고 (Ex=480 nm Em-522 nm)， 정상 대조군에 대한 백분율로 그 결과를 하기 표 6 및 도 8에 나타내었다.
【표 6】
Figure imgf000030_0001
표 6에 나타낸 바와 같이， 본 발명에 따른 제조예 1의 오고닌 투여군의 활 성 산소 발생량은 천식 유도군 보다 68.42% 감소하였으며, 비교군 1(덱사메타 손) (39.58 %) 및 비교군 2(몬테루카스트 )(45.84 ¾)의 투여군 보다 뛰어난 억제효과 를 나타내는 것으로 확인되었다. ' 이로부터， 본 발명의 오고닌은 천식에서 나타나는 활성산소의 생성량을 감 소시키는 효과가 우수하므로 천식 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있 다.
<실시예 6>조직병리학적 검사
항원이 야기 된 기관지에서는 호산구， 호중구 및 대식세포로 이루어진 염증 2g 성 세포의 침윤이 관찰된다. 이에 본 발명에 따른 오고닌의 천식에 대한 효과를 알 아보기 위하여 기관지 폐포 세척을 수행하지 않은 폐를 떼어내어 조직병리학적 검 사를 수행하였다. 각 군의 기관지 폐포 세척을 수행하지 않은 적출된 폐장은 통상적인 포르말 린 고정과 파라핀 포매를 거쳐 4 urn 두께로 영구조직 절편을 제작하여 각각 H & E 염색올 수행하였다. H & E 염색 후 각 개체의 조직 절편당 무작위로 5개 부위의 염 증지수를 측정하여 평균을 내었다. 염증지수 0 은 기관지 주변에 염증세포가 발견되지 않은 경우， 염증지수 1 은 간헐적으로 염증 세포가 관찰되는 경우, 염증지수 2는 대부분의 기관지 주변에 한층에서 두세층사이의 얇은 염증세포층이 관찰되는 경우， 염증지수 3은 대부분의 기관지 주변에 두세층에서 다섯층 이하의 염증세포층이 관찰되는 경우， 염증지수 4 는 대부분의 기관지 주변에 다섯층 이상의 두꺼운 염증세포층이 관찰되는 경우로 평가하였다. 그 결과를 하기 표 7 및 도 9， 10에 나타내었다.
【표 7]
ᄋ3즈 지수
|丁
ᅳ 세기관지 주위 혈관 주위
제조예 1(오고닌) 1.00±0.28 1.40±0.22
정상 대조군 (NC) 0.00±0.00 0.00±0.00
천식 유도군 (OVA) 3.60±0.22 3.80±0.18
비교군 l(DEXA) 1.75±0.19 1.50±0.22
비교군 2 (Monte) 2.25±0.22 2.50±0.25 본 발명에 따른 천식 유도군에서는 세기관지 주변에 호산구를 비롯한 많은 염증세포가 침윤되어 있었으며 과다 증식된 상피 세포와 비후 된 기관지 평활근도 확인되었다. 반면, 표 7에 나타낸 바와 같이， 약물을 투여한 군에서는 염증세포의 침윤 이 현저하게 감소 되어 이를 수치화하였을 때 천식 유도군은 세기관지 주변의 염증 지수가 3.60±0.22이었으나， 비교군 l(DEXA)은 1.75±0.19, 비교군 2(Monte)는 2.25±0.22 및 본 발명의 제조예 1의 오고닌 투여군은 1.00±0.28로 모두 천식 유 도군에 비해 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다. 또한， 혈관 주변의 염증 지수는 천식 유도군에서 3.80 ±0.18로 나타났으나, 비교군 1은 1.50±0.22， 비교군 2는 2.50±0.25 및 본 발명의 제조예 1의 오고닌 투여군은 1,40 ±0.22로 모두 천식 유도군에 비해 유의성 있게 감소하는 것으로 나 타났다. 이로부터， 본 발명의 오고닌은 항원이 야기 된 기관지에서는 호산구, 호중 구 및 대식세포로 이루어진 염증성 세포를 감소시키는 효과가 우수하므로 천식 치 료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있다.. 따라서， 상기 실시예 1 - 6의 결과로부터 , 본 발명의 오고닌은 천식 발생의 원인으로 문제가 되는 기도과민성을 경감시키고， 기도 내 활성 산소 발생량을 억제 시키며， 기관지 내 염증세포 침윤을 억제할 뿐만 아니라， 혈청과 기관지 폐포 세척 액 내의 난 알부민， 특히 IgE 생성을 억제하고, 폐에서 Th2 사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 우수하므로 천식 예방, 치료 및 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. <제제예 1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
오고닌 500 mg
유당 100 mg
탈크 10 rag 상기의 성분들을 흔합하고 기 밀포에 층진하여 산제를 제조한다 .
1-2. 정제의 제조
오고닌 500 mg
옥수수전분 100 rag
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg 상기의 성분들을 흔합한 후 통상의 정제의 제조방법 에 따라서 타정하여 정 제를 제조한다 .
1-3. 캅샐제의 제조
오고닌 500 rag
옥수수전분 100 mg
유당 100 rag
스테아린산 마그네슘 2 rag 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합하고 젤라틴 캡술에 층 전하여 캡슐제를 제조한다.
1-4. 주사제의 제조
오고닌 500 mg
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제 조한다.
100 nig
10 g
5 g
적량 통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬 향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 흔합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정 제수를 가하여 전체 100 n 로 조절한 후 갈색 병에 충진하여 멸균시켜 액체를 제조 한다.
<제제예 2> 건강식품의 제조
오고닌 1000 nig
비타민 흔합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 비타민 E 1.0 rag
비타민 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2
비타민 C 10 mg
비오틴 10
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 rag
판토텐산 칼슘 0.5 nig
무기질 흔합물 적량
황산제 1철 1.75 rag
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제 1인산칼륨 15 mg
제 2인산칼슴 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 rag
염화마그네슘 24.8 mg 상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성 분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다. <제제예 3> 건강 음료의 제조
오고닌
구연산
을리고당
매실농축액
타우린
정제수를 가하여 전체 통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후， 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 21 용기에 취득하 여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다. 상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따 라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
<제제예 4>기타 건강식품의 제조
4-1. 음료의 제조
꿀 522 rag
치옥토산아미드 5 mg
니코틴산아미드 10 nig
염산리보플라빈나트륨 3 rag
염산피리독신 2 mg
이노시를 30 mg
오르트산 50 mg 5 오고닌 0.48-1.28 rag
물 200 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다. 4-2. 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %
설탕 76.36~76.76 %
오고닌 0.24~0.64 %
후르츠향 1 ¾>
물 2 % 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉 ¾을 제조하였
4-3. 캔디의 제조
설탕 50-60 %
물엿 39.26~49.66 %
오고닌 0.24~0.64 %
오렌지향 0.1 % 상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다. 4-4. 밀가루 식품의 제조
오고닌 0.5 내지 5 중량부를 밀가루 100 중량부에 첨가하고， 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크， 쿠키， 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조 하였다.
4-5. 유제품 (dairy products)의 제조
오고닌 5 내지 10 중량부를 우유 100 중량부에 첨가하고, 상기 우유를 이용 하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
4-6. 선식의 제조
현미, 보리, 참쌀， 율무를 공지의 방법으로 알파화 시켜서 건조한 것을 배 전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조하였다. 검은콩， 검정깨, 들깨도 공 지의 방법으로 찌서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메시의 분말로 제조 하였다. 상기에서 제조한 곡물류 및 종실류와 본 발명의 오고닌을 다음과 같은 비 율로 배합하여 제조하였다. 현미 30 %
율무 15 %
보리 20 %
들깨 7 %
검정콩 7 %
검은깨 7 %
오고닌 3 %
영지 0.5 %
지황 0.5 %

Claims

【청구의 범위】 【청구항 1】 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으로 허용가능 한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]
Figure imgf000039_0001
【청구항 2】
제 1항에 있어서， 상기 천식은 기관지성 천식, 알러지성 천식， 아토피형 천식 비아토피형 천식， 운동유발 천식， 아스피린 천식， 심인성 천식， 폐포성 천식으로 이 루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성 물.
【청구항 3】
제 1항에 있어서， 상기 오고닌은 기도과민성을 경감 기도 내 활성 산소 생량을 억제 또는 기관지 내 염증세포의 침윤을 억제시키는 것을 특징으로 하는 학적 조성물.
【청구항 4】
제 1항에 있어서， 상기 오고닌은 기관지 내 염증세포의 수를 감소, 혈청 내
IgE항체의 농도를 감소 또는 Th2싸이토카인의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 5】
하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 또는 개선용 건강식품 조성물:
[화학식 1]
Figure imgf000040_0001
【청구항 6]
거 15항에 있어서, 상기 천식은 기관지성 천식, 알러지성 천식， 아토피형 천식， 비아토피형 천식， 운동유발 천식, 아스피린 천식， 심인성 천식， 폐포성 천식으로 이 루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건강식품 조 성물.
[청구항 7】
게 5항에 있어서， 상기 오고닌은 기도과민성을 경감, 기도 내 활성 산소 발 생량을 억제 또는 기관지 내 염증세포의 침윤올 억제시키는 것을 특징으로 하는 건 강식품 조성물.
【청구항 8】
제 5항에 있어서， 상기 오고닌은 기관지 내 염증세포의 수를 감소, 혈청 내
IgE항체의 농도를 감소 또는 Th2싸이토카인의 발현을 억제시키는 것을 특징으로 하는 건강식품 조성물.
【청구항 9】
약학적으로 유효한 양의 하기 화학식 1로 표시되는 오고닌 (Wogonin) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 천식에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식 치료방법 :
[화학식 1]
Figure imgf000041_0001
【청구항 10]
하기 화학식 1로 표시 되는 오고닌 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 천식 예방 또는 치료 용도 :
[화학식 1]
Figure imgf000041_0002
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