WO2010013846A1 - 新規悪性中皮腫治療剤及び免疫賦活化剤 - Google Patents

新規悪性中皮腫治療剤及び免疫賦活化剤 Download PDF

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那須保友
柏倉祐司
渡部昌実
許南浩
阪口政清
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国立大学法人岡山大学
桃太郎源株式会社
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    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus

Definitions

  • the present invention relates to malignant agents and agents.
  • the gastrointestinal and visceral organs and the heart are encased in membranes such as the pleura and membrane, respectively, and cover the surface of these membranes. When this skin occurred. Depending on the position, there are pleura, peritoneum and tumor.
  • oday therapy which is a combination of conventional surgery, chemotherapy, and radiation therapy, is the mainstay, it still has 5 lives and 0, and it is a malignant refractory period.
  • E Dkk 3 was found at Okayama University as a gene whose expression decreases with the occurrence of human normal cells, and it is clear that it is homologous to the milk of the kk d ckkop) gene involved in the formation of enopus. It is a strange thing (See and below). In studies with human prostate cancer, it was found that infection with E Dkk 3 virus (dE) produced some kind of stoma and activated c un NK nase (JNK) to induce pothos. (See 2).
  • the purpose is to provide a method for malignant treatment using E kk 3 and to include E kk 3. Furthermore, the purpose is to provide a method using E kk 3 and a preparation containing E kk 3.
  • the viable vector pleural transmission rate is always excellent, and the same L 7 life is redundant in normal cells. It is thought to be centered on the cell.
  • E Dkk 3 activates and activates the N cell by enhancing the L 7 viability of normal cells.
  • N or consisting of the base sequence represented by (a), including the following E kk 3DN or Kuta containing the N as an active ingredient
  • N is a base sequence that is complementary to the base sequence shown in (b), and N is a host that has a host property and a cell L 7 property.
  • N consisting of the base sequence represented by (a) or
  • N consisting of a base sequence that is complementary to the base sequence shown in (b), which is N in a stringent condition and has a host and a cell L7 property.
  • E kk 3DN or Kuta containing the DN is administered to the chest cavity.
  • N consisting of the base sequence represented by (a) or
  • N is composed of a base sequence complementary to the base sequence shown in (b), and N is a target that possesses a potency and a cell L7 property.
  • 6 Kuta is a vector of 5's.
  • E kk 3 DN or Kuta containing the DN is administered into the thoracic cavity. Ninety-eight possible to induce a pot to the cell, and the cell is broken.
  • DN consisting of the base sequence represented by (a) or
  • DN consisting of the base sequence represented by (a) or
  • (b) DN that is a base sequence that is complementary to the base sequence shown in (b) and that has a site condition, and that contains a host and a L 7 property of a cell.
  • N In the base sequence complementary to the base sequence shown in (b) N, which is a complex condition, and has a potency and a cell L7 property.
  • Fig. 3 is a diagram showing 2 H cell pot conduction by E kk 3.
  • Figure 2 shows the progression of JNK pcn and activation cusp 3 at 2 H by E kk 3.
  • Fig. 3 is a diagram showing JKK Lee's control of E kk 3's potential at 2H.
  • Figure 4 shows the current control of d at 2 H by E Dkk 3.
  • Fig. 5 is a diagram showing a small amount of potential induced by E Dkk 3 at 2 H due to d-regulated expression.
  • Fig. 6 shows the current regulation of PJNK pcun and activated cusp 3 driven by E Dkk 3 at 2 H by d-regulation expression.
  • Fig. 7 is a diagram showing the post-conduction of H28 cells and H0202 cells by E kk 3.
  • Fig. 8 is a diagram showing a small amount of postpotentiation induced by E kk 3 in H28 cells and H2052 due to d-regulated expression.
  • ga is a diagram showing the results of E kk 3 in a Nudus transplanted with HL c vesicles.
  • gb is a diagram showing an image showing the result of E kk 3 in a Nudus transplanted with 2 H Luc cells.
  • FIG. 4 is a view showing the state of E C Dkk 3 in a normal membrane.
  • FIG. 4 is a diagram showing the use of E kk 3 in normal cells.
  • FIG. 2 is a diagram showing EDkk 3 for L 7 in a normal cell (cytokine eye).
  • Fig. 3 is a diagram showing EDkk 3 for L 7 in normal cells (Northern).
  • FIG. 4 is a diagram showing L 7 of E kk 3.
  • FIG. 5 is a diagram showing the offspring biological mechanism caused by E kk 3. Good for carrying out Ming
  • the edk 3DN or the K containing this N is effective.
  • the base sequence of RE kk 3 DN is shown in Sequence. In addition, it is represented by an anosequence 2 of the E kk 3 protein that is recorded by E Dkk 3 DN.
  • the E kk 3 DN contained in the photo has the amino acid sequence represented by sequence 2 and the amino acid sequence represented by sequence 2, and has the potential for And it is a protein with intercellular 7 (L7) properties.
  • L7 protein with intercellular 7
  • Ano BL Bas cLoca gnmen ea ch Too a he Na ona eneo Bo canoganoa National Center for Biological Sciences
  • an anoic acid substituted, deleted and / or added E.g., using auto or constant ram
  • at least 85, preferably 9 Up Further preferred are those having the identity of 95, particularly preferred of 97.
  • E Dkk 3DN can be obtained by chemical synthesis based on the information on sequence or sequence 2. It can also be obtained as an E kk 3 tank by genetic engineering techniques. Furthermore, it is also possible to obtain it according to 00 038523.
  • the E Dkk 3DN included in the light is a N sequence that has a base sequence that is complementary to the base sequence represented by the sequence N, the base sequence represented by the sequence, BLT (Bas cLoca gn en Sea ch Too a he Na ona en eo Bo og ca no ma on (for example, using the national laboratory of biological science)
  • BLT Base cLoca gn en Sea ch Too a he Na ona en eo Bo og ca no ma on (for example, using the national laboratory of biological science)
  • Cells such as N that contain a protein consisting of an anodic acid substituted, deleted, or added amino acid This is a tag that has the potential to antagonize the cell and the italic 7 (L 7) property.
  • strict conditions are, for example, 0 ⁇ DS.
  • E Dkk 3DN contained in Ming is N, which is the tag that represents the property shown in Sequence 2.
  • RE kk 3DN can be a human, a human, etc. based on the sequence information. It is also possible to obtain it according to 001 038523.
  • Kuta including E kk 3 N is also included.
  • the test E kk 3 protein is expressed by Can produce results for tumors.
  • the target gene in gene therapy can be achieved by the body law of the gene (N).
  • N body law of the gene
  • a typical method for transferring genes is to use a vector such as Adewis, Adewis (), and Twis. Introduced genes targeted for N or N virus such as Twice, Swiss, Wax, Pox, Poio, Bis, Sedai, 40 Disease Infectious Disease (H) However, it is possible to introduce a cell gene by infecting cells with a tissue virus.
  • Adequate instructors are preferred when using the genes related to light for gene therapy using ice.
  • Ade-Wysuta it is possible to transfer into the cells of the type (), efficiently transfer into the cells of (2), and (3) the size can be reduced by the heart. (4) It is suitable for the transfer of nV vo cell contacts.
  • E2 or E4 area was lacking as a gene therapy treatment in addition to E E3 area, such as Ey3, which was a substitute for the E E3 area (yake ea Poc Na cad c U 93 320 996)
  • the second-generation Wistar (Lebe eaJo 0 944 996 z guch H Kay, Hene he, 10 2013 999), the Adewis genome almost completely absent (U LE), the third-generation Wisbe (en ae de ⁇ ea ⁇ J ⁇ o ⁇ 73 9303 999) has been developed, but there is no particular limitation on the introduction of the genes related to the light, and it can be used with any of the above-mentioned ones.
  • an id tractor with built-in ability added to ecchaea Poc Naca Sc U 96 2615 999
  • Wisvector that has the ability to be incorporated into chromosomes by using the Laspo gene, it can be applied to long-term gene expression. It is. It is also possible to add tissue isomerism to the Adewi sector by inserting a column indicating organizational transition in the Adewi Sui H group (zug ch H Hayakawa TN pon nsho 7 544 000)
  • the target gene can be introduced into a cell or tissue using a kuta in which a gene kuta such as a plasta is incorporated.
  • cell genes can be introduced by the method of DN using a liposome, um, E E xystra or micro glass tube.
  • a gene by an encapsulated liposome ne na poso
  • a gene by an electrostatic liposome e ecoos ac ype posoe
  • HJ population e ecoos ac ype posoe
  • HJE population e ecoos ac ype posoe
  • Kuta can be taken into cells.
  • an expression vector used in this case an expression vector that can express a target gene in a living body can be used.
  • p ene 08 193 200 (1991)
  • p pc N 3, 1, p eo Ibigue, Stratagene
  • p eo Ibigue, Stratagene
  • the ect containing E kk 3DN may contain a transferor for transcribing the gene, a guna, a gene for introducing and identifying the cell into which the gene was introduced.
  • a motor can be used.
  • nVvo In order to enter the Kuta containing Mt. E kk 3DN, nVvo, which directly introduces gene therapy, removes certain cells from humans, and 0 Use ex V vo to introduce the gene therapy cell outside and return the cell to the body (Sci, 1994, No. 24, 45, 36 () 23 48 (1994), 2 (15) 1994 ) Gene Therapy Association, Gene Therapy Dock, Nu Ti, 999)
  • malignant including pleura, peritoneum.
  • malignant preference is preferred.
  • the medicine contains an agent containing the above-mentioned E Dkk 3DN or the N-containing Kuta.
  • L7 quinone can be administered in the form of clear, L7 quinone and can be administered by oral administration with drugs, capsules, powders, pills, or injections, infusions, suppositories, sps, eye drops, transdermal, drugs, etc. Oral administration can be mentioned.
  • the effect can be exerted by administration.
  • L7 bases and dilutions commonly used in the pharmaceutical field.
  • steanium is used.
  • physiological saline, grapes and other fluids containing supplements are used, and appropriate dissolution, such as apples and pigs, is used.
  • Hea and malignant 2 H, 28 cells and 2052 cells were used. These were obtained from T (me canType eueoeco). , (FBS, 2 gta, 100 m, 100 use P 640 (B) with g m stop-in added 37.
  • the Wisctor (d E) containing E kk 3 DN was prepared by the following method.
  • the full length E kk 3 CN was introduced into x, and was transferred to the virus vector by TP (Taka a Bo) (ba za F ea ance es 2000 65 9617 9622). Lac) was taken as a control.
  • the 2 H transactant (2 H Luc) that stably expresses the phrase gene is expressed as Kash aka a e cu a on 003 07 1078 8
  • nne (apotos) was performed by the following method. That is, in order to adjust cell conduction at nVo, the cells were cultured 24 times in 6-up. The cells were treated in serum-free soil with dLac d E upc yOn econon) and then replaced with fresh ground. 48 excitement, n Su Ce ea h De ec on Foesce nk (oche Dagnos cs was used to evaluate TUNEL (e na deoxynuc eo dy ansease ed a edU P abe n). The total number of cells in 100 cells (P) was analyzed, and the cells in which were observed were counted in 3 to 5 fields under a microscope.
  • TUNEL was performed using nSueDeecoKFuocece (oche) to detect cells in which cells were observed with nVvo. That is, the weaving was cut, put into a T compound and rapidly set in the element. The (0) sup was fixed with methano at 30 room temperature, PB containing 0.1 T on 00 was allowed to stain, and stained with TUNEL.
  • Figure 2 shows the results of the cell bust analysis used. As shown in Fig. 2, the actual state of Pc acve Caspase 3 was increased in d E feeling. In other words, it was proved that the d E infection causes a postpot through JNK sex.
  • JNK nh bo was added to the post-up.
  • the results are shown in FIG. JNK nh b o significantly suppressed d E pot.
  • JNK nh b o significantly suppressed d E pot.
  • the following experiment was conducted in order to regulate the development of proteins caused by dE infection at nVo.
  • the cells are fed 24 times in 6-up, and the cells are serum-free with d Lac d E at 20 0 (mpc yOn ec on). After doing 2 inside, it was replaced with fresh ground. Forty-eight inkbaths and tanks were collected and rusted.
  • Figure 4 shows the results of the Ustat analysis of nh bo O de en a on d). As shown in Fig. 4, after 48 hours of d sensation, the actual state of d decreased at 2 H.
  • Fig. 6 shows the results of ustab analysis in the cells used in a e a (2 H without any treatment) 5.
  • the increase in dE pJNK pc and cveCaspase 3 was suppressed by d-regulated expression.
  • JNK sexualization which is the main mechanism of the d RE point, was harmed by d expression.
  • An orthotopic malignant deus was prepared by giving 2.06 HLc in 00 LPBS to 8 B LB nudus (obtained from L).
  • ga shows the quantification (ho on sec) of 2 H L () by. Compared to the previous day (Day 0), d E significantly decreased in ay 0.
  • gb represents an image corresponding to ga.
  • the d Lac sensation mouse used in (4) was dissected 7 days after infection, and the appearance of the gene Lac in the inner and membranes was analyzed with the Lac color separated into normal tissues. Lac color below.
  • PB H8 0 home dehydr 37 2 7m, 0 ⁇ 2 gluta dehydrate 25 0 8 2 g 0 2 5 E 200 2 5m
  • ac PB 50m 5 fan cathode 0 2 5m , 5m 2a 2 0m 0 0 0 o u Deoxycho ae 0 0 0 5 0 0 2 NP40 0 0 0 gm ga 50 g
  • the appearance of 2 ink Lac was analyzed at room temperature.
  • Oa shows the results of gene analysis by Lac color in the d Lac group. As shown in Oa, a gene was introduced into 50 cells of the cell, but no gene was found in the remaining cells. Nonetheless, there are some negative effects, so d E It was thought that there was a use.
  • D E was performed using human cells.
  • U 24 was used as a human. These were established by (Ba Le an J ance 993 53 45 456)
  • the cells were treated with dE at 20 0 and infected with dE.
  • Figure 6 shows the color results when dE is infected into normal cells. It was confirmed that the expressed E was in the cells ().
  • the site of the upper site when d normal cells were infected with E was determined using site sites.
  • the site Kai Ai used ayB o Huan y ok ne n body ay 6 (ayB o ech No c oss).
  • Figure 2 shows the results. As shown in Fig. 2, an increase in L 7 was confirmed.
  • Fig. 3 shows the results of the nozat analysis on the d E normal line 3, ex E shows the binato E quality. As shown in Fig. 3, it was confirmed that the d 7 E sensitivity line was based on the current state of L 7 N.
  • L 7 life is derived from infection of normal cells by dE.
  • L 7 activates N Na ua K vesicles
  • Figure 5 shows the offspring biological mechanism caused by d E giving. As shown in Fig. 5, there are two paths: d-regulation and p38 sexualization. Causing the pot to the cell, the latter
  • the amount of E kk 3 N applied to the adenoviral vector (dE) to the local malignant deus () is reduced in quantity and the survival is improved.
  • the amount was reduced significantly by giving d RE C (), and good survival was observed.
  • no obvious effect was observed.
  • the JK point is due to nh b on Ode a on (d), which is closely related to cell growth.
  • dE can exert a wide variety of results.

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Abstract

　REIC/Dkk-3を用いて悪性中皮腫を治療する方法及びREIC/Dkk-3を含む悪性中皮腫治療剤の提供。 　以下のREIC/Dkk-3 DNA又は該DNAを含むベクターを有効成分として含む中皮腫治療剤： (a)　配列番号１に表される塩基配列からなるDNA；又は (b)　配列番号１に表される塩基配列に相補的な塩基配列からなるDNAにストリンジェントな条件でハイブリダイズするDNAであって、アポトーシス誘導活性及び細胞のIL-7産生促進活性を有するタンパク質をコードするDNA。

Description

新 剤及び 術分野
本 、 悪性 剤及び 剤に関する。
部の 、 胃腸・ 臓などの 器、 心臓は、 それぞれ、 胸膜・ ・ 膜 などの膜に包まれており、 これらの膜の表面をおお て るものを と 。 この 皮 ら発生した と 。 には、その 位によ て、 胸膜 、 腹膜 、 腫などがある。
には、 悪性 と良性 があり、 悪性 限局 のものとび まん性のものがある。 および アスベス ト との が証明 されて る。 年中 増加傾向にある。
来の 手術 法、 化学療法、 放射線 法を併用する oda y 療が中心であるが、依然として 5 生存 ０ 下であり、悪性 難治世 である。
法 しては胸膜 と胸膜 があるが前者では根治 に問 題があり、 また後者には合併症が多 。 学療法 してはpe e exe Pの み合わ をはじめとして多種多様な eg meが試みられて るが、必ずしも 的に 効果のあるものではな 、 また 作用も多 。 射線 はあ までも 助的役 割を担 のみである。 年、 サイ ト イ 療 して L 2や FN 身投与な どが試みられて るが、 副作用が強 、 また期待されて たほどの 小効果 も得られて な 。 ま 、どの 療法も確実な効果が期待できるものではな 、 更に強力な悪性 略の 出が急務とな て る。
E Dkk 3は、岡山大学でヒ ト 常線 胞の に伴 て発現が低下す る遺伝子として され、 後に enopusの 成に関わる kk d ckkop ) 伝子 ァ の 乳類メ 相同であることが明ら にな たものである ( び非 を参照)。 ヒ ト 立腺癌 で行 た検討では E Dkk 3 ウイ ス ( d E ) を感染させる 、 何ら の ス ト スを生じ c un N K nase(JNK)を活性化して ポト スを誘導するこ とが分 て る ( 2を参照)。
際公開 ００1 ０38523 ット
Tsu T e a B ochemB ophys es o mun 268 2０ 4 (2０００)
2 ba zua e a Cance es 65 617 22 2００5) 明の
、 E kk 3を用 て悪性 治療する方法及び E kk 3を 含む の 供を目的とする。 、 さらに E kk 3を用 て する方法及び E kk 3 を含む 剤の 供を目的とす る。
、 新規な画期的な悪性 療法に て検討を行 た。 すなわ ち、 n V oにお て悪性 (2 H H28 H2０52) に E kk 3 伝 子を含む ウイ ス ( d E ) を感染さ ると JN ポト スを起こし、 そのJN ポト スが細胞 殖などに深 関わ て る h b onO d e en a on d ) の 下によるものであることが証 明された。この d の 同所 悪性 モデ ウスにお ても確認 れ た。 方で n V voにお て 胞 の 伝子 入が ００ ではな にも わらず 的な抗 果を呈するこ ら、 d E 与が何ら の 性化作用を 起するこ が考えられたため、 正常 ( ) を用 て 解析した ころ、 nV oで d E 、が正常線 染するとその
胞から L 7 NK Na a K e 胞の 性化に寄与するサイ トカイン) が することを見出した。 また、 その L 7 JN 性化 p38 性化 T 性化 F 性化によるものであることも明ら にした。
が行 たウイ スベクタ 胸膜 伝子 率も 常に優れ て るこ ら、 正常 胞にお ても同様の L 7の 生が冗 NK 胞を中心 する されたもの 考えられる。
上の知見より、 悪性 対する d E 、 胞に ポト スを誘導するだけではな 、 正常 胞にも を誘 導することにより、 他の治療法にはな 劇的な治療 果をもたらすことが判明し た。
明の を用 た悪性 の 以下の 徴を有する。
E C Dkk 3 ウイ スを直接 与する。
2 与された E kk 3が 胞の ポト スを誘導する。
3 与された E Dkk 3が正常 胞 らの L 7 生能を高めることでN 胞を活性化し、 する。
すなわち、 以下の おりである。
下の E kk 3DN 又は該 N を含む クタ を有効成分として む中 (a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ な条件で イブ する DN であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
2 クタ が ウイ ス クタ である の 。
3 胸膜 である 又は 2 の 。
4 である 3 の 。
5 胞に ポト スを誘導し、 正常 胞の する、 ～ 4 の ずれ の 。
6 下のRE kk 3DN 又は該 N を含む クタ を有効成分として (a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ンジ な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタン ク質を ドする N
7 クタ が ウイ ス クタ である 6 の 。 8 下の E kk 3DN 又は該 N を含む クタ を 者に投与する ことを含む、 療法
(a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト リ ジ な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
9 クタ が ウイ ス クタ である 8 の 療法。
０ 胸膜 である 9 の 。
E kk 3DN 又は該DN を含む クタ を胸腔 に投与する、 の 療法。
2 胞に ポト スを誘導し、 か 胞の
する 8 の 療法。
3 下の E kk 3DN 又は該 N を含む クタ を動物に投与するこ を含む、 動物の
(a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ ン な条件で イブ する DN であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7産 性を有するタ ク質を ドする N
4 クタ が ウイ ス クタ である 3 の
5 の 造における、以下の E kk 3DN 又は該DN を含む クタ の
(a) g に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ ン な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
6 クタ が ウイ スベクタ である 5 の 。
7 胸膜 である 5 又は 6 の 。
E kk 3 DN 又は該 DN を含む クタ が胸腔 に投与される、 7 の 。 9 、 胞に ポト スを誘導し、 胞の する、 5 8 ずれ の 。
2０ 物における免疫 剤 造における、以下の E kk 3DN 又は 該 N を含む クタ の
(a) に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) に表される 基配 に相補 な 基配列 らなる N にス ト リ ジ な条件で イブ する DN であ て、 ポト シス 性及 び 胞の L 7産 性を有するタ ク質を ドする N
2 クタ が ウイ ス クタ である 2０ の 。
22 の 療に用 る、 以下の E kk 3 DN
(a) に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ な条件で イブ する DN であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
23 胸膜 である 22 の E Dkk 3 DN
24 に投与 れる、 23 の E Dkk 3 DN
25 胞に ポト スを誘導し、 胞の
する、 22 ～ 24 の ずれ の E kk 3 DN
26 の 療に用 る、 22 の E kk 3 DN を含む クタ 。 27 クタ が ウイ ス クタ である 26 の E kk 3DN を含 む クタ 。
28 胸膜 である 26 又は 27 の E Dkk 3DN を含む クタ 。
29 に投与される、 28 の E kk 3 N を含む クタ 。
3０ 胞に ポ シスを誘導し、 胞の
する、 26 ～ 29 の ずれ の E kk 3 DN を含む クタ 。
3 物の に用 る、 以下の E kk 3 DN
(a) に表される 基配 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ンジ な条件で イ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
32 物の に用 る、 3 の E kk 3 DN を含む クタ 。 33 クタ が ウイ スベクタ である 32 の E kk 3DN を含 む クタ 。 、
明細書は本願 先権の である日本国 2００8 96857号の明細書 および または図面に記載される内容を包含する。 面の 単な説明
は、 E kk 3による 2 H 胞の ポト ス 導を示す図である。 2は、 E kk 3による 2 H での JNK pc n、 活性化カスペ ス 3 の 進を示す図である。
3は、 JNKイ による 2 H での E kk 3の ポト ス 導の 制を示す図である。
4は、 E Dkk 3により 2 H での d の 現の 制を示す図である。 5は、 d 制発現による 2 H での E Dkk 3により 導される ポト スの 少を示す図である。
6は、 d 制発現による 2 H での E Dkk 3により 進される PJNK pc un、 活性化カスペ ス 3の 現の 制を示す図である。
7は、 E kk 3による H28 胞及びH2０52 胞の ポト ス 導を示す 図である。
8は、 d 制発現による H28 胞及びH2０52 での E kk 3によ り 導される ポト スの 少を示す図である。
gaは、 H L c 胞を移植したヌ ド ウスにおける E kk 3の 果を示す図である。
gbは、 2 H Luc 胞を移植したヌ ド ウスにおける E kk 3の 果を示す 像を示す図である。
g Cは、 2 H Luc 胞を移植したヌ ド ウスに E kk 3を投与した 合の ウスの を示す図である。
は、 に導入した E Dkk 3の 現を示す図である。 は、 正常 膜における E C Dkk 3の 現を示す図である。 は、 正常 胞における E kk 3の 用を示す図である。 2は、 正常 胞における E Dkk 3の L 7 用を示す図である (サイ トカインア イ )。
3は、 正常 胞における E Dkk 3の L 7 用を示す図である (ノ ザンブ ッ )。
4は、 E kk 3の L 7 の を示す図である。
5は、 E kk 3により 起される 用の 子生物学的メカ ズムを示す図である。 明を実施するための 良の
下、 本 明を詳細に説明する。
明の 、 E Dkk 3DN 又は該 N を含む クタ を有効成 分として 。
RE kk 3 DN の 基配列は、 配列 に表される。 また、 E Dkk 3 DN が ドする E kk 3タ ク質のア ノ 配列 2に表される。
明の に含まれる E kk 3 DN を ド タ ク質は、 配列 2に表されるア ノ 配列 2に表されるア ノ 実 質的に同一のア ノ 列を有し、 胞に対する ポト ス 性及び 胞のインタ イキ 7 ( L 7) 性を有するタ ク質である。 こ こで、 実質的に同一のア ノ しては、 ア ノ 列に対して 1又は 複数 し は数個(1～1０ 、 好まし は 1～5 、 さらに好まし は 1 し は2 )のア ノ酸が置換、欠失及び 又は付加されたア ノ は ア ノ BL (Bas cLoca gnmen ea chToo a heNa ona en e o B o og ca n o a on 国国立生物学 センタ の カ アラ イ メ ト ツ )) ( えば、 オ トすなわち 定の ラメ タ を用 て)を用 て計算した きに、少な とも 85 上、好まし は9 。 上、 さらに好まし は95 上、特に好まし は97 上の同一性を有して るもの が挙げられる。
E Dkk 3DN を ド タ ク質は、 配列 又は配列 2の 報に基 て、 化学合成により得ることができる。 また、 遺伝子工学的手法に より E kk 3タン ク として得ることができる。さらに、 ００ ０38523 報の 従 て得ることも可能である。
明の に含まれる E Dkk 3DN は、配列 に表される 基配列に相補 な 基配列を有する DN ス ト ジ な条件下で イブ する N 、配列 に表される 基配列 、BL T(Bas cLoca gn en Sea ch Too a he Na ona en e o B o og ca n o ma on ( 国国立生 物学 セ タ の カ アライ メ ト ツ )) ( えば、 オ トすなわち 定の ラメ タを用 て) を用 て計算した きに、 少な とも 5 上、 好まし は 9０。 上、 さらに好まし は 95 上、 特に好ま し は97 上の同一性を有して る N 、 又は前記DN により ドされるタ ン ク質のア ノ 列に対して 又は複数 し は数個(1～1０ 、好まし は 1～5 、 さらに好まし は 1 し は 2 ) ア ノ酸が置換、 欠失及び 又 は付加されたア ノ 列 らなるタ ク質を ドする N などの 、 胞に対する ポト ス 性及び 胞のイ タ イキ 7 ( L 7) 性を有するタ クを ドするものである。 ここで、 ス ト シジ ン な条件 とは、 例えば、 、 ０・ DS 。
37C 度の 件であり、 より 厳し 条件としては ０・ 5 、 ０・ S 。
42C 度の 件であり、 さらに厳 。
し 条件としては ０・2 、 ０・ 1 65C 度の 件である。 らに、 明の に含まれる E Dkk 3DN は、配列 2に表されるタ ク質を ドする N である。
RE kk 3DN は、 配列 報に基 て、 ヒ ト 、 ヒ ト 等 ら ることができる。 また、 ００1 ０38523 報の 従 て得ることも可 能である。
さらに、 E kk 3 N を含む クタ をも 含する。 クタ を に導入することにより、被験 E kk 3タン ク質が発現し中 腫に対する 果を発揮し得る。
伝子治療における目的の 伝子 ( N )の 体 の の 法により ことができる。 伝子を 入する方法 して、 ウイ ス クタ を 用 る方法及び非ウイ ス クタ を用 る方法があり、 の 法が公 であ る( 学、 遺伝子治療の 術、 社、 1996 学、 遺伝子 、 社、 997 伝子治療 会編、 遺伝子治療 ンドブック、 ヌ・ティ ・ ス、 1999)
伝子 入のためのウイ ス クタ しては、 アデ ウイ ス、 アデ ウイ ス( )、 ト ウイ ス等のウイ スベクタ を用 た方法が代表的な のである。 した ト ウイ ス、 スウイ ス、 ワク アウイ ス、 ポックスウイ ス、ポ オウイ ス、 ビスウイ ス、セ ダイウイ ス、 4０ 疫不全症 イ ス(H )等の N ウイ ス又は N ウイ スに目的 する遺伝子 を導入し、 細胞に組 ウイ スを感染 ることによ て、 細胞 伝子を 導入するこ が可能である。
明に係る遺伝子を イ スを用 た遺伝子治療に使用するとき、 アデ ウ イ ス クタ が好まし られる。 アデ ウイ ス クタ の 徴として、 ( ) の 類の 胞に 伝子 入ができる、 (2) の 胞に対して も効率よ 伝子 入ができる、 (3) 心により 縮が可能であり、 タイタ (1０～ PFU 上) のウイ スが得られる、 (4) nV voの 胞 の 接 の 伝子 入に適して る、 と た点が挙げられる。 伝子治療 ウ イ スとしては、 E E3 域を欠 させた 代の ウイ ス クタ ( yake e a P oc Na cad c U 93 32０ 996) ら E E3 域に 加え、 E2 し は E4 域を欠 させた 2 代の ウイ ス クタ (L ebe e a J o ０ 944 996 z guch H Kay ・ H ene he ・ 1０ 2０13 999)、 アデ ウイ スゲノムをほぼ完全に欠 させた( U LE ) 3 代 の ウ イ ス ベ ( e n ae de ・ ・ e a ・ J・ o ・ 73 93０3 999)が開発されて るが、 明に係る遺伝子を導入す るには、特に限定されず、 ずれの ウイ ス クタ でも使用 能である。 さらに、 の 色体に組み込み能を付与した イ ッド クタ ( ecch a e a P oc Na ca Sc U 96 2615 999)や、 ラ スポ の 伝子を用 るこ により染色体に組み込む 力を有した ウイ スベ クタ などを利用すれば、 長期的な遺伝子 現にも応用が可能である。 また、 ア デ ウイ ス ァイ の H プに組織 な移行性を示す 列 を 入するこ により、 アデ ウイ ス クタ に組織 異性を付与することも 可能である( zug ch H Hayakawa T N pon nsho 7 544 ０００)
明にお て、 E Dkk 3DN を含む ウイ ス クタ を d E C 呼ぶ。
また、 上記 イ スを用 ることな 、 プラス クタ 等 遺伝子 クタ が組み込まれた クタ を用 て、 目的遺伝子を細胞や 織に 導入するこ ができる。 えば、リポ ク ョ 、 ン ウム 、 E E キス トラ 、微小ガラス管を用 たDN の 法などにより細胞 伝子を導入するこ ができる。 また、 内包 リポソ ム( n e na poso。) による遺伝子 、 静電気 リポソ ム(e ec o os a c ype poso e)によ る遺伝子 、 H J ポソ ム 、改良 H J ポソ ム (H J E ポソ ム )、 H J E( ベ プ) クタ を用 た方法、 セプタ 伝子 、 ティク 銃で ( )とともに N 子を細胞に移入する方法、 naked N の 、 のポ による によ ても、
クタ を細胞 に取り込ま ることが可能である。 この 合に用 る発現 クタ としては、 生体 で目的遺伝子を発現さ るこ のできる クタ であれ なる発現 クタ も用 ることができるが、 例えば p ( ene ０8 193 2００(1991)) 、 p pc N 3、 1、 p eo (イ ビ ゲ 、 ス トラタ ジ ン )、 などの クタ が挙げられる。
E kk 3DN を含む クタ は、 伝子を転写するためのプ タ ン ンサ 、 グナ 、 遺伝子が導入された細胞の 識及び 又は選 別のための 伝子 含んで てもよ 。 この際のプ タ して は、 プ モ タ を用 ることができる。
明の E kk 3DN を含む クタ を 入するには、遺伝子治療 を直接 に導入する n V vo 、 、 ヒ ト らある種の細胞を取り出して ０ 外で 伝子治療 胞に導入し、 その 胞を体 に戻すex V vo 用 ればよ ( サイ ス、 1994 4 号、 2０ 45 事、 36( ) 23 48 (1994) 刊、 2(15) 1994) 伝子治療 会編、 遺伝子治療 ンド ック、 ヌ・ティ ・ 、 999)
明にお て、 悪性 を 、 胸膜 、 腹膜 、 含む。 この中でも悪性の 好まし 。
明の 、 胞に ポト スを誘導すると に、 正常 胞の L 7 生能を高め、 NK 胞を活性化し、 そ す る。 この 果、 E kk 3による 胞 の ポト ス 導と正常 胞によ る と 2 の 用により 対する相乗 果を発揮 する。 明の による 胞及び 胞を標的とする悪 性 伝子治療法と言える。
、上記の E kk 3 N 又は該DN を含む クタ を含む 胞の L 7 進剤を含む。 さらに、 、 上記の E Dkk 3DN 又は該 N を含む クタ を含む 剤を含む。
明の 、 L 7 進剤及び 、 の 態で投与することができ、 剤、 カプセ 、 、 散剤、 ップ によ る経口投与、 ある は注射 、 点滴 、座薬、 スプ 、 点眼 、 経 、 剤などによる 口投与を挙げることができる。
明の 、 L 7 進剤及び 、 局所 与 することも可能であり、 例え 対しては、 胸腔 カテ テ
により投与するこ によりその 果を発揮し得る。
まし は、 胸腔 複数回、 胸腔 体に本 が行き渡るよ に 直接 入を行 。
明の 、 L 7 進剤及び 、 製剤 野 にお て通常用 られる 、希釈 、 を含む。たとえば、 の 、 としては、 、 ステア グネ ウムなどが使用される。 の としては、 生理 塩水、 ブドウ やその他の補 を含む 液などが使 用され、 適当な溶解 、 例えばア 、 プ ピ グ などの ア 、 イオン 剤などと併用してもよ 。 しては、 、 大豆油などが使用され、 しては安息香酸 ジ 、 ジ ア などを併用してもよ 。
その 、 、 年齢、 体重などによ て異なるが、 数日
おきに あたり、 UN として０・ g～ 0 9を投与すればよ 。
また、 E kk 3DN を含む クタ を用 る場合、例えば 1０7～０p (p a e o ng n の クタ を投与すればよ 。
明を 下 によ て具体的に説明するが、 はこれらの によ て限定されるものではな 。
E Dkk 3の
実施 にお ては、 He a びに悪性 である 2 H 、 28 胞及び 2０52 胞を用 た。これらの 、 T ( me canType e u e o ec o ) より入手した。 、 (FBS 、 2 グ タ 、 1００ ット m 、 1００はg m ス ト プト イ ンを添加した P 64０ ( B ) を用 37。
C、 5 ０ 件下で 持した。
E kk 3 DN を含む ウイ ス クタ ( d E ) は、 以下の 法で 作製した。 すなわち、 全長 E kk 3 C N を x に導入 し、 TP (Taka a B o) により ウイ スベクタ にトラ ス ァ した ( ba z a F e a ance es 2００5 65 9617 9622) Lac 伝子を含む ウイ ス クタ ( d Lac ) を対照として た。
フ ラ ゼ 伝子を安定に発現する 2 H トラ スフ クタ ト (2 H Luc)をKash ak a e a cu a on ００3 ０7 1０78 8
従 て、 2 H 胞にp E p o3 c e ase P as dを導入し 製した。
( ) E kk 3による 胞のJN ポト ス
nne (アポト ス) は以下の 法で行 た。 すなわち、 nV oにおける細胞 導を調 るために、 細胞を平 6ウ プ トに 24 養した。 胞を d Lac d E で の u p c yO n ec on) で無血清 地中にて2 理した後、 新鮮 地に交換した。 48 間のイ キ ショ 、 n S u Ce ea h De ec on F o esce n k ( oche D agnos cs を 用 て TUNEL ( e na deoxynuc eo dy ans e ase ed a edU P end abe n ) アッ を行 ポ ト スを評価した。 体的には FP 性の核を持 細胞を ポト ス と し、 1００個の細 ( P ) における ポト シス 性細胞の 合を解析し た。 が認められた細胞は、 顕微鏡下で3～5の なる視野にお て計数し た。
nV voで細胞 が認められた細胞を検出するために、 nS u e De ec o K F uo esce ( oche)を用 て TUNEL を行 た。すなわち、 織 を切断し、 T化合物 に入れ、 素中で急速 結した。 ( ０ ) サ プ をメタノ を用 て 3０ 室温で固定し 、 ０・ 1 T on ００を 含むPB を させ、 TUNEL 染色した。
ウ スタ ット 、 ヒ ト E kk 3 2に示すタ ク質に 対する 体を用 て行 た。
2 H (ヒ ト )に d Lac 又は d E (2０ ０ )を感染させ48 間後に ポト スを評価した。 に結果を示す。 FP 性の核を持 もの が ポ ス である。 に示すよ に、 d E 感 胞にて明ら に ポト ス 多 た。
2に用 た細胞のウ スタ ブ ット 析の 果を示す。 2に示すよ に、 d E 感 明ら に Pc ac ve Caspase 3の 現が上昇し て た。 すなわち、 d E 感染でJNK 性を介する ポト スが起こ て るこ が証明された。
らに、 ポ スアッ にお て、 JNK nh b o を添加して行 た。 果を図3に示す。 JNK nh b o で d E ポト スが有意に抑制 された。 て、 2 H 胞における d E ポ シスはJNK で あるこ が証明された。
( ) E kk 3による d の
nV oで d E 感染による のタン ク質の発 化を調 るために以 下の 験を行 た。 まず 胞を平 6ウ プ トに 24 養し、 細胞を d Lac d E で2０ 0 (m p c yO n ec on) で無血清 中にて2 理した後、 新鮮 地に交換した。 48 間のインキ ベ シ ョ 、 タン ク質を回収しウ スタ ブ ットを行 た。
4に nh b o O d e en a on d )のウ スタ ット 析の 果を示す。 4に示すよ に d 感 48 間後にお て 2 H 明ら に d の 現が低下して た。
次に d の 発現が d E ポト スに及ぼす影響を検討するため に以下の 験を行 ポト スを解析した。 6ウ プ トに 24 養し、 細胞を d Lac d E d d ( d adenov s)で以下の の 件で無血清 地中にて2 理した。
e d E 2０ ０ We 2 d E 2０ ０ d Lac ０ ０ we 3 d RE 2０ ０ d d ０ ０
新 地に交換した後、 48 イ キ ョ を行 、 UNEL に ポト スを評価した。 5に示すよ に、感染48 間後にお て d 制発現で明ら に d E ポト スが減少して た。 このことは d E ポト スが d 少に依存して ることを証明して る。
6に、 a e a (何も処理して な 2 H ) 5で用 た細胞にお けるウ スタ ブ ット 析の 果を示す。 6に示すよ に、 d 制発現に より d E pJNK pc 、 c veCaspase 3の 上昇が抑制された。 すなわち、 d RE ポト スの 本的メカ ムである JNK 性化が d 発現により 害されたこ が証明された。 まり d E 感染による d d E ポト スを促進して る ことが考えられ た。
(3) H28 胞及び 2 52 胞を用 た検討
(H28 H2０52)を用 て上記( ) (2) 同様に d E ポト スを検討した。 7に示すよ に、 H28 H2０52にお ても 2 H 同様に d E の感染により d 下及びJNKの ( 性化) が 認められた。 さらに、 8に示すよ に、 d 制発現により d E
ポト スが抑制された。 まり d E 感 d JN の ( 性化) ポト ス 序は他の悪性 胞にお ても認められた。 (4) モデ ウスを用 た検討 (その )
００ LPBS中の 2・０ ０6の H L cを8 B LB ヌ ド ウス ( L よ り入手) の 与し、 同所 悪性 デ ウスを作製した。
間後、 4 ０ ０8
P aq e o m g n ０ PB 中の d E d ac を細胞を投与した部位と同じ部位 ら胸腔 与した。 ト し て PB を投与した。 nV vo ラ ゼイメ ジ グ ステム) システムにより 5 ごとに投与 2０ 間にわた て発光を測定し、 さらに ウ スの死を タ した。 瘍のサイ 部は別の処 を用 て 目に 評価した。
gaに、 による 2 H L ( )の 量化( ho on sec) を示す。 前(Day ０)に比較し ay ０にお て d E 有意に 量が低下した。 gbは、 gaに対応する 像を示す。
9 は、 生存 線を示す。 9 に示すよ に、 対照 に比較し d E 明ら に生存 が改善して た。 上の結 より、 d E
悪性 対して 的な治療 果がある 考えられた。
(5) デ ウスを用 た検討 (その2)
(4) にて使用した d Lac 感 ウスを感染7 後に解剖し、 正 常 織 に分別した Lac 色にて 内及び 膜における 伝子 Lac の 現を解析した。 Lac 色の 以下の 。 PB H8 ０ ( ホ ムア デヒド 37 2 7m 、 ０・ 2 グ タ ア デヒド 25 ０ 8 2 g ０ 2 5 E 2００ 2 5m ) で 8 Cにて 定後 ac (PB 5０m 5 フ アン カ ウム 0 2 5m 、 5㎜ ア カ ウム 2 5m 2 g ０ ０ ０ od u Deoxycho a e ０ ０ ０5 ０ ０2 NP4０ ０ ０ g m ga 5０ g 室温 にて 2 インキ ション Lac の 現を解析した。
Oaに、 d Lac 群における Lac 色による 伝子 析の 果を示す。 Oaに示すよ に、 の 5０ 胞に 伝子は導入されて るが、 残りの 胞に 伝子 見られな た。 それにも わらず 的な 抗 果が見られること ら、 d E 与には何ら の 用があると考えられた。
Obに、 Lac 群における LacZ 色による正常 膜での 伝子 析の 果を示す。 膜にし り とした遺伝子 現が認められた( )。 この 見より 膜における E の 現が何ら の 用を 起して るこ が強 示唆された。
2 E kk 3による L 7の
ヒ ト 胞を用 て d E の 行 た。 ヒ ト としては U 24を用 た。これらは が確立した(Ba Le a n J ance 993 53 45 456)
胞を d E を20 0 で48 理し、 d E を感染 た。
に d E を正常線 胞に感染さ たときの 色の 果を示す。 制 発現された E が細胞 ( ) にあることが確認された。
d E を正常線 胞に感染さ たときの 上 サイ トカイ をサ イ トカイ ア イを用 て 定した。 サイ トカイ ア イは、 ayB o Hu an y ok ne n body ay 6 ( ayB o ech No c oss )を用 た。
2に結果を示す。 2に示すよ に、 L 7の 上昇が確認された ( の )。
さらに、 d RE 感 胞を用 たノ ザ ブ ッ 行 た。 タ N を ジ ネ ト ノ ・ク ホ ム 出法に より 離した。 2０ g の N を ・０ ガ スゲ 中で分 、 ナイ
(Ny an P us y on e b ane E Hea hca e B o c encs)に転写した。 ヒ L 7 伝子 片をプ ブとして た。
3に d E 感 常線 でのノ ザ ブ ット 析の 果を示す 3 、 ex E は ビナ ト E タ ク質を示す。 3に示す よ に、 d E 感 常線 明ら に L 7 N の 現が元 して ることが確認された。
さらに、 4に示すタン ク質に対する 体を用 てウ スタ ブ ット 行 、 E kk 3による L 7 の を解析した。 L 7は RF F により 活性化するが、 d E 感染により 胞にお て F 現が冗 して ることが確認された ( F 2は常時発現して た)。 その F の としてJNK 性化 p38 性化 ST T 性化が証明され た。
実施 の より、 d E を正常 胞に感染さ ると L 7 生が元 する ことが確認された。 L 7はN Na ua K e 胞を活性化し
することが知られており、正常 胞にお ても d E の感染により L 7 の 生が元 NK 胞を介する して る 考えられる。
5に d E 与により 起される 用の 子生物学的 メカ ズムを示す。 5に示すよ に d 制と p38 性化の2 の 路 がある 考えられる。 胞に ポト スを引き起こし、 後者
胞 らの L 7 を引き起こし、その NK 性化を誘導する。 上の利用 能性
に示すよ に、 E kk 3 N を アデ ウイ スベクタ ( d E ) を同所 悪性 デ ウスにお て ( ) 与することにより 意に 量が縮小しまた生存 の 善がみられる。 悪性 デ ウスにお て、 d RE C ( ) 与により 意に 量が縮小し、 また 生存 の 善がみられた。 また、 明ら な 作用は認められな た。 このよ に、 d RE C 悪性 対する めて有効な治療法である。 ま た、 実施 に示すよ にJ K ポト スが細胞 殖などに深 関わ て る nh b on O d e en a on ( d )の 下によるものであるこ が示 れた。 d 多 の癌で 現し に深 関与して ること ら、 d E は幅広 種 の 果を発揮し得る。 d E を胸腔 に投与することにより、 正常 膜における L 7の に ながり NK 胞 を中心とする 活性化し、 d E 体の 胞に対する ポ ス 果と相ま て非常に優れた治療 果を発揮する。 明細書で引用した全ての 行物、 特許および 願をそのまま して 本明細書にと り入れるもの する。

Claims

求の
・ 下の E Dkk 3DN 又は該UN を含む クタ を有効成分として む 中
(a) に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) g に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ な条件で イ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
2・ クタ が ウイ ス クタ である 載の 。 3・ 胸膜 である 又は2に記載の 。
4・ である 3 載の 。
5・ 胞に ポト スを誘導し、正常 胞の する、 請求 ～4の ずれ 項に記載の 。
6・ 下の E Dkk 3DN 又は該DN を含む クタ を有効成分 して (a) に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 列 らなる DN にス ト ンジ ン な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
7・ クタ が ウイ ス クタ である 6 載の 。 8・ 下の E kk 3DN 又は該 N を ベクタ を 者に投与す るこ を含む、 療法
(a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ンジ ン な条件で イ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
9・ クタ が ウイ ス クタ である 8 載の 療法。 ０・ 胸膜 である 9 載の 。
E kk 3 N 又は該 N を含む クタ を胸腔 に投与する、 請求 ０ 載の 療法。
2・ 胞に ポト スを誘導し、 胞の
する 8 載の 療法。
3・ 下の E kk 3 N 又は該 N を含む クタ を動物に投与するこ とを含む、 動物の
(a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ ン な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
4・ クタ が ウイ ス クタ である 3 載の
。
5 の 造における、 以下の E kk 3 N 又は該DN を含 む クタ の
(a) に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) に表される 基配 に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ ン な条件で イ する DN であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
6・ クタ が ウイ ス クタ である 5に記載の 。 7・ 胸膜 である 5又は 6に記載の 。
8 E kk 3 N 又は該DN を含む クタ が胸腔 に投与 れる、 請 求 7 載の 。
9・ 、 胞に ポト スを誘導し、 胞の する、 請求 5～ 8の ずれ 項に記載の 。 2０・ 物における免疫 剤の 造における、 以下の E kk 3 DN N を含む クタ の
(a) 表される 基配列 らなる DN 又は
(b) g に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ト ジ ン な条件で イブ する N であ て、 ポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタン ク質を ドする N 2 ・ クタ が ウイ スベクタ である 2 に記載の 。 22・ の 療に用 る、 以下の E C kk 3 DN
(a) g に表される 基配列 らなる DN 又は
(b) に表される 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ジ な条件で イブ する N であ て、 ポト シス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする DN
23・ 胸膜 である 22 載 E kk 3 N
24・ に投与される、 請求 23 載の E Dkk 3 DN
25・ 胞に ポト スを誘導し、 胞の
する、 請求 22～24の ずれ 項に記載の E Dkk 3 DN
26・ の 療に用 る、 請求 22 載のRE Dkk 3DN を含む ク タ
2 7・ クタ が ウイ ス クタ である 26に記載の E Dkk 3 DN を含む クタ 。
28・ 胸膜 である 26 27に記載の E Dkk 3 N を含む クタ 。
29・ に投与される、 請求 28 載の E kk 3DN を含む クタ 3０・ 胞に ポ スを誘導し、 胞の
する、請求 26～29の ずれ 項に記載の E Dkk 3 N を含む クタ 3 ・ 物の に用 る、 以下 E kk 3 DN
(a) に表される 基配列 らなる N 又は
(b) g に表 れる 基配列に相補 な 基配列 らなる N にス ジ ン な条件で イ する N であ て、・ アポト ス 性及 び 胞の L 7 性を有するタ ク質を ドする N
32・ 物の に用 る、 請求 3 載の E kk 3 N を含む クタ 。
3 3・ クタ が ウイ スベクタ である 3 2に記載の
2０ E Dkk 3 DN を含む クタ 。
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