WO2010056099A1 - Compuesto de regeneración celular - Google Patents

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WO2010056099A1
WO2010056099A1 PCT/MX2009/000121 MX2009000121W WO2010056099A1 WO 2010056099 A1 WO2010056099 A1 WO 2010056099A1 MX 2009000121 W MX2009000121 W MX 2009000121W WO 2010056099 A1 WO2010056099 A1 WO 2010056099A1
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stem cells
crc
compound
cell
regeneration
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PCT/MX2009/000121
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French (fr)
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Gerardo Martín GONZÁLEZ LÓPEZ
Dolores Javier SÁNCHEZ GONZÁLEZ
Carlos Armando Sosa Luna
Original Assignee
Sociedad Internacional Para La Terapia Celular Con Celulas Madre, Medicina Regenerativa Y El Antienvejecimiento, S.C.
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells

Definitions

  • stem cells known in English as stem cells are also known as “stem cells”, “stem cells”, “precursor cells”, “progenitor cells” and “stem cells”.
  • the stem cell is the precursor of approximately 250 differentiated cell lines and their stages of partial differentiation that are losing the pluripotential capacity of the original stem cell and are compromising with a certain cell lineage to form specific specialized cells, such as neurons, pancreatic beta cells, cardiomyocytes, among many others. >
  • Stem cells are characterized by the fact that they can divide simultaneously to maintain cellular self-renewal; that is, a sustained production of stem cells similar to her.-
  • Trejo-Bahena Nl Cellular and molecular biology. Editorial Alfil; Mexico Federal District, 2006). These characteristics show the injection of stem cells as a potential therapy, useful for carrying out the cell regeneration in patients.
  • Sosa-Luna CA Cell Therapy with Stem Cells and Regenerative Medicine. Mexico 2008;
  • stem cells are cultured without their cell bed (feeder cells), stem cells die and begin to differentiate in a disorderly manner.
  • feeder cells stem cells
  • derived from primate primordial cells refers to a cell culture medium to make
  • This cell culture medium This cell culture medium
  • Phase I to III medicine (Traynor A. et. Al. "Treatment of severe systemic lupus erythematosus with high-dose chemotherapy and haematopoietic stem-cell transplantation: a phase I” published in August 2000 in The Lancet. VoI. 356 Andrew P. et. Al, "The Adult Blood and
  • stem cells are cultured and sometimes expanded with the methods and culture media previously described in the background of the present invention, and the stem cells are administered in bulk or as boluses by procedures known as bone marrow transplantation, very similar to conventional blood transfusions, or injections of purified stem cells are applied, in which highly specialized surgical procedures are included, in which interventional radiology procedures can be integrated, which also requires the expense of medical fees, hospitalization, anesthesia, clinical laboratory and cabinet studies. Orlic and collaborators injected in the peripheral area of acute myocardial infarction, stem cells, these cells were differentiated in structures of the heart, improving the function of the infarcted heart.
  • CRC Cellular Regeneration Compound
  • FIG. 1 shows a diagram of the invention
  • Figure 2 refers to the results obtained after applying "Cellular Regeneration Compound” (CRC), in experimental animals Wistar rats with Diabetes Mellitus previously induced with streptozotocin, where the increase in renal function measured by creatinine clearance (ml / min) ) and morphological analysis of the histological sections of the glomeruli.
  • CRC Cellular Regeneration Compound
  • CRC also indicates the quantities, conditions and elements that are required to produce the CRC ("Cellular regeneration compound"): In No. 1; It refers to a cell culture box with a purified line of cryopreserved stem cells cryopreserved -198 0 C, which are thawed gradually increasing the temperature at a rate of 2 degrees Celsius per minute ( ⁇ 2 ° C / min.) until reaching the temperature of twenty degrees Celsius (-20 0 C).
  • Cellular “(CRC), which is solution” A " is prepared under sterile conditions and in a controlled environment at a cooling temperature of less than sixteen degrees Celsius (16
  • cupric sulfate pentahydrate 16.9 mg of cupric sulfate pentahydrate, 38.1 mg of magnesium sulfate, 1.3 mg of sodium iodide, 14 mg of sodium fluoride, 163.9 mg of sodium chloride, 10 mg of thiamine, 250 mg of pyridoxine, 1000 mg of ascorbic acid , 1.0 mg of activin, 0.2 mg of stimulatory factor of pluripotential cells (C-kit), 0.6 mg of procaine derivative G1, 0.4 mg of procaine derivative G2, and 0.4 mg of procaine derivative G3.
  • C-kit stimulatory factor of pluripotential cells
  • the stem cells prehydrated in the base solution "A” are evaluated in the confocal microscope that uses a laser light source (laser), which allows various transverse images of the stem cells (No. 6) (Ordonez RM) , Espinosa AM, Sánchez- González DJ et al.
  • Laser laser light source
  • Espinosa AM Espinosa AM
  • Sánchez- González DJ et al Enhanced oncogenicity of Asian-American human papillomavirus 16 is associated with impaired E2 repression of E6 / E7 oncogene transcription. J Gen Virol 2004; 85:
  • Stem cells with healthy morphology are taken in a sterile syringe (No. 10).
  • No. 11 of Figure 1 It refers to the detailed morphological study that discards membrane alterations, infection, genetic alterations.
  • endodermal growth factor K2 FGE
  • FGE endodermal growth factor K2
  • 1/3 refers to the fourth base solution "D" of the CRC; useful for inducing cell regeneration by
  • pluripotentials without any genetic modification which are cryopreserved or lyophilized in bottles or boxes of cell lines in culture, after gradually defrosting them from -20 0 C to 8 o C, they are prehydrated in the base solution of the cell regeneration compound (base solution "A") which is the base solution for preparing the cell regeneration compound (bottles "B", “C” and “D”).
  • the "CRC” (in its base solutions “B”, “C” and “D”) serve as inducing compounds of the stem cells in cell therapy protocols, favoring their regenerative capacity and anti-aging
  • the application of the procedure to prepare the cell regeneration compound (“A”, “B”, “C” and “D” bottles) includes sterility conditions, morphological analysis and the quantification of stem cells.
  • the application of this "CRC” in cell therapy No. 16 and No. 17 figure 1/3 (bottles "A”, “B”, “C” and “D") allows cell therapy with stem cells to be very safe and does not require gene typing studies for HLA haplotypes because both the base
  • the “CRC” forms a liquid composition composed of a concentration of 2 x 10 9 pluripotential stem cells, previously analyzed and quantified by confocal microscopy, which are prepared by adding various substances in the concentrations and conditions already described (oligometals, activin, factors of growth of fibroblasts (FGF), Beta Transformation Factor (TGF- ⁇ ), ascorbic acid, thiamine, riboflavin, Neurological Growth Factor, retinol, procaine derivative G1, procaine derivative G2, procaine derivative G3, L-Cysteine, Growth Factor Mesodermal A1 (FGM), K2 endodermal growth factor (FGE), Pluripotential cell stimulating factor (cKit), Interleukin 7 (IL-7), Interleukin 3 (IL-3), Monocyte Colon Stimulating Factor (M-CSF ) and Granulocyte Colony Stim
  • the “CRC” can be applied by various routes of paraenteral administration, at a dose of 0.1 milliliters per kilogram of weight, generally five applications are used intravenously with a volume of 5 milliliters of the cell regeneration compound and five intramuscular injections preferably in the deltoid region (No 17); injecting 0.5 milliliters of the same compound every 7 days, obtaining cell regeneration effects, to induce: neurogenesis, hematopoiesis, chondrogenesis, osteogenesis, vasculogenesis and angiogenesis that can be assessed in the skin, renal function tests, as well as the disappearance of neurological symptoms , inflammation and joint pain that occur due to biological aging and the development of chronic degenerative diseases.
  • This cycle of ten injections of the compound can be used twice to three times to complete thirty injections in a period of four months.
  • the application of the CRC is the safest, since most of our patients (plus 700 patients with 10 applications of the CRC each) have not had to run from surgical risks and have not required the support of interventional radiology, and only in some cases have been required of procedures that require an operating room, and of subspecialized surgeons and anesthesiologists. Intensive therapy is generally not required, and after three years of application no complications have been observed, however, all patients improve markedly enough by appreciating clinically, with signs and symptoms of cell regeneration.
  • the "CRC” is currently the only real option of cell regeneration for some incurable diseases or that do not have current treatment.
  • the "CRC” is a source of replacement of dead, devitalized cells and cell regeneration in diseased tissues, prolonging and improving the quality of life in healthy or sick people.
  • Circulating stem cells released by the "CRC” can be incorporated into undamaged organs, and act as anti-aging agents, by increasing the average life of the cells of the organ and the person in question [Méndez-Bolaina E, Sanchez-Gonzalez DJ et al. . Effect of caveolin-1 scaffolding peptide and 17 ⁇ -estradbl on intracellular Ca2 + kinetics evoked by angiotensin Il in human vascular smooth muscle cells. Am J Physiol CeII Physiol 2007; 293: C1953
  • the object of this invention is to provide a cell regeneration compound that does not exist in the market, which allows the application of stem cells in the form of cellular therapy, avoiding studies of HLA typing gene, and surgical and interventional radiology interventions used in the implant. or cell transplant.
  • the "CRC” acts using the principle of cell regeneration, which naturally occurs in body tissues. If we consider that Throughout life, organisms suffer from continuous wear, if there is no cell regeneration, the life expectancy of living beings would be significantly reduced.
  • CRC Cellular “(CRC) is that it allows the intravenous, intramuscular and local administration of stem cells for therapeutic purposes in chronic degenerative conditions in which chronic renal failure and Diabetes Mellitus are included, After extensively describing its composition and way of preparing the "Compound of Cellular Regeneration" the inventors Gerardo
  • CRC Cellular Regeneration Compound
  • CRC Compound of Cellular Regeneration
  • CRC Cellular Regeneration Compound
  • CRC Cellular Regeneration
  • the transdifferentiation that is to say the stem cells acquire the characteristics of the tissue cells where they are implanted more quickly.
  • changes in the microenvironment are formed that attract the stem cells released and activated by the "CRC” that are circulating.
  • the circulating stem cells of the "CRC” can be incorporated into undamaged organs, acting as anti-aging agents by providing bioactive molecules of cellular regeneration, which increase the average life of the cells of the organ and of the person in question.
  • CRC Cellular Regeneration Compound
  • Diabetes Mellitus that is the result of the destruction or degeneration of pancreatic B cells and their vascular complications, which can be treated with CRC since cell regeneration is induced by inducing vasculogenesis, angiogenesis, neurogenesis and myogenesis, which allows to reverse the natural history or clinical evolution of patients with chronic renal failure, with loss or dysfunction of endothelial cells, manifesting with arterial hypertension, and diabetic nephropathy;
  • vasculopathy that presents with venous, arterial insufficiency, ulcers and infections of difficult scarring in the lower extremities, a condition known as diabetic foot. (Sosa Luna CA et. Al.
  • the "CRC” has a biological anti-aging effect, this is explained because as time passes the stem cells become scarcer, perhaps this decrease is the one that conditions the greater vulnerability of the elderly. If we inject the "CRC” into the circulation of these patients they will have more capacity for cell regeneration, since in the circulation the number of stem cells activated and released by the "CRC” is increased they have the ability to migrate from the circulation to the organs, devices and systems that are aging.
  • the "CRC” stem cells have the ability to transdirect into different types of cells Differentials such as: the endothelial and others that make up the organs and tissues of the body, observing a cellular regeneration of the skin, greater hydration, luminosity, turgencies of
  • the biological aggression is also added to the environmental aggression (which includes various infections, accidents, injuries and other diseases whose origin and pathophysiology is not yet known), as well as the endogenous aggression which is divided into the alterations of the environmental aggression (which includes various infections, accidents, injuries and other diseases whose origin and pathophysiology is not yet known), as well as the endogenous aggression which is divided into the alterations of the environmental aggression (which includes various infections, accidents, injuries and other diseases whose origin and pathophysiology is not yet known), as well as the endogenous aggression which is divided into the alterations of the
  • Protein damage can be best explained by poor diet (rich in carbohydrates, poor in amino acids and proteins) and damage to mitochondria, which also occur. 5 deteriorate over time, although they do not always do them constantly. When the damage exists, it is possible to structurally show it with high-resolution confocal microscopy
  • stem cells are released from the bone marrow and other reservoirs, crossing the bloodstream to those tissues that are most in need.
  • this organ fires compounds that emit a signal so that the stem cells are released into the circulation.
  • the organ starts the cascade of inflammation by releasing compounds that attract the stem cells to this particular organ.
  • the stem cells that were released by our cell regeneration compound follow the path of the concentration of these compounds and leave the bloodstream to migrate to the organ where they are proliferating and begin to differentiate into cells of that particular organ.
  • CRC to release stem cells activated in the circulation through our invention and the protocols described cell therapy for regenerative medicine and antiaging are of great importance since the circulating stem cells decrease with increasing 'age and disease Chronic and degenerative (Pacheco-Ram ⁇ rez MA, Rodr ⁇ guez-Perales MA, López-Chavira A 1 Canul-Andrade LP, Mart ⁇ nez-Mart ⁇ nez CM, Sánchez-González DJ. Expression of nitric oxide synthases in head and neck glomic tumors. Rev Sanid Milit Mex 2006; 60 (6): 369-378). In this way, it could be concluded that children and babies have a very effective "stem cell system" and do not need the support of the "CRC”.
  • chromosomes genetic material
  • DNA deoxyribonucleic acid
  • the stem cells contain intact DNA as well as healthy mitochondria and many proteins that have the ability to reverse many of the effects of aging, the stem cells are rich in the telomerase enzyme which can decrease the loss of telomeric DNA sequences in aged or senescent cells.
  • stem cells are the best vector, and can be considered as "intelligent micro-spheres" (since they are microscopic living organisms, with the total capacity of self-replication as well as of tropism, that is to say they recognize and travel to the site of the damage or injury, as well as the transdifferentiation of differences in the missing or injured cell type) (Sánchez-González DJ et. al. Biological effects of fields Industrial frequency electromagnetic. Model in rats. Rev Sanid Milit Mex 2007; 61 (6):
  • stem cells Since they contain within them the complete human genome, which, unlike the gene therapy protocols, is intact, undifferentiated and can give rise to all the proteins that give rise to the various cell types that constitute the human body, It should be noted that in cell therapy with stem cells, stem cells not (negative) have been modified, altered or even touched in their genetic machinery (DNA), they have only been protected from all the harmful agents mentioned above, such as irradiation, infectious agents, etc. So the cells that are transplanted have a biological age of zero (new) years.
  • Example 1 Chronic and neurodegenerative diseases are a group of clinical entities that are increasingly diagnosed in our country and in the world. These diseases include: Alzheimer's dementia, Parkinson's disease, Huntington's disease and Amyotrophic Lateral Sclerosis (Aguilera P, Sánchez-González DJ et. Al. Time-related changes in constitutive and inducible nitric oxide synthases in the rat striatum in a model of Huntington's disease.
  • Neurotoxicology 2007; 28 (6): 1200-1207 The particularity of these clinical entities is that they do not have a form of treatment that limits or reverses the severe deterioration and disability they produce. They have an invariably progressive, disabling and short-term mortality course in some, and significant disability in all of them. Given the little curative effect of current treatments, the use of cell therapy as a therapeutic alternative has been explored. Brain repair through the application of cell transplants is the focus of attention in recent research. Additionally, the nervous system has immunological privileges that reduce the need for the usual immunosuppressants in transplants, even in heterologists. Additionally, autologous stem cell transplantation favors that these cells can be established in the brain and transdifferentiated to neurons.
  • Example 2 Patients with refractory angina and a history of myocardial ischemia or infarction, when they can no longer be treated with conventional therapies such as coronary angioplasties and Sten placements, with ejection fraction of 37.5% after receiving cell therapy With “CRC” they can improve their ejection fraction in months, leaving 47% and reducing medication requirements and symptoms. Patients with heart failure with functional class III and 30% basal ejection fraction improve after five to fifteen sessions of "CRC" cell therapy. All patients will improve to a functional class II. Some of the SPECT Sestamibi Tc99m studies after the "CRC" treatment during clinical follow-up show improvement due to cellular regeneration translated into an increase in myocardial vascularity and viability.
  • Example 3 Chronic Renal Failure and complications of Diabetes Mellitus.
  • Figure 3 shows a graph with the average result of creatinine clearance before and after treatment with "CRC” in our patients with chronic renal failure, obtained of creatinine clearance studies before (No 1) and after (No 2) receiving ten applications 5 ten applications of "CRC” intravenously and intramuscularly.
  • Example 4 In neurodegenerative diseases, from 2001 and 2003, the results of controlled studies of embryonic dopamine neuron transplantation in patients with mild-moderate Parkinson's disease were reported. In these studies it was concluded that the application of multiple implants, including the nigra substance and striatum in animal models produce better results. Likewise, these findings were confirmed in patients, who showed clinical improvement as well as with the use of positron emission tomography with fluorodopa (PET), and without developing motor complications. The objective of implanting stem cells in Parkinson's disease is to reconstruct the neural neural pathway with precursors of neural stem cells or grafts of dopamine neurons.
  • Example 5 in dementias that are clinical syndrome characterized by severe loss of acquired cognitive and emotional skills that interfere with daily performance and quality of life. Dementia can be caused by more than 55 diseases, some not progressive and occurs mainly in late stages of life. The prevalence is one% in people 60 years of age and doubles every five years, to increase to 30 or 50% in people 85 years and older.
  • Alzheimer's dementia which explains between 80 and 85% of the causes of dementia.
  • Other forms are vascular dementia (due to multiple cerebral infarctions); dementia in Huntington's disease, fronto-temporal dementia, dementia with 15 Lewy bodies and AIDS dementia, among others. Of all cases with dementia, less than% are susceptible to treatment with the "CRC"
  • Example 6 We have high expectations due to the improvement seen in patients with neurological conditions, facial paralysis for which we have used the "CRC” in patients with Down syndrome, autism, deafness, muteness, sequelae due to cerebral vascular events and all have presented improvement in the symptoms and signs they present, all of these have been treated With external protocol and we are in the process of building an internment area to apply the cell therapy with "CRC” in patients with severe mental and psychiatric conditions, such as Chronic Schizophrenia, and we have a cooperation and research agreement with the Mexican Association of Friends of Schizophrenic Patients AC (AMAPE).
  • AMAPE Mexican Association of Friends of Schizophrenic Patients AC
  • Example 7 In traumatic injuries, osteoarthritis, sprains, for a faster recovery from surgery or during traumatic spinal cord injury is not a neurodegenerative disease. However, in our laboratory we have been working on the search for the most appropriate methodology to find the repair of the damaged spinal cord.

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Abstract

Esta invención se refiere a un compuesto de regeneración celular que permite la administración intravenosa, intramuscular y local de células madre con fines terapéuticos en padecimientos crónicos degenerativos en los que se incluye la Insuficiencia Renal Crónica y la Diabetes Mellitus. El objeto de esta invención es proporcionar un compuesto de regeneración celular no existente en el mercado, que permite aplicar células madre en forma de terapia celular, evitándose estudios de genetipificación de HLA, e intervenciones quirúrgicas y de radiología intervencionista que se emplean en el implante o trasplante de células madre. La fórmula del compuesto de regeneración celular que permite aplicar de células madre sin modificación genética alguna, las cuales se encuentran criopreservadas o liofilizadas en frascos o cajas de líneas celulares en cultivo, después de descongelarlas gradualmente de -20° C a 8° C, son prehidratadas en la solución base del Compuesto de Regeneración Celular (CRC).

Description

COMPUESTO DE REGENERACIÓN CELULAR ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las células madre conocidas en inglés como stem cells, también se les conoce como "células troncales", "células tronco", "células precursoras", "células progenitoras" y "células estaminales".
La célula madre es Ia precursora de aproximadamente 250 estirpes de células diferenciadas y sus estadios de diferenciación parcial que van perdiendo Ia capacidad pluripotencial de Ia célula madre original y se van comprometiendo con un determinado linaje celular para formar células especializadas específicas, como son las neuronas, las células beta pancreáticas, los cardiomiocitos, entre otras muchas más. >
Las células madre se caracterizan por que pueden dividirse simultáneamente para mantener una autorenovación celular; es decir una producción sostenida de células madre semejantes a ella.-
Así como Ia transdiferenciación y tropismo que permite generar células hijas comprometidas hacia una estirpe celular específica, además de que tienen Ia capacidad de migrar al sitio de lesión o daño en el que ocurre Ia diferenciación celular, después de que ocurra Ia implantación, observándos Ia regeneración celular en los tejidos sanos y enfermos (Sánchez-González DJ,
Trejo-Bahena Nl. Biología Celular y Molecular. Editorial Alfil; México Distrito Federal, 2006). Estas características hacen ver a Ia inyección de células madre como una terapéutica potencial, útil para llevar acabo Ia regeneración celular en enfermos. (González-López GM, Sánchez-González DJ y
Sosa-Luna CA. Terapia Celular con Células Madre y Medicina Regenerativa. México 2008;
Editorial Alfil). Thomson y colaboradores {U.S. Pat. No. 5, 843,780; Proc. Nati. Acad. ScL USA 92:7844, 1995} fueron los primeros en aislar y propagar células madre de primates. En forma subsiguiente derivaron Ia primera línea celular de células madre humana a partir de los blastocistos. Gearhart y 5 colaboradores derivaron células madre germinales a partir de tejidos fetales de origen gonadal
(Shamblott etal. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 95:13726, 1998; and U.S. Pal No. 6,090,622).
Tanto las células madre derivadas de blastocistos como las que se obtienen de tejidos gonadales,
10 tienen características que las definen como células madre pluripotentenciales, es decir; pueden
ser cultivadas durante largos periodos de tiempo sin que estas entren en diferenciación,
15manteniendo un morfología con cariotipo normal y son capaces diferenciarse un importante
número de células especializadas.
El problema más importante para utilizar células madre pluripotentes en protocolos de terapia
20 ' . celular es que estas células madre son cultivadas tradicionalmente sobre una cama de células
(feeder cells) que previenen Ia diferenciación (U.S. Pat. No. 5, 843,780; U.S. Pal No. 6, 090,622).
25De a cuerdo a los experimentos de Thomson y colaboradores (Science 282:114, 1998), Cuando
las células madre son cultivadas sin su cama de células (feeder célls), las células madre mueren y comienzan a diferenciarse en forma desordenada. En Ia patente Internacional publicada por
30 Geron Corp. (IVO 99/20741), titulada: "Métodos y materiales para el crecimiento de células madre
derivadas de células primordiales de primate"; se refiere a un medio de cultivo celular para hacer
35crecer células madre de primates y que permanezcan en un estado de indiferenciación bajo
condiciones de presión osmótica baja y bajo nivel de endotoxinas. Este medio de cultivo celular
puede combinar suero para soportar las células madre y Ia cama de células, el medio de cultivo
40 celular además incluye aminoácidos no-esenciales, antioxidantes, factores de crecimiento nucleótidos y sales de piruvato. Otra patente Internacional publicada por Geron Corp. (WO
4501/51616) titulada: "Técnicas de crecimiento y diferenciación de células madre humanas pluripotentes" Y el articulo de Xu y colaboradores (Nature Biotechnology 19:971, 2001) titulado:
"Crecimiento de células madre indiferenciadas, sin cama de células (feeder cells"). El artículo de 50
Lebkowski y colaboradores (Cáncer J. 7 Suppl. 2:S83, 2001) titulado: "Células madre embrionarias humanas: cultivo, diferenciación, y modificación genética para aplicaciones de medicina regenerativa". Estas publicaciones reportan ejemplos de estado del arte de Ia técnica y siempre se tratan de medios y métodos de cultivo celular para propagar células madre y mantenerlas en un estado de indiferenciación. Sin embargo, no existe ningún "Compuesto de
Regeneración Celular" que permita inyectar células madre en forma de terapia celular a seres humanos. Ni existe algún producto farmacéutico similar que pueda actuar como "Compuesto de
Regeneración Celular", que haya tenido éxito en revertir Ia progresión de enfermedades crónicas degenerativas, como Ia Insuficiencia Renal Crónica inducida por Ia Diabetes Mellitus u otras patologías (Chirino Yl1 Sánchez-González DJ et. al. Protective effects of apocynin against cisplatin-induced oxidative stress and nephrotoxicity. Toxicology 2008; 245: 18-23 y Razo- Rodríguez AC, Chirino Yl, Sánchez-González DJ et. al. Garlic powder ameliorates cisplatin- induced nephrotoxicity and oxidative stress. J Med Food 2008; 11(3):582-586.).
Si bien las células madre se han aplicado en algunos protocolos clínicos de investigación en
Medicina en fase I a III (Traynor A. et. al. "Treatment ofsevere systemic lupus erythematosus with high-dose chemotherapy and haematopoietic stem-cell transplantation: a phase I" publicados en Agosto del 2000 en Ia revista The Lancet. VoI. 356. Andrew P. et. al, "The Adult Blood and
Marrow Stem CeII Transplant Service" Hackensack. Bone Marrow Transplantation, Abril del 2000,
Sykes M. et. al. "Treatment of severe autoimmune disease by stem-cell transplantation" Nature
No. 2; VoI. 435 (7042), pp. 620-7. June 2005, Shamblott MJ et. al. "CeII therapies for type 1 diabetes mellitus". Expert Opin Biol Ther 2004 Mar; VoI. 4 (3), pp. 269-77); en todos estos protocolos las células madre son cultivadas y en ocasiones expandidas con los métodos y medios de cultivo descritos previamente en los antecedentes de Ia presente invención, y las células madre se administran en masa o como bolos mediante procedimientos conocidos como trasplante de médula ósea, de forma muy similar a las convencionales transfusiones sanguíneas, o bien se aplican inyecciones de células madre purificadas, en las que se incluyen procedimientos quirúrgicos altamente especializados, en los que se pueden integrar procedimientos de radiología intervencionista, los cuales además requiere de Ia erogación de gasto de honorarios médicos, los de hospitalización, anestesia, estudios de laboratorio clínico y gabinete. Orlic y colaboradores inyectaron en Ia zona periférica del infarto agudo al miocardio, células madre, estas células se diferenciaron en estructuras del corazón, mejorando Ia función del corazón infartado.
La reparación cardiaca producida por las células madre redujo Ia mortalidad en un 68% y el tamaño del infarto en un 40%.(Or//c D. et. al. Proc. Nati. Acad. ScL USA 2001; 98(18):10344-
10349) Otros trabajos relacionados con Ia células madre están contribuyendo a establecer quecuanto más altos sean los niveles de células madre en circulación, mayor es Ia habilidad del cuerpo para regenerarse y estar por más tiempo sano (Werner et.al. N Engl J Med.2005; 8; 353
(10):999-1007).
Este tipo de invenciones e investigaciones están cambiando el paradigma en Ia historia de Ia humanidad en Ia que se pensó que era imposible reparar el daño causado una vez que se ha establecido Ia muerte o daño celular en un órgano vital como es el caso de los infartos al corazón.
Otras investigaciones complementarias son las de Bozlar M et. La. (2005) Saudi Med J.
26(8):1250-4. Kong D1 et. al. (2004) Circulation. 110(14) .2039-46. Eroglu E, et al. Agalar F, Altuntas I1 Eroglu F. (2004) Tohoku J Exp Med. 204(1):11-6. Tomoda H, Aoki N.et.al. Clin Cardiol.
2003 Od; 26(10):455-7. Krause DS et. Al. CeI1 105:369-77. Eglitis M. et. Al. Proc. Nati. Acad. ScL USA VoI. 4094, pp. 4080-4085. Camargo FD, et. Al. Nature 20039(12):1520-27; y el de lanus A, et. Al. J. Clin. Invest. (2003) 111:843-850. Secretaría de Salud. Manual de Procedimientos
Operativos de Ia Unidad de Trasplante de Progenitores Hematopoyéticos, del Instituto Nacional de Pediatría (2008). DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Como se puede constatar en el estado de Ia técnica, hasta el momento de Ia presente invención, Ia aplicación terapéutica de células madre en inyecciones o transfusiones no incluye un
"Compuesto de Regeneración Celular" , ya que Ia terapia celular con células madre se ha realizado en forma directa y empleando células frescas de médula ósea, cordón umbilical o líneas celulares de células madre pluripotenciales cultivadas y purificadas, las cuales son implantadasen el sitio de daño o a través de trasplantes de médula ósea (similares a Ia transfusión sanguínea), procedimientos terapéuticos que incluyen necesariamente Ia gen tipificación del haplotipo HLA del donador y receptor del trasplante, procedimientos que elevan el costo, que igualmente se ve incrementado por Ia mano de obra altamente especializada, como de cirujanos subespecialistas, como son los neurocirujanos y los cirujanos cardiovasculares, que estáncapacitados para llevar las células madre en grandes cantidades a los sitios anatómicos específicos donde se requieren, a través de avanzados procedimientos quirúrgicos (Sánchez- González DJ, Trejo-Bahena Nl. Practicas de Histología. Editorial Alfil; México Distrito Federal, 2007). Con Ia finalidad de suprimir estos y otros inconvenientes, se pensó en el desarrollo de Ia presente invención "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC), que se pretende proteger pormedio de Ia presente solicitud, pues se trata de un compuesto integrado por cuatro frascos con soluciones base ("A", "B", "C" y "D") en las cuales se suspenden elementos celulares (células madre en estado de criopreservación a una temperatura de menos ciento noventa y seis grados centígrados (-196° C) y el polvo derivado de Ia misma cantidad de células deshidratadas por liofilización) para diversas aplicaciones terapéuticas en Terapia Celular, Medicina Regenerativa yAntienvejecimiento. Los detalles característicos de nuestra invención titulada "Compuesto de
Regeneración Celular" (CRC), se muestran claramente en Ia siguiente descripción y en las 3 figuras que Ie acompañan. La figura 1 muestra un esquema de Ia invención, Ia figura 2 se refiere a los resultados obtenidos después de aplicar "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC), en animales de experimentación ratas Wistar con Diabetes Mellitus inducida previamente con estreptozotocina, en donde se aprecia el aumento de Ia función renal medida por Ia depuración de creatinina (ml/min) y el análisis morfológico de los cortes histológicos de los glomérulos. La figura
3 se refiere a los resultados obtenidos clínicamente en nuestro grupo de pacientes con insuficiencia renal crónica en donde se aprecia claramente el incremento estadísticamente significativo de Ia función renal medida por Ia depuración de creatinina (ml/min), existiendo consistencia entre los resultados en animales como en pacientes humanos hecho inédito que no ha sido publicado hasta Ia presente solicitud de patente, todos ellos son ejemplos que demuestran
Ia efectividad del "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) descrito en Ia presente solicitud de patente de invención.
La descripción de Ia de Ia página 1/2, Ia figura 1, se refiere a Ia forma en que se debe preparar el
CRC, así mismo se indica las cantidades, condiciones y elementos que se requieren para producir el CRC ("Compuesto de regeneración Celular"): En el No. 1; se refiere a una caja de cultivo celular con una línea purificada de células madre pluripotenciales criopreservadas -198 0C, las cuales se descongelan gradualmente aumentado Ia temperatura a una velocidad de 2 grados centígrados por minuto (Δ 2°C/min.) hasta alcanzar Ia temperatura de menos veinte grados centígrados (-200C).
En el No 2 de Ia figura 1 ; muestra Ia segunda opción de Ia fuente de células madre las cuales se encuentran en polvo en un estado de deshidratación total obtenido por un proceso de liofilización convencional.
En el No 3 de Ia figura 1; se muestra que ambas fuentes de células madre deben ser hidratadas con Ia solución "A" Ia cual se debe encontrar a una temperatura de 80C. En el No 4 de Ia figura 1 , de Ia página 1/2 se encuentra Ia base del "Compuesto de Regeneración
Celular" (CRC) que es Ia solución "A", esta se prepara en condiciones de esterilidad y en un ambiente controlado a una temperatura de refrigeración menor a dieciséis grados centígrados (16
0C) y mayor a cuatro grados centígrados (4 0C). La solución base "A" del "CRC", se prepara con un litro de de agua bidestilada en una botella de vidrio o de plástico con tapón de goma Ia cual se somete' a un proceso tradicional de esterilización como el de Ia autoclave, en Ia que previamente se disolvió cloruro de sodio (NaCI), lactato de sodio (NaC3Hsθ3), cloruro de calcio (CaCb) y cloruro de potasio (KCI) para alcanzar Ia siguiente proporción iónica: Na+= 130 mEq, Ch = 109 mEq, Lactato = 28 mEq, Ca2+ = 3 mEq y K+ = 4 mEq; esta solución debe alcanzar una osmolaridad de 273 mOsm/L, y no debe rebasar los 300 mOsm/L Ia cual es verificada empleando un osmómetro convencional. Después de esterilizar esta solución por cualquier método convencional de esterilización, se Ie agregan una solución estéril con 55 mg de cloruro de zinc,
16.9 mg de sulfato cúprico pentahidratado, 38.1 mg de sulfato de magnesio, 1.3 mg de yoduro de sodio, 14 mg de fluoruro de sodio, 163.9 mg de cloruro de sodio, 10 mg de tiamina, 250 mg de piridoxina, 1000 mg de ácido ascórbico, 1.0 mg de activina, 0.2 mg de factor estimulador de células pluripotenciales (C-kit), 0.6 mg de derivado procaíníco G1, 0.4 mg de derivado procaínico G2, y 0.4 mg de derivado procaínico G3.
En el No 5 Ia células madre prehidratadas en Ia solución base "A" son evaluadas en el microscopio confocal que emplea una fuente de luz láser (láser), Ia cual permite realizar diversas imágenes transversales de Ia células madre (No 6) (Ordóñez RM, Espinosa AM, Sánchez- González DJ et. al. Enhanced oncogenicity of Asian-American human papillomavirus 16 is associated with impaired E2 repression of E6/E7 oncogene transcríption. J Gen Virol 2004; 85:
1433-1444), las cuales son reflejadas y enfocadas por las lentes ópticas (No. 7) emitidas por Ia células en suspensión con Ia solución base "A" (No. 8) obteniendo diversas imágenes microscópicas (No. 9) (Floriano-Sánchez E, VManueva C, Medina-Campos ON, Rocha D,
Sánchez-González DJ et. al. Nordihydroguaiaretic acid is a potent In vitro scavenger of peroxynitrite, singlet oxygen, hydroxyl radical, superoxide anión, and hypochlorous acid and prevents in vivo ozone-induced tyrosine nitration in lungs. Free Radie Res 2006; 40 (5): 523-533).
Las células madre con morfología saludable son tomadas en una jeringa estéril (No. 10). En el No 11 de Ia figura 1; se refiere al estudio morfológico minucioso que descarte alteraciones de Ia membrana, infección, alteraciones genéticas.
En el No. 12 de Ia figura 1; se refiere a Ia cuantificación del numero de células por mililitro de solución base por diversos métodos de microscopia confocal o FACs en este se suspenden aproximadamente 1000, 000,000 células madre en 500 mi de Ia solución base "A" del CRC anteriormente ya descrita.
En el No 13 de Ia figura 1; se refiere a Ia segunda solución base "B" del CRC; útil para inducir regeneración celular por condrogénesis, hematopoyesis y osteogénesis. La cual se prepara de Ia siguiente forma: 500 mi de solución base "A" del CRC con una concentración de 2000,000 elementos celulares (células madre) cuantificadas y verificadas previamente por análisis morfológico en microscopia confocal, a este volumen (500 mi) se Ie agrega además: L-cisteína 1.0 mg, 0.5 μg de interleucina 7 (IL-7), 0.5 μg de interleucina 3 (IL-3), 0.1 mg de Factor de crecimiento mesodérmico A1 (FGM), 0.1 mg de factor estimulador de colonias de monocitos (M-CSF), y 0.1 mg de factor estimulador de colonias de granulocitos (GM-CSF); todos adicionados y mezclados en forma controlada en condiciones estériles almacenados a ocho grados centígrados (8o C) por no más de una semana, o a menos cuatro grados centígrados (-4° C) por no más de cinco semanas o a menos veinte grados centígrados (-200C ) por no mas de veinticuatro semanas.
En el No 14 de Ia figura 1; se refiere a Ia tercer solución base "C" del CRC; útil para inducir regeneración celular por angiogénesis y vasculogénesis. La cual se prepara de Ia siguiente forma, 5 500 mi de solución base "B" del CRC anteriormente preparada a Ia que se Ie adiciona Io siguiente: a Ia que se Ie agrega 0.3 mg de factor de transformación de crecimiento beta (TGF-B) y 0.2 mg de
factor de crecimiento endodérmico K2 (FGE); todos adicionados y mezclados en forma controlada 10 en condiciones estériles almacenados a ocho grados centígrados (8o C) por no más de una
semana, o a menos cuatro grados centígrados (-4° C) por no más de cinco semanas o a menos
15 veinte grados centígrados (-200C ) por no mas de veinticuatro semanas. En el No 15 de Ia figura
1/3 se refiere a Ia cuarta solución base "D" del CRC; útil para inducir regeneración celular por
neurogénesis, angiogénesis y vasculogénesis. La cual se prepara de Ia siguiente manera, 500 mi 20 de solución base "C" del CRC anteriormente descrita a Ia que se Ie adiciona Io siguiente: 100 mg de de retinol, 0.5 mg factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) y 0.2 mg de factor de crecimiento
25 neurológico (FGFN). Finalmente el "Compuesto de Regeneración Celular" CRC para aplicación en
Terapia Celular, Medicina Regenerativa y Antienvejecimiento se integra por las cuatro soluciones base ("A","B","C" y "D"), formando una composición líquida integrada por una concentración de 2 x 30
109 células madre hidratadas, previamente analizadas y cuantificadas por microscopia confocal,
las cual se prepara adicionados diversas sustancias en las concentraciones y condiciones ya 35 antes descritas (oligometales, activita y factores de crecimiento de fibroblastos.
La fórmula y el procedimiento para preparar el "CRC" permite aplicar células madre
pluripotenciales sin modificación genética alguna, las cuales se encuentran criopreservadas o 40 liofilizadas en frascos o cajas de líneas celulares en cultivo, después de descongelarlas gradualmente de -20 0C a 8o C, son prehidratadas en Ia solución base del compuesto de 45 regeneración celular (solución base "A") el cual es Ia solución base para preparar el compuesto de regeneración celular (frascos "B", "C" y "D").
El "CRC" (en sus soluciones base "B", "C" y "D") sirven de compuestos inductores de las células 0 madre en los protocolos de terapia celular, favoreciendo su capacidad regenerativa y de antienvejecimiento. La aplicación del procedimiento para preparar el compuesto de regeneración celular (frascos "A", "B", "C" y "D") incluye condiciones de esterilidad, análisis morfológico y Ia cuantificación de células madre. La aplicación de este "CRC" en terapia celular No 16 y No 17 figura 1/3 (frascos "A", "B", "C" y "D") permite que Ia terapia celular con células madre, se muy segura y no requiere de estudios de gen tipificación para haplotipos HLA por que tanto Ia base El compuesto de regeneración celular
(frascos "A", "B", "C" y "D") sirve de vehículo para transportar las células madre en los protocolos de terapia celular, medicina regenerativa y antienvejecimiento útil para diversos padecimientos crónico degenerativos, que requieren de una regeneración celular como: Ia Insuficiencia Renal
Crónica; las Diabetes Mellitus, las artrosis, Ia Enfermedad de Parkinson, el Vitíligo, etc. Para Io cual se requieren aplicar un mínimo de 5 aplicación intravenosa cada 7 días de 6 mi del compuesto de regeneración celular empleando "2 mi de frasco "B", 2 mi de frasco "C" y 2 mi del , frasco "D" además de aplicar un volumen de 1.0 mi intramuscularmente en Ia región deltoidea del compuesto "B" y de ser necesario 3 mi más del compuesto de regeneración celular, empleando un volumen de 1 mi del frasco "B", 1 mi del frasco "C" y 1 mi del frasco "D" este volumen se aplica localmente en el sitio que se pretende regenerar. Finalmente el "Compuesto de Regeneración Celular" CRC queda preparado como un compuesto en estado líquido de color transparente con diversas tonalidades de color rojizo, para aplicación en forma de inyecciones Io hace útil en Terapia Celular, Medicina Regenerativa y
Antienvejecimiento que se integra por las cuatro soluciones base ("A","B","C" y "D"), descritas ampliamente en Ia descripción de Ia invención. El "CRC" forma una composición líquida integrada por una concentración de 2 x 109 células madre pluripotenciales, previamente analizadas y cuantificadas por microscopia confocal, las cual se prepara adicionados diversas sustancias en las concentraciones y condiciones ya antes descritas (oligometales, activína, factores de crecimiento de fibroblastos (FGF), Factor de Transformación Beta (TGF-β), ácido ascórbico, tiamina, , riboflavina, Factor de Crecimiento Neurológico, retinol, derivado procaínico G1, derivado procaínico G2, derivado procaínico G3, L-Cisteína, Factor de Crecimiento Mesodérmico A1 (FGM), Factor de crecimiento endodérmico K2 (FGE), Factor estimulador de células pluripotenciales (cKit), Interleucina 7 (IL-7), interleucina 3 (IL-3), Factor Estimulador de Colonias de Monocitos (M-CSF) y Factor Estimulador de Colonias de Granulocitos (GM-CSF)), Ia cual se extraen de frasco contenedor del "CRC" empleando siempre una jeringa con aguja estériles, aplicando procedimientos convencionales de asepsia y antisepsia (limpieza del tapón de goma con torunda con alcohol del 96°), en forma inmediata un volumen de 5 a 6 mi "CRC" es aplicado por vía intravenosa, (vea Ia figura 1 No 16) y por vía intramuscular en el mismo paciente región deltoidea (vea Ia figura 1 No 17), el "CRC" debe ser almacenado a temperatura de refrigeración a
40C a 8o C, tiene un periodo de caducidad de 10 días y no debe emplearse después de una semana. En Ia figura 1 en los No. 16 y No 17, se refieren al protocolo que se debe seguir para aplicar las inyecciones con el "CRC", una vez que se han preparación las cuatro soluciones base
"A", "B","C" y "D"; descritas con anterioridad. El "CRC" puede aplicarse por diversas vías de administración paraenteral, a una dosis de 0.1 mililitros por kilogramo de peso, generalmente se emplea cinco aplicaciones por vía intravenosa con un volumen de 5 mililitros del compuesto de regeneración celular y cinco inyecciones por vía intramuscular preferentemente en Ia región deltoidea (No 17); inyectando 0.5 mililitros del mismo compuesto cada 7 días, obteniéndose efectos de regeneración celular, para inducir: neurogénesis, hematopoyesis, condrogénesis, osteogénesis, vasculogénesis y angiogénesis que pueden ser valorados en Ia piel, pruebas de función renal, así como Ia desaparición de síntomas neurológicos, inflamación y dolor articular que se presentan por el envejecimiento biológico y por el desarrollo enfermedades crónico degenerativas. Este ciclo de diez inyecciones del compuesto puede emplearse en dos a tres ocasiones hasta completar treinta inyecciones en un periodo de cuatro meses.
La aplicación del CRC es Ia más segura, ya que Ia mayoría de nuestros pacientes (más 700 pacientes con 10 aplicaciones del CRC cada uno) no han tenido que correr de riesgos quirúrgicos y no han requerido del apoyo de radiología intervencionista, y solamente en algunos casos se han requerido de procedimientos que exigen quirófano, y de cirujanos subespecializados y anestesiólogos. Generalmente no se requiere de terapia intensiva, y después de tres años de aplicación no se han observado complicaciones, sin embargo, todos los pacientes mejoran en forma suficientemente notoria apreciándose clínicamente, con signos y síntomas de regeneración celular. El "CRC" es en Ia actualidad Ia única opción real de regeneración celular para algunas enfermedades incurables oque no cuentan con tratamiento actual. El "CRC" es una fuente de sustitución de células muertas, desvitalizadas y de regeneración celular en tejidos enfermos, prolongan y mejoran Ia calidad de vida en personas sanas o enfermas.
Las células madre circulantes liberadas por el "CRC" pueden incorporarse a órganos no dañados, y actuar como agentes antienvejecimiento, al aumentar el promedio de vida de las células del órgano y de Ia persona en cuestión [Méndez-Bolaina E, Sanchez-Gonzalez DJ et al. . Effect of caveolin-1 scaffolding peptide and 17β-estradbl on intracellular Ca2+ kinetics evoked by angiotensin Il in human vascular smooth muscle cells. Am J Physiol CeII Physiol 2007; 293: C1953
- C1961).
El objeto de esta invención es proporcionar un compuesto de regeneración celular no existente en el mercado, que permite aplicar células madre en forma de terapia celular, evitándose estudios de gen tipificación de HLA, e intervenciones quirúrgicas y de radiología intervencionista que se emplean en el implante o trasplante de células. El "CRC" actúa empleando el principio de regeneración celular, que de forma natural ocurre en los tejidos del cuerpo. Si consideramos que a Io largo de Ia vida los organismos sufren de un desgaste continuo, si no existiera Ia regeneración celular, Ia esperanza de vida de los seres vivos se reduciría en forma notable. Por otro lado, gran parte del amplio elenco de las enfermedades que afectan al ser humano, tienen su origen en Ia degeneración y muerte de los diferentes tipos de células diferenciadas que conforman los tejidos y órganos de nuestro cuerpo, que se ven afectados en forma nociva de manera aguda como suele ocurrir en un infarto agudo al miocardio o de manera crónica como en las enfermedades degenerativas y el envejecimiento biológico. Queda ampliamente descrito que Ia invención a que se refiere a Ia presente solicitud de patente de invención es un "Compuesto de Regeneración
Celular" (CRC) es que permite Ia administración intravenosa, intramuscular y local de células madre con fines terapéuticos en padecimientos crónicos degenerativos en los que se incluye Ia insuficiencia renal crónica y Ia Diabetes Mellitus, Después de describir ampliamente su composición y forma de preparar el "Compuesto de Regeneración Celular" los inventores Gerardo
Martín González-López, Dolores Javier Sánchez- González y Carlos Armando Sosa-Luna, reclaman el "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) como su invención, declarando que a su real saber y entender han descrito en Ia forma más sencilla, Ia manera de llevarlo acabo su invención, además de incluir Ia resultados de sus investigaciones y hasta llegar al desarrollo del
"CRC", los que constatan el funcionamiento de Ia presente invención al que han denominado
"Compuesto de Regeneración Celular" "CRC" declarando que es Ia manera más segura de llevar células madre pluripotenciales al organismo de los seres humanos, evitándose en Ia mayoría de las veces de hospitalización y estudios de laboratorio (p. e. genotipiflcación como los haplotipos HLA).
FUNCIONAMIENTO DE LA INVENCIÓN
Las enfermedades crónicas, degenerativas, el envejecimiento y las agresiones del medio ambiente contaminado por Ia industrialización humana, aceleran considerablemente Ia reserva de células madre de los seres vivos limitando Ia capacidad de regeneración celular intrínseca de los organismos (Trejo-Bahena Nl, Pérez-Astudillo LH1 Orjuela-Henry DJ, Balderas-Cornelio A,
Salinas-Cano F, Martínez-Martínez CM, Sánchez-González DJ. Estudio comparativo para determinar ácido hipúrico (HA) en orina mediante los métodos colorimétricos de Ogata y de
Astudillo. Rev Sanid Milit Mex 2008; 62 (1): 3541). En diversas publicaciones científicas recientes señaladas anteriormente en los antecedentes de Ia , presente solicitud de patente, se ha concluido que el número de células madre en Ia sangre es uno de los mejores indicadores para Ia salud en los seres humanos. Por Io tanto se requiere de un
Compuesto que permita introducir células madre sanas en Ia sangre, esto se logra en forma segura aplicando el "Compuesto de Regeneración Celular" CRC1 ampliamente descrito en Ia presente solicitud de invención.
El funcionamiento del "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) se explica debido a que incrementa Ia reservas de células madre incrementando Ia capacidad intrínseca de regeneración celular en pacientes y personas sanas, obteniéndose una mejor estado de salud y calidad de vida en muchas maneras, de esto no hay duda ya que cada día aumentan el número de investigaciones que comprueban que las células madre en circulación son el factor más importante en Ia salud de las personas, que permite Ia regeneración celular; cuanto mayor sea Ia cantidad de células madre en circulación, mayor será Ia habilidad del cuerpo para regenerarse.
El funcionamiento de nuestra invención denominada "Compuesto de Regeneración Celular"
(CRC) trabaja induciendo Ia capacidad regenerativa de las células madre en una suspensión líquida estéril que permite llevar en un volumen adecuado (6 a 0.5 mi ) un número suficiente células madre (10,000,000 de elementos celulares) que permiten en forma segura y práctica elevar el número de células madre en Ia circulación sistémica o en forma local empleando diversas vías de administración farmacológica, como son: Ia intravenosa, intramuscular y Ia local. Al aplicar por vía intravenosa e intramuscular el "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC), permite Ia liberación inteligente de células madre pluripotenciales y moléculas bioactivas, las cuales promueven Ia activación de los elementos necesarios para que se lleve acabo Ia regeneración celular, Io que facilita su ingreso a Ia circulación hacia los tejidos dañados y acelera
Ia transdiferenciación es decir las células madre adquieren las características propias de las células del tejido donde se implantan en forma más rápida. En el sitio de lesión se forman cambios en el microambiente que atraen a las células madres liberadas y activadas por el "CRC" que se encuentran circulantes. Las células madre circulantes del "CRC" pueden incorporarse a órganos no dañados, actuando como agentes antienvejecimiento al proveer de moléculas bioactivas de regeneración celular, que aumentan el promedio de vida de las células del órgano y de Ia persona en cuestión.
El mejor ejemplo de que el "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) es un inductor de hematopoyesis, vasculogénesis, angiogénesis, miogénesis y neurogénesis, es el efecto de regeneración en Ia insuficiencia renal crónica, el cual se ejemplifica ampliamente en Ia presente solicitud de patente, sin embargo, el "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC), también es útil para tratar diversas afecciones y enfermedades de índole crónica, degenerativa o por envejecimiento celular biológico; obteniéndose buenos resultados en los pacientes en los que Ia enfermedad o padecimiento es el resultado de Ia destrucción y/o disfunción de células diferenciadas especificas, como por ejemplo: Ia enfermedad de Parkinson que es el resultado de
Ia destrucción o degeneración de las neuronas dopaminérgicas del cerebro (González López GM et. al. Neurol Neurocir Psiquiat 2007; 40 (3): 80-91).
La Diabetes Mellitus que es el resultado de Ia destrucción o .degeneración de las células B pancreáticas y sus complicaciones vasculares, las cuales pueden ser tratadas con el CRC ya que se induce una regeneración celular induciendo vasculogénesis, angiogénesis, neurogénesis y miogénesis, que permite revertir Ia historia natural o evolución clínica de los pacientes con insuficiencia renal crónica, con pérdida o disfunción de las células endoteliales, manifestándose con hipertensión arterial, y nefropatía diabética; además de Ia vasculopatía periférica que se presenta con insuficiencia venosa, arterial, úlceras e infecciones de difícil cicatrización en las extremidades inferiores, padecimiento conocido como pie diabético. (Sosa Luna CA et. al. Rev San/cí Milit Mex 2005 59(1):32-50 y Rev Sanid Milit Mex 2006 60(5):324-333), anemia falciforme, talasemia, distrofia muscular, Demencia de Alzheimer, Epilepsia, Esquizofrenia, Enfermedad
Cerebro-vascular, (Sosa Luna CA et. al. Rev Sanid Milit Mex 1999; 53(2):123-128 y Sosa Luna CA ef. al. Rev. Neurología, Neurocirugía y Psiquiatría 2002; 35(4):183-202) lesión traumática de Ia columna vertebral, degeneración de las células de Purkinje, isquemia cardiaca, insuficiencia hepática, distrofia muscular de Duchenne, artrosis, osteogénesis imperfecta, Síndrome de de
Down, y como apoyo regeneración en los pacientes con cáncer que se encuentra recibiendo esquemas de radioterapia y quimioterapia, e\c.(Vásquez-Moctezuma I, Meraz-Ríos MA, Magaña M, Villanueva-López GC, Sánchez-González DJ. Quimiorresistencia en el melanoma. Informe preliminar. Actas Dermatol Dermatopatol 2006; 6: 8-10 y Torres-Salazar JJ, Sánchez-González DJ ef. al. Distribución y estado de maduración de células dendrítícas y activación de linfocitos CD4+ en adenocarcinoma prostático. Rev Mex Uro! 2007; 67: 140-146).
El "CRC" tiene un efecto de antienvejecimiento biológico, esto se explica ya que al pasar el tiempo las células madre se vuelven más escasas, tal vez esta disminución sea Ia que condicione Ia mayor vulnerabilidad de las personas ancianas. Si nosotros inyectamos el "CRC" en Ia circulación de estos pacientes tendrán más capacidad de regeneración celular, ya que en Ia circulación se incrementa el número de células madre activadas y liberadas por el "CRC" tienen Ia capacidad de migrar a partir de Ia circulación a los órganos, aparatos y sistemas que se están envejeciendo. Las células madre del "CRC" tienen Ia capacidad de transdíferenciarse en diferentes tipos de células diferenciales como: las endoteliales y otras más que conforman los órganos y tejidos del cuerpo, observándose una regeneración celular de Ia piel, mayor hidratación, luminosidad, turgencias de
Ia piel, así como el anciano percibe un estado de revitalización (recuperación de Ia energía) al anciano (Tapia E, Sánchez-González DJ, et al. Treatment with pyrrolidine dithlocarbamate improves proteinuría, oxidative stress and glomerular hypertension In overload proteinuria. Am J Physiol Renal Physiol 2008 Aug 27). En los cromosomas de personas que presentan envejecimiento biológico, se observan entrecruzamientos de ADN y con frecuencia se producen roturas de una sola cadena; disminuyen las metilaciones del ADN y perdiéndose las secuencias teloméricas en dicho ácido nucleico.
También al envejecimiento biológico se suma Ia agresión ambiental (en los que se incluyen infecciones diversas, accidentes, traumatismos y otras enfermedades cuyo origen y fisiopatología todavía no se conoce), así como Ia agresión endógena Ia cual se divide en las alteraciones del
ADN heredados por nuestros padres, Ia cual se asocia a Ia aparición de enfermedades crónico- degenerativas como Ia Diabetes Mellitus, Hipertensión, cáncer etc. (Pou-López VC, Gallardo-
Ollervides FJ, García-Mendoza JA, Sánchez-González DJ. Dexametasona transtimpánica enhipoacusla súbita neurosensorial tardía. Rev Sanid Milit Mex 2008; 62 (2): 57-65). Estas agresiones continúan con Ia serie de impactos nocivos, si bien Ia estructura primaria de las proteínas no se altera con el envejecimiento del ADN, las agresiones ambientales y endógenas aumentan los cambios posteriores a Ia traducción (Sánchez-González DJ et al. Ozone exposure induces ¡NOS expression and tyrosíne nitration in rat aorta. Environ Toxicol Pharmacol 2004; 17: 1-7 y Sánchez-González DJ et. al. Producción de ¡NOS y nitración de proteínas en Ia aorta de ratas expuestas a ozono. Rev Sanid Milit Mex 2005; 59 (4): 223-240).
Los daños en las proteínas pueden explicarse mejor, por una mala alimentación (rica en carbohidratos, pobre en aminoácidos y proteínas) y daño en las mitocondrias, que también se 5 deterioran con el tiempo, aunque no siempre los hacen de forma constante. Cuando el daño existe, es posible evidenciarlo estructuralmente con microscopía confocal de alta resolución
(Sánchez-González DJ et. al. Microscopio confocal en el diagnóstico dermatológico de las
10 enfermedades ampollosas autoinmunitarias. Actas Dermatol Dermatopatol 2007; 7: 9-15 e
Imágenes de microscopía confocal en el diagnóstico de las enfermedades ampollosas ]5autoinmunes. Rev Sanid Milit Mex 2006; 60 (2): 82-90). En el envejecimiento y en organismo que reciben este tipo de nutrición rica en carbohidratos y
pobre en proteínas, hemos observado como las mitocondrias son más susceptibles sufrir de
20 alteraciones del ADN de las mismas condicionan estados de estrés oxidativo ocasionan
alteraciones en los procesos bioquímicos de desaminación, oxidación, entrecruzamientos y
25glicosilación no enzimática, en las ~ enzimas prostaciclina sintasa y tromboxano sintasa,
ocasionando un desequilibrio en Ia biodisponibilidad del tromboxano liberado en Ia circulación y una reducción de Ia prostaciclina, provocando una mayor predisposición a Ia trombosis y
30 vasoconstricción en los vasos sanguíneos de los pacientes que presentan Diabetes Mellitus e
Hipertensión Arterial (Sosa Luna CA et. al. Rev Sanid Milit Mex 200559(1):32-50 y Rev Sanid Milit
35 Mex 200660(5):324-333). El efecto de regeneración celular, es más evidente, cuando por motivo de alguna enfermedad, algún stirpe celular diferenciada, se encuentra bajo un gran reto o estrés, tal es el caso de las 0 células productoras de insulina conocidas como células B del los islotes de Langerhans del páncreas, las cuales se encuentran disminuidos o destruidas en los pacientes con Diabetes 5 Mellitus, ocasionando una sensación de fatiga crónica, y cuando se ocasiona Ia insuficiencia de insulina, se observa el incremento de Ia glucosa sanguínea, apareciendo incremento en Ia orina, sed y aumento del apetito, sintomatología característica de esta enfermedad (Shamblott MJ; Clark 0 GO, CeII therapies for type 1 diabetes mellltus. Expert Opin BIoI Ther 2004 Mar; VoI. 4 (3), pp.
269-77).
En Ia figura 2, se presentan algunos resultados de nuestros experimentos aplicando "Compuesto de Regeneración Celular" CRC (Terapia Celular) en animales con insuficiencia renal en un modelo experimental de Diabetes Mellitus de nuestro laboratorio con insuficiencia de insulina, en ratas deIa cepa wistar hiperglicémicas (glucosa sanguínea >300 mg/dl), por inducción con estreptozotocina.
La aplicación de Compuesto de Regeneración Celular" CRC (Terapia Celular) permitió regenerar los ríñones dañados, evidenciado por el aumento en Ia depuración de creatinina (No 10) y el análisis morfológico (No 5). Podemos apreciar que en Ia barra negra (animales de laboratorio sanos o control No 2 y No 4) presentan una depuración de creatinina promedio de 2.84 ml/min que equivale a una función renal del 94.66% de mientras que los animales de laboratorio representados por Ia barra roja enfermos con Diabetes Mellitus (No 8 y No 6)), sin tratamiento alguno durante Ia evolución de Ia hiperglicemia) presentaron un depuración de creatinina promedio de 1.84 ml/min, que equivale a una función renal del 61.3% valor que permite hacer el diagnóstico de insuficiencia renal crónica (< 70%). Los animales enfermos representados por Ia barra verde (No 9) con Diabetes Mellitus que recibieron un tratamiento nefroporotector estándar con un fármaco inhibidor de Ia enzima convertidora de angiotensina Ramipríl a una dosisi mg/kg de peso diariamente por vía oral presentaron una depuración de creatinina de 2.6 que equivale a una función renal de 86.6% y los animales enfermos con Diabetes Mellitus representados con una barra amarilla (No 10) que recibieron el "Compuesto de Regeneración Celular" (Terapia Celular) presentaron una depuración de creatinina de 3.7 ml/min equivalente a una función renal de
123.3% , se obtuvo una regeneración celular (No 5). Los animales con Diabetes Mellitus referenciados en Ia barra azul (No 11), recibieron un tratamiento con fármaco inhibidor selectivo de la ciclooxigenasa, Celecoxib a una dosis de 4 mg/kg de peso diariamente por vía oral, presentaron un efecto nefrotóxico (No 7), observándose, Ia presencia de proteinuria franca en Ia capsula de Bowman, una depuración de creatinina de 1.4 ml/min equivalente a una función renal de 46.66% en franca insuficiencia renal.
De forma natural las células madre son liberadas desde Ia médula ósea y otros reservónos, atravesando el torrente sanguíneo hacia aquellos tejidos que tienen mayor necesidad. Cuando un órgano está sujeto a exigencias por enfermedad, este órgano dispara compuestos que emiten una señal para que las células madre sean liberadas a Ia circulación. El órgano inicia Ia cascada de Ia inflamación lanzando a Ia circulación compuestos que atraen a las células madre a este órgano en particular. Entonces las células madre que fueron liberadas por nuestro compuesto de regeneración celular, siguen el camino de Ia concentración de esos compuestos y dejan el torrente sanguíneo para migrar al órgano donde se están proliferando y comienzan a diferenciarse en células de ese órgano en particular La habilidad del "CRC" de liberar las células madre activadas en Ia circulación a través de nuestra invención y los protocolos descritos de terapia celular para medicina regenerativa y antienvejecimiento son de gran relevancia ya que las células madre en circulación disminuyen al aumentar' en edad y en las enfermedades crónicas y degenerativas (Pacheco-Ramírez MA, Rodríguez-Perales MA, López-Chavira A1 Canul-Andrade LP, Martínez- Martínez CM, Sánchez-González DJ. Expresión de las sintasas de óxido nítrico en tumores glómicos de cabeza y cuello. Rev Sanid Milit Mex 2006; 60 (6): 369-378). De esta manera, se podría concluir que los niños y bebés tienen un "sistema de células madre" muy efectivo y no necesita del apoyo del "CRC". Sin embargo, hemos aplicado "CRC" en niños menores de 10 años como apoyo al tratamiento de quimioterapia y radioterapia en leucemias agudas, así también en pacientes pediátricos con Síndromes Genéticos como el de de Down, Turner, etc. También en niños con problemas del neurodesarrollo, autistas, debilidad mental, parálisis cerebral infantil, déficit de atención y jóvenes con esquizofrenia. Estamos recibiendo testimonios con información acerca de experiencias muy fuertes indicando que Ia terapia celular con células madre podría brindar beneficios significantes para los niños pequeños (Aguilera-Hernández P1 Chánez- Cárdenas ME1 Sánchez-González DJ et. al. Regulación de las sintasas de óxido nítrico en el estriado de rata en el modelo de Ia enfermedad de Huntington inducido por quinoímico. Arch Neurocien Mex 2006; 11: 31). La terapia celular empleando el "CRC" es Ia forma más segura de tratar los daños que sufre el material genético que se encuentra en el núcleo celular y las mitocondrias. Estos daños son uno de los factores más relevantes del proceso de envejecimiento biológico y Ia senescencia celular.
En los ancianos se producen un mayor número de alteraciones estructurales de los cromosomas (material genético) los cuales están compuestos del ácido desoxirribonucléico (ADN) que se manifiestan con Ia sintomatología propia del envejecimiento como deterioro de Ia, función cardiovascular, osteomuscular, presbiacusia y presbiopía, etc (Béjar-Cornejo F, Olivares D1 Cantero MA1 Sánchez-González DJ. Grosor corneal determinado mediante topografía corneal
ORBSCAN en pacientes diagnosticados con glaucoma en población mexicana. Rev Sanid Milit Mex 2007; 61 (5): 310-319) Las células madre contienen ADN intacto así como mitocondrias saludables y muchas proteínas que tienen Ia capacidad de revertir muchos de los efectos del envejecimiento, las células madre son ricas en Ia enzima telomerasa Ia cual puede disminuir Ia pérdida de las secuencias teloméricas del ADN en las células envejecidas o senescentes. Desde el punto de vista de "terapia génica", podemos considerar que las células madre son el mejor vector, y pueden ser consideradas como "micro-esferas inteligentes" (ya que son organismos vivos microscópicos, con Ia total capacidad de autorreplicación así como de tropismo, es decir reconocen y viajan al sitio del daño o lesión, así como de transdiferenciación de diferencian en el tipo celular faltante o lesionado) (Sánchez-González DJ et. al. Efectos biológicos de campos electromagnéticos de frecuencia industrial. Modelo en ratas. Rev Sanid Milit Mex 2007; 61 (6):
371-380). Ya que contienen en su interior el genoma humano completo, el cual, a diferencia de los protocolos de terapia génica, se encuentra intacto, indiferenciado y puede dar origen a todas las proteínas que dan origen a los diverso tipos celulares que constituyen el cuerpo humano, cabe resaltar que en Ia terapia celular con células madre, las células madre no (negativo) han sido modificadas, alterada o siquiera tocadas en su maquinaria genética (ADN), solamente han sido protegidas de todos los agentes nocivos antes mencionados como son Ia irradiación, agentes infecciosos, etc. De manera que las células que se trasplantan tienen una edad biológica de cero años (nuevas).
A continuación presentamos diversos ejemplos de Ia utilidad en el empleando de "Compuesto de Regeneración Celular (CRCj:
Ejemplo 1: Las enfermedades crónicas y las neurodegenerativas son un grupo de entidades clínicas que se diagnostican cada vez con más frecuencia en nuestro país y en el mundo. Entre estas enfermedades se incluyen: Ia demencia de Alzheimer, Ia enfermedad de Parkinson, Ia enfermedad de Huntington y Ia Esclerosis Lateral Amiotrófica (Aguilera P, Sánchez-González DJ et. al. Time-related changes in constitutive and inducible nitric oxide synthases in the rat striatum in a model of Huntington's disease.
Neurotoxicology 2007; 28 (6):1200-1207). La particularidad que guardan estas entidades clínicas es que no cuentan con una forma de tratamiento que limite o revierta el severo deterioro e incapacidad que producen. Tienen un curso invariablemente progresivo, incapacitante y con mortalidad a corto plazo en algunas, e incapacidad significativa en todas ellas. Dado el poco efecto curativo de los tratamientos actuales, se ha explorado el uso de Ia terapia celular como una alternativa terapéutica. La reparación cerebral mediante Ia aplicación de trasplantes celulares es el foco de atención en las investigaciones recientes. Adicionalmente, el sistema nervioso tiene privilegios inmunológicos que reducen Ia necesidad de los inmunosupresores habituales en trasplantes, incluso en los heterólogos. Adicionalmente, el trasplante autólogo de células madre favorece ehque estas células puedan establecerse en el cerebro y transdiferenciarse a neuronas. Ejemplo 2: Los pacientes con angina refractaria y con antecedentes de isquemia al miocardio o infarto, cuando ya no pueden ser tratados con terapias convencionales como son Ia angioplastias coronarias y colocaciones de Sten, con fracción de eyección de 37.5% después de recibir Ia terapia celular con "CRC" pueden mejorar en meses su fracción de eyección quedando en un 47% y disminuyendo los requerimientos de medicamentos y Ia sintomatología. Los pacientes con insuficiencia cardiaca con clase funcional III y fracción de eyección basal del 30% mejoran después de cinco a quince sesiones de terapia celular con "CRC". Todos los pacientes mejoraran a una clase funcional II. Algunos de los estudios de SPECT Sestamibi Tc99m a los posteriores al tratamiento con "CRC" durante el seguimiento clínico muestran mejoría por Ia regeneración celular traducida en un incremento de Ia vascularización y viabilidad del miocardio. Uno de nuestros pacientes con enfermedad de tres vasos coronarios fuera de tratamiento por angioplastía coronaria después de haber sido valorada por el especialista Dr. Hugo Gutiérrez Leonard en el Hospital Central Militar, mejoró Ia perfusión miocárdica SPECT Sestamibi Tc99m después de recibir cinco inyecciones intravenosas del "CRC" encontrándose una mejoría notable evidenciada por los mismos familiares, ya que ahora podía caminar más cuadras sin presentar dolor en el tórax, cansancio y falta de aire, el estudio mostró isquemia en un sola rama coronaria es decir de los tres vasos con isquemia se regeneraron dos, con Ia aplicación de células madre. Ejemplo 3: Insuficiencia Renal Crónica y complicaciones de Ia Diabetes Mellitus., en Ia figura 3 se muestra una gráfica con el promedio del resultado de Ia depuración de creatinina antes y después del tratamiento con "CRC" en nuestros pacientes con insuficiencia renal crónica, obtenidos de los estudios de depuración de creatinina antes (No 1) y después (No 2) de recibir diez aplicaciones 5 diez aplicaciones del "CRC" por vía intravenosa e intramuscular. Presentaron reversión en Ia progresión del deterioro de Ia función renal en sus estudios de laboratorio clínico y sintomatología, sin precedentes (Cruz C, Correa-Rotter R, Sánchez-González DJ et. al. Renoprotective and 10 antihypertensive effects of S-allylcyste¡ne in 5/6 nephredomized rats. Am J Physiol Renal Physiol
2007; 293: F1691-F1698 y Chirino Yl, Trujlllo J, Sánchez-González DJ et. al. Selective iNOS
\5inhibition reduces renal damage induced by cisplatin. Toxicol Lett 2008;176 (1): 48-57). En Ia
figura 2/3 se mostró Ia gráfica, elaborada con los resultados de nuestros experimentos realizados
en animales de laboratorio, ratas cepa wistar con nefropatía diabética por Diabetes Mellitus;
20 inducidas con una inyección intraperitoneal de estreptozotocina.
En Ia página 2/2, se pueden observar cambios a las 5 semanas después del tratamiento con
25 "CRC", figura 2, que corroboran los resultados de Ia depuración de creatinina en coherencia con los obtenidos en humanos con expedientes clínicos figura 3 (Pedraza-Chaverri J, Yam-Canul P1
Chirino Yl, Sánchez-González DJ et. al. Protective effects of garlic powder against potassium
30 dichromate-induced oxidative stress and nephrotoxicity. Food Chem Toxicol 2008; 46 (2): 619-627 y Segoviano-Murillo S, Sanchez-Gonzalez DJ et. al. S-allylcysteine ameliorates ischemia and
35 reperfusion induced renal damage. Phytother Res 2008; 22 (6): 836-840). Los experimentos en animales figura 2, no sólo nos permitieron evaluar Ia función, sino que también pudimos observar los cambios en el microscopio de los glomérulos en los cortes de histología renal. Los cortes de 0 los animales control fueron similares a los cortes de ratas diabéticas tratadas con nuestro tratamiento de Medicina Regenerativa que se ofrece a los pacientes en Ia SITECEM (Orozco- 5 lbarra M, Medina-Campos ON, Sanchez-Gonzalez DJ et. al. Pedraza-Chaverri J. Evaluation of oxidative stress in d-serine induced nephrotoxicity. Toxicology 2007; 229: 123-135; Yam-Canul P1
Chirino Yl, Sánchez-González DJ et. al. PJ34, a poly adenosine diphosphate-ribose polymerase 0 inhibitor, attenuates chromate-induced nephrotoxicity. Basic Clin Pharmacol Toxicol 2008; 102 (5): 483-488 y Yam-Canul P1 Chirino Yl, Sánchez-González DJ et. al. Nordlhydroguaiaretic acid attenuates potassium dichromate-induced oxldative stress and nephrotoxicity. Food Chem Toxicol
2008; 46 (3): 1089-1096).
Ejemplo 4: en las enfermedades neurodegenerativas, a partir de los años 2001 y 2003, se reportaron los resultados de estudios controlados de trasplante de neuronas de dopamina de origen embrionario en pacientes con enfermedad de Parkinson ligero-moderado. En estos estudios se concluyó que Ia aplicación de implantes múltiples, incluyendo Ia sustancia nigra y cuerpo estriado en modelos animales producen mejor resultado. Igualmente, estos hallazgos se confirmaron en pacientes, los cuales mostraron mejoría clínica al igual que con el uso de Ia tomografía por emisión de positrones con fluorodopa (PET), y sin desarrollar complicaciones motoras. El objetivo de implantar células madre en Ia enfermedad de Parkinson es reconstruir Ia vía neuronal nigroestriada con precursores de células madre neurales o injertos de neuronas de dopamina. El trasplante de neuronas dopaminérgicas derivadas de células madre se ha intentado con el objetivo de estimular sinapsis local o liberación de citoquinas por el injerto. Los pacientes con enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson mejoran clínicamente con el tratamiento de células madre humanas disminuyendo Ia torpeza generalizada y Ia lentitud en Ia realización de movimientos; mejorando Ia escasez de motilidad espontánea, disminuye el temblor de reposo y Ia rigidez (Sánchez-González DJ et. al. Óxido nítrico en el sistema nervioso central.
Neuronas nltrérgicas. Neurol Neurocir Psiquiat 2004; 37 (2): 73-78). Los pacientes recuperan Ia respuesta a Ia administración farmacológica del precursor (levodopa). Hoy Ia aplicación del "CRC" es una alternativa para los pacientes con Parkinson. Se pueden realizar estudios de resonancia magnética al inicio y a los 6 meses de Ia terapia celular, con espectroscopia de N-acetilaspartato
(NAA)/creatina (Cr) y estudios de perfusión SPECT con Tc 99m sestamibi. Los resultados clínicos han sido muy satisfactorios. No han ocurrido complicaciones y todos los pacientes mejoran sus parámetros clínicos.
Ejemplo 5: en las demencias que son síndrome clínico caracterizado por pérdida severa de las habilidades cognitivas y emocionales adquiridas que interfieren con el desempeño diario y Ia calidad de vida. La demencia puede ser ocasionada por más de 55 enfermedades, algunas no progresivas y ocurre principalmente en etapas tardías de Ia vida. La prevalencia es del uno % en personas de 60 años de edad y se duplica cada cinco años, para incrementarse hasta llegar al 30 o 50 % en las personas de 85 años y mayores.
Existen múltiples formas de demencia; sin embargo, Ia más común es Ia demencia de Alzheimer, que explica entre el 80 y el 85 % de las causas de demencia. Otras formas son Ia demencia vascular (por infartos cerebrales múltiples); demencia en enfermedad de Huntington, demencia fronto-temporal, demencia con 15 cuerpos de Lewy y demencia por SIDA, entre otras. De Ia totalidad de los casos con demencia, menos del % son susceptibles de tratamiento con el "CRC"
No obstante que existen varios medicamentos útiles en el tratamiento de Ia demencia, ninguno de ellos ha sido eficaz en detener Ia progresión inevitable de esta enfermedad neurodegenerativa. La frecuencia y prevalencia de este trastorno se incrementa paulatinamente en el mundo. Este hecho se debe principalmente al incremento en Ia esperanza de vida de Ia población. Una estimación efectuada por nuestro grupo de investigadores en el año 1999 reportó que en nuestro país existía una prevalencia de 814 mil personas con trastornos cognitivos asociados a Ia edad, y más de medio millón de mexicanos con demencia de tipo Alzheimer. Los pacientes con Alzheimer mejoran su capacidad intelectual y memoria. Los autistas y niños con síndrome de Down mejoran su capacidad de lenguaje, articulación de palabras, mejorando las comunicaciones con sus padres y maestros.
Ejemplo 6: Tenemos grandes expectativas debido a Ia mejoría que se observa en pacientes con padecimientos neurológicos, parálisis facial por Io cual hemos utilizado el "CRC" en pacientes con síndrome de Down, autismo, sordera, mudez, secuelas por eventos vasculares cerebrales y todos han presentado mejoría en Ia síntomas y signos que presentan, todos estos se han tratado con protocolo extemos y estamos en proceso de construcción de una área de internamiento para aplicar Ia terapia celular con "CRC" en pacientes con padecimientos mentales y psiquiátricos graves, como Ia Esquizofrenia Crónica, y tenemos un acuerdo de cooperación e investigación con Ia Asociación Mexicana de Amigos de Pacientes Esquizofrénicos A.C. (AMAPE).
Ejemplo 7: En lesiones traumáticas artrosis, esguinces, para una recuperación más rápida de una cirugías o durante Ia lesión traumática de Ia médula espinal no es una enfermedad neurodegenerativa. Sin embargo, en nuestro laboratorio hemos estado trabajando en Ia búsqueda de Ia metodología más apropiada para buscar Ia reparación de Ia médula espinal dañada.
Desafortunadamente jóvenes y adultos jóvenes presentan secuelas de diferente magnitud que van desde hernias discales con una excelente respuesta al tratamiento con "CRC" hasta consecuencia de parálisis por lesión medular ocasionada en accidentes o enfermedades degenerativas y congénitas. Por Io anterior, estamos investigando clínicamente el efecto del "CRC" para tratar de reparar Ia médula espinal dañada. En nuestro país no se han realizado estudios de frecuencia y prevalencia de lesión traumática de Ia médula espinal; no obstante, se ha estimado que Ia frecuencia anual de personas con daño en Ia médula espinal es de 40 casos por un millón de habitantes (Estados Unidos), Io cual representa una incidencia de 11 mil casos nuevos cada año En esta estimación no se incluyen los casos de las personas que mueren en el accidente. Las causas más frecuentes de lesión en Ia médula espinal son, en forma consistente, los accidentes en vehículo (41 %), lesiones por violencia (22 %) y caídas (21 %). Debido a que Ia edad de presentación de Ia lesión espinal es en jóvenes y adultos jóvenes, con potencial para prolongada sobrevida, Ia prevalencia de esta entidad clínica es bastante alta y se incrementa cada año. Se ha estimado que más de un cuarto de millón de personas en los Estados Unidos viven en Ia actualidad con incapacidad, por secuelas debidas a lesión de médula espinal. La mayoría de los casos de trauma en Ia médula espinal ocurre en adultos jóvenes. El promedio de edad de estos casos es de 28.7 años; Ia mayor parte de los traumas medulares ocurrieron entre los 16 y los 30 años de edad. El 77.8 % de los casos de lesión espinal son del sexo masculino, por Io general jóvenes o adultos jóvenes que se encuentran en etapa productiva o en el inicio de
Ia misma. Se ha observado que más de Ia mitad de los enfermos (64.2 %) tenían empleo antes de sufrir Ia lesión medular.
Posteriormente al evento traumático, al décimo año de evolución sólo una tercera parte de los pacientes con Paraplejía volvían a tener empleo remunerativo. Por Io anterior, se considera que esta entidad clínica tiene importante repercusión económica en el paciente y en su familia, por los costos directos e indirectos que produce. El gasto promedio anual por el cuidado de salud del enfermo y los costos directos, varían de acuerdo con Ia severidad de Ia lesión. Sin embargo, los costos indirectos que incluyen pérdida del salario, pérdida de beneficios suplementarios y productividad, se estiman que son en promedio alrededor de los 60 mil dólares por año; no obstante, esta cifra puede variar dependiendo del nivel educativo del paciente, el tipo de empleo y el historial laboral antes del accidente, además de Ia severidad de Ia lesión medular. Por Io anterior, consideramos justificada Ia aplicación del "CRC" como una opción alternativas terapéuticas para este tipo de problemas.

Claims

REIVINDICACIONES
5 Habiendo descrito suficientemente nuestra invención, Ia consideramos como novedad y por Io
tanto reclamamos como de nuestra excusiva propiedad, Io contenido en las siguientes cláusulas:
10
1. Las concentraciones, volúmenes, condiciones de esterilidad y temperatura que permite elaborar las soluciones base "A", "B", "C" y "D" del "Compuesto de Regeneración Celular" CRC de
15 Ia descripción de Ia invención que permite aplicar de células madre sin modificación genética
alguna, las cuales se encuentran criopreservadas o liofilizadas en frascos o cajas de líneas
celulares en cultivo, después de descongelarlas gradualmente de -200C a 8o C, son prehidratadas
20 en Ia solución base "A" del Compuesto de Regeneración Celular (CRC).
25 2. La aplicación del procedimiento de Ia descripción de Ia invención (figura MZ-) que permite para preparar el compuesto de regeneración celular (frascos "A" "B", "C" y "D") incluye condiciones de
• esterilidad, temperatura, análisis morfológico y Ia cuantificación de células madre en Ia
30 concentración y volumen estipulado estipulada en Ia descripción del CRC.
353. La aplicación del "Compuesto de Regeneración Celular" para protocolos de terapia celular con células madre, se sin requerir de estudios de gen tipificación para haplotipos HLA de las células madre pluripotenciales empleadas para Ia preparación del "CRC" y del paciente que recibe Ia 40 inyección del CRC.
454. La aplicación del "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) para tratar diversos padecimientos crónicos degenerativos, que requieren de una regeneración celular como:
Insuficiencia Renal Crónica; Diabetes Mellitus, Artrosis, Artritis Reumatoide, Lupus Eritematoso 50 Sistémico, Esclerosis Lateral Amiotrofica, Esclerosis Múltiple, Enfermedad de Parkinson, Vitíligo,
Hernias Discales, Síndrome de Down, Autismo, Esquizofrenia, Demencias, Pérdida de Ia audición, parálisis, insuficiencia vascular arterial o venosa, etc. Para Io cual se requieren aplicar un mínimo de cinco inyecciones intravenosas cada 7 días con un volumen de 6 mi del "Compuesto de
Regeneración Celular" (CRC) empleando "2 mi de frasco "B", 2 mi de frasco "C" y 2 mi del frasco "D" además de aplicar un volumen de 1.0 mi intramuscularmente en Ia región deltoidea del compuesto "B" y de ser necesario 3 mi más del compuesto de regeneración celular, empleando un volumen de 1 mi del frasco "B", 1 mi del frasco "C" y 1 mi del frasco "D" este volumen se aplica localmente en el sitio que se pretende regenerar.
5. Otras aplicaciones del "Compuesto de Regeneración Celular" (CRC) Ia única opción real de regeneración para enfermedades incurables. Como fuente de sustitución de células y tejidos enfermos, con Ia intención de prolongar Ia calidad de vida en personas sanas o enfermas, actuando como un compuesto de antienvejecimiento.
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