WO2010095741A1 - 新規ステロイド誘導体及びその製造方法、並びにその新規ステロイド誘導体を含有する医薬 - Google Patents

新規ステロイド誘導体及びその製造方法、並びにその新規ステロイド誘導体を含有する医薬 Download PDF

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一 小鹿
隆吉 間宮
俊隆 鍋島
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Nagoya University NUC
Meijo University
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Nagoya University NUC
Meijo University
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to a novel steroid derivative that can be expected to express NGF activity, a method for producing the same, and a medicine containing the novel steroid derivative.
  • NGF enhancing activity a steroid derivative exhibiting a high NGF-like activity from Oni-Starfish. In some cases, it has an effect of enhancing its action on NGF, and is hereinafter referred to as “NGF enhancing activity”.
  • the present invention has been completed in view of the above circumstances, and it is an object to be solved to provide a novel steroid derivative and a method for producing the same.
  • R 1 to R 6 are functional groups that can be independently selected from hydrogen or an alkyl group, and may be the same or different.
  • N is 1 or 2.
  • One or more of hydrogen elements bonded to carbon atoms at 1, 2, 4 to 16 positions in the steroid skeleton can be substituted with a methyl group, an OH group, or a methoxy group.
  • the steroid derivative of the formula (1) is at least one of the formula (1a) and the formula (1b).
  • the steroid derivatives represented by formula (1a) and formula (1b) are stereoisomers at the 3-position of the steroid skeleton in the steroid derivative of formula (1). That is, the steroid derivative of formula (1) is a compound in which the three-dimensional structure at the steroid skeleton is not limited.
  • the steroid derivatives of the formula (1a) and the formula (1b) are the same as the steroid derivatives of the formula (1) except that the three-dimensional structure of the steroid skeleton is specified.
  • the chemical structure of the portion other than the vicinity of the position is omitted.
  • formulas (A), and (B), as in formula (1) the three-dimensional structure of the steroid skeleton of each compound is represented by formula (1a) and formula (1).
  • a feature of the method for producing a novel steroid derivative of the present invention according to claim 3 for solving the above-mentioned problem is a method for producing a novel steroid derivative represented by the general formula (1),
  • the first intermediate represented by the following general formula (2) is reacted with a first reaction reagent represented by Me 2 CHMgX (X is Cl or Br) to obtain a second intermediate represented by the general formula (3).
  • X is Cl or Br
  • R ′ is an OQ group, OH, or
  • Q is a protecting group for a hydroxyl group, and is a group that is all the same or different.
  • the feature of the method for producing a novel steroid derivative of the present invention according to claim 4 for solving the above-mentioned problem is a method for producing a novel steroid derivative represented by the above general formula (1),
  • the second intermediate represented by the following general formula (3) is reacted with a second reaction reagent which is one of the compounds represented by the following general formulas (5) to (8) to give a general formula (4
  • R ′ is an OQ group, OH, or
  • R ′′ can be independently selected from an alkyl group.
  • the feature of the medicament of the present invention according to claim 6 that solves the above-mentioned problem is that it acts by expressing NGF-related activity in claim 5.
  • a drug having NGF-related activity is expected to exert an effective action as a pharmacological action for treating dementia, improving learning ability, and the like.
  • the invention according to claim 1 can provide a steroid derivative that can be expected to express NGF-related activity and can be produced by a simple method.
  • the steroid derivative of the invention according to claim 2 is excellent.
  • the novel steroid derivative of the present invention can be produced by a simple method.
  • the novel steroid derivative of the present invention is a compound represented by the general formula (1) described above. This compound has a structure that can be easily produced by the production method of the present invention described later.
  • R 1 is preferably a methyl group from the viewpoint of the NGF-related activity enhancing effect (see Patent Document 1).
  • the substituents desirably introduced into the steroid skeleton and the positions thereof are methyl groups at the 10th and 13th positions, and OH groups at the 6th, 8th, 15th and 16th positions, respectively.
  • the OH group corresponding to R 1 in the compound of the formula (A) is an OMe group (formula (B)).
  • n is 1 because it is close to natural products.
  • the method for producing a novel steroid derivative of the present invention comprises (i) a step of obtaining a second intermediate represented by the above general formula (3) from the first intermediate represented by the above general formula (2) (hereinafter referred to as the first step). And / or (ii) a step of obtaining a third intermediate represented by the general formula (4) from the second intermediate represented by the general formula (3) (hereinafter referred to as a second step). And a step of obtaining a final product represented by the general formula (1) from the obtained intermediate.
  • R ′ in the formulas (2) to (4) is OQ or OH group, a sugar is finally bonded.
  • the first step is a step of introducing an isopropyl group instead of the —NMe (OMe) group in the first intermediate.
  • This reaction can be performed using an ether solvent or the like.
  • X in Me 2 CHMgX, Cl is desirable.
  • the second step is a step of adding a second reaction reagent to the ketone in the second intermediate to form a third intermediate having an extended carbon-carbon bond.
  • a second reaction reagent When the compounds of the formulas (5) to (7) are used as the second reaction reagent, a steroid derivative in which n in the general formula (1) is 2 is obtained, and when the compound of the formula (8) is used, n Is a steroid derivative in which 1.
  • the reaction proceeding in the second step will be briefly described based on the following formula.
  • the second reaction reagent of the formula (5) reacts with the ketone part (n) of the second intermediate
  • the second reaction reagent from which Li has been removed is added to the carbon atom of the ketone to form the structure (p).
  • dehydration is performed using thionyl chloride (SOCl 2 ) or the like to form the structure (q).
  • the reaction proceeds sequentially with the structure (r) and the structure (s).
  • the structure (s) is a partial structure of the third intermediate.
  • the partial structure (n) of the second intermediate can be changed to the partial structure (q) of the third intermediate in a one-step reaction. it can.
  • a steroid derivative having n of 2 in the general formula (1) can be produced.
  • the second reaction reagent of formula (8) reacts with the ketone part (n) of the second intermediate
  • the second reaction reagent from which Li has been removed is added to the carbon atom of the ketone to form the structure (t).
  • the structure (u) is formed with mercury (II) chloride or the like.
  • dehydration is performed, and the reaction with the structure (w) is sequentially performed by the structure (v) and hydrogenation and reduction (in no particular order).
  • Structure (w) is a partial structure of the third intermediate.
  • the medicament of the present invention contains the novel steroid derivative, pharmaceutically acceptable ester or prodrug of the present invention as an active ingredient.
  • the medicament of the present invention exists in the form of the steroid derivative of the present invention in the living body after being administered in vivo, or passes through the form of the steroid derivative of the present invention even for a moment.
  • the medicament of the present invention is particularly expected to express NGF-related activity.
  • the expression of NGF-related activity is expected to exert an action on nerves in the brain and the like, and as a pharmacological action, it is expected to exhibit an effective action for treating dementia and improving learning ability. As described in Examples using mice described later, it was confirmed that short-term memory impairment and cognitive memory impairment associated with aging were improved.
  • the novel steroid derivative of the present invention may have an OH group, in which case the OH group may be esterified with a pharmaceutically acceptable group.
  • the group to be esterified include, but are not limited to, acidic groups including carboxylic acid, phosphoric acid, phosphinic acid, sulfonic acid, sulfinic acid, and boronic acid.
  • the prodrug of the novel steroid derivative of the present invention is a form in which the compound is biologically, pharmaceutically or therapeutically active when administered in vivo (active compound: In one form) is a compound that is metabolized or converted separately by one or more steps or processes. That is, a prodrug is a compound that regenerates an active compound in vivo by a metabolic process or the like. Therefore, it is also conceivable that the esterified compound described above corresponds to a prodrug.
  • Prodrugs are designed to alter the metabolic stability or transport properties of the drug, mask side effects or toxicity, improve the flavor of the drug, or alter other properties or characteristics of the drug be able to.
  • the pharmaceutical preparation of the present invention can be prepared according to a conventional method.
  • other pharmaceutically acceptable ingredients for example, carriers, excipients, disintegrants, buffers, emulsifiers, suspending agents, soothing agents, stabilizers, preservatives, preservatives, physiological Salt solution, solvent, etc.
  • lactose, starch, sorbitol, D-mannitol, sucrose and the like can be used.
  • disintegrant starch, carboxymethylcellulose, calcium carbonate and the like can be used.
  • Phosphate, citrate, acetate, etc. can be used as the buffer.
  • emulsifier gum arabic, sodium alginate, tragacanth and the like can be used.
  • suspending agent glyceryl monostearate, aluminum monostearate, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, sodium lauryl sulfate and the like can be used.
  • benzyl alcohol, chlorobutanol, sorbitol and the like can be used.
  • stabilizer propylene glycol, ascorbic acid or the like can be used.
  • preservatives phenol, benzalkonium chloride, benzyl alcohol, chlorobutanol, methylparaben, and the like can be used.
  • preservatives benzalkonium chloride, paraoxybenzoic acid, chlorobutanol, and the like can be used.
  • solvent water, DMF, alcohol and the like can be used alone or as a mixed solvent.
  • the dosage form for formulation is not particularly limited. Examples of dosage forms are tablets, powders, fine granules, granules, capsules, syrups, injections, external preparations, and suppositories.
  • the compound of formula (14) corresponds to the first intermediate
  • the compound of formula (15) corresponds to the second intermediate
  • the compound of formula (17) corresponds to the third intermediate.
  • the compound of the formula (5) R ′′ is an ethyl group
  • the finally produced steroid derivatives are those in which R 1 to R 6 are all H but into which a substituent necessary as a sugar to be reacted in the step of changing from the formula (11) to the formula (12) is introduced.
  • a substituent necessary as a sugar to be reacted in the step of changing from the formula (11) to the formula (12) is introduced.
  • an arbitrary substituent can be introduced into the substituents of R 1 to R 3 .
  • an arbitrary substituent can be introduced into the substituents of R 4 to R 6. .
  • Rat adrenal medullary pheochromocytoma-derived PC12 cells were obtained from RIKEN Cell Bank. Cryopreserved cells (2 ⁇ 10 4 cells) were washed with a medium (MEME-10% fetal calf serum-5% horse serum), spread in a 9 cm petri dish together with 10 mL of medium, at 37 ° C. for 1 week in a 5% CO 2 atmosphere. The culture was stationary. After subculturing the cells for 4 weeks or more after harvesting the cells, diluting with fresh medium to 2 ⁇ 10 5 cells / dish and culturing for 1 week, the harvested cells were used for the test. Up to 12 times). Hereinafter, culturing is performed at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere.
  • the neurite outgrowth activity is regarded as the value of NGF-like activity, and the neurite outgrowth activity when added together with NGF at a concentration (1.0 ng / mL) that induces neurite outgrowth is NGF enhancing activity
  • the value of Sample addition concentrations were 10 ⁇ g / mL, 20 ⁇ g / mL, and 40 ⁇ g / mL.
  • the compound reported in Patent Document 1 (acanthasteroside B3.
  • Compound 40A in Patent Document 1 hereinafter, simply referred to as “B3”.
  • the addition concentrations are 10 ⁇ g / mL, 20 ⁇ g / mL, and 40 ⁇ g / mL.
  • NGF NGF-like activity
  • Tables 2 and 3 NGF enhancing activity
  • the NGF enhancing activity for SK-IV-66-2 and -3 is higher than that of NGF 1.0 ng / mL and 40 ng / mL, but slightly lower than B3. It was found to show a high value.
  • MO-IV-52-1 corresponding to the compound (Aa) was synthesized by the route shown in FIG.
  • MO-IV-52-1 is an approximately 1: 1 mixture of stereoisomers at the carbon atom at position 24, as shown in FIG.
  • Compound (10A) is obtained by dissolving 4.0 g of methyl cholate in 60 mL of anhydrous dichloromethane, adding 5.0 mL of 2,6-lutidine and 7.7 mL of triethylsilyl triflate (TESOTf), and stirring at room temperature for 1.5 hours. 7.2 g was obtained (yield 100%).
  • TES represents a triethylsilyl group.
  • the compound of formula (14A) corresponds to the first intermediate
  • the compound of formula (15A) corresponds to the second intermediate
  • the compound of formula (17A) corresponds to the third intermediate.
  • a compound of the formula (5) R ′′ is an ethyl group
  • the finally produced steroid derivatives are all those in which R 1 to R 6 are H, but those having a substituent introduced as a sugar to be reacted in the step of changing from the formula (11A) to the formula (12A) are adopted.
  • an arbitrary substituent can be introduced into the substituents of R 1 to R 3 .
  • an arbitrary substituent can be introduced into the substituents of R 4 to R 6. .
  • mice 15-month-old ICR male mice (aged mice) and 8-week-old mice (young mice) as a young control were purchased from Japan SLC Co., Ltd. and used.
  • a steroid derivative (MO-IV-52-1) is administered to a mouse at a rate of 0.1 mL per 10 g body weight, the dose of the steroid derivative is 1 mg / kg (M1) or A solution prepared to 10 mg / kg (M10) (containing 1% by mass of dimethyl sulfoxide (DMSO)) was subcutaneously administered every day for 14 days.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the Y-shaped maze experiment is a wooden Y-shaped maze (upper width 10 cm, lower width 3 cm, height 12 cm, length 40 cm, one end of the arm is closed to make a dead end, and the open end is radial (adjacent arm And the inside is painted black. The inside is painted black.) The inside is free to search and the next arm to invade is the nearest The rate that is different from the arm that has invaded twice in the past was recorded as the alternation behavior rate (Alternation behavior (%)) and used as an index of short-term memory.
  • the novel object recognition test was performed using a gray acrylic box (length 30 cm, width 30 cm, height 35 cm). Different objects were brought into contact with each other during the training trial (14th day) and the holding trial after 24 hours (15th day), and the ratio of the contact time to the novel object per total contact time during the holding trial was calculated. During the training trial, the wooden blue triangular prism and the red pyramid were brought into contact with each other, and during the holding trial, the red square pyramid was replaced with a black golf ball.
  • the novel steroid derivative of the present invention can be expected to express NGF-related activity.
  • a substance having NGF-related activity is expected to exert an effective action as a pharmacological action for treating dementia, improving learning ability, and the like, and can be expected to be applied as a drug.

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Abstract

【課題】ＮＧＦ活性の発現が期待できる新規ステロイド誘導体を提供すること。 【解決手段】下記式（Ａ）又は（Ｂ）で示される化合物。 （式（Ａ）、（Ｂ）中のｎは１又は２）

Description

新規ステロイド誘導体及びその製造方法、並びにその新規ステロイド誘導体を含有する医薬
　本発明は、ＮＧＦ活性の発現が期待できる新規ステロイド誘導体及びその製造方法、並びにその新規ステロイド誘導体を含有する医薬に関する。
　本発明者らはオニヒトデから高いＮＧＦ様活性を示すステロイド誘導体を発見している（特許文献１：ＷＯ２００６／０９０９１０号公報）。なお、ＮＧＦに対してその作用を増強する作用を有する場合があり、以下「ＮＧＦ増強活性」と称する。
　しかしながら、特許文献１に開示したステロイド誘導体は高い活性を示すものの天然物由来の化合物であるため、将来にわたる十分な供給量の確保が困難である。従って、工業生産可能な方法にて製造可能な新規ステロイド誘導体が求められる。
　本発明は上記実情に鑑み完成したものであり、新規ステロイド誘導体及びその製造方法を提供することを解決すべき課題とする。
　また、本発明で提供する新規ステロイド誘導体を含有する医薬を提供することも解決すべき課題とする。
　上記課題を解決する請求項１に係る本発明の新規ステロイド誘導体の特徴は、下記一般式（１）で示される化合物であることにある。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
（式（１）中、Ｒ１～Ｒ６は水素又はアルキル基から全て独立して選択可能な官能基であり、同一であっても異なるものであっても良い。ｎは１又は２である。ステロイド骨格中の１、２、４～１６位の炭素原子に結合する水素元素のうちの１つ以上をメチル基、ＯＨ基、又はメトキシ基に置換できる。）
　なお、式（１）のステロイド誘導体は式（１ａ）及び式（１ｂ）の少なくとも一方である。
　式（１ａ）及び式（１ｂ）で表されるステロイド誘導体は式（１）のステロイド誘導体におけるステロイド骨格の３位における立体異性体である。つまり、式（１）のステロイド誘導体はステロイド骨格における３位の立体構造が限定されていない化合物である。ここで、式（１ａ）及び式（１ｂ）のステロイド誘導体はステロイド骨格の３位の立体構造が特定されている以外の構造は式（１）のステロイド誘導体と同じであるため、ステロイド骨格の３位の近傍以外の部分の化学構造を省略して記載している。
　以下に示す式（２）～（４）、式（Ａ）、及び（Ｂ）においても式（１）と同様にそれぞれの化合物がもつステロイド骨格における３位の立体構造は式（１ａ）及び式（１ｂ）のいずれかに相当する立体構造をもつ化合物からなり、ステロイド骨格の３位の立体構造が式（１ａ）に相当する化合物である式（２ａ）～（４ａ）、式（Ａａ）、及び（Ｂａ）と、３位の立体構造が式（１ｂ）に相当する化合物である式（２ｂ）～（４ｂ）、式（Ａｂ）、及び（Ｂｂ）とからなる（全て図示略）。
　上記課題を解決する請求項２に係る本発明の新規ステロイド誘導体の特徴は、請求項１において、前記一般式（１）に記載の化合物は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）であることにある。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
（式（Ａ）、（Ｂ）中のｎは１又は２）
　上記課題を解決する請求項３に係る本発明の新規ステロイド誘導体の製造方法の特徴は、上記一般式（１）で示される新規ステロイド誘導体を製造する方法であって、
　下記一般式（２）で示される第１中間体に対し、Ｍｅ２ＣＨＭｇＸ（ＸはＣｌ又はＢｒ）で表される第１反応試薬を反応させ、一般式（３）で表される第２中間体を得る工程と、
　前記第２中間体から最終生成物とする工程と、
　を有することにある。従って、一般式（１）で示される新規ステロイド誘導体に含まれる上記式（Ａ）、式（Ｂ）で示される新規ステロイド誘導体を製造することも可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
（式（２）及び（３）で示された化合物がもつステロイド骨格中、前記一般式（１）と対応する位置に同じ置換基をもつ。但し、ＯＨ基をもつ場合にはＯＱ基が代わりに導入される。；Ｒ’はＯＱ基、ＯＨ、又は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
である。；Ｑは水酸基の保護基であり、全て同一であるか、又は、異なるものがある基である。）
　上記課題を解決する請求項４に係る本発明の新規ステロイド誘導体の製造方法の特徴は、上記一般式（１）で示される新規ステロイド誘導体を製造する方法であって、
　下記一般式（３）で示される第２中間体に対し、下記一般式（５）～（８）で表される化合物のうちの１つである第２反応試薬を反応させ、一般式（４）で表される第３中間体を得る工程と、
　前記第３中間体から最終生成物とする工程と、
　を有することにある。従って、一般式（１）で示される新規ステロイド誘導体に含まれる上記式（Ａ）、式（Ｂ）で示される新規ステロイド誘導体を製造することも可能である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
（式（３）及び（４）で示された化合物がもつステロイド骨格中、前記一般式（１）と対応する位置に同じ置換基をもつ。但し、ＯＨ基をもつ場合にはＯＱ基が代わりに導入される。；Ｒ’はＯＱ基、ＯＨ、又は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
である。；式（３）及び（４）中、Ｑは水酸基の保護基であり、全て同一であるか、又は、異なるものがある基である。；前記第２反応試薬として、式（５）～（７）のうちの何れかを選択する場合には、ｎが２、式（８）の化合物を選択する場合にはｎが１である。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
（式（５）～（７）中、Ｒ”はアルキル基から独立して選択可能である。）
　上記課題を解決する請求項５に係る本発明の医薬の特徴は、請求項１に記載の新規ステロイド誘導体、医薬上許容できるそのエステル又はそのプロドラッグを含有することにある。
　上記課題を解決する請求項６に係る本発明の医薬の特徴は、請求項５において、ＮＧＦ関連活性を発現することにより作用することにある。ここで、ＮＧＦ関連活性をもつ医薬は「産業上の利用可能性」欄で説明した通り、薬理作用として痴呆治療、学習能力向上などに有効な作用を発揮することが期待される。
　請求項１に係る発明によれば、ＮＧＦ関連活性の発現が期待でき、簡易な方法にて製造可能なステロイド誘導体を提供できる。特に請求項２に係る発明のステロイド誘導体が優れている。
　請求項３及び４に係る発明によれば、簡易な方法にて本発明の新規ステロイド誘導体を製造することができる。
　請求項５及び６に係る発明によれば、本発明の新規ステロイド誘導体がもつＮＧＦ関連活性などの薬理作用を発現できる医薬を提供できる。
実施例における新規ステロイド誘導体の合成方法（その１）を示す図である。 実施例におけるＮＧＦ様活性の測定結果を示すグラフである。 実施例におけるＮＧＦ増強活性の測定結果を示すグラフである。 実施例における新規ステロイド誘導体の合成方法（その２）を示す図である。 実施例におけるY字型迷路実験の結果（ＭＯ－ＩＶ－５２－１）を示すグラフである。 実施例におけるY字型迷路実験の結果（B3）を示すグラフである。 実施例における新奇物体認知試験の結果を示すグラフである。
　（新規ステロイド誘導体）
　本発明の新規ステロイド誘導体は、上述した一般式（１）にて表される化合物である。この化合物は後述する本発明の製造方法により簡易に製造可能な構造である。
　ここで、Ｒ１～Ｒ６のうち、Ｒ１についてはメチル基であることがＮＧＦ関連活性増強効果の観点からは望ましい（特許文献１参照）。また、ステロイド骨格中に導入されることが望ましい置換基及びその位置としては、１０位と１３位とにメチル基、６位と８位と１５位と１６位にＯＨ基がそれぞれ導入されることが望ましい。また、１０位と１３位とにメチル基、７位と１２位とにＯＨ基がそれぞれ導入されることが望ましい（例えば式（Ａ）の化合物：ｎ＝２）。式（Ａ）の化合物におけるＲ１に相当するＯＨ基をＯＭｅ基にすることが望ましい（式（Ｂ））。ｎは１とすることが天然物に近いため望ましい。
　（新規ステロイド誘導体の製造方法）
　本発明の新規ステロイド誘導体の製造方法は、(i)上記一般式（２）で表される第１中間体から上記一般式（３）で表される第２中間体を得る工程（以下、第１工程と称する）、及び／又は、(ii)上記一般式（３）で表される第２中間体から上記一般式（４）で表される第３中間体を得る工程（以下、第２工程と称する）を有し、得られた中間体から一般式（１）で表される最終生物を得る工程を更に有する。式（２）～（４）中のＲ’がＯＱ又はＯＨ基である場合には最終的に糖が結合される。
・第１工程
　第１工程は第１中間体における－ＮＭｅ（ＯＭｅ）基に変えて、イソプロピル基を導入する工程である。この反応はエーテル溶媒などを用いて行うことができる。Ｍｅ２ＣＨＭｇＸにおけるＸとしてはＣｌが望ましい。
・第２工程
　第２工程は第２中間体におけるケトンに第２反応試薬を付加反応させて、更に炭素－炭素結合を伸長した第３中間体を形成する工程である。第２反応試薬として式（５）～（７）の化合物を用いた場合には一般式（１）中のｎが２であるステロイド誘導体となり、式（８）の化合物を用いた場合にはｎが１であるステロイド誘導体となる。
　ここで第２工程において進行する反応について下式に基づき簡単に説明する。第２中間体がもつケトンの部分（ｎ）に式（５）の第２反応試薬が反応すると、Ｌｉが脱離した第２反応試薬がケトンの炭素原子に付加して構造（ｐ）を形成する。その後、塩化チオニル（ＳＯＣｌ２）などを用いて脱水し、構造（ｑ）を形成する。次いで構造（ｒ）、構造（ｓ）と順次反応を進める。構造（ｓ）が第３中間体がもつ部分構造である。式（６）、（７）で表される第２反応試薬を用いると第２中間体の部分構造（ｎ）から第３中間体の部分構造（ｑ）に１段階の反応で変化させることができる。これの工程により一般式（１）におけるｎが２のステロイド誘導体を製造できる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
　第２中間体がもつケトンの部分（ｎ）に式（８）の第２反応試薬が反応すると、Ｌｉが脱離した第２反応試薬がケトンの炭素原子に付加して構造（ｔ）を形成する。その後、塩化水銀(II)などで構造（ｕ）を形成する。その後、脱水して構造（ｖ）、水素付加と還元と（順不同）により構造（ｗ）と順次反応を進める。構造（ｗ）が第３中間体がもつ部分構造である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
　（医薬）
　本発明の医薬は本発明の新規ステロイド誘導体、医薬上許容できるエステル、又はプロドラッグを有効成分として含有する。ここで本発明の医薬は、生体内に投与された後、生体内において本発明のステロイド誘導体の形態で存在するか、又は、本発明のステロイド誘導体の形態を一瞬でも経るものである。本発明の医薬は特にＮＧＦ関連活性の発現が期待される。ＮＧＦ関連活性の発現により、脳内などにおける神経への作用が発現して、薬理作用として痴呆治療、学習能力向上などに有効な作用を発揮することが期待される。後述するマウスを用いた実施例にて説明するように、加齢に伴う短期記憶障害及び認知記憶障害を改善することが推認された。
　医薬上許容できるエステル化について説明する。本発明の新規ステロイド誘導体はＯＨ基を有することがあり、その場合はそのＯＨ基が医薬上許容できる基にてエステル化されていても良い。エステル化する基としては限定はされないがカルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸、及びボロン酸を含む酸性基が例示できる。
　次に医薬上許容できるプロドラッグについて説明する。本願において本発明の新規ステロイド誘導体のプロドラッグとは、インビボで投与すると、その化合物が生物学的、薬学的、又は治療的に活性のある形態（活性化合物：本願では本発明の新規ステロイド誘導体のうちの１つの形態）に、1つ以上のステップ又は過程によって代謝されるか、或いは別途に変換される化合物である。つまり、プロドラッグは、生体内において代謝過程などにより活性化合物を再生する化合物である。従って、前述したエステル化した化合物がプロドラッグに該当することも考えられる。プロドラッグは、薬物の代謝安定性又は輸送特性を変更するように、副作用又は毒性を遮蔽するように、薬物の風味を改善するように、又は薬物のその他の性質又は特性を変えるように設計することができる。インビボでの薬力学的過程及び薬物代謝の知識によって、当業者は、薬学的に活性のある化合物を見出したら、その化合物のプロドラッグを設計することができる(例えば、Nogradyの著作、(2005)Medicinal Chemistry A Biochemical Approach,Oxford University Press,New Yorkを参照)。　本発明の医薬の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合には、製剤上許容される他の成分（例えば、担体、賦形剤、崩壊剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤、無痛化剤、安定剤、保存剤、防腐剤、生理食塩水、溶媒など）を含有させることができる。賦形剤としては乳糖、デンプン、ソルビトール、D-マンニトール、白糖等を用いることができる。崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム等を用いることができる。緩衝剤としてはリン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等を用いることができる。乳化剤としてはアラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント等を用いることができる。懸濁剤としてはモノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸アルミニウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム等を用いることができる。無痛化剤としてはベンジルアルコール、クロロブタノール、ソルビトール等を用いることができる。安定剤としてはプロピレングリコール、アスコルビン酸等を用いることができる。保存剤としてはフェノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルパラベン等を用いることができる。防腐剤としては塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸、クロロブタノール等を用いることができる。溶媒としては水の他、ＤＭＦ、アルコールなどを単独又は混合溶媒として用いることができる。
　製剤化する場合の剤形も特に限定されない。剤形の例は錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、注射剤、外用剤、及び座剤である。
　（ステロイド誘導体の合成：その１）
　図１に示す経路にて化合物（Ａａ）に相当する、ＳＫ－ＩＶ－６８－２及びＳＫ－ＩＶ－６８－３を合成した。ＳＫ－ＩＶ－６８－２及びＳＫ－ＩＶ－６８－３は図１に示すように、２４位の炭素原子における立体異性体であるが、その立体構造（Ｒ配置、Ｓ配置）は特定できていない。
　コール酸ナトリウム１．３ｇをDMF（１０ｍＬ）に溶解し、ヨウ化メチル０．３７ｍＬを加え、室温で１５時間撹拌することにより、コール酸メチル１．２ｇを得た（収率９７％）。
　コール酸メチル３１６ｍｇを無水ジクロロメタン４．５ｍＬに溶解し、２，６-ルチジン２．１ｍＬとｔ-ブチルジメチルシリルトリフラート２．１ｍＬを加えて、室温で１５時間撹拌することにより化合物（１０）５２１ｍｇを得た（収率９７％）。
　化合物（１０）２３ｍｇをテトラヒドロフラン１ｍＬに溶解し、４６％フッ化水素酸０．１１ｍＬを加えて、室温で１時間撹拌することにより化合物（１１）１９ｍｇを得た（収率９５％）。
　化合物（１１）１０２ｍｇ、シアン化水銀５２ｍｇ、臭化水銀７５ｍｇを無水アセトニトリル３ｍＬに溶解し、２，３，４－トリ－Ｏ－ピバロイル－α－Ｄ－ブロモキシロース６４ｍｇを加えて、室温で３時間撹拌することにより化合物（１２）を得た（収率４９％）。
　化合物（１２）924ｍｇをメタノール３４ｍＬに溶解し、炭酸カリウム１．２７ｇを加え、室温で２時間撹拌することによりトリオール７３５ｍｇを得た（収率９２％）。このトリオール７２８ｍｇを無水ジクロロメタン１０ｍＬに溶解し、２，６-ルチジン１．３ｍＬとｔ-ブチルジメチルシリルトリフラート１．３ｍＬを加えて、室温で１１時間撹拌することにより化合物（１３）９８４ｍｇを得た（収率９４％）。
　化合物（１３）１９０ｍｇをメタノール（５．６ｍＬ）とテトラヒドロフラン（３．４ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、水酸化リチウム一水和物４３３ｍｇを水３．０ｍＬに溶解した溶液を滴下した。この混合物を５０℃で１．５時間撹拌した後、１Ｎ塩酸１２０ｍＬで処理することによりカルボン酸１８９ｍｇを得た（収率９９％）。このカルボン酸１７９ｍｇを無水ジクロロメタン４．０ｍＬに溶解し、１，１-カルボニルジイミダゾール５３ｍｇを加えて室温で１時間撹拌した。この混合物にＮ，Ｏ-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩７７ｍｇを加え、室温で１．５時間撹拌することにより化合物（１４）１７７ｍｇを得た（収率９５％）。
　化合物（１４）７７８ｍｇを無水テトラヒドロフラン２４ｍＬに溶解し、０℃で塩化イソプロピルマグネシウム（Ｍｅ２ＣＨＭｇＸにおけるＸがＣｌの化合物）のテトラヒドロフラン溶液（２Ｍ）４．９ｍＬを滴下し、０℃で３０分、５０℃で１１時間撹拌することにより化合物（１５）３２７ｍｇを得た（収率４３％）。
　無水テトラヒドロフラン６．１ｍＬにリチウムヘキサミチルジシラジドのテトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ）１．７ｍＬを加え、－７８℃に冷却し、無水酢酸エチル０．１８ｍＬを滴下して１５分撹拌した。この混合物に化合物（１５）３１７ｍｇのテトラヒドロフラン溶液（１０ｍＬ）を滴下し、－７８℃で１時間撹拌することにより化合物（１６）２９０ｍｇを得た（収率８５％）。
　無水ピリジン２．３ｍＬに塩化チオニル０．２７ｍＬを加え室温で４０分撹拌した後、０℃に冷却した。ここに化合物（１６）５２６ｍｇの無水ジクロロメタン溶液（５．６ｍＬ）を滴下し、０℃で１．５時間撹拌することにより、脱水化合物の粗生成物５１８ｍｇを得た。次いで、無水テトラヒドロフラン３．５ｍＬに水素化アルミニウムリチウムのテトラヒドロフラン溶液（２．０Ｍ）１．１ｍＬを加え、０℃に冷却後、前述の脱水化合物５１８ｍｇのテトラヒドロフラン溶液（８．３ｍＬ）を滴下した。この混合物を室温で１．５時間撹拌することによりアルコール４５７ｍｇを得た（収率９２％）。次いで、このアルコール４７．１ｍｇを酢酸エチル１．５ｍＬに溶解し、白金黒２３．６ｍｇを加え、水素雰囲気下、室温で２６時間撹拌することにより化合物（１７）４１．７ｍｇを得た（収率８８％）。
　化合物（１７）６２．５ｍｇ、シアン化水銀２０ｍｇ、臭化水銀２９ｍｇを無水ジクロロメタン１．８ｍＬに溶解し、アセトブロモキシロース３６．７ｍｇを加えて、室温で２．５時間撹拌することにより化合物（１８）３１．４ｍｇを得た（収率３８％）。
　化合物（１８）７．４ｍｇを無水トルエン０．１ｍＬに溶解し、０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（１．５Ｍ）０．０１３ｍＬを加え、０℃で３０分撹拌することにより化合物（１９）３．３ｍｇを得た（収率５３％）。
　化合物（１９）４．４ｍｇをテトラヒドロフラン０．１６ｍＬに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ）０．１４ｍＬを加え、５５℃で１４時間撹拌した。得られた生成物をテトラヒドロフラン０．０６ｍＬに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ）０．１８ｍＬを加え、１００℃で２０時間、１２０℃で７時間、１３０℃で１９時間撹拌することにより化合物（Ａ）（ｎは２）０．８ｍｇを得た（収率３２％）。この物質は立体異性体の混合物だったので、さらにＨＰＬCで精製し、ＳＫ－ＩＶ－６８－２（０．３ｍｇ）とＳＫ－ＩＶ－６８－３（０．１ｍｇ）を得た（それぞれの収率１２％、４％）。ＨＰＬＣの条件は次の通り。カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　ＯＤＳ－ＨＧ－５（直径１０ｍｍ×長さ２５ｃｍ、野村化学製）、移動相：５０％アセトニトリル－水、流速：３ｍＬ/分、検出器：示差屈折計。
　ここで、式（１４）の化合物が第１中間体に相当し、式（１５）の化合物が第２中間体に相当する。そして、式（１７）の化合物が第３中間体に相当する。式（１５）の化合物に反応させる第２反応試薬としては式（５）の化合物（Ｒ”がエチル基）を採用している。
　最終的に生成したステロイド誘導体はＲ１～Ｒ６は全てＨであるが、式（１１）から式（１２）に変化させる工程にて反応させる糖として必要な置換基を導入したものを採用することでＲ１～Ｒ３の置換基に任意の置換基を導入できる。また、式（１７）から式（１８）に変化させる工程にて反応させる糖として必要な置換基を導入したものを採用することでＲ４～Ｒ６の置換基に任意の置換基を導入できる。
　（ＮＧＦ関連活性の測定）
　ラット副腎髄質褐色細胞腫由来ＰＣ１２細胞は、理研セルバンクから入手した。
　凍結保存細胞（２×１０4細胞）を培地（ＭＥＭＥ－１０％牛胎児血清－５％馬血清）で洗浄し、培地１０ｍＬとともに９ｃｍシャーレに撒き、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃、１週間静置培養した。細胞を収穫し新しい培地で２×１０5細胞／シャーレになるように希釈して１週間培養する継代培養操作を４回以上繰返した後、収穫した細胞を試験に用いた（継代操作は１２回まで）。以下、培養とは５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で行うものとする。
　２４穴マイクロプレートの各ウエルに、２×１０4細胞のＰＣ１２細胞を含む培地１ｍＬを入れ、ＣＯ２インキュベータ中、３７℃で２４時間静置培養した。培地を、適当な濃度のサンプルを含む無血清ＭＥＭＥ培地１ｍＬ（１％ＤＭＳＯ含有）に交換し、２４時間ごとに１週間、細胞の様子を観察した。計約１００細胞が観察できる視野３つを無作為に選択し、突起長が細胞の長径より長い細胞数を計測して、その割合をパーセントに換算して、神経突起伸張率（％）とした。
　サンプルを単独で添加した場合を神経突起伸長活性をＮＧＦ様活性の値とし、神経突起伸長の誘導が小さい濃度（１．０ｎｇ／ｍＬ）のＮＧＦと共に添加した場合の神経突起伸長活性をＮＧＦ増強活性の値とした。サンプルの添加濃度は１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬとした。対照試験として、特許文献１にて報告した化合物（acanthasteroside B3。特許文献１における化合物４０Ａに相当する。以下、単に「Ｂ３」と称する。：添加濃度は１０μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ）及びＮＧＦ（添加濃度は１．０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ）についても測定を行った。各濃度について３回ずつ測定した。なお、何も加えない（０μＭ）場合には神経突起伸張率は０であった。結果を表１・図２（ＮＧＦ様活性）及び表２・図３（ＮＧＦ増強活性）に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
　表１及び図２から明らかなように、ＳＫ－ＩＶ－６８－２についてのＮＧＦ様活性はＮＧＦよりは小さいもののＢ３よりも高い値を示した。特に６日目からの立ち上がりが期待できることが分かった。
　表２及び図３から明らかなように、ＳＫ－ＩＶ－６８－２及び－３についてのＮＧＦ増強活性はＮＧＦ１．０ｎｇ／ｍＬ及び４０ｎｇ／ｍＬの場合よりも高くなり、Ｂ３よりも僅かに低いものの高い値を示すことが分かった。
　（ステロイド誘導体の合成：その２）
　ステロイド誘導体合成方法（その１）に対して収率を４０倍程度にまで向上できる方法を以下に示す。
　図４に示す経路にて化合物（Ａａ）に相当する、ＭＯ－ＩＶ－５２－１を合成した。ＭＯ－ＩＶ－５２－１は図４に示すように、２４位の炭素原子における立体異性体の約１：１の混合物である。
　コール酸ナトリウム１．３ｇをDMF（１０ｍＬ）に溶解し、ヨウ化メチル０．３７ｍＬを加え、室温で１５時間撹拌することにより、コール酸メチル１．２ｇを得た（収率９７％）。
　コール酸メチル４．０ｇを無水ジクロロメタン６０ｍＬに溶解し、２，６-ルチジン５．０ｍＬとトリエチルシリルトリフラート(TESOTf)７．７ｍＬを加えて、室温で１．５時間撹拌することにより化合物（１０Ａ）７．２ｇを得た（収率１００％）。なお、ＴＥＳはトリエチルシリル基を表す。
　化合物（１０Ａ）２１７ｍｇをテトラヒドロフラン４．２ｍＬに溶解し、４６％フッ化水素酸０．３８ｍＬを加えて、室温で２０分間撹拌することにより化合物（１１Ａ）１７５ｍｇを得た（収率９５％）。
　化合物（１１Ａ）３１５ｍｇ、シアン化水銀１７２ｍｇ、臭化水銀２４５ｍｇを無水アセトニトリル１０ｍＬに溶解し、２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－α－Ｄ－ブロモキシロース２１４ｍｇを加えて、室温で３０分間撹拌することにより化合物（１２Ａ）３１４ｍｇを得た（収率７２％）。
　化合物（１２Ａ）１．４ｇをメタノール３６ｍＬに溶解し、炭酸カリウム１．３ｇを加え、室温で１時間撹拌することによりトリオール１．２ｇを得た（収率９７％）。このトリオール１．１ｇを無水ジクロロメタン１５ｍＬに溶解し、２，６-ルチジン１．０ｍＬとｔ-ブチルジメチルシリルトリフラート(TBSOTf)１．５ｍＬを加えて、室温で４時間撹拌することにより化合物（１３Ａ）１．７ｇを得た（収率１００％）。
　化合物（１３Ａ）１．７ｇをメタノール（４９ｍＬ）とテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、水酸化リチウム一水和物３．８ｇを水２６ｍＬに溶解した溶液を滴下した。この混合物を５０℃で３時間撹拌した後、１Ｎ塩酸１２０ｍＬで処理することにより粗カルボン酸１．５ｇを得た。この粗カルボン酸１．５ｇを無水ジクロロメタン３６ｍＬに溶解し、１，１-カルボニルジイミダゾール(Im2CO)４５２ｍｇを加えて室温で１時間撹拌した。この混合物にＮ，Ｏ-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩４０６ｍｇを加え、室温で２３時間撹拌することにより化合物（１４Ａ）１．５ｇを得た（２段階の収率８６％）。
　化合物（１４Ａ）７１３ｍｇを無水テトラヒドロフラン７．４ｍＬに溶解し、０℃で塩化イソプロピルマグネシウム（Ｍｅ２ＣＨＭｇＸにおけるＸがＣｌの化合物）のテトラヒドロフラン溶液（２Ｍ）１．９ｍＬをゆっくり滴下し、室温に昇温しながら２時間撹拌することにより化合物（１５Ａ）４２９ｍｇを得た（収率６１％）。
　無水テトラヒドロフラン１．４ｍＬにリチウムヘキサミチルジシラジドのテトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ）０．５５ｍＬを加え、－７８℃に冷却し、無水酢酸エチル(EtOAc)０．０５５ｍＬを滴下して１５分撹拌した。この混合物に化合物（１５Ａ）１２５ｍｇのテトラヒドロフラン溶液（１．４ｍＬ）を滴下し、－７８℃で１．５時間撹拌することにより化合物（１６Ａ）１２９ｍｇを得た（収率９５％）。
　無水ピリジン７．２ｍＬに塩化チオニル０．８５ｍＬを加え室温で４０分撹拌した後、０℃に冷却した。ここに化合物（１６Ａ）８２２ｍｇの無水ジクロロメタン溶液（８．９ｍＬ）を滴下し、０℃で２０分間撹拌することにより、脱水化合物の粗生成物８２９ｍｇを得た。次いで、無水テトラヒドロフラン１１ｍＬに水素化アルミニウムリチウムのテトラヒドロフラン溶液（２．０Ｍ）１．１ｍＬを加え、０℃に冷却後、前述の脱水化合物８５２ｍｇのテトラヒドロフラン溶液（１３ｍＬ）をゆっくり滴下した。この混合物を室温で１時間撹拌することにより粗アルコール５６５ｍｇを得た。次いで、この粗アルコール５６５ｍｇを酢酸エチル１６ｍＬに溶解し、白金黒８５ｍｇを加え、水素雰囲気下、室温で４８時間撹拌した。触媒をろ別した後、得られた粗生成物（ほぼ未反応の原料）に対し再度、白金黒１１３ｍｇを用いて接触還元を行うことにより化合物（１７Ａ）５１９ｍｇを得た（３段階の収率６４％）。
　化合物（１７Ａ）９２ｍｇ、シアン化水銀３５ｍｇ、臭化水銀４９ｍｇを無水ジクロロメタン１．８ｍＬと無水アセトニトリル１．８ｍＬの混合溶媒に溶解し、１，１，３，３－テトラメチルウレア(TMU)４．８μＬを加えた後、２，３，４－トリ－Ｏ－ピバロイル－α－ブロモキシロース５５ｍｇを加えて、室温で１時間撹拌することにより化合物（１８Ａ）９３ｍｇを得た（収率７６％）。
　化合物（１８Ａ）１４６ｍｇを無水エーテル３．９ｍＬに溶解し、０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液（１．５Ｍ）０．９４ｍＬを加え、０℃で２時間撹拌することにより粗生成物８９ｍｇを得た。この粗生成物８９ｍｇをテトラヒドロフラン０．７ｍＬに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ）０．７ｍＬを加え、５０℃で１６時間撹拌することにより化合物（Ａ）（ｎは２）４７ｍｇを得た（２段階の収率６８％）。この化合物は２４位の炭素原子における立体異性体の約１：１の混合物である。
　ここで、式（１４A）の化合物が第１中間体に相当し、式（１５A）の化合物が第２中間体に相当する。そして、式（１７A）の化合物が第３中間体に相当する。式（１５A）の化合物に反応させる第２反応試薬としては式（５）の化合物（Ｒ”がエチル基）を採用している。
　最終的に生成したステロイド誘導体はＲ１～Ｒ６は全てＨであるが、式（１１A）から式（１２A）に変化させる工程にて反応させる糖として必要な置換基を導入したものを採用することでＲ１～Ｒ３の置換基に任意の置換基を導入できる。また、式（１７A）から式（１８A）に変化させる工程にて反応させる糖として必要な置換基を導入したものを採用することでＲ４～Ｒ６の置換基に任意の置換基を導入できる。
（動物実験）
　マウス：15ヶ月齢のICR系雄性マウス（加齢マウス）、若齢対照として8週齢の同マウス（若齢マウス）を日本SLC（株）から購入し使用した。
　投与：ステロイド誘導体（ＭＯ－ＩＶ－５２－１）を、体重１０ｇあたり０．１ｍLの割合でマウスに投与したときに、ステロイド誘導体の投与量がマウスの体重基準で1 ｍｇ／ｋｇ（Ｍ１）または10 ｍｇ／ｋｇ（Ｍ１０）になるように調製した溶液（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を１質量％含有）を14日間毎日、皮下投与した。対照試験としてＤＭＳＯの１質量％水溶液を同様に皮下投与した。
　行動実験：実験１３日目にオープンフィールド試験による行動観察を行った結果、ステロイド誘導体の投与の有無による顕著な行動変化は認められなかった。その後、実験１４日目にＹ字型迷路実験、１４及び１５日目に新奇物体認知試験を行った。
　Ｙ字型迷路実験は木製のＹ字型の迷路（上部幅１０ｃｍ、下部幅３ｃｍ、高さ１２ｃｍ、長さ４０ｃｍのアームの一端を閉じて行き止まりとし、開放された端部を放射状（隣接するアームとの角度が１２０°）に接続してあり、その内部を自由に行き来できるようにしてある。内側は黒く塗ってある。）の中を自由に探索行動させ、次に侵入するアームが直近の過去２回侵入したアームと異なる率を交替行動率（Alternation behavior（％））として記録し、短期記憶の指標とした。
　新奇物体認知試験は灰色アクリル製の箱（縦３０ｃｍ、幅３０ｃｍ、高さ３５ｃｍ）を用いて行った。訓練試行時（１４日目）と２４時間後の保持試行時（１５日目）とで異なる物体に接触させ、保持試行時における全接触時間あたりの新奇物体に対する接触時間の割合を算出した。訓練試行時には木製の青色三角柱と赤色四角錐とに接触させ、保持試行時には赤色四角錐を黒色のゴルフボールに置き換えて試験を行った。
　結果（Ｙ字型迷路実験）：加齢マウスの対照群が低い交替行動率を示すのに対し、投与群では有意に改善し、若齢マウスと同等のレベルを示した（図５）。若齢マウスに投与しても効果が見られないように見えるが、これは70％付近が頭打ち（天井効果）である（100%は一定方向に回転する異常行動）。天然ステロイド配糖体（acanthasteroside B3：Ｂ３）についても同様にＹ字型迷路実験を行った結果（図６）と比較すると、ＭＯ－ＩＶ－５２－１では1ｍｇ／ｋｇの低い投与量でも効果を示すのに対し、天然ステロイド配糖体（Ｂ３）では1ｍｇ／ｋｇを超えた濃度で効果を示すことから、合成品の効果が天然物より高いことが示唆される。
　結果（新奇物体認知試験）：結果を図７に示す。全てのマウスについて訓練試行時には青色三角柱と赤色四角錐とのそれぞれについて同程度に接触したことから、嗜好性に偏りが少なく、試験に用いる物体として適正なものであることが推認された。
　保持試行時には新奇物体である黒色のゴルフボールへの接触時間の割合は、加齢マウス（対照群）では、ほぼ５０％とほとんど変化がなかったのに対し、加齢マウス（１０ｍｇ／ｋｇ投与群）では若いマウスと同程度にまで向上し、認知記憶障害の改善効果が推認された。加齢マウス（１ｍｇ／ｋｇ投与）では対照群よりも新奇物体への接触時間の割合の割合は僅かに増加し、若干の効果が推認された。なお、若齢マウス（１０ｍｇ／ｋｇ投与群）の結果が若齢マウス（対照群）と同程度であることから、若齢マウスにおける認知記憶力増強効果については効果を認めることはできなかった。
　本発明の新規ステロイド誘導体はＮＧＦ関連活性などの発現が期待できる。ＮＧＦ関連活性を有する物質は薬理作用として痴呆治療、学習能力向上などに有効な作用を発揮することが期待され、薬剤としての応用が期待できる。

Claims (6)

  1. 　下記一般式（１）で示される化合物である新規ステロイド誘導体。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ６は水素又はアルキル基から全て独立して選択可能な官能基であり、同一であっても異なるものであっても良い。ｎは１又は２である。ステロイド骨格中の１、２、４～１６位の炭素原子に結合する水素元素のうちの１つ以上をメチル基、ＯＨ基、又はメトキシ基に置換できる。）
  2. 　前記一般式（１）に記載の化合物は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）である請求項１に記載の新規ステロイド誘導体。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式（Ａ）、（Ｂ）中のｎは１又は２）
  3. 　下記一般式（１）で示される化合物である新規ステロイド誘導体を製造する方法であって、
    　下記一般式（２）で示される第１中間体に対し、Ｍｅ２ＣＨＭｇＸ（ＸはＣｌ又はＢｒ）で表される第１反応試薬を反応させ、一般式（３）で表される第２中間体を得る工程と、
    　前記第２中間体から最終生成物とする工程と、
    　を有することを特徴とする新規ステロイド誘導体の製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ６は水素又はアルキル基から全て独立して選択可能な官能基であり、同一であっても異なるものであっても良い。ｎは１又は２である。ステロイド骨格中の１、２、４～１６位の炭素原子に結合する水素元素のうちの１つ以上をメチル基、ＯＨ基、又はメトキシ基に置換できる。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     式（２）及び（３）で示された化合物がもつステロイド骨格中、前記一般式（１）と対応する位置に同じ置換基をもつ。但し、ＯＨ基をもつ場合にはＯＱ基が代わりに導入される。；Ｒ’はＯＱ基、ＯＨ、又は、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     である。；Ｑは水酸基の保護基であり、全て同一であるか、又は、異なるものがある基である。）
  4. 　　下記一般式（１）で示される化合物である新規ステロイド誘導体を製造する方法であって、
    　下記一般式（３）で示される第２中間体に対し、下記一般式（５）～（８）で表される化合物のうちの１つである第２反応試薬を反応させ、一般式（４）で表される第３中間体を得る工程と、
    　前記第３中間体から最終生成物とする工程と、
    　を有することを特徴とする新規ステロイド誘導体の製造方法。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （式（１）中、Ｒ１～Ｒ６は水素又はアルキル基から全て独立して選択可能な官能基であり、同一であっても異なるものであっても良い。ｎは１又は２である。ステロイド骨格中の１、２、４～１６位の炭素原子に結合する水素元素のうちの１つ以上をメチル基、ＯＨ基、又はメトキシ基に置換できる。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     （式（３）及び（４）で示された化合物がもつステロイド骨格中、前記一般式（１）と対応する位置に同じ置換基をもつ。但し、ＯＨ基をもつ場合にはＯＱ基が代わりに導入される。；Ｒ’はＯＱ基、ＯＨ、又は、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     である。；式（３）及び（４）中、Ｑは水酸基の保護基であり、全て同一であるか、又は、異なるものがある基である。；前記第２反応試薬として、式（５）～（７）のうちの何れかを選択する場合には、ｎが２、式（８）の化合物を選択する場合にはｎが１である。）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     （式（５）～（７）中、Ｒ”はアルキル基から独立して選択可能である。）
  5. 　請求項１に記載の新規ステロイド誘導体、医薬上許容できるそのエステル又はそのプロドラッグを含有する医薬。
  6. 　ＮＧＦ関連活性を発現することにより作用する請求項５に記載の医薬。
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