WO2012045906A1 - Aminociclohexanos polihidroxilados y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales - Google Patents

Aminociclohexanos polihidroxilados y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales Download PDF

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    • C07C2601/14—The ring being saturated

Definitions

  • the present invention relates to polyhydroxylated aminocyclohexane compounds and their use for the treatment of lysosomal diseases such as Gaucher's disease.
  • the method of synthesis of said compounds is described in the present invention.
  • Sphingolipids are complex lipids derived from sphingosine, an unsaturated alcohol of 18 carbons, which are very abundant in biological membranes and some are precursors of compounds involved in cell signaling processes. In some of the lysosomal diseases, the accumulation of sphingolipids occurs, because the enzymes that hydrolyse these molecules have mutations that impede their proper cellular function. Gaucher's disease is one of these diseases classified as üsosomal storage disorders, characterized by the accumulation of the glucositeeramide sphincnoptide (GlcCer) in the Iisosomes.
  • GlcCer glucositeeramide sphincnoptide
  • the disease is caused by the deficient activity of the enzyme glucocerebrosidase, a beta * glucosidase that hydrolyzes GicCer into glucose and ceramide, because said enzyme has several mutated forms.
  • the cellular levels of the enzyme mutated and folded incorrectly are abnormally low due to its premature degradation by specific endoproteases in the endoplasmic reticulum.
  • pharmacological chaperones which are competitive inhibitors of the target enzyme that assist in the correct folding and localization of the defective protein, at sub-inhibitory concentrations, has become a very active research field (Fan, J .-Q. Trends Pharmacoi Sci. 2003, 24, 355-360),
  • WO2009 / 066069 describes the use of a series of compounds, which act as pharmacological chaperones of certain enzymes folded incorrectly, for the treatment of diseases related to disorders in lysosomal storage.
  • the cyclitols obtained show an important activity on the glucocerebrosidase enzyme acting as inhibitors thereof, if either, they have shown themselves unable to act as pharmacological chaperones at low concentrations, both in cells that do not show mutations in the enzyme or in cells from Gaucher disease patients.
  • the present invention relates to a family of compounds of general formula (I) 5 by means of which better efficiencies and greater results are achieved against Gaucher's disease. Elio is due to the fact that with these compounds a greater potentiation of the enzyme ⁇ -glycocerebrosidasa (enzyme directly related to Gaucher's disease) in iinfoblasts is achieved, compared to compounds already described in the State of the Art, obtaining very promising results at very low concentrations () M ⁇ in cellular assays, which indicates a greater activity of these new compounds with respect to those described above.
  • a first aspect of the present invention refers to a compound of general formula (I)
  • X is selected from a group -NHR 1 or a group -OR 2 ;
  • R 1 is selected from H, ak io C 1 -C 18 , a cycloalkyl or an arite group;
  • R 2 is selected from C 1 -C 18 alkyl, a cycloalkyl or an aryl group;
  • R 3 is selected from a Ct-Cia alkyl group, a cycloalkyl or an arite group. According to a preferred embodiment,
  • X is a group -NHRi
  • «R 5 is H
  • Rt is a C 1 -cia alkyl; preferably a Cs-C ⁇ j alkyl group.
  • Ri is an alkyl group it may be substituted by a cycloaiquyl or aryium group, the preferred aryne group being a phenyl.
  • Ri is a cicioalqui ⁇ o or an Aryan group.
  • X is a -OR 2 group; ⁇ is preferably selected from a C7-C1Q alkyl group, preferably a Cs-C alkyl group.
  • This alkyl group may be substituted by a cycloalkyl or by an arite group, with the preferred Aryan group being a phenyl.
  • 3 is a C1-C18 alkyl group and may be substituted by a coalkyl or an arite, preferably aryium.
  • R3 is a C1-C9 alkyl group, substituted or not by a cycloalkyl or aryium group, with the preferred Aryan group being a phenyium.
  • R 3 is a C 1 alkyl group or a C 9 alkyl group substituted or not by a cycloalkyl group or an Aryan group, the preferred aryium being a phenyl.
  • the compound of general formula (I) is selected from the following list:
  • the compound of general formula (I) is selected from:
  • the compound of general formula (i) uses as a medicament.
  • a second aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition, which comprises a compound of general formula (I) or its salts, solvates or prodrugs, together with one or more pharmaceutically acceptable excipients and at least one pharmaceutically acceptable carrier, adjuvant and / or vehicle.
  • the pharmaceutical composition further comprises one or more active ingredients.
  • the pharmaceutical composition is presented in a form adapted to parenteral, orai, sublingual, nasal, intrathecal, bronchial, lymphatic, rectal, transdermal or inhaled administration.
  • a third aspect of the present invention relates to the use of the compound of general formula (i) or of the pharmaceutical composition for the preparation of a medicament.
  • the use as a medicament of the compound of the general formula (!) Or of the pharmaceutical composition comprising it is for the treatment and / or prevention of a disease related to üsosoma ⁇ -type disorders.
  • the medicament is used for the treatment and / or prevention of Gaucher's disease.
  • the medicament is presented in a form adapted to parentera ⁇ , oral, sublingual, nasal, intrathecal, bronchial, lymphatic, rectal, transdermal or inhaled administration.
  • a fourth aspect of the present invention relates to a method of synthesis of the compound of general formula (i), which comprises the transformation of a compound of general formula (A) into the compound of general formula 0);
  • Z is selected from a group -OH, -N 3 or a group NR 4 R 5
  • X is selected from a group -NHF or a group -OR2;
  • Ri is selected from H, C 1 -C 18 alkyl, or a saturated or unsaturated cycloaiqual of 4 to 8 links;
  • R2 is selected from C 1 -C 18 alkyl or a saturated or unsaturated cycloalkyl of 4 to 8 links;
  • F ⁇ is selected from a C1-C18 akyl group or a saturated or unsaturated cycloaiquyl of 4 to 8 links.
  • FU and Rg are the same or different from each other and are selected from H »alkyl CrCie, a saturated or unsaturated cycloaiquyl of 4 to 8 links or a CO-OFk group where Re is selected from, by ryl, C 1 -C, 8 or a saturated or unsaturated cycloaiquyl of 1 to 4 links.
  • aldehyde refers in the present invention to apathetic, linear or branched chains, having 1 to 18 carbon atoms, for example, methyl, ethyl, n-propyl ( ⁇ -propyl, n- butyio, tert-butyl, sec-butyl, n-pentiium, etc.
  • the alkyl radicals may be optionally substituted by one or more substituents such as halogen, hydroxy, azide, carboxylic acid or a substituted or unsubstituted group selected from amine, amido, carboxylic ester, ether, thioi, acylamino or carboxamido, alkoxid, thiol, amino, aciamine, cyano, carboxylate, carboxamide, carboxy ester, arite or heteroanlo or combinations of these groups
  • the alkyl group is substituted, it is preferably by one or several amine, amide or ether groups, which in turn may or may not be substituted by alkyl, amide, cycloafc lo or ethers groups and these, in turn, may also be substituted or not.
  • substituents such as halogen, hydroxy, azide, carboxylic acid or a substituted or unsubstituted group selected from amine, amido, carboxylic ester, ether, thio
  • Aryan refers, in the present invention, to single or multiple aromatic rings, having between 5 and 18 links in which a proton has been removed from the ring.
  • the aryl group has 5 to 7 carbon atoms, even more preferably it is a phenyl.
  • the arite groups are for example, but not limited to phenyl, naphthyl, diphenium, indenyl, phenanthryl or anthracil.
  • Aryan radicals may be optionally substituted by one or more substituents.
  • salts preferably pharmaceutically acceptable or in substantially pure form.
  • pharmaceutically acceptable salt is meant, among other things, compounds that have a pharmaceutically acceptable level of purity except for pharmaceutical additives normally considered as such as digesters, vehicles and that do not include material that is considered toxic at normal dosage levels. Purity levels for drugs they are preferably between 50% and more preferably 70% and even more preferably 90%. In a preferred embodiment of the present invention, the level of purity is about 95% pure with respect to the compound of the invention or its salts.
  • the two reactions are typically carried out in solution.
  • the salt can precipitate in soiution and can be collected by filtration or solutions of the compound of the invention and the desired acid or base can be recovered, as appropriate.
  • the sai can be precipitated from a solution and collected by filtration or can be recovered by evaporation of the solvent. The degree of ionization in the sai can vary between completely ionized to almost non-ionized.
  • Salt by the addition of pharmaceutically acceptable acids refers to those salts that retain the biological effectiveness and properties of free bases, which are not undesirable either biologically or otherwise, and which are formed with inorganic acids such as, but not limited to , hydrochloric acid, hydrobromic acid, suifuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like, and organic acids such as, but not limited to, acetic acid, 2,2-dichloroacetic acid, adipic acid »alginic acid, ascorbic acid, aspartic acid, benzensulfonic acid, benzoic acid, 4-acetamidobenzoic acid, canfonic acid, camphor-10-suifonic acid, capric acid, caproic acid, capnltco acid, carbonic acid, cinnamic acid, citric acid, cyclic acid, dodecyanitic acid, ethan-1 acid, 2 phonic acid, ethanesulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid * fumaric acid
  • uric acid maleic acid, ouric acid, cerotic acid, oxalic acid, palmitic acid, pamoic acid, proptonic acid, pyroglutamic acid, pyruvic acid, salicylic acid, 4- aminosalicylic acid, sebacic acid, stearic acid, succinic acid, tartaric acid , thioic acid, p-toiuensu phonic acid, trifiuoroacetic acid, undecylenic acid, and the like.
  • “Pharmaceutically acceptable base addition salt” refers to those salts that retain the biological effectiveness and properties of free acids, which are not undesirable either biologically or otherwise. These salts are prepared from the addition of an inorganic base or an organic base to the free acid. Salts derived from inorganic bases include, but are not limited to, sodium, potassium, lithium, ammonium, calcium, magnesium, iron, 2inc, copper, manganese, aluminum and the like safes.
  • Salts derived from organic bases include, but are not limited to, salts of primary, secondary and tertiary amines, substituted amines that include natural substituted amines, cyclic amines and basic ion exchange resins, such as ammonia, isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethiamine, tripropylamine, diethanolamine, ethanolamine, deanol, 2- methiaminoethane !, 2 * dietiyaminoetanoi, dicyclohexylamine, lysine, arginine, hysididine, caffeine, procalna, hydrabamine, coyin, betaine, benetamine, benzathine, ethenediamine, thiaminemine, thycosine tromethamine, glucosalimine, thycosineamine, thycosineamine, glucosalbumin , pu quarrels, piperazine
  • Figure 1 Inhibition (%) of cyclosols 1-5, on human ⁇ -glucocerebiOsidase in fibroblasts after 24h Incubation at different concentrations of inhibitor.
  • cyclosols described in this invention include aminocyclitols with an aicoxy group (1-6) and cyclols with two alkoxy groups (7):
  • the precursor of the sky! 7 was obtained by alqutlacióón dei diol 23, prepared according to Luchetti, G. et al, (Luchetti, G. et al. Synthesis 2008, 19, 3142-3147), with nonyl iodide ⁇ scheme 2).
  • Example 2 The a2idocyclylt described in Example 2 is subjected to reduction by an analogous procedure described in Example 5 and the product is obtained in a yield of 72%.
  • Example 3 The azidocycitol described in Example 3 is subjected to reduction by an analogous procedure to that detailed in Example 5 and the product is obtained in 85% yield.
  • [a] »-31.2 (c 1.0, CHCl3); IR (film): ⁇ »3089, 3066, 3033, 2921, 2854, 1496, 1454, 1362, 1090, 1071, 1028, 735, 696 cm; ⁇ NMR ( ⁇ , 500 MHz, CDCI3): 2.48 (d, 1H, 9.4 Hz), 3.43-3.50 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.71-3.75 (m, 1H), 3.96 (t, 1 H, J «9.3 Hz), 4.61-4.93 (m, 8H), 7.24-7.35 (m, 20H); t3 C NMR ( ⁇ , 100 MHz, CDCI3): 54.3, 61.8, 73.1, 75.7, 75.9, 76.0, 79.9, 82.3, 82.9, 83.3, 8
  • Example 10 Preparation of (1 2S, 3 4f?, 5S, 6) -2,3,4,5-tetrakis ⁇ encyloxy) -6-methoxy-A ⁇ nonyll dohexylamine (19).
  • a solution of amynocycite 14, prepared according to the procedure described in Efempto 5, is treated with nonanal according to the reductive amination procedure detailed in Example 9.
  • the crude product is purified by column chromatography using as eluent a mixture of hexane. / acetate 2: 1 and the product is obtained with a yield of 73%.
  • a dissolution of the amino acid 15, prepared according to the procedure described in Example 6, is treated with nonanal according to the reductive aminadon procedure detailed in Example 9.
  • the crude product is purified by column chromatography using a hexane / ethyl acetate polarity mixture. increasing as an eluent (from 20: 1 to 6: 1) and the product is obtained with a yield of 81%.
  • the crude product is purified by column chromatography using a hexane / acetate mixture. of ethyl of increasing polarity as eluent (from 20: 1 to 5: 1) and the product is obtained in 80% yield.
  • the crude product is purified by column chromatography using a hexane / ethyl acetate mixture of increasing polarity as an edentifier (from 20: 1 to 5: 1) and the product is obtained in a yield of 75% [a] -18.4 (c 1.0, CHCl 3 );
  • H NMR (6, 500 MHz, CD 3 COCD 3 ): 0.85-0.90 (m, 6H), 1.20-1.39 (m, 24H), 1.39-1.51 (m, 2H), 1.57-1.63 (m, 2H), 2.50-2.70 (m, 2H), 2.7
  • Example 14 Preparation of (IS ⁇ ⁇ ⁇ f ⁇ ⁇ SS ⁇ f ⁇ J-l ⁇ - tetrakis ⁇ b ncilo ⁇ ) - 5,6-dinonifoxiciciohexane (24). Following the procedure of! Example 1, from diol 23, prepared according to G. Luchett ⁇ et al. (Luchett ⁇ , G. et al.
  • Example 16 Preparation of the hydrochloride of (1 S, 2 / ?, 3S, 4f? S 5f1,6S ⁇ -5-methoxy-6- ⁇ noniiamino) cick) hexane-, 2,3,4-tetraol (2).
  • Example 19 Preparation of the hydrochloride of ⁇ i S, 2R, 3SAR, 5S, 6S) ⁇ 5-me ⁇ ox ⁇ ⁇ e- (nonylamino) cfclohexane-1, 2,3,4-tetraol (5).
  • Example 20 Preparation of the hydrochloride of (1 f1, 2S, 3f?, 4S, 5S ( 6S -5- (nonlamino) -6- (nont! Oxy) cyclohexane-1, 2,3,4-tetraol (6 ).
  • Example 23 Inhibitory activity of some of the compounds on human B-gicocorebrebidasidase in fibroblasts
  • fibroblasts were incubated for 24 hours in the absence or presence of 50 ⁇ inhibitors and an "intact enzyme assay" described by Sawkar et al. (Sawkar, AR; Cheng, W, C; Beutler, E; Wong, CH; Ba ⁇ ch, WE; Kelly, JW Proc. Nati Acad Sci.
  • ⁇ -glucocerebrosidase The activities of ⁇ -glucocerebrosidase were determined in Cellular Used after incubating the lymphoblasts in the presence or absence of increasing concentrations of compounds 1-6 for 3 days in 12-well plates. After washing the pei ⁇ et with PBS, it was resuspended in water and lysed by sounding.
  • Table 4 shows the concentrations of the compounds at which a greater increase in activity on ⁇ -glucocerebrosidase was observed in lymphoblasts of Gaucher patients with N370S or L444P mutations.
  • the ctcütotes tested demonstrated a significant impact on the potentiation of enzymatic activity, especially against the N370S mutation.
  • the activity of ⁇ -giucocerebrosidasa in lysates obtained from lymphoblasts of Gaucher patients with N370S mutations was increased up to 2.0 times in e! most favorable case (compounds 5 and 6). However, a slight increase in residual activity was observed up to 1.5 times for the L444P mutation in the most favorable case (compound 2).
  • the compounds increased the activity of ia ⁇ -giucocerebrosidase more than 1.4 and 1.2 times at some concentration tested against the N370S and L444P mutations, respectively.

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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos aminociclohexanos polihidroxilados y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales tales como la enfermedad de Gaucher. Además en la presente invención se describe el procedimiento de síntesis de dichos compuestos.

Description

Aminociclohexanos polihidroxilados y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales.
La presente invención se refiere a compuestos amínociclohexanos polihidroxilados y su uso para el tratamiento de enfermedades lisosomales tales como la enfermedad de Gaucher. Además en ia presente invención se describe el procedimiento de síntesis de dichos compuestos. ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR
Las enfermedades causadas por desórdenes de almacenaje i ¡soso mal, son un tipo de enfermedades raras congénitas, causadas por desórdenes metabólicos que provocan que determinados lípídos se acaben acumulando en los íisosomas. Los síntomas de estas enfermedades, varían dependiendo del tipo de desorden, aunque se manifiestan ya en ios primeros meses o años de vida de ios enfermos, que suelen morir a una edad temprana. Entre ios síntomas habituales, destacan retraso en ei desarrollo, dlficuítad en ios movimientos, apoplejía, demencia, sordera, ceguera, disfunciones en órganos (hígado, corazón, pulmón etc.) y crecimiento óseo anormal.
Los esfíngolipidos, son iípidos complejos derivados de la esfingosina, un alcohol insaturado de 18 carbonos, que son muy abundantes en las membranas biológicas y algunos son precursores de compuestos implicados en procesos de señalización celular. En algunas de las enfermedades lisosomales se produce ia acumulación de esfingolípidos, debido a que las enzimas que hidrolizan estas moléculas presentan mutaciones que impiden su correcta función celular. La enfermedad de Gaucher es una de estas enfermedades clasificadas como desórdenes de almacenaje üsosomal, caracterizada por la acumulación dei esfíngolíptdo glucositeeramida (GlcCer) en los Iisosomas. La enfermedad es causada por la actividad deficiente de ia enzima glucocerebrosidasa, una beta* glucosidasa que hidroliza GicCer en glucosa y ceramída, debido a que dicha enzima presenta varías formas mutadas. Los niveles celulares de la enzima mutada y plegada incorrectamente, son anormalmente bajos debido a su degradación prematura por acción de endoproteasas específicas en el retículo endoplásmieo. Durante los últimos años se han desarrollado varias estrategias terapéuticas enfocadas a la enfermedad de Gaucher. Entre ellas, el uso de chaperonas farmacológicas, que son inhibidores competitivos de la enzima diana que asisten el plegado y localización correctos de !a proteína defectuosa, a concentraciones sub-inhíbítorias, ha iiegado a ser un campo de investigación muy activo (Fan, J.-Q. Trends Pharmacoi Sci. 2003, 24, 355-360),
El documento WO2009/066069, describe el uso de una serie de compuestos, que actúan como chaperonas farmacológicas de ciertas enzimas plegadas incorrectamente, para el tratamiento de enfermedades relacionadas con desórdenes en el almacenaje lisosomal.
Durante ios últimos años, se ha estado trabajando en ei desarrollo de nuevos aminocclitoles con apiicabidad potencial como chaperonas farmacológicas de ia enzima giucosiícerebrosldasa (Egido-Gabás, .; Serrano, P.; Casas, J.; Liebaria, A.; Delgado, A. Org. Biomol. Chem. 2005, 3, 1195-1201 y Egido- Gabás, L; Canaís, D.; Casas, J.; Liebaria, A.; Delgado, A., Che Me Chem 2007, _?, 992-994), Sin embargo, la expioración de ia diversidad química mediante la funcionalízacíón dei núcleo de aminociciitoi ha presentado ciertas ¡imitaciones (Serrano, P ; Casas, J.; Zueco, .; Emeric, G.; Egido-Gabás, M.; Liebaria, A.; Delgado, A, J. Comb, Chem 2007, 9, 43-52). Los resultados más prometedores surgen de la apertura regio- y este re o se lectiva del conduritoi B epóxído con una serie de aminas alifáticas con diferente longitud de cadena. La presencia de un anillo de triazoi en ia cadena lateral {Díaz, L.; Bujons, J.; Casas, J.; Liebaria, A.; Delgado, A. J. Med. Chem. 2010, 53, 5248-5255) produce un incremento en ia potencia de ios inhibidores.
Hasta el momento, los ciclitoles obtenidos muestran una importante actividad sobre el enzima glucocerebrosidasa actuando como inhibidores del mismo, si bien se han mostrado incapaces de actuar como chaperonas farmacológicas a bajas concentraciones,, tanto en células que no presentan mutaciones en el enzima como en células procedentes de pacientes de la enfermedad de Gaucher.
Teniendo en cuenta que tos desórdenes en el almacenaje lísosomal están causados por el incorrecto piegamiento o localización íntracelular de las enzimas implicadas en el metabolismo de ciertos sustratos como glicolípidos y giicoproteínas, sería deseable obtener compuestos que actuaran como chaperonas farmacológicas y que fueran capaces de conseguir que estas enzimas se plegaran y localizaran correctamente, recuperando así su funcionalidad y evitando la acumulación anormal de estos sustratos en los lisosomas. Un problema general que existe en el desarrollo de chaperonas farmacológicas, es que los compuestos obtenidos hasta el momento no poseen potencia suficiente para incrementar la actividad enzimática en células en cultivo, y por tanto, se deben dar a dosis muy altas con lo que se reduce la ventana terapéutica entre la recuperación funcional y la inhibición del enzima. La necesidad de utilizar altas concentraciones de chaperonas farmacológicas puede además inducir problemas de toxicidad y selectividad además de aumentar las actividades inespecfficas no deseadas,
Asimismo, al unirse estos compuestos en el centro activo del enzima, la recuperación funcional de glucocerebrosídasas mutadas en posiciones cercanas al centro activo de la enzima (tales como la N370S) es más probable, mientras que las mutaciones de aminoácidos lejanos al centro activo (tales como la L444F) son mas insensibles a los compuestos. Seria por tanto deseable obtener nuevos compuestos más potentes y selectivos en ensayos celulares, que actuaran a concentraciones menores, de manera selectiva y que fueran activos sobre mutaciones resistentes al rescate funcional de ia actividad enzimática mediante chaperonas farmacológicas, DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a una familia de compuestos de fórmula general (I)5 mediante tos cuales se consiguen mejores eficiencias y mayores resultados frente a ía enfermedad de Gaucher. Elio es debido a que con estos compuestos se consigue una mayor potenciación de ia enzima β- gíucocerebrosídasa (enzima directamente relacionada con la enfermedad de Gaucher) en iinfoblastos, frente a compuestos ya descritos en el Estado de la Técnica llegándose a obtener resultados muy prometedores a concentraciones muy bajas ()M} en ensayos celulares, lo cual indica una mayor actividad de estos nuevos compuestos respecto a ios descritos anteriormente.
Por io tanto un primer aspecto de ia presente invención se refiere a un compuesto de fórmula general (I)
Figure imgf000005_0001
o cualquiera de sus sales, isómeros o soivatos,
donde
X se selecciona entre un grupo -NHR1 o un grupo -OR2;
Y es un grupo -OR3;
R1 se selecciona entre H, ak io C1-C18, un cicloalquilo o un grupo arito;
R2 se selecciona entre alquilo C1-C18, un cicloalquilo o un grupo arilo;
R3 se selecciona entre un grupo alquilo Ct-Cia, un cicloalquilo o un grupo arito. Según una realización preferida,
X es un grupo -NHRi ;
De manera preferida» R5 es H;
Según otra realización preferida, Rt es un grupo alquilo C1-Cia; preferiblemente un grupo alquilo Cs-C<j.
De manera preferida, cuando Ri es un grupo alquilo puede estar sustituido por un grupo cicloaiquilo o ariio, siendo el grupo ariio preferido un fenilo.
Según otra realización preferida, Ri es un cicioalquiío o un grupo ariio.
En otra realización preferida, X es un grupo -OR2; な se selecciona entre un grupo alquilo C7-C1Q preferiblemente un grupo alquilo Cs-C», Este grupo alquilo puede estar sustituido por un cicioalquiío o por un grupo arito, siendo ei grupo ariio preferido un fenilo. En una realización preferida, 3 es un grupo alquilo C1-C18 pudíendo estar sustituido por un cJoalquiio o un arito, preferiblemente ariio.
De manera preferida, R3 es un grupo alquilo C1-C9, sustituido o no por un grupo cicioalquiío o ariio, siendo ei grupo ariio preferido un feniio.
De manera aún más preferida, R3 es un grupo alquilo C1 o un grupo alquilo C9 sustituidos o no po un grupo cicioalquiío o un grupo ariio, siendo el ariio preferido un fenilo.
Según otra realización preferida, el compuesto de fórmula general (I), se selecciona de entre la siguiente lista:
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0002
o sus sales, isómeros o solvatos.
De manera preferida el compuesto de fórmula general (I), se selecciona de entre:
Figure imgf000007_0001
o sus sales, isómeros o solvatos. Según otra realización preferida, ai compuesto de fórmula general (i) usa como medicamento.
Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula general (I) o sus sales, solvatos o prodrogas, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y ai menos un transportador farmacéuticamente aceptable, adyuvante y/o vehículo.
De manera preferida, ía composición farmacéutica además comprende uno o más principios activos.
Según otra realización preferida, ia composición farmacéutica se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral, orai, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.
Un tercer aspecto de !a presente invención se refiere al uso dei compuesto de fórmula general (i) o de ía composición farmacéutica para la eiaboración de un medicamento. Según una realización preferida, ei uso como medicamento del compuesto de fórmula general (!) o de ía composición farmacéutica que lo comprende es para eí tratamiento y/o prevención de una enfermedad relacionada con trastornos de tipo üsosomaí. De manera preferida el medicamento se usa para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Gaucher.
Además también de manera preferida, el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración parenteraí, oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.
Un cuarto aspecto de ía presente invención se refiere a un procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (i), que comprende la transformación de un compuesto de fórmula general (A) en el compuesto de fórmula general 0);
Figure imgf000009_0001
o cualquiera de sus sales, isómeros o solvatos,
donde;
Z se selecciona entre un grupo -OH, -N3 o un grupo NR4R5
X se selecciona entre un grupo -NHF o un grupo -OR2;
Y es un grupo ~0な;
Ri se selecciona entre H, alquilo C1-C18 o un cícloaíquüo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones;
R2 se selecciona entre alquilo C1-C18 o un cictoalquíio saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones; y
Fな se selecciona entre un grupo aiquíio C1-C18 o un cicioaiquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones.
FU y Rg son iguales o diferentes entre sí y se seleccionan entre H» alquil CrCie, un cicioaiquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones o un grupo CO-OFk donde Re se selecciona entre, a rilo, aiquíio C1-C,8 o un cicioaiquilo saturado o insaturado de 1 a 4 eslabones.
De manera preferida, en ei procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (l)t cuando Z es un grupo -OH, se lleva a cabo una reacción de alquilación sobre ios grupos hidroxilo desprotegídos.
Según otra realización preferida, cuando Z es un grupo -Na, se llevan a cabo una etapa de reducción del grupo azido a amina y una aminación reductora con un aldehido seleccionado entre C7H1SCHO ó C8H ! 7CHO< En la presente invención el término "alquilo" se refiere en ía presente invención a cadenas apáticas, lineales o ramificadas, que tienen de 1 a 18 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo( í-propílo, n-butiio, tert-butilo, sec- butilo, n-pentiio, etc. Los radicales alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes tales como halógeno, hídroxiio, azida, ácido carboxílico o un grupo sustituido o no sustituido seleccionado de entre amíno, amido, éster carboxílico, éter, tíoí, acilamino o carboxamido, alcóxído, tíol, amino, aciíamíno, ciano, carboxilato, carboxamida, carboxiéster, arito o heteroanlo o combinaciones de estos grupos. Cuando el grupo alquilo está sustituido, lo está preferentemente por uno o varios grupos amina, amida o éter, que a su vez pueden estar o no sustituidos por grupos alquilo, amida, cicloafc lo o éteres y estos a su vez, pueden estar igualmente sustituidos o no. El término cícloafcjuílo se refiere a un radical estable monocíciico o bicíclico de 3 a 10 miembros, que está saturado o parcialmente saturado, y que sólo consiste en átomos de carbono e hidrógeno, tal como ciciohexilo o adamantilo.
El término ariío se refiere, en la presente invención, a anillos aromáticos sencillos o múltiples, que tienen de entre 5 a 18 eslabones en ios que se ha eliminado un protón del anillo. Preferentemente el grupo arílo tiene de 5 a 7 átomos de carbono, aún más preferiblemente es un fenilo. Los grupos arito son por ejemplo, pero sin limitarse a fenilo, naftilo, difeniio, indenilo, fenantrilo o antracilo. Los radicales ariío pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más sustituyentes.
Por compuestos de ia invención, también nos referimos a sus sales, preferiblemente aceptables farmacéuticamente o de forma sustancialmente pura. Por sal farmacéuticamente aceptable se entiende, entre otras cosas, compuestos que tengan un nivel de pureza aceptable farmacéuticamente exceptuando aditivos farmacéuticos normalmente considerados como tales como diiuyentes, vehículos y que no incluyan material que se considere tóxico en niveles de dosificación normales. Los niveles de pureza para ios fármacos son preferiblemente entre un 50% y más preferiblemente un 70% y aún más preferentemente el 90%. En una realización preferente de la presente invención eí nivel de pureza está alrededor del 95% de pureza respecto ai compuesto de ia invención o sus sales.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de de la invención se puede preparar mediante uno o más de estos procedimientos:
(i) hacer reaccionar eí compuesto de la invención con el ácido deseado (Ü) convertir una sal del compuesto de la invención en otro, mediante reacción con un ácido apropiado o mediante una columna de intercambio iónica adecuada.
Las dos reacciones se llevan a cabo típicamente en solución. La sal puede precipitar en soiución y se puede recoger mediante filtración o se puede recuperar soluciones dei compuesto de la invención y eí ácido o base deseado, según sea apropiado. La sai puede precipitar de una solución y recogerse mediante filtración o se puede recuperar mediante evaporación del disolvente. El grado de ionización en la sai puede variar entre completamente ionizado a casi no ionizado.
Sal por adición de ácidos farmacéuticamente aceptabie, se refiere a aquellas sales que retienen la efectividad biológica y las propiedades de las bases libres, que no son indeseables ni biológicamente ni de otra manera, y que se forman con ácidos inorgánicos taies como, pero sin limitación, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido suifúrico, acido nítrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como, pero sin limitación, ácido acético, ácido 2,2- dícioroacético, ácido adípico» ácido algínico, ácido ascórbíco, ácido aspártico, ácido benzensulfónico, ácido benzoico, ácido 4-acetamídobenzoico, ácido canfónico, ácido canfor-10-suifónico, ácido cáprico, ácido caproico, ácido capnltco, ácido carbónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido ciciámico, ácido dodeciísiífúñco, ácido etan-1 ,2disu!fónico, ácido etansulfóntco, ácido 2- hidroxietansulfónico* ácido fumárico, ácido gaiactárico, ácido gentísico, ácido glucoheptóníco, ácido giucónico, ácido giucurónico, ácido giutámico, ácido 2- oxo-Qlutáfico, ácido glicerofosfórico, ácido glicólico, ácido hipúríco, ácido isobutírico, ácido láctico, ácido iactobióníco. ácido íá úrico, ácido maleico, ácido oíeico, ácido cerótico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido pamoico, ácido proptónico, ácido píroglutámico, ácido pírúvico, ácido salicílico, ácido 4- aminosalícílico, ácido sebácíco, ácido esteárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido tio ánico, ácido p-toiuensu ¡fónico, ácido trifiuoroacético, ácido undecilénico, y similares.
"Sal por adición de bases farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que retienen la efectividad biológica y las propiedades de los ácidos libres, que no son indeseables ni biológicamente ni de otra manera. Estas sales se preparan a partir de la adición de una base inorgánica o de una base orgánica al ácido libre. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, pero sin limitación, safes de sodio, de potasio, de litio, de amonio, de calcio, de magnesio, de hierro, de 2ínc, de cobre, de manganeso, de aluminio y similares. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero sin limitación, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de Intercambio iónico, tales como amoníaco, isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietiiamina, tripropilamina, dietanolamína, etanolamína, deanol, 2- metiiaminoetano!, 2*díetiíaminoetanoí, diciciohexilamina, lisina, argínina, hístídína, cafeína, procalna, hidrabamína, coíina, betaína, benetamína, benzatina, etitendiamína, glucosalína, metilglucamina, teobromina, trietanoiamína, trometamína, pu riñas, piperazina, N-etilpíperidina, resinas de poiiamina y similares.
A lo largo de ia descripción y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para tos expertos en ia materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de ia descripción y en parte de la práctica de ia invención. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de ia presente invención. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1, Inhibición (%) de ios ciclitoles 1-5, sobre la β-glucocerebiOsidasa humana en fibroblastos después de 24h de Incubación a distintas concentraciones de inhibidor.
Figura 2. Inhibición (%} dei ciciito! 6 sobre !a β-g!ucocerebrosidasa humana en fibroblastos después de 24h de incubación a distintas concentraciones de inhibidor.
EJEMPLOS
A continuación se ilustra ía invención medíante unos ensayos realizados, que pone de manifiesto ia especificidad y efectividad de ios compuestos de fórmula general (i) de ía presente invención.
A. Síntesis de ios compuestos de la Invención
Los ciclitoles descritos en esta invención incíuyen aminociclitoles con un grupo aicoxi (1-6) y ciclitoles con dos grupos alcoxi (7):
Figure imgf000013_0001
Para la preparación de los aminociclitoles con un grupo aicoxi (1-6), se sigue la secuencia de reacción descrita en ei esquema 1. Para ello, se protegió ei grupo hidroxílo de los azidoaicohoies 8 y 9, preparados según P. González {Gonzátez-Buines, P. y coi. en Cartwhydr. Res. 2007, 342, 1947-1952), con un grupo alquilo y a continuación, ia reducción del grupo azido a amina proporcionó ias aminas 14-17. Por aminación reductora de estas aminas con ei aldehido correspondiente se obtuvieron ios precursores 1&-22.
Figure imgf000014_0001
Esquema 1. Reactivos y condiciones: a) Ref.: González-Bulnes, P. y col. {González-Bulnes, P. y col, Carbohydr, Res. 2007, 342, 1947-1952) y Serrano, P. y col. {Serrano, P. y col. J. Org. Chem. 2005, 70 (20), 7829-7840); b) NaH, Mel o C9H19I, DMF, 0 aC, 71 -93%; c) UAIH4, THF, 72-95%; d) C7H15CHO o <なHITCHO, NaBHgCN, AcOH (cat.), MeOH, 73-81%; e) Pd/C, THF, HC! cat, H2 (2 atm), 89-94%.
El precursor del cielito! 7 se obtuvo mediante la alqutlacíón dei diol 23, preparado según Luchetti, G. y col, (Luchetti, G. y col. Synthesis 2008, 19, 3142-3147), con yoduro de nonilo {esquema 2).
La hidrogenóos en presencia de! catalizador de Pd/C de los precursores 13, 18-22 y 24 permitió la obtención de los requeridos ciciitoles 1-7 después de la eliminación de los grupos bencilo.
Figure imgf000015_0001
Esquema 2. Reactivos y condiciones: a) NaH, CeHigl, DMF, 78%; b) Pd/C, THF, Hs (2 atm), 89%. Se realizó la caracterización estructural de los compuestos preparados y usados en esta invención mediante espectrometría de masas, rotación óptica y espectroscopia de R N de 'Ή y 13C.
Ejemplo 1. Preparación de ^ S^R^RAS^R^Rf-d-aziáo^ ,2,3,4- tetrakis{bendloxi)-6-{metoxi)ác{ohexano {10}.
A una disolución de! azidoalcohol 8 (076 g, 1.35 mmol), preparado según P. González {Gonzáiez-Bulnes, P. y col. en Carbohydr. Res. 2007, 342, 1947- 1952), en DMF (7 mi) se añade NaH {65 mg, 1.6 mmol) a 0 SC y se deja en agitación durante 15 mín. A continuación, se añade yoduro de metilo (2.7 mmol) y la disolución resultante se mantiene en agitación a 0 BC durante 30 min. Pasado este tiempo, se añade agua (20 mL) y se extrae la fase acuosa con éter (3 x 20 mL). Los extractos combinados se lavan con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se eliminan ios disolventes a presión reducida. El crudo obtenido se purifica medíante cromatograf ta en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente (de 20:1 a 6:1) como eluyente y se obtiene el producto con un rendimiento del 93%. [a] +6.0 (c 0.5, CHCl3); IR (film): υ «. 3090, 3066,
3026, 2922, 2857, 2106, 1499, 1454, 1360, 1137, 1064, 1028, 735, 697 cm-1; 1H RMN (δ, 500 MHz, CDC!3): 3.08 (t, 1 H, J =9.6 Hz), 3.32 (t, 1 H, J =9.6 Hz), 3.42 (í, 1 H, J«10.0 Hz), 3.45-3.52 (m, 2H), 3.57 (t, 1 H, J =9.3 Hz), 3.70 (s, 3H), 4.82-4.93 (m, 8H), 7.26-7.35 (m, 20H): 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 61.5, 66.7, 76.08, 76.10, 76,14, 81.0, 82.5, 83.3, 83.4 (2), 127.9-128.6, 137.9, 138.3, 138.4. HR S calculado para C35H37N30sNa: 602.2631 [M+Na]*. Encontrado: 602.2629.
Ejemplo 2. Preparación de (1 $r2R,3RA$$R,&Rl-5~azido~ 1 ,2,3,4- t8írakis{ enciloxí)-6-{noniloxi)ciclohexano (11).
Siguiendo el procedimiento dei Ejempio 1 , a partir de! azidoalcoho! 8 e yoduro de nonílo se obtiene el producto con un rendimiento de! 93%. [a] +9.1 (c 1.0, CHCÍ3); iR {film}: u « 3089, 3064, 3031 » 2925, 2854, 2102, 1497, 1454, 1359, 1137, 1069, 1028, 733, 696 cm-1; 1H R N (5, 500 MHz, CDCÍ3): 0.89 (t, 3H, J «6.9 Hz), 1.19-1.42 {m, 12H), 1.61-1.66 (m, 2H), 3.14 (t, 1 H, J =9.4 Hz), 3.30 (t, 1 H, J =9.7 Hz), 3.38-3.42 (m, 1H), 3.47-3.50 (m, 2H), 3.55 (t, 1H, J =9.2 Hz), 3.74-3.86 (m, 2H), 4.82-4.89 (m, 6H), 7.25-7.35 (m, 20H); 13C RMN {δ, 100 Hz, CDCIs): 14.3, 22.8, 26.2, 29.4, 29.69, 29.71 , 30.5, 32.0, 67.0, 74.4, 76.07, 76.09, 76.15, 81.1 , 81.5, 82.6, 83.3, 83.4, 127.8-128.6, 137.9, 138.39, 138.40. HRMS calculado para C^H^NoOs a: 714.3883 [M+Na]. Encontrado: 714.3901.
Ejemplo 3. Preparación de (1 S,2f1 ,3f1 ,4S,5fí,6S)-5-azído-1 ,2,3,4- tetrakís(benciloxi)-6-{metoxí)cicjohexano (12)
Siguiendo el procedimiento del Ejempio 1 , a partir de! azidoalcoho! 9, preparado según P. González (González-Buines, P. y col. en Carbohydr. Res. 2007, 342, 1947-1952), e yoduro de metilo se obtiene e! producto con un rendimiento dei 71%. [al» +5.2 (c 1.0, CHCl3); IR (film): u - 3090, 3031 , 2925, 2854, 2102, 1497, 1453, 1361 , 1069, 1028, 735, 696 cm- ; 1H RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 3.23 (dd, 1 H, J=10.4, 2.1 Hz), 3.44 (dd, 1 H, J =9.8, 2.1 Hz), 3.49- 3.55 (m, 2H), 3 JO (s, 3H), 3.98 (t, 1 H, J -9.8 Hz), 4.01 (t, 1 H, J -9.6 Hz), 4.70- 4.93 (m, 8H), 7.30-7.35 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCb): 61.6, 63.4, 73.3, 75.8, 75.9, 76.2, 78.8, 80.3, 81.4, 81.6, 84.4, 127.7-128.6, 138.03, 138.06, 138.61, 138.65. HRMS calculado para <¼βΗ3τΝ30βΝβ: 602.2631 [M+Na]*. Encontrado: 602.2625. Ejemplo 4, Preparación de {1 S,2R,3R,4S,5Rt6S)-5-azida-\ ,2,3,4- tetraki5{benriioxi)~6-{noníioxi)ciclohexano (13).
S guiendo el procedimiento del Ejemplo 1 , a partir de! azidoalcohol 9 e yodura de nonilo se obtiene &l producto con un rendimiento del 90%. [a] « +7.6 (c 1.0, CHCÍ3); IR (film): υ « 3089, 3064, 3031 , 2925, 2855, 2106, 1497, 1454, 1360, 1137, 1065, 1028, 734, 697 cm'1; RMN (δ, 500 MHz, CDC!3): 0.91 (t, 3H, J =6.8 Hz), 1.08-1.44 (m, 12H), 1.46-1.70 (m, 2H), 3.17 (dd, 1 H, J -10.3, 1.9 Hz), 3.41 {dd, 1 H, J »9.8, 1.8 Hz), 3.53 (t, 1 H, J *9.2 Hz), 3.67-3.71 (m, 1 H), 3.88- 3.92 (m, 2H), 3.99-4,04 (m, 2H), 4.73-4.97 (m, 8H), 7.26-7.42 (m, 20H); 13C RMN {δ, 100 MHz, CDCÍ3): 14.3, 22.8, 26.2, 29.5, 29.6, 29.8, 30.4, 32.1 , 63.4, 73.1 , 73.9, 75.7. 76.1 , 77.1, 80.2, 81.6, 81.7, 84.5, 127.7-128.6, 138.15, 138.22, 138.56, 138.71. HR S calculado para C^HssNaOsNa: 714.3883 [M+Na]+. Encontrado: 7 4.3898.
Ejemplo 5. Preparación de (1 ?>2S,3 ?,4f?,5S>6fí)-2,3,4,5-tetrakis{bencíloxi)-6- (metoxi)ciclohexiiamína {14}.
Una disolución del azídocicíitol descrito en el Ejemplo 1 (722 mg, 1.25 mmol) en THF (10 mL} se añade lentamente sobre una suspensión de UAIH4 (85 mg, 2.25 mmol) en THF (10 mL) manteniendo la temperatura a 0 SC bajo atmósfera de argón. A continuación se agita durante 3h a temperatura ambiente y se añade una solución saturada de Na2S04 a 0 aC. La solución resultante se diluye con acetato de etilo, se seca con Na2S04, se filtra a través de Celíte y ésta se lavó varias veces con acetato de etilo. Se eliminan ios disolventes a presión reducida y se obtiene el producto con un rendimiento del 95% (655 mg, 1.18 mmol). [a] £+9.7 (c 1.0, CHCÍ3); IR (film): u « 3092, 3064, 3030, 2904,
2853, 1497, 1454, 1356, 1130, 1063, 1043, 1027, 734, 695 cm-1; 1H RMN (δ, 500 MHz, CDC ); 1.81 (br s, 2H), 2.88 (t, 1 H, J =10.0 Hz), 3.09 (t, 1 H, -9.5 Hz), 3.36 (t, 1 H, J -9.4 Hz), 3.50-3.64 (m, 3H), 3.68 (s, 3H), 4.70-5.02 (m, 8H), 7.29-7.36 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 55.6, 61.6, 75.8, 75.9, 76.0, 76.1 , 82.9, 83.5, 84.34, 84.35, 84.39, 127.8-128.7, 138.42, 138.45, 138.50, 138.55. HRMS calculado para C35H40 O5: 554.2906 [M+H]\ Encontrado: 554.2838.
Ejemplo 6, Preparación de (í R£S RAR$S fy-2&4 etrak s(bená\oñ)~6- (noniloxi}ciclohexilamina (15).
El a2idocícfltol descrito en el Ejemplo 2 se somete a reducción mediante un procedimiento análogo ai que se detaíla en el Ejemplo 5 y se obtiene el producto con un rendimiento del 72%. [ajg +7.6 (c 1.0, CHC ); IR (film): u « 3090, 3065, 3033, 2924, 2854, 1497, 1 52, 1356, 1130, 1069, 1043, 1024, 732, 696 cnr5; Ή RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 0.90 (t, 3H, J ^7.0 Hz), 1.19-1.40 (m, 12H), 1.54-1.67 (m, 2H), 1.90 {br s, 2H), 2.90 (t, 1 H, J =10.0 Hz), 3.16 (t, 1H, J =9.4 Hz), 3.35 (t, 1H, J *=9.4 Hz), 3.53-3.69 (m, 4H), 3.93-3.97 <m, 1 H), 4.71 - 5.02 (m, 8H), 7.26-7.37 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.3, 22.8, 26.3, 29.4, 29.6, 29.7, 30.6, 32.0, 55.5, 74.1, 75.85, 75.89, 76.0, 76.1 , 82.7, 83.1 , 83.6, 84.4 (2), 127.8-128.7, 138.45, 138.47, 138.53. HRMS calculado para C43H56 O5: 666.4158 [M+H]+. Encontrado: 666.4131.
Ejemplo 7. Preparación de {1 ff,2S,3R)4fí,5S,6^-2,3,4,5-tetrakís{benciloxi)-6- (metoxi)ctclohexilamina {16).
El azídocicíitol descrito en el Ejemplo 3 se somete a reducción mediante un procedimiento análogo al que se detalla en el Ejemplo 5 y se obtiene el producto con un rendimiento del 85%. [a] »-31.2 (c 1.0, CHCl3); IR (film): υ » 3089, 3066, 3033, 2921 , 2854, 1496, 1454, 1362, 1090, 1071 , 1028, 735, 696 cm ; Ή RMN (δ, 500 MHz, CDCI3): 2,48 (d, 1H, =9.4 Hz), 3.43-3.50 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.71 -3.75 (m, 1H), 3.96 (t, 1 H, J «9.3 Hz), 4.61-4.93 (m, 8H), 7.24- 7.35 (m, 20H); t3C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 54.3, 61.8, 73.1 , 75.7, 75.9, 76.0, 79.9, 82.3, 82.9, 83.3, 85.0, 127.04-128.65, 138.35, 138.67, 138.80, 138.86. HRMS calculado para CssH^ Os: 554.2906 [Μ+Η] . Encontrado: 554.2927. Ejemplo 8. Preparación de (1 fí,2S,3f?,4 ?}5S,6S)-2,3,4l5-tetrakis(bencíloxi)-6- {noniloxljciciohexíiamina (17).
Eí aztdoctclito! descrito en el Ejemplo 4 se somete a reducción mediante un procedimiento análogo al que se detalla en el Ejemplo 5 y se obtiene el producto con un rendimiento del 80%. [a] g -47.1 (c 1.0, CHC ); IR (film): u « 3080, 3060, 3033, 2924, 2854, 1497, 1454, 1362, 1090, 1069, 1024, 732, 696 crrf1; 1H RMN {5, 500 MHz, CDCIs): 0.92 (t, 3H, J =6.7 Hz), 1.24-1.33 (m, 12H), 1.50-1.63 (m, 2H), 2.46 (d, 1 H, J «9.5 Hz), 3.40-3.64 (m, 4H), 3.80-3.83 (m, 1 H), 3.98-4.07 (m, 2H), 4.67-5.04 (m, 8H), 7.24-7.35 (m, 20H); 13C RMN (β, 100 MHz, CDCI3): 14.3, 22.8, 26.3, 29.5, 29.6, 29.8, 30.6, 32.1 , 54.3, 72.9, 73.6, 75.85, 75.86, 76.0, 78.1 , 82.3, 83.0, 83.3, 85.1 , 127.6-128.7, 138.4, 138.72, 138.73, 138.9. HRMS calculado para C^H^NOs: 666.4158 [M+H)+. Encontrado: 666.4156.
Ejemplo 9. Preparación de (1 H,2S,3 ?,4fí,5S,6 ?)-2,3,4,5-tetrakis( endloxi)-6- metoxí- W-ocíilcicIohexílamina (18).
Una solución del amínocicirtoí 14 {80 mg, 0.14 mmol), descrito en el Ejemplo 5, en metano! (5 mL) se trata sucesivamente con cianoborohidruro sódico (18 mg, 0.29 mmol), ácido acético (10 μΙ_) y octanaí (25 pL, 0.16 mmol). La reacción se deja bajo atmósfera de argón y en agitación durante 4h. Pasado este tiempo, se añade agua (0.2 mL) y se evapora el disolvente. El residuo obtenido se resuspende en éter (20 mL) y se lava con agua (15 mL). La fase acuosa se extrae con éter (3 x 20 mL). Los extractos combinados se lavan con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secan sobre sulfato de magnesio y se eliminan ios disolventes a presión reducida. El crudo obtenido se purifica medíante cromatografía en columna utilizando como eluyente una mezcla de hexano/acetato 2:1 y se obtiene el producto con un rendimiento del 77%. [a) £ +7.5 (c 0.2, CHC!3); IR (film): u * 3089, 3064, 3031 , 2925, 2854, 1497, 1454, 1359, 1134, 1064, 1028, 733, 697 cm 1; 1H RMN (0, 500 MHz, CDCI3): 0.89 (t, 3H, J «7.0 Hz), 1.25-150 (m, 12H), 2.57 (t, 1 H, J -10.1 Hz), 2.73-2.81 (m, 2H), 3.16 (t, 1 H, J =9.3 Hz), 3.41 (t, 1 H, J =9.6 Hz), 3.50-3.65 (m, 3H), 3.67 (8, 3H), 4.73-5.01 (m, 8H), 7.24-7.43 (m, 20H); 13C R N (δ\ 100 Hz, CDCfe): 14.3, 22.8, 27.4, 29.36, 29.39, 29.6, 30.7, 32.0, 49.9, 61.2, 62.1 , 75.72, 75.90, 75.92, 76.0, 81.9, 83.2, 84.2, 84.4, 84.5, 127.8-128.6, 138.34, 138.47, 138.54. HR S calculado para CwHssNOs 666.4158 [M+Hf. Encontrado: 666,4221.
Ejemplo 10. Preparación de (1 2S,3 4f?,5S,6 )-2,3,4,5-tetrakis{ enciloxi)-6- metoxi-A^noníl dohexilamína (19). Una disolución deí amínociciitoí 14, preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el Efempto 5, se trata con nonanal según el procedimiento de amínación reductora detallado en eí Ejemplo 9. El producto crudo se purifica mediante cromatografía en columna utilizando como eluyente una mezcla de hexano/acetato 2:1 y se obtiene el producto con un rendimiento del 73%. [aj*+13.0 (c 0.3, CHC½); IR (film): u * 3089, 3065, 3033, 2924, 2854, 1497, 1454, 1359, 1136, 1064, 1028, 733, 697 cm'1; RMN (δ, 500 Hz, CDCI3): 0.89 (t, 3H» J=6.99 Hz), 1.22-1.44 (m, 14H), 2.55 (t, 1 H, -10.1 Hz), 2.73-2.81 (m, 2H), 3.16 (t, 1 H, J «9.2 Hz), 3.41 (t, 1 H, J «9.5 Hz), 3.49-3.61 (m, 3H), 3.65 (s, 3H), 4.73-5.00 (m, 8H), 7.28-7.35 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.3, 22.8, 27.4, 29 A 29.7, 30.7, 32.0, 49.9, 61.2, 62.1 , 75.7, 75.91, 75.93, 76.1 , 82.0, 83.2, 84.2, 84.44, 84.49, 127.8-128.7, 138.3, 138.47, 138.55. HRMS calculado para C44H58NG5: 680.43 5 [M+Hj*. Encontrado: 680.4221.
Ejemplo 11. Preparación de (1 fí,2S,3 ?)4fí,5S,6fí)-2(3,4)5-tetrakis(benciloxi)-W- nonfi-6-{noniioxi)cicíohexílamina (20).
Una disolución del aminocíclíto! 15, preparado de acuerda con el procedimiento descrito en el Ejemplo 6, se trata con nonanal según el procedimiento de aminadón reductora detallado en el Ejempio 9. El producto crudo se purifica medíante cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente como eíuyente (de 20:1 a 6:1 ) y se obtiene el producto con un rendimiento del 81%. [a]" +5.2 (c 1.0, CHCI3); IR (film): u = 3089, 3064, 3030, 2955, 2924, 2854, 1497, 1467, 1454, 1358, 1133, 1064, 1028, 735, 696 cm'1; 1 RMN (δ, 500 Hz, CDCI3): 0.90 (dt, 6H, J =6.9, 7.0 Hz), 1.22-1.45 m, 22H), 1.42-1.45 (m, 2H), 1.55-1.66 (m, 2H), 2.27-2.30 (m, 2H), 2.56 (t 1 H, J =1G.0 Hz), 2.76-2.85 (m, 2H), 3.20-3.23 (m, 1 H), 3.37-3.44 (m, 1 H), 3-51 -3.68 (m, 4H), 3.91-3.95 (m, 1 H), 4.74-4.98 (m, 8H), 7.27-7.35 (m, 20H); 13C R N (β, 100 MHz, CDCi3): 14.3, 22.8, 26.4, 27.4, 29.4, 29.5, 29.7, 30,7, 32.03, 32.05, 50.4, 62.2, 74.0, 75.7, 75.9, 76.0, 76.1, 82.2, 82.6, 83.3,
84.5 (2), 127.79-128.63, 138.4, 138.5, 138.56, 138.59. HRMS calculado para CeaH7 Oe: 792.5567 [M+H]\ Encontrado: 792.5620.
Ejemplo 12. Preparación de (1 fl,2S,3f1,4f1,5S,6S)-2,3,4,5-tetraki3(benclloxl)-6- metoxi~N-noníitódohexiíamína (21 ).
Una disolución del aminociciitoi 16, preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 7, se trata con nonanal según el procedimiento de aminación reductora detallado en ei Ejemplo 9. El producto crudo se purifica mediante cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente como eluyente (de 20:1 a 5:1 ) y se obtiene ei producto con un rendimiento del 80%. [a]» -12.9 (c 1.0, CHC ); IR (film): u « 3089, 3069, 3031 , 2955, 2921 , 2850, 1497, 1467, 1454, 1358, 1133, 1064, 1028, 735, 696 crn'1; *H RMN (6, 500 MHz, CD3COCD3): 0.88 (t, 3H, J «5.9 Hz), 1.24-1.35 (m, 12H), 1.44-1.52 (m, 2H), 2.50-2.90 (m, 3H), 3.54 (t, 1 H, J =8.7 Hz), 3.60-3.73 (m, 5H), 3.87 (t, 1 H, J =9.5 Hz), 3.99-4.01 (m. 1 H), 4.72- 4.93 (m, 8H), 7.22-7.42 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 Hz, CD3COCD3): 14.4, 23.3, 28.0, 29.9, 30.1 , 30.3, 30.4, 32.6, 48.4, 61.6, 61.7, 73.1 , 75.8, 75.9, 76.00,
82.6 (2), 83.2, 85.5, 128.0-129.1 , 139.9, 140.2, 140.3 (2). HRMS calculado para C44HS8 O5: 680.4315 [M+Hf. Encontrado: 680.4346.
Ejemplo 13. Preparación de (1 fí,2S,3fí,4fí,5S,6S)-2,3,4,5-tetrakis(bencíloxi)-A/- nonil-6-(noniloxí)ciclohexi amina (22).
Una disolución del aminocidíto! 17, preparaos de acuerdo con ei procedimiento descrito en e Ejemplo 8, se trata con nonanal según el procedimiento de aminación reducíora detallado en eí Ejemplo 9. El producto crudo se purifica medíante cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo de polaridad creciente como eíuyente (de 20:1 a 5:1 ) y se obtiene el producto con un rendimiento del 75%. [a] -18.4 (c 1 ,0, CHCl3); IR (film): u * 3088, 3062, 3029, 2955, 2924, 2854, 1497, 1467, 1454, 1362, 1133, 1088, 1070, 732, 696 cm-1; H RMN (6, 500 MHz, CD3COCD3): 0.85-0.90 (m, 6H), 1.20-1.39 (m, 24H), 1.39-1.51 (m, 2H), 1.57-1.63 (m, 2H), 2.50-2.70 (m, 2H), 2.75-2.90 (m, 1 H), 3.48 ( 1H, J -9.1 Hz), 3.56 (dd, 1 H, J =9.8, 1.5 Hz), 3.64 (t, 1 H, J «9.4 Hz), 3.71 (dt, 1 H, J -9.0, 6.4 Hz), 3.84-3.88 (m, 1 H), 3.91 (t, 1 H, J =9.5 Hz), 3.97 (dt, 1 H, J =8.9> 6.4 Hz), 4.14 (br s, 1 H), 4.71-4.94 (m, 8H), 7.22- 7.42 (m, 20H); ,3C RMN (δ, 100 MHz, CD3COCD3): 14.4, 23.34, 23.37, 27.0, 28.1 , 29,2, 29.9, 30.1 , 30.3, 30.4, 30.5, 31.2, 32.6, 32.7, 48.4, 62.0, 73.0, 73.8, 75.3, 75.9, 76.0, 82.7 (2), 83.4, 85.6, 128.0-129.0, 140.00, 140.30, 140.35, 140.45. HRMS calculado para C5Í>HMN05: 792.5567 [M+H]+. Encontrado: 792.5578.
Ejempio 14. Preparación de (I S^ñ^fí^^SS^fíJ-l ^^^-tetrakisíb ncilo í)- 5,6-dinonifoxiciciohexano (24). Siguiendo el procedimiento de! Ejemplo 1 , a partir del diol 23, preparado según G. Luchettí y col. (Luchettí, G. y col. Synt esis 2008, 19, 3142-3147), e yoduro de nonílo (10 equivalentes) se obtiene un crudo que se purifica medíante cromatografía en columna utilizando una mezcla de hexano/acetato de etilo (20:1) como eiuyente y se obtiene el producto con un rendimiento del 78%. [ajf +2.0 (c 0.7, CHC!3); IR (film): u « 3085, 3065, 3026, 2959, 2924, 2854, 1734, 1718, 1267, 1095, 1071 , 1028, 728, 668 cm 5H RMN (δ, 500 MHz, CDC ): 0.90-0.94 (m, 6H), 1.28-1.42 (m, 24H), 1.61-1.66 (m, 4H), 3.15-3.21 (m, 1 H), 3.37-3.40 (m, 1 H), 3.48 (td, 1 H, J -2.2, 9.2 Hz), 3.53-3.58 (m, 1 H), 3.61- 3.66 (m, 1 H), 3.78 (td, 2H, J =£.2, 6.5 Hz), 3.93 (d, 1H, J =2.05 Hz), 3.97 (td, 1 H, J =2.3, 9.5 Hz), 4.05 (dt, 1 H, J =2.3, 9.5 Hz), 4.75-4.97 (m, 8H), 7.30-7.42 (m, 20H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CDCI3): 14.3, 22.83, 22.84, 26.3, 26.42, 26.47, 29.52, 29.66, 29.70, 29.74, 29.8, 30.4, 30.5, 32.0, 32.1 , 70.9, 72.8, 73.5, 75.0, 75.9, 76.0, 76.1, 81.1, S1.6, 817, 81.8, 837, 127.6-128.5, 138.6, 138.97, 139.02, 139.2. HRMS calculated for C52H 206Na: 815.5227 [M+Naj+. Found; 815.5238. Ejemplo 1S. Preparación del hidrocloruro de (1 S^SS^S eS^S-metoxi-e- {octilamíno)cicíohexano-1 ,2,3,4-tetraol (1).
Una disolución del amínocidito! 18 {0.1 mmo!), preparado de acuerdo con el procedimiento descrito en e! Ejempio 9, en una mezcia de THF (3 mL) y HCl (4 gotas) se hidrogenó a 2 atm en presencia de Pd/C (50 mg, 5-15%) durante 18 h. Pasado este tiempo ía mezcla de reacción se filtró a través de Celite y ésta se lavó varías veces con meta no I. Se eliminaron los disolventes a presión reducida obteniéndose ei producto deseado con un rendimiento del 92%. [oj +8.5 (c 1.0, CH3OH); 'H RMN (δ, 500 MHz, CD3OD): 0.91 (t, 3H, J »6.9 Hz), 1.28-1.47 {m, 10H), 1.7f 1.80 (m, 2H), 3.03 (t, 1 H, J =10.8 Hz), 3.08-3.14 (m, 2H), 3.17-3.26 (m, 2H), 3.33-3.37 (m, 1 H), 3.44 (t, 1 H, ¿«8.9 Hz), 3.48-3.54 {m, 1 H), 3.67 (s, 3H); 13C RMN (δ, 100 Hz, CD3OD): 14.4, 23.7, 27.3, 27.6, 30.2 (2), 32.9, 45.8, 60.8, 61.7, 69.7, 75.3, 76.3, 77.4, 79.0. HRMS calculado para CtsHagNOs: 306.2280 [M+Hj+. Encontrado: 306.2276.
Ejemplo 16. Preparación del hidrocloruro de (1 S,2/?,3S,4f?s5f1,6S}-5-metoxi-6- {noniiamino)cick)hexano- ,2,3,4-tetraol (2).
De acuerdo con ei procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir del aminocíclítoí 19, preparado siguiendo el procedimiento descrito en ei Ejemplo 10, se obtiene eí producto 2 con un rendimiento del 94%. [α] « +10.3 (c 1.0, CH3OH); <H RMN (δ, 500 MHz, CD3OD); 0.90 (t, 3H, J =6.9 Hz), 1.31-1.43 (m, 12H), 1.70-1.75 (m, 2H), 3.03 <t, 1 H, J =10.8 Hz), 3.08-3.17 (m, 2H), 3.18-3.26 {m, 2H), 3.34-3.37 (m, 1H), 3.44 (t, 1 H, J 8.9 Hz), 3.49-3.54 (m, 1 H), 3.66 (s, 3H) 13C RMN (6, 100 MHz, CD3OD): 14.5, 23.7, 27.3, 27.6, 30.2, 30.4, 30.5, 33.0, 46.0, 60.9, 61.7, 69.8, 75.3, 76.3, 77.4, 79.0. HRMS calculado para Ci6Hs4NOs: 320.2437 [M+Hf. Encontrado: 320.2433. Ejemplo 17. Preparación de! hidrocloruro de {1 2S,3fí,4S,5S,6fl)-5- {nonilamino)-6~(noniloxf) clohexano-1 ,2,3,4-tetraol (3). De acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir dei aminocíclítoí 20, preparado siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
11 , se obtiene el producto 3 con un rendimiento del 89%. [c¡j«+9.3 (c 0.9,
CHaOH); * RMN (6, 500 MHz, CDsOD): 0.90 (dt, 6H, J »7.0, 6.9 Hz), 1.31-1.43 (m, 24H), 1.60-1.76 (m, 4H), 3.00-3.12 (m, 2H), 3.16-3.21 (m, 2H), 3.24 (t, 1 H, J =9.1 Hz), 3.40-3.48 {m, 3H), 3.60-3.65 (m, 1 H), 4.13-4.18 (m, 1 H); 13C RMN <6, 100 MHz, CD3OD): 14.5, 23.8, 27.3, 27.4, 27.7, 30.3, 30.4, 30.5, 30.6, 30.8, 31.5, 33.06, 33.12, 46.8, 62.0, 70,0, 74.1 , 75.4 , 76.3, 77.6, 78.0. HRMS calculado para C2 H50NG5: 432.3689 [M+Hj\ Encontrado: 432.3675.
Ejemplo 18» Preparación del hidrocloruro de (1 f1 ,2S,3f?,4S,5S,6S)-5-amino-6- (nomloxi)ctclohexano-1,2,3,4-tetraol (4).
De acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir de! azidocíelítol 13, preparado siguiendo e! procedimiento descrito en el Ejemplo 4, se obtiene el producto 4 con un rendimiento de! 90%. [a] |v -11.6 {c 0.5, CH3OH);
*H RMN (δ, 500 Hz, CD3OD): 0.90 (t, 3H, J =6.8 Hz), 1.25-1.40 (m, 12H), 1.55-1.70 (m, 2H), 3.10 (d, 1H, J «10.5 Hz), 3.19 (t, 1 H, J «9.1 Hz), 3.45-3.53 (m, 1H), 3.54-3.70 (m, 3H), 3.80-3.87 (m, 1 H), 3.98-4.05 <m, 1 H); 13C RMN (δ, 100 MHz, CD3OD): 14.4, 23.7, 27.1 , 30.5, 30.7, 30.8, 31.2, 33.1 , 55.2, 71.5, 73.9, 74.6, 75.1 , 77.0, 78.7. HRMS calculado para C1sH3z 05: 306.2280 [M+HJ*. Encontrado: 306.2265.
Ejemplo 19. Preparación del hidrocioruro de {i S,2R,3SAR,5S,6S)~5-me\ox\~e- (nonilamino)cfclohexano-l ,2,3,4-tetraol (5).
De acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir dei aminociciíto! 21 , preparado siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo
12, se obtiene el producto 5 con un rendimiento de! 89%. [a] £-15 (c 0.9,
CH3OH); *H RMN ($, 500 MHz, CD3OD): 0.90 (t, 3H, J =6.8 Hz), 1.27-1,43 (m, 12H), i .60-1.85 (m, 2H), 3.00-3.24 (m, 4H), 3.50-3.60 (m, 2H), 3.65-3.72 (m, 4H), 3.91-3.97 (m, 1H); 13C RMN (δ, 100 Hz, CD3OD): 14.4, 23.7, 27.0, 27.7, 30.3, 30.4, 30.5, 33.0, 47.0, 60.9, 62.0, 71.2, 73.6, 74.8, 77.0, 78.0. HRMS calculado para CigH^ Og: 320.2437 [M+H]\ Encontrado: 320.2433.
Ejemplo 20. Preparación del hídroctoruro de (1 f1 ,2S,3f?,4S,5S(6S -5- (non¡lamino)-6-(nont!oxi)ciclohexano-1 ,2,3,4-tetraol (6).
De acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir del aminocíclito 22, preparado siguiendo el procedimiento descrito en el Ejemplo 13, se obtiene el producto 6 con un rendimiento de! 92%. [a]» -18 (c 1.0, ChhOH); 1H RMN (δ, 500 Hz, CD3OD): 0.88-0.96 (m, 6H), 1.25-1.42 (m, 24H), 1.60-1.80 (m, 4H), 3.04-3.09 (m, 2H), 3.13 (dd, 1 Hf J-10.7, 2.6 Hz), 3.19 (t, 1 H, J «9.1 Hz), 3.50 (dd, H, J «9.9, 2.2 Hz), 3.54-3.64 (m, 2H), 3.72 (dd, H, J «10.5, 9.3 Hz), 3.98-4.05 (m, H), 4.16 (dt, 1 H, J -9.1 , 7.2 Hz); 13C RMN (δ, 100 Hz, CD3OD): 14.5 (2), 23.74, 23.75, 27.1 , 27.2, 27.8, 30.3, 30.4, 30.51 , 30.53, 30.76, 30.80, 31.5, 33.0, 33.1 , 46.9, 60.9, 71.3, 73.6, 74.8 (2), 76.6, 77.1. HRMS calculado para C^HsoNOs: 432.3689 [M+Hf. Encontrado: 432.3674. Ejemplo 21. Preparación de (1 fí, 2S, 3S, 4R, 5R, 6S) - 5, 6- bis(noniloxi)ciclohexano-1 ,2,3,4-tetraol (7).
De acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15, a partir de! intermedio 24, preparado siguiendo ei procedimiento descrito en el Ejemplo 14, se obtiene el producto 7 con un rendimiento del 89%. [α)§" +15.4 (c 1.0, CH3OH); Ή RMN (δ, 500 MHz, CD3OD): 0.90 (t, 6H, =6.9 Hz), 1.25-1,42 (m, 24H), 1.53-1.65 (m, 4H), 3.07 (dd, 1 H, J »2.3, 9.9 Hz), 3.13 (t, 1 H, J -9.2 Hz), 3.30-3.36 (m, 1 H), 3.51-3.77 (m, 6H), 3.84 {t, 1 H, J =2.4 Hz); !3C RMN (δ, 100 Hz, CD3OD): 14.5, 23.8, 27.3, 27.4, 30.49, 30.53, 30.7, 30.82, 30.84, 31.2, 31.4, 33.1 , 717, 73.6, 73.9, 74.6, 76.8, 79.3, 82.4. HRMS calculado para C2<?H4806Na: 455.3349 (M+Na]+. Encontrado: 455.3328. B. Ensayos biológicos.
Se estudió ei efecto de una serie de cíclitoles sintetizados químicamente sobre distintas glicostdasas y se determinó ia actividad sobre ia Giucosiiceramida Sintasa. También se evaluaron algunos compuestos de la invención en la inhibición in vitro de ia β-glucocerebrosidasa humana y ia potenciación de actividad de esta enzima en iinfobiastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P en presencia de algunas chaperonas farmacológicas. Ejemplo 22. Actividad inhibidora sobre ailcosidasas y Giucosiiceramida Sintasa
Se estudió ia selectividad de ios compuestos 1-7 sobre la (3- giucocerebrosídasa, sobre un panel de glicosidasas comercial mente disponibles y se determinó la actividad sobre la Giucosiiceramida Sintasa en homogeneizados de células A549 como se describe en Egído-Gabás, . y col. en Org. Bbmoi. C em. 2005, 5 (7)» 1195-1201. Se recoge un resumen de los datos de inhibición en ias Tablas 1 , 2 y 3.
Figure imgf000026_0001
Tabía 1 : Actividad inhibidora sobre glicosidasas.^
Figure imgf000026_0002
Figure imgf000027_0001
Tabía 2: Actividad inhibidora sobre glicosidasas;
Figure imgf000027_0002
Tabla 3: Actividad inhibidora sobre Glucosífceramída Sintasa (GCS)
[a] Ninguno de tos compuestos mostró actividad frente a la enzima α· galactosídasa (grano café verde) y ct-glucosidasa de arroz a 100 μΜ. [b] % actividad a 800 uM. [c] % actividad a 50 μΜ.
Con ía excepción dei delito! 7, ios compuestos resultaron ser unos inhibidores muy potentes de la β-giucocerebrosídasa, con valores de IC» de! orden de nanomolar o micromolar. Es destacable que ninguno de los compuestos mencionados arriba presentaron una actividad significativa sobre la o gaiactosidasa, α-g!ucosidasas y S-glucosídasa de almendra a 100 μ . Asi mismo, ninguno de los compuestos mostraron actividad significativa sobre la Giucosílceramida Sintasa de homogeneízados de células A549 a una concentración de 250 μΜ, indicando una selectividad hacia la enzima hidrolíttca. Por otro íado, los compuestos 1 , 4 y 6 mostraron una moderada inhibición, entre 80 y 87%, sobre la β-gaiactosidasa de hígado bovino a 100 μΜ.
Ejemplo 23. Actividad inhibidora de aiaunos de los compuestos sobre la B- giücocerebrosídasa humana en fibroblastos Para estudiar (a inhibición de los ciclitoies 1-6 sobre la enzima β- g!ucocerebrosidasa humana, se incubaron fibroblastos durante 24h en ausencia o presencia de los inhibidores a 50 μ y se empíeó un "ensayo de enzima intacta" descrito por Sawkar y col. (Sawkar, A. R.; Cheng, W, C; Beutler, E; Wong, C. H.; Baích, W. E.; Kelly, J. W. Proc. Nati Acad. Sci. U S A 2002, 99 {24), 15428-15433} para determinar la actividad enzimática mediante la adición deí sustrato {β-D-glucopiranósido de 4-metilumbeliferilo) a células intactas seguido d la cuantificacíón de la 4~metilumbeiíferona liberada. Previamente se estudiaron la citotoxicidad de los inhibidores. Los compuestos 3 y 6, presentaron cierta citotoxicidad, con valores de LDso de 24 y 12 μΜ, respectivamente, por lo que fueron testados a 5 μΜ. Sin embargo, el resto de compuestos no presentaron citotoxicidad a concentraciones inferiores a 300 μ .
Los compuestos 3-6 que mostraron más de un 46% de inhibición a 50 μ , fueron también testados a concentraciones más bajas. Se recoge un resumen de la inhibición (%) sobre !a β-glucocerebrosidasa humana en la Figura 1 y en la Figura 2 (para el compuesto 6). Es destacable que el cielito! 6 mostró una potente inhibición de la β- g!ucocerebrosidasa humana en fibroblastos a concentraciones del orden de nM. Ejemplo 24. Potenciación ¡n itro de la actividad de ia B-aiucocerebrosidasa en ünfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P en
Se determinaron las actividades de la β-glucocerebrosidasa en Usados celulares después de incubar ios linfoblastos en presencia o en ausencia de concentraciones crecientes de los compuestos 1-6 durante 3 días en placas de 12 pociilos. Después de lavar eí peiíet con PBS, se resuspendió en agua y se lisó mediante sontoación. Brevemente, se incubaron a 37 8C 10 μΙ_ del homogeneizado con 50 μΐ del sustrato β-D-glucopiranósido de 4- metilumbel ferilo (6 mM} en tampón citrato-fosfato 0.1 M, pH 5.2 suplementado con taurocolato de sodio (0,25%) y Tritón X-100 (0.1%). Se dejó reaccionar durante 2 h y se paró la incubación añadiendo 150 μΐ~ de tampón glicina- hidróxido de sodio 0.2 (pH 10<6). Se determinó la 4-metilumbeliferona liberada mediante fluorometría (excitación 355 nm; emisión 460 nm). La proteína fue cuantfficada mediante el krt de ensayo de proteína Micro BCA (Pierce, Thermo Scientifie).
En la Tabla 4 se indican las concentraciones de ios compuestos a las que se observó un mayor incremento de la actividad sobre la β-glucocerebrosidasa en linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P.
Los ctcütotes testados demostraron un impacto significativo sobre la potenciación de la actividad enzímátíca, especialmente frente a ia mutación N370S. La actividad de la β-giucocerebrosídasa en lisados obtenidos a partir de linfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S se incrementó hasta 2.0 veces en e! caso más favorable (compuestos 5 y 6). Sin embargo, se observó un débil incremento en la actividad residual hasta 1.5 veces para la mutación L444P en el caso más favorable (compuesto 2). Los compuestos incrementaron la actividad de ia β-giucocerebrosidasa más de 1.4 y 1.2 veces a alguna concentración testada frente a las mutaciones N370S y L444P, respectivamente. Los ciclitoles 1 , 2 y 4 a aitas concentraciones (10 o 5 μΜ) fueron eficaces frente a la mutación N370S, con elevaciones de actividad residual entre 1.7 y 1.8 veces, mientras que ios compuestos 3 y 5 a 1 μΜ incrementaron la actividad residual 1.4 y 2 veces, respectivamente- El compuesto 6, que había resuítado ser un potente inhibidor de la β- giucocerebrosidasa, incrementó ia actividad residual de esta enzima hasta 1.9 veces a una concentración de 1 nM. Es destacable que este último compuesto resultó ser el más eficaz de ias series frente a las mutaciones L444P, con eievaciones de la actividad residual alrededor de 1.4 veces a una concentración de 0.01 nM. Los resultados anteriores apoyan el concepto terapéutico de que ios potentes inhibidores cic!ito!es con estructura cíclica pueden servir como chaperonas farmacológicas eficaces para potenciar ia actividad enzimática mulante de pacientes con enfermedad de Gaucher.
Figure imgf000030_0001
Tabla 4. Potenciaciones de actividad sobre ia β-giucocerebrosídasa en íinfoblastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S o L444P en presencia de algunas chaperonas farmacológicas. [a] Se incubaron los tinfobtastos de pacientes de Gaucher con las mutaciones N370S y L444P durante 3 días con las chaperonas farmacológicas antes de determinar la actividad. Se presentan ios valores observados para el mayor incremento de la actividad residual de la β-glucocerebrosidasa. Los datos entre paréntesis corresponden a fas concentraciones de las chaperonas farmacológicas.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Compuesto de fórmula general (I):
Figure imgf000032_0001
o cualquiera de sus sales, isómeros o solvatos,
donde
X se selecciona entre un grupo -NHRi o un grupo -OR2;
Y es un grupo -OR3;
R1 se selecciona entre H, alquilo C1-C18 o un cicloalquilo o un grupo arilo;
R2 se selecciona entre alquilo C1-C18 o un cicloalquilo o un grupo arilo; y R3 se selecciona entre un grupo alquilo C1-C18 o un cicloalquilo o un grupo arilo.
2. El compuesto según la reivindicación 1 donde X es un grupo -NHR1.
3. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde Ri es H.
4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde R1 es un grupo alquilo C -C18.
5. El compuesto según la reivindicación 4, donde R1 es un grupo alquilo C8- c9. El compuesto según la reivindicación 4, donde Ri es un grupo alquilo C1- C- 8 sustituido por un grupo cicloalquilo o arilo. El compuesto según la reivindicación 5, donde Ri es un grupo alquilo Ce- C-9 sustituido por un grupo cicloalquilo o arilo El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 6 6 7, donde el grupo arilo es un fenilo. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde Ri es un cicloalquilo o un grupo arilo. El compuesto según la reivindicación 1 , donde X es un grupo -OR2. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 10, donde R2 es un grupo alquilo CyCio- El compuesto según la reivindicación 1 1 , donde R2 es un grupo alquilo C7-C10 sustituido por un grupo cicloalquilo o arilo. El compuesto según la reivindicación 8, donde R2 es un grupo alquilo C8- C9. El compuesto según la reivindicación 11 , donde R2 es un grupo alquilo Ce-Cg sustituido por un grupo cicloalquilo o arilo. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 14, donde el grupo arilo es un fenilo. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde R3 es un grupo alquilo C1-C18. El compuesto según la reivindicación 16, donde R3 es un grupo alquilo C1 -C9. El compuesto según la reivindicación 17, donde R3 es un grupo alquilo Ci. El compuesto según la reivindicación 17, donde R3 es un grupo alquilo C9. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, donde el grupo alquilo está sustituido por un grupo cicloalquilo o arilo. El compuesto según la reivindicación 20, donde el grupo arilo es un fenilo. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde R3 es un grupo cicloalquilo o un grupo arilo. El compuesto según la reivindicación 22, donde R3 es un fenilo. El compuesto de fórmula general (I), según la reivindicación 1 , que se selecciona de entre la siguiente lista:
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000035_0001
o sus sales, isómeros o solvatos. El compuesto de fórmula general (I), según la reivindicación 24, que se selecciona de entre:
Figure imgf000035_0002
o sus sales, isómeros o solvatos. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25 para su uso como medicamento. Composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula general (I) o sus sales, solvatos o prodrogas, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, junto con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables y al menos un transportador farmacéuticamente aceptable, adyuvante y/o vehículo. Composición farmacéutica según la reivindicación 27, donde además comprende uno o más principios activos.
29. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 27 ó 28, donde dicha composición se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral, oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.
30. Uso del compuesto de fórmula general (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25 o de la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 27 a 29, para la elaboración de un medicamento.
31. Uso según la reivindicación 30, donde el medicamento se utiliza para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad relacionada con trastornos de tipo lisosomal. 32. Uso según la reivindicación 31 , donde el medicamento se utiliza para el tratamiento y/o prevención de la enfermedad de Gaucher.
33. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32, donde el medicamento se presenta en una forma adaptada a la administración parenteral, oral, sublingual, nasal, intratecal, bronquial, linfática, rectal, transdérmica o inhalada.
34. Procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (I), según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, que comprende la transformación de un compuesto de fórmula general (A) en el compuesto de fórmula general (I):
Figure imgf000036_0001
o cualquiera de sus sales, isómeros o solvatos,
donde;
Z se selecciona entre un grupo -OH, -N3; o un grupo NR4R5.
X se selecciona entre un grupo -NHRi o un grupo -OR2;
Y es un grupo -OR3;
R1 se selecciona entre H, alquilo C1-C18 o un cicloalquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones;
R2 se selecciona entre alquilo Ci-C18 o un cicloalquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones;
R3 se selecciona entre un grupo alquilo C Ci8 o un cicloalquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones; y
R4 y R5 son iguales o diferentes entre si y se seleccionan entre H, alquil C1-C-18, un cicloalquilo saturado o insaturado de 4 a 8 eslabones o un grupo CO-OR6, donde R6 se selecciona entre, arilo, alquilo C1-C18 o un cicloalquilo saturado o insaturado de 1 a 4 eslabones. Procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (I), según la reivindicación 34, donde si Z es un grupo -OH, se lleva a cabo una reacción de alquilación sobre los grupos hidroxilo desprotegidos. Procedimiento de síntesis del compuesto de fórmula general (I), según la reivindicación 34, donde si Z es un grupo -N3, se llevan a cabo una etapa de reducción del grupo azido a amina y una aminación reductora con un aldehido seleccionado entre C7H15CHO ó CeHi7CHO.
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