WO2009128257A1 - アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法 - Google Patents

アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2009128257A1
WO2009128257A1 PCT/JP2009/001720 JP2009001720W WO2009128257A1 WO 2009128257 A1 WO2009128257 A1 WO 2009128257A1 JP 2009001720 W JP2009001720 W JP 2009001720W WO 2009128257 A1 WO2009128257 A1 WO 2009128257A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
adiponectin
sleep
blood
evaluating
secretion regulator
Prior art date
Application number
PCT/JP2009/001720
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
明彦 藤井
Original Assignee
花王株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 花王株式会社 filed Critical 花王株式会社
Priority to US12/988,108 priority Critical patent/US8440464B2/en
Priority to EP09732309A priority patent/EP2270497B1/en
Priority to CN2009801133101A priority patent/CN102007410B/zh
Publication of WO2009128257A1 publication Critical patent/WO2009128257A1/ja

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
    • G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
    • G01N2800/044—Hyperlipemia or hypolipemia, e.g. dyslipidaemia, obesity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2864—Sleep disorders

Definitions

  • the present invention relates to a method for evaluating or selecting an adiponectin secretion regulator.
  • Adiponectin (adiponectin) is a factor mainly secreted from adipocytes (adipokine), but has recently been reported to have an insulin resistance improving action and an anti-arteriosclerosis action (Non-patent Document 1).
  • adipokines other than adiponectin TNF- ⁇ , resistin, free fatty acids and the like are known, and it has been clarified that all of them induce insulin resistance.
  • Adiponectin which is a good adipokine that improves insulin resistance, unlike many adipokines, has recently received much attention.
  • Non-patent Document 2 It has been shown as clinical data that not only the action of adiponectin but also a decrease in the amount of adiponectin in blood becomes a predictive marker for the onset of diabetes (Non-patent Document 2). In addition, it has been reported that the amount of adiponectin in the blood shows an inverse correlation with the degree of obesity (Non-patent Document 3), and a decrease in adiponectin is an important role in the onset and exacerbation of insulin resistance, diabetes and cardiovascular disease due to obesity. It is presumed that Therefore, substances that promote the secretion of adiponectin are considered to be useful for the prevention and improvement of these diseases.
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor ⁇
  • insulin is used by using a system in which 3T3-L1 cells, which are preadipocytes, are differentiated. It has been reported that the expression level of adiponectin decreases by the addition of dexamethasone, etc. (Non-patent Document 4).
  • Non-patent Document 5 the expression level of adiponectin has been evaluated in a test system using adipocytes extracted during abdominal surgery. It has also been reported that in vitro screening of an adiponectin expression inducer is possible by using a cell retaining an adiponectin enhancer element and a reporter gene (Patent Document 1).
  • the present invention includes the following steps (A) to (C): A method for evaluating or selecting an adiponectin secretion regulator (A) A step of administering a test substance to an experimental animal (B) An experimental animal (C) measuring the adiponectin concentration in the blood and evaluating the change, It is related to.
  • the present invention relates to providing a method for evaluating or selecting an adiponectin secretion regulator in a simple and rapid manner in vivo.
  • the present inventors have examined a screening system using animals, and surprisingly, in a sleep disorder model, it is found that the blood adiponectin concentration decreases in a short period after the sleep disorder load, and the model is used. It has been found that evaluation or selection of an adiponectin secretion regulator is possible.
  • an adiponectin secretion regulator can be evaluated or selected easily and quickly. Therefore, the present invention is useful as a simple screening method for a prophylactic or ameliorating agent for metabolic abnormalities such as abnormal carbohydrate metabolism and abnormal lipid metabolism and various diseases resulting therefrom.
  • the blood adiponectin concentration was decreased in a short period after the sleep disorder was loaded.
  • the reduction in blood adiponectin concentration has an adiponectin secretion promoting action (Japanese Patent Laid-Open No. 2005-232059), and has an in vivo insulin resistance improving effect, cholesterol and triglyceride lowering action (Journal of Nutritional Biochemistry). 13 (2002), 717-726), which was suppressed by the administration of chlorogenic acid. Therefore, it is possible to evaluate or select an adiponectin secretion regulator that promotes or suppresses secretion of adiponectin by using a sleep disorder model system. Below, the evaluation or selection method of the adiponectin secretion regulator of this invention is demonstrated.
  • the experimental animal used in the present invention may be an experimental small animal that can be used as a sleep disorder model, but is preferably a rodent such as a mouse, rat, or guinea pig.
  • “sleep disorders” added to animals include sleep disorders induced by known sleep disorder methods devised for the purpose of examining the significance of sleep in the living body. Those that inhibit are preferred. Examples of known sleep disorder methods include the methods described below. Among them, the platform method is preferably used. 1) Platform method (Youngblood BD et al. Physiol Behav. 67 (5) 643-649, (1999)) The platform method is also called a flower pot method and is a typical sleep inhibition method. This method is a method capable of relatively specifically inhibiting REM sleep among sleep. In this method, water is placed in a cage and a small cylindrical platform (platform) on which experimental animals can be placed is installed.
  • platforms small cylindrical platform
  • a stainless steel cylinder having a diameter of 6-7 cm is placed in an acrylic resin cage for rearing rats, and water is applied to the lower part of the cylinder by 1-2 cm.
  • One 250-400 g rat is put in this and reared. At this time, rats should be able to freely consume food and drinking water.
  • This method is a method of inhibiting sleep by placing a treadmill or rotating disk in a cage and periodically operating the treadmill or disk.
  • the period of sleep disturbance load varies depending on the sleep disorder method and is usually about 1 to 5 days. However, when the platform method is used, the decrease in blood adiponectin concentration is significantly 1 day after the sleep disorder load. Since it decreases, it may be about 1 to 2 days.
  • the administration timing of the test substance may be appropriately selected according to the purpose, and may be before or after the sleep disorder is loaded on the experimental animal, or may be performed in parallel with the sleep disorder load.
  • the administration method may be any of oral administration, transdermal administration, subcutaneous administration, intradermal administration, intramuscular administration, tail vein administration, intraperitoneal administration, etc., but oral administration is preferred.
  • Measurement of adiponectin in serum or plasma can be performed by ELISA (enzyme antibody) method, radioimmunoassay method, Western blotting method and the like. Specifically, it can be performed using a rat adipectin ELISA kit (AdipoGen).
  • an adiponectin secretion regulator based on the concentration of adiponectin in the blood.
  • the concentration is statistically significant compared to the concentration of a control to which the test substance is not administered.
  • the test substance can be evaluated or selected as an adiponectin secretion promoter.
  • examples of the adiponectin secretion promoter include substances that improve the low adiponectin state by enhancing the expression of adiponectin.
  • Such adiponectin secretagogues are diseases or symptoms caused by a low adiponectin state such as hypoadiponectinemia, impaired glucose tolerance, diabetes, type 2 diabetes, insulin resistance syndrome, diabetic complications, hyperglycemia, arteriosclerosis Drugs or foods for prevention, treatment or improvement of infectious diseases, atherosclerosis, cardiovascular diseases, cerebrovascular disorders, vascular stenosis, peripheral vascular diseases, aneurysms, hyperlipidemia, hypercholesterolemia, obesity, etc. It can be.
  • blood was collected from the abdominal aorta under an anesthesia of Foren (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) into a Benoject vacuum blood collection tube, and the resulting heparin plasma was stored at ⁇ 80 ° C. until use.
  • Plasma adiponectin was measured using a rat adipectin ELISA kit (AdipoGen). Plasma was diluted 1000 times with the dilution buffer in the kit, and then the adiponectin concentration was measured according to the kit protocol.
  • Plasma adiponectin is already significantly lower than that in the rest group 1 day after REM sleep inhibition, and plasma adiponectin is 2 days and 4 days after REM sleep inhibition compared to the rest group Significantly decreased. However, the decrease in plasma adiponectin did not depend on the duration of REM sleep inhibition, and the degree of decrease was similar in 1 to 4 days of REM sleep inhibition (FIG. 1).

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

　アディポネクチン分泌調節剤を簡易且つ迅速に評価又は選択する方法の提供。 　以下の（Ａ）～（Ｃ）の工程を含むことを特徴とする、アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法。（Ａ）被験物質を実験動物に投与する工程、（Ｂ）実験動物に睡眠障害を負荷する工程、（Ｃ）血液中のアディポネクチン濃度を測定し、その変化を評価する工程。

Description

アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法
　本発明は、アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法に関する。
　アディポネクチン（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）は、主に脂肪細胞から分泌される因子（アディポカイン）であるが、近年インスリン抵抗性改善作用や抗動脈硬化作用があることが報告されている（非特許文献１）。アディポネクチン以外のアディポカインとして、ＴＮＦ－α、レジスチン、遊離脂肪酸などが知られているが、これらはいずれもインスリン抵抗性を惹起することが明らかとなっている。アディポネクチンは多くのアディポカインとは異なりインスリン抵抗性を改善する善玉アディポカインであることから、最近、非常に注目されている。
　アディポネクチンはその作用だけではなく、血中アディポネクチン量の低下が糖尿病発症の予知マーカーになることも臨床データとして示されている（非特許文献２）。また、血中アディポネクチン量は肥満度と逆相関を示すことが報告されており（非特許文献３）、肥満によるインスリン抵抗性、糖尿病、循環器疾患の発症、増悪においてアディポネクチンの低下が重要な役割を果たしていると推察されている。従って、アディポネクチンの分泌を促進する物質は、これら各疾病の予防・改善に有用であると考えられている。
　アディポネクチン発現量を評価するｉｎ　ｖｉｔｒｏ試験系はいくつか確立されており、例えば、脂肪前駆細胞株である３Ｔ３－Ｌ１細胞を分化させた系を用いて、ＴＮＦ－α（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　α）、ｉｎｓｕｌｉｎ、ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎなどの添加でアディポネクチン発現量が低下することが報告されている（非特許文献４）。
　また、腹部の手術の際に摘出された脂肪細胞を用いた試験系でもアディポネクチン発現量が評価されている（非特許文献５）。また、アディポネクチンのエンハンサーエレメントとレポータージーンを保持した細胞を用いることにより、アディポネクチン発現誘導剤のｉｎ　ｖｉｔｒｏスクリーニングが可能であることも報告されている（特許文献１）。
　一方、ｉｎ　ｖｉｖｏでの試験系では、ＫＫＡｙマウス（非特許文献６）、ｄｂ／ｄｂマウス（非特許文献７）、ｏｂ／ｏｂマウス（非特許文献８）、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（非特許文献９）、Ｚｕｃｋｅｒ　ｆａｔｔｙ（非特許文献１０）などの肥満糖尿病モデル動物が、高脂肪食下で肥満、インスリン抵抗性、高中性脂肪血症などを起こし、肥満にともなって血中アディポネクチン量が低下することから、当該肥満糖尿病モデル動物を用いてアディポネクチン分泌能等が評価されている。
　しかしながら、血中アディポネクチン量が低下するまでに高脂肪食下で少なくとも数週間飼育する必要があり、アディポネクチン分泌量の変化を評価するためには多大な時間を要するという問題があった。
国際公開第２００５／０９４８６６号パンフレット
Ｋａｄｏｗａｋｉ，Ｔ．ｅｔ　ａｌ．：Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１１６：１７８４．１７９２（２００６）． Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｊ．ｅｔ　ａｌ．：Ｌａｎｃｅｔ．，３６１：２２６－２２８（２００３）． Ａｒｉｔａ，Ｙ．ｅｔ　ａｌ．：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２５７：７９－８３（１９９９）． Ｆａｓｓｈａｕｅｒ．ｅｔ　ａｌ．：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２９０：１０８４－１０８９（２００２）． Ｈａｌｌｅｕｘ，ＣＭ．ｅｔ　ａｌ．：Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２８８：１１０２－１１０７（２００１）． Ｔｓｕｃｈｉｄａ　Ａ　ｅｔ　ａｌ．：Ｄｉａｂｅｔｅｓ．；５４（１２）：３３５８－３３７０（２００５）． Ｆｕｊｉｔａ　Ｈ　ｅｔ　ａｌ．：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｊ．；５２：４２７－４３３（２００５）． Ｈａｌｕｚｉｋ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．；１４５：３２５８－３２６４，（２００４）． Ａｒａｋｉ　Ｋ　ｅｔ　ａｌ．：Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．；４８：５１－５７，（２００６）． Ｇａｌｉｓｔｅｏ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．：Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３５：２３９９－２４０４，（２００５）．
発明の要約
　本発明は、以下の（Ａ）～（Ｃ）の工程を含むことを特徴とする、アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法
　（Ａ）被験物質を実験動物に投与する工程
　（Ｂ）実験動物に睡眠障害を負荷する工程
　（Ｃ）血液中のアディポネクチン濃度を測定し、その変化を評価する工程、
に係るものである。
レム睡眠阻害による血漿アディポネクチンの低下を示すグラフ。＊Ｐ＜０．０５（Ｄｕｎｎｅｔ検定、ｖｓ　休息群） レム睡眠阻害による血漿アディポネクチン低下に対するクロロゲン酸の効果を示すグラフ。＊Ｐ＜０．０５（Ｆｉｓｈｅｒ‘ｓ　ＰＬＳＤ検定）
　本発明は、ｉｎ　ｖｉｖｏで、アディポネクチン分泌調節剤を簡易且つ迅速に評価又は選択する方法を提供することに関する。
　本発明者らは、動物を用いたスクリーニング系を検討したところ、意外にも睡眠障害モデルにおいて、血中アディポネクチン濃度が、睡眠障害負荷後、短期間で低下することを見出し、当該モデルを用いることによりアディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択が可能となることを見出した。
　本発明によれば、アディポネクチン分泌調節剤を簡易且つ迅速に評価又は選択することができる。従って、本発明は、糖質代謝異常、脂質代謝異常等の代謝異常症候群及びそれに起因する各種疾患の予防又は改善剤の簡易なスクリーニング法として有用である。
　後記実施例に示すとおり、睡眠障害を誘発した動物モデルにおいて、血中アディポネクチン濃度が睡眠障害負荷後、短期間で低下していた。そして、当該血中アディポネクチン濃度の低下が、アディポネクチン分泌促進作用を有すること（特開２００５－２３２０５９号公報）、ｉｎ　ｖｉｖｏでインスリン抵抗性改善効果、コレステロール及びトリグリセリド低下作用を有すること（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１３（２００２），７１７－７２６）が報告されているクロロゲン酸の投与によって抑制された。従って、睡眠障害モデル系を用いることによりアディポネクチンの分泌を促進又は抑制するようなアディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択が可能である。
　以下に、本発明のアディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法について説明する。
　本発明において用いられる実験動物としては、睡眠障害のモデルとして使用可能な実験小動物であればよいが、例えばマウス、ラット、モルモット等げっ歯類であるのが好ましい。
　本発明において、動物に付加される「睡眠障害」としては、睡眠の生体における意義を検討する目的で考案されている公知の睡眠障害方法によって誘発される睡眠障害が挙げられ、このうちレム睡眠を阻害するものが好ましい。
　公知の睡眠障害方法としては、以下に示すような方法が挙げられるが、中でもプラットホーム法を用いるのが好ましい。
　１）プラットホーム法（Ｙｏｕｎｇｂｌｏｏｄ　ＢＤ　ｅｔ　ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｂｅｈａｖ．６７（５）６４３－６４９，（１９９９））プラットホーム法は、フラワーポット法とも呼ばれ、代表的な睡眠阻害方法である。
　この方法は睡眠のなかでもレム睡眠を比較的特異的に阻害できる方法である。
　この方法は、ケージの中に水を張り、実験動物がのることができる小さな円柱の台（プラットホーム）を設置するものである。動物はプラットホーム上で休むことができるが、レム睡眠に入ると筋肉が弛緩するため体勢が崩れ水面に体が触れることから、動物はノンレム睡眠をとることはできるが、レム睡眠をとることができない状態になる。
　具体的には、直径６－７ｃｍのステンレス製の円柱をラット飼育用アクリル樹脂性ケージに入れ、円柱の上部より１－２ｃｍ下まで水を張る。これに、２５０～４００ｇのラットを１匹ずつ入れ、飼育する。このときラットが餌と飲用水を自由に摂取することができるようにする。
　２）トレッドミル又はディスク法（Ｇｕｚｍａｎ－Ｍａｒｉｎ　Ｒ　ｅｔ　ａｌ．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２（８）：２１１１－２１１６（２００５）、Ｅｖｅｒｓｏｎ　ＣＡ　ｅｔ　ａｌ．Ａｍ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ　Ｍｅｔａｂ．２８６：１０６０－１０７０（２００４）．）。
　この方法は、これはケージの中に、トレッドミル又は回転するディスクを入れておき、定期的にトレッドミルまたはディスクを稼動させることにより、睡眠を阻害する方法である。
　３）飼育中に騒音を出して睡眠を阻害する方法（Ｒａｂａｔ　Ａ　ｅｔ　ａｌ．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．１０５９：８２－９２（２００５））
　この方法は、振動数が２０－３００ヘルツで強さが７０－８０デシベルの音を不定期にスピーカーより流し、睡眠を阻害するものである。
　４）動物に対するハンドリングにより睡眠を阻害する方法（Ｔｏｒｕ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｅｈａｖ．２０（５）：７５７－７６１（１９８４））
　この方法は、動物が睡眠に入ろうとするときに手で触ることにより睡眠を阻害するものである。
　睡眠障害負荷の期間は、睡眠障害の方法によっても異なり、通常１日～５日程度であるが、プラットホーム法を用いた場合、血中アディポネクチン濃度の低下は、睡眠障害負荷後１日で有意に低下することから、１～２日程度であればよい。
　被験物質の投与時期は、目的に応じて適宜選択すれば良く、実験動物に睡眠障害を負荷する前でも後でもよく、或いは睡眠障害の負荷と並行して行うことでも良い。
　投与方法は、経口投与、経皮投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、尾静脈投与、腹腔内投与等の何れでもよいが、好ましくは経口投与である。
　血清または血漿中のアディポネクチンの測定は、ＥＬＩＳＡ（酵素抗体）法、ラジオイムノアッセイ法、ウエスタンブロッティング法などにより行うことができる。
　具体的には、ラットａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ　ＥＬＩＳＡキット（ＡｄｉｐｏＧｅｎ社）等を用いて行うことができる。
　以上より、血中のアディポネクチン濃度に基づき、アディポネクチンの分泌調節物質を評価又は選択することができるが、この場合、例えばその濃度が、被験物質を投与しない対照の濃度と比較して統計的に有意に高ければ、該被験物質をアディポネクチン分泌促進剤として評価又は選択することができる。
　ここで、アディポネクチン分泌促進剤としては、アディポネクチンの発現を増強する等して、低アディポネクチン状態を改善する物質が挙げられる。斯かるアディポネクチン分泌促進剤は、低アディポネクチン状態によって引き起こされる疾患又は症状、例えば、低アディポネクチン血症、耐糖能障害、糖尿病、２型糖尿病、インスリン抵抗性症候群、糖尿病合併症、高血糖症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、心臓血管疾患、脳血管障害、血管狭窄、末梢血管疾患、動脈瘤、高脂血症、高コレステロール血症、肥満等の予防、治療又は改善のための医薬品又は食品となり得るものである。
　１．方法
　ＳＤラット（♂、１０～１１週齢）を体重が等しくなるように群分けした。ケージの中にラットが休息できる直径６．０ｃｍ高さ２．５ｃｍの円柱プラットホームを設置し、プラットホームの１ｃｍ下まで水を張った。このケージで１～４日間飼育（１匹／１ケージ）した。休息群は通常の床敷を入れたケージで飼育した（各群Ｎ＝４）。クロロゲン酸を投与する実験では、３０時間レム睡眠阻害のためのケージで飼育し、クロロゲン酸（５－ＣＱＡ，ｓｉｇｍａ社）投与群は１５０ｍｇ／ｋｇ（３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の用量で１２時間毎に３回ゾンデによる経口投与を行った。コントロール群には蒸留水を投与し、休息群は通常の床敷を入れたケージで飼育し、蒸留水を投与した（各群Ｎ＝６）。レム睡眠阻害終了後、直ちにフォーレン（大日本製薬）麻酔下で、腹大動脈より血液をベノジェクト真空採血管に採取し、得られたヘパリン血漿は使用まで－８０℃で保存した。血漿アディポネクチンはラットａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ　ＥＬＩＳＡキット（ＡｄｉｐｏＧｅｎ社）により測定を行った。血漿はキット中の希釈バッファーで１０００倍に希釈された後、キットプロトコールに従ってアディポネクチン濃度を測定した。
２．結果
（１）レム睡眠阻害が血漿アディポネクチンに与える影響
　レム睡眠阻害１日後においてすでに血漿アディポネクチンは休息群に比べて有意に低下し、レム睡眠阻害２，４日後においても血漿アディポネクチンは休息群に比べて有意に低下した。しかしながら、血漿アディポネクチンの低下はレム睡眠阻害の期間には依存せずレム睡眠阻害１～４日で低下の度合いは同等であった（図１）。
（２）レム睡眠阻害による血漿アディポネクチン低下に対するクロロゲン酸の効果
　レム睡眠阻害により、血漿アディポネクチンは有意に低下し、レム睡眠阻害による血漿アディポネクチンの低下をクロロゲン酸（ＣＱＡ）は、有意に抑制した（図２）。
　以上より、レム睡眠障害系は非常に短期間で血中アディポネクチンを低下させることができるため、この系を用いれば効率良くアディポネクチン分泌調節剤をスクリーニングすることが可能となる。

Claims (4)

  1. 　以下の（Ａ）～（Ｃ）の工程を含むことを特徴とする、アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法。
    　（Ａ）被験物質を実験動物に投与する工程
    　（Ｂ）実験動物に睡眠障害を負荷する工程
    　（Ｃ）血液中のアディポネクチン濃度を測定し、その変化を評価する工程
  2. 　睡眠障害の負荷がレム睡眠阻害である請求項１記載の方法。
  3. 　レム睡眠阻害がプラットホーム法による睡眠阻害である請求項２記載の方法。
  4. 　実験動物がラット又はマウスである請求項１～３のいずれか１項記載の方法。
PCT/JP2009/001720 2008-04-16 2009-04-14 アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法 WO2009128257A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/988,108 US8440464B2 (en) 2008-04-16 2009-04-14 Method for evaluation or selection of adiponectin secretion regulator
EP09732309A EP2270497B1 (en) 2008-04-16 2009-04-14 Method for evaluation or selection of adiponectin secretion regulator
CN2009801133101A CN102007410B (zh) 2008-04-16 2009-04-14 脂联素分泌调节剂的评价或选择方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2008-107047 2008-04-16
JP2008107047 2008-04-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009128257A1 true WO2009128257A1 (ja) 2009-10-22

Family

ID=41198962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2009/001720 WO2009128257A1 (ja) 2008-04-16 2009-04-14 アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US8440464B2 (ja)
EP (1) EP2270497B1 (ja)
JP (1) JP5432567B2 (ja)
CN (1) CN102007410B (ja)
WO (1) WO2009128257A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101604212B1 (ko) * 2015-07-17 2016-03-17 울산대학교 산학협력단 Ｎａｄ를 함유하는 비만 또는 내당능장애의 예방 및 치료용 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005232059A (ja) 2004-02-18 2005-09-02 Iichiro Shimomura 低アディポネクチン血症予防・治療剤
WO2005094866A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 Toudai Tlo, Ltd. アディポネクチン発現誘導剤およびその利用
JP2006273839A (ja) * 2005-03-04 2006-10-12 National Institute Of Advanced Industrial & Technology アディポネクチン産生増進剤
JP2007075071A (ja) * 2005-09-16 2007-03-29 Eisai R & D Management Co Ltd 睡眠障害マーカーおよび睡眠障害治療剤

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE602004020372D1 (de) * 2003-10-15 2009-05-14 Sekisui Medical Co Ltd Verfahren zur probenvorbehandlung sowie immunologisches testverfahren unter verwendung davon
US7781171B2 (en) 2003-10-15 2010-08-24 Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. Mehod of pretreating sample and immunological assay method using the same
ATE515699T1 (de) * 2004-03-31 2011-07-15 Kazuhisa Maeda Verwendung von adiponectin als marker in der vorhersage post-operativer infektion
KR100766273B1 (ko) * 2006-10-23 2007-10-15 주식회사 녹십자 아디포넥틴을 유효 성분으로 포함하는 프라더-윌리 증후군소아용 수면 장애 치료제
EP2020447A1 (en) 2007-08-03 2009-02-04 Zeltia, S.A. Method for identifying compounds modulating adiponectin gene expression

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005232059A (ja) 2004-02-18 2005-09-02 Iichiro Shimomura 低アディポネクチン血症予防・治療剤
WO2005094866A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 Toudai Tlo, Ltd. アディポネクチン発現誘導剤およびその利用
JP2006273839A (ja) * 2005-03-04 2006-10-12 National Institute Of Advanced Industrial & Technology アディポネクチン産生増進剤
JP2007075071A (ja) * 2005-09-16 2007-03-29 Eisai R & D Management Co Ltd 睡眠障害マーカーおよび睡眠障害治療剤

Non-Patent Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ARAKI K. ET AL., HYPERTENSION, vol. 48, 2006, pages 51 - 57
ARITA, Y. ET AL., BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 257, 1999, pages 79 - 83
ESRA TASALI ET AL.: "Slow-wave sleep and the risk of type 2 diabetes in humans", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA, vol. 105, no. 3, 22 January 2008 (2008-01-22), pages 1044 - 1049, XP008143370 *
EVERSON CA. ET AL., AM. J. PHYSIOL. ENDOCRINOL. METAB., vol. 286, 2004, pages 1060 - 1070
FASSHAUER. ET AL., BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 290, 2002, pages 1084 - 1089
FUJITA H. ET AL., ENDOCRINE J., vol. 52, 2005, pages 427 - 433
GALISTEO M. ET AL., J. NUTR., vol. 135, 2005, pages 2399 - 2404
GUZMAN-MARIN R. ET AL., EUR. J. NEUROSCI., vol. 22, no. 8, 2005, pages 2111 - 2116
HALLEUX, CM. ET AL., BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 288, 2001, pages 1102 - 1107
HALUZIK M. ET AL., ENDOCRINOLOGY, vol. 145, 2004, pages 3258 - 3264
JOURNAL OF NUTRITIONAL BIOCHEMISTRY, vol. 13, 2002, pages 717 - 726
KADOWAKI, T. ET AL., J. CLIN. INVEST., vol. 116, 2006, pages 1784 - 1792
NORBERT STEFAN ET AL.: "Plasma Adiponectin Concentration Is Associated With Skeletal Muscle Insulin Receptor Tyrosine Phosphorylation, and Low Plasma Concentration Precedes a Decrease in Whole-Body Insulin Sensitivity in Humans", DIABETES, June 2002 (2002-06-01), pages 1884 - 1888, XP008143374 *
RABAT A. ET AL., BRAIN RES., vol. 1059, 2005, pages 82 - 92
See also references of EP2270497A4 *
SPRANGER, J. ET AL., LANCET, vol. 361, 2003, pages 226 - 228
TORU M. ET AL., PHARMACOL. BIOCHEM. BEHAV., vol. 20, no. 5, 1984, pages 757 - 761
TSUCHIDA A. ET AL., DIABETES, vol. 54, no. 12, 2005, pages 3358 - 3370
YOUNGBLOOD BD. ET AL., PHYSIOL. BEHAV., vol. 67, no. 5, 1999, pages 643 - 649

Also Published As

Publication number Publication date
JP2009276341A (ja) 2009-11-26
EP2270497B1 (en) 2013-01-16
CN102007410B (zh) 2013-10-09
EP2270497A1 (en) 2011-01-05
CN102007410A (zh) 2011-04-06
JP5432567B2 (ja) 2014-03-05
US20110033877A1 (en) 2011-02-10
US8440464B2 (en) 2013-05-14
EP2270497A4 (en) 2012-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Krause et al. Diabetic myopathy differs between Ins2 Akita+/− and streptozotocin-induced type 1 diabetic models
Ostler et al. Effects of insulin resistance on skeletal muscle growth and exercise capacity in type 2 diabetic mouse models
Benedini et al. Irisin: a potential link between physical exercise and metabolism—an observational study in differently trained subjects, from elite athletes to sedentary people
Krause et al. Adiponectin is expressed by skeletal muscle fibers and influences muscle phenotype and function
De Lorenzo et al. Normal-weight obese syndrome: early inflammation?
Chu et al. Insulin resistance in postmenopausal women with metabolic syndrome and the measurements of adiponectin, leptin, resistin, and ghrelin
Su et al. FoxO1 links insulin resistance to proinflammatory cytokine IL-1β production in macrophages
Weber-Hamann et al. Metabolic changes in elderly patients with major depression: evidence for increased accumulation of visceral fat at follow-up
Kowalska et al. Insulin resistance, serum adiponectin, and proinflammatory markers in young subjects with the metabolic syndrome
Tokuyama et al. Serum resistin level is associated with insulin sensitivity in Japanese patients with type 2 diabetes mellitus
Yi et al. A transient metabolic recovery from early life glucose intolerance in cystic fibrosis ferrets occurs during pancreatic remodeling
Mitrou et al. Skeletal muscle insulin resistance in morbid obesity: the role of interleukin-6 and leptin
Meral et al. New adipocytokines (vaspin, apelin, visfatin, adiponectin) levels in children treated with valproic acid
Mitrou et al. Insulin action in morbid obesity: a focus on muscle and adipose tissue
Hannukainen et al. Higher free fatty acid uptake in visceral than in abdominal subcutaneous fat tissue in men
DK2929355T3 (en) ISOVALERYLGYLINE AS BIOMARKER FOR PREPARATION FOR WEIGHT GAIN AND OBESE
Gopalan et al. A 12-week aerobic exercise intervention results in improved metabolic function and lower adipose tissue and ectopic fat in high-fat diet fed rats
Ciresi et al. Hepatic steatosis index in acromegaly: correlation with insulin resistance regardless of the disease control
Babapour et al. Correlation of serum adipolin with epicardial fat thickness and severity of coronary artery diseases in acute myocardial infarction and stable angina pectoris patients
WO2005005665A1 (ja) Lceによる肥満治療に有効な化合物の評価方法
Seferovic et al. Increases in bioactive lipids accompany early metabolic changes associated with β-cell expansion in response to short-term high-fat diet
Hemmeryckx et al. Effect of premature aging on murine adipose tissue
Dong et al. Targeting adrenomedullin to improve lipid homeostasis in diabetic pregnancies
JP5432567B2 (ja) アディポネクチン分泌調節剤の評価又は選択方法
Stojakovic et al. Long-term consumption of high-fat diet impairs motor coordination without affecting the general motor activity

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200980113310.1

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09732309

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12988108

Country of ref document: US

Ref document number: 2009732309

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE