WO2009141486A1 - Neoglicolípidos, sus agregados con nanotubos de carbono, procedimiento de obtención y aplicaciones - Google Patents

Neoglicolípidos, sus agregados con nanotubos de carbono, procedimiento de obtención y aplicaciones Download PDF

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WO2009141486A1
WO2009141486A1 PCT/ES2009/070180 ES2009070180W WO2009141486A1 WO 2009141486 A1 WO2009141486 A1 WO 2009141486A1 ES 2009070180 W ES2009070180 W ES 2009070180W WO 2009141486 A1 WO2009141486 A1 WO 2009141486A1
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Noureddine Khiar El Wahabi
Manuel PERNÍA LEAL
Inmaculada FERNÁNDEZ FERNÁNDEZ
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Consejo Superior De Investigaciones Científicas
Universidad De Sevilla
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    • B28—WORKING CEMENT, CLAY, OR STONE
    • B28B—SHAPING CLAY OR OTHER CERAMIC COMPOSITIONS; SHAPING SLAG; SHAPING MIXTURES CONTAINING CEMENTITIOUS MATERIAL, e.g. PLASTER
    • B28B3/00—Producing shaped articles from the material by using presses; Presses specially adapted therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/08—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium
    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur

Definitions

  • the present invention is part of the field of bionanotechnology. More specifically, the present invention pertains to the field of carbohydrate-nanotube conjugates or aggregates and their applications in processes that involve interactions of carbohydrates with other biochemical or biological species, such as their applications in diagnosis and in non-stick therapy. .
  • glycocalyx a name of Greek origin that means "sweet shell”.
  • glycocalyx For a long time it was thought that the role of glycocalyx was merely that of a cell protection agent against external agents by repulsive interactions. However, recent data indicate that the glycidic part of the glycocalyx plays a preponderant role in the process of communication of the cell with the surrounding environment (CR Bertozzi, LL Kiessling, Science 2001, 291, 2357).
  • lectins The recognition of carbohydrates by their specific biological receptors (lectins) is involved in various biological and pathological processes, such as viral replication, cell-cell recognition, cell adhesion, inflammation, biochemical signal transduction, adhesion of pathogens, tumor metastasis and as markers of the progress of various diseases.
  • neuronal cells use carbohydrates to facilitate their development and differentiation; the progress of cancer cells is generally characterized by an increase in carbohydrate-dependent adhesion processes and by an increase in carbohydrates on the cell surface; viruses recognize carbohydrates to enter the host cell; and bacteria use carbohydrates to adhere to the host cell [R. Kleene, M. Schachner Nat. Rev. Neurosci. 2004, 5, 195-208; S. Hakomori, K. Handa, FEBS Lett. 2002, 531, 88-92; AE Smith, A. Helenius, Science 2004, 304, 237-242; KA Karlson, Biochem. Soc. Trans. 1999, 27, 471-474].
  • the multi-conjugates developed to date can be classified into two groups: (i) low valence model systems and (ii) high valence model systems.
  • Low valence model systems have a molecular character and typically allow the incorporation of two to twenty ligands. These systems include glycoclusters, glycodendrimers and derivatives of conformationally rigid macrocycles such as calixarenes, cyclopeptides, crown ethers and cyclodextrins.
  • the so-called high valence systems among which are the examples presented in this invention, have a supramolecular nucleus or result from the supramolecular organization of monovalent monomers.
  • these systems are neoglycoproteins, neoglycol polymers, liposomes and self-assembled monolayers.
  • the cluster effect discussed above, has driven the development of anti-adhesive drugs mu 11 and 1 entities against bacteria and viruses by presenting glycoligands on flexible polymers.
  • Multi-layer nanotubes or MWNT consist of several layers of graphite concentrically formed forming cylindrical layers with diameters of 4 - 30 nm according to the number of cylinders, and lengths that can reach up to 10 ⁇ m.
  • the walls of the nanotubes are constituted by carbon hexagons with sp 2 hybridization and the cylindrical carbon layers are separated a distance of 3.44 ⁇ .
  • a second type of nanotubes with the peculiarity of being constituted by a single layer of graphite [" * K]; rici, 7. iV.twe J 99.5, ' ⁇ ⁇ - F or "3_.
  • Mono-layer or SWNT (“ single wall nanotube ”) carbon nanotubes are generally diameters from 1 to 1.5 nm and several ⁇ m in length.
  • NTCs come in different forms that can be classified into three types according to the curl of the graphite layer plus external: (a) type "armchair” ⁇ "Armcha ⁇ r"), represents the nanotubes that have two sides of the hexagon perpendicular to the axis of the tube. (b) “zigzag” type, represents nanotubes that have two sides of the hexagon parallel to the axis of the tube. (c) "chiral” type, represents all intermediates between the two previous types.
  • NTCs are synthetic products, and the three most important methods for their preparation are: (i) the electric arc method, (b) the laser ablation method and (iii) the chemical vapor deposition method.
  • NTCs Since its discovery, nanotubes have aroused enormous interest in scientists. Proof of this is the number of publications that have appeared in the last five years and that exceed 10,000 articles. The interest of the NTCs is based on their exceptional mechanical properties. NTCs are six times lighter than steel, but one hundred times stronger. Its ability to deform without breaking, under a mechanical action, is also remarkable: molecular dynamics experiments have shown that carbon nanotubes possess Young's moduli (relationship between traction or compression exerted on nanotubes and elongation or shortening resulting from it) exceptionally high. Although structurally related to graphite, carbon nanotubes have shown surprising electronic and magnetic properties. Theoretical studies, which have recently been confirmed experimentally, have shown that NTCs have different magnetic and electronic characteristics depending on their structure.
  • glycolipidic compounds consisting of a carbohydrate linked to a polycarbonate and polyoxygenated chain containing a diacetylene function, are capable of self-organizing in the form of rings around carbon nanotubes, and forming stable polymers.
  • the action of irradiation of ultraviolet light on the starting glycolipid due to the presence of the diacetylene function
  • carbon glycolipid-nanotube aggregates is formed.
  • the use of these glycolipids is a way of presenting carbohydrates on a semi-flexible nanometric material capable of adapting its structure to the biological molecules with which it can interact, so they would be very useful in biomedicine, both as diagnostic and therapeutic agents.
  • the inventors have also succeeded in separating the polymerized glycolipid rings surrounding the nanotubes, thus obtaining what they have termed glyconanosomes (GNS).
  • GNS glyconanosomes
  • both the neoglycolipid-carbon nanotube aggregates and the glyconanosomes have a large number of applications in biomedicine.
  • a first aspect of the invention is directed to a glycolipid of general formula I:
  • R is a carbohydrate selected from mono-, di- and polysaccharide
  • a second aspect of the invention is directed to a process for obtaining a glycolipid of formula I, comprising:
  • R, X, j, k, m and n have the previously mentioned meanings.
  • Another aspect of the invention is directed to a supramolecular aggregate comprising carbon nanotubes and a compound of formula (I) as previously defined.
  • another aspect of the invention constitutes a process for the preparation of a supramolecular aggregate as defined above comprising: a) mixing a suspension of carbon nanotubes with a compound of formula I, in water, and sonicating the mixture during the time needed to obtain an aggregate formed by carbon nanotubes around which the compound of formula (I) is located; b) centrifuge the mixture obtained in step a) in order to eliminate nanotubes that do not have compounds of formula I organized around them; c) irradiating the solution obtained in step b) with ultra-violet light to polymerize the compound of formula (I), so that said compound polymerized is located in the form of rings around carbon nanotubes; and d) dialyze the solution obtained in step c) against deionized water in order to eliminate glycolipids and / or micelles derived therefrom that are not in contact with the nanotubes
  • the invention relates to a supramolecular aggregate obtainable according to the procedure described above.
  • Another aspect of the invention is a process for producing a glyconanosome comprising removing the rings of polymerized compounds of formula I surrounding the nanotubes obtained according to the procedure defined above.
  • the invention is directed to a glyconanosome obtainable according to the procedure defined in the previous paragraph.
  • the invention further relates to a supramolecular aggregate as defined above for use as a medicament.
  • the invention is directed to the use of a supramolecular aggregate as defined above for the preparation of a medicament directed to the treatment of diseases and / or conditions that occur with carbohydrate-mediated interactions.
  • the use of the supramolecular aggregate is for the preparation of a medicament aimed at the treatment of bacterial infections, viral infections, inflammatory processes, cancer or dysfunctions in the immune response during tissue transplantation.
  • the present invention is directed to a kit for blood group determination which comprises a supramolecular aggregate as previously defined.
  • the invention in another aspect, relates to a vaccine comprising a supramolecular aggregate as previously defined and an antigen.
  • the invention relates to a method for determining the presence in a medium of a substance capable of interacting with a carbohydrate, comprising: a) contacting a supramolecular aggregate as defined above with the substance in such a manner. that the substance can be associated with carbohydrate; and b) determine whether the association takes place or not.
  • a final aspect of the invention is the use of a glyconanosome as previously defined as a vector of a biologically active molecule.
  • Figure 1 Schematic representation of the glycocalyx and glycolipid-carbon nanotube aggregates of the invention.
  • Figure 2. Preparation of glyconanosomes from glycolipids-carbon nanotubes aggregates.
  • glycolipid or "neoglycolipid” refers to a compound consisting of a carbohydrate covalently linked to a polycarbonated and polyoxygenated chain containing a diacetylene function, and having the following general formula (I) :
  • R is a carbohydrate selected from mono-, di- and polysaccharide;
  • X is oxygen, sulfur, -CH 2 - or -NH-;
  • n, m, j and k are whole numbers, the same or different, between 0 and 20; ei is 0 or 1.
  • the compounds of formula (I) are photopolymerizable, that is, they can form polymers by the action of ultraviolet light irradiation due to the presence of acetylenic groups.
  • carbohydrate By the term carbohydrate, reference is made in the present invention to an organic compound of general formula (CH 2 O) n , in which n is between 4 and
  • carbohydrates such as those carbohydrates that have a carbon oxidized to carboxylic acid and deoxy sugars, which are sugars that have one or more reduced hydroxyl groups, these hydroxyl groups being optionally independently substituted by other groups such as an amino group or a thioether group .
  • carbohydrates are the 1- deoxy sugars, where the hydroxyl of the anomeric carbon of the reducing end is substituted by another heteroatom (S, N), or by a carbon atom, with their corresponding valences occupied.
  • the carbohydrates of the invention are selected from the following group: 1- deoxyglucose, 1-deoxygalactose, 1-deoxyarabinose, 1- deoxyximose, 1-deoxy-N-acetyl-galactosamine, 1- deoxyxylose, 1-deoxymeltose, 1-deoxylactose, 1-deoxy-N-acetyl-galactosamine- ⁇ -1, 3-galactose, more preferably 1-deoxygalactose, 1-deoxyglucose, 1-deoxyannose and 1- deoxylactose.
  • the saccharide exists in acetal form.
  • the OH group may or may not be protected as an ester or as an ether.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of formula (I) in which X is a sulfur atom giving rise to the compound of general formula Ia:
  • n, m, j and k are integers, equal or different, between 0 and 20; ei is 0 or 1.
  • n is between 1 and 10, preferably between 1 and 5, more preferably it is 2.
  • m is between 1 and 10, preferably between 1 and 5, more preferably it is 2.
  • j is between 1 and 10, preferably between 5 and 10, more preferably it is 6.
  • k is between 1 and 15, preferably between 5 and 15, more preferably it is 9.
  • n is 2
  • m is 2
  • j is 6 and k is 9, giving rise to the compound of general formula Ia ':
  • Another even more preferred embodiment of the invention is the compound of formula (Ia ') in which i is equal to 1 and R is 1-deoxylactose, giving rise to the compound of formula Ia' (2):
  • Another even more preferred embodiment of the invention is the compound of formula (Ia ') in which i is equal to 1 and R is 1-deoxyglucose, giving rise to the compound of formula Ia' (3):
  • Another even more preferred embodiment of the invention is the compound of formula (Ia ') in which i is equal to 1 and R is 1-deoxygalactose, giving rise to the compound of formula Ia '(4):
  • Another even more preferred embodiment of the invention is the compound of formula (Ia ') in which i is equal to 1 and R is 1-deoxyanose, giving rise to the compound of formula Ia' (5):
  • R, X, j, k, m and n have the aforementioned meanings
  • R, X, j, k, m and n have the previously mentioned meanings.
  • any dehydrating agent known to a person skilled in the art can be used, however the use of O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate is preferred (TBTU).
  • any compound that allows reducing an azide group to a Amine group in a particular aspect, any compound that allows reducing an azide group to a Amine group
  • the use of triphenylphosphine (PPh 3 ) is preferred.
  • organic solvents the use of CH2C12, DMSO, DMF or THF is preferred.
  • silica means in the present invention a structure formed by a carbon nanotube around which are located in the form of rings, polymerized glycolipids of formula (I). The nanotube and glycolipid are bound specifically non-covalently by hydrophobic interaction.
  • This nanometric aggregate is a stable biomaterial useful as a multivalent carbohydrate presentation model.
  • a schematic representation of the aggregates of the invention is shown in Figure 1.
  • the carbon nanotube of the supramolecular aggregate of the invention is selected from single-layer or multi-layer nanotube and has a "zigzag", “chiral” or “armchair” structure.
  • Another aspect of the invention is the process for obtaining the supramolecular aggregate of the invention comprising the following steps: a) mixing a suspension of carbon nanotubes with a compound of formula I, in water, and sonicating the mixture for the necessary time until the compound of formula (I) is located around the carbon nanotubes forming an aggregate; b) centrifuge the mixture obtained in step a) in order to eliminate nanotubes that do not have compounds of formula I organized around them; c) irradiating with ultraviolet light the solution obtained in step b) to polymerize the compound of formula (I), so that said polymerized compound is located in the form of rings around the carbon nanotubes; and d) dialyze the solution obtained in step c) against deionized water in order to eliminate glycolipids and micelles derived therefrom that are not in contact with the nanotubes.
  • step a) it is not necessary to use buffer solution or add detergents.
  • step a) it is not necessary to use buffer solution or add detergents.
  • step b) it is not necessary to use buffer solution or add detergents.
  • step a) it is not necessary to use buffer solution or add detergents.
  • step b) it can be observed if the solubilization of carbon nanotubes in water has been carried out, indicative of the formation of stable aggregates, if this does not occur, carbon nanotubes would end up precipitating .
  • said sonication time is about 30 minutes.
  • the glycolipids are preorganized in a hemimyellar form around the carbon tubes.
  • the centrifugation step can be performed by any centrifugation technique known in the art.
  • step c) of polymerization of the glycolipids involves irradiation thereon of ultraviolet light for the time necessary to allow polymerization of said glycolipids.
  • the time required to polymerize the glycolipid with ultraviolet light is around
  • This polymerization stage causes the glycolipids that were pre-organized in hemimyellar form around the nanotube, to be polymerized by organizing in the form of rings around it.
  • the polymerization of glycolipds has allowed to obtain Very stable aggregates, whose structure remains for at least 3 months.
  • glyconanosomes in the context of the present invention, the term "glyconanosama” means a ring-shaped structure consisting of polymerized glycolipids of formula (I), obtained from the carbon glycolipid-nanotube supramolecular lagrega by separation of the nanotube from carbon.
  • the glyconanosome is hydrophobic in its internal cavity and hydrophilic in its external part.
  • the separation or process of sliding the polymerized glycolipid rings out of the carbon nanotube can be carried out by different prior art methods. For example, when the carbohydrates of the glycolipidic chain are charged, an electric field is applied, using electrophoresis as a separation technique.
  • glyconanosomes obtained constitute a new glycocalix model with a multivalent presentation of carbohydrates that have important biological advantages for their application in biomedicine.
  • Another aspect of the invention is the biological application of carbon-glycolipid nanotubes and glyconanosomes, as a result of the multivalent presentation of carbohydrates in their outer layer, as well as those derived from its structural characteristics.
  • carbohydrate-mediated interactions are described in the literature whose study and modulation could be carried out by the aggregates described in this invention. Among these interactions are: the adhesion of leukocytes to endothelial cells, the carbohydrate-antibody interaction, carbohydrate-protein interaction from which a bacterial or viral infection results, the immunological recognition of tumor cells, adhesion of tumor cells to Endothelial cells in the processes of cancer metastases and interactions that lead to the rejection of a transplanted tissue.
  • the present invention is directed to the use of a supramolecular aggregate carbon nanotube-gl i co 1 i pi do as previously defined for the preparation of a medicament for the treatment of diseases and / or conditions They are involved in carbohydrate-mediated interactions.
  • the supramolecular aggregate can have multiple copies of carbohydrate, diseases that occur with multivalent interactions can be treated.
  • the disease and / or condition is selected from bacterial infections, viral infections, inflammatory processes, cancer and immune response dysfunctions during tissue transplantation.
  • the supramolecular aggregates of the present invention represent a new family of new generation antibiotics. It is known in the literature that the broad and growing resistance of bacteria to antibiotics is one of the most serious and global health problems. Because the interaction or infection of the bacterium to healthy cells begins through an interaction with the carbohydrates of the cell membrane, blocking or inhibiting this interaction by the aggregates of the invention allows it to block bacterial activity. . On the other hand, because this interaction takes place on the surface of the bacteria, they could hardly develop resistance against a non-stick therapy based on carbohydrates.
  • An example of a carbohydrate-mediated bacterial infection is the infection caused by the bacterium Helicobacter pylori responsible for acute chronic gastritis, gastric and duodenal ulcer, the appearance of gastric adenocarcinoma and lymphoma of the mucosa-associated lymphoid tissue in humans.
  • Helicobacter pylori responsible for acute chronic gastritis, gastric and duodenal ulcer, the appearance of gastric adenocarcinoma and lymphoma of the mucosa-associated lymphoid tissue in humans.
  • examples of viral carbohydrate-mediated viral infections include the influenza virus (influenza) that infects cells through very valuable interactions of the inine hemagglut of the viral surface with the terminal sialic acid of the glycoconjugates. of the host Thus the inhibition of these interactions can prevent influenza infection.
  • influenza virus influenza
  • AIDS virus infection is another example of viral infection involving carbohydrates.
  • HIV-I infects healthy cells by interacting with the host galactosylceramide (GalCer) with the gp 120 protein of the virus.
  • GalCer galactosylceramide
  • Another application of the supramolecular aggregates of the present invention is to modulate the inflammation process.
  • members of the selectin family participate in the initial processes of adhesion of leukocytes to endothelial cells during the inflammation process. Once inflammation occurs, transported neutrophils adhere to the cell surface of the endothelium and begin to roll slowly.
  • the aggregates of the present invention are of interest for the control of the immune response, such as in transplant processes.
  • the immune recognition of a tissue is initiated by the interaction of carbohydrates present in the transplanted tissue and the components of the host's immune system such as antibodies, this interaction could be a good target to improve the host's immune response.
  • the ⁇ Gal epitope constitutes an important antigenic epitope in the process of rejection of transplanted tissues.
  • the intervention or control of the interaction of the ⁇ Gal epitope with the host's immune system can be a good therapeutic target and thus improve tissue transplantation.
  • neoglycolipid-carbon nanotubes aggregates can function as vaccines by inducing the immune system to produce antibodies capable of attacking the carbohydrates present on the surface of cancer cells.
  • cancer cells are characterized by the synthesis of a large number of aberrant carbohydrates on its surface, which can be used to develop a mechanism for the activation of the immune system against the cancer cells themselves.
  • Another application of the aggregates in the treatment of cancer is to inhibit their metastasis, e.g. inhibiting the migration of tumor cells through endothelial cells.
  • the present invention is directed to the use of carbon nanotube supramolecular aggregates-gl i co 1 ip i do s for the determination of the blood group in an individual.
  • the present invention relates to a kit for the determination of the blood group in an individual comprising a supramolecular carbon-glycolipid nanotube aggregate as defined herein.
  • the invention relates to a vaccine comprising the supramolecular aggregate carbon nanotube-gl i co 1 ip i do and an antigen.
  • the ligand that is associated with the aggregate acts as an antigen.
  • a further application of the aggregates of the invention is for catalysis in the synthesis of antibodies by a host organism. Which is of paramount importance since carbohydrates generally lack antigenic power.
  • the supramolecular aggregates of the present invention can also be used for the determination of the presence in a medium of a substance capable of interacting with a carbohydrate.
  • the method for determining the presence of said substance consists in: (i) contacting the aggregate and the substance in such a way that it can produce the association between both and (ii) determine whether or not the association has taken place.
  • a method of correlating the presence or absence of association with the diagnosis of a pathological state caused by the substance can be implemented to this method.
  • An example of using the aggregates of the present invention as a substance determination system is the detection of anti-carbohydrate antibodies.
  • Another possible application of the aggregates of this invention is the detection of a species when it recognizes one of the epitopes present in the aggregates.
  • Polymeric lipids in glycolipid-nanotube carbon aggregates as well as in g 1 i with nano s orna s have the characteristic of changing color under a mechanical action (mechanochromism), or thermal action (thermochromism) or any other external stress. This feature can be applied to use these aggregates for diagnostic purposes.
  • the present invention is directed to the use of a glyconanosome as defined above as a vector for the intelligent transport of biologically active molecules.
  • biologically active molecule refers to any substance that is used in the treatment, cure, prevention or diagnosis of a disease or that is used to improve the physical and mental well-being of humans and animals. According to the present invention, said molecules will have a marked hydrophobic character. These molecules may include polysaccharides, proteins, peptides, lipids, ol igonucleotides, polynucleotides, nucleic acids and mixtures thereof.
  • glyconanosomes Another possible application of glyconanosomes is their use for the solubilization and stabilization of membrane proteins.
  • neoglycolipids of suitable size glyonanosomes with structures similar to a lipid bilayer capable of emulating the cell membrane can be generated.
  • the hydrophobic part of the membrane proteins is introduced into its hydrophobic cavity.
  • the glyconanosome / membrane protein complex is solubilized in water without the need for detergents that can damage or alter the active structure of the protein.
  • DIPEA DMAP diisopropylethylamine: 4-dimethylaminopyridine
  • the purification and separation of the compounds obtained has generally been carried out on a chromatographic column under pressure, using Merck 60 A silica gel (pore size 40-63 ⁇ m) as the stationary phase. In each case the eluent used is indicated.
  • the rotational powers [ ⁇ ] D have been determined at room temperature, using a 10 cm long cell.
  • the Nuclear Magnetic Resonance spectra ( 1 H-NMR and 13 C-NMR) have been recorded on the Bruker DRX-300 (300 MHz), DPX-400 (400 MHz) and DRX-500 (500 MHz) spectrometers, using as CDCI3 solvent if not indicated otherwise.
  • Mass spectra were performed by the Mass Spectrometry Service of the University of Seville on a Kratos MS-80-RFA spectrometer and a Micromass mass spectrometer model AutoSpec.
  • V-A Ll-azido-3,6,9-trioxaundecanoic acid
  • a suspension of 100% water nanotubes in water is prepared and the compound (1) synthesized in Example 6 is added.
  • the mixture is sonicated until the nanotubes are solubilized, indicative of the formation of stable aggregates. Said sonication time turns out to be about 30 minutes.
  • the mixture obtained is centrifuged in order to eliminate nanotubes that do not have organized glycolipids around them.
  • the solution is dialyzed with deionized water in order to eliminate lipids and / or micelles derived therefrom that are not in contact with the nanotubes.
  • the non-polymerized aggregates are not stable during the time studied since the nanotubes have precipitated, indicating that the structure of said aggregates is not maintained. On the contrary, the suspension of the polymerized aggregates remains stable, no precipitation of the nanotubes is observed.

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Abstract

La presente invención se refiere a un glicolípido de fórmula (I) en la que R es un carbohidrato seleccionado entre un mono-, di- y un polisacárido; X es oxígeno, azufre, -CH 2 -o –NH-;n, m, j y k son números enteros, iguales o diferentes entre sí, comprendidos entre 0 y 20; e 10 i es 0 ó 1; así como a un agregado nanotubo de carbono-glicolípido; a un procedimiento para su obtención así como al uso de los mismos en procesos que implican interacciones de carbohidratos con otras especies bioquímicas.

Description

NEOGLICOLÍPIDOS, SUS AGREGADOS CON NANOTUBOS DE CARBONO, PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN Y APLICACIONES
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se enmarca dentro del campo de la bionanotecnologia . Más específicamente, la presente invención pertenece al campo de los conjugados o agregados carbohidratos-nanotubos de carbono y sus aplicaciones en los procesos que impliquen interacciones de carbohidratos con otras especies bioquímicas o biológicas, como por ejemplo sus aplicaciones en el diagnóstico y en la terapia antiadhesiva .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Al mirar una célula al microscopio electrónico, se observa que está cubierta por una densa capa formada por carbohidratos, unidos de manera covalente a proteínas (glicoproteinas) o lipidos (glicolipidos) . Al conjunto de todas estas moléculas se le denomina glicocálix, nombre de origen griego que significa "cascara dulce".
Durante mucho tiempo se pensó que el papel del glicocálix era meramente el de un agente de protección de las células frente a agentes externos mediante interacciones repulsivas. Sin embargo, datos recientes indican que la parte glucidica del glicocálix juega una papel preponderante en el proceso de comunicación de la célula con el medio que la rodea (C. R. Bertozzi, L. L. Kiessling, Science 2001, 291, 2357) . El reconocimiento de carbohidratos por sus receptores biológicos específicos (lectinas) está implicado en procesos biológicos y patológicos diversos, tales como la replicación vírica, el reconocimiento célula-célula, la adhesión celular, la inflamación, la transducción de señales bioquímicas, la adhesión de agentes patógenos, la metástasis tumoral y como marcadores del progreso de varias enfermedades. A modo de ejemplo, las células neuronales utilizan los carbohidratos para facilitar su desarrollo y su diferenciación; el progreso de las células cancerosas generalmente se caracteriza por un incremento de procesos de adhesión dependientes de carbohidratos y por un incremento de los carbohidratos en la superficie celular; los virus reconocen carbohidratos para tener entrada en la célula huésped; y las bacterias utilizan los carbohidratos para adherirse a la célula huésped [R. Kleene, M. Schachner Nat . Rev. Neurosci. 2004, 5, 195-208; S. Hakomori, K. Handa, FEBS Lett. 2002, 531, 88-92; A. E. Smith, A. Helenius, Science 2004, 304, 237-242; K. A. Karlson, Biochem. Soc. Trans . 1999, 27, 471-474] .
La importancia del papel biológico de los carbohidratos, descubierto recientemente, ha desencadenado un esfuerzo multidisciplinar para el entendimiento de la estructura, la función y el mecanismo de reconocimiento de los hidratos de carbono por las lectinas a nivel molecular. Debido a que la primera interacción de un patógeno con una célula huésped está mediada por la interacción lectina- carbohidratos, su inhibición constituye una excelente herramienta para luchar contra la infección viral y bacteriana. El desarrollo de terapias antiadhesivas a base de carbohidratos, llevarla a gl i co fármaco s para el tratamiento de enfermedades viricas tan importantes como el SIDA, o al desarrollo de antibióticos de nueva generación, entre otros. Sin embargo, existen dos limitaciones fundamentales para el desarrollo de glicofármacos :
(i) La alta complejidad de los hidratos de carbono. Comparados con los otros tipos de biopolimeros, los ácidos nucleicos y las proteínas, que tienen una disposición lineal de unidades repetidas, los azúcares tienen muchos sitios de unión en diferentes disposiciones, dando lugar a estructuras muy ramificadas y ricas estereoquimicamente .
(ii) Las baj as a finidades de la interacción carbohidratos-lectinas, que a menudo están en el rango micromolar o incluso milimolar.
Sin embargo, en los sistemas biológicos la presentación multivalente de los glicoligandos da lugar a asociaciones efectivas, que muestran una alta especificidad (efecto cluster) [L. L. Kiessling, J. E. Gestwicki, L. E. Strong, Curr. Opin. Chem. Biol. 2000, 4, 696-703] . La dificultad en disponer de carbohidratos de origen natural, asociada a la imposibilidad de su clonación, ha impulsado el desarrollo de diversos modelos de sistemas polivalentes. Los glicoconjugados sintéticos presentan la ventaja de permitir la modificación del número y la disposición de los elementos de reconocimiento. Las investigaciones llevadas a cabo hasta la fecha, han puesto de manifiesto que los ligandos multivalentes presentan a menudo una afinidad aparente respecto al receptor muy superior a la del correspondiente ligando monovalente [M. Mammen, S. K. Choi, G. M. Whitesides, Angew. Chem. Int. Ed. Engl . 1998, 37, 2755-2794] . Los multiconjugados desarrollados hasta la fecha pueden clasificarse en dos grupos: (i) sistemas modelo de baja valencia y (ii) sistemas modelo de alta valencia .
Los sistemas modelo de baja valencia, tienen carácter molecular y permiten típicamente la incorporación de dos a veinte ligandos. Entre estos sistemas, se incluyen glicoclusteres, glicodendrimeros y derivados de macrociclos conformacionalmente rigidos como calixarenos, ciclopéptidos, éteres corona y ciclodextrinas . Los llamados sistemas de alta valencia, entre los que se encuentran los ejemplos que se presentan en esta invención, tienen un núcleo supramolecular o resultan de la organización supramolecular de monómeros monovalentes. Entre estos sistemas se encuentran las neoglicoproteinas, los neoglicopol imeros , los liposomas y las monocapas autoensambladas . El efecto cluster, antes comentado, ha impulsado el desarrollo de fármacos antiadhesivos mu 11 i va 1 e n t e s contra bacterias y virus mediante la presentación de glicoligandos sobre polímeros flexibles.
[R. Autar, A. S. Khan, M. Schad, J. Hacker, R. M. Liskamp,
R. J. Pieters, ChemB±oChem, 2003, 4, 1317-1325; N.
Nagahori, R. T. Lee, S. Nishimura, D. Page, R. Roy, Y. C.
Lee, ChemB±oChem, 2002, 3, 836-844; J. D. Reuter, A. Myc, M. M. Hayes, Z. Gan, R. Roy, D. Qin, R. Yin, L. T. Piehler, R. Esfand, D. A. Tomalia, J. R. Baker, Bioconjug. Chem. 1999, 10, 271-278; S. K. Choi, M. Mammen, G. M. Whitesides J. Am. Chem. Soc, 1999,119, 4103-4111; G. B. Sigal, M. Mammen, G. Dahmann, G. M. Whitesides, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 3789-3800] . En el campo de la nanotecnologia cabe destacar el uso de las nanoparticulas de oro como plataforma multivalente para el estudio de las interacciones carbohidratos-carbohidratos y carbohidratos- proteinas. [J. M. de la Fuente, A. G. Barrientos, T. C. Rojas, J. Rojo, J. Cañada, A. Fernández, S. Penadés, Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 2257-2261; H. Otsuka, Y. Akiyama, Y. Kagasaki, K. Kataoka, J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 8226-8230; C-C. Lin, Y. -C. Yeh, C-Y. Yang, C-L. Chen, G. F. Chen, C-C Chen, Y. -C Wu, J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 3508-3509; B. Nolting, J. -J. Yu, G. -Y. Liu, S.- J. Cho, S. Kauzlarich, C Gervay-Hague, Langmuir 2003, 19, 6465-6473] . Adicionalmente, existen dispositivos sensibles a la presencia de patógenos que utilizan asociaciones multivalentes para el reconocimiento [D. H. Charych, J.O. Nagy, W. Spevak, M. D. Bednarski, Science 1993, 261, 585- 588; Z. F. Ma, J. R. Li, M. H. Liu, J. Cao, Z. Y. Zou, J. Tu, L. Jiang, J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 12678-12679; M. D. Disney, J. Zhang, T. M. Swager, P. H. Seeberger, J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 13343-13346] .
Por otro lado, productos secundarios de la síntesis de fulerenos, los nanotubos de carbono (NTCs ó CNTs) fueron descubiertos en 1991 por el microscopista japonés S. Iijima de la sociedad NEC Corporation en Japón [S. Iijima, Nature 1991, 354, 56-58] . Después del grafito, el diamante y los fulerenos, los nanotubos de carbono representan la cuarta forma alotrópica del carbono. Los nanotubos multi-capas o MWNT ("multi wall nanotube") están constituidos por varias capas de grafito enrolladas de forma concéntrica formando capas cilindricas con diámetros de 4 - 30 nm según el número de cilindros, y longitudes que pueden llegar hasta 10 μm. Las paredes de los nanotubos están constituidas por hexágonos de carbono con hibridación sp2 y las capas cilindricas de carbono están separadas una distancia de 3.44 Á. Dos años más tarde, el equipo de NEC Corporation de Japón y de IBM de EEUU descubrieron un segundo tipo de nanotubos con la particularidad de estar constituidos por una única capa de grafito ["* K] ;rici, 7.
Figure imgf000006_0001
iV.twe J 99.5, 'ϊ^- F o"3_ . Los nanotubos de carbono mono-capa o SWNT ("single wall nanotube") tienen generalmente diámetros de 1 a 1.5 nm y varios μm de longitud. A diferencia de los MWNT, los SWNT no se pueden aislar, porque la mayoría se encuentra bajo la forma de paquetes de cilindros debido a interacciones de van der Waals (interacción hidrófobas) muy fuertes entre los diferentes tubos. Los NTCs se presentan bajo diferentes formas que se pueden clasificar en tres tipos según el enrollamiento de la capa de grafito más externa: (a) tipo "sillón" {"Armcha±r") , representa los nanotubos que tienen dos lados del hexágono perpendicular al eje del tubo. (b) tipo "zigzag", representa los nanotubos que tienen dos lados del hexágono paralelo al eje del tubo. (c) tipo "quiral", representa todos los intermedios entre los dos tipos anteriores.
Los NTCs son productos sintéticos, y los tres métodos más importantes para su preparación son: (i) el método del arco eléctrico, (b) el método de ablación láser y (iii) el método de deposición quimica de vapor.
Desde su descubrimiento, los nanotubos han despertado un enorme interés en los cientificos. Prueba de ello es el número de publicaciones que han aparecido en los últimos cinco años y que superan los 10.000 artículos. El interés de los NTCs se basa en sus excepcionales propiedades mecánicas. Los NTCs son seis veces más ligeros que el acero, pero cien veces más resistentes. Su capacidad para deformarse sin romperse, bajo una acción mecánica, es también destacable: experimentos de dinámica molecular han mostrado que los nanotubos de carbono poseen módulos de Young (relación entre la tracción o la compresión que se ejerce sobre los nanotubos y la elongación o acortamiento que resulta de ello) excepcionalmente elevados. Aunque estructuralmente relacionados con el grafito, los nanotubos de carbono han mostrado propiedades electrónicas y magnéticas sorprendentes. Estudios teóricos, que recientemente han sido confirmados experimentalmente, han mostrado que los NTCs presentan diferentes características magnéticas y electrónicas dependiendo de su estructura. Su peculiar fluorescencia en la zona del infrarrojo cercano puede utilizarse para fabricar sensores biológicos y para tratar el cáncer. En este sentido, varios grupos han mostrado recientemente que los NTCs pueden penetrar en el interior de las células, sugiriendo su posible uso como vehículos para el transporte de "cargamentos" biológicamente activos [P. Cherukhi, S. M. Bachillo, S. H. Litovsky, R. B. Weisman, J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 15638; N. W. S. Kam, M. O'Connell, J. A. Wisdom, H. J. Dai, Proc. Nati. Acad. Sel. U. S. A. 2005, 102, 11600; N. W. S. Kam, T. C. Jessop, P. A. Wender, J. Dai, J. Am. Chem. Soc.
2004, 126, 15638; N. W. S. Kam, J. Dai, J. Am. Chem. Soc.
2005, 127, 6021; D. Pantarotto, R. Singh, D. McCarthy, M. Erhart, J. P. Briand, M. Prato, K. Kostarelos, A. Bianco,
Angew. Chem. Int. Ed. 2004, 43, 5242] .
Sin embargo, a pesar de su enorme potencialidad, el uso de los NTCs en biología y biomedicina ha sido relativamente escaso hasta la fecha actual. Esto es debido fundamentalmente a la baja solubilidad de los NTCs en la mayoría de los disolventes en general y concretamente en agua, el medio biológico por excelencia.
A pesar de los esfuerzos realizados para entender la estructura, la función y el mecanismo de reconocimiento celular de los hidratos de carbono presentes en las membranas celulares todavía no ha sido descrito un modelo de glicocálix celular con una presentación multivalente de glicolipidos organizados alrededor de nanotubos de carbono.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los autores de la presente invención han encontrado que compuestos de tipo glicolipidico, constituidos por un carbohidrato unido a una cadena policarbonada y polioxigenada que contiene una función diacetilénica, son capaces de autorganizarse en forma de anillos alrededor de nanotubos de carbono, y de formar polímeros estables mediante la acción de irradiación de luz ultravioleta sobre el glicolipido de partida, debido a la presencia de la función diacetilénica . Se forman así lo que se ha denominado agregados glicolipido-nanotubo de carbono. El empleo de estos glicolípidos supone una forma de presentación de los carbohidratos sobre un material nanométrico semiflexible capaz de adaptar su estructura a las moléculas biológicas con las que puede interaccionar, por lo que resultarían muy útiles en biomedicina, tanto como agentes de diagnóstico como terapéuticos.
Esta presentación es mucho más ventajosa que en los sistemas modelo de presentación multivalente de carbohidratos descritos en la técnica. Además, como ventaja adicional, los agregados descritos son solubles en muchos disolventes orgánicos así como en agua. El hecho de que sean solubles en agua permite presentar a los carbohidratos en sus conformaciones naturales. Por otra parte, al encontrase los nanotubos de carbono funcionalizados con los glicolípidos, aquéllos carecen de toxicidad.
Los autores de la invención han conseguido además separar los anillos de glicolípidos polimerizados que rodean los nanotubos, obteniendo así lo que han denominado gliconanosomas (GNS) .
Debido al elevado número de procesos en los que están implicados los carbohidratos de las membranas celulares tanto los agregados de neoglicolípidos-nanotubos de carbono como los gliconanosomas tienen un gran número de aplicaciones en biomedicina.
Así, un primer aspecto de la invención se dirige a un glicolípido de fórmula general I:
Figure imgf000010_0001
I en la que
R es un carbohidrato seleccionado entre mono-, di- y polisacárido;
X es oxigeno, azufre, -CH2- o -NH-; n, m, j y k son números enteros, iguales o diferentes, comprendidos entre 0 y 20; e i es 0 ó 1. Un segundo aspecto de la invención se dirige a un procedimiento para la obtención de un glicolipido de fórmula I, que comprende:
• para la obtención de un compuesto de fórmula I en el que i = 0 :
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula
AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH
donde X y n tienen los significados previamente mencionados, para obtener un compuesto de fórmula general IV AcO-R-X- (CH2) n-NH2 IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados,
(2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3
V donde m tiene el significado previamente mencionado, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(3) reducir el compuesto de fórmula VI con un agente reductor selectivo de la función azida para dar una amina de fórmula VII
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-NH2
VII
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados, (4) hacer reaccionar el compuesto VII con un ácido carboxilico de fórmula general VIII
Figure imgf000012_0001
VIII
donde j y k tienen los significados previamente mencionados, en presencia de un agente deshidratante para rendir un compuesto de fórmula general IX
Figure imgf000012_0002
IX donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(5) hacer reaccionar el compuesto IX con metilato sódico en metanol y posterior purificación del compuesto de fórmula I (i = 0)
Figure imgf000012_0003
I (i = 0) donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados, • para la obtención de un compuesto de fórmula I en el que i = 1 :
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula
AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH
donde X y n tienen los significados previamente mencionados, para obtener un compuesto de fórmula general IV
AcO-R-X- (CH2) n-NH2 IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados,
(2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3
V donde m tiene el significado previamente mencionado, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(3) hacer reaccionar un ácido carboxilico de fórmula general VIII, con propargilamina en un disolvente orgánico en presencia de un agente deshidratante para formar un compuesto de fórmula general X
Figure imgf000014_0001
X
donde j y k tienen los significados previamente mencionados,
(4) acoplar el compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados, con un compuesto de fórmula X, mediante una cicloadicion 1,3-dipolar, para dar un compuesto de fórmula general XI
Ac R^'
Figure imgf000014_0002
donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados, y (5) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula XI con metilato sódico en metanol y posterior purificación para obtener el compuesto de fórmula I (i = 1)
Figure imgf000015_0001
I (i = 1)
donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados .
Otro aspecto de la invención se dirige a un agregado supramolecular que comprende nanotubos de carbono y un compuesto de fórmula (I) como se ha definido previamente. Asimismo, constituye otro aspecto de la invención un procedimiento para la preparación de un agregado supramolecular como se ha definido anteriormente que comprende : a) mezclar una suspensión de nanotubos de carbono con un compuesto de fórmula I, en agua, y sonicar la mezcla durante el tiempo necesario para obtener un agregado formado por nanotubos de carbono alrededor de los cuales se ubica el compuesto de fórmula (I); b) centrifugar la mezcla obtenida en la etapa a) con el fin de eliminar los nanotubos que no presentan compuestos de fórmula I organizados a su alrededor; c) irradiar con luz ultra-violeta la solución obtenida en la etapa b) para polimerizar el compuesto de fórmula (I), de manera que dicho compuesto polimerizado se ubica en forma de anillos alrededor de los nanotubos de carbono; y d) dializar contra agua desionizada la solución obtenida en la etapa c) con el fin de eliminar los glicolipidos y/o las micelas derivadas de los mismos que no se encuentran en contacto con los nanotubos .
En un aspecto adicional la invención se refiere a un agregado supramolecular obtenible según el procedimiento descrito anteriormente.
Otro aspecto de la invención lo constituye un procedimiento para producir un gliconanosoma que comprende retirar los anillos de compuestos de fórmula I polimerizados que rodean los nanotubos obtenidos según el procedimiento anteriormente definido.
En otro aspecto, la invención se dirige a un gliconanosoma obtenible según el procedimiento definido en el párrafo anterior.
La invención se refiere además a un agregado supramolecular como se ha definido anteriormente para su uso como medicamento.
Asimismo, la invención se dirige al uso de un agregado supramolecular como se ha definido anteriormente para la preparación de un medicamento dirigido al tratamiento de enfermedades y/o condiciones que cursan con interacciones mediadas por carbohidratos.
En particular, el uso del agregado supramolecular es para la preparación de un medicamento dirigido al tratamiento de infecciones bacterianas, infecciones virales, procesos inflamatorios, cáncer o disfunciones en la respuesta inmune durante el trasplante de tejidos.
En otro aspecto adicional, la presente invención se dirige a un kit para la determinación del grupo sanguíneo que comprende un agregado supramolecular como se ha definido previamente.
En otro aspecto, la invención se refiere a una vacuna que comprende un agregado supramolecular como se ha definido previamente y un antigeno.
Asimismo, la invención se refiere a un método para la determinación de la presencia en un medio de una sustancia capaz de interaccionar con un carbohidrato, que comprende: a) poner en contacto un agregado supramolecular como se ha definido anteriormente con la sustancia de tal manera que la sustancia se pueda asociar al carbohidrato; y b) determinar si la asociación tiene lugar o no.
Un último aspecto de la invención lo constituye el uso de un gliconanosoma como se ha definido previamente como vector de una molécula biológicamente activa.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1.- Representación esquemática del glicocálix y de los agregados glicolipidos-nanotubos de carbono de la invención .
Figura 2.- Preparación de los gliconanosomas a partir de los agregados glicolipidos-nanotubos de carbono.
Figura 3.- Imagen de Microscopio Electrónico de Transmisión de los NTCs rodeados del glicolipido 1 sin polimerizar.
Figura 4.- Foto de Microscopio Eletectrónico de Transmisión de los NTCs rodeados del glicolipido 1 polimerizado .
Figura 5.- Fotos de las suspensiones acuosas de los agregados : nanotubos de carbono-gl icol ipido 1 s in pol ime r i z a r y n a n o t u b o s d e c a r b o n o-gl icol ipido 1 polimerizado, después de tres meses. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Glicolipidos
En el contexto de la presente invención, el término "glicolipido" o "neoglicolipido" se refiere a un compuesto constituido por un carbohidrato unido covalentemente a una cadena policarbonada y polioxigenada que contiene una función diacetilénica, y que presenta la siguiente fórmula general (I) :
Figure imgf000018_0001
en la que
R es un carbohidrato seleccionado entre mono-, di- y polisacárido; X es oxigeno, azufre, -CH2- o -NH-; n, m, j y k son números enteros, iguales o diferentes, comprendidos entre 0 y 20; e i es 0 ó 1.
Los compuestos de fórmula (I) son fotopolimerizables, es decir, pueden formar polimeros mediante la acción de irradiación de luz ultra-violeta debido a la presencia de los grupos acetilénicos .
Mediante el término carbohidrato se hace referencia en la presente invención a un compuesto orgánico de formula general (CH2O)n, en la cual n está comprendido entre 4 y
40, seleccionado entre monosacáridos , disacáridos y polisacáridos, preferentemente monosacáridos.
No obstante, entre estos compuestos están también incluidos dentro del alcance de la invención derivados de carbohidratos como por ejemplo aquellos carbohidratos que presentan un carbono oxidado a ácido carboxilico y los desoxiazúcares , que son azúcares que presentan uno o más grupos hidroxilo reducidos, estando opcionalmente estos grupos hidroxilo independientemente sustituidos por otros grupos como puede ser un grupo amino o un grupo tioéter. En un aspecto particular, los carbohidratos son los 1- desoxiazúcares, en donde el hidroxilo del carbono anomérico del extremo reductor esta sustituido por otro heteroátomo (S, N), o por un átomo de carbono, con sus correspondientes valencias ocupadas.
En una realización particular los carbohidratos de la invención se seleccionan entre el siguiente grupo: 1- desoxiglucosa, 1-desoxigalactosa, 1-desoxiarabinosa, 1- desoximanosa, 1-desoxi-N-acetil-galactosamina, 1- desoxixilosa, 1-desoximaltosa, 1-desoxilactosa, 1-desoxi-N- acetil-galactosamina-β-1, 3-galactosa, más preferentemente 1-desoxigalactosa, 1-desoxiglucosa, 1-desoximanosa y 1- desoxilactosa . En otra realización particular el sacárido existe en forma acetálica. En otra realización particular, el grupo OH puede estar o no protegido como éster o como éter.
Una realización preferente de la invención lo constituye un compuesto de fórmula (I) en el cual X es un átomo de azufre dando lugar al compuesto de fórmula general Ia:
Figure imgf000019_0001
Ia donde n, m, j y k son números enteros, iguales o diferentes, comprendidos entre 0 y 20; e i es 0 ó 1. En una realización particular, n está comprendido entre 1 y 10 , pref erentemente entre 1 y 5 , más preferentemente es 2.
En otra realización particular, m está comprendido entre 1 y 10 , pref erentemente entre 1 y 5 , más preferentemente es 2.
En otra realización particular, j está comprendido entre 1 y 10 , preferentemente entre 5 y 10 , más preferentemente es 6.
En otra realización particular, k está comprendido entre 1 y 15 , preferentemente entre 5 y 15 , más preferentemente es 9.
En una realización aún más preferente, n es 2, m es 2, j es 6 y k es 9, dando lugar al compuesto de formula general Ia' :
Figure imgf000020_0001
Ia'
donde i es 0 ó 1. Una realización aún más preferente de la invención lo constituye el compuesto de fórmula (Ia') en el que i es igual a 0 y R es 1-desoxilactosa, dando lugar al compuesto de fórmula Ia' (1) :
Figure imgf000021_0001
Ia ' (1)
Otra realización aún más preferente de la invención lo constituye el compuesto de fórmula (Ia') en el que i es igual a 1 y R es 1-desoxilactosa, dando lugar al compuesto de fórmula Ia' (2) :
Figure imgf000021_0002
Ia' (2)
Otra realización aún más preferente de la invención lo constituye el compuesto de fórmula (Ia') en el que i es igual a 1 y R es 1-desoxiglucosa, dando lugar al compuesto de fórmula Ia' (3) :
Figure imgf000021_0003
Ia' (3)
Otra realización aún más preferente de la invención lo constituye el compuesto de fórmula (Ia') en el que i es igual a 1 y R es 1-desoxigalactosa, dando lugar al compuesto de fórmula Ia' (4) :
Figure imgf000022_0001
Ia' (4)
Otra realización aún más preferente de la invención lo constituye el compuesto de fórmula (Ia') en el que i es igual a 1 y R es 1-desoximanosa, dando lugar al compuesto de fórmula Ia' (5) :
Figure imgf000022_0002
Ia' (5)
Constituye un segundo aspecto de la presente invención un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) , en adelante procedimiento de preparación de glicolipidos de la invención, que comprende las siguientes etapas : • para la obtención de un compuesto de fórmula I en el que i = 0 :
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH
donde X y n tienen los significados previamente mencionados, para obtener un compuesto de fórmula general IV
AcO-R-X- (CH2) n-NH2
IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados,
(2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3
V donde m tiene el significado previamente mencionado, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados, (3) reducir el compuesto de fórmula VI con un agente reductor selectivo de la función azida para dar una amina de fórmula VII
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-NH2
VII
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(4) hacer reaccionar el compuesto VII con un ácido carboxilico de fórmula general VIII
Figure imgf000024_0001
VIII
donde j y k tienen los significados previamente mencionados, en presencia de un agente deshidratante para rendir un compuesto de fórmula general IX
Figure imgf000024_0002
IX donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(5) hacer reaccionar el compuesto IX con metilato sódico en metanol y posterior purificación del compuesto de fórmula I (i = 0)
Figure imgf000025_0001
I (i = 0) donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados,
• para la obtención de un compuesto de fórmula I en el que i = 1 :
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula
AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH
donde X y n tienen los significados previamente mencionados, para obtener un compuesto de fórmula general IV
AcO-R-X- (CH2) n-NH2 IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados, (2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3 V donde m tiene el significado previamente mencionado, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados,
(3) hacer reaccionar un ácido carboxilico de fórmula general VIII, con propargilamina en un disolvente orgánico en presencia de un agente deshidratante para formar un compuesto de fórmula general X
Figure imgf000026_0001
donde j y k tienen los significados previamente mencionados,
(4) acoplar el compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3 VI donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados, con un compuesto de fórmula X, mediante una cicloadicion 1,3-dipolar, para dar un compuesto de fórmula general XI
Figure imgf000027_0001
XI
donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados, y
(5) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula XI con metilato sódico en metanol y posterior purificación para obtener el compuesto de fórmula I (i = 1)
Figure imgf000027_0002
I (i = i)
donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados.
Como agente deshidratante se puede utilizar cualquier agente deshidratante conocido por un experto en el estado de la técnica, no obstante se prefiere el uso de tetrafluoroborato de O- (benzotriazol-1-il) -N, N, N ' , N ' - tetrametiluronio (TBTU) .
Por su parte, como agente reductor se puede emplear cualquier compuesto que permita reducir un grupo azida a un grupo amina. En un aspecto particular, se prefiere el uso de trifenilfosfina (PPh3)
Como disolventes orgánicos se prefiere el uso de CH2C12, DMSO, DMF o THF.
Agregados glicolipido-nanotubo de carbono
Por el término "agregado supramolecular" se entiende en la presente invención una estructura formada por un nanotubo de carbono alrededor del cual se ubican en forma de anillos, glicolipidos de fórmula (I) polimerizados . El nanotubo y el glicolipido se encuentran unidos de manera especifica no covalente mediante una interacción hidrófoba.
Este agregado nanométrico es un biomaterial estable útil como modelo de presentación multivalente de carbohidratos. En la Figura 1 se muestra una representación esquemática de los agregados de la invención.
En una realización particular el nanotubo de carbono del agregado supramolecular de la invención se selecciona entre nanotubo monocapa o multicapa y tiene estructura "zig-zag", "quiral" o "sillón".
Otro aspecto de la invención lo constituye el procedimiento de obtención del agregado supramolecular de la invención que comprende las siguientes etapas: a) mezclar una suspensión de nanotubos de carbono con un compuesto de fórmula I, en agua, y sonicar la mezcla durante el tiempo necesario hasta que el compuesto de fórmula (I) se ubica alrededor de los nanotubos de carbono formando un agregado; b) centrifugar la mezcla obtenida en la etapa a) con el fin de eliminar los nanotubos que no presentan compuestos de fórmula I organizados a su alrededor; c) irradiar con luz ultravioleta la solución obtenida en la etapa b) para polimerizar el compuesto de fórmula (I), de manera que dicho compuesto polimerizado se ubica en forma de anillos alrededor de los nanotubos de carbono; y d) dializar contra agua desionizada la solución obtenida en la etapa c) con el fin de eliminar los glicolipidos y o las micelas derivadas de los mismos que no se encuentran en contacto con los nanotubos .
Para la realización de la etapa a) no es necesario el empleo de disolución tampón ni la adición de detergentes. Por otra parte, para establecer el tiempo necesario de sonicación, se puede observar si se ha llevado a cabo la solubilización de los nanotubos de carbono en agua, indicativo de la formación de agregados estables, si no ocurriese esto, los nanotubos de carbono terminarían precipitando. En una realización preferente, dicho tiempo de sonicación está alrededor de 30 minutos. Durante esta etapa, los glicolipidos se preorganizan en una forma hemimicelar alrededor de los tubos de carbono. La etapa de centrifugación se puede realizar por cualquier técnica de centrifugación conocido en la técnica.
Por su parte, la etapa c) de polimerización de los glicolipidos supone la irradiación sobre los mismos de luz ultravioleta durante el tiempo necesario para permitir la polimerización de dichos glicolipidos. En una realización preferente, el tiempo necesario para polimerizar el glicolipido con luz ultravioleta se encuentra entorno a las
12 horas. Esta etapa de polimerización provoca que los glicolipidos que se encontraban preorganizadas en forma hemimicelar alrededor del nanotubo, se polimericen organizándose en forma de anillos alrededor del mismo.
Tal como se muestra en el ejemplo 18, la polimerización de los glicolipdos ha permitido obtener agregados muy estables, cuya estructura permanece durante al menos 3 meses.
Gliconanosomas En el contexto de la presente invención, por el término "gliconanosama" se entiende una estructura en forma de anillo constituida por glicolipidos de fórmula (I) polimerizados, obtenida a p a r t i r de l a g r e g a do supramolecular glicolipido-nanotubo de carbono mediante la separación del nanotubo de carbono. El gliconanosoma es hidrófobo en su cavidad interna e hidrofilico en su parte externa .
En la Figura 2 se muestra un esquema de la preparación de los gl iconanosomas a partir de los agregados glicolipido-nanotubo de carbono.
La separación o proceso de deslizar los anillos de glicolipidos polimerizados fuera del nanotubo de carbono puede llevarse a cabo por diferentes métodos del estado de la técnica. Por ejemplo, cuando los carbohidratos de la cadena glicolipidica están cargados se aplica un campo eléctrico, utilizando como técnica de separación la electroforesis.
Los gliconanosomas obtenidos constituyen un nuevo modelo de glicocálix con una presentación multivalente de carbohidratos que presentan ventajas biológicas importantes para su aplicación en biomedicina.
Usos de los agregados y los gliconanosomas
Otro aspecto de la invención lo constituye la aplicación biológica de los agregados nanotubos de carbono- glicolipidos y de los gliconanosomas, como resultado de la presentación multivalente de los hidratos de carbono en su capa externa, así como aquellas derivadas de sus características estructurales.
En lo relacionado con las primeras de estas actividades, constituye un aspecto de esta invención el uso de los agregados supramoleculares en la preparación de un medicamento. Dichos agregados sirven como agentes terapéuticos y de diagnóstico en procesos relacionados con interacciones mediadas por carbohidratos.
En la literatura están descritas varias interacciones mediadas por carbohidratos cuyo estudio y modulación podría llevarse a cabo mediante los agregados descritos en esta invención. Entre estas interacciones se encuentran: la adhesión de los leucocitos a las células endoteliales, la interacción carbohidratos-anticuerpo, interacción carbohidrato-proteína de la cual resulta una infección bacteria o vírica, el reconocimiento inmunológico de las células tumorales, adhesión de las células tumorales a las células endoteliales en los procesos de metástasis de cáncer e interacciones que conllevan el rechazo de un tejido trasplantado.
Por lo tanto, en un aspecto adicional la presente invención se dirige al uso de un agregado supramolecular nanotubo de carbono-gl i co 1 i pi do como se ha definido previamente para la preparación de un medicamento dirigido al tratamiento de enfermedades y/o condiciones que cursan con interacciones mediadas por carbohidratos. En una realización preferida de la invención, dado que el agregado supramolecular puede presentar múltiples copias de carbohidrato, se pueden tratar enfermedades que cursan con interacciones multivalentes .
En un aspecto particular de la invención, la enfermedad y/o condición se selecciona entre infecciones bacterianas, infecciones virales, procesos inflamatorios, cáncer y disfunciones en la respuesta inmune durante el trasplante de tejidos.
Por lo que se refiere al tratamiento de infecciones bacterianas, los agregados supramoleculares de la presente invención suponen una nueva familia de antibióticos de nueva generación. Es conocido en la literatura que la amplia y creciente resistencia de las bacterias a los antibióticos constituye una de las problemáticas sanitarias más serias y global. Debido a que la interacción o la infección de la bacteria a las células sanas empieza mediante una interacción con los carbohidratos de la membrana celular, el bloqueo o la inhibición de esta interacción por parte de los agregados de la invención permitirla el bloqueo de la actividad bacteriana. Por otra parte, debido a que esta interacción tiene lugar en la superficie de las bacterias, difícilmente estas podrían desarrollar una resistencia contra una terapia antiadhesiva basada en los hidratos de carbono.
Un ejemplo de infección bacteriana mediada por carbohidratos es la infección producida por la bacteria Helicobacter pylori responsable de las gastritis crónica aguda, la úlcera gástrica y duodenal, la aparición del adenocarcinoma gástrico y del linfoma de la mucosa-asociada al tejido linfoide en humanos. Teniendo en cuenta que la adhesión de la H. pylori a las células sanas tiene lugar mediante una interacción multivalente con carbohidratos de tipo antigeno Lewisb, de oligosacáridos sililados y de los oligosacáridos sulfatados de la glicoproteina mucina, el empleo de agregados supramoleculares en los cuales el glicolipido contenga los oligosacáridos capaces de bloquear estas interacciones adhesivas, permitirla tratar los desordenes mencionados. Por otra parte, ejemplos de infecciones virales mediadas por hidratos de carbono incluyen el virus de la gripe (influenza) que infecta las células a través de interacciones muí t i valentes de la hemaglut inina de la superficie viral con el ácido siálico terminal de los glicoconj ugados del huésped. Asi la inhibición de estas interacciones puede impedir la infección gripal.
La infección del virus del SIDA constituye otro ejemplo de infección viral implicando carbohidratos. El HIV-I infecta las células sanas mediante la interacción con la galactosilceramida (GalCer) del huésped con la proteina gp 120 del virus. Asi una presentación multivalente de un análogo de la GalCer sobre los nanotubos de carbono podria inhibir la interacción celular GalCer y el HIV-I. Otra aplicación de los agregados supramoleculares de la presente invención, consiste en modular el proceso de inflamación. En particular, los miembros de la familia de las selectinas participan en los procesos iniciales de adhesión de los leucocitos a las células endoteliales durante el proceso de inflamación. Una vez que se produce la inflamación, los neutrófilos transportados se adhieren a la superficie celular del endotelio y empiezan a rodar lentamente. Este movimiento se produce por interacción entre selectinas E y P de la superficie celular de las células endoteliales y glicoproteinas que llevan sialil-Lex presentes en el neutrófilo. Por lo tanto, el bloqueo de dichas interacciones por parte de los agregados de la invención permitirla modular el proceso de inflamación.
Datos recogidos en la literatura dirigidos hacia el uso de la selectinas como diana terapéutica han puesto de manifiesto que las tres familias de selectinas conocidas reconocen, auque con baja afinidad, al te t rasacár ido sialil-Lewis X (SLex) , ya sea sialilado o fucosilado. Las aproximaciones desarrolladas en la literatura adolecen de una baja afinidad en la interacción selectina-SLex y de que las interacciones de las células que expresan selectinas son polivalentes. En este sentido, la presente invención que propone una presentación polivalente de carbohidratos, constituye una excelente solución para el tratamiento de las inflamaciones mediante la presentación multivalente y controlada de los ligandos de las selectinas.
Como aplicación adicional, los agregados de la presente invención resultan de interés para el control de la repuesta inmune, como por ejemplo en los procesos de transplantes. Como el reconocimiento inmunológico de un tejido se inicia por la interacción de los carbohidratos presentes en el tejido transplantado y de los componentes del sistema inmune del huésped como los anticuerpos, esta interacción podria constituir una buena diana para mejorar la respuesta inmunológica del huésped. A titulo de ejemplo, se ha comprobado que el oligosacáridos Galαl-3Galβl-4GlcNac (llamado epitopo αGal) constituye un epitopo antigénico importante en el proceso de rechazo de tejidos trasplantados. Asi la intervención o el control de la interacción del epitopo αGal con el sistema inmune del huésped puede constituir una buena diana terapéutica y mejorar asi el transplante de tejidos. Una aplicación alternativa es el tratamiento del cáncer, debido a que muchos antigenos de tumores y muchos factores autocrinos de tumores están basados sobre carbohidratos. En este contexto, los agregados neoglicolipidos-nanotubos de carbono pueden funcionar como vacunas induciendo al sistema inmune a producir anticuerpos capaces de atacar los carbohidratos presentes a la superficie de las células cancerosas. En este sentido, esta recogido en la literatura que las células cancerosas se caracterizan por la síntesis de un gran número de carbohidratos aberrantes en su superficie, que pueden servir para el desarrollo de un mecanismo para la activación del sistema inmune contra las mismas células cancerosas. Otra aplicación de los agregados en el tratamiento del cáncer consiste en inhibir su metástasis, por ej . inhibiendo la migración de las células tumorales a través de las células endoteliales .
En un aspecto adicional, la presente invención se dirige al uso de los agregados supramoleculares nanotubo de carbono-gl i co 1 ip i do s para la determinación del grupo sanguíneo en un individuo. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un kit para la determinación del grupo sanguíneo en un individuo que comprende un agregado supramolecular nanotubo de carbono-glicolípidos como se ha definido en la presente memoria descriptiva.
En otro aspecto adicional, la invención hace referencia a una vacuna que comprende el agregado supramolecular nanotubo de carbono-gl i co 1 ip i do y un antígeno. El ligando que queda asociado al agregado actúa de antígeno.
Una aplicación adicional de los agregados de la invención es para la catálisis en la síntesis de anticuerpos por un organismo huésped. Lo cual es de suma importancia dado que los carbohidratos carecen por lo general de poder antigénico.
Los agregados supramoleculares de la presente invención también pueden ser utilizados para la determinación de la presencia en un medio de una sustancia capaz de interaccionar con un carbohidrato. En este sentido el método para la determinación de la presencia de dicha sustancia consiste en: (i) poner en contacto el agregado y la sustancia de tal manera que se pueda producir la asociación entre ambos y (ii) determinar si la asociación ha tenido o no lugar. A este método se puede implementar una etapa de correlacionar la presencia o ausencia de asociación con el diagnóstico de un estado patológico provocado por la sustancia.
Un ejemplo de utilización de los agregados de la presente invención como sistema de determinación de sustancias es la detección de los anticuerpos anti carbohidratos . Otra posible aplicación de los agregados de esta invención es la detección de una especie cuando reconoce uno de los epitopos presente en los agregados. Los lipidos poliméricos en los agregados glicolipidos-nanotubo de carbono asi como en los g 1 i co nano s orna s tienen la característica de cambiar de color bajo una acción mecánica (mecanocromismo) , o térmica (termocromismo) o cualquier otro estrés exterior. Esta característica puede aplicarse para utilizar estos agregados con fines de diagnóstico.
A modo de ejemplo, la contaminación alimenticia por la bacteria enterohemorrágica Escherichia coli es una de las causa más frecuente en los estallidos de infecciones bacterianas con serias consecuencias para la salud humana. Por otra parte los métodos de detección y de control de los alimentos en la actualidad se caracterizan por su lentitud y baja eficacia. Teniendo en cuenta que la infección de la bacteria E coli tiene lugar tras una interacción multivalente de la misma con mañosas en la superficie celular, los agregados de esta invención constituyen una excelente herramienta para su detección. Por otra parte, debido al incremento producido en el amplio espectro de resistencia de ciertos patógenos a los medicamentos, existe actualmente el temor a que el tiempo transcurrido desde el momento en que un agente infeccioso ha sido detectado hasta la determinación de su perfil de multirresistencia, ya es demasiado tarde para el paciente. Como para todas las enfermedades graves -incluyendo el cáncer y el ataque al corazón- un diagnóstico temprano constituye la llave que decide muchas veces entre la vida o la muerte.
Muchos patógenos y toxinas comienzan sus ataques a las células sanas a través de un reconocimiento proteina- carbohidratos . Teniendo una plétora de agregados con diferentes carbohidratos específicos para cada patógeno y cada toxina, se dispone de una herramienta muy eficiente para un diagnóstico rápido de las citadas infecciones.
Otras aplicaciones importantes de la presente invención son aquellas derivadas de la estructura de los gl iconanosomas . Como se ha indicado anteriormente, las estructuras en forma de anillo formadas por glicolipidos polimerizados en la superficie del nanotubo de carbono y separadas posteriormente de dichos nanotubos, son hidrófobas en su cavidad interna e hidrófila en su parte externa. Constituyen por lo tanto vehículos interesantes para la s o lub i 1 i z aci ón y el transporte de moléculas biológicamente activas, hidrófobas no hidrosolubles en medio acuoso. Teniendo en cuenta la presencia de gl icoligandos en su superficie, se puede por lo tanto transportar selectivamente las moléculas hidrófobas hacia aquellas células o tejidos que poseen en su superficie los receptores adecuados de dichos glicoligandos . Por tanto, en un aspecto adicional la presente invención se dirige al uso de un gliconanosoma como el definido anteriormente como vector para el transporte inteligente de moléculas biológicamente activas.
El término "molécula biológicamente activa" se refiere a cualquier sustancia que se utiliza en el tratamiento, cura, prevención o diagnóstico de una enfermedad o que se utiliza para mejorar el bienestar fisico y mental de seres humanos y animales. Según la presente invención, dichas moléculas tendrán un marcado carácter hidrófobo. Estas moléculas pueden incluir polisacáridos, proteínas, péptidos, lipidos, ol igonucleót idos , polinucleót idos , ácidos nucleicos y mezclas de los mismos.
Otra posible aplicación de los gliconanosomas es su uso para la solubilización y estabilización de proteínas membranarias . Utilizando neoglicolipidos de tamaño adecuado se pueden generar gliconanosomas con estructuras semejantes a una bicapa lipidica capaces de emular la membrana celular. En presencia de los gliconanosomas la parte hidrófoba de las proteínas membranarias se introduce en su cavidad hidrófoba. El complejo gliconanosoma / proteina membranaria se solubiliza en agua sin necesidad de detergentes que pueden dañar o alterar la estructura activa de la proteina.
EJEMPLOS DE LA INVENCIÓN Abreviaturas :
BOC: terc-butoxicarbonil ccf : cromatografía en capa fina
DIPEA: diisopropiletilamina DMAP: 4-dimetilaminopiridina
DMF: dimetilformamida
THF: tetrahidrofurano
TBTU: tetrafluoroborato de 0- (benzotriazol-1-il) -
N, N, N ' , N ' -tetrametiluronio
Métodos generales
El seguimiento de las reacciones se ha llevado a cabo por cromatografía en capa fina, empleando cromatoplacas de gel de sílice soportada sobre aluminio Alugram®Sil . G/V245 Merck de 0.25 mm de espesor. El análisis de las placas se ha llevado a cabo en una lámpara de UV de λ=254 nm mediante revelado con ácido fosfomolíbdico, ácido sulfúrico o vainillina.
Los disolventes anhidros empleados en las reacciones han sido secados según el procedimiento descrito en la bibliografía. El tetrahidrofurano (THF) y el dietil éter
(Et2O) fueron destilados bajo argón sobre sodio/benzofenona y el diclorometano (CH2CI2) sobre CaH2.
La purificación y separación de los compuestos obtenidos se ha llevado a cabo generalmente en columna cromatográfica bajo presión, utilizando como fase estacionaria gel de sílice Merck 60 A (tamaño de poro 40-63 μm) . En cada caso se indica el eluyente empleado.
Los poderes rotatorios [α] D se han determinado a temperatura ambiente, utilizando una celda de 10 cm de longitud. El polarímetro utilizado es Perkin Elmer 341MC, y se ha empleado la línea D del sodio (λ=589 nm) . Los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (1H-RMN y 13C-RMN) se han registrado en los espectrómetros Bruker DRX-300 (300 MHz), DPX-400 (400 MHz) y DRX-500 (500 MHz), empleando como disolvente CDCI3 si no se indica lo contrario. En cada caso se indican los desplazamientos químicos (δ) en la escala de ppm (usando TMS como referencia) , el número de protones (calculados por integración) , el valor de las constantes de acoplamiento J (Hz) y la asignación estructural de las señales. Las abreviaturas empleadas para indicar la multiplicidad de las señales son: s (singlete) , d (doblete), t (triplete) , dd (doble doblete) , m (multiplete) , sa (singlete ancho) .
Los espectros de masas (EM) fueron realizados por el Servicio de Espectrometría de Masas de la Universidad de Sevilla en un espectrómetro Kratos MS-80-RFA y en un espectrómetro de masas Micromass modelo AutoSpec.
Los estudios de microscopía electrónica han sido realizados en la Universidad Louis Pasteur de Estrasburgo y en el Centro de Investigación, Tecnología e Innovación
(CITIUS) de la Universidad de Sevilla, utilizando un microscopio electrónico de transmisión (PHILIPS CM-200) .
EJEMPLO 1 (2-Aminoetil)-2,2^ ,3,3' , A' , 6, 6' -hepta-O-acetil-l-tio-β- lactósido (IV-A)
Figure imgf000040_0001
A una disolución de octaacetato de lactosa (2 mmol, 1.35 g) en CH2CI2 anhidro (10 mL) , bajo atmósfera de argón y con agitación, se le añadió el W-BOC-cisteamina (500 μL, 2.96 mmol) y BF3-Et2O (700 μL, 3.90 mmol) . La reacción se calentó a reflujo a 700C durante 24 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, y el crudo obtenido se purificó mediante cromatografía en columna usando CH2Cl2ZMeOH (9:1), obteniéndose IV-A con un 73% (1.12 g) de rendimiento.
Sólido. Rf = 0.38 (CH2Cl2/Me0H 9:1); [α]D = +11.56 (c 0.4, CHCl3); 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 6.65 (sa, H, NH2), 5.30 (d, 1 H, J4 ,3 = 2.7 Hz, H- 4 ' ) , 5.16 (t, 1 H, J2, 3 = 9.17 Hz, H-2), 5.05 (t, 1 H, J2, 3 = 10.0 Hz, H-2 ' ) , 4.92 (dd, 1 H, J3, 2 = 10.0 Hz , J3, 4 = 3.4 Hz, H-3'), 4.88 (t, IH, J3, 2 = 9.7 Hz, H-3) , 4.54 (d, 1 H, J6a,6b = 12 Hz, H-6a), 4.53 (d, 1 H, J1, 2 = 6.3 Hz, H-I'), 4.50 (d, 1 H, J1, 2 = 10.0 Hz, H-I), 4.07 (m, 3 H, H-6b, H-6'), 3.85 (t, 1 H, J5, 6 = 6.6 Hz, H-5'), 3.77 (t, 1 H, J4, 3 = 9.5 Hz, H-4), 3.63 (m, 1 H, H-5) , 3.40 (m, 2 H, CHzNH2), 2.90 (dt, 1 H, 2JsCHCH = 13.6 Hz, 3JSCHCH2 = 5.5 Hz, SCH), 2.77 (dt, 1 H, 2JsCHCH = 13.6 Hz, 3J3CH CH2 = 5.8 Hz, SCH') , 2.1 (s, 3 H, CH3CO), 2.09 (s, 3 H, CH3CO), 2.02 (s, 3 H, CH3CO), 2.01 (2 s, 6 H, CH3CO), 2.00 (s, 3 H, CH3CO), 1.92 (s, 3 H, CH3CO) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ [ppm] 170.5-169.0 (7 CO) ,
101.0 (Cl ' ) , 83.8 (Cl) , 77.0 (C5) , 75.9 (C4) , 73.6 (C2) ,
70.9 (C3' ) , 70.7 (C5' ) , 70.1 (C3) , 69.1 (C2' ) , 66.6 (C4' ) , 61.9 (C6) , 60.8 (C6' ) , 41.4 (CNH3 +) , 33.2 (SCH2) , 20.9-20.4
(7 CH3) .
EMAR para C28H4iNOi7SNa : calculado 718.199291 [M+Na] , encontrado 718.198562 (1.0 ppm) .
(2-Aminoetil) -2 ,3, 4 , 6-tetra-O-acetil-l-tio-β-D-gluco- piranósido (IV-B)
Figure imgf000041_0001
A una disolución de pentaacetato de glucosa (2 mmol, 783 mg) en CH2Cl2 anhidro (10 mL) , bajo atmósfera de argón y con agitación, se le añade W-BOC-cisteamina (500 μL, 2.96 mmol) y BF3-Et2O (700 μL, 3.90 mmol), se calienta la reacción a reflujo a 700C durante 24 horas, siguiendo la reacción por cromatografia en capa fina. Se concentra el crudo de reacción y se purifica mediante cromatografia en columna usando CH2Cl2 /MeOH (9:1), obteniéndose IV-B con un 92% (879 mg) de rendimiento.
Sólido. Rf = 0.30 (CH2Cl2/Me0H 9:1); [α]D = +16.06 (c 1.0, CHCl3) ; 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 6.58 (sa, 2 H, NH2) , 5.23 (t, 1 H, J4, 3 = 9.4 Hz, H-4) , 5.13 (t, 1 H, J2, 3 = 9.7 Hz, H-2) , 5.01 (t, IH, J3, 4 = 9.6 Hz , H-3) , 4.64 (d, 1 H, Ji, 2 = 10.1 Hz, H-I) , 4.38 (d, 1 H, J6a,6b = 11.9 Hz, H-6a) , 4.12 (dd, 1 H, J6b,6a = 12.7 Hz, J6b,5 = 3.9 Hz, H-6b) , 3.88 (d, 1 H, J5, 6b = 9.3 Hz, H-5) , 3.4-3.3 (2 m, 2 H, CH2NH2) , 3.16 (m, 1 H, SCH) , 2.95 (m, 1 H, SCH) , 2.10-2.0 (4 s, 12 H, 4 CH3) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 171.9-169.6 (4 CO) , 83.7 (Cl) , 76.0 (C5) , 73.5 (C3) , 69.4 (C4) , 67.9 (C2) , 61.7 (C6) , 41.3 (CH2NH2) , 28.2 (SCH2) , 20.7-20.6 (4 CH3) . EMAR pa ra Ci6H25NO9SNa: calculado 430.114773 [M+Na] , encontrado 430.113567 (2.8 ppm) .
(2-Aminoetil) -2,3,4, 6-tetra-O-acetil-l-tio-β-D- galactopiranósido (IV-C)
Figure imgf000042_0001
A una disolución de pentaacetao de galactosa (2 mmol, 783 mg) en CH2Cl2 anhidro (10 mL) , bajo atmósfera de argón y con agitación, se le añade W-BOC-cisteamina (500 μL, 2.96 mmol) y BF3-Et2O (700 μL, 3.90 mmol), se calienta la reacción a reflujo a 700C durante 24 horas. El disolvente se elimina por presión reducida y el crudo de reacción obtenido se purifica mediante cromatografia en columna usando CH2Cl2/Me0H (9:1), obteniéndose IV-C con un 93% (883 mg) de rendimiento.
Sólido. Rf = 0.39 (CH2Cl2MeOH 9:1) ; [α]D = +7.56 (c 0.4, CHCl3); 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 6.58 (sa, 2 H, NH2) , 5.45 (d, 1 H, J4, 3 = 3.0 Hz, H-4) , 5.22 (t, 1 H, J2, 3 = 10.0 Hz, H-2) , 5.07 (dd, 1 H, J3, 2 = 10.0 Hz, J3, 4 = 3.1 Hz, H- 3) , 4.59 (d, 1 H, J1, 2 = 10.0 Hz , H-I) , 4.25 (m, 1 H, H- 6a) , 4.08 (m, 2 H, H-5, H-6b) , 3.37 (m, 2 H, CH2NH2) , 3.19 (m, 1 H, SCH) , 2.95 (m, 1 H, SCH' ) , 2.17-2.0 (4 s, 12 H, 4 CH3) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ [ppm] 171.5-169.9 (4 CO) , 83.8 (Cl) , 75.0 (C5) , 71.6 (C3) , 67.2 (C4) , 66.5 (C2) , 61.5 (C6) , 40.9 (CH2NH2) , 27.9 (SCH2) , 20.7-20.5 (4 CH3) .
EMAR pa ra Ci6H25NO9SNa: calculado 430.114773 [M+Na] , encontrado 430.114188 (1.4 ppm) .
EJEMPLO 2 Síntesis del espaciador (V-A)
Metanosulfonato de ll-hidroxi-3 , 6 , 9-trioxaundecanilo
OMs
Se adiciona gota a gota cloruro de mesilo (3.87 mL, 50.0 mmol) sobre una solución de tetraetilenglicol (22.66 mL, 140 mmol) a 00C en THF anhidro (100 mL) y NEt3 anhidra (15 mL) . Una vez terminada la adición se lleva a temperatura ambiente y se deja toda la noche. El disolvente se evapora a presión reducida el crudo del producto obtenido se pone en la reacción siguiente sin purificar.
ll-Azido-3 , 6 , 9-trioxaundecanol Se disuelve el crudo obtenido en el paso anterior en
EtOH (10OmL), se le añade azida sódica, (6.50 g, 100 mmol) y se calienta a reflujo durante toda la noche. Se elimina el disolvente a presión reducida y se purifica el crudo obtenido mediante cromatografía en columna usando como eluyentes AcOEt/Hex (1:1) , Rf = 0.18 obteniendo 7.48 g
(Rto. 30%) del producto deseado cuyas características físicas corresponden al producto descrito en la literatura.
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 3.58 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 4.8 Hz, HOCH2CH2) , 3.53 (m, 10 H, 5 CH2O) , 3.46 (t, 2 H, 3JCH2CH2N3 = 4.8 Hz, OCHsCH2N3) , 3.26 (t, 2 H, 3JCH2CH2N3 = 4.8 Hz, CH2CH2N3) , 3.1 (sa, 1 H, OH) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 72.5 (HOCCO) , 70.6- 69.9 (CO) , 61.5 (COH) , 50.5 (CN3) .
Ácido ll-azido-3,6,9-trioxaundecanoico (V-A)
Figure imgf000044_0001
A una disolución de 13 (1.17 g, 5.33 mmol) en acetona (100 mL) se le añade el reactivo de Jones (16 mL) a temperatura ambiente y se deja agitar durante toda la noche. Al dia siguiente se observa un precipitado verde, que corresponde al óxido de cromo (IV) . Cuando la reacción ha terminado se le añade isopropanol (15 mL) , para neutralizar el exceso del reactivo de Jones, y se deja agitar una hora. Luego se añade carbón activo para eliminar las sustancias coloreadas y Na2SO4. A las 2 horas se filtra con celita y se evapora el disolvente a vacio. Obtenemos el compuesto V-A con un rendimiento cuantitativo. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 8.70 (sa, 1 H, HOOC) , 4.01 (m, 1 H, HOOCCH2) , 3.60 (m, 10 H, HOCH2) , 3.29 (m, 2 H, CH2ON3) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.5 (CO) , 70.9 (HOOCCH2) , 70.4-70.2 (4 CH2O) , 68.3 (OCH2CH2N3) , 50.5 (CN3) .
EJEMPLO 3
[14-Azido-4-oxo-6,9,12-trioxa-3-azatetradecanil] 2, 2^ ,3, 3^ ,4^ ,6,6^-hepta-O-acetil-l-tio-β-lactósido (VI-A)
Figure imgf000045_0001
A una disolución del compuesto IV-A (68 mg, 0.29 mmol), TBTU (93 mg, 0.29 mmol) y DIPEA (70 μL, 0.43 mmol) en DMF anhidra (0.5 mL) , bajo atmósfera de argón y agitación a temperatura ambiente, se añade a los 5 minutos una disolución del compuesto V-A (223 mg, 0.29 mmol) y DIPEA (70 μL, 0.43 mmol) en DMF anhidra (1 mL) . Se deja agitar la reacción a temperatura ambiente durante una noche. La reacción se sigue por cromatografía en capa fina, una vez terminada la reacción, se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCO3 (20 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2Cl2 (2 x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatografía en columna usando como mezcla de eluyentes CH2Cl2/Me0H (20:1), obteniéndose VI-A con un rendimiento del 85% (225 mg) . Aceite de color amarillo. Rf = 0.21 (CH2Cl2/Me0H 20:1) ; [α]D = -7.66 (c 0.85, CHCl3) ;
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.20 (t, 3JCH2NH = 1.1
Hz, NHCO) , 5.33 (d, 1 H, J4 , 3 = 2.4 Hz, H-4 ' ) , 5.18 (t, 1 H, J2, 3 = 9.2 Hz, H-2) , 5.08 (t, 1 H, J2 ,3 = 10.0 Hz, H-2 ' ) ,
4.93 (m, 2 H, H-3' , H-3) , 4.50 (m, 3 H, H-I, H-I' , H-6a) ,
4.1 (m, 3 H, H-6b, 6' ) , 3.98 (s, 2 H, COCH2O) , 3.85 (t, 1
H, J5 ,6 = 6.8 Hz, H-5' ) , 3.77 (t, 1 H, J4, 3 = 9.5 Hz, H-4) ,
3.68 (s, 11 H, 5 CH2O, H-5) , 3.50 (m, 2 H, CH2NH) , 3.38 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 4.9 Hz, CH2N3) , 2.88 (m, 1 H, SCH) , 2.70 (m,
1 H, SCH' ) , 2.1-1.9 (7 s, 7 CH3CO) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 170.4-169.1 (8 CO) ,
101.1 (Cl' ) , 83.7 (Cl) , 77.0 (C5) , 76.8 (C4) , 73.9 (C2) ,
71.0 (C3' ) , 70.7-70.3 (C5' , C3, 5 CH2O, COCH2) , 69.1 (C2 ' ) , 66. 6 (C4 ' ) , 62.1 (C6) , 60.8 (C6 ' ) , 50.6 (CN3) , 38.9
(CH2NH) , 30.3 (SCH2) , 20.8-20.4 (7 CH3) .
EMAR para C36H54N4O2ISNa : calculado 933.289897 [M+Na]+, encontrado 933.285373 (4.8 ppm) .
EJEMPLO 4
[14-Amino-4-oxo-6,9,12-trioxa-3-azatetradecanil] 2, 2' , 3, 3' , 4' ,6,6'-hepta-Q-acetil-l-tio-β-lactósido (VII-A)
Figure imgf000046_0001
A una disolución de compuesto VI-A (103 mg, 0.113 mmol) en CH2Cl2 anhidro (3 mL) , se le añade Ph3P (32.6 mg, 0.124 mmol) y se dej a agitar 24 horas a temperatura ambiente . Se le añade 0.3 mL NH4OH (para romper el iminof osf orano que se forma como intermedio) y se deja agitar una hora a temperatura ambiente. Se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCÜ3 (10 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2CI2 (2 x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatografía en columna usando como mezcla de eluyentes CH2Cl2/Me0H (2 : 1 ) 1% NEt3, obteniéndose VII-A con un rendimiento del 91% (91 mg) .
Aceite de color amarillo. Rf = 0.24 (CH2Cl2/Me0H 25:1) ; [α]D = -6.42 (c 0.4, CHCl3) ;
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.26 (m, 1 H, NHCO) ,
5.33 (d, 1 H, J4 ,3 = 2.7 Hz, H-4' ) , 5.16 (t, 1 H, J3, 2 = 9.2
Hz, H-2) , 5.05 (t, 1 H, J2 , 3 = 10.2 Hz, H-2 ' ) , 4.93 (dd, 1
H, J3 ,2 = 10.4 Hz, J3 ,4 = 3.4 Hz, H-3' ) , 4.88 (t, 1 H, J3, 4 = 9.7 Hz, H-3) , 4.50 (m, 3 H, H-I, H-I' , H-6a) , 4.38 (sa, 2
H, NH2) , 4.1 (m, 3 H, H-6b, 6' ) , 3.98 (s, 2 H, COCH2O) ,
3.85 (t, 1 H, J5, 6 = 6.8 Hz, H-5' ) , 3.77 (t, 1 H, J4, 3 = 9.5
Hz, H-4) , 3.63 (s, 11 H, 5 CH2O, H-5) , 3.46 (m, 2 H,
CH2NH) , 3.00 (m, 2 H, CH2NH2) , 2.84 (m, 1 H, SCH) , 2.69 (m, 1 H, SCH' ) , 2.1-1.9 (7 s, 7 CH3CO) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ [ppm] 170.4-169.1 (8 CO) ,
101.1 (Cl ' ) , 83.6 (Cl) , 76.8 (C5) , 76.06 (C4) , 73.7 (C2) ,
70.9-70.0 (C5 ' , C3 ' , C3, 5 CH2O, COCH2) , 69.2 (C2 ' ) , 66.7
(C4 ' ) , 62.1 (C6) , 60.8 (C6' ) , 40.6 (CH2NH2) , 38.9 (CH2NH) , 30.3 (SCH2) , 20.8-20.4 (7 CH3) .
EMAR para C36H56N4O2ISNa : calculado 907.299399 [M+Na]+, encontrado 907.300858 (-1.6 ppm) .
EJEMPLO 5 [4 , 16-Dioxo-β , 9 , 12-trioxa-3 , 15-diaza-25 , 27- tetracontadiinil] 2,2' ,3,3' ,4 ' , 6, 6' -hepta-O-acetil 1-tio-β- lactósido (IX-A)
Figure imgf000048_0001
A una disolución de VII-A (42.4 mg, 0.113 mmol) , TBTU (40 mg, 0.12 mmol) y DIPEA (20 μL, 0.10 mmol) en DMF anhidra (0.5 mL) , bajo atmósfera de argón, ausencia de luz y agitación a temperatura ambiente, se añade a los 5 minutos una disolución de VIII-A (100 mg, 0.113 mmol) y DIPEA (40 μL, 0.20 mmol) en DMF anhidra (1.0 mL) . Se deja agitar a temperatura ambiente, la reacción termina a los 45 min. , se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCÜ3 (20 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2CI2 (2 x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatografía en columna usando como mezcla de eluyentes AcOEt/Hex (1:3) , obteniéndose IX-A con un rendimiento del 70% (98 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.28 (AcOEt/Hex 1:1) ; [α]D = -5.6 (c 0.45, CHCl3) ;
1H RMN ( 500 MHz , CDCl3) : δ[ppm] 7.23 (m, 1 H, SCH2CH2NHCO) , 6.26 (m, 1 H, NHCOCH2CH2) , 5.33 (d, 1 H, J4, 3 = 2.9 Hz, H-4 ' ) , 5.19 (t, 1 H, J2, 3 = 9.2 Hz, H-2) , 5.08 (t, 1 H, J2 ,3 = 10.2 Hz, H-2 ' ) , 4.95 (dd, 1 H, J3 , 2 = 10.3 Hz , J3 ,4 = 3.2 Hz, H-3 ' ) , 4.91 (t, 1 H, J3, 2 = 9.6 Hz, H-3) , 4.50 (m, 3 H, H-I, H-I ' , H-6a) , 4.10 (s, 2 H, COCH2O) , 4.08 (m, 3 H, H-6' ,H-6b) , 3.86 (m, I H , J5 , 6 = 6.6 Hz, H-5' ) , 3.77 (t, 1 H, J3, 4 = 9.4 Hz, H-4) , 3.65 (m, 11 H, 5 CH2O, H- 5) , 3.53 (m, 2 H, 2 CHNHCO) , 3.45 (m, 2 H, 2 CH'NHCO) , 2.86 (m, 1 H, SCH) , 2.72 (m, 1 H, SCH' ) , 2.21 (t, 4 H, 3JCH2CH2 = 6.9 Hz, 2 CH2C=C) , 2.15 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 7.6 Hz, COCHzCH2) , 2.10-1.90 (7 s, 7 CH3CO) , 1.59 (m, 2 H, COCH2CHs) , 1.49 (t, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.3 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.86 (t, 3 H,
Figure imgf000049_0001
.
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.5-169.0 (9 CO) , 101.1 (Cl ' ) , 83.6 (Cl) , 77.6-77.4 (2 CH2C≡C) , 76.9 (C5) , 76.1 (C4) , 73.7 (C2) , 70.9-70 .0 (C3 ' , C5 ' , C3, 5 CH2O, COCH2) , 69.1 (C2 ' ) , 66.6 (C4 ' ) , 65.3, 65.2 (2 CH2C≡C) , 62.1 (C6) , 60.8 (C6' ) , 39.1 (OCH2CH2NH) , 38.9 (SCH2CH2NH) , 36.5 (NHCOCH2CH2) , 31.9 (CH2CH2CH3) , 30.4 (SCH2) , 29.7-22.7 (15 CH2) , 20.8-20.5 (7 CH3CO) , 19.19, 19.18 (CH2C≡C) , 14.1 (CH3CH2) .
EJEMPLO 6
4 , 16-Dioxo-β , 9 , 12-trioxa-3 , 15-diaza-25 , 27-tetracontadiinil]
1-tio- β-lactósido (1)
Figure imgf000049_0002
A una disolución de compuesto IX-A (98 mg, 0.079 mmol) en MeOH (1 mL) y CH2Cl2 (0.5 mL) , a temperatura ambiente y en ausencia de luz, se le añade una disolución de NaOMe en MeOH I M (I mL, 1 mmol) . Tras agitar durante una hora, se neutraliza con amberlita [ Ir-120 (plus ) res ina de intercambio iónico] , se filtra y se elimina el disolvente a vacio. El producto obtenido se purifica mediante una columna Shephadex 20, usando como disolvente MeOH. Se obtiene 1 con un rendimiento del 75% (58 mg) . Sólido blanco. Rf = 0.4 (CH3CN/H2O/NH4OH 6: 1: 1) ; [α]D = -2.38 (c 0.84, MeOH) ;
1H RMN (500 MHz, MeOD) : δ[ppm] 8.36 ( ta, 1 H, SCH2CH2NHCO) , 8.08 (ta, 1 H, NHCOCH2CH2) , 4.43 (d, 1 H, J1, 2 = 9.8 Hz, H-I) , 4.35 (d, 1 H, J1 ,2 = 7.6 Hz, H-I' ) , 4.00 (m, 2 H, COCH2O) , 3.99 (dd, 1 H, J6a,6h = 12.2 Hz, J6a,5 = 2.2 Hz, H-6a) , 3.82 (m, 2 H, H-4' ,H-6b) , 3.75 (m, 1 H, H-6'a) , 3.68 (m, 5 H, H-6b' , 2 CH2O) , 3.63 (m, 6 H, 3 CH2O) , 3.55 (m, 2 H, H-5 ' , H-4) , 3.50 (m, 4 H, H-2 ' , H-3 ' , H-3, SCH2CH2NH) , 3.47 (m, 1 H, H-5) , 3.35 (m, 2 H, OCH2CH2NH) , 3.27 (m, 1 H, H-2) , 2.90 (m, 1 H, SCH) , 2.78 (m, 1 H, SCH' ) , 2.25 (t, 4 H, 3JCH2CH2 = 6.9Hz, 2 CH2C=C) , 2.15 (t, 2H, 3JCH2CH^= 7.6Hz, COCH2CH2) , 1.60 (t, 2 H, 3 JCH2CH2 = 7.0 Hz, COCH2CH2) , 1.50 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.35 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.90 (t, 3 H, 3 JCH2CH3 = 6.5 Hz, CHsCH2) .
13C RMN (125.7 MHz, MeOD) : δ[ppm] 176.4, 172.9 (2
NHCO) , 105.1 (Cl ' ) , 87.0 (Cl) , 80.6-80.4 (C5' ,C5) , 77.9
(C3' , 2 CH2C≡C) , 77.1 (C4) , 74.8 (C3) , 74.1 (C2) , 72.5-70.3
(6 CH2O, C2' , C4' ) , 66.4 (2 CH2C≡C) , 62.5 (C6' ) , 62.1 (C6) , 40.5 (SCH2CH2NH) , 40.3 (OCH2CH2NH) , 37.1 (COCH2CH2) , 31.5- 29.5 ( 15 CH2) , 27.0 (COCH2CH2) , 19.7 (2 CH2C≡C) , 14.4 (CH2CH3) .
EJEMPLO 7 N- (2-Propinil) pentacosa-11 , 13-diinamida (X-A)
Figure imgf000050_0001
A una disolución del ácido VIII-A (304 mg, 0.80 mmol) en CH2Cl2 anhidro (10 mL) , bajo atmósfera de argón, con agitación y en ausencia de luz, se le añade N-N'- diisopropilcarbodiimida (138 μL, 0.88 mmol) , propargilamina
(56 μL , 0 . 80 mmol ) y DMAP ( 9. 78 mg, 0.08 mmol ) a temperatura ambiente, siguiendo la reacción por ccf .
Dejamos la reacción durante una noche. Una vez terminada, se concentra directamente a vacio y purificamos por cromatografía en columna, usando como eluyentes AcOEt/Hex
(1 :3) , obteniéndose X-A con un rendimiento del 83% (274 mg) .
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 5.6 (sa, 1 H, NHCO) , 4.05 (m, 2 H, CH2NHCO) , 2.22 (t, 4 H, 3JCH2CH2C≡C = 7.0 Hz, 2 CH2C=C) , 2.18 (t, 2 H, 3JCOCH2CH2 = 7.6 Hz, COCH2) , 1.62 (t, 2 H, 3JCOCH2CH2 = 7.0 Hz , COCH2CH2) , 1.50 (m, 4 H, 2 CHzCH2C=C) , 1.36 (m, 2 H, CH2CH3) , 1.25 (m, 22 H, 11 CH2) , 0.87 (t, 3 H, 3JCH2CH3 = 6.9 Hz, CH3CH2) . 13C RMN ( 125.7 MHz, CDC I3) : δ [ppm] 172.6 (CO) , 79.6
(HC≡C) 77.6-77.4 (2 CH2C≡C) , 71. 6 (HC≡C) , 65.3-65.2 (2 CH2C≡C) , 36.4 (NHCOCH2CH2) , 31.9 (CH2CH2CH3) , 29.6-28.3 (13 CH2) , 25.5 (COCH2CH2) , 22.7 (CH2CH3) , 19.2-19.1 (2 CH2C≡C) , 14.1 (CH3) .
EJEMPLO 8
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -l- [14- (2,2^ ,3,3^ ,4^ ,6,6^- hepta-O-acetil-l-tio-β-lactósido) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12- aza-tetradecanil] -1-H- [1,2, 3-triazol] (XI-A)
Figure imgf000051_0001
A una disolución de la compuesto VI-A (80 mg, 0.088 mmol) en CH2CI2 (2 mL) , bajo atmósfera de argón, ausencia de luz, temperatura ambiente y agitación, se le añade compuesto X-A (36 mg, 0.088 mmol) , DIPEA (20 μL, 0.096 mmol) , CuCl (1 mg, 0.0088 mmol) . Seguimos la reacción por ccf y se observa que termina a la hora. Se evapora el disolvente a vacio y purificamos mediante columna cromatográf ica usando como eluyentes CH2Cl2/Me0H (20 : 1) , obteniéndose XI-A con un rendimiento del 85% (98 mg) . Sólido blanco. Rf = 0.16 (CH2Cl2/Me0H 10:1) ; [α]D = -
5.6 (c 0.45, CHCl3) ;
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.67 (s, 1 H, H triazol) , 7.21 (t, 3JCH2NH = 5.8 Hz, SCH2CH2NHCO) , 6.37 (m, 1 H, NHCOCH2CH2) , 5.33 (d, 1 H, J4 ,3 = 2.5 Hz, H-4 ' ) , 5.19 (t, 1 H, J2, 3 = 9.2 Hz, H-2) , 5.08 (t, 1 H, J2 ,3 = 10.3 Hz, H-2 ' ) , 4.96 (dd, 1 H, J3 ,2 = 10.4 Hz , J3 , 4 = 3.4 Hz, H- 3' ) , 4.90 (t, 1 H, J3, 4 = 9.5 Hz, H-3) , 4.50 (m, 7 H, H-I, H-I ' , H-6a, 2 CH2-triazol) , 4.12 (dd, 1 H, J6 a,6 b = 11.1 Hz, J6 a, 5 = 6.2 Hz, H-6 'a) , 4.05 (m, 2 H, H-6'b, H-6b) , 3.97 (s, 2 H, COCH2O) , 3.87 (m, 3 H, H-5' , OCH2CH2N3) , 3.78 (t, 1 H, J3, 4 = 9.6 Hz, H-4) , 3.65 (m, 2 H, CH2O) , 3.60 (m, 7 H, H-5, 3 CH2O) , 3.53 (m, 1 H, SCH2CHNH) , 3.43 (m, 1 H, SCH2CH'NH) , 2.85 (m, 1 H, SCH) , 2.72 (m, 1 H, SCH' ) , 2.21 (t, 4 H, 3JCH2CH2 = 6.9 Hz, 2 CH2C=C) , 2.16 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 7.6 Hz, COCH2CH2) , 2.13-1.95 (7 s, 7 CH3CO) , 1.59 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 7.0 Hz, COCH2CH2) , 1.47 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.3 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.86 (t, 3 H, 3JCH2CH^= 6.5 Hz, CH3CH2) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.4-169.0 (9 CO) , 144.7 (C triazol) , 123.2 (CH triazol) , 101.1 (Cl ' ) , 83.6 (Cl) , 77.6-77.4 (2 CH2C≡C) , 77.0 (C5) , 76.2 (C4) , 73.7 (C2 ) , 70.9-70 .2 (C3 ' , C5 ' , C3 , 4 CH2O, COCH2) , 69.4 (OCH2CH2N3) , 69.1 (C2 ' ) , 66.7 (C4 ' ) , 65.3, 65.2 (2 CH2C≡C) , 62.1 (C6) , 60.8 (C6' ) , 50.2 (CN3) , 38.9 (SCH2CH2NH) , 36.5 (NHCOCH2CH2) , 34.8 (CH2NHCOCH2CH2) , 31.9 (CH2CH2CH3) , 30.4 (SCH2) , 29.6-22.6 (15 CH2) , 20.8-20.5 (7 CH3CO) , 19.19-19.18 (CH2C≡C) , 14.1 (CH3CH2) .
EJEMPLO 9
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (1-tio-β- lactosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza-tetradecanil] -1-H-
[1,2,3-triazol] (2)
Figure imgf000053_0001
A una disolución de compuesto XI-A (77 mg, 0.058 mmol) en MeOH (2 mL) y CH2Cl2 (0.5 inL) , a temperatura ambiente y en ausencia de luz, se le añade una disolución de NaOMe en MeOH I M (I mL, 1 mmol) . Tras agitar durante una hora, se neutraliza con amberlita [Ir-120 (plus) resina de intercambio iónico], se filtra y se elimina el disolvente a vacio. El producto obtenido se purifica mediante una columna Shephadex 20, usando como disolvente MeOH. Se obtiene 2 con un rendimiento del 78% (46 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.4 (CH3CN/H2O/NH4OH 6:1:1); [α]D = -7.95 (c 1.1, MeOH) ;
1H RMN (500 MHz, MeOD) : δ[ppm] 8.36 (ta, 1 H, SCH2CH2NHCO) , 8.08 (ta, 1 H, NHCOCH2CH2) , 7.88 (s, 1 H, H triazol) , 4.57 (t, 2 H, CH2NHCOCH2CH2) , 4.41 (m, 3 H, H-I, CH2N3) , 4.34 (d, 1 H, H-I' ) , 3.99 (s, 2 H, COCH2O) , 3.90 (m, 3 H, CH2O, H-6a) , 3.81 (m, 2 H, H-6b, H-4') , 3.75 (m, 1 H, H-6 ' a) , 3.68 (m, 3 H, H-6b' , CH2O) , 3.63 (m, 6 H, 3 CH2O) , 3.58 (m, 2 H, H-5 ' , H-4) , 3.50 (m, 4 H, H-2 ' , H-3 ' , H-3, SCH2CHNH) , 3.40 (m, 2 H, H-5, SCH2CH'NH) , 3.30 (m, 1 H, H- 2) , 2.90 (m, 1 H, SCH) , 2.77 (m, 1 H, SCH' ) , 2.20 (m, 4 H, CH2C=C) , 1.60 ( t, 2 H, 3JCH2CH2 = 7.0 Hz, COCH2CH2) , 1.50 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.35 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.90 (t, 3 H, 3J" CH2CH3=6.5 Hz, CH2CH2) .
13C RMN ( 125.7 MHz , MeOD) :δ[ppm] 176.1, 172.8 (2 NHCO) , 146.2 (C triazol) , 125.0 (CH triazol) , 105.1 (Cl ' ) , 87.0 (Cl) , 80.6-80.5 (C5 ' , C5) , 77.9 (2 CH2C≡C) , 77.1 (C4) , 74.8 (C3) , 74.1 (C2) , 72.5-70.4 (C3 ' , C2 ' , 5 CH2O, COCH2) , 70.3 (C4 ' ) , 66.4 (2 CH2C≡C) , 62.5 (C6' ) , 62.1 (C6) , 51.4 (CN3) , 40.5 (SCH2CH2NH) , 36.9 (NHCOCH2CH2) , 35.6
(CH2NHCOCH2CH2) , 33.1 (CH2CH2CH3) , 30.7-29.5 (SCH2 , 13 CH2) , 26.9 (CO CH2CH2) , 23.7 (CH2 CH3) , 19.7 (CH2C≡C) , 14.4 (CH2CH3) .
EJEMPLO 10
[14-Azido-4-oxo-6,9,12-trioxa-3-azatetradecanil] 2,3,4,6- tetra-O-acetil-l-tio-β-D-glucopiranósido (VI-B)
Figure imgf000054_0001
A una disolución del compuesto IV-B (139 mg, 0.61 mmol), TBTU (292 mg . , 0.91 mmol) y DIPEA (100 μL, 0.61 mmol) en DMF anhidra (1.0 mL) , bajo atmósfera de argón y agitación a temperatura ambiente, se añade a los 5 minutos una disolución del compuesto V-A (290 mg, 0.61 mmol) y DIPEA (220 μL, 1.20 mmol) en DMF anhidra (1.5 mL) . La reacción termina a las tres horas, se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCO3 (20 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2CI2 (2x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa saturada de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatograf ia en columna usando como mezcla de eluyentes CH2Cl2/Me0H (25 : 1) , obteniéndose VI-B con un rendimiento del 75% (287 mg) .
Aceite de color amarillo. Rf = 0.28 (CH2Cl2/Me0H 25: 1) ; [α] D = -5.21 (c 0.4, CHCl3) ; 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.18 (ta, 1 H, NHCO) ,
5.12 (t, 1 H, J4, 3 = 9.4 Hz, H-4) , 4.97 (t, 1 H, J2, 3 = 9.7 Hz, H-2) , 4.92 (t, 1 H, J3, 4 = 9.7 Hz , H-3) , 4.48 (d, 1 H, Ji, 2 = 10.5 Hz, H-I) , 4.12 (dd, 1 H, J6a,6b = 12.4 Hz, J6a,5 = 4.9 Hz, H-6a) , 4.05 (d, 1 H, J6b, 6a = 12.4 Hz, H-6b) , 3.90 (s, 2 H, COCH2) , 3.65 (m, 1 H, H-5) , 3. 60 (s, 10 H, 5 CH2O) , 3.4 (m, 2 H, CH2NH) , 3.38 (m, 2 H, CH2N3) , 2.7 (m, 2 H, SCH2) , 1.98 - 1.90 (4 s, 12 H, 4 CH3 ) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 170.5-169.3 (5 CO) , 83.7 (Cl) , 75.8 (C5) , 73.6 (C3) , 70.9- 69.9 (6 CH2O) , 69.8 (C2) , 68.2 (C4) , 62.0 (C6) , 50.6 (CN3) , 38.8 (CNH) , 30.3 (SCH2) , 20.6-20.4 (4 CH3) .
EMAR para C24H38N4Oi3SNa: calculado 645.205379 [M+Na] , encontrado 645.205180 (0.3 ppm) .
EJEMPLO 11
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (2 ,3, 4 , 6-tetra-O- acetil-1-tio-β-D-glucosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza- tetradecanil] -1-H- [1,2, 3-triazol] (XI-B)
Figure imgf000056_0001
A una disolución de la compuesto VI-B (90 mg, 0.145 mmol) en CH2CI2 (2 mL) , bajo atmósfera de argón, ausencia de luz, temperatura ambiente y agitación, se le añade el compuesto X-A (65.5 mg . , 0.16 mmol), DIPEA (38 μL, 0.218 mmol) y CuCl (1.5 mg., 0.0145 mmol) . Se siguió la reacción por ccf y se observó que termina a la hora. Se evaporó el disolvente a vacio y se purificó mediante cromatografía en columna usando como eluyentes CH2Cl2/Me0H (20:1) , obteniéndose XI-B con un rendimiento del 95% (142 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.25 (CH2Cl2/Me0H 20:1); [α]D = - 6.15 (c 1.1, CHCl3) ;
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.65 (s, 1 H, H triazol) , 7.22 (t, 3JCH2CH2 = 5.8 Hz, SCH2CH2NHCO) , 6.37 (m, 1 H, NHCOCH2CH2 ) , 5.21 (t, 1 H, J4, 3 = 9.4 Hz, H-4) , 5.04 (t, 1 H, J2, 3 = 9.8 Hz, H-2) , 5.00 (t, 1 H, J3, 4 = 9.4 Hz , H-3) , 4.58 (d, 1 H, J1, 2 = 10.1 Hz, H-I) , 4.50 (m, 4 H, 2 CH2- triazol) , 4.20 (dd, 1 H, J6a,6b = 12.4 Hz, J6a,5 = 5.1 Hz, H- 6a) , 4.12 (dd, 1 H, J6b,6a = 12.4 Hz, J6b,5 = 5.1 Hz, H-6b) , 3. 97 (s, 2 H, COCH2O) , 3.86 (t, 2 H, 3JCH2CH2 = 6.2 Hz, OCH2CH2N3) , 3.73 (m, 1 H, H-5) , 3.65 (m, 2 H, CH2O) , 3.60 (m, 6 H, 3 CH2O) , 3.56 (m, 1 H, SCH2CHNH) , 3.44 (m, 1 H, SCH2CH'NH) , 2.89 (m, 1 H, SCH) , 2.75 (m, 1 H, SCH' ) , 2.21 (t, 4 H, 3JCH2CH2 = 6.9 Hz, 2 CH2C=C) , 2.16 (t, 2H, 3JCH2CH2 = 7.6 Hz, COCH2CH2) , 2.05-1.97 (4 s, 4 CH3CO) , 1.60 (m, 2 H, COCH2CH2) , 1.49 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.26 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.86 (t, 3 H, 3JCH2CH2 = 6.5 Hz, CH3CH2) . 13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.1-169.4 (6 CO) , 144.6 ( C triazol) , 123.1 (CH triazol) , 83.8 (Cl) , 77.6- 77.4 (2 CH2C≡C) , 75.9 (C5) , 73.8 (C3) , 71.0-70.4 (6 CH2O) , 69.8 (C2) , 68.3 (C4) , 65.3-65.2 (2 CH2C≡C) , 62.1 (C6) , 50.2 (CN3) , 38.8 (SCH2CH2NH) , 36.5 (NHCOCH2CH2) , 34 . 9
(CH2NHCOCH2CH2) , 31.9 (CH2CH2CH3) , 30.3-28.3 (SCH2, 13 CH2) , 25.6 (COCH2CH2) , 22.7 (CH2CH3) , 20.7-20.5 (4 CH3) , 19.2 (2 CH2C≡C) , 14.1 (CH3) .
EJEMPLO 12
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (1-tio-β-D- glucosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza-tetradecanil] -1-H-
[1,2,3-triazol] (3)
Figure imgf000057_0001
A una disolución de compuesto XI-B (130 mg, 0.127 mmol) en MeOH (3 mL) y CH2Cl2 (1 mL) , a temperatura ambiente y en ausencia de luz, se le añade una disolución de NaOMe en MeOH IM (1 mL, 1 mmol) . Tras agitar durante una hora, se neutraliza con amberlita [Ir-120 (plus) resina de intercambio iónico], se filtra y se elimina el disolvente a vacio. El producto obtenido se purifica mediante una columna Shephadex 20, usando como disolvente MeOH. Se obtiene 3 con un rendimiento cuantitativo (110 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.25 (CH2Cl2/Me0H 20:1); [α]D = - 6.15 (c 1.1, MeOH) ; 1H RMN (500 MHz, MeOD) : δ[ppm] 8.36 (t, 1 H, 3JCH2NH = 5.8 Hz, SCH2CH2NHCO) , 8.08 (m, 1 H, NHCOCH2CH2) , 7.91 (s, 1 H, H triazol) , 4.57 (m, 2 H, CH2N3) , 4.40 (m, 3 H, CH2N3, H- 1) , 3.93 (s, 2 H, COCH2O) , 3.89 (m, 3 H, H-6a, OCH2CH2N3) , 3.67 (m, 2 H, CH2O) , 3.63 (m, 7 H, H-6b, 3 CH2O) , 3.49 (m, 2 H, SCH2CH2NH) , 3.34 (m, 1 H, H-3) , 3.30 (m, 2 H, H-5, H- 4) , 3.20 (m, 1 H, H-2) , 2.88 (m, 1 H, SCH) , 2.77 (m, 1 H, SCH' ) , 2.23 (m, 6 H, COCH2CH2, 2 CH2C=C) , 1.60 (m, 2 H, COCH2CH2) , 1.49 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.30 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.89 (t, 3 H, 3JCH2CH^= 6.5 Hz, CH3CH2) .
13C RMN ( 125.7 MHz, MeOD) : δ[ppm] 176.2-172.8 (2 NHCO) , 146.2 (C triazol) , 125.1 (CH triazol) , 87.2 (Cl) , 82.2 (C5) , 79.6 (C3) , 77.9-77.8 (2 CH2C≡C) , 74.4 (C2) , 72.0-70.9 (6 CH2O) , 70.4 (C4) , 66.4 (2 CH2C≡C) , 63.0 (C6) , 51.5 (CN3) , 40.5 (SCH2CH2NH) , 37.0 (NHCOCH2CH2) , 35. 6 (CH2NHCOCH2CH2) , 33.1 (CH2CH2CH3) , 31.0-29.5 (SCH2, 13 CH2) , 26.8 (COCH2CH2) , 23.7 (CH2CH3) , 19.2 (2 CH2C≡C) , 14.4 (CH3) .
EJEMPLO 13 14-Azido-4-oxo-6,9,12-trioxa-3-azatetradecanil]2,3,4,6- tetra-O-acetil-l-tio-β-D-galactopiranósido (VI-C)
Figure imgf000058_0001
A una disolución del compuesto IV-C (83.7 mg., 0.36 mmol), TBTU (173.5 mg., 0.54 mmol) y DIPEA (88 μL, 0.50 mmol) en DMF anhidra (1 mL) , bajo atmósfera de argón y agitación a temperatura ambiente, se añade a los 5 minutos una disolución del compuesto V (148 mg., 0.36 mmol) y DIPEA
(100 μL, 1.10 mmol) en DMF anhidra (1.0 mL) . La reacción termina en una hora, se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCO3 (20 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2CI2 (2 x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatografia en columna usando como mezcla de eluyentes CH2Cl2/MeOH (25:1), obteniéndose el producto requerido VI-C con un rendimiento del 82% (184 mg) .
Aceite de color amarillo. Rf = 0.24 (CH2Cl2/Me0H 25:1); [α]D = -5.09 (c 0.63, CHCl3); 1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.21 (ta, 1 H, NHCO), 5.41 (d, 1 H, J4, 3= 3.2 Hz, H-4), 5.20 (t, 1 H, J2, 3 = 9.9 Hz, H-2), 5.03 (dd, 1 H, J3, 2 = 10.0 Hz, J3, 4 = 3.1 Hz, H- 3), 4.54 (dt, 1 H, J1, 2 = 10.0 Hz, J1, 3 = 3.3 Hz, H-I), 4.08 (m, 2 H, H-6) , 3.95 (m, 3 H, H-5, COCH2), 3.65 (m, 10 H, 5 CH2O), 3.55 (m, 1 H, CHNH), 3.47 (m, 1 H, CH'NH), 3.37 (m, 2 H, CH2N3), 2.90 (m, 1 H, SCH), 2.75 (m, 1 H, SCH'), 2.15 - 1.95 (4 s, 12 H, 4 CH3) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 170.4-169.6 (5 CO) , 84.3 (Cl) , 74.6 (C5) , 71.8 (C3) , 71.0- 70.0 (6 CH2O) , 67.3 (C4) , 67.2 (C2) , 61.5 (C6) , 50.7 (CN3) , 38.8 (CNH) , 30.4 (SCH2) , 20.7-20.6 (4 CH3) .
EMAR para C24H38N4O13SNa: calculado 645.205379 [M+Na] , encontrado 645.205180 (0.3 ppm) .
EJEMPLO 14
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (2 ,3, 4 , 6-tetra-O- acetil-1-tio-β-D-galactosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza- tetradecanil] -1-H- [1,2, 3-triazol] (XI-C)
Figure imgf000060_0001
A una disolución de la compuesto VI-C (144 mg, 0.231 mmol) en CH2CI2 anhidro (4 mL) , bajo atmósfera de argón, ausencia de luz, temperatura ambiente y agitación, se le añade el compuesto X-A (105 mg, 0.235 mmol) , DIPEA (70 μL, 0.345 mmol) y CuCl (3.0 mg . , 0.023 mmol) . Seguimos la reacción por ccf y observamos que termina a la hora . Evaporamos el disolvente a vacio y purificamos mediante cromatografía en columna usando como eluyentes CH2Cl2/Me0H (20 : 1) , obteniéndose XI-C con un rendimiento del 98% (230 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.23 (CH2Cl2/Me0H 20 : 1) ; [α] D = - 2.21 (c 1.1, CHCl3) ; 1H RMN ( 500 MHz , CDCl3) : δ[ppm] 7 . 65 ( s , 1 H, H triazol ) , 7 . 21 ( ta , SCH2CH2NHCO) , 6.46 (ta, 1 H, NHCOCH2CH2) , 5.40 (d, 1 H, J4, 3 = 3.2 Hz, H-4) , 5.18 (t, 1 H, J2, 3 = 9.9 Hz, H-2) , 5.03 (dd, 1 H, J3, 2 = 10.0 Hz , J3, 4 = 3.2 Hz, H-3) , 4.53 (d, 1 H, J1, 2 = 10.0 Hz, H-I) , 4.48 (m, 4 H, 2 CH2-triazol) , 4.10 (m, 2 H, H-6) , 3.95 (m, 3 H, H-5, COCH2O) , 3.84 (m, 2 H, OCH2CH2N3) , 3.60 (m, 8 H, 4 CH2O) , 3.53 (m, 1 H, SCH2CHNH) , 3.45 (m, 1 H, SCH2CH'NH) , 2.90 (m, 1 H, SCH) , 2.75 (m, 1 H, SCH' ) , 2.20 (m, 4 H, 2 CH2C= ) , 2.16 (m, 2 H, COCH2CH2) , 2.11-1.95 (4 s, 4 CH3CO) , 1.55 (m, 2 H, COCH2CH2) , 1.47 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.30 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.86 (t, 3 H, 3JCH2CH^= 6.5 Hz, CH3CH2) .
13C RMN (125.7 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.2-169.6 (6 CO) , 144.7 (C triazol) , 123.1 (CH triazol) , 84.3 (Cl) , 77.6-77.4 (2 CH2C≡C) , 74.5 (C5) , 71.8 (C3) , 70.9-69.4 (6 CH2O) , 67.3 (C4) , 67.2 (C2) , 65.3-65.2 (2 CH2C≡C) , 61.4 (C6) , 50.2 (CN3) , 38.8 (SCH2CH2NH) , 36.5 (NHCOCH2CH2) , 34.8
(CH2NHCOCH2CH2) , 31.9 (CH2CH2CH3) , 30.5 (SCH2) , 29.6-28.3 (13 CH2) , 25.6 (COCH2CH2) , 22.7 (CH2CH3) , 20.8-20.6 (4 CH3) , 19.2-19.1 (2 CH2C≡C) , 14.1 (CH3) .
EJEMPLO 15
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (1-tio-β-D- galactosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza-tetradecanil] -1-
H-[l,2,3-triazol] (4)
Figure imgf000061_0001
A una disolución del compuesto X-C (190 mg, 0.18 mmol) en MeOH (4 mL) y CH2Cl2 (1 mL) , a temperatura ambiente y en ausencia de luz, se le añade una disolución de NaOMe en MeOH I M (I mL, 1 mmol) . Tras agitar durante una hora, se neutraliza con amberlita [Ir-120 (plus) resina de intercambio iónico] , se filtra y se elimina el disolvente a vacio. El producto obtenido se purifica mediante una columna Shephadex 20, usando como disolvente MeOH. Se obtiene 4 con un rendimiento cuantitativo (159 mg) .
Sólido blanco. Rf = 0.23 (CH2Cl2/Me0H 20:1); [α]D = - 2.21 (c 1.1, MeOH) ;
1H RMN (500 MHz, MeOD) : δ[ppm] 8.38 (m, 1 H, SCH2CH2NHCO), 8.15 (m, 1 H, NHCOCH2CH2), 7.88 (s, 1 H, H triazol), 4.56 (m, 2 H, CH2N3), 4.42 (m, 2 H, CH2NHCOCH2CH2) , 4.35 (d, 1 H, J1, 2 = 10.0 Hz, H-I) , 3.99 (s, 2 H, COCH2O) , 3.88 (m, 2 H, H-4, H-6a) , 3.75 (m, 3 H, H-6b, CH2O) , 3.67 (m, 2 H, CH2O) , 3.62 (m, 6 H, 3 CH2O) , 3.54 (m, 2 H, H-2, H-5) , 3.50 (m, 2 H, SCH2CH2NH) , 3.45 (dd, 1 H, J3, 2 = 9.2 Hz, J3, 4 = 3.2 Hz, H-3) , 2.89 (m, 1 H, SCH) , 2.78 (m, 1 H, SCH' ) , 2.22 (m, 6 H, COCH2CH2, 2 CH2C=C) , 1.60 (m, 2 H, COCH2CH2) , 1.50 (m, 4 H, 2 CH2CH2C=C) , 1.31 (m, 26 H, 13 CH2) , 0.89 (t, 3 H, 3JCH2CH3 = 6.5 Hz, CH3CH2) .
13C RMN (125.7 MHz, MeOD) : δ[ppm] 176.2-172.8 (2 CO) , 146.2 (C triazol) , 123.1 (CH triazol) , 87.7 (Cl) , 80.8 (C5) , 77.9 (2 CH2C≡C) , 76.3 (C3) , 72.0-71.3 (4 CH2O) , 70.6 (C2) , 70.4 (C4) , 69.8, 67.6 (2 CH2O) , 66.4 (2 CH2C≡C) , 62.8 (C6) , 51.4 (CN3) , 40.4 (SCH2CH2NH) , 37.0 (NHCOCH2CH2) , 35.6 (CH2NHCOCH2CH2) , 33.1 (CH2CH2CH3) , 30.7-29.5 (SCH2, 13 CH2) , 26.9 (COCH2CH2) , 23.7 (CH2CH3) , 19.7 (2 CH2C≡C) , 14.4 (CH3) .
EJEMPLO 16
14-Azido-4-oxo-6,9,12-trioxa-3-azatetradecanil]2,3,4,6- te tra- O-ace til - 1 - tio- β -D-manopiranósido (VI -D )
Figure imgf000062_0001
A una disolución del compuesto IV-D (83.7 mg., 0.36 mmol) , TBTU (173.5 mg., 0.54 mmol) y DIPEA (88 μL, 0.50 mmol) en DMF anhidra (1 mL) , bajo atmósfera de argón y agitación a temperatura ambiente, se añade a los 5 minutos una disolución de la compuesto V (148 mg . , 0.36 mmol) y DIPEA (100 μL, 1.10 mmol) en DMF anhidra (1.0 mL ) . La reacción termina en una hora, se neutraliza con una disolución acuosa de NaHCO3 (20 mL) , se extrae la fase acuosa con CH2Cl2 (2 x 20 mL) y los extractos orgánicos reunidos se lavan con una disolución acuosa de NaCl (15 mL) . Se seca sobre Na2SO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente a vacio. La purificación se realiza mediante cromatografia en columna usando como mezcla de eluyentes CH2Cl2/Me0H (25:1), obteniéndose el producto requerido VI-D con un rendimiento del 82% (184 mg) .
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.27 (ta, 1 H, NHCO), 5.32 (1 H, m, H-I), 5.30 (m, 2H, H-4,H-2), 5.21 (dd, IH, J3, A= 10.0 Hz, J3.2=3.2 Hz, H-3), 4.36 (m, 1 H, H-5), 4.28 (dd, 1 H, J6a6b 12.2 Hz, J6a5=5.5 Hz, H-6a), 4.09 (dd,l H, J6b6a =12.2 Hz, J6b5=1.7 Hz, H-6b) , 3.99 (m, 2 H, COCH2O), 3.68 (m, 10 H, 5 CH2O), 3.45 (m, 2 H, CH2NH), 3.38 (t, 2 H, J=4.9 Hz, CH2N3), 2.8 (m, 2 H, SCH2), 2.14-1.97 (4 AcO) .
13C RMN (125 MHz, CDCl3) : δ [ppm] 170.6-169.7 (5 CO), 82.5 (Cl) , 70.9 (C4) , 70.6-70.2 ( 6 OCH2), 69.4(C3), 69.1 (C5) , 66.3 (C2) , 62.4 (C6) , 50.7 (CN3), 38.1 (SCH2CNHCO), 31.1 (SCH2), 20.9-20.6 (4 CH3) .
EMAR para C24H38N4Oi3SNa: calculado 645.205379 [M+Na] , encontrado 645.205180 (0.3 ppm) .
EJEMPLO 17
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (2 ,3, 4 , 6-tetra-O- acetil-1-tio-β-D-manosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza- tetradecanil] -1-H- [1,2, 3-triazol] (XI-D)
Figure imgf000063_0001
A una disolución de la compuesto VI-D (144 mg, 0.231 mmol) en CH2CI2 anhidro (4 mL) , bajo atmósfera de argón, ausencia de luz, temperatura ambiente y agitación, se le añade compuesto X-A (105 mg, 0.235 mmol) , DIPEA (70 μL, 0.345 mmol) y CuCl (3.0 mg, 0.023 mmol) . Seguimos la reacción por ccf y observamos que termina a la hora .
Evaporamos el disolvente a vacio y purificamos mediante cromatografía en columna usando como eluyentes CH2Cl2/Me0H
(20: 1) , obteniéndose XI-D con un rendimiento del 98% (230 mg) .
1H RMN (500 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 7.68 (s, l H, H triazol) , 7.26 (ta, 1 H, NHCO) , 6.40 ( m, I H, CONHCH2) , 5.3 (m, 3 H, H-I, H-4, H-2) , 5.21 (dd, 1 H, J3, 4= 10.0 Hz, J3.2=3.2 Hz, H-3) , 4.51 (t, 2 H, J =5.0 Hz, CH2N3) , 4.48 (d, 2 H, triaz-CH2) , 4.37 (m, 1 H, H-5) , 4.3 (dd, 1 H, J6a6b 12.2 Hz, J6a5=5.5 Hz, H-6a) , 4.09 (dd, IH, J6b6a =12.2 Hz, J6b5=1.7 Hz, H-6b) , 3.99 (m, 2 H, COCH2O) , 3.85 (m, 2 H, CH2CH2N3) , 3.66-3.6 (m, 8 H, 4 CH2O) , 3.5 (m, 2 H, CH2NH) , 2.77 (m, 2 H, SCH2) , 2.22 (t, 4 H, 2 CH2C≡C) , 2.16 (m, 4 H, COCH2CH2) , 2.08-1.95 (4 AcO) , 1.60 (m, 30 H, 15 CH2) , 0.85 (t, 3 H, CH3, J= 6.9 Hz, CH3) .
13C RMN (125 MHz, CDCl3) : δ[ppm] 173.2-169.6 (6 CO) , 144.7 (C triaz) , 123.2 (CH triaz) , 82.4 (Cl) , 77.6-77.4 (C≡C-C≡C) , 70.9-69.1 (C4, CH2, C3, C5) 66.2 (C2) , 65.3-65.2 (C≡C-C≡C) , 62.4 (C6) , 50.2 (CN3) , 38.1 (CNHCO) , 36.4 (NHCOCH2CH2) , 34.8 (triaz-CH2) , 31.9 (CH2) , 31.1 (SCH2) , 29.6-25.6 (CH2) , 20.9-20.6 (4 CH3) , 19.2-19.1 (2 CH2C≡C) , 14.1 (CH3) .
4- (12,14-Pentacosadiinamidometil) -1- [14- (1-tio-β-D- manosiloxi) -ll-oxo-3 , 6 , 9-trioxa-12-aza-tetradecanil] -1-H-
[1,2,3-triazol] (5)
Figure imgf000065_0001
A una disolución de compuesto X-D (190 mg, 0.18 mmol) en MeOH (4 mL) y CH2CI2 (1 mL) , a temperatura ambiente y en ausencia de luz, se le añade una disolución de NaOMe en MeOH IM (1 mL, 1 mmol) . Tras agitar durante una hora, se neutraliza con amberlita [Ir-120 (plus) resina de intercambio iónico], se filtra y se elimina el disolvente a vacio. El producto obtenido se purifica mediante una columna Shephadex 20, usando como disolvente MeOH. Se obtiene 5 con un rendimiento cuantitativo (159 mg) .
1H RMN (500 MHz, MeOD) : δ[ppm] 7.9 (s,l H, H triazol), 5.30 (m, 1 H, H-I), 4.57 (t, 2 H, J=4.9 Hz, CH2N3), 4.40 ( s, 2 H, triazCH2NHCO) , 3.93 (s, 2 H, COCH2O) , 3.9 (m, 2 H, H-4, H-2) , 3.88 (m, 2 H, H-3, H-5) , 3.82 (dd, 1 H, J6a6b 12.2 Hz, J6a5=5.5 Hz, H-6a) , 3.70 (m, IH, H-6b) , 3.65 (m, 10 H, 5 CH2O) , 3.5 (m, 2 H, CH2NHCO) , 2.80 (m, 2 H, SCH2) , 2.22 (m, 6 H, 2 CH2C≡C, COCH2CH2) , 1.60 (m, 2 H, CH2) , 1.50 (m, 4 H, 2 CH2) , 1.30 (m, 30 H, 15 CH2) , 0.85 (t, 3 H, CH3, J= 6.9 Hz, CH3) .
13C RMN (125 MHz, CDCl3) : δ [ppm] 175.2-171.5 (2 CO) , 143.3 (C triaz) , 125.6 (CH triaz) , 85.2 (Cl) , 76.6-76.5 (C≡C-C≡C) , 73.8 (C4) , 72.2 (C3) , 71.7 (C5) , 70.6-69.6 (OCH2) , 68.5 (C2) , 67.5, 65.1 (C≡C^C≡C) , 61.3 (C6) , 51.5 (CN3) , 38 . 4 (CNHCOCH2O) , 35.4 (NHCOCH2CH2) , 33.3 (triaz- CH2) , 31.9 (CH2) , 31.1 (SCH2) , 30.1- 28.2 (CH2) , 25.4 (COCH2CH2) , 22.3 (CH2CH3) , 18.3 (2 CH2C≡C) , 13.1 (CH3) . EJEMPLO 18 Preparación de agregados nanotubos de carbono-glicolipidos
Se prepara una suspensión de nanotubos de carbono en agua al 100% y se añade el compuesto (1) sintetizado en el Ejemplo 6. Se procede a sonicar la mezcla hasta que los nanotubos se solubilizan, indicativo de la formación de agregados estables. Dicho tiempo de sonicación resulta ser de unos 30 minutos. A continuación, se centrifuga la mezcla obtenida con el fin de eliminar los nanotubos que no presentan glicolipidos organizados a su alrededor.
Por último, se procede a dializar la solución con agua desionizada con el fin de eliminar los lipidos y/o micelas derivadas de los mismos que no se encuentran en contacto con los nanotubos.
En la Figura 3 se muestra una imagen de microscopio electrónico de transmisión de los nanotubos de carbono rodeados de glicolipido (1) sin polimerizar obtenidos según el procedimiento descrito.
Este mismo procedimiento se lleva a cabo con los compuestos (2) y (4) obtenidos en los Ejemplos 9 y 15, respectivamente .
Para la obtención de los agregados en los cuales el glicolipido está polimerizado, se sigue el mismo procedimiento descrito anteriormente pero una vez eliminados los nanotubos que quedan libres (sin glicolipido alrededor) tras la etapa de centrifugación, se procede a irradiar la mezcla con luz ultravioleta durante 12 horas con el fin de polimerizar el glicolipido. La Figura 4 muestra una imagen de microscopio electrónico de transmisión de los nanotubos de carbono rodeados de glicolipido (1) polimerizado. EJEMPLO 19
Estudio comparativo de la estabilidad de los agregados nanotubo de carbono-glicolipido Se toman muestran de suspensiones de agregados de nanotubos de carbono-glicolipido en los cuales el glicolipido está polimerizado y sin polimerizar, obtenidos según el procedimiento descrito en el Ejemplo 18 y se almacenan durante 3 meses en viales (Figura 5) . El vial A contiene la suspensión con los agregados no polimerizados y el vial B contiene la suspensión con los agregados polmerizados .
Como puede observarse a partir de dicha figura, los agregados no polimerizados no resultan estables durante el tiempo estudiado dado que los nanotubos han precipitado, indicativo de que la estructura de dichos agregados no se mantiene. Por el contrario, la suspensión de los agregados polimerizados permanece estable, no se observa precipitación alguna de los nanotubos.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula general I:
Figure imgf000068_0001
en la que
R es un carbohidrato seleccionado entre mono-, di- y polisacárido; X es oxigeno, azufre, -CH2- o -NH-; n, m, j y k son números enteros, iguales o diferentes entre si, comprendidos entre 0 y 20; e i es 0 ó 1.
2. Compuesto según la reivindicación 1, de fórmula general Ia:
Figure imgf000068_0002
Ia en la que
R, m, j, k e i tienen los significados definidos en la reivindicación 1.
3. Compuesto según la reivindicación 2, de fórmula general Ia'
Figure imgf000069_0001
Ia' en la que
R e i tienen los signif icados def inidos en la reivindicación 1.
Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R es un monosacárido o un disacárido .
Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que R es un sacárido seleccionado e n t r e 1-desoxiglucosa, 1-desoxigalactosa, 1- desoxiarabinosa, 1-desoximanosa, 1-desoxi-N-acetil- galactosamina, 1-desoxixilosa, 1-desoximaltosa, 1- desoxilactosa, 1-desoxi-N-acetil-galactosamina-β-l, 3- galactosa, preferentemente seleccionado entre 1- desoxigalactosa, 1-desoxiglucosa, 1-desoximanosa y 1- desoxilactosa .
Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula Ia' (1) :
Figure imgf000069_0002
Ia' (1)
Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula Ia' (2)
Figure imgf000070_0001
Ia ' (2 )
Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula Ia' (3)
Figure imgf000070_0002
Ia' (3)
9. Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula Ia' (4)
Figure imgf000070_0003
Ia' (4)
10. Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula Ia' (5)
Figure imgf000070_0004
Ia' (5)
11. Un procedimiento para la obtención de un compuesto según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende:
• cuando i = 0
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula
AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado en la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH
donde X y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1, para obtener un compuesto de fórmula general IV
AcO-R-X- (CH2) n-NH2
IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3 V donde m tiene el significado previamente mencionado en la reivindicación 1, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3 VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(3) reducir el compuesto de fórmula VI con un agente reductor de la función azida selectivo para dar una amina de fórmula VII
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-NH2 VII
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(4) hacer reaccionar el compuesto VII con un ácido carboxilico de fórmula general VIII
Figure imgf000072_0001
VIII
donde j y k tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1, en presencia de un agente deshidratante para rendir un compuesto de fórmula general IX
Figure imgf000073_0001
IX donde R, X, m, n, j y k tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
;5) hacer reaccionar el compuesto IX con metilato sódico en metanol y posterior purificación del compuesto de fórmula I (i = 0)
Figure imgf000073_0002
I (i = 0) donde R, X, m, n, j y k tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
• cuando i = 1
(1) hacer reaccionar un carbohidrato peracetilado de fórmula
AcO-R-OAc
donde R tiene el significado previamente mencionado en la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula
NHBOC- (CH2) n-XH donde X y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1, para obtener un compuesto de fórmula general IV
AcO-R-X- (CH2) n-NH2
IV
donde R, X y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(2) hacer reaccionar el compuesto obtenido en la etapa (1) con un ácido de fórmula general V
CO2H-CH2-O- (CH2-CH2-O) m-CH2-CH2-N3 V donde m tiene el significado previamente mencionado en la reivindicación 1, en presencia de un agente deshidratante, en un disolvente orgánico para dar un compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(3) hacer reaccionar un ácido carboxilico de fórmula general VIII, con propargilamina en un disolvente orgánico en presencia de un agente deshidratante para formar un compuesto de fórmula general X
Figure imgf000075_0001
donde j y k tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1,
(4) acoplar el compuesto de fórmula general VI
AcO-R-X- (CH2) n-NH-CO-CH2-O- (CH2-CH2-O)111-CH2-CH2-N3
VI
donde R, X, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1, con un compuesto de fórmula X, mediante una cicloadicion 1, 3-dipolar, para dar compuesto de fórmula general XI
Figure imgf000075_0002
XI
donde R, X, j , k, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1, y
(5) hacer reaccionar dicho compuesto de fórmula XI con metilato sódico en metanol y posterior purificación para obtener el compuesto de fórmula I (i = 1)
Figure imgf000076_0001
I (i = 1)
donde R, X, j, k, m y n tienen los significados previamente mencionados en la reivindicación 1.
12. Un agregado supramolecular que comprende un nanotubo de carbono y un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.
13. Agregado supramolecular según la reivindicación 12, en el que el nanotubo de carbono es monocapa o multicapa, de estructura "zig-zag", "quiral" o "sillón".
14. Un procedimiento para la preparación de un agregado supramolecular como se define en las reivindicaciones 12 y 13, que comprende:
a) mezclar una suspensión de nanotubos de carbono con un compuesto de fórmula I, en agua, y sonicar la mezcla durante el tiempo necesario para obtener un agregado formado por nanotubos de carbono alrededor de los cuales se ubica el compuesto de fórmula (I);
b) centrifugar la mezcla obtenida en la etapa a) con el fin de eliminar los nanotubos que no presentan compuestos de fórmula I organizados a su alrededor;
c) irradiar con luz ultra-violeta la solución obtenida en la etapa b) para polimerizar el compuesto de fórmula (I), de manera que dicho compuesto polimerizado se ubica en forma de anillos alrededor de los nanotubos de carbono; y
d) dializar contra agua desionizada la solución obtenida en la etapa c) con el fin de eliminar los glicolipidos y o las micelas derivadas de los mismos que no se encuentran en contacto con los nanotubos .
15. Un agregado supramolecular obtenible según el procedimiento de la reivindicación 14.
16. Un procedimiento para producir un gliconanosoma que comprende retirar los anillos de compuestos de fórmula
I polimerizados que rodean los nanotubos obtenidos según el procedimiento de la reivindicación 14.
17. Procedimiento según la reivindicación 16, donde el proceso para retirar los anillos se efectúa mediante la aplicación de un campo eléctrico.
18. Un gliconanosoma obtenible según el procedimiento definido en cualquiera de las reivindicaciones 16 a 17.
19. Un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15 para su uso como medicamento .
20. Uso de un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15 para la preparación de un medicamento dirigido al tratamiento de enfermedades y/o condiciones que cursan con interacciones mediadas por carbohidratos.
21. Uso según reivindicación 20 en el que la enfermedad y/o condición se selecciona entre infecciones bacterianas, infecciones virales, procesos inflamatorios, cáncer y disfunciones en la respuesta inmune durante el trasplante de tejidos.
22. Uso según reivindicación 21, en el que la infección bacteriana es una infección mediada por la bacteria Heliobacter pylori.
23. Uso de un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15 para la detección del grupo sanguíneo en un individuo.
24. Un kit para la determinación del grupo sanguíneo que comprende un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15.
25. Una vacuna que comprende un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12, 13 ó 15 y un antigeno.
26. Un método para la determinación de la presencia en un medio de una sustancia capaz de interaccionar con un carbohidrato, que comprende: a) poner en contacto un agregado supramolecular como se define en cualquiera de las reivindicaciones
12, 13 ó 15 con la sustancia de tal manera que la sustancia se pueda asociar al carbohidrato; y b) determinar si la asociación tiene lugar o no.
27. Uso de un gliconanosoma como se define en la reivindicación 18 como vector de una molécula biológicamente activa hidrófoba.
28. Uso de un gliconanosoma como se define en la reivindicación 18 como vector de una proteina de membrana .
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