WO2010138960A3 - Procédés et systèmes de profilage de l'expression d'une seule molécule d'arn - Google Patents

Procédés et systèmes de profilage de l'expression d'une seule molécule d'arn Download PDF

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Abstract

La présente invention concerne, de façon générale, des procédés et des systèmes permettant le profilage de l'expression de l'ARN à partir d'un échantillon, par exemple une cellule unique, sur la base de la mesure simultanée de l'incorporation en continu de nucléotides fluorogènes dans des acides nucléiques complémentaires. Lesdits procédés de profilage de l'expression de l'ARN (par exemple d'origine procaryote, eucaryote ou virale) dans un échantillon peuvent comprendre les étapes consistant à déposer, dans chacun des microréacteurs d'une pluralité de microréacteurs éventuellement scellés, un mélange en phase solution comprenant une unique copie d'un ARN cible (ou une copie d'ADN correspondante) en provenance d'un échantillon (par exemple une cellule unique), un catalyseur de réplication des acides nucléiques et un mélange de nucléotides comportant un premier nucléotide porteur d'un premier marqueur essentiellement non fluorescent jusqu'à après son incorporation dans un acide nucléique sur la base de sa complémentarité avec la cible; à laisser se dérouler en continu la réplication, dépendant d'une matrice, des cibles dans les microréacteurs; à séquencer les cibles dans les microréacteurs en détectant en temps réel l'incorporation individuelle du premier nucléotide durant la réplication dépendant de la matrice grâce à un suivi de l'émission de fluorescence résultant du premier marqueur; et à déterminer, à partir dudit séquençage, le niveau d'expression de l'ARN dans l'échantillon.
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