PASTA TERMOPLÁSTICA PARA LA REPARACIÓN TEJI DOS VIVOS.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se encuadra dentro del campo de los materiales biocompatibles. En especial aquellos que se utilizan en ingeniería tisular para Ia reparación de tejidos vivos. En particular, Ia presente invención pertenece al campo de los biomateriales tixotrópicos, a sus procedimientos de obtención y a sus usos en el tratamiento de reparación, regeneración y acondicionamiento de tejidos vivos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Los materiales biocompatibles o biomateriales son compuestos inertes diseñados para ser implantados o incorporados dentro de un sistema vivo con el objeto de sustituir y/o regenerar tejidos vivos y sus funciones. En ingeniería tisular se han desarrollado diversos biomateriales que promueven Ia proliferación celular, soportan cargas fisiológicas y son fáciles de manipular y sintetizar. (Biomaterials 27 (2006) 1889-1898; Biomaterials 26 (2005) 3215-322). Entre estos materiales existen diversos tipos de polímeros biocompatibles que a menudo son además biodegradables. (Nature Biotechnology, Volume 20, June 2002 (602-606); Macromolecules 1997, 30, 2876-2882; Macromol. Biosci. 2001 , 1 , 91-99; Polymer
Degradation and Stability 91 (2006) 733-739) Algunos materiales presentan baja viscosidad en condiciones de síntesis pero son capaces de polimerizar y formar geles en condiciones fisiológicas, Io que permite que sean inyectables y evita Ia necesidad de cirugía (Biomacromolecules 2006, 7, 288-296; Biomaterials 26 (2005) 3941-3951 ). La bibliografía científica es prolífica en ejemplos y combinaciones. A modo de muestra, Byeongmoon et al. (Macromolecules 33,8317-8322, 2000) describen Ia síntesis de un biopolímero en bloque que es biodegradable porque contiene ácidos orgánicos tales como el ácido láctico y el ácido glicólico y biopolímeros como el polietilenglicol capaces de gelificar en condiciones fisiológicas sin producir irritación del tejido y que además son biodegradables y reabsorbibles por el organismo. Sin embargo, los materiales de este tipo no pueden soportar cargas fisiológicas pues carecen de dureza por Io que resultan ineficaces mecánicamente cuando se utilizan en estructuras de carga como huesos en animales o ramas en vegetales. Además algunos polímeros experimentan
deformaciones cuando son expuestos a altas temperaturas o a estrés por un periodo de tiempo prolongado y sufren un deterioro tan rápido que a veces no permite Ia completa reparación de Ia estructura antes de Ia degradación del polímero. Para solucionar este problema se han ingeniado en el campo de Ia técnica una serie de materiales compuestos utilizando biocerámicas. Las cerámicas aumentan Ia dureza y reducen Ia velocidad de degradación del polímero. En general es deseable que las partículas de biocerámica estén distribuidas de manera homogénea en el polímero biodegradable para que las propiedades del compuesto sean también homogéneas. En ocasiones, algunos implantes médicos de elementos estructurales del cuerpo, como por ejemplo los huesos, están fabricados con un material compuesto polímero/cerámica. La solicitud de patente internacional WO-2008036206-A1 describe un material implantable compuesto de biopolímero y biocerámica, Io cual facilita Ia resistencia y reduce el desgaste del implante. A diferencia de los polímeros inyectables, estos implantes se forman normalmente fuera del cuerpo y se colocan mediante cirugía. Lamentablemente, tales implantes presentan problemas de adaptación a las superficies de destino, que son normalmente irregulares, presentan grietas o una morfología no estándar.
En cierto tipo de lesiones, es posible una estrategia de tratamiento donde el implante constituye una plataforma para Ia reconstrucción del tejido. Se conocen en el estado de Ia técnica diversas solicitudes de patentes, que describen Ia preparación de plataformas con características muy diversas. Un problema crítico para el correcto funcionamiento de estas plataformas es que se ajusten correctamente a las diversas irregularidades de Ia estructura a tratar. Sin embargo, una vez moldeados, estos compuestos tampoco pueden volver a remodelarse para ajustarse con precisión a Ia superficie a reparar. La solicitud de patente internacional WO-2007092559-A1 describe un material compuesto de biocerámica y biopolímeros biodegradables adecuados para implantes óseos. La composición del material compuesto descrito en ella Ie otorga una rigidez apropiada para cargas fisiológicas pero que impide Ia correcta adaptación a Ia superficie a reparar.
Los inventores de Ia presente solicitud han descubierto de manera sorprendente que un material compuesto por una biocerámica y un polímero en bloque formado por bloques rígidos alternados con bloques flexibles, como por ejemplo los polímeros de polietilenglicol, permite Ia remodelación tras el endurecimiento de Ia
plataforma. De esta manera, se puede crear una plataforma con una morfología inicial que podrá ser remodelada mediante fuerzas mecánicas a Ia hora de implantarla para su perfecta adaptación a Ia superficie a reparar. Este material puede aplicarse además en campos diferentes de Ia biomedicina, por ejemplo en ingeniería tisular de plantas, como plataforma para injertos o como inductor de enraizamiento.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
Figura 1 : Gráfico que demuestra Ia reología de carácter altamente tixotrópico de Ia pasta termoplástica de Ia invención. El estudio que se muestra aquí se realizó a una temperatura de 36QC. Como se puede observar, Ia viscosidad a esfuerzo 0 Pa es de 4,75 E+05 Pa-s. Figura 2: Demostración de Ia adaptabilidad de Ia pasta de Ia invención a las superficies irregulares. Se puede apreciar que, mediante fuerzas mecánicas, una bola de pasta termoplástica se adapta a Ia superficie irregular de Ia figura. Figura 3: Etapas de síntesis del polímero en bloque del material de Ia invención.
OBJETO DE LA INVENCIÓN
Un primer objeto de Ia presente invención se refiere a un material compuesto, de reología tixotrópica, que en estado inicial tiene consistencia de pasta y carácter termoplástico y que está constituido principalmente por un biopolímero de bloque y una biocerámica que constituye entre 10-70% del peso total del material. El biopolímero de bloque se corresponde con Ia fórmula general [(A-B-C)n-D-E-D-
(A-B-C)n-Jm donde A y C son monómeros dihidroxilo o diamino, B y D son diácidos carboxílicos, E es un polímero con un índice hidroxilo ≥ 10 y n y m son índices numéricos ≥ 1. Este biopolímero de bloque comprende un bloque rígido (A-B-C)n y un bloque flexible (-D-E-D-). El bloque rígido consiste en un polímero formado mayoritariamente por enlaces tipo éster y que incluye opcionalmente enlaces tipo amida, mientras que el bloque flexible consiste en un segundo polímero que comprende una cadena hidrocarbonada que contiene enlaces ester o éter.
Un segundo objeto de Ia presente invención es un procedimiento de preparación del material de Ia presente invención mediante microondas, que
comprende una primera etapa de síntesis en microondas del bloque co-polímero (A- B-C)n donde A es o un monómero lineal alifático dihidroxilo o una diamina, B es un diácido carboxílico y n es un índice numérico ≥1 ; una segunda etapa de síntesis en microondas del bloque copolímero -D-E-D- donde D es un diácido carboxílico y E es un polímero con un índice hidroxilo ≥ 10; una tercera etapa de elongación en microondas del bloque copolímero (A-B-C)n con el bloque copolímero -D-E-D-, para crear el polímero en bloque y una última etapa de mezcla del polímero en bloque con Ia biocerámica.
Un tercer objeto de Ia presente invención comprende el uso del material de Ia presente invención en el tratamiento de reparación de tejidos vivos. Tanto tejidos de origen animal como de origen vegetal como por ejemplo el hueso, piel, pelo uñas y pezuñas, cortes y heridas superficiales, acoplamiento de injertos agrícolas o estimulación del enraizamiento vegetal.
Para facilitar Ia comprensión de Ia memoria y las reivindicaciones se facilitan las siguientes definiciones:
Pasta termoplástica es una composición de un material compuesto, que es un sólido constituido por materias que tienen características físicas diferentes en el cual cada una de las materias retiene su propia identidad mientras proporciona ciertas propiedades al compuesto. En especial, pasta termoplástica se refiere aquí a un material deformable, capaz de endurecer a temperaturas de entre 20-50 QC y reblandecer por acción mecánica o por calor; que tiene un fuerte carácter tixotrópico y cuyos materiales constituyentes comprenden, de manera no limitante, partículas de cerámica y un polímero de bloque, con un bloque duro y otro flexible que incluye un polímero con un índice hidroxilo ≥ 10, de alto peso molecular y constituido por cadenas capaces de asociarse por medio de fuerzas débiles.
Un polímero de bloque es un copolímero constituido por grupos o bloques diferenciables de macromoléculas con diferentes índices de repetición.
Un biopolímero es un polímero utilizado en biología aplicada, que es compatible con el organismo en el cual se aloja; especialmente, un polímero no alergogénico. Los biopolímeros comprenden macromoléculas poliméricas tanto naturales, bien
aisladas de organismos, bien producidas mediante técnicas de biología molecular o ingeniería genética, como sintéticas que sean conocidas o diseñadas ad hoc. Ambas pueden comprender, bien homopolímeros, bien copolímeros o bien una mezcla de estos.
Una biocerámica es un material que se utiliza en biología aplicada. Es cristalino o amorfo, esencialmente inorgánico, no metálico, poroso y frágil; que se forma y madura por Ia acción del calor. Puede ser inerte o activo y tomar parte en procesos biológicos. Puede permanecer invariable, reabsorberse o disolverse.
La tixotropía es Ia propiedad de algunos fluidos que muestran un cambio en Ia viscosidad dependiente de fuerzas externas como el calor o Ia fricción de manera que en ausencia de dichas fuerzas externas, Ia viscosidad del fluido es baja o muy baja mientras que tras Ia aplicación de dichas fuerzas, Ia viscosidad del fluido aumenta temporalmente.
El índice hidroxilo se refiere a Ia cantidad de grupos OH que en un polímero son capaces de formar enlaces poliéster y polieter. Los oxígenos de este tipo de enlace son capaces de formar puentes de hidrógeno con una cerámica que forma parte del mismo material compuesto que dicho polímero. Así, cuanto menor el índice hidroxilo, mayor el número de posibles puentes de hidrógeno entre el polímero y Ia cerámica. El índice de hidroxilo es el número de mg de hidróxido potásico equivalente a los grupos hidroxilo en un gramo de material. Los grupos hidroxilo son acetilados con una cantidad conocida de anhídrido acético. El exceso de anhídrido se descompone posteriormente mediante Ia adición de agua y el ácido acético formado se valora con una solución etanólica de hidróxido potásico 0,5 N. Para calcular el índice de hidroxilo se procede con Ia metodología descrita en Fat and Science Technology, 1989. no. 9-1990, pag. 371-373. El índice hidroxilo se calcula según Ia fórmula:
m
Donde V1 es el volumen en mi de Ia disolución de hidróxido potásico necesario para Ia muestra; V2 es el volumen en mi de Ia disolución de hidróxido potásico necesario
para el blanco; N es Ia normalidad de Ia disolución de hidróxido potásico; m es el peso del polímero en gramos y AV es el valor de acidez de Ia muestra.
El término "reabsorbible" en Ia presente invención se refiere a que el soporte desaparezca en el tiempo a medida que es sustituido por tejido regenerado. "Asimilable" se refiere en Ia presente invención a que los componentes de Ia pasta pueden integrarse a las estructuras normales del organismo sin necesidad de ser previamente degradados. "Degradable" se refiere en Ia presente invención a que el organismo puede descomponer mediante procesos enzimáticos los elementos que constituyen el material para incorporarlos a sus procesos bioquímicos normales.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
El objeto de Ia presente invención se refiere en un primer aspecto a un material compuesto cuya reología es característicamente tixotrópica por Io que tras endurecerse es capaz de recuperar cierta viscosidad en función de las fuerzas mecánicas y calóricas que se apliquen. Los elementos constituyentes del material compuesto, al que nos referiremos a partir de ahora como pasta termoplástica, consisten principalmente en un polímero de bloque y una biocerámica y opcionalmente otros componentes minoritarios. La composición del polímero en bloque es de particular importancia para Ia adaptabilidad de Ia pasta termoplástica ya que es Ia alternancia de bloques rígidos con bloques flexibles Io que permite Ia reología tixotrópica. Así, inicialmente los bloques flexibles establecen asociaciones por medio de fuerzas débiles con Ia biocerámica. En Ia pasta en reposo, al enfriarse suficientemente, se desacopla esta asociación quedando Ia pasta cohesionada por asociaciones entre el bloque rígido y Ia biocerámica así como mediante puentes de
H entre las cadenas de polímero de manera que, al aplicar fuerzas mecánicas y una pequeña cantidad de calor sobre Ia pasta rígida (cuya dureza proviene de Ia biocerámica), el bloque flexible vuelve a establecer las fuerzas débiles con Ia biocerámica con el consiguiente aumento de Ia viscosidad y resultando en Ia reología tixotrópica descrita en Ia figura 1. El estudio de Ia figura 1 se realizó a 36QC por Io que se demuestra que, en condiciones fisiológicas, Ia pasta termoplástica cumple los requisitos de dureza necesarios para sustituir y regenerar tejidos como el hueso cuya función se desarrolla a temperaturas similares. Como se ha explicado anteriormente, Ia reología tixotrópica es Ia principal
característica de Ia presente invención. Esta característica principal de Ia invención confiere Ia ventaja de permitir una perfecta adaptación a Ia superficie del tejido a tratar. Los elementos que confieren esta ventaja Ie dan al material el aspecto y Ia consistencia de una pasta moldeable por acción de fuerzas mecánicas y calóricas. La figura 2 demuestra Ia perfecta adaptabilidad de Ia pasta a superficies irregulares.
Otra ventaja característica de Ia presente invención es su biocompatibilidad. La pasta termoplástica de Ia presente invención es biocompatible porque es bien tolerada por el organismo al cual se incorpora. Esta ventaja viene dada por Ia naturaleza de sus componentes: el biopolímero en bloque está compuesto por dos tipos de polímeros, rígido y flexible, ambos degradables, reabsorbibles y asimilables por los organismos vivos. Así mismo, Ia biocerámica es también reabsorbible, asimilable y biodegradable.
En una realización, el biopolímero que constituye el bloque rígido es un heteropolímero compuesto por ácido glutámico y un diol de no más de 10 carbonos, por ejemplo 1 ,8-octanodiol. En realizaciones alternativas, se pueden utilizar también monómeros de caprolactona, ácido láctico, ácido glicólico, ácido fumárico y sus mezclas. Se puede introducir en este bloque cualquier monómero que se considere apropiado para su función dentro del material compuesto. En una realización particular, el bloque rígido del biopolímero de bloque comprende enlaces tipo amida en un porcentaje inferior o igual al 5% del peso total de Ia pasta. De esta manera el resultado obtenido sería una mayor rigidez del material que experimenta cierta disminución de su carácter tixotrópico.
En otra realización particular, el polímero E se elige de entre el grupo de los óxidos de etileno, las poliamidoaminas, las poliaminas, los polioles y sus combinaciones. En una realización preferente, el bloque flexible está formado por polímeros de óxido de etileno, preferiblemente polietilenglicol (PEG) cuyo peso molecular no excede 20,000 kDa. En otra realización preferente, el polímero de óxido de etileno contiene hasta 50 ramificaciones. La pasta termoplástica puede albergar cualquier biopolímero con un número suficiente de radicales hidroxilo libres, de manera que éstos sean capaces de formar puentes de hidrógeno con Ia cerámica. Por ejemplo, en otra realización, el bloque flexible es un biopolímero de Ia familia de los glucosaminglucanos (GAGs), como el ácido hialurónico. Cuando Ia pasta de Ia presente invención contiene ácido hialurónico, resulta altamente compatible con el tejido nervioso, epitelial y conectivo. Así, en otra realización particular, el polímero E es un glucosaminglucano
seleccionado del grupo formado por condroitin sulfato, dermatan sulfato, keratan sulfato, heparina, heparan sulfato, ácido hialurónico y sus mezclas. En Ia presente invención, es preferible que el componente de biocerámica sea particulado y esté distribuido de manera homogénea en Ia ultraestructura de Ia pasta. Cuanto más uniforme sea Ia distribución de las partículas de biocerámica, mas uniforme serán las propiedades del material y más predecible su comportamiento en cada aplicación práctica. En Ia presente invención, los materiales biocerámicos incluyen de manera no limitante las cerámicas del fosfato calcico, óxido de aluminio, óxido de circonio, óxido de sílice, carbón pirolítico, bioglass, sales de cobre, hierro, cobalto, zinc, magnesio, manganeso, calcio, boro, bióxido de titanio y combinaciones de estos. En una realización preferida, Ia biocerámica es Ia hidroxiapatita. La hidroxiapatita es el componente mineral del hueso natural y se incluirá en Ia presente invención cuando esta se utilice en el tratamiento de reparación de estructuras de naturaleza ósea. En otra realización preferida, el componente biocerámico comprende el bioglass. El bioglass es una cerámica no cristalina altamente biocompatible. El bioglass se puede sustituir por otra cerámica amorfa de propiedades equivalentes o por otro sólido amorfo altamente biocompatible. Algunas de las realizaciones de Ia presente invención están concebidas para su uso en el campo de Ia agricultura y Ia jardinería industrial u ornamental. Una realización particular de Ia presente invención incorporaría en Ia biocerámica sales de cobre (II) como antifúngico para su aplicación en el ensamblaje de injertos vegetales.
Sin modificar los componentes esenciales de Ia presente invención, se pueden incluir en Ia pasta termoplástica elementos variados en porcentajes tales que, sin afectar significativamente a Ia reología del material, Ie otorguen propiedades específicas para su aplicación en diferentes usos prácticos. En una realización particular, Ia presente invención comprende además del biopolímero de bloque y Ia biocerámica, un tercer componente en un porcentaje en peso < 1% a elegir de entre antibióticos, factores de crecimiento animal o vegetal, factores celulares, de enraizamiento, promotores de floración, maduración de los frutos, inhibidores de Ia maduración, factores de senescencia, germinación etc. Entre ellos podrían encontrarse hormonas animales o vegetales, alcaloides, elementos nutritivos, aceites, acondicionadores cosméticos y sus combinaciones. Opcionalmente, Ia invención contempla también Ia siembra con células, procariotas o eucariotas, del material de Ia invención.
En un segundo aspecto, Ia presente invención se refiere a un proceso de síntesis mediante microondas que, frente a Ia síntesis convencional, confiere Ia ventaja de obtener una mayor velocidad de reacción otorgada por las fuerzas electromagnéticas que Ie confieren las microondas, además de evitar los desfases térmicos asociados con Ia conducción y/o Ia temperatura. Así se consiguen unos tiempos de reacción menores además de unas temperaturas más suaves. La síntesis de polímeros mediante microondas ocurre en el rango de minutos mientras que por métodos convencionales el proceso duraría horas. Para sintetizar el material compuesto de Ia invención, se hace reaccionar en una primera etapa el ácido carboxílico y el diol de manera que el ácido carboxílico se localice en los extremos de las cadenas ya que los grupos carboxílicos deben quedar en los extremos del bloque rígido para que puedan reaccionar con el bloque flexible. Una vez que se obtiene así el bloque rígido, se procede a Ia segunda etapa donde se hace reaccionar con el bloque flexible; una vez obtenido el polímero de base, se procede al mezclado con Ia cerámica de elección. Durante las etapas de síntesis, es conveniente Ia inyección de aire comprimido para ventilar, aumentar el efecto microondas y favorecer Ia polimerización. La síntesis de los polímeros puede realizarse asimismo mediante procedimientos convencionales. Ello requeriría temperaturas mas elevadas y además sería necesaria Ia elección de catalizadores adecuados y un sistema de extracción del agua producida en Ia policondensación.
La figura 3 ilustra las reacciones que tienen lugar en Ia síntesis mediante microondas de Ia pasta termoplástica de Ia presente invención.
En un tercer aspecto, el objeto de Ia presente invención se refiere a Ia utilización de Ia pasta termoplástica en el tratamiento de reparación de tejidos vivos, tanto animales como vegetales. En una realización preferente, el tejido animal es el hueso de mamíferos, incluyendo el hueso humano. En este caso Ia pasta de Ia presente invención incluiría una biocerámica como por ejemplo Ia hidroxiapatita, que es el componente mineral del hueso natural, para estimular Ia regeneración del hueso. Otras biocerámicas con propiedades equivalentes o mejoradas podrían ser igualmente incluidas para este uso particular de Ia pasta termoplástica de Ia presente invención. En una realización más preferente, Ia pasta termoplástica así constituida se emplea en el tratamiento de roturas y enfermedades óseas.
En otra realización preferente, Ia pasta termoplástica se utiliza en el tratamiento y acondicionamiento de estructuras superficiales tales como Ia piel, el pelo, las uñas y
las pezuñas así como en el tratamiento de cortes y heridas superficiales. En este caso, Ia pasta termoplástica de Ia presente invención incluye un polímero E promotor de Ia proliferación y Ia migración celular, como, por ejemplo, el ácido hialurónico. También, por ejemplo, efectores citotóxicos para el tratamiento de lesiones producidas por un crecimiento celular desproporcionado como son, por ejemplo, los tumores. Independientemente de cual sea el polímero de elección para el bloque flexible, se incluirán constituyentes minoritarios a Ia pasta para conseguir efectos terapéuticos o cosméticos apropiados para cada caso. Entre ellos se pueden encontrar, como se ha dicho anteriormente, compuestos citotóxicos, factores de crecimiento o diferenciación celular, compuestos antivirales, antibióticos y antifúngicos, partículas portadoras de ácidos nucleicos destinados a modificar Ia expresión celular de elementos genéticos intrínsecos o extrínsecos al tejido, elementos nutritivos y acondicionadores como aceites cosméticos y combinaciones de todos ellos. En otra realización particular, Ia pasta termoplástica se utiliza en el tratamiento de reparación de tejidos vegetales, como por ejemplo los tejidos vegetales lignificados. En una realización preferente, Ia presente invención se utiliza en el acoplamiento de injertos agrícolas. En este caso, Ia pasta termoplástica de Ia presente invención incluye una biocerámica que comprende sales de cobre (II), que actúan como agente antifúngico. Además o alternativamente, Ia pasta termoplástica de Ia presente invención puede incluir otros componentes de características equivalentes o mejoradas para este mismo propósito, bien como componentes mayoritarios que formen parte de los componentes esenciales o bien como componentes minoritarios en una proporción no superior al 1%. Otra realización preferente de Ia presente invención comprende el uso de Ia pasta termoplástica descrita en Ia estimulación del enraizamiento vegetal de, por ejemplo, arbustos y árboles. En este caso, Ia pasta termoplástica de Ia presente invención incluye entre sus componentes minoritarios hormonas vegetales y opcionalmente células procariotas con el objeto de estimular los procesos fisiológicos normales de tales tejidos. Con el mismo objeto se pueden incluir en Ia pasta de Ia presente invención otros componentes de características equivalentes o mejoradas.
EJEMPLOS
Ejemplo 1 : Síntesis de Ia pasta termoplástica.
Reactivos:
Se hacen reaccionar 12 g de ácido glutárico (0,09 moles) y 1 1 '1 g de 1 ,8 octanodiol (0,08 moles) en un horno de microondas (Discorvery CEM) a una potencia de 100 W durante 1 hora. Se trabaja a vacío (100 mbar) y refrigerando el sistema con aire comprimido para mantener Ia temperatura constante a 120QC. De esta manera se genera un bloque rígido.
Posteriormente el bloque rígido se hace reaccionar con polietilenglicol de 2000 (6,5 g 3 mM) en el mismo reactor de microondas durante 240 minutos y una potencia de 100 W a 120QC. De nuevo se trabaja a vacío y con refrigeración de aire comprimido. El polímero resultante (biopolímero en bloque) (10g) se mezcla con 10g de
Hidroxiapatita de baja cristalinidad obtenida en nuestro laboratorio mediante un proceso de sol-gel (E. Garreta 2005, Tesis doctoral Instituí Químic de Sarriá- Universitat Ramón LIuII) mediante un mezclador planetario tipo Speed Mixer ®.
Ejemplo 2. Utilización de Ia pasta con hidroxiapatita en Ia reparación ósea.
Utilizando el polímero sintetizado por el método del ejemplo 1 se obtiene una pasta termoplástica al mezclar en proporciones 1 :1 en peso con hidroxiapatita consiguiendo una pasta moldeable y adaptable. Esta pasta es implantada en defectos calvarios en ratas. En las observaciones preliminares no se han observado síntomas de inflamación de los especímenes. Y el defecto después de tres meses se observa totalmente cubierto
Ejemplo 3. Utilización de Ia pasta con sulfato de cobre en el acoplamiento de injertos vegetales.
El polímero termoplástico de Ia invención y cuyo método de síntesis se explica en el ejemplo uno, se mezcla con una proporción 1 :0,02 de sulfato de cobre, producto con una gran actividad fungicida. La pasta resultante de fácil aplicación se deposita sobre ramas de árboles frutales acabadas de podar. Después de Ia aplicación se observa un recubrimiento homogéneo sobre Ia herida que es mecánicamente estable. Al cabo de dos meses no se observa ningún residuo sobre Ia herida ya recuperada y tampoco Ia aparición de hongos y ninguna otra enfermedad relacionada con el proceso de poda.