WO2011025167A2 - 2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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윤영주
이진수
유제만
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Definitions

  • composition for preventing or treating cancer comprising 3-nitropyridine derivative compound substituted at the 2, 6-position or a pharmaceutically acceptable salt thereof
  • the present invention is a composition for preventing or treating cancer comprising the 3-nitropyridine derivative compound substituted at the 2, 6 position or a pharmaceutically acceptable salt thereof, use thereof, method for preventing or treating cancer using the same and It relates to a method of inhibiting the mRNA expression of the heat shock protein used.
  • heat shock factor 1 (hereinafter referred to as HSFl) is one of several heat shock transcription control factors, fami ly, and is most closely related to the expression of heat shock protein. Due to stimulating factors such as external heat stimulation, trauma, stress, heavy metals, hypoxia, HSF1 is present as a monomer in the cytoplasm, and when external stimulation comes, it forms a trimer and enters the nucleus through phosphorylation. The combination eventually produces the heat shock proteins.
  • heat shock proteins include Heat shock protein (HSP) 27, 40, 60, 70,
  • HSF1 Glucose-regulated protein
  • GRP94 Glucose-regulated protein
  • heat shock proteins are closely related to cancer cell proliferation, differentiation, metastasis, death and recognition by the immune system. Ta Therefore, the heat shock protein overexpressed in cancer cells is particularly closely related to the apoptosis of cancer cells, and therefore, the development of anti-cancer drugs has been developed (Vol loch and Sherman 1999; Nylandsted et al 2000a, 2000b; Ciocca et al. 2003; Gyrd-Hansen et al 2004).
  • an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, comprising a 2-nitropyridine derivative compound substituted with 2, 6-position represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. It is.
  • Another object of the present invention is to prevent or treat cancer of a composition comprising a 3—nitropyridine derivative compound substituted with 2, 6-position represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. To provide a purpose.
  • Another object of the present invention is a 3-, 2-substituted 3-position represented by Formula 1 It is to provide a method for preventing or treating cancer using a composition comprising a nitropyridine derivative compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Another object of the present invention is to heat the cells by contacting the composition comprising a 2-nitropyridine derivative compound substituted with 2, 6-position represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof
  • a 2-nitropyridine derivative compound substituted with 2, 6-position represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof By suppressing the expression of shock factor 1 protein, it provides a method of inhibiting the expression of mRNA of the heat shock protein in the cell.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises a 3-nitropyridine derivative compound substituted with 2 ′ 6-position represented by the following Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • 3 ⁇ 4 is H; Hydroxy; Di alkylamino which is C 2 to C 6 ; C 2 to C 6 straight or branched chain of the alkyl-amino; C 2 to C 6 straight chain or ground hydroxy alkyl; C 3 to C 6 linear or pulverized dihydroxy alkyl; Alkoxy alkyl which is C 3 to C 6 ; Or a saturated or unsaturated 5 or 6 membered heterocyclic compound containing 1 to 3 heteroatoms selected from N, 0 and S, which is unsubstituted or substituted with an alkyl group of d to C 3 , wherein ⁇ is a ratio. With or without symmetric carbon,
  • 3 ⁇ 4 is H; Or d to C 4 straight or pulverized alkyl; Or substituted or unsubstituted
  • C 3 to C 6 is a cyclic alkyl group
  • Ri and R 2 combine with each other to form a saturated or unsaturated 5- or 6-membered heterocyclic compound, wherein the hetero ring contains 1 to 3 hexanes selected from N, 0 and S; Terteroatoms, wherein the hetero ring is unsubstituted or substituted with d to c 5 linear or pulverized alkyl, c 2 to c 5 linear or branched hydroxyalkyl, or hydroxy substituted
  • ⁇ 2i> 3 ⁇ 4 is indazole-5-yl; Or indazole-6-day,
  • N is an integer of 0 to 3.
  • the compound represented by Formula 1 is Ri, H, hydroxy, methoxy, pyridinyl, ' 1, 3-dioxalan group, morpholine, substituted or unsubstituted piperazine, N- Methylpiperazine or NR 4, wherein 3 ⁇ 4 are each independently hydrogen, methyl, t-butyl, moruponyl or N-methylpiperazine; 3 ⁇ 4 is H, methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, cyclopropyl, or t-butyl; Or! ⁇ and R2 combine to 4-hydroxypiperidin-1-yl, piperazine-
  • n is an integer of 0-3.
  • the pharmaceutically acceptable salts mean salts commonly used in the pharmaceutical industry, for example, inorganic ionic salts, hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, Inorganic acid salts, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, ⁇ -luenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, citric acid, maleic acid , Succinic acid, oxalic acid, benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, manderic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid, galacturonic acid, glutamic acid, glutaric acid, glucuronic acid, aspartic acid, ascorbic acid, carbonic acid, Organic acid salts, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulf
  • 3-nitropyridine derivative of the 2, 6-position of the compound of Formula 1 of the present invention is Korean Patent Application No. 10-1999—0064403, Korean Patent Application No. 10-1999- It may be prepared according to the method described in 0053295.
  • the compound represented by Compound 1 according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is an inhibitor of the expression or activity of HSF1 protein, and is useful as an agent for preventing and treating cancer through such physiological activity.
  • the anticancer effect of the compound represented by Formula 1 is a novel use that has not been identified before the present invention.
  • the present inventors have conducted WST-1 assay on human cancer cell lines such as colon cancer, pancreatic cancer, lung cancer, and breast cancer. It exhibited a growth inhibitory effect (GIso) of 50% from 39 ⁇ . After transplanting a colorectal cancer cell line into immunodeficient mice, Compound 1 was administered intraperitoneally to confirm that the growth of cancer tissues was inhibited.
  • HSFKHeat shock factor 1 inhibition means that HSF1 is activated to act as a transcriptional regulator protein to reduce or block the activity of HSF1 acting on the carcinogenic process. Inhibition of HSF1 inhibits cell growth and induces cell death, thereby preventing or treating cell proliferative diseases.
  • cell proliferative disease refers to a disease in which malignant and nonmalignant hyperproliferative cell populations are formed that look morphologically different from surrounding tissue, and a representative example of such cell proliferative disease is cancer.
  • anticancer refers to an action of inhibiting or killing the proliferation of cancer cells, and refers to both prevention and treatment of cancer.
  • prevention refers to any action that inhibits cancer formation or delays the onset of administration of the composition.
  • treatment means any action that improves or advantageously changes the symptoms of the disease by administration of the composition.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be used for the prevention or treatment of colon cancer, stomach cancer, prostate cancer, breast cancer, kidney cancer, liver cancer, brain tumor, lung cancer, uterine cancer, colon cancer, bladder cancer, pancreatic cancer, blood cancer, etc. It is not limited to these. More preferably, the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the prevention or treatment of colorectal cancer, pancreatic cancer, breast cancer, lung cancer, prostate cancer or stomach cancer.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may include additives such as pharmaceutically acceptable diluents, binders, disintegrants, lubricants, pH adjusting agents, antioxidants, dissolution aids, and the like within the scope of not impairing the effects of the present invention. .
  • Sugars, sugars, starch, microcrystalline cellulose, lactose (lactose monohydrate), glucose, di-manny, alginate, alkaline earth metal salts, clays, polyethylene glycols, anhydrous calcium hydrogen phosphate, or combinations thereof Water can be used; Binders, starch, microcrystalline cellulose, polymer Acidic silica, manny, di-manny, sucrose, lactose monohydrate, polyethylene glycol, polyvinylpyrrolidone (povidone), polyvinylpyrrolidone copolymer (copovidone), hypromellose, hydroxypropylfilel Loose, natural gum, synthetic gum, copovidone, gelatin, or a combination thereof may be used.
  • the disintegrating agent may be a starch or modified starch such as sodium starch glycolate, corn starch, potato starch or pregelatinized starch; Clay such as bentonite, montmorillonite, or veegum; Cell cellulose such as microcrystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose or carboxymethyl cellulose; Algins such as sodium alginate or alginic acid; Cross-linked saloses such as sodium croscarmel lose; Gums such as guar gum and xanthan gum; Crosslinked polymers such as crosslinked polyvinylpyridone (crospovidone); Effervescent preparations such as sodium bicarbonate, citric acid, or a combination thereof can be used.
  • Clay such as bentonite, montmorillonite, or veegum
  • Cell cellulose such as microcrystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose or carboxymethyl cellulose
  • Algins such as sodium alginate or alginic acid
  • Cross-linked saloses such as
  • Lubricating agents include talc, stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate, sodium lauryl sulfate, hydrogenated vegetable oils, sodium benzoate, sodium stearyl fumarate, glyceryl behenate, glyceryl monorate, glyceryl monostearate, Glycerylpalmitostearate, colloidal silicon dioxide, or a combination thereof can be used.
  • PH-adjusting agents include acidifying agents such as acetic acid, adipic acid, ascorbic acid, sodium ascorbic acid, sodium ether, malic acid, succinic acid, tartaric acid, fumaric acid, citric acid (citric acid), precipitated calcium carbonate, ammonia water, Basic agents such as glutamine, sodium carbonate, magnesium oxide, magnesium carbonate, sodium citrate, tribasic phosphate, and the like can be used.
  • Antioxidants may use dibutyl hydroxy toluene, butylated hydroxyanisole, tocopherol acetate, tocope, propyl gallate, sodium hydrogen sulfite, sodium pyrosulfite, and the like.
  • dissolution aids may be used sodium lauryl sulfate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters of polysorbate dung, sodium docuate, poloxamer and the like.
  • an enteric polymer may be included to prepare a delayed-release preparation.
  • a water insoluble polymer may be included to prepare a delayed-release preparation.
  • a hydrophobic compound may be included to prepare a delayed-release preparation.
  • a hydrophilic polymer may be included to prepare a delayed-release preparation.
  • the enteric polymer is insoluble or stable under acidic conditions of less than pH 5, and refers to a polymer that is dissolved or decomposed under specific pH conditions of pH 5 or higher.
  • hypromellose acetate succinate and hypromellose Phthalate hydroxypropyl methyl salo phthalate
  • hydroxymethyl ethyl cellulose phthalate cell cellulose acetate phthalate, cellulose acetate succinate, cellulose acetate maleate
  • cellulose benzoate phthalate Cellulose propionate phthalate
  • Enteric cellulose derivatives such as methyl cellulose phthalate, carboxymethyl ethyl cellulose, and ethyl hydroxyethyl cellulose, cellulose phthalate, and methyl hydroxyethyl cellulose
  • Styrene-acrylic acid copolymer methyl acrylate-acrylic acid copolymer, methyl methacrylate acrylic acid copolymer (e.g.
  • enteric acrylic acid copolymer such as octyl copolymer; Poly (methyl methacrylate) co-polymer (e.g. Eudragit L, Eudragit S, Evonik, Germany), poly (methacrylate acrylate) copolymer (e.g.
  • Eudragit L100- An enteric polymethacrylate copolymer such as 55); Vinyl acetate-maleic anhydride copolymer, styrene-maleic anhydride copolymer, styrene-maleic acid monoester copolymer, vinylmethyl ether-maleic anhydride copolymer, ethylene-maleic anhydride copolymer, vinyl butyl ether- Enteric maleic acid copolymers such as maleic anhydride co-polymer, acrylonitrile-methyl methacrylate, maleic anhydride copolymer, and butyl acrylate-styrene-maleic anhydride copolymer; And enteric polyvinyl derivatives such as polyvinyl alcohol phthalate, polyvinyl acetal phthalate, polyvinyl butyrate phthalate and polyvinyl acetacetal phthalate.
  • the water-insoluble polymer refers to a polymer that is insoluble in pharmaceutically acceptable water that controls the release of the drug.
  • the water insoluble polymer may be polyvinylacetate (such as colicoat SR30D), water insoluble polymethacrylate copolymer [such as poly (ethylacrylate-methyl methacrylate) copolymer (such as Eudra NE30D, Poly (Ethylacrylate-methylmethacrylate-trimethylaminoethylmethacrylate) copolymer (eg Eudragit RSP0), etc.], Ethyl salose, cellulose ester, cellulose Ether, cellulose acylate, cellulose dicylate, celrose triacylate, cellulose acetate, cellulose diacetate and cellulose triacetate.
  • polyvinylacetate such as colicoat SR30D
  • water insoluble polymethacrylate copolymer such as poly (ethylacrylate-methyl methacrylate) copolymer
  • the hydrophobic compound refers to a substance that does not dissolve in pharmaceutically acceptable water that controls the release of the drug.
  • Fatty acids and fatty acid esters such as, for example, glyceryl palmitostearate, glyceryl stearate, glyceryl bihenate, cetyl palmitate, glyceryl monooleate and threric acid;
  • Fatty acid alcohols such as cetostearyl alcohol, cetyl alcohol and stearyl alcohol; Waxes such as carnauba wax, beeswax, and microcrystalline wax;
  • Minerals such as talc, precipitated carbonate, calcium hydrogen phosphate, zinc oxide, titanium oxide, kaolin, bentonite, montmorillonite, and gum.
  • the hydrophilic polymer may be added to pharmaceutically acceptable water to control the release of the drug.
  • a polymer material that is dissolved.
  • Cellulose derivatives such as hypromellose, hydroxypropyl salose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, methyl cellulose and carboxymethyl cellulose sodium
  • Gums such as guar gum, locust bean gum, tragacantha, carrageenan, acacia gum, arabic gum, gellan gum, and xanthan gum;
  • Proteins such as gelatin, casein, and zein;
  • Polyvinyl derivatives such as polyviny
  • Eudragit E100, Evonik, Germany poly (ethyl acrylate-methyl methacrylate Hydrophilic polymethacrylate copolymers such as -triethylaminoethyl-methacrylatechloride) copolymers (eg, Eudragit RL, RS, Evonik, Germany); Polyethylene derivatives such as polyethylene glycol, and polyethylene oxide; Carbomer.
  • additives selected from colorants and fragrances may be selected and used to formulate the formulations of the present invention.
  • the range of the additives is not limited to the use of the above additives, and the above additives may be formulated by containing a dose in the usual range by selection.
  • compositions of the present invention may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups and aerosols, oral formulations, external preparations, suppositories, or sterile injectable solutions according to a conventional method. Can be used.
  • the present invention provides a use of the compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof mentioned above in the manufacture of a pharmaceutical preparation for the prevention or treatment of cancer.
  • the present invention is a method for preventing or treating cancer by administering an effective amount of the compound represented by the above formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a mammal including a human in need of cancer prevention or treatment To provide.
  • the term "administration" means introducing the pharmaceutical composition of the present invention to the patient in any suitable way, and the route of administration of the pharmaceutical composition of the present invention is a general route as long as it can reach the purpose organization It can be administered via.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered once or twice a day at regular time intervals.
  • the daily dosage of the compound represented by Formula 1 of the present invention is lmg to 200mg, which may vary depending on the severity, age, sex, and specificity of the patient.
  • the compound represented by Formula 1 of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof may prevent or treat cancer by inhibiting the expression or activity of HSF1 protein.
  • the present invention by contacting a composition comprising a compound represented by the above formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof in contact with a cell,
  • It provides a method of inhibiting the expression of mRNA of the heat shock protein in the cell by inhibiting the expression or activity of HSF 1 protein.
  • the compounds of the present invention can be usefully used for the treatment of cancer by effectively inhibiting the growth of cancer cell lines and HSF1.
  • Figure 1 is a micrograph observing the number and shape of cells over time of HCT-116 colon cancer cells treated with Compound 1 of the present invention.
  • FIG. 2 is a diagram showing the cleavage of PARP, a marker of cell death, by treating Compound 1 of the present invention with HCT-116 colon cancer cells at different concentrations.
  • 3 is a diagram showing the weight change of the nude mouse regression model by intraperitoneal administration of compound 1 of the present invention.
  • Figure 4 is a diagram showing the tumor size change of the nude mouse regression model by intraperitoneal administration of compound 1 of the present invention.
  • FIG. 5 is a view showing the results of measuring the weight of the tumor on the last day (day 18) of the nude mouse regression model by intraperitoneal administration of compound 1 of the present invention.
  • a [pRL-TK] vector a plasmid that always expresses constant Renilla luciferase, was purchased from Promega.
  • [pHSE-TA-Luc] and [pRL-TK] plasmids were simultaneously infected with colorectal cancer cell lines (HCT116, purchased from ATCC).
  • Colon cancer cells to which plasmids were introduced using 0.05% trypsin-EDTA were removed from the cell culture dish and seeded with 20,000 cells in each well of a 96-well assay plate. It was. After 18 hours of incubation in a 37 ° C. incubator containing 5% carbon dioxide in a medium containing 10% FBS, the compound [13 ⁇ 4 DMSO (Dimethylsulfoxide)] and the compound represented by Chemical Formula 1 of the present invention were dissolved in 1000 ⁇ in DMS0. Was added and incubated in a 37 ° C. incubator for 30 min (1/100 fold dilution).
  • thermal stratification transcription factor 1 The activity of thermal stratification transcription factor 1 is specific for fireflies luciferase and Renilla luciferase after thermal stratification at 44 ° C for 15 minutes, followed by 6 hours of incubation in a 37 ° C incubator. Separate substrates Beetle luciferin (Promega) and coelenterazine (Promega) were added sequentially 25 ⁇ after measurement.
  • Luminescence intensity by decomposition of the substrate was measured using a luminometer (Luminometer, Wallac 1420), the measured value is shown in Table 1 by calculating the activity deactivation (3 ⁇ 4>) through the following formula 1 (Measured firefly luciferase activity, which proportionally reflects the activity of HSF1, is a nonspecific cytotoxicity and transfection that occurs in each experimental group using the Renilla luciferase activity value expressed by a constantly expressing promoter. Deviation of the efficiency was corrected).
  • RLU relative luminescence unit
  • Firefly luciferase expression plasmid having a promoter regulated by HSF1 is [pRL-TK]: means a plasmid that constantly expresses constant Renilla luciferase.
  • Example 2 Confirmation of Growth Inhibition Effect of Human Colorectal Cancer Cell Line of Compound of the Present Invention
  • the growth inhibitory rate (%) of human colorectal cancer cell growth of Compounds 1, 11, 30, and 35 of the present invention was measured using a WST-1 assay.
  • Human colon cancer cell line HCT-116 was cultured in a medium containing 103 ⁇ 4> fetal bovine serum (FBS) at 37 ° C and 5% carbon dioxide, and cells were removed using 0.05% trypsin-EDTA. Came out.
  • FBS fetal bovine serum
  • control absorbance [DMS refers to the absorbance measured at 450nm 1 hour after the WST-1 reagent in 48 hours treated HCT-116 cell line, sample hop intensity: [Compound 1] 48 hours treatment) The absorbance measured at 450 nm after 1 hour of WST-1 reagent was added to the HCT-116 cell line.
  • Heat shock protein 70 whose expression is regulated by HSF1, plays an important role in the apoptosis of cancer cells. Therefore, the mRNA expression level of Heat shock protein 70 of Compound 1 of the present invention was measured by measuring the mRNA expression level of Heat shock protein 70 induced when heat-shock Compound 1 was treated with the following experimental method. It was confirmed.
  • Compound 1 of the present invention containing a vector containing an artificial HSF1 transcription start part inhibited the function of HSF1 even at the cellular level.
  • Example 4 Confirmation of Growth Inhibition Effect of Various Cancer Cell Lines of Compound of the Present Invention
  • the growth inhibition of various cancer cell lines of humans by Compound 1 of the present invention was measured by using a WST-1 assay.
  • Human cancer cell lines were cultured in a medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) at 37 ° C and 5% carbon dioxide, and cells were detached using 0.05% trypsin-EDTA.
  • FBS fetal bovine serum
  • Compound 1 of the present invention inhibited the growth of various cancer cells by 50% in the concentration range of 3 ⁇ to 39 ⁇ .
  • GI 50 of Compound 1 of the present invention for HCT-116, HCT-15, HT-29, and Mia PaCa-2 was 3 ⁇ , and for SW620, MDA-MB-231 and A549.
  • GI 50 was 4 ⁇ , 8 ⁇ and 5 ⁇ .
  • HCT-116 cells were seeded in 100 ⁇ 10 cell culture dishes at 10 ⁇ 10 5 counts. After 18 hours, the control group (0.1% DMS0) and ⁇ dissolved in the compound KDMS0 of the present invention were treated with the HCT-116 large intestinal cancer cells for 24 hours and 48 hours, and then the change in the cell morphology of the Nikon TE-300 fluorescence microscope Observed through. The result of photographing the result by x100 magnification is shown in FIG.
  • HCT-116 colorectal cancer cells treated with Compound 1 of the present invention compared to the control group treated with DMS0 only, the number of cells decreases over time and some cells fall from the bottom of the culture dish. And it was confirmed that the shape of the cell changed to the contracted circle. That is, the compound of the present invention through the experiment
  • HCT-116 cells were seeded in 100 ⁇ 10 cell culture dishes at 10 ⁇ 10 5 counts. After 18 hours, the control group was treated with DMS0 (0.13 ⁇ 4), and Compound 1 of the present invention was treated with lnM, 2 ⁇ , 5 ⁇ , 7 ⁇ , After treatment with ⁇ , 20 ⁇ and 30 ⁇ concentration and grown for 48 hours, the cells were removed from the culture dish by treatment with trypsin. 5 ml of PBS (phosphate buffered saline) was added and centrifuged twice at 1080 rpm for 5 minutes to remove trypsin.
  • PBS phosphate buffered saline
  • Compound 1 of the present invention was confirmed to increase the G2-M group compared to the control group treated only DMS0 in proportion to the concentration up to 10 ⁇ . At concentrations above 10 ⁇ , the apoptosis of cells that remained in the G2-M phase was induced, increasing the ratio of sub-Gl. Therefore, it was confirmed that Compound 1 of the present invention induced apoptosis in a concentration-dependent manner.
  • PARP poly (ADP-Ribose) polymerase
  • HCT-116 cells were inoculated with 10 ⁇ 10 cells in a 100 mm 3 cell culture dish. After 18 hours, Compound 1 was treated with ⁇ , 2 ⁇ , 5 ⁇ , 7 ⁇ , 10 ⁇ and 20 ⁇ concentrations and incubated for 48 hours. Cells treated to analyze cleavage of PARP by Compound 1 were dissolved in RIPA buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, ImM sodium vanadate, 0.5% sodium deoxycholate, 0.05% sodium deoxy sulfate) I was. The cell lysate was centrifuged at 1080 rpm to recover the supernatant, and the protein concentration of the recovered cell solution was measured using a Bradford reagent (Bio-Rad protein assay, USA).
  • RIPA buffer 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, ImM sodium vanadate, 0.5% sodium deoxycholate, 0.05%
  • the tumor size change by daily repeated repeated administration of compound 1 was observed for 18 days to confirm the anticancer effect.
  • the volume of the tumor tissue was 592.4 ⁇ 182.3 ⁇ 3 for vehicle contr, 345.9 ⁇ 163.6 ⁇ 3 for compound 1 and 427.7 ⁇ 169.3 ⁇ 3 for adriamycin.
  • Tumor growth inhibition rate (3 ⁇ 4) [1- ( ⁇ of test group / ⁇ of solvent control group)] X 100
  • mice On the last day of the experiment (day 18), the mice were regenerated and the tumors were excised and weighed. The results are shown in FIG. 5.
  • the vehicle contr was 494.7 mg for 1258 ° C, 665.6 ⁇ 318.0 mg for Compound 1, and 860.6 ⁇ 294.8 mg for adriamycin.
  • a statistically significant decrease in tumor weight was observed in the 50 mg / kg Compound 1 group (47.1%) (p ⁇ 0.05) and 31.6% in the positive control group (ADR 2 mg / kg). Tumor weight loss was seen. 4) Visual confirmation of tumor size
  • FIG. 6 which is a photograph taken from tissues of the (ADR 2 mg / kg) administration group and the compound K50 mg / kg) administration group, the compound 1 of the present invention was visually confirmed to have an excellent anticancer effect.
  • Compounds of the present invention can inhibit the expression of HSP by inhibiting the expression or activity of HSF1 protein.
  • the compounds of the present invention can induce the death of cancer cells by inhibiting the survival and growth of cancer cells, as a result can be used as an anticancer agent that can prevent or treat cancer.

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Abstract

본 발명은 2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 약학 조성물은 암세포주의 성장과 Heat shock factor 1의 활성을 효과적으로 저해함으로써 암 치료와 암 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물
【기술분야]
<ι> 본 발명은 2， 6 위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제 학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물， 이의 용도， 이를 이용한 암의 예방 또는 치료 방법 및 이를 이용한 heat shock protein의 mRNA발현을 억제하는 방법에 관한 것이다.
【배경기술】
<2> 문명 이 발달되어 갈수록 암의 발생률이 증가되고 있음에도 불구하고 암 환자 의 치료법은 외과적 수술， 방사선 치료 , 40여종의 강한 세포독성을 나타내는 항암물 질 투여에 의한 화학요법에 의존하고 있다. 그러나， 이 러한 치료법들은 대개 조기 암 환자나 특정 암에만 처치가 국한되어 있으므로 , 암으로 인한 사망은 계속 증가하고 있는 추세이다.
<3> 한편， Heat shock factor 1 (이하 HSFl)은 여 러 열 충격 전사 조절 인자 fami ly중 하나로， Heat shock protein의 발현과 가장 밀접 한 관련이 있다. 외부의 열 자극 , 외상， 스트레스 , 중금속， 저산소증 같은 자극요인에 의해 HSF1은 세포질에 단 량체로 존재하다가 외부의 자극이 오게 되면 삼량체를 이루어 핵 내로 들어가게 되고 인산화 과정을 거 쳐 유전자 내 특정 서 열과 결합하게 되어 최종적으로 Heat shock protein들을 생산해 내게 한다.
<4> 알려진 Heat shock protein들로는 Heat shock protein (HSP) 27, 40， 60, 70,
90 등과 Glucose-regulated protein (GRP) 78, GRP94 등이 있다. 이들 단백질은 외부 의 유독한 영향으로부터 세포를 보호하는 역할을 하거나， 단백질이 본래의 기능을 하 는데 중요한 단백질의 접 힘에도 관여한다. 이 같은 Heat shock protein의 기능은 종 양세포에서도 중요한 역할을 할 것이라고 여겨진다 . 실제， HSF1이 발암 과정의 직접 적 인 관련성 이 있다는 것이 밝혀지면서 , HSF1은 항암치료의 새로운 타겟으로 인지되 고 있다 (Chengkai .Dai et al . ,Cel l (2007 ) , 130 , 1005- 1018) . 또한 HSFl 특이적 siRNA 를 사용하여 HSF1 발현을 억제시키면 세포 성장이 억 제되면서 세포사멸 (apoptosis)이 유도되고， 암에서 Heat shock protein이 과도하게 발현이 된다는 것이 보고되 었다. 즉 , Heat shock protein는 암세포의 증식 , 분화， 전이， 사멸 그리고 면역 체계에 의 한 인지 등과 밀접하게 관련 되어 있음이 그동안의 여 러 연구에 의해서 알려졌다. 따 라서， 암세포에서 과발현된 Heat shock protein은 암세포의 세포 자살과 특히 더욱 밀접하게 관련되어 있으므로 이를 항암 타겟으로 한 약제 개발이 이루어지고 있다 (Vol loch and Sherman 1999； Nylandsted et al 2000a, 2000b; Ciocca et al 2003； Gyrd-Hansen et al 2004) .
<5> 또한， 최근 보고에 따르면 전립선 암 등 특정 암 세포주들에서 HSF1의 발현량 및 활성 이 크게 증가되었음이 보고되었다 (Tang, D.， et al 2005;Khaleque,M.A. , et al 2005) - 이러 한 사실은 개개의 Heat shock protein들을 타겟으로 하기보다는 이들 Heat shock protein들의 발현을 조절하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개발하 는 것이 훨씬 더 효율적 일 수 있음을 시사한다.
<6> 이 러 한 사실을 바탕으로， 현재까지 Heat shock protein을 타겟으로 한 암 예 방 또는 치료용 약학 조성물은 HSP90의 ATP 결합 부위를 목표로 한 geldanamycin과 그것의 유도체인 17-Al lylaminogeldanamycin, 17-Deme t oxyge 1 danamyc i n °1 있으며 , 이 들은 현재 임상 단계에 있다.
<?> 그러나, 그 외 Heat shock protein인 특히 HSF1를 전사 단계에서 조절하는 전 사조절 인자를 목표로 한 암 예방 또는 치료용 약학 조성물은 아직까지 개발되지 않 은 실정이다.
<8>
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
<9> 이러한 배경 하에서， 본 발명자들은 본 출원인에 의해 기 출원된 대한민국특 허 출원번호 : 10- 1999-0064403과 대한민국특허 출원번호 : 10- 1999-0053295에 기 재된 HBV(Hepat it is B virus) 및 HIV(Human Immunodef iciency Virus) 증식을 억제하는 효 과를 갖는 것으로 알려진 2, 6-위치가 치환된 3-니트로피 리딘 유도체들이 HSF1의 발 현 및 활성을 조절한다는 것을 발견하였다. 그리고 이 화합물들이 다양한 인체의 암 세포주와 성장을 억제시킴을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
<ιο> 따라서， 본 발명의 목적은 화학식 1로 표시되는 2， 6-위치가 치환된 3-니트로 피 리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
<ιι> 본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 2, 6-위치가 치환된 3— 니트로피 리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조 성물의 암 예방 또는 치료용 용도를 제공하는 것이다 .
<12> 본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 2， 6-위치가 치환된 3- 니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조 성물을 사용하여 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다 .
본 발명 의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 2， 6-위치가 치환된 3- 니트로피 리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조 성물을 세포와 접촉시켜 상기 세포에서 heat shock factor 1 단백질의 발현을 억제함 으로써 , 상기 세포에서 heat shock protein의 mRNA의 발현을 억 제하는 방법을 제공하 는 것이다 .
【기술적 해결방법】
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 2ᅳ 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유 도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료 용 약학 조성물을 제공한다.
【화학식 1]
Figure imgf000005_0001
상기 화학식 1에서
¾은 H; 하이드록시 ; C2 내지 C6인 디 알킬아미노; C2 내지 C6 인 직쇄 또는 분쇄 상 아미노알킬 ; C2 내지 C6 인 직 쇄 또는 분쇄상 하이드록시 알킬 ; C3 내지 C6인 직 쇄 또 는 분쇄상 디하이드록시 알킬 ; C3 내지 C6인 알콕시 알킬 ; 또는 치환되지 않거나 d 내 지 C3인 알킬기로 치환된 N, 0， S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하 는， 포화 또는 불포화된 5원자 또는 6원자의 헤테로고리 화합물이며， ^은 비 대칭 탄 소를 포함하거나 포함하지 않고，
¾는 H; 또는 d 내지 C4인 직쇄 또는 분쇄상 알킬 ; 또는 치환되거나 비치환된
C3 내지 C6인 시클릭 알킬기 이거나，
Ri 과 R2 가 서로 결합하여 포화 또는 불포화된 5원자 또는 6원자의 헤테로고리 화합물을 형성하고 , 이때 헤테로 고리에는 N, 0 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤 테로원자가 포함되며, 상기 헤테로 고리는 치환되지 않거나 d내지 c5인 직쇄 또는 분쇄상알킬， c2내지 c5인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬， 또는 하이드록시로치 환되며,
<2i> ¾는 인다졸 -5-일; 또는 인다졸 -6-일이고，
<22> n은 0 내지 3의 정수이다.
<23> 본 발명에서， 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이 Ri은 H, 히드록시， 메록시， 피리디닐， ' 1， 3-디옥살란기， 모르포린, 치환되거나비치환된 피페라진, N-메틸피페라 진 또는 NR4 이고 (여기서， , ¾는 각각 독립적으로 수소, 메틸, t-부틸, 모루포닐 또는 N-메틸피페라진이며); ¾는 H, 메틸， 에틸, 이소프로필， 이소부틸， 시클로프로 필， 또는 t-부틸이고; 또는！^과 R2가결합하여 4-히드록시피페리딘 -1-일, 피페라진-
1-일， 2，2，6，6-테트라메틸피페라진 -1-일, 4-하이드록시에틸피페라진 -1-일을 나타내 며; Rs는 인다졸 -5-일 또는 인다졸 -6-일이고; n은 0 내지 3의 정수인 것이 바람직하 다.
본 발명에서， 상기 화학식 1로표시되는 화합물 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염 중 바람직한 것은 다음과 같다:
1) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (메틸아미노) -3-니트로피리딘，
2) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-(이소프로필아미노) -3-니트로피리딘 ,
3) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노ᅳ 6-[ (N-메틸 -2-히드록시에틸)아미노] -3-니트로피 리딘,
4) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- (이소부틸아미노) -3-니트로피리딘,
5) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(4-히드록시피페리디노) -3-니트로피리딘 ,
6) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- (피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘,
7) 2-( 1H-인다졸 -5—일 )아미노 -6- [ (N-에틸 -2-히드록시에틸 )아미노] -3-니트로피 리딘，
8) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(t-부틸아미노) -3-니트로피리딘，
9) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[(2，2，6，6-테트라메틸피페리진 -4-일)] -3-니트 로피리딘，
10) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6- [ (2-피리딜)에탈아미노] -3-니트로피리딘 ,
11) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트 로피리딘, <36> 12) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- [(3-디메틸아미노 -2， 2-디메틸)프로필아미노
]-3-니트로피리딘，
<37> 13)2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-[ (N-[ 1， 3]-디옥살란 -2-일메틸 ) -메틸아미노] -
3-니 로피리딘，
<38> 14) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6-[ (1-(S)-메틸 -2-히드록시에틸)아미노] -3-니 트로피리딘,
<39> 15) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트 로피리딘，
<40> 16)2-( 1H-인다졸 -6-일 )아미노 -6- [2- (N , N-디메틸아미노)에틸아미노] -3-니트로 피리딘，
<4i> 17) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6-[(2-피리딜)메틸아미노] -3-니트로피리딘，
<42> 18) 2-(1Η-인다졸 -5—일)아미노 -6-[(1-메틸 -2-메록시)에틸아미노] -3-니트로피 리딘，
<43> 19) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6-[(4-메틸피페라진 -1-일)아미노 ]-3-니트로피 리딘，
<44> 20) 2-(1Η-인다졸 6-일)아미노 -6-[(4-모르포린 -1-일)아미노 ]-3-니트로피리딘,
<45> 21) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(N,N-디메틸아미노 )-3-니트로피리딘，
<46> 22) 2- (1H-인다졸 -6-일)아미노 -6-[( 4-피리딜)메틸아미노] -3-니트로피리딘，
<47> 23) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노—6— [(2-피리딜)에틸아미노] -3-니트로피리딘，
<48> 24) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6-(2-모르포리노에틸아미노) -3-니트로피리딘,
<49> 25) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[3- (이미다졸 -1-일)프로필아미노 ]-3-니트로 피리딘，
<50> 26)2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [( 2-아미노시클로핵실)아미노 ] -3-니트로피리 딘，
<5i> 27) 2- 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6- (메틸아미노 )-3-니트로피리딘，
<52> 28) 2- (1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-아미노 -3-니트로피리딘,
<53> 29) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6— (이소프로필아미노 )-3-니트로피리딘，
<54> 30) 2-(1Η-인다졸ᅳ 5-일)아미노 -6- (시클로프로필아미노) -3-니트로피리딘，
<55> 31) 2- 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [(2-히드록시 -1-히드록시메틸)에틸아미노] -
3-니트로피리딘，
<56> 32) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[(l-(S)-메틸 -2-히드록시에틸)아미노 ]-3-니 트로피리딘, <57> 33) 2-(lH-인다졸 -5-일)아미노 -6- [(2-모르포리노)에틸아미노] -3—니트로피리 딘，
<58> 34) 2-(1Η-인다졸 -6- -일)아미노 -6- (피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘,
<59> 35) 2-(1Η-인다졸 -5- -일)아미노 -6-(4-메틸피페라진 -1-일)— 3-니트로피리딘 ,
<60> 36) 2-(1Η- -인다졸 -6- -일)아미노 -6-(4-메틸피페라진 -1-일 )-3-니트로피리딘 ,
<61> 37) 2-(1Η-인다졸 -6- -일 )아미노 -6-(4-히드록시피페리디노) -3-니트로피리딘 ,
<62> 38) 2-(1Η- -인다졸 -5- -일)아미노 -6-[ (4-메틸피페라진 -1-일)아미노] -3-니트로피 리딘，
<63> 39) 2-(1Η-인다졸 -5- -일)아미노 -6- [ ( ί-부틸아미노)아미노] -3-니트로피리딘 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염 .
<64> 또한， 본 발명에서, 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이들의 약제학적으로 허 용 가능한 염 중 더욱 바람직한 것은 다음과 같다:
<65> 1) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- (메틸아미노 )-3-니트로피리딘，
<66> 11)2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트로 피리딘,
<67> 30) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- (시클로프로필아미노)— 3-니트로피리딘，
<68> 35) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(4-메틸피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염,
<69> 본 발명에서， 약제학적으로 허용 가능한 염은 의약업계에서 통상적으로 사용 되는 염을 의미하며， 예를들어 칼슴， 칼륨， 나트륨 및 마그네슘등으로 제조된 무기 이온염 , 염산， 질산， 인산, 브롬산， 요오드산, 과염소산, 주석산 및 황산등으로 제 조된무기산염, 메탄설폰산， 에탄설폰산, 벤젠설폰산, Ρ-를루엔술폰산， 나프탈렌설폰 산, 아세트산， 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산， 숙신산, 옥살산, 벤조산， 타르타르산， 푸마르산, 만데르산， 프로피온산， 구연산, 젖산， 글리콜산 ， 글루콘산， 갈락투론산, 글루탐산， 글루타르산， 글루쿠론산, 아스파르트산, 아스코르브산， 카본 산, 바닐릭산， 하이드로 아이오딕산등으로제조된 유기산염， 메탄설폰산， 에탄설폰 산， 벤젠설폰산， Ρ-를루엔설폰산 및 나트탈렌설폰산 등으로 제조된 설폰산염 , 글리 신, 아르기닌， 라이신 등으로 제조된 아미노산염 및 트리메틸아민， 트리에틸아민, 암 모니아, 피리딘， 피콜린 등으로 제조된 아민염 등이 있으나， 열거된 이들 염에 의해 본 발명에서 의미하는 염의 종류가 한정되는 것은 아니다.
<70> 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물인 2， 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유 도체는 대한민국특허 출원번호: 10-1999—0064403， 대한민국특허 출원번호: 10-1999- 0053295에 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다.
<71> 본 발명에 따른 화합물 1로 표시되는화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가 능한 염은 HSF1 단백질의 발현 또는 활성의 억제제이며, 이러한 생리활성을 통하여 암의 예방 및 치료용 제제로서 유용하다.
<72> 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 항암효과는본 발명 이전에는 밝혀진 바 없는새로운 용도로서, 본 발명자는 대장암， 췌장암， 폐암， 유방암등의 인간암세포 주에 대해 WST-1검정한 결과 3내지 39μΜ에서 50%의 성장 억제 효과 (GIso)를 나타 내었다. 대장암 세포주를 면역결핍 생쥐에 이식한후 화합물 1을 복강으로 투여하여 암조직의 성장이 억제됨을 확인하였다.
<73> 본 발명에서 용어， "HSFKHeat shock factor 1) 저해"란 HSF1이 활성화되어 전사조절 단백질로 작용하여 발암 과정에 작용하는 HSF1의 활성을 감소또는 차단시 키는 것을의미한다. HSF1저해를통하여 세포성장이 억제되고세포사멸이 유도되므 로 세포 증식성 질환을 예방또는 치료할 수 있다.
<74> 상기 용어 "세포 증식성 질환"은 주변 조직과 형태상 상이하게 보이는 악성 및 비악성의 과증식된 세포군이 형성되는 질환을의미하고， 이런 세포증식성 질환의 대표적인 예가 암이다.
<75> 본 발명에서 사용된 용어 "항암 "은 암세포의 증식을 억제하거나사멸하는 작 용을 의미하는 것으로, 암의 예방 및 치료 모두를 일컫는다.
<76> 본 발명에서 사용되는 용어 "예방 "은 조성물의 투여로 암 형성을 억제시키거 나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에 있어서，"치료"란 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
<77> 본 발명의 약학 조성물은 바람작하게는 대장암， 위암, 전립선암， 유방암， 신 장암， 간암, 뇌종양, 폐암， 자궁암, 결장암， 방광암， 췌장암， 혈액암등의 예방또는 치료에 사용될 수 있으며 이들로 한정되는 것은 아니다. 보다 바람직하게는 본 발명 의 약학 조성물은 대장암, 췌장암, 유방암， 폐암， 전립선암 또는 위암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
<78> 본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 효과를 해치지 않는 범위 안에서 약학적 으로 허용 가능한 회석제， 결합제, 붕해제, 윤활제， pH조절제， 산화방지제， 용해보 조제 등의 첨가제를 포함할 수 있다.
<79> 회석제는슈가, 전분， 미결정셀를로오스, 유당 (유당수화물), 포도당， 디 -만니 를， 알기네이트， 알칼리토금속류염， 클레이, 폴리에틸렌글리콜， 무수인산수소칼슘, 또는 이들의 흔합물등을사용할수 있으며; 결합제는 전분， 미결정셀를로오스, 고분 산성 실리카, 만니를， 디-만니를， 자당, 유당수화물， 폴리에틸렌글리콜， 폴리비닐피 를리돈 (포비돈), 폴리비닐피를리돈공중합체 (코포비돈)， 히프로멜로오스， 히드록시프 로필셀를로오스， 천연검, 합성검, 코포비돈， 젤라틴， 또는 이들의 흔합물 등을사용 할 수 있다.
<80> 붕해제는 전분글리콘산나트륨， 옥수수전분， 감자전분 또는 전호화전분 등의 전분 또는 변성전분; 벤토나이트， 몬모릴로나이트， 또는 비검 (veegum) 등의 클레이; 미결정셀를로오스, 히드록시프로필셀를로오스 또는 카르복시메틸셀를로오스 등의 셀 를로오스류; 알긴산나트륨 또는 알긴산 등의 알긴류; 크로스카멜로스 (croscarmel lose)나트륨 등의 가교 샐를로오스류; 구아검, 잔탄검 등의 검류; 가교 폴리비닐피를리돈 (crospovidone)등의 가교중합체 ; 중탄산나트륨， 시트르산등의 비 등성 제제， 또는 이들의 흔합물을사용할 수 있다.
<81> 윤활제는 탈크, 스테아린산, 스테아린산 마그네슘， 스테아린산칼슘， 라우릴 설페이트나트륨, 수소화식물성오일, 나트륨벤조에이트, 나트륨스테아릴푸마레이트, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴모노레이트， 글리세릴모노스테아레이트， 글리세릴팔 미토스테아레이트, 콜로이드성 이산화규소 또는 이들의 흔합물 등을사용할 수 있다.
<82> pH조절제는 초산， 아디프산， 아스코르빈산 , 아스코르빈산 나트륨， 에테르산 나트륨， 사과산， 숙신산, 주석산, 푸마르산, 구연산 (시트르산)과같은산성화제와침 강 탄산 칼슘， 암모니아수, 메글루민， 탄산 나트륨， 산화 마그네슴, 탄산 마그네슴, 구연산 나트륨， 삼염기칼슴인산염과 같은 염기성화제 등을사용할 수 있다.
<83> 산화방지제는 디부틸 히드록시 틀루엔, 부틸레이티드 히드록시아니솔, 초산 토코페롤， 토코페를, 프로필 갈레이트, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨등을사 용할수 있다.본발명의 선방출성 구획에서, 용해보조제는라우릴황산나트륨, 폴리소 르베이트 둥의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 도큐세이트 나트륨 , 폴록 사머 (poloxamer) 등을사용할 수 있다.
<84> 또한, 지연방출성 제제를 만들기 위해 장용성 고분자， 수불용성 중합체， 소수 성 화합물， 및 친수성 고분자를 포함할 수 있다.
<85> 상기 장용성 고분자는 pH5미만의 산성 조건하에서 불용성이거나또는 안정한 것으로， pH5이상인 특정 pH조건하에서 용해되거나또는분해되는 고분자를 말하며, 예를 들어, 히프로멜로오스아세테이트숙시네이트， 히프로멜로오스프탈레이트 (히드록 시프로필메틸샐를로오스 프탈레이트), 히드록시메틸에틸셀를로오스프탈레이트， 셀를 로오스아세테이트프탈레이트， 셀를로오스아세테이트숙시네이트， 셀를로오스아세테이 트말레이트,셀를로오스벤조에이트프탈레이트，셀를로오스프로피오네이트프탈레이트， 메틸샐를로오스프탈레이트 , 카르복시메틸에틸셀를로오스 및 에틸히드록시에틸셀를로 오스프탈레이트， 메틸히드록시에틸셀를로오스과 같은 장용성 셀를로오스 유도체 ; 스 티 렌-아크릴산 공중합체， 아크릴산메틸-아크릴산 공중합체， 아크릴산메틸메타크릴산 공중합체 (예컨대， 아크릴-이즈)， 아크릴산부틸-스티 렌-아크릴산 공중합체， 및 아크릴 산메틸 -메타크릴산 -아크릴산옥틸공중합체과 같은 상기 장용성 아크릴산계 공중합체 ; 폴리 (메타크릴산 메틸 메타크릴레이트) 공증합체 (예컨대 , 유드라짓 L, 유드라짓 S, 에보닉 , 독일 )， 폴리 (메타크릴산 에틸아크릴레이트) 공중합체 (예컨대， 유드라짓 L100-55)와 같은 장용성 폴리메타크릴레이트 공중합체 ; 아세트산비닐-말레인산 무수 물 공중합체 , 스티 렌-말레인산 무수물 공증합체， 스티 렌-말레인산모노에스테를 공중 합체 , 비닐메틸에 테르-말레인산 무수물 공중합체 , 에 틸렌-말레인산 무수물 공중합체， 비닐부틸에 테르-말레인산 무수물 공증합체 , 아크릴로니트릴 -크릴산메틸 · 말레인산 무 수물 공중합체， 및 아크릴산부틸 -스티 렌-말레인산 무수물 공중합체와 같은 장용성 말 레인산계 공중합체 ; 및 폴리비닐알콜프탈레이트 , 폴리비 닐아세탈프탈레이트 , 폴리비 닐부틸레이트프탈레이트 및 폴리비닐아세트아세탈프탈레이트와 같은 장용성 폴리비닐 유도체가 있다.
<86> 상기 수불용성 중합체는 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물 에 용해되지 않는 고분자를 말한다. 예를 들어 , 수불용성 중합체는 폴리비닐아세테이 트 (예컨대， 콜리코트 SR30D) , 수불용성 폴리메타크릴레이트 공중합체 [예컨대， 폴리 ( 에틸아크릴레이트 -메틸 메타크릴레이트) 공중합체 (예컨대， 유드라짓 NE30D， 폴리 (에 틸아크릴레이트-메틸메타크릴레이트 -트리메틸아미노에 틸메타크릴레이트)공중합체 (예 컨대， 유드라짓 RSP0)등]， 에틸샐를로오스 , 셀를로오스 에스테르， 셀를로오스 에 테르， 셀를로오스 아실레이트， 셀를로오스 디아실레이트， 샐를로오스 트리아실레이트， 셀를 로오스 아세테이트， 셀를로오스 디아세테이트 및 셀를로오스 트리아세테이트 등이 있 다.
<87> 상기 소수성 화합물은 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물에 용해되지 않는 물질을 말한다. 예를 들어， 글리세릴 팔미토스테아레이트 , 글리세릴 스테아레이트， 글리세릴 비헤네이트， 세틸 팔미 테이트， 글리세릴 모노 올레이트 및 스레아린산과 같은 지방산 및 지방산 에스테르류 ; 세토스테아릴 알코올， 세틸알코올 및 스테아릴알코을과 같은 지방산 알코을류 ; 카르나우바왁스， 밀납， 및 미결정왁스와 같은 왁스류 ; 탈크， 침강탄산칼슴， 인산일수소칼슘 , 산화아연 , 산화티탄， 카올린， 벤 토나이트， 몬모릴로나이트 및 비검과 같은 무기질 물질 등이 있다.
<88> 상기 친수성 고분자는 약물의 방출을 제어하는 약제학적으로 허용가능한 물에 용해되는 고분자물질을 말한다. 예를 들어， 덱스트린， 폴리덱스트린， 덱스트란, 펙 틴 및 펙틴유도체， 알긴산염， 폴리갈락투론산, 자일란, 아라비노자일란, 아라비노갈 락탄， 전분， 히드록시프로필스타치， 아밀로오스, 및 아밀로펙틴와같은당류; 히프로 멜로오스, 히드록시프로필샐를로오스, 히드록시메틸셀를로오스， 히드록시에틸셀를로 오스， 메틸셀를로오스및 카르복시메틸셀를로오스나트륨과같은셀를로오스유도체 ; 구아검， 로커스트 콩 검， 트라가칸타， 카라기난, 아카시아검， 아라비아검, 젤란검, 및 잔탄검과 같은 검류; 젤라틴, 카제인， 및 제인과 같은 단백질; 폴리비닐 알코올， 폴리비닐 피를리돈, 및 폴리비닐아세탈디에틸아미노아세테이트과 같은 폴리비닐유도 체; 폴리 (부틸 메타크릴레이트 -(2-디메틸아미노에틸)메타크릴레이트-메틸메타크릴레 이트) 공중합체 (예컨대， 유드라짓 E100, 에보닉， 독일)， 폴리 (에틸 아크릴레이트 -메틸 메타크릴레이드-트리에틸아미노에틸-메타크릴레이트클로라이드)공중합체 (예컨대, 유드라짓 RL, RS, 에보닉， 독일)과 같은 친수성 폴리메타크릴레이트 공중합체; 폴리 에틸렌 글리콜， 및 폴리에틸렌 옥사이드와 같은 폴리에틸렌 유도체; 카보머 등이 있 다.
<89> 이외에도착색제， 향료중에서 선택된 다양한 첨가제로서 약학적으로허용가 능한 첨가제를 선택 사용하여 본 발명의 제제를 제제화할 수 있다.
<90> 본 발명에서 첨가제의 범위가 상기 첨가제를 사용하는 것으로 한정되는 것은 아니며， 상기한 첨가제를 선택에 의하여 통상 범위의 용량을 함유하여 제제화할 수 있다.
<91> 본 발명의 약학 조성물은 통상의 방법에 따라 산제， 과립제， 정제， 캡슐제, 현탁액, 에멀견， 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형， 외용제， 좌제 또는 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
<92> 또한, 본 발명은 암 예방또는 치료를 위한 약제학적 제제를 제조하는데 앞서 언급한상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 사용하는 용도를 제공한다.
<93> 또한， 본 발명은 앞서 언급한상기 화학식 1로표시되는 화합물또는 이의 약 제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 암 예방또는 치료를요하는 인간을포함하는 포유류에게 투여함으로서 암을 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다 .
<94> 본 발명에서 용어, "투여 "는 어떠한적절한방법으로환자에게 본 발명의 약 학조성물을도입하는 것을 의미하며， 본 발명의 약학조성물의 투여 경로는목적 조 직에 도달할수 있는 한 일반적인 경로를통하여 투여될 수 있다. 경구투여, 복강내 투여， 정맥내 투여， 근육내 투여， 피하투여, 내피 투여， 비내 투여， 폐내투여， 직장 내 투여 , 강내 투여， 복강내 투여， 경막내 투여될 수 있으며 , 이에 제한 되지 않는 다.
<95> 본 발명의 약학 조성물은 일일 1회 또는 일정한 시간 간격을 두고 일일 2회 이상 투여될 수 있다.
<96> 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물의 일일 투여량은 lmg 내지 200mg 이 며， 이는 환자의 중증 , 나이， 성별 , 환자의 특이성에 따라 달라질 수 있다.
<97> 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가 능한 염은 HSF1 단백질의 발현 또는 활성을 저해하여 암을 예방 또는 치료할 수 있 다.
<98> 또한， 본 발명은 앞서 언급한 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약 제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 세포와 접촉시켜， 상기 세포에서
HSF 1 단백질의 발현 또는 활성을 저해시킴으로써 상기 세포에서 Heat shock protein 의 mRNA의 발현을 억제하는 방법을 제공한다.
<99>
【유리한 효과】
<ιοο> 본 발명의 화합물은 암세포주의 성장과 HSF1을 효과적으로 저해함으로써 암의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
<101>
【도면의 간단한 설명】
<102> 도 1은 본 발명의 화합물 1을 처리 한 HCT-116 대장암세포의 시간에 따른 세포 수 및 형 태를 관찰한 현미경 사진이다.
<103> 도 2는 본 발명의 화합물 1을 농도별로 HCT-116 대장암세포에 처리하여 세포사 멸의 marker인 PARP의 절단을 확인한 도이다.
<104> 도 3은 본 발명의 화합물 1의 복강투여에 의한 nude mouse regression model의 체중변화를 나타낸 도이다.
<105> 도 4는 본 발명의 화합물 1의 복강투여에 의한 nude mouse regression model의 종양크기 변화를 나타낸 도이다.
<106> 도 5는 본 발명의 화합물 1의 복강투여에 의한 nude mouse regression model의 최종일 (day 18)의 종양의 무게를 측정한 결과를 나타낸 도이다 .
<107> 도 6은 본 발명의 화합물 1의 복강투여에 의한 nude mouse regression model의 최종일 (day 18)의 종양조직의 사진이다.
<108> 【발명의 실시를 위한 형태】
<109> 이하， 실시예를통하여 본발명을상세히 설명하고자한다. 이들실시예는본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로， 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다 :
<110>
<ιιι> <실시예 1> 본 발명 화합물의 HSF1활성 억제효과 확인
<ιΐ2> 본 발명의 화합물 1， 11， 30및 35의 HSF1활성 억제효과를 확인하기 위해 다 음과 같은 이중 루시퍼라아제법을수행하였다. 한국생명공학연구원에서 HSF1이 결합 하는 염기서열 (HSE)을 PCR방법으로 제조하여 pTA-Luc플라스미드 (제조사: Clontech) 에 삽입하여, 열 층격 전사조절 인자 l(HSFl)의 활성에 비례하여 반딧불 루시퍼라제 (Firefly luciferase)의 발현이 증가하는플라스미드인 [pHSE-TA-Luc]를제조하였다. HSF1의 활성과 무관하게， 레닐라 루시퍼라제 (Renilla luciferase)를 항상 일정하게 발현하는 플라스미드인 [pRL-TK] 백터를 Promega 사에서 구입하여 사용하였다. [pHSE-TA-Luc]와 [pRL-TK] 플라스미드를 대장암세포주 (HCT116, 구입처: ATCC에서 구 매)에 동시에 감염시켰다.
<ιΐ3> 0.05%트립신 -EDTA(trypsin-EDTA)를 이용하여 플라스미드들이 도입된 대장암 세포를 세포배양접시로부터 떼어내고 96-웰 검정 플레이트의 각각의 웰 (well)에 20 ,000개의 세포를 접종하였다. 10% FBS가 포함된 배지에서 5% 이산화탄소를 포함하 는 37°C 배양기에 18시간배양한후， 대조군 [1¾ DMSO(Dimethylsulfoxide)]과본발명 의 화학식 1로표시되는화합물을 DMS0에 1000 μΜ로녹인 것을 첨가하고 30분간 37 °C 배양기에서 배양하였다 (1/100배 희석). 열 층격 전사조절 인자 1의 활성은 44°C에서 15분간 열 층격을 준 뒤， 37°C 인큐베이터에서 6시간 동안 배양한후에 반딧불 루시 퍼라제 (Firefly luciferase)와 레닐라 루시퍼라제 (Renilla luciferase)에 특이적인 별도의 기질 Beetle luciferin (구입처: Promega)과 coelenterazine (구입처: Promega)을 순차적으로 25 ^씩 첨가한후측정하였다. 기질의 분해에 의한발광강도는월락사의 루미노메터를 이용하여 측정하였으며 (Luminometer, Wallac 1420) , 그 측정값을 하기 식 1을 통해 활성저해도 (¾>)를 계산하여 하기 표 1에 나타내었다 (HSF1의 활성을 비례적 으로 반영하는 측정된 반딧불 루시퍼라제 활성은， 항상 일정하게 발현하는프로모터 에 의해 발현되는 레닐라루시퍼라제 활성값을사용하여 각각의 실험구에서 발생하는 비특이적인 세포독성 및 transfection효율의 편차를 보정하였다).
<114> [식 1] 활성저해도 (%) = 100 x [1- ggg]
(RLU: relative luminescence unit) (상기 식에서， 대조구 RLU: [pHSE-TA-Luc] + [pRL-TK] + [DMS이를 의미하며, 시료구 RLU: [pHSE-TA-Luc] + [pRL-TK] + [화합물 1]을 의미하며， [pHSE-TA-Luc]：
HSF1에 의해 조절되는프로모터를 갖고 있는 반딧불루시퍼레이즈발현 플라스미드이 고, [pRL-TK]: 레닐라루시퍼라제 (Renilla luciferase)를항상일정하게 발현하는플 라스미드을 의미한다.)
【표 1】
Figure imgf000015_0001
표 1의 결과와같이， 본 발명 화합물 1, 11, 30및 35는모두 luciferase의 활 성을 90%이상 저해하였다.
<실시예 2>본 발명 화합물의 인간 대장암세포주의 성장억제 효과 확인 본 발명의 화합물 1， 11, 30 및 35에 대해 인간 대장암세포 성장억제도 (%)를 WST-1 assay을 사용하여 측정하였다. 인간 대장암세포주 HCT-116을 10¾>소태아혈청 (FBS)이 포함된 배지에서 37°C, 5%이산화탄소를유지하며 배양하였고， 0.05%트립신 -EDTA(trypsin-EDTA)를 이용하여 세포를 떼어내었다.
헤마토사이토미터0 0131：00 1：011^^)로 계산한 인간 대장암 세포주 HCT-116 7,000개의 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰에 각각투여하고， 5%이산화탄소를포함한 37 °C 배양기에서 10% FBS가포함된 배지하에 세포를 배양시켰다. 24시간후에 대조 군 (0.1 % DMS0) , 본 발명의 화합물 1, 11, 30 및 35를 각각 10 μΜ포함 (DMS0에 녹인 화합물을 배지로 회석)한 배지로 교환한후, 48시간동안 배양시켰다. 이후에 각 웰에 WST-KDojindo사 제품) 발색시약을 10^씩을 첨가하고 1시간 동안 배양한 다음， ELISA판독기 (ELISA Reader , Bio-Rad사 제품)를 이용하여 450 ran에서 흡광도를 측정 한후, 식 2를 통해 성장억제도 of Growth Inhibition)을 계산하였으며， 그 결과는 표 2에 나타내었다.
[식 2]
/ 纖훼: 崎 § m ¾ \M
靜 纖
(상기 식에서, 대조구흡광도: [DMS이를 48시간처리된 HCT-116세포주에 WST- 1시약을 넣고 1시간후 450nm에서 측정한 흡광도를 의미하며 , 시료구홉광도: [화합 물 1]이 48시간 처리된 HCT-116세포주에 WST-1시약을 넣고 1시간후 450nm에서 측 정한 흡광도를 의미한다.)
【표 2】
Figure imgf000016_0001
표 2와 같이 화합물 ΙΟμΜ을 처리하였을 때 본 발명의 화합물 1, 11， 30, 35 모두는 약 50%내외의 인간 대장암세포주의 성장억제 효과가 있음이 관찰되었다. 따라서， 본 발명 화합물은 인간 대장암세포주에 대하여 항암 활성을 가지는 것으로 확인되었다.
<실시예 3> 본 발명 화합물의 Heat shock protein 70의 mRNA발현 억제효과 확인
HSF1에 의해서 발현이 조절되는 Heat shock protein 70은 암세포의 세포사멸 에 중요한 역할을 한다. 따라서, 열 충격과 함께 본 발명의 화합물 1을 처리하였을 때 유도되는 Heat shock protein 70의 mRNA 발현량을 다음과 같은 실험방법을 통해 측정하여 본 발명의 화합물 1의 Heat shock protein 70의 mRNA발현 억제효과 확인하 였다.
RNA는 TRIzol(Invitrogen)을 통해 모아졌으며 얻어진 RNA 2/g정도를 취하여 Revert Aid first strand cDNA synthesis kit (Fermentas)을 이용하여 RNA에 상보적인 DNA를 합성하였다. 이 상보적인 DNA를 주형으로 하여 첨가해 준 IQTM SYBR green supermix (BioRad)의 형광발색 정도로 Heat shock protein 70의 mRNA의 발현량을실 시간 역전사효소 연쇄 중합 반웅을 통해 확인해 보았다. 1시간 동안 44°C에서 열 층 격을 통해 증가한 HSP70의 mRNA발현량이 본 발명의 화합물 1의 농도가증가함에 따 라 감소하는 것을 확인하였다. 그 결과를 하기 식 3통해 계산하여 표 3에 나타내었다.
[식 3]
Figure imgf000017_0001
【표 3]
Figure imgf000017_0002
상기 표 3과 같이, 인위적인 HSF1의 전사시작부분이 들어간 백터를 ο 은 본 발명의 화합물 1은 실제 세포 수준에서도 HSF1의 기능을 저해하였다.
<실시예 4> 본 발명 화합물의 다양한 암세포주의 성장 억제 효과 확인 본 발명의 화합물 1에 의한 인간의 다양한 암세포주들의 성장 억제를 WST-1 assay를 이용하여 측정하였다. 인간암세포주들을 10%소태아혈청 (FBS)이 포함된 배 지에서 37°C, 5% 이산화탄소를 유지하며 배양하였고, 0.05% 트립신 -EDTA(trypsin- EDTA)를 이용하여 세포를 떼어내었다.
96-웰 플레이트의 각 웰에 헤마토사이토미터 (hematocytometer)로 계산한 5,00( fl(MDA-MB-231),7,00(^fl(HCT116, HCT15,Mia PaCa-2, PANC-1, SW620, HT-29, A549) 세포를 각각투여하였다.
세포의 배양은 5>이산화탄소를포함한 37 'C 배양기에서 10% FBS가포함된 배 지에서 수행하였고, 24시간후에 대조군 (0.1 % DMS0) 및 본 발명의 화합물 1을 농도 별로포함 (DMS0에 녹인 화합물을배지로 회석)한배지로교환하였다. 48시간동안처 리한후에 각 웰에 WST-l(Dojindo사 제품) 발색시약을 10 씩을 첨가하고 1시간 동 안 배양한 다음， ELISA판독기 (ELISA Reader, Bio-Rad사 제품)를 이용하여 450 nm에 서 흡광도를 측정하였으며. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. <145> 【표 4】
Figure imgf000018_0001
<147> 표 4에서 보듯이 본 발명의 화합물 1은 3μΜ내지 39μΜ의 농도범위에서 다양한 암세포의 성장을 50%억제하였다. 구체적으로본발명의 화합물 1의 HCT-116, HCT-15, HT-29, Mia PaCa-2에 대한 GI50은 3μΜ이었으며 , SW620, MDA-MB-231 및 Α549에 대한
GI50은 4μΜ, 8μΜ및 5μΜ이었다.
<148>
<149> <실시예 5> 본 발명 화합물의 인간대장암세포 세포형태 변화확인
<150> HCT-116 세포를 100隱 세포 배양 접시에 10X105 개수로 접종하였다. 18시간 후 대조군 (0.1% DMS0) 및 본 발명의 화합물 KDMS0에 녹인) ΙΟμΜ를상기 HCT-116대 장암세포에 처리하여 24시간， 48시간 동안 처리한 후 세포의 형태 변화를 니콘 TE- 300 형광현미경을 통하여 관찰하였다. 그 결과를 xlOO배율로 촬영한 결과를 도 1에 도시하였다.
<151> 도 1에서 나타난바와 같이, 본 발명의 화합물 1을 처리한 HCT-116 대장암세포 는 DMS0만을처리한 대조군에 비해, 시간이 지남에 따라세포수가 감소하고 일부 세 포가배양접시 바닥으로부터 떨어지는 것을확인할수 있었으며， 세포의 형태가수축 된 원형으로 바뀐 것을 확인할 수 있었다. 즉， 본 실험을 통해 본 발명의 화합물은
HCT-116세포를사멸시키는효과가있음이 확인되었으몌 대장암을포함한암에 대한 항암제로 작용할 수 있음을 알수 있었다.
<152>
<153> <실시예 6>다양한농도에 따른본 발명 화합물의 암세포주 세포사멸효과 확
91
<154> 1) 본 발명 화합물의 세포주기에 따른 암세포주 세포사멸효과 확인
<155> HCT-116 세포를 100隱 세포 배양 접시에 10X105 개수로 접종하였다. 18시간 후 대조군으로 DMS0(0.1¾) 처리하고， 본발명의 화합물 1을 lnM, 2μΜ, 5μΜ, 7μΜ, ΙΟμΜ, 20μΜ 및 30μΜ농도로 처리하여 48시간 동안 키운 뒤, trypsin을 처리하여 세포를 배양접시에서 떨어뜨렸다. PBS(phosphate buffered saline) 5ml을 넣고 1080rpm에서 5분 동안 2회 원심 분리하여 trypsin을 제거하였다. PBS로 2회 세척 후 상층액을 버리고 PBS 1ml을 넣고 70%차가운 알코을을 5ml 처리하여 -20°C에서 12시 간동안세포를 고정시킨 후， 알코을로고정시킨 세포를 1080rpm으로 5분간원심 분리 하여 알코을을 제거하고 PBS로 두 번 세척하여 잔여 알코올을 완전히 제거하였다. RNase (lOyg/ml)를 넣어 RNA를 제거하고 PKpropidium iodide, 50 /1111)로 1)^를 염색하였다. 37°C에서 30분간 방치 후 20 ,000개의 세포의 세포주기를 FACScallibur (Becton Dickinson, San Jose, CA)로 측정하였고, 세포 주기 분석 프로그램인 Modifit!s program (Becton Dickinson)을 이용하여 세포주기의 Sub-Gl, G0-G1, S및 G2-M기에 있는 세포의 양을 백분율로 계산하여 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
<156> 【표 5】
Figure imgf000019_0001
<157>
<ΐ58> (상기 표 5에서, Conc.(pM)이 "0"인 것은 DMS0(0.1%)를 처리한 대조군을나 타낸다)
<159> 상기 표 5와 같이 , 본 발명 화합물 1은 10μΜ까지 농도에 비례하여 DMS0만 처 리한대조군에 비해 G2-M기가증가하는 것을 확인할수 있었다. 10μΜ이상의 농도에 서는 G2-M기에 머물러있던 세포들의 세포사멸이 유도되면서 sub-Gl의 비율이 증가함 이 확인되었다. 따라서, 본 발명의 화합물 1은 농도 의존적으로 세포사멸을 유도시킴 이 확인되었다.
<160> 2) 본 발명 화합물의 세포주기에 따른 암세포주 세포사멸효과 확인
<i6i> 한편， poly (ADP-Ribose) polymerase [이하， PARP]은세포사멸의 유도를 확인 할수 있는마커로외부자극에 대해 유전자의 안정성을유지할수 있게 해주는 대표 적인 세포 내의 수리 시스템이다. 세포사멸이 일어나게 되면 PARP가잘리게 되고 이 러한 PARP의 절단은 세포사멸의 대표적인 신호로 여겨진다.
<162> 따라서, 본 발명의 화합물 1의 세포사멸 유도 활성을 확인하기 위하껴 다음과 같은 실험을 하였다. <163> 100隱세포배양접시에 HCT-116세포를 10X10개로 접종하였다. 18시간후 화 합물 1을 ΙμΜ, 2μΜ, 5μΜ, 7μΜ, 10 μΜ및 20μΜ농도로 처리하여 48시간동안 배 양하였다. 화합물 1에 의한 PARP의 절단을분석하기 위해 처리된 세포를 RIPA buffer (50mM Tris-HCl, pH7.4, 150mM NaCl, 5mM EDTA, ImM sodium vanadate, 0.5% sodium deoxycholate, 0.05% sodium deoxy sulfate)으로용해시켰다. 세포용해액을 1080rpm 으로 원심 분리하여 상층 세포액을 회수하였으며, Bradford reagent (Bio-Rad protein assay, USA)를 이용하여 회수한 세포액의 단백질 농도를 측정하였다.
<164> 또한 7.5% SDS-PAGE (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis)를 이용하여
30pg의 세포용해액을 단백질 분리한후, PVDF막 (Millipore, USA)으로 단백질들을 전기 이동하고 TBST (50mM Tris-HCl, pH7.6, 150mM NaCl, 0.1% tween 20)에 녹인 5% skim mi lk를 이용하여 blocking하였다. PARP항체 (Cell signaling, USA), Act in항 처 USigma, USA)로 1시간 동안 반웅시키고 HRP가 conjugation된 2차 항체 (Jackson Immunolab, USA)와 1시간 동안 반웅 사킨 뒤， chemi luminescence POD시약 (Roche, Germany)을 사용하여 검출하였다. 그결과는 도 2에 도시하였다.
<165> 즉, 상기 도 2를 통해 화합물 1의 처리농도에 비례하여 절단된 PARP형태가 관 찰되는 것을 볼 수 있으며 이를 통해 화합물 1에 의해서 HCT-116세포사멸이 유도됨 을 확인할 수 있다.
<166>
<167> <실시예 7>Nude mouse regression model에서 화합물 1의 복강투여에 의한부 작용 및 항암 효과 확인
<168> Female S.P.F BALB/c nude mice (6주령)에 HCT-1164X 10? eel ls/ml을 이식 하 여 군별 평균종양의 크기가 72.2蘭30 )에 도달하였을 때 mouse를무작위적으로 6마 리씩 3개의 그룹 (n=6)으로 나누어 regression model을 만들고, 여기에 본 발명의 화 합물 1을 io% DMAC(dimethylacetamide) , 50% PEG300 및 40% Distilled Water (v/v/v) 로구성된 용액에 녹인 후， 18일 동안본발명의 화합물 1을 일일 투여용량 50mg/kg으 로 하여 매일 복강투여하였다. 양성대조물질로는 adriamycin 2mg/kg의 용량으로 처 리하였다. 그 시험 기간 동안 특이한 증상은 관찰되지 않았으며, 마우스 체중 변화 결과， 종양의 부피변화 결과， 종양의 무게변화 결과 및 최종일의 종양 조직 적출사 진은 각각 도 3 내지 도 6과 같다. (한편， 개체별 종양의 크기의 차이는 standard deviation으로 개체 차이를 표시하였으며, 통계처리 방법 중 평균비교 AN0VA사후분 석인 Dunnett test를사용하여 용매대조군과 각 처치군의 평균을 비교하였다) 1) 체중변화 관찰
도 3에 나타낸 바와 같이， 최종일 (day 18) 결과를 보면 용매 대조군과 비교하 여 화합물 1(50 mg/kg) 투여군에서 체중 감소는 없으나， 양성대조물질 (ADR 2 mg/kg) 투여군에서는 13. (p<0.001)의 통계적으로 유의한 체중 감소가관찰되었다.
2) 종양 부피변화 관찰
도 4에 나타난 바와같이， Regression model에서 화합물 1의 매일반복복강투 여에 의한종양크기 변화를 18일 동안관찰하여 항암효과를 확인하였다. 최종일에 종 양조직의 부피를 측정한결과， vehicle contr 의 경우 592.4±182.3画3, 화합물 1의 경우에는 345.9±163.6誦 3 , adriamycin의 경우에는 427.7±169.3細3이었다.
도 4의 결과를 식 4를 통해 종양성장억제율 (¾)을 구하면 표 6과 같다.
[식 4]
종양성장억제율 (¾)= [1- (시험군의 Αί/용매대조군의 Αί)] X 100
{상기식에서， Λί= Vt-Vo, Fi (Measurement of the tumor volume)이다 }
[표 6]
Figure imgf000021_0001
(*p<0.05 vs 용매대조군)
표 6에서 보는 바와 같이， 최종일 (day 18) 결과를 보면 용매대조군과 비교하 여 화합물 1(50 mg/kg) 투여군에서 47.4%(p<0.05)의 통계적으로 유의한 종양성장 억 제효과가 관찰되었으며， 양성대조물질 (ADR 2 mg/kg) 투여군에서는 31.7%의 종양성장 억제효과가 나타났다.
3) 종양무게변화 관찰
실험 최종일 (day 18)에 마우스를 회생시켜 종양을 절제한 후 그 무게를 측정 한결과를도 5에 도시하였다. vehicle contr 의 경우 1258士 494.7mg, 화합물 1의 경 우 665.6±318.0mg, adriamycin의 경우는 860.6±294.8mg이었다. 용매대조군에 비하 여， 50mg/kg의 화합물 1 투여군에서는 47.1%(p<0.05)의 통계적으로 유의한 종양무게 감소가 관찰 되었으며, 양성대조물질 투여군 (ADR 2 mg/kg)에서는 31.6%의 종양성장 종양무게 감소가 나타났다. <186> 4) 종양크기의 육안 확인
<187> 또한, 실험 최종일 (day 18)에 용매 투여군 (vehicle control), 양성대조물질
(ADR 2mg/kg) 투여군 및 화합물 K50mg/kg)투여군의 조직을 적출하여 찍은사진인 도 6에 의하면, 본 발명의 화합물 1은 우수한항암효과가 있음이 육안으로 확인되었다. 【산업상 이용가능성】
<188> 본 발명의 화합물들은 HSF1 단백질의 발현 또는 활성을 저해하여 HSP의 발현 을 억제할 수 있다. 또한 본 발명의 화합물들은 암세포의 생존 및 성장을 억제하여 암세포의 사멸을유도할수 있으며， 그 결과， 암을 예방또는치료할수 있는 항암제 로사용될 수 있다.
<189>

Claims

【청구의 범위】 【청구항 1] 하기 화학식 1로 표시되는 2， 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방또는 치료용 약학조성물:
[화학식 1]
Figure imgf000023_0001
상기 화학식 1에서
¾은 H; 히드록시 ; C2내지 C6인 디알킬아미노; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상 아미노알킬; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬; C3내지 C6인 직쇄 또는 분쇄상 디하이드록시알킬; C3 내지 C6인 알콕시알킬; 또는 치환되지 않거나 d 내지
C3인 알킬기로 치환된 N, 0 및 S중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하 는， 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물이며， ¾은 비대칭 탄 소를 포함하거나포함하지 않고,
¾는 H; Ci 내지 C4인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬; 또는 치환되거나 비치환된 C3 내지 C6인 시클릭알킬기이거나，
Ri과 ¾가서로 결합하여 포화 또는 불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물을 형성하고， 이때 헤테로 고리에는 N, 0및 S중에서 선택된 1내지 3개의 헤 테로원자가포함되며 , 해테로 고리는 치환되지 않거나 d 내지 C5인 직쇄 또는 분쇄 상알킬기， C2내지 C5인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬 , 또는하이드록시로 치환 되며，
¾는 인다졸 -5-일; 또는 인다졸 -6-일이고, n은 0 내지 3의 정수이다.
【청구항 2]
제 1항에 있어서， 상기 화학식 1로 표시되는 화합물이 ^은 H, 히드록시, 메록 시， 피리디닐， 1， 3-디옥살란기， 모르포린， 치환되거나비치환된 피페라진， N-메틸피 페라진또는 NR4 이고 (여기서， ,¾는각각독립적으로수소， 메틸， t-부틸, 모르포 닐 또는 N-메틸피페라진이며); R2는 H, 메틸， 에틸， 이소프로필, 이소부틸， 시클로프 로필， 또는 t-부틸이고; 또는 ¾과 R2가결합하여 4-히드톡시피페리딘 -1-일, 피페라진
-1-일, 2， 2, 6 ,6-테트라메틸피페라진 -1-일, 4-히드록시에틸피페라진— 1-일을나타내며; R3는 인다졸 -5-일 또는 인다졸 -6-일이고; n은 0내지 3의 정수인 화합물인 암 예방 또는 치료용 약학조성물.
【청구항 3】
제 1항에 있어서， 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가 능한 염이
1 ) 2- ( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (메틸아미노) -3-니트로피리딘，
2) 2- ( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (이소프로필아미노) -3-니트로피리딘,
3) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [ (N-메틸 -2-히드록시에틸 )아미노] -3-니트로피 리딘，
4) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (이소부틸아미노) -3-니트로피리딘，
5) 2-( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6-(4-히드톡시피페리디노) -3-니트로피리딘 ,
6) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6- (피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘,
7) 2- ( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6- [ (N-에틸 -2-히드록시에틸 )아미노] -3-니트로피 리딘，
8) 2-(1Η-인다졸 -5—일)아미노 -6-(t-부틸아미노) -3-니트로피리딘，
9) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[(2，2，6,6-테트라메틸피페리진 -4-일)] -3-니트 로피리딘，
10) 2- (1H—인다졸 -6-일)아미노 -6- [(2-피리딜)에틸아미노] -3-니트로피리딘,
11) 2-( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트 로피리딘，
12) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [ (3-디메틸아미노 -2 , 2-디메틸)프로필아미노 ]-3-니트로피리딘,
13) 2-(1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-[(Ν-[1,3]-디옥살란 -2-일메틸) -메틸아미노] - 3-니트로피리딘,
14) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6-[ ( 1-(S)-메틸 -2-히드록시에틸)아미노] -3-니 트로피리딘, 15) 2-(1Η-인다졸 -6-일)아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트 로피리딘,
16 ) 2- ( 1H-인다졸 -6-일 )아미노 -6- [ 2- (N， N-디메틸아미노)에틸아미노] -3-니트로 피리딘,
17) 2-( 1H-인다졸 -6-일 )아미노 -6— [( 2-피리딜)메틸아미노] -3—니트로피리딘，
18) 2- 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6— [(1-메틸 -2-메톡시)에틸아미노] -3-니트로피 리딘，
19) 2-( 1H-인다졸 -6-일 )아미노 -6- [( 4-메틸피페라진 -1-일)아미노 ]—3-니트로피 리딘，
20) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노— 6- [ ( 4-모르포린 -1-일 )아미노] -3-니트로피리딘
21) 2-( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6- (N , N-디메틸아미노) -3-니트로피리딘，
22) 2-( 1H-인다졸 -6-일 )아미노 -6- [ (4-피리딜)메틸아미노]—3-니트로피리딘,
23) 2-( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6- [( 2-피리딜)에틸아미노] -3-니트로피리딘，
24) 2-( 1H—인다졸 -6-일)아미노— 6— (2—모르포리노에틸아미노) -3-니트로피리딘 ,
25) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[3-(이미다졸 -1-일)프로필아미노] -3-니트로 피리딘,
26 ) 2— ( 1H-인다졸 -5-일 )아미노 -6- [ (2-아미노시클로핵실)아미노 ] -3-니트로피리 딘，
27) 2-OLH-인다졸 -6-일)아미노 -6- (메틸아미노 )-3-니트로피리딘 ,
28) 2-(1Η—인다졸 -5-일)아미노 -6-아미노 -3-니트로피리딘,
29) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6- (이소프로필아미노) -3-니트로피리딘，
30) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (시클로프로필아미노) -3-니트로피리딘，
31) 2-( 1H-인다졸 5-일 )아미노 -6- [ (2-히드록시 -1-히드록시메틸)에틸아미노] -3-니트로피리딘，
32) 2-(1Η-인다졸 -5—일)아미노— 6-[ (1-(S)-메틸 -2-히드록시에틸)아미노] -3-니 트로피리딘,
33) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [ ( 2-모르포리노)에틸아미노] -3-니트로피리 딘，
34) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6- (피페라진 -1-일 )-3-니트로피리딘，
35) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(4-메틸피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘，
36) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6-(4-메틸피페라진— 1-일 )-3-니트로피리딘，
37) 2-( 1H-인다졸 -6-일)아미노 -6-(4-히드록시피페리디노) -3-니트로피리딘， 38) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- [ (4-메틸피페라진 -1-일)아미노] -3-니트로피 리딘,
39) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-[(ί-부틸아미노)아미노 ]-3-니트로피리딘 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 암 예방 또는 치료용 약학조성물.
【청구항 4】
게 3항에 있어서, 화학식 1로표시되는 화합물 및 이의 약제학적으로허용가능 한 염이
I) 2-UH-인다졸 -5—일)아미노 -6- (메틸아미노 )-3-니트로피리딘，
II) 2-( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진 -1-일] -3-니트로 피리딘，
30) 2— ( 1H-인다졸 -5-일)아미노 -6- (시클로프로필아미노) -3-니트로피리딘, 35) 2-(1Η-인다졸 -5-일)아미노 -6-(4-메틸피페라진 -1-일) -3-니트로피리딘 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 것인 암 예 방 또는 치료용 약학 조성물.
【청구항 5】
제 1항에 있어서， 상기 암 예방 또는 치료가 Heat shock factor 1 단백질의 발현 또는 활성 억제에 의한 것인 암 예방 또는 치료용 약학조성물.
【청구항 6】
제 1항에 있어서， 상기 암이 대장암, 위암, 전립선암, 유방암, 신장암, 간암， 뇌종양, 폐암, 자궁암， 결장암， 방광암, 전립선암또는 췌장암인 암 예방 또는 치료 용 약학 조성물.
【청구항 7】
제 6항에 있어서， 상기 암이 대장암, 췌장암, 유방암， 폐암， 전립선암또는:위 암인 암 예방또는 치료용 약학 조성물.
【청구항 8]
하기 화학식 1로 표시되는 2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 화합물 또는 이들의 염을 포함하는 조성물의 암 예방또는 치료용 용도: [화학식 1]
Figure imgf000027_0001
상기 화학식 1에서
Rr H; 히드록시 ; C2내지 C6인 디알킬아미노; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상 아미노알킬; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬; C3내지 C6인 직쇄 또는 분쇄상 디하이드록시알킬; C3 내지 C6인 알콕시알킬; 또는 치환되지 않거나 d 내지
C3인 알킬기로 치환된 N, 0 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하 는, 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물이며， ^은 비대칭 탄 소를 포함하거나 포함하지 않고，
R2는 H; d 내지 C4인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬; 또는 치환되거나 비치환된 C3 내지 C6인 시클릭알킬기이거나，
과 ¾가서로 결합하여 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물을 형성하고, 이때 헤테로고리에는 N, 0및 S중에서 선택된 1 내지 3개의 헤 테로원자가 포함되며 , 헤테로 고리는 치환되지 않거나 d 내지 C5인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬기， C2내지 C5인 직쇄 또는 분쇄상하이드록시알킬, 또는 하이드록시로 치환 되며，
¾는 인다졸 -5_일； 또는 인다졸 -6-일이고，
. n은 0 내지 3의 정수이다.
【청구항 91
하기 화학식 1로 표시되는 2， 6—위치가 치환된 3-니트로피리딘 화합물 또는 이의 약제학적으로허용가능한 염을포함하는조성물을 대상자에게 투여하는단계를 포함하는 암 예방또는 치료 방법 . [화학식 1]
Figure imgf000028_0001
상기 화학식 1에서，
^은 H; 히드록시 ; C2내지 C6인 디알킬아미노; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상 아미노알킬; c2내지 c6인 직쇄 또는 분쇄상하이드록시알킬; c3내지 c6인 직쇄 또는 분쇄상 디하이드록시알킬; C3 내지 C6인 알콕시알킬; 또는 치환되지 않거나 d 내지
C3인 알킬기로 치환된 N, 0 및 S중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하 는， 포화또는 불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물이며, ^은비대칭 탄 소를 포함하거나 포함하지 않고,
¾는 H; d내지 C4인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬; 또는 치환되거나 비치환된 C3 내지 C6인 시클릭알킬기이거나,
Ri과 ¾가서로결합하여 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물을 형성하고， 이때 헤테로고리에는 N, 0및 S중에서 선택된 1내지 3개의 헤 테로원자가포함되며， 헤테로 고리는 치환되지 않거나 d 내지 C5인 직쇄 또는 분쇄 상알킬기 , C2내지 C5인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬, 또는 하이드록시로 치환 되며,
Rs는 인다졸 -5-일 ; 또는 인다졸 -6-일이고， n은 0 내지 3의 정수이다.
【청구항 10]
제 9항에 있어서， 상기 조성물은 Heat shock factor 1 단백질의 발현 또는 활 성을 저해하는 것인 암 예방또는 치료 방법.
【청구항 11】
하기 화학식 1로 표시되는 2， 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물을 세포와 접촉시키는 단계; 및 상기 조성물 및 상기 세포의 접촉에 의해 상기 세포에서 Heat shock factor 1 단백질의 발현 또는 활성을 저해시키는 단계를 포함하는 세포의 Heat shock protein 의 mRNA의 발현을 억제하는 방법 .
[화학식 1]
Figure imgf000029_0001
상기 화학식 1에서
¾은 H; 히드록시 ; C2내지 C6인 디알킬아미노; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상 아미노알킬; C2내지 C6인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬; C3내지 C6인 직쇄 또는 분쇄상 디하이드록시알킬; C3 내지 C6인 알콕시알킬; 또는 치환되지 않거나 Ci 내지
C3인 알킬기로 치환된 N, 0 및 S 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하 는， 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물이며, ^은 비대칭 탄 소를 포함하거나 포함하지 않고，
R2는 H; d내지 C4인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬; 또는 치환되거나 비치환된 C3 내지 C6인 시클릭알킬기이거나,
Ri과 R2가서로결합하여 포화또는불포화된 5원자또는 6원자의 헤테로고리 화합물을 형성하고, 이때 헤테로 고리에는 N, 0및 S중에서 선택된 1내지 3개의 헤 테로원자가포함되며 , 헤테로 고리는 치환되지 않거나 d 내지 C5인 직쇄 또는 분쇄 상 알킬기 , C2내지 C5인 직쇄 또는분쇄상하이드록시알킬, 또는 하이드록시로 치환 되며，
R3는 인다졸 -5-일 ; 또는 인다졸 -6-일이고， n은 0 내지 3의 정수이다.
PCT/KR2010/005336 2009-08-28 2010-08-13 2, 6-위치가 치환된 3-니트로피리딘 유도체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물 WO2011025167A2 (ko)

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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9701664B2 (en) 2013-10-04 2017-07-11 Cancer Research Technology Limited Fused 1,4-dihydrodioxin derivatives as inhibitors of heat shock transcription factor 1
US10647678B2 (en) 2015-04-01 2020-05-12 Cancer Research Technology Limited Quinoline derivatives as inhibitors of heat shock factor 1 pathway activity
EP3894392A4 (en) * 2018-12-11 2022-08-24 Duke University COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF CANCER
CN115611885A (zh) * 2022-08-29 2023-01-17 厦门大学 N-取代-5-((4-取代嘧啶-2-基)氨基)-1h-吲哚-2-甲酰胺衍生物
US11814370B2 (en) 2016-10-07 2023-11-14 Cancer Research Technology Limited Deuterated N-(5-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carboxamido)-2-fluorophenyl)-2-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)quinoline-6-carboxamide
US12031128B2 (en) 2022-04-07 2024-07-09 Battelle Memorial Institute Rapid design, build, test, and learn technologies for identifying and using non-viral carriers

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4567272A (en) * 1983-09-21 1986-01-28 Rutgerswerke Aktiengesellschaft Pyrrole containing 2-aminonitropyridine derivatives
KR20090025371A (ko) * 2006-07-01 2009-03-10 메르크 파텐트 게엠베하 Ｈｓｐ90-유도 질병 치료용 인다졸 유도체

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100566194B1 (ko) * 1999-12-29 2006-03-29 동화약품공업주식회사 신규의 3-니트로피리딘 유도체 및 그를 포함하는 약학적조성물

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4567272A (en) * 1983-09-21 1986-01-28 Rutgerswerke Aktiengesellschaft Pyrrole containing 2-aminonitropyridine derivatives
KR20090025371A (ko) * 2006-07-01 2009-03-10 메르크 파텐트 게엠베하 Ｈｓｐ90-유도 질병 치료용 인다졸 유도체

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9701664B2 (en) 2013-10-04 2017-07-11 Cancer Research Technology Limited Fused 1,4-dihydrodioxin derivatives as inhibitors of heat shock transcription factor 1
US10189821B2 (en) 2013-10-04 2019-01-29 Cancer Research Technology Limited Fused 1,4-dihydrodioxin derivatives as inhibitors of heat shock transcription factor I
US11124501B2 (en) 2013-10-04 2021-09-21 Cancer Research Technology Limited Fused 1,4-dihydrodioxin derivatives as inhibitors of heat shock transcription factor I
US11787786B2 (en) 2013-10-04 2023-10-17 Cancer Research Technology Limited Fused 1,4-dihydrodioxin derivatives as inhibitors of heat shock transcription factor 1
US10647678B2 (en) 2015-04-01 2020-05-12 Cancer Research Technology Limited Quinoline derivatives as inhibitors of heat shock factor 1 pathway activity
US11814370B2 (en) 2016-10-07 2023-11-14 Cancer Research Technology Limited Deuterated N-(5-(2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxine-6-carboxamido)-2-fluorophenyl)-2-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)quinoline-6-carboxamide
EP3894392A4 (en) * 2018-12-11 2022-08-24 Duke University COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF CANCER
US12031128B2 (en) 2022-04-07 2024-07-09 Battelle Memorial Institute Rapid design, build, test, and learn technologies for identifying and using non-viral carriers
CN115611885A (zh) * 2022-08-29 2023-01-17 厦门大学 N-取代-5-((4-取代嘧啶-2-基)氨基)-1h-吲哚-2-甲酰胺衍生物

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