WO2011122722A1 - 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품 - Google Patents

콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품 Download PDF

Info

Publication number
WO2011122722A1
WO2011122722A1 PCT/KR2010/002024 KR2010002024W WO2011122722A1 WO 2011122722 A1 WO2011122722 A1 WO 2011122722A1 KR 2010002024 W KR2010002024 W KR 2010002024W WO 2011122722 A1 WO2011122722 A1 WO 2011122722A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cholesterol
cholesterol oxidase
phytosterol
fermentation
food
Prior art date
Application number
PCT/KR2010/002024
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
이승숙
정종문
이유진
장영선
Original Assignee
주식회사 벤스랩
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 벤스랩 filed Critical 주식회사 벤스랩
Priority to PCT/KR2010/002024 priority Critical patent/WO2011122722A1/ko
Publication of WO2011122722A1 publication Critical patent/WO2011122722A1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
    • C12Y101/03006—Cholesterol oxidase (1.1.3.6)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A23L33/11—Plant sterols or derivatives thereof, e.g. phytosterols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/30—Dietetic or nutritional methods, e.g. for losing weight
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/365—Nocardia

Definitions

  • the present invention relates to a mass production method of fermentation of phytosterols using the Nocardia sp. NES115 strain, and more specifically, the Nocardia sp. NES115 producing cholesterol oxidase having excellent physiological activity.
  • Functional food composition containing phytosterol fermented product fermented with strain (Accession No. KACC-91437) as an active ingredient. Method for producing cholesterol oxidase to reduce cholesterol to obtain excellent efficacy in improving body fat, Method for producing phytosterol fermentation using cholesterol oxidase, Functional composition for improving body fat using this phytosterol fermentation , Food and health functional food.
  • Obesity-related diseases include high blood pressure, arteriosclerosis, diabetes, fatty liver and cholelithiasis, and gout. It is also reported that obesity is 1.3 times higher than normal weight in mortality. Therefore, it is necessary to prevent obesity in advance, and if it becomes obesity, it is important to make a normal metabolism through weight loss as soon as possible to achieve a smooth metabolism.
  • Phytosterols or phytosterols are composed of cytosterol, campesterol, stigmasterol and the like. Phytosterols have a structure very similar to cholesterol and have been known to reduce cholesterol absorption and lower cholesterol levels in serum (US Pat. No. 5,578,334). Phytosterols are commonly found in fruits, vegetables, nuts, cereals, corn, legumes, etc., and their efficacy began in the 1950s. As a drug for the treatment of cardiovascular disease, coronary artery, and hyperlipidemia due to the cholesterol absorption and absorption lowering effect of phytosterol, clinical trials are being conducted, and many research results are coming out.
  • Phytosterol has been recognized as GRAS (Generally Recognized As Safe) in the United States as a very safe substance for humans, and its stability in Europe.
  • FDA's scientific findings indicate that phytosterol esters have a cholesterol-lowering effect when consumed at 1.3 g per day and are recommended by the National Institutes of Health (NIH), which translates into at least 800 mg per day. It is content. Therefore, in the United States, Europe and Japan, a lot of phytosterol-enhanced products have been developed and marketed, attracting attention not only to patients with high cholesterol, but also to those concerned about health, so that medical food experts such as doctors, pharmacists, nutritionists, etc. First, food selection is recommended.
  • cholestenone is a product produced when cholesterol oxidase oxidizes cholesterol and is colorless, tasteless, and odorless. It suppresses the accumulation of body fat (Suzuki, 1993), and decreases the concentration of lipoproteins in the blood. The function was discovered. By using this function, the food field can be used as a diet food to reduce cholesterol by adding cholesterol oxidase to cheese, ham, sausage, and various dairy products, as a preventive agent for obesity, and for treating obesity. This is expected.
  • phytosterols and fatty acids that are currently used in the food industry do not provide independent cholesterol lowering performance. This in turn results in lower than optimal utilization of the naturally occurring cholesterol lowering performance in compounds containing both plant and fatty acid substances. Therefore, there is a need to provide new phytosterol compounds using the natural cholesterol lowering ability of phytosterols and fatty acids.
  • Another problem is that currently available phytosterols made from vegetable oils require significant amounts of fat present in the food to ensure that the phytosterols are successfully incorporated into food.
  • Phytosterols made from vegetable oils produce soft sticky masses that do not spread easily, so they have to be limited in their fat content when used in food. Therefore, it does not require significant amounts of fat to be present and is successfully incorporated into nutritional delivery systems such as food and food, thereby providing a new form of phytosterol that enables consumers to make more diverse and beneficial food choices. Is required.
  • the present inventors have studied extensively in order to provide a functional composition having excellent dietary efficacy using plant sterols, and as a result, selected NES115 strain (No. KACC-91437) belonging to the genus Nocadia producing cholesterol oxidase. , Establishment of a method for producing cholesterol oxidase having excellent physiological activity using the strain (Patent Application No .: 10-2009-0021154) was obtained by reacting the cholesterol oxidase and phytosterol obtained plant fermentation product, this It was used to prepare a functional composition having excellent efficacy in weight loss and body fat improvement efficacy.
  • an object of the present invention by mass production of plant sterol fermented product using the Nocardia sp. NES115 strain culture medium that produces cholesterol oxidase with excellent physiological activity to obtain excellent efficacy in improving body fat in addition to weight loss It is to provide a dietary functional composition that allows.
  • the method of the present invention for achieving the above object comprises a plant sterol fermentation step of reacting by adding 0.5 to 10% phytosterol to the strain culture medium containing cholesterol oxidase produced in the Nocardia sp.
  • NES115 strain It consists of mass production of phytosterol fermentation using Nocardia sp.
  • the present invention for achieving the above object, in the method for producing cholesterol oxidase, Nocardia sp. ( Nocardia sp.) Strain of accession number KACC-91437 containing various nitrogen sources, carbon sources and trace minerals It is characterized by culturing in a medium.
  • the composition of the production medium is yeast extract 10g / L to 300g / L, malt extract 20g / L to 500g / L, glucose 0.5g / L to 50g / L, ammonium sulfate 0.01g / L to 10g / L, calcium hydrochloride 0.01 g / L to 10 g / L, iron sulfate 0.01 g / L to 10 g / L, magnesium sulfate 0.01 g / L to 10 g / L, potassium phosphate 0.01 g / L to 10 g / L, and cholesterol oxidase It is characterized by containing 1g / L to 100g / L phytosterol as a derivative to help the expression of.
  • cholesterol oxidase is prepared using a Nocardia sp. NES115 strain of accession number KACC-91437 in an expression medium containing various nitrogen sources, carbon sources, and trace minerals. After mass culture, 0.5-10% of phytosterol was added to a culture solution containing cholesterol oxidase obtained by centrifugation, and the reaction temperature was 30 ° C to 38 ° C, pH 5 to 8, stirring speed of 200 to 500rpm, and air supply of 1 to 20L. It is characterized by using a cholesterol oxidase, characterized in that the reaction proceeds for 1 to 5 days / min.
  • the functional composition is characterized by reducing weight loss and triglycerides and cholesterol containing phytosterol fermentation as a main component.
  • the main ingredient is a phytosterol fermented product, which is a functional composition, and contains other food ingredients such as dietary fiber, soybean isolate protein peptide, carnitine, and the like, in addition to the functional composition having body fat improving effect to reduce weight loss and triglycerides and cholesterol. It is done.
  • the food is characterized in that the powder, granules, tablets, capsules, liquid or beverage form.
  • the main ingredient is a plant sterol fermented as a functional composition, characterized in that it comprises a food supplement acceptable additives in addition to the functional composition having a body fat improving effect of reducing weight loss and triglycerides and cholesterol.
  • the health functional food is characterized in that the powder, granules, tablets, capsules or beverage form.
  • the present invention relates to a functional composition having an effect of weight loss and body fat improvement, comprising a phytosterol fermentation product fermented using a Nocardia sp. NES115 strain that produces cholesterol oxidase with excellent physiological activity.
  • the present invention relates to a functional composition effective for reducing weight loss and improving body fat.
  • the functional food containing the composition of the present invention as an active ingredient is a diet that can be easily ingested by combining food ingredients without toxicity and side effects to reduce triglycerides and cholesterol in addition to weight loss to obtain excellent efficacy in improving body fat. It relates to a functional composition.
  • 1 is a graph showing the growth rate and activity of cholesterol oxidase produced therefrom of the genus Nocardia sp.
  • FIG. 2 is an HPLC chromatogram showing cholestenone produced by fermenting cholesterol with cholesterol oxidase and showing changes before and after cholesterol fermentation.
  • Figure 3 shows the campestolone produced by fermentation of campesterol, one of the main components of phytosterol, with cholesterol oxidase produced from the Nocardia sp. NES115 strain, before and after fermentation of campesterol.
  • HPLC chromatogram showing
  • Figure 4 is an HPLC chromatogram analyzed at 210 nm and 240 nm of phytosterols reactant of cholesterol oxidase.
  • FIG. 5 is an HPLC chromatogram at 210 nm and 240 nm showing changes in constituents after fermentation of phytosterol by cholesterol oxidase produced from the Nocardia sp. NES115 strain.
  • FIG. 6 shows the results of quantitative analysis before and after fermentation of main components of phytosterols by cholesterol oxidase produced from Nocardia sp. NES115 strain.
  • Figure 7 is a TLC photograph of the fermentation date of the plant sterol fermentation by cholesterol oxidase produced from the genus Nocardia sp. NES115 strain.
  • 9 is a graph showing the results of animal experiments showing changes in blood lipid concentrations of phytosterol fermentation products.
  • 10 is a graph showing the results of animal experiments showing the effect of inhibiting body fat formation of plant sterol fermentation.
  • the present invention relates to a method for mass-producing phytosterol fermentation comprising a phytosterol fermentation step of supplying a fermentation amount of phytosterol to a Nocardia sp. NES115 strain culture medium.
  • the genus Nocardia sp. (NES115) has been previously filed by the present applicant, Nocardia sp., NES115 and KACC-91437, and a method of producing cholesterol oxidase having excellent physiological activity is It is described in detail in US Patent No. 10-2009-0021154 by the Applicant.
  • More detailed mass production method is as follows.
  • Incubation is necessary to obtain an appropriate cell mass, which is very important for maintaining a constant incubation time in the subsequent mass culture step and the cell's activity capacity.
  • the mass culturing step of the present invention is a cell growth step, which is a process of quantitatively increasing the cells until the cell volume is appropriate for the expression and secretion of cholesterol oxidase, and the culture temperature of 25 ° C. to 35 ° C., pH 2 to 8, and agitation rate 200 To 500 rpm, pressure pressure 0.5 to 1.5 mbar, air supply 5 to 40 L / min.
  • inoculated more than 1% of dissolved oxygen of the cells, 1% or more of the culture medium and induce the expression and secretion of the desired cholesterol oxidase by using plant sterols with glucose and derivatives as carbon sources.
  • dissolved oxygen is rapidly depleted due to vigorous respiration of the cells, but in general, a method of supplying pure oxygen is used.
  • the air supply is 5 to 40 L / min
  • the pressure is 0.5 to 1.5 mbar
  • the stirring speed By adjusting the physical conditions of 200 to 500rpm from the beginning of the mass culture stage to the end of the culture was able to maintain the dissolved oxygen amount of more than 1%. This can reduce production costs by maintaining dissolved oxygen above a certain level without the use of pure oxygen in large fermenters.
  • Bulk culture medium used in the present invention is yeast extract 10g / L to 300g / L, malt extract 20g / L to 500g / L, glucose 0.5g / L to 50g / L, ammonium sulfate 0.01g / L to 10g / L, It consists of 0.01 g / L to 10 g / L of calcium hydrochloride, 0.01 g / L to 10 g / L of iron sulfate, 0.01 g / L to 10 g / L of magnesium sulfate, and 0.01 g / L to 10 g / L of potassium phosphate.
  • Nocardia sp. NES115 is first cultured using glucose as a carbon source, and cultured by adding a certain amount of phytosterol as a derivative to obtain cholesterol oxidase having excellent physiological activity. Next, the plant sterols are added to the strain culture solution so that the plant is reacted for a predetermined time so that the fermented plant sterols are produced.
  • More detailed phytosterol fermentation production method is as follows. After the completion of the mass culture step, the culture was stopped and centrifuged at 12,000 rpm to separate the cells and the bacterial culture solution and 0.5-10% of phytosterol in a reaction vessel. At this time, the reaction temperature was 30 °C to 38 °C, pH 5 to 8, the stirring speed of 200 to 500rpm, air supply 1 to 20 L / min. The reaction was carried out for 1 to 5 days to obtain the desired phytosterol fermentation.
  • Nocardia sp. NES115 of accession number KACC-91437 was used, and Table 1 was used to effectively produce cholesterol oxidase, a desired enzyme.
  • Table 1 was used to effectively produce cholesterol oxidase, a desired enzyme.
  • Phytosterol used in the present invention was purchased from Jinyong Natural Co., Ltd. was used.
  • Optimal medium composition 1% yeast extract, 2% malt extract, 0.8% glucose, 0.2% phytosterol, defoaming agent 0.1% sucrose fatty acid ester, obtained in 300L fermenter (Fermentec, Korea) for mass production of enzyme
  • the fermentation reaction was carried out for 3 days to obtain the transformed phytosterol fermented product by cholesterol oxidase which is known to have weight loss effect by inhibiting body fat accumulation and inhibiting enzyme expression related to fat metabolism.
  • cholesterol oxidase which is known to have weight loss effect by inhibiting body fat accumulation and inhibiting enzyme expression related to fat metabolism.
  • the peak pattern changed by daily reaction with cholesterol oxidase was confirmed by HPLC (FIG. 2).
  • the HPLC used for analysis was Waters system (600 controller, Delta 600 pump and 2487 UV detector), and the column was Symmetry C 18 (5 ⁇ m, 4.6 ⁇ 250 mm, Waters). 100% methanol was used as the mobile phase, and 20 ⁇ L of the reaction solution terminated with a mobile phase flow rate of 0.8 mL / min was analyzed, and the amount of each substrate was decomposed at 210 and 240 nm and the amount of the product was analyzed.
  • campestenone, ⁇ -sitostenone and stigmastenone which were the fermented forms of campesterol, ⁇ -sitosterol and stigmasterol, were the main components of cholesterone and phytosterol at 240 nm.
  • phytosterol it is not a single substance like cholesterol, and as shown in FIG. 5, the peak of the fermented and unfermented forms overlaps at 210 nm after fermentation.
  • campesterol, ⁇ -sitosterol and stigmasterol which are the main components of phytosterols by cholesterol oxidase during fermentation.
  • campesterol, ⁇ -sitosterol and stigmasterol A standard curve was prepared by HPLC analysis. This is based on the results of HPLC analysis of cholesterone produced after fermenting cholesterol with cholesterol oxidase for the reason that it is impossible to purchase a commercial standard for fermented active ingredients, and each of the campesterol, sitosterol and stigmasterol is used as a substrate for cholesterol oxidase.
  • the amount of the fermentation product produced by the reduced amount of the substrate was calculated at 1: 1, and the standard curve for the amount of the fermented product produced by the reduced amount of the substrate was prepared and quantified.
  • the active ingredients stigmasterol, campesterol and ⁇ -sitosterol were 65.3% (90.5 ⁇ g / L stigmastenone), 74.5% (162.5 ⁇ g / L campestenone), and 78.2% of the active ingredients after 72 hours of fermentation, respectively. (243.9 ⁇ g / L ⁇ -sitosternone), the conversion rate of phytosterols was 50% or more.
  • the optimum fermentation reaction time was finally determined to be 72 hours (FIG. 6).
  • Optimum phytosterol fermentation confirmed through HPLC and TLC was applied to the production conditions to obtain a large amount of phytosterol fermentation.
  • the culture was stopped and centrifuged at 12,000 rpm, and 5% of plant sterol was added to the culture medium in which the cells and the culture medium were separated into fermentation reactions for 3 days.
  • the fermentation reaction temperature was 37 °C, pH7, stirring speed 250 rpm, air supply 1 to 20 L / min.
  • phytosterol fermentation in the form of 50% or more converted by cholesterol oxidase was obtained.
  • rats with an average body weight of 105 ⁇ 5g were adapted to the environment for 1 week with general feed (NIH # 31M feed), and then divided into 1 group of normal diet group and 2 groups of high-fat diet group.
  • the temperature of the kennel was maintained at 22 ⁇ 2 °C, humidity at 50 to 55% conditions.
  • the general diet group supplies the original general diet
  • the high-fat diet group 2 induces obesity for 3 weeks on a high-fat diet containing 20% lard, and then adds the average weight to the group 2
  • the readjustment of the sample plant sterol fermentation
  • Each group of dietary feed was prepared as shown in Table 2.
  • NIH # 31M Ground whole wheat 35.2%, ground whole yellow corn 20%, ground whole oats 10%, wheat middlings 10%, fish meal (60% protein) 9%, soybean meal (47.5% protein) 5%, soy bean oil 2.5%, Alfalfa meal (17% protein) 2%, Dicalcium phosphate 1.55, Brewer's dried yeast 1%, Ground limestone 0.5%, Salt 0.5%, vitamine premix 0.25%, mineral premix 0.25%, Choline chloride 0.135, L -lysine 0.1%, DL-methionine 0.1%.
  • Body weight was measured once every three days at a certain time, and feed intake was measured at 2 pm daily and calculated as daily intake by subtracting the remaining amount from the previous day's supply.
  • the weight loss efficacy of the plant sterol ferment was shown in FIG.
  • the weight gain amount was calculated by the following method as the weight of each group.
  • Blood was collected after 8 weeks of experiments to determine the effect of phytosterol fermentation on cholesterol and triglyceride reduction effects. Fasting was performed 12 hours before the day of blood collection to exclude changes in diet.
  • blood was collected with a 10 ml syringe from the cardiac vein immediately after opening under ether anesthesia. Serum was left at room temperature for 20 minutes, centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes, and used as a sample.
  • the surrounding epididymal fat left / right
  • mesenteric fat mesenteric fat
  • post-peritoneal fat tissue carefully extracted from the experimental animals around the epididymis, were washed with physiological saline, and then water was removed with filter paper.
  • HFD + SF plant sterol fermentation added group
  • a mesenteric adipose tissue reduced about 14.6%
  • post-peritoneal In the adipose tissue the reduction effect was about 20.4%, resulting in an average reduction of 14% in the adipose tissue.
  • Soybean Isolate Protein Peptide 100 mg
  • Vitamin B 6 ... ........... 0.5 mg
  • Vitamin B 12 ... .......... 0.2 ⁇ g
  • Nicotinic Acid Amide ... 1.7 mg
  • composition ratio of the vitamin and mineral mixture is a composition suitable for a relatively healthy food in a preferred embodiment
  • the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method.
  • the granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.
  • Purified water is added to the whole ... 900 ml
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and refrigerated Used to prepare the healthy beverage composition of the invention.
  • composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment
  • the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, use purpose.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)

Abstract

본 발명은 체중감량 및 체지방 개선 효과가 있는 기능성 조성물에 관한 것으로, 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주로부터 생산된 콜레스테롤 산화효소 배양액에 식물스테롤을 0.5 내지 10% 첨가하여 반응시키는 식물스테롤 발효단계를 포함하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용한 식물스테롤 발효물의 대량생산방법에 관한 것이다. 상기 방법에 따라 체중감량 외에 중성지방 및 콜레스테롤을 감소 효과가 있는 식물스테롤 발효물의 대량 생산을 통하여 체중감량 및 체지방 개선 효과가 있는 다이어트 보조제로서의 실용화를 가능하게 한다.

Description

콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품
본 발명은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용한 식물스테롤 발효물의 대량생산방법에 관한 것으로서, 좀 더 구체적으로는 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주(기탁번호 KACC-91437)를 이용하여 발효한 식물스테롤 발효물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품 조성물로 독성 및 부작용이 없는 식품 및 생약성분을 배합하여 편리하게 섭취하게 함으로써 체중감량 외에 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시켜 체지방 개선에 있어서 우수한 효능을 얻을 수 있도록 하는 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품에 관한 것이다.
현대에 들어와서 영양 섭취상태가 양호해지면서 사람들의 체격이 향상되는 효과를 거두었다. 그러나, 영양의 과잉 섭취와 생활환경의 변화에 따른 운동 부족 등으로 비만자가 급격히 늘어나는 부작용도 함께 나타났다. 비만은 임상적으로 각종 질병의 발생에 관여하거나 질병을 악화시킨다. 비만과 관련된 질병으로서는 고혈압, 동맥경화, 당뇨, 지방간 및 담석증, 통풍 등이 있다. 또한 사망률에 있어서도 비만자는 정상 체중자들보다 1.3배 이상 더 높은 것으로 보고되어 있다. 그러므로, 비만은 미리 예방하는 것이 필요하고, 비만증으로 된 경우에는 빨리 체중감량을 통하여 정상체중으로 만들어 원활한 신진 대사가 이루어지도록 하는 것이 중요하다.
또한, 콜레스테롤의 과량섭취가 증가하는 추세로서, 이와 관련된 질병이 커다란 사회적 문제로 대두되고 있다. 식생활 습관의 변화로 콜레스테롤 함량이 높은 식품을 자주 섭취하게 되고 이러한 식품들에 함유된 콜레스테롤이 혈중 콜레스테롤의 증가시켜 고지혈증, 동맥경화, 부정맥, 심근경색과 같은 심혈관계 질병을 유발시키는 중요한 원인이 되고 있다. 외인성 및 내인성으로부터 유도된 콜레스테롤은 소장내로 이동하여 대략 50%가 흡수된다. 따라서, 콜레스테롤이 장내로 흡수되지 못하도록 콜레스테롤을 제어하는 메커니즘이 콜레스테롤 관련 질병의 예방 및 치료에 매우 중요한 요소가 된다.
식물스테롤 또는 피토스테롤(phytosterol)은 시토스테롤(sitosterol), 캠페스테롤(campesterol), 스티크마스테롤(stigmasterol) 등으로 구성된다. 식물스테롤은 콜레스테롤과 매우 유사한 구조를 가지고 있으면서 콜레스테롤의 흡수를 줄여 혈청내의 콜레스테롤 수치를 낮추어 주는 것으로 알려져 왔다(미국특허 제 5,578,334호). 식물스테롤은 일반적으로 과일, 채소, 견과류, 곡류, 옥수수, 콩과류 동식물계에 널리 존재하며, 그 효능에 대해서는 1950년대 연구가 시작되었다. 식물스테롤의 콜레스테롤 흡수 흡수저하 작용으로 심장혈관질환, 심장관상동맥 및 고지혈증의 치료를 위한 약물로서 임상실험 등이 행하여지고 있고, 많은 연구결과들이 나오고 있다. 식물스테롤은 인체에 대해서 매우 안전한 물질로 미국 GRAS(Generally Recognized As Safe)로 인정받았으며, 유럽에서도 그 안정성을 인정하였다. 또한 FDA의 과학적 연구 결과에 따르면 식물스테롤 에스터는 1일 1.3g 섭취시 콜레스테롤 저하 효과가 있는 것으로 FDA가 인정하고 미국국립보건원(NIH)에서 권장하고 있는데 이를 식물스테롤로 환산하면 1일 최소 800mg에 해당하는 함량이다. 따라서 미국, 유럽 및 일본 등에서는 식물스테롤이 강화된 제품들이 많이 개발 시판되어 콜레스테롤이 높은 환자뿐만 아니라 건강을 염려하는 사람들의 많은 관심을 얻어 의사, 약사, 영양사 등의 의료 식품 전문가들이 식물스테롤이 강화된 식품 선 택을 우선적으로 추천하고 있다.
한편, 콜레스테논(cholestenone)은 콜레스테롤 산화효소가 콜레스테롤을 산화시켰을 때 만들어진 생성물로 무색, 무미, 무취로서 체지방의 축적을 억제하며(Suzuki, 1993), 혈중 리포단백질(lipoprotein)의 농도를 저하시키는 기능이 발견되었다. 이런 기능을 이용하여 식품 분야에서는 치즈, 햄, 소시지 및 각종 유제품에 콜레스테롤 산화효소를 첨가하여 콜레스테롤을 저감시키는 다이어트 식품, 비만의 예방제, 비만증의 치료제 등으로 이용할 수 있는 가능성이 있어 산업적으로 넓은 응용면이 예상되고 있다. 그 외에도 식물스테롤의 한 종류인 캠페스테롤(campesterol)을 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 산화시 생성되는 캠페스테논(campestenone)역시 체지방 축적 억제 및 지방 대사 관련 효소 발현 억제를 통한 체중 감소 효능이 다양한 연구들을 통해 밝혀졌다.
또한, 어떤 지방산은 콜레스테롤 흡수를 차단함으로써 자연적으로 혈청 콜레스테롤의 농도를 낮추는 것으로 알려져 있다. 그러나, 현재 식품산업에서 사용되고 있는 식물스테롤과 지방산류는 독립적인 콜레스테롤 저하 성능을 제공하지 못한다. 이는 결국 식물 물질과 지방산 물질 모두를 함유한 화합물에서 자연적으로 발생하는 콜레스테롤 저하 성능의 최적의 활용보다 낮은 결과를 초래한다. 그러므로 식물스테롤 및 지방산의 자연적인 콜레스테롤 저하능력을 이용한 새로운 식물스테롤류 화합물의 제공이 요구된다. 또다른 문제는, 식물성 기름으로 만들어진 현재 사용가능한 식물스테롤은 식물스테롤이 성공적으로 식품에 편입되도록 하기 위해서 음식물에 존재하는 지방을 상당량 요구한다는 점이다. 식물성 기름으로 만들어진 식물스테롤은 쉽게 퍼지지 않는 무른 점착성 덩어리(soft sticky mass)를 생성하기 때문에, 그들을 음식에 이용할 때에는 지방 함량을 높여야 하는 제한이 따른다. 그러므로, 상당량의 지방이 존재할 것을 요구하지 않고, 음식물 및 식료품과 같은 영양물 전달 체계(nutritional delivery system)로 성공적으로 편입됨으로써, 소비자에게 보다 다양하고 유익한 식품 선택을 할 수 있는 새로운 형태의 식물스테롤의 제공이 요구된다.
이에 본 발명자들은 상기와 같은 점을 감안하여 식물스테롤을 이용한 다이어트 효능이 우수한 기능성 조성물을 제공하고자 광범위하게 연구하였으며 그 결과 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 노카디아 속 NES115 균주(기탁번호 KACC-91437)를 선별, 상기 균주를 이용한 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 방법을 확립하여(특허출원번호: 10-2009-0021154호) 얻어진 콜레스테롤 산화효소와 식물스테롤을 반응시켜 식물스테롤 발효물을 얻었으며, 이를 이용하여 체중감량 및 체지방 개선 효능에 우수한 효능을 가지는 기능성 조성물을 제조하게 되었다.
본 발명의 목적은 효과적인 체중감량효과를 나타내고 신체의 제 기능을 유지 또는 개선시킬 수 있는 다이어트 영양조성물을 제공하는 것이다. 이에 본 발명에서는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주(기탁번호 KACC-91437)를 이용하여 생리활성이 우수한 콜레스테롤 산화효소를 대량생산하여 이 배양액에 식물스테롤을 일정량 반응시켜 체중감량 및 체지방 개선 효능이 우수한 식물스테롤 발효물을 대량생산할 수 있었고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은, 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주 배양액을 이용하여 식물스테롤 발효물을 대량생산하여 체중감량 외에 체지방 개선에 우수한 효능을 얻을 수 있도록 하는 다이어트 기능성 조성물을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 방법은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주에서 생산된 콜레스테롤 산화효소가 함유된 균주 배양액에 식물스테롤을 0.5 내지 10% 첨가하여 반응시키는 식물스테롤 발효단계를 포함하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용한 식물스테롤 발효물을 대량생산하는 것으로 이루어진다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 적용은 하기 발명의 상세한 설명란으로부터 당업자에게 명백하게 드러날 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법에 있어서, 기탁번호 KACC-91437의 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 각종 질소원, 탄소원 및 미량무기물을 함유하는 발현 배지에서 대량 배양하는 것을 특징으로 한다.
또한, 생산배지의 조성은 효모추출물 10g/L 내지 300g/L, 맥아추출물 20g/L 내지 500g/L, 글루코스 0.5g/L 내지 50g/L, 황산암모늄 0.01g/L 내지 10g/L, 염산칼슘 0.01g/L 내지 10g/L, 황산철 0.01g/L 내지 10g/L, 황산마그네슘 0.01g/L 내지 10g/L, 인산칼륨 0.01g/L 내지 10g/L으로 구성되고, 여기에 콜레스테롤 산화효소의 발현을 도와주는 유도체로 식물스테롤을 1g/L 내지 100g/L 함유함을 특징으로 한다.
또한, 대량 배양시 배양온도 25℃ 내지 35℃, pH2 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 압력 압력 0.5 내지 1.5 mbar, 공기 공급량 5내지 40 L/min 조건으로 3~7일 배양하는 것을 특징으로 한다.
또한, 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법에 있어서, 각종 질소원, 탄소원 및 미량무기물을 함유하는 발현 배지에서 기탁번호 KACC-91437의 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용하여, 콜레스테롤 산화효소를 대량 배양한 후, 원심분리하여 얻은 콜레스테롤 산화효소를 함유한 배양액에 식물스테롤 0.5 내지 10%를 넣고 반응온도는 30℃ 내지 38℃, pH5 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 공기 공급량 1내지 20 L/min로 1내지 5일간 반응을 진행하는 것을 특징으로 하는 콜레스테롤 산화효소를 이용하는 것을 특징으로 한다.
또한, 기능성 조성물로 식물스테롤 발효물을 주성분으로 함유하는 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 것을 특징으로 한다.
또한, 기능성 조성물인 식물스테롤 발효물을 주성분으로 하고, 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 체지방 개선효능이 있는 기능성 조성물 외에 식이섬유, 대두분리단백펩타이드, 카르니틴 등 기타 식품 성분을 함유하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 액상 또는 음료 형태인 것을 특징으로 한다.
또한, 기능성 조성물인 식물스테롤 발효물을 주성분으로 하고, 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 체지방 개선효능이 있는 기능성 조성물 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 체중감량 및 체지방 개선 효과가 있는 기능성 조성물에 관한 것으로, 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용하여 발효한 식물스테롤 발효물을 포함하는 체중감량 및 체지방 개선에 효과가 있는 기능성 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품은 독성 및 부작용이 없는 식품 성분을 배합하여 편리하게 섭취하게 함으로써 체중감량 외에 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시켜 체지방 개선에 있어서 우수한 효능을 얻을 수 있도록 하는 다이어트 기능성 조성물에 관한 것이다.
도 1은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주의 성장속도와 그로부터 생산되는 콜레스테롤 산화효소의 활성을 배양 시간에 따라 나타낸 그래프이다.
도 2는 콜레스테롤을 콜레스테롤 산화효소로 발효반응하여 생성된 콜레스테논(cholestenone)을 보여주는 것으로 콜레스테롤 발효전ㆍ후의 변화를 나타내는 HPLC 크로마토그램이다.
도 3은 식물스테롤의 주성분 중 하나인 campesterol을 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주로부터 생산되는 콜레스테롤 산화효소로 발효반응하여 생성된 캠페스테논(campestenone)을 보여주는 것으로 campesterol의 발효전ㆍ후의 변화를 나타내는 HPLC 크로마토그램이다.
도 4는 콜레스테롤 산화효소의 반응물인 식물스테롤의 210 nm와 240 nm에서 분석된 HPLC 크로마토그램이다.
도 5는 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주로부터 생산되는 콜레스테롤 산화효소에 의한 식물스테롤의 발효후의 성분변화를 나타내는 210 nm와 240 nm에서의 HPLC 크로마토그램이다.
도 6은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주로부터 생산되는 콜레스테롤 산화효소에 의한 식물스테롤의 주요성분의 발효전ㆍ후 정량분석 결과이다.
도 7은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주로부터 생산되는 콜레스테롤 산화효소에 의한 식물스테롤 발효물의 발효 날짜별 TLC 사진이다.
(A) UV detector (254 nm)를 이용하여 확인한 식물스테롤 발효물의 TLC 분석 결과
(B) 발색제(10% CuSO4 in 8% H3PO4)를 이용하여 확인한 식물스테롤과 식물스테롤 발효물의 TLC 분석 결과
1번-콜레스테롤; 2번-콜레스테논(식물스테롤 발효물의 위치); 3번-식물스테롤; 4번-발효 1일차 식물스테롤 발효물; 5번-발효 2일차 식물스테롤 발효물; 6번-발효 3일차 식물스테롤 발효물
도 8은 식물스테롤 발효물의 체중감량 효능을 나타낸 동물실험 결과 그래프이다.
도 9는 식물스테롤 발효물의 혈중지질 농도변화를 나타낸 동물실험 결과 그래프이다.
도 10은 식물스테롤 발효물의 체지방 형성 억제효능을 나타낸 동물실험 결과 그래프이다.
이하 본 발명을 좀 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다. 진술한 바와 같이, 본 발명은 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주 배양액에 일정량의 식물스테롤을 공급하여 발효시키는 식물스테롤 발효단계를 포함하는 식물스테롤 발효물 대량생산 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 상기 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115는 본 출원인에 의해 기 출원된 것으로 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115, KACC-91437이며, 생리활성이 우수한 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 방법은 본 출원인에 의하여 대한미국 특허 제10-2009-0021154호에 상세히 기재되어 있다.
보다 상세한 대량생산 방법은 하기와 같다. 본 발명에서는 먼저 종균배양을 위해 콜레스테롤 산화효소의 발현을 돕기 위해 첨가되는 유도체인 식물스테롤이 첨가되지 않은 일반 YM배지에 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115를 30L 규모의 발효조에 접종하여 24시간 내에 적절한 균체량을 얻어낼 수 있도록 배양시키는데, 이는 계속되는 대량배양단계의 일정한 배양시간 유지와 균체의 활성능력에 매우 중요하다. 이어지는 배양단계는 300L 규모의 발효조에 앞서의 종균 배양액을 1%이상 접종하여 30L와 동일하게 24시간 배양하여 적절한 균체량을 얻어낸 다음 이를 1 ton 규모의 발효조에 1%이상 접종하여 대량배양을 실시한다. 본 발명의 대량배양 단계는 세포성장단계로서, 먼저 콜레스테롤 산화효소의 발현 및 분비에 알맞은 세포량이 될 때까지 세포를 양적으로 증대시키는 과정으로 배양온도 25℃ 내지 35℃, pH2 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 압력 압력 0.5 내지 1.5 mbar, 공기 공급량 5내지 40 L/min이었다. 대량배양의 초반부에는 균체들의 용존산소량을 1% 이상, 종배양액을 1%이상 접종하고, 탄소원으로 글루코오스와 유도체로 식물스테롤을 사용하여 원하는 콜레스테롤 산화효소의 발현 및 분비를 유도한다. 대량배양단계 초반부에서는 균체들의 왕성한 호흡작용으로 인해 용존산소량이 급격히 고갈되어 일반적으로 순산소를 공급하는 방법을 사용하나, 본 발명에서는 공기공급량 5내지 40 L/min, 압력 0.5 내지 1.5 mbar, 교반속도 200 내지 500rpm의 물리적 조건을 조절하는 것을 대량배양단계 초반부에서부터 배양 종료시까지 적용하므로써 용존산소량을 1% 이상 유지할 수 있었다. 이로 인하여 대규모 발효조에서 순산소를 사용하지 않고도 용존산소값을 일정수준 이상으로 유지하여 생산비용을 감소시킬 수 있다.
본 발명에서 사용된 대량배양배지는 효모추출물 10g/L 내지 300g/L, 맥아추출물 20g/L 내지 500g/L, 글루코스 0.5g/L 내지 50g/L, 황산암모늄 0.01g/L 내지 10g/L, 염산칼슘 0.01g/L 내지 10g/L, 황산철 0.01g/L 내지 10g/L, 황산마그네슘 0.01g/L 내지 10g/L, 인산칼륨 0.01g/L 내지 10g/L으로 구성되고, 여기에 콜레스테롤 산화효소의 발현을 도와주는 유도체로 식물스테롤을 1g/L 내지 100g/L을 첨가하였으며, 이는 세포성장에 필요한 질소원, 탄소원, 미량금속 등을 첨가하여 하기 표 1에 나타낸 바와 같은 배지 조성으로 기본적인 배양공정에 대한 실험을 수행하였고, 원하는 균체량 및 콜레스테롤 산화효소의 활성을 얻기 위해 7일 이상 소요되는 세포성장 구간을 5일로 단축할 수 있었다. 상기 글루코스와 같은 탄소원을 고갈시킨 후, 발현 유도물질이면서 세포의 탄소원으로 사용되는 식물스테롤을 첨가하여 배양 시, 회분배양 중반기에서부터는 세포성장은 둔화되고, 증가한 세포량으로부터 효과적으로 원하는 단백질인 콜레스테롤 산화효소를 얻을 수 있게 된다.
본 발명의 식물스테롤 발효물 대량생산방법은 우선 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115를 글루코스를 탄소원으로 하여 배양하며, 생리활성이 우수한 콜레스테롤 산화효소를 얻기 위하여 식물스테롤을 유도체로 일정량 첨가하여 배양한 다음, 상기 균주 배양액에 식물스테롤을 첨가하여 일정시간 반응하므로 식물스테롤 발효물이 생산되도록 한다.
보다 상세한 식물스테롤 발효물 생산 방법은 하기와 같다. 대량배양단계가 끝난 후 배양을 멈추고 12,000rpm으로 원심분리하여 균체와 균 배양액을 분리한 상기 배양액과 식물스테롤 0.5 내지 10%를 반응조에 넣고 반응한다. 이때 반응온도는 30℃ 내지 38℃, pH5 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 공기 공급량 1내지 20 L/min이었다. 원하는 식물스테롤 발효물을 얻기 위해 1내지 5일간 반응을 진행하였다.
다음의 실시예로서 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
실시예 1. 생리활성이 우수한 콜레스테롤 산화효소의 발효조를 이용한 대량생산
1-1. 본 발명 콜레스테롤 산화효소의 발효조를 이용한 대량 생산(1)
식물스테롤을 발효하는데 필요한 생리활성이 뛰어난 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 균주는 기탁번호 KACC-91437의 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115를 사용하였고, 원하는 효소인 콜레스테롤 산화효소를 효과적으로 생산하기 위해서 표 1에 나타낸 바와 같은 배지 조성으로 기본적인 발효공정에 대한 실험을 수행하였다. 본 발명에 사용한 식물스테롤은 진용내츄럴(주)에서 구입하여 사용하였다.
효소 대량생산을 위해 300L 발효조(Fermentec, Korea)에 실험실 10L 배양조에서 얻어진 최적 배지 조성(1% yeast extract, 2% malt extract, 0.8% glucose, 0.2% phytosterol, 소포제로서 자당지방산에스테르 0.1%, 미량금속으로 MgSO4·7H2O 0.001%, CaCl2·2H2O 0.001%, FeSO4·7H2O 0.001%, K2HPO4 0.001%, (NH4)2SO4 0.001%, pH 7.0)을 그대로 적용하여 200 L 배양하였다. 발효조 조건은 30℃, 250 rpm으로 일정하게 유지시켜주고 통기량(aeration)은 40 L/min 주입하였다. pH의 경우 초기 배양액의 pH를 7.0으로 맞춰주고 별도로 조절은 하지 않았다. 배양 기간 동안 24시간 간격으로 배양액을 취해 균 성장과 효소 활성을 조사하였다. 균 배양 결과 3일차부터 활성이 거의 2배씩 높아져 7일차에 이르렀을 때는 100 mU/mL까지의 높은 활성을 나타냈다. 균 성장 또한 flask에 비하여 빠르게 진행되었고 이에 따라 효소 생산도 앞당겨진 것으로 나타났다(도 1).
표 1
Figure PCTKR2010002024-appb-T000001
실시예 2. 식물스테롤 발효물 확인 및 정량
2-1. 본 발명 콜레스테롤 산화효소를 이용한 식물스테롤 발효물의 HPLC 확인 및 정량(1)
체지방 축적 억제 및 지방대사 관련 효소발현 억제를 통한 체중감소 효능이 있다고 알려진 콜레스테롤 산화효소에 의한 변환된 형태의 식물스테롤 발효물을 얻기 위해 3일간 발효반응을 실시하였다. 이때 발효과정에서 콜레스테롤 산화효소에 의한 식물스테롤의 변화를 확인 및 정량하기 위해 먼저 콜레스테롤을 콜레스테롤 산화효소로 3일간 반응하여 일별로 변화된 peak 패턴을 HPLC로 확인하였다(도 2).
분석에 사용된 HPLC는 Waters 시스템(600 controller, Delta 600 pump 그리고 2487 UV detector)을 사용하였고, 컬럼은 Symmetry C18(5 μm, 4.6×250 mm, Waters)을 사용하였다. 이동상은 100% 메탄올을 사용하였고, 이동상 유속을 0.8 mL/min로 하여 종결된 반응액 20 μL를 주입한 뒤 UV 210 nm와 240 nm에서 각각의 기질이 분해된 양과 생성물의 양을 분석하였다.
그 결과 발효시간이 지날수록 210 nm에서 콜레스테롤의 발효된 형태인 콜레스테논 peak가 원래의 콜레스테롤 peak 앞쪽에 생성되는 것을 확인할 수 있었고, 식물스테롤의 주성분들인 campesterol, sitosterol 그리고 stigmasterol도 콜레스테롤 산화효소로 발효 후 동일한 HPLC 크로마토그램 패턴을 나타내었다. 도 2, 3에서와 같이 콜레스테롤과 campesterol를 콜레스테롤 산화효소로 발효 반응시의 동일한 HPLC 크로마토그램 패턴결과를 확인할 수 있다. 특히, 콜레스테롤과 식물스테롤의 경우 콜레스테롤 산화효소 발효 전 210 nm에서 detect한 HPLC 크로마토그램에서는 peak를 확인할 수 있으나, 240 nm에서는 생성된 peak가 생성되지 않았다(도 4). 그러나 발효후에는 240nm에서 콜레스테논과 식물스테롤의 주성분들인 campesterol, β-sitosterol 그리고 stigmasterol의 발효된 형태인 campestenone, β-sitostenone 그리고 stigmastenone의 peak를 확인할 수 있었다. 식물스테롤의 경우 콜레스테롤처럼 단일물이 아니라서 도 5에서 보는바와 같이 발효 후 210 nm에서는 발효된 형태와 발효되지 않은 형태의 peak가 겹침현상이 일어났다.
이에 근거하여 발효과정에서 콜레스테롤 산화효소에 의한 식물스테롤 주성분인 campesterol, β-sitosterol 그리고 stigmasterol의 변화 및 함량을 분석하기 위해 먼저, 단일물질의 campesterol, β-sitosterol 그리고 stigmasterol을 구입하여 각각에 대한 농도별 HPLC 분석을 통한 표준곡선(standard curve)을 작성하였다. 이는 발효된 유효성분들에 대한 시판되는 표준물질을 구입할수 없는 이유로 콜레스테롤을 콜레스테롤 산화효소로 발효시킨 후 생성된 콜레스테논의 HPLC 분석결과를 바탕으로 각각의 campesterol, sitosterol 그리고 stigmasterol을 기질로서 콜레스테롤 산화효소에 반응시킨 후 기질이 감소된 양만큼 생성된 발효산물의 생성량을 1:1로 계산하여 기질의 감소량으로 생성된 발효물의 생성량에 대한 표준곡선을 작성하여 정량하였다. 그 결과, 식물스테롤의 유효성분 stigmasterol, campesterol, β-sitosterol은 72 시간의 발효 후 각각 유효 성분에 대하여 65.3%(90.5㎍/L의 stigmastenone), 74.5% (162.5㎍/L의 campestenone), 78.2% (243.9㎍/L의 β-sitosternone)의 전환률을 나타내므로, 식물스테롤의 유효성분 전환율은 50%이상의 유효성분 전환율을 나타내었다. 추가실험으로 72시간 이상 식물스테롤을 발효시, 콜레스테롤 산화효소의 기능이 이미 소실되어 미미한 정도의 전환만 이루어지므로 최적 발효반응시간은 72시간으로 최종 결정하였다(도 6).
2-2. 본 발명 콜레스테롤 산화효소를 이용한 식물스테롤 발효물의 TLC 확인(2)
콜레스테롤 산화효소를 이용한 발효반응에 의한 식물스테롤의 변화를 TLC로도 확인할 수 있었다. 먼저 TLC(Merck, Silica gel 60 F254)에 에탄올에 녹인 샘플을 5 ㎕씩 점적하였다. 점적 후 hexane, ethyl ether(1:3) 혼합액으로 전개한 후 UV lamp(Upland, UVGL-58)를 이용, 콜레스테롤과 콜레스테논 확인 실험을 통해 콜레스테논만 확인되는 254 nm의 자외선을 조사하여 확인하였다. 식물스테롤을 콜레스테롤 산화효소로 반응 후 일별로 변화된 형태를 254 nm의 자외선을 조사하여 식물스테롤 발효물을 확인하였다(도 7A). 또한, 발색으로 일별로 식물스테롤 발효물의 변화를 확인하기 위하여 발색제(10% CuSO4 in 8% H3PO4)을 뿌린 후 120℃로 가열하였다. 도 7B에서와 같이 발효 반응시간이 경과할수록 식물스테롤이 식물스테롤 발효물로 전환되는 양상을 확실하게 볼 수 있었고, UV detector (254 nm)로 측정시 발효 후 전환된 식물스테롤 발효물의 양이 점점 증가하는 패턴을 나타내고 있다.
실시예 3. 식물스테롤 발효물 대량 생산
3-1. 본 발명 콜레스테롤 산화효소를 이용한 식물스테롤 발효물의 대량생산(1)
HPLC와 TLC를 통해 확인된 최적의 식물스테롤 발효물을 생성 조건을 적용하여 식물스테롤 발효물을 대량으로 얻고자 하였다. 먼저, 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115의 대량배양단계가 끝난 후 배양을 멈추고 12,000rpm으로 원심분리하여 균체와 균 배양액을 분리한 상기 배양액에 식물스테롤 5%를 반응조에 넣고 3일간 발효 반응하였다. 이때 발효 반응온도는 37℃, pH7, 교반속도 250 rpm, 공기 공급량 1내지 20 L/min이었다. 얻어진 식물스테롤 발효물은 앞서의 결과와 동일하게 50% 이상이 콜레스테롤 산화효소에 의해 변환된 형태의 식물스테롤 발효물을 얻을 수 있었다.
실험예 1. 체중감량 효능에 대한 식물스테롤 발효물의 동물실험
실시예 3에서 생산된 식물스테롤 발효물의 체중감량 효능을 알아보기 위하여 동물실험을 수행하였다.
동물실험은 평균체중이 105 ± 5g (Sprague-Dawley rat, ♂)인 흰쥐를 일반사료(NIH#31M 사료)로 일주일간 환경에 적응시킨 후 일반식이군 1그룹과 고지방식이군 2그룹으로 나누었으며 사육실의 온도는 22 ± 2℃, 습도는 50∼55% 조건으로 유지시켰다. 식물스테롤 발효물을 적용하기에 앞서 일반식이군은 본래의 일반 식이를 공급하고, 고지방식이군 2그룹은 lard 20%가 함유된 고지방식으로 3주간 비만 유도한 다음, 평균 체중이 유사하도록 2군을 재조정한 후 샘플(식물스테롤 발효물)이 첨가된 사료를 직접 제작하여 8주간 동물 실험을 진행하였다. 각 군의 식이사료는 표 2와 같이 제조하였다.
표 2 각 군의 식이사료 제조
Diet composition ND (%) Experimental diet (%)
HFD HFD+SF
NIH#31M1) 85 68 68
Lard - 20 20
Corn starch 15 12 11
Slimpid - - 1
Total 100 100 100
1)NIH#31M: Ground whole wheat 35.2%, ground whole yellow corn 20%, ground whole oats 10%, wheat middlings 10%, fish meal (60% protein) 9%, soybean meal (47.5% protein) 5%, soy bean oil 2.5%, Alfalfa meal (17% protein) 2%, Dicalcium phosphate 1.55, Brewer's dried yeast 1%, Ground limestone 0.5%, Salt 0.5%, vitamine premix 0.25%, mineral premix 0.25%, Choline chloride 0.135, L-lysine 0.1%, DL-methionine 0.1%.
체중은 3일에 한번씩 일정시간에 측정하였으며, 사료 섭취량은 매일 오후 2시에 측정하여 전날 공급량에서 남아 있는 양을 빼서 일일 섭취량으로 계산하였다. 식물스테롤 발효물의 체중감량 효능은 도 8과 같이 나타났다. 식물스테롤 발효물군(HFD+SF)의 체중증가량을 일반식이군(ND)대비 고지방식이군(HFD)의 체중증가량을 대비하여 비교했을 경우 약 50%의 체중감량 효과가 있었다. 체중감소량은 각 군의 체중으로 다음과 같은 방법으로 계산하였다.
Figure PCTKR2010002024-appb-I000001
실험예 2. 식물스테롤 발효물의 콜레스테롤 및 중성지방 감소 효능
식물스테롤 발효물의 혈액내 콜레스테롤과 중성지방 감소효능을 알아보기 위하여 8주간의 실험이 끝난 후 혈액을 채취하였다. 혈액채취 전날 12시간 전부터 절식을 수행하여 식이에 대한 변화를 배제하였다. 혈액채취 시에는 ether 마취하에 개복한 즉시 심장정맥에서 10ml 주사기로 혈액을 채혈하였다. 혈청은 상온에서 20분간 방치하고 3000rpm에서 15분간 원심분리한 후 시료로 사용하였다.
총콜레스테롤의 경우, 고지방식이에 식물스테롤 발효물을 첨가하여 먹인 군(HFD+SF)과 고지방식이를 먹인 군(HFD) 모두 일반식이군(ND)과 유사한 결과를 보이므로 총콜레스테롤 함량 변화에는 영향을 미치지 않았다. 한편, 고지방식이를 먹인 군(HFD)은 일반식이를 먹인 군(ND)보다 LDL-콜레스테롤은 1.38배 증가하였으며, HDL콜레스테롤은 0.78배 감소하였다. 한편, 고지방식이에 식물스테롤 발효물을 첨가하여 먹인 군(HFD+SF)은 고지방식이를 먹인 군(HFD)에 비하여 LDL-콜레스테롤은 1.5배 감소하였으며, 이는 일반식이군과 거의 동일한 수치였다. 또한, HDL콜레스테롤은 고지방식군에 비해 1.25배 증가하였다(도 9). 그 외 간, 비장, 신장 무게에서는 거의 차이가 없었고, 혈당(glucose(mg/dL))에서도 각 군별로 유의적인 차이는 나타나지 않았다.
체지방 관련 지표로서 부고환 주위 지방 실험동물에서 적출한 부고환주위지방(좌/우), 장간막 지방, 복막후지방량 조직을 조심스럽게 적출하여 생리식염수로 세척한 다음 여과지로 수분을 제거한 후 지방조직의 중량을 측정하였다. 부고환 지방조직에서는 고지방식이군(HFD)과 비교 시 식물스테롤 발효물 첨가군(HFD+SF)이 약 7%의 감소효과를 나타내었고, 장간막 지방조직에서는 약 14.6%의 감소효과를, 그리고 복막후 지방조직에서는 약 20.4%의 감소효과를 나타내므로 지방조직에 있어서 평균 14% 정도의 감소효과를 나타내었다. 따라서, 식물스테롤 발효군 급여 시 체지방 축적을 대표하는 부고환 지방, 복막후 지방, 장간막 지방이 유의적으로 감소하므로 식물스테롤 발효물이 체지방량 감소에 매우 효과적인 소재임을 알 수 있었고, 이것은 체중 증가 억제 효과와 일치하였다(도 10).
제제예 1. 건강 식품의 제조
실시예 3의 기능성 조성물......................1000 ㎎
식이섬유 ......................................2000 ㎎
대두분리단백펩타이드...........................100 ㎎
카르니틴.......................................50 ㎎
비타민 혼합물..................................20 g
비타민 A 아세테이트............................70 ㎍
비타민 E......................................1.0 ㎎
비타민 B1..........................................................0.13 ㎎
비타민 B2..........................................................0.15 ㎎
비타민 B6..........................................................0.5 ㎎
비타민 B12.........................................................0.2 ㎍
비타민 C.......................................10 ㎎
비오틴.........................................10 ㎍
니코틴산아미드.................................1.7 ㎎
엽산...........................................50 ㎍
판토텐산 칼슘.................................0.5 ㎎
무기질 혼합물.................................적 량
황산제1철.....................................1.75 ㎎
산화아연......................................0.82 ㎎
탄산마그네슘..................................25.3 ㎎
제1인산칼륨....................................15 ㎎
제2인산칼슘....................................55 ㎎
구연산칼륨.....................................90 ㎎
탄산칼슘.......................................100 ㎎
염화마그네슘..................................24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 2. 건강 음료의 제조
실시예 3의 기능성 조성물..................2000 ㎎
식이섬유.....................................3 g
구연산....................................1000 ㎎
올리고당...................................100 g
매실농축액...................................1 g
타우린.......................................1 g
유화제 .......................................3 g
정제수를 가하여 전체......................900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (9)

  1. 기탁번호 KACC-91437의 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 각종 질소원, 탄소원 및 미량무기물을 함유하는 발현 배지에서 대량 배양하여 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 생산배지의 조성은 효모추출물 10g/L 내지 300g/L, 맥아추출물 20g/L 내지 500g/L, 글루코스 0.5g/L 내지 50g/L, 황산암모늄 0.01g/L 내지 10g/L, 염산칼슘 0.01g/L 내지 10g/L, 황산철 0.01g/L 내지 10g/L, 황산마그네슘 0.01g/L 내지 10g/L, 인산칼륨 0.01g/L 내지 10g/L으로 구성되고, 여기에 콜레스테롤 산화효소의 발현을 도와주는 유도체로 식물스테롤을 1g/L 내지 100g/L 함유함을 특징으로 하는 콜레스테롤 산화효소의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서, 대량 배양시 배양온도 25℃ 내지 35℃, pH2 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 압력 압력 0.5 내지 1.5 mbar, 공기 공급량 5내지 40 L/min 조건으로 3∼7일 배양하는 것을 특징으로 하는 콜레스테롤 산화효소의 제조방법.
  4. 제 1항에 있어서, 각종 질소원, 탄소원 및 미량무기물을 함유하는 발현 배지에서 기탁번호 KACC-91437의 노카디아 속(Nocardia sp.) NES115 균주를 이용하여, 콜레스테롤 산화효소를 대량 배양한 후, 원심분리하여 얻은 콜레스테롤 산화효소를 함유한 배양액에 식물스테롤 0.5 내지 10%를 넣고 반응온도는 30℃ 내지 38℃, pH5 내지 8, 교반속도 200내지 500rpm, 공기 공급량 1내지 20 L/min로 1내지 5일간 반응을 진행하는 것을 특징으로 하는 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 기능성 조성물로 식물스테롤 발효물을 주성분으로 함유하는 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 것을 특징으로 하는 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 기능성 조성물인 식물스테롤 발효물을 주성분으로 하고, 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 체지방 개선효능이 있는 기능성 조성물 외에 식이섬유, 대두분리단백펩타이드, 카르니틴 등 기타 식품 성분을 함유하는 것을 특징으로 하는 식품.
  7. 제 6항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 액상 또는 음료 형태로 이루어진 것을 특징으로 하는 식품.
  8. 제 4항에 따라 생산된 식물스테롤 발효물을 주성분으로 하고, 체중감량 및 중성지방 및 콜레스테롤을 감소시키는 체지방 개선효능이 있는 기능성 조성물 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
  9. 제 8항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태로 이루어진 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
PCT/KR2010/002024 2010-04-01 2010-04-01 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품 WO2011122722A1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2010/002024 WO2011122722A1 (ko) 2010-04-01 2010-04-01 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2010/002024 WO2011122722A1 (ko) 2010-04-01 2010-04-01 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011122722A1 true WO2011122722A1 (ko) 2011-10-06

Family

ID=44712401

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2010/002024 WO2011122722A1 (ko) 2010-04-01 2010-04-01 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2011122722A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3845232A4 (en) * 2018-08-30 2022-05-04 Daisankasei Co., Ltd. NEW USE OF PHYTOSTENONE

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100102871A (ko) * 2009-03-12 2010-09-27 주식회사 벤스랩 체지방 분해에 관여하는 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 신규한 노카디아 속 ｎｅｓ115 균주와 이를 이용한 콜레스테롤 산화효소의 생산방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100102871A (ko) * 2009-03-12 2010-09-27 주식회사 벤스랩 체지방 분해에 관여하는 콜레스테롤 산화효소를 생산하는 신규한 노카디아 속 ｎｅｓ115 균주와 이를 이용한 콜레스테롤 산화효소의 생산방법

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEETHAM, P. S. ET AL.: "The characterization and interconversion of three forms of cholesterol oxidase extracted from Nocardia rhodochrous", THE BIOCHEMICAL JOURNAL, vol. 201, no. 3, 1 March 1982 (1982-03-01), pages 515 - 521 *
IKEDA, I. ET AL.: "Compest-5-en-3-one, an oxidized derivative of campesterol, activates PPARalpha, promotes energy consumption and reduces visceral fat deposition in rats", BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA, vol. 1760, no. 5, 23 March 2006 (2006-03-23), pages 800 - 807 *
KHMELNITSKY, Y. L.: "Detergentless microemulsions as media for enzymatic reactions. Cholesterol oxidation catalyzed by cholesterol oxidase.", EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY, vol. 176, no. 2, 15 September 1988 (1988-09-15), pages 265 - 271 *
MACLACHLAN, J. ET AL.: "Cholesterol oxidase: sources, physical properties and analytical applications.", JOURNAL OF STEROID BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY., vol. 72, no. 5, April 2000 (2000-04-01), pages 169 - 195, XP002478703, DOI: doi:10.1016/S0960-0760(00)00044-3 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3845232A4 (en) * 2018-08-30 2022-05-04 Daisankasei Co., Ltd. NEW USE OF PHYTOSTENONE

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20090181437A1 (en) Method for producing a conjugated linoleic acid glyceride
KR101361603B1 (ko) 체내 지질 개선 조성물
JP4231208B2 (ja) 骨粗鬆症の予防のための発酵乳由来の栄養補助食品
WO2009102152A2 (ko) 천연물을 이용한 발효물의 제조 방법 및 상기 방법에 의해 제조된 발효물을 포함하는 식품 또는 의약품
WO2018062914A1 (ko) 신규한 락토바실러스 사케이 및 이를 포함하는 조성물
EP1911849A1 (en) Prophylactic/ameliorating agent for menopausal disorder and functional beverage/food
KR100717742B1 (ko) 콜레스테롤 저하제，2차 담즙산 생산 억제제 및 음식품
WO2011122722A1 (ko) 콜레스테롤 산화효소를 제조하는 방법, 콜레스테롤 산화효소를 이용하여 식물스테롤 발효물을 생산하는 방법, 이 식물스테롤 발효물을 이용한 체지방 개선용 기능성 조성물, 식품 및 건강기능성식품
WO2020091192A9 (ko) 인체 흡수형 진세노사이드 및 오메가-6 지방산이 증진된 산양삼 숙성 복합발효물 및 그 제조방법
CA2267340A1 (en) Methods and compositions employing red yeast fermentation products
MX2009001782A (es) Agente mejorador de metabolismo de lipidos.
EP2746398A1 (en) Process for producing conjugated linolenic acid from linolenic acid employing Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, or Lactobacillus oris strains.
JP4800961B2 (ja) 付加的に発酵させたジスチラーズ・グレインの、高血糖値の予防及び／又は治療のための使用
WO2023043218A1 (ko) 바실러스 서브틸리스 낫또 배양균체 추출물을 포함하는 기억력 개선용 조성물
JPH10298083A (ja) 高脂血症治療用組成物および高脂血症対応食品
WO2003077904A1 (fr) Compositions renforçant l'activite biologique qui contiennent un aglycone d'isoflavone issu de germes de soja
JP2013227250A (ja) Ｎｒｆ２活性化剤およびその用途
KR100829543B1 (ko) 감마-아미노부틸산 함량이 증가된 유산균 발효물을포함하는 기억력 향상제
US20040131712A1 (en) Anti diarrhoea compositions
CN112616922A (zh) 缓解非酒精性脂肪肝的发酵乳制品及其制备方法
EP3370751B1 (en) Lentil extract with cholesterol lowering and prebiotic activity
Giampapa Every man takes the limits of his own field of vision for the limits of the world.
WO2022243933A1 (en) Nutraceutical composition with probiotics, prebiotics and palm date pulp
EP1424073A1 (en) Anti diarrhoea compositions
CA2198560A1 (en) Food products containing bacteria with cholesterol lowering activity

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10849044

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 10849044

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1