WO2006126504A1 - 銀被覆粒子およびその用途 - Google Patents

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WO2006126504A1
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silver
coated
substance
particles
bound
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English (en)
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Inventor
Kazumichi Iwata
Hiroshi Hinou
Shinichiro Nishimura
Original Assignee
National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles

Definitions

  • the present invention relates to silver-coated particles, silver-coated particles to which a biological substance or a physiologically active substance is bound, a method of performing an enzyme reaction using silver-coated particles, and separation, detection or storage of substances using silver-coated particles. On how to do.
  • magnetic particle carriers can be easily recovered by applying a magnetic field, so that a device such as a centrifuge is not required, which is excellent in convenience.
  • Patent Document 2 When using magnetic particles, the problem is that the reaction system is contaminated by the flow of magnetic components from the particles, and the activity of biological substances or physiologically active substances is inhibited.
  • polymer coating technology has been used exclusively.
  • the particle carrier coated with the polymer has a problem of non-specific adsorption in which substances other than the target substance are adsorbed. Further, the magnetic material component could not be sufficiently prevented from flowing out. It is difficult to sufficiently prevent the outflow of magnetic substance components even for fine particles (for example, Non-Patent Document 1) coated with a magnetic substance with gold, and also the effect of reducing nonspecific adsorption of biomolecules on the gold surface Even low power.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-116515
  • Patent Document 2 JP-A-7-82302
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 4-97912
  • Patent Document 4 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-118079
  • Non-Patent Document l IEEE.Transaction on Magnetics, Vol. 35, No. 5 (1999), p3496- 3498 Disclosure of the Invention
  • An object of the present invention is to provide a particle carrier capable of preventing the outflow of particle core components from the particle carrier and stably binding a biological substance or a physiologically active substance.
  • the present inventors have found that the particle core component can be prevented from flowing out by coating the particle core component with silver, and the present invention is completed. It came.
  • the present invention includes the following inventions.
  • a method for separating a target substance from a mixture comprising using silver-coated particles having a substance that binds the target substance on the surface thereof.
  • a particle carrier capable of preventing the outflow of a particle core component having a particle carrier force and stably binding a biological substance or a biologically active substance.
  • FIG. 1 shows the results of HPLC analysis when peptides were incubated in the presence of magnetic particles without silver coating.
  • FIG. 2 shows a spectrum of M ALDI-TOF MS when the peptide was incubated in the presence of magnetic particles having no silver coating.
  • FIG. 3 shows the relationship between peptide cleavage rate and time in the presence of silver-coated magnetic particles or magnetic particles without silver coating.
  • FIG. 4a shows an HPLC chart of a peptide solution incubated in the presence of silver-coated magnetic particles.
  • FIG. 4b shows a MALDI-TO F MS spectrum of a peptide solution incubated in the presence of silver-coated magnetic particles.
  • FIG. 5 shows the relationship between incubation time and galactose transfer rate when glycopeptides are incubated in the presence of MBP-GalT-bound silver-coated magnetic particles and UDP-Gal.
  • FIG. 7 shows a schematic diagram of silver-coated particles of the present invention.
  • (a) shows a silver-coated particle in which the particle core component is coated with silver.
  • (B) shows silver-coated particles to which biological substances are bound.
  • (C) shows silver-coated particles having a utility ligand on the surface.
  • (d) shows silver-coated particles in which a biological substance is bound via a affine ligand.
  • e shows a particle in which the affinity ligand is bound to a particle in which the entire particle including the particle core component is silver.
  • the silver-coated particles of the present invention are particles in which the particle core component is coated with silver.
  • the core component is a component that substantially constitutes the particle, and is a component other than the silver coating layer.
  • the particle core component those usually used in this technical field can be used, and there is no particular limitation, and it is also possible to use inorganic materials and organic materials!
  • inorganic materials include gold, silver, copper, aluminum, tungsten, cobalt, molybdenum, chromium, platinum, titanium, nickel, and other metals, stainless steel, hastelloy, inconel, alloys such as monel and duralumin, magnetite, and the like.
  • metal oxides such as ferrite, laminates of the above metals and ceramics, silicon, silica, glass, fused silica, synthetic quartz, alumina, sapphire, ceramics, forsterite, and photosensitive glass.
  • organic material examples include fluorine resin such as polytetrafluoroethylene (PTFE) and polyvinylidene fluoride (PVDF), polypropylene, polyethylene, polybutene, polystyrene, polychlorinated butyl, polybutyl alcohol and polyacetic acid.
  • fluorine resin such as polytetrafluoroethylene (PTFE) and polyvinylidene fluoride (PVDF), polypropylene, polyethylene, polybutene, polystyrene, polychlorinated butyl, polybutyl alcohol and polyacetic acid.
  • Polyolefins such as bulls, polyamides such as nylon (eg nylon 6, nylon 66, nylon 11, nylon 12, nylon MX D6), polyesters such as polybutylene terephthalate, polyethylene terephthalate and polytrimethylene terephthalate, polycarbonate, polyurethane, poly Examples include polymer materials such as lactic acid, ABS resin (Acrylonitrile Butadiene Styrene resin), acrylic resin, methyl pentene resin, phenol resin, melamine resin and epoxy resin.
  • the particle core component is preferably a component containing a magnetic substance.
  • the component containing a magnetic material is preferably a component containing a ferromagnetic material.
  • Ferromagnetic materials include iron, cobalt, nickel, gadolinium, terbium, dysprosium, holmium, erbium and thulium, and alloys containing these (eg, iron-cobalt alloys), oxides and complex oxides (eg, magnetite). (Fe 2 O 3), Maghemite ( ⁇ —Fe 2 O 3), manganese zinc ferrule
  • the component to be included may be in the form of a polymer material including the magnetic material.
  • the polymer material the same materials as described above can be used.
  • particles in which a particle core component containing a magnetic material is coated with silver are referred to as silver-coated magnetic particles.
  • silver-coated magnetic particles include silver-coated magnetic particles.
  • the silver-coated particles also include particles in which the entire particle including the particle core component is composed of silver. Particles containing a magnetic material as a particle core component are advantageous because they can be easily operated by combining with a magnet.
  • the silver-coated particle of the present invention is characterized in that the particle core component is coated with silver.
  • a method of coating the core component with silver a method usually used in this technical field can be used, and there is no particular limitation. For example, it can be carried out by subjecting particles comprising particle core components to an electroless plating process.
  • Electroless plating treatment includes (1) a method in which particles are immersed in a solution containing a complexing agent, a reducing agent, etc., and a solution containing silver ions is dropped, and (2) a silver ion, a complexing agent, etc.
  • a method of immersing particles in a solution containing the solution and dropping the reducing agent solution (3) a method of immersing in a solution containing silver ion, a complexing agent, a reducing agent, etc. and dropping caustic alkali, etc. are used.
  • Examples of the solution containing silver ions include a silver nitrate solution, a silver sulfate solution, a silver acetate solution, a solution in which silver is dissolved in nitric acid, and a solution in which silver is dissolved in sulfuric acid.
  • As complexing agents ammonia and Z or salts of ethylenediamine tetraacetic acid, nitrotriacetic acid, triethylenetetramine hexaacetic acid, etc. are used.
  • As reducing agents formalin, hydrazine and its derivatives, tartaric acid, glucose, alkyl mercaptan and Derivatives thereof, allyl mercabtan and derivatives thereof are used.
  • a sodium hydroxide aqueous solution is slowly dropped into the aqueous solution of sulfuric acid and ferrous iron with stirring to form a precipitate of hydroxide and ferrous iron.
  • the temperature of the suspension is raised to 85 ° C with stirring, and then oxygenated with an air pump at a speed of 200 LZhr for 8 hours with oxygen to generate magnetite particles.
  • Preparation of silver-coated particles To a uniform dispersion obtained by adding 10 g of magnetite particles and 0.1 lg of sodium dodecyl sulfate to 3 Oml of distilled water, add 0.75 g of silver nitrate and adjust to pH 8 with 10% aqueous ammonia. The suspension is heated to 60 ° C, and then 1 ml of 36% formaldehyde solution is added dropwise and stirred for 2 hours. Filter and wash the fine particles, then dry at 100 ° C for 3 hours. The silver coverage of the resulting fine particles is about 5% by mass.
  • the silver coating amount is usually 0.1 to 20% by mass, preferably 1 to 10% by mass.
  • the average particle size of the silver-coated particles of the present invention is usually 0.05 to 20 ⁇ m, preferably 0.1 to 10 ⁇ m.
  • silver is also more stable than other metals and has a feature that it is less likely to cause side reactions. Furthermore, since silver has a bactericidal effect, it can prevent microbial degradation when handling biological materials. Even if silver ions are eluted, precipitation and separation can be performed very simply by adding salt and chloride ions. In addition, it has the advantage that it has very little non-specific adsorption compared to other metal coatings.
  • the silver-coated particles of the present invention are suitable for binding a biological substance or a physiologically active substance to the surface thereof.
  • the physiologically active substance include various drugs having biological activity in vivo, such as a compound that specifically binds to a receptor in a cell or a cell membrane and generates biological activity.
  • Biological substances include peptides, nucleic acids, lipids, carbohydrates, cells and viral vesicles.
  • Peptides include oligopeptides, polypeptides and proteins, and peptide derivatives. Tan The protein includes antibodies, enzymes, receptors and the like.
  • Peptide derivatives include fusion peptides fused with other peptides, glycopeptides, chemically modified peptides bound to polymers such as polyethylene glycol, post-translationally modified peptides, and the like.
  • Post-translational modifications of peptides include phosphorylation, acetylation, methylation, myristoylation, glycosylation, amidylation and ubiquitination.
  • Nucleic acids include DNA and RNA, as well as single and double stranded nucleic acids.
  • Carbohydrates include monosaccharides, oligosaccharides, polysaccharides, glycolipids, glycopeptides, glycoproteins, glycosides and the like.
  • Cells, virus vesicles and the like include intracellular organelles, fungi, ribosomes and the like.
  • the biological substance or physiologically active substance can be bound to the silver-coated particles by a method usually used in the art.
  • the bond may be a covalent bond or a non-shared bond such as an electrostatic bond.
  • a chemical modification group reactive with a biological substance or a physiologically active substance can be introduced on the particle surface, and the biological substance or the physiologically active substance can be bound to the particle surface via the chemical modification group.
  • the chemically modifying group introduced to the particle surface include an amino group, a carboxyl group, an epoxy group, a formyl group, a hydroxyl group, and an activated ester group. It is also effective to introduce a metal chelate group such as nickel chelate or cobalt chelate. Metal chelating groups are suitable for peptide binding.
  • the chemical modifying group may be introduced to the particle surface via a spacer.
  • the biological substance can also be bound to the particle surface via the affinity ligand.
  • the present invention also relates to a silver-coated particle having a utility ligand on the particle surface, and a silver-coated particle in which a biological substance is bound to the particle surface via the affinity ligand.
  • the affinity ligand is a substance having a property of adsorbing the target biological substance, and can be appropriately selected by those skilled in the art depending on the kind of substance to be bound to the particles.
  • Specific examples of affinity ligands include, for example, amylose, antibodies, histidine tags, silan coupling agents, cellulose derivatives such as nitrocellulose, polycations (polylysine, polyethyleneimine, etc.), and reactive ends.
  • One molecule of the linker possessed.
  • the present invention also relates to a method for carrying out an enzyme reaction using silver-coated particles having an enzyme bound to the surface thereof.
  • the method of the present invention usually comprises the steps of contacting the enzyme-bound silver-coated particles with a substrate and separating the enzyme-bound silver-coated particles from the reaction system. Enzyme-bound silver-coated particles Separation from the reaction system can be carried out by filtration, centrifugation or a method using a magnet. In the case of silver-coated particles containing a magnetic substance as a core component, the particles can be more easily separated without performing centrifugation or the like by a method using a magnet. The separated enzyme-bound silver-coated particles can be used again for the enzyme reaction, which is advantageous in terms of cost.
  • the outflow of the particle core component to the reaction system is prevented, so that the enzyme may be decomposed or the enzyme reaction may be inhibited by the component.
  • a magnetic substance having an activity of decomposing a peptide as a nuclear component for example, particles containing magnetite.
  • the enzyme reaction is not hindered.
  • the enzyme that can be used in the enzyme reaction of the present invention is not particularly limited, and any of transferase, oxidoreductase, hydrolase, isomerase, and ligase can be used.
  • transferases include glycosyltransferases, specifically sialyltransferases, galactose transferases, N-acetylyl darcosamine transferases, N-acetyl galatatosamine transferases, mannose transferases, glucose Examples thereof include transferase, fucose transferase, xylose transferase, and glucuronyl transferase sugar.
  • the present invention also relates to a method for separating a target substance from a mixture, characterized by using silver-coated particles having a substance that binds the target substance on the surface thereof.
  • Substances that bind the target substance include substances that specifically interact with and bind to the target substance and substances that adsorb the target substance. Specific interactions include antigen-antibody reaction, avidin-biotin binding reaction, enzyme-substrate binding reaction, hybridization between nucleic acid and complementary chain, ligand-receptor binding reaction, nucleic acid-transcription factor binding reaction And a cell adhesion factor binding reaction, a bond formation reaction between a carbonyl group and an oxyamino group or a hydrazide group.
  • the substance that adsorbs the target substance examples include the above-mentioned affinity ligand.
  • the mixture to be separated is not particularly limited as long as it can contain a substance that can bind to the substance bound to the silver-coated particles.
  • Examples include expression products, cell extracts, cell culture supernatants, fermented microorganism products, marine organism extracts, plant extracts and the like.
  • the separation method of the present invention comprises a step of bringing a silver-coated particle having a substance that binds a target substance on its surface and a mixture into contact with each other, and a step of separating silver-coated particles to which the target substance is bound.
  • a silver-coated particle having a substance that binds a target substance on its surface and a mixture into contact with each other
  • a step of separating silver-coated particles to which the target substance is bound Including. Particles can be separated by filtration, centrifugal separation, a method using a magnet, and the like, as in the case of enzyme-bound silver-coated particles. Since silver-coated particles have very little nonspecific adsorption, the separation method of the present invention can separate only the target substance and is excellent in selectivity.
  • the present invention also relates to a method for detecting a substance that interacts with a biological substance using silver-coated particles having the biological substance bound to the surface thereof.
  • Biological substance interactions include antigen-antibody reaction, avidin-piotine binding reaction, enzyme-substrate binding reaction, hybridization between nucleic acid complementary strands, ligand-receptor binding reaction, nucleic acid-transcription factor binding reaction And specific interactions such as the binding reaction of cell adhesion factors.
  • the detection method of the present invention includes a step of bringing silver-coated particles having biological substances bound to the surface thereof into contact with a sample, and a step of detecting substances interacting with the biological substances on the silver-coated particles.
  • a substance that interacts with a biological substance bound to silver-coated particles can also be screened. Although it does not restrict
  • Compound libraries Compound libraries, gene library expression products, cell extracts, cell culture supernatants, fermented microorganism products, marine organism extracts, plant extracts and the like.
  • the specific interaction can be detected by, for example, a method commonly used in the art. Examples thereof include mass spectrometry and a method using a label. Methods using labels include radioisotopes, enzymes such as alkaline phosphatase, acid phosphatase, peroxidase, 13 galactosidase, glucose 6-phosphate dehydrogenase and luciferase, and fluorescent agents such as fluorescein, rhodamine, Cy3, Cy5, chemical Examples include luminescent molecules. It can also be detected by immunoprecipitation. As mass spectrometry, for example, TOF-MS method can be used.
  • the present invention also relates to a method for preserving a biological material or physiologically active substance by binding the biological substance or physiologically active substance to the surface of silver-coated particles.
  • a biological material or physiologically active substance by binding the biological substance or physiologically active substance to the surface of silver-coated particles.
  • particle core components are prevented from flowing out, and since silver is stable and does not easily cause side reactions, biological or bioactive substances bound to the particles are decomposed during storage. There is nothing.
  • silver since silver has a bactericidal effect, it can also prevent degradation of biological substances or physiologically active substances by microorganisms.
  • Magnetic beads manufactured by Toyobo Co., Ltd.
  • 500 ⁇ l of 100 mM HEPES pH7.4, 0.1% NaN, 0.1% Triton—X 100 containing 50 mg for 48 hours
  • Figure 1 shows the results of HPLC analysis of the peptide.
  • Fig. 2 shows the spectrum of M ALDI-TOF MS at that time. The part indicated by the arrow represents the fragment generated by cleaving the peptide! /
  • Silver-coated magnetic particles 1 (silver coating amount: about 3% by mass)
  • Silver-coated magnetic particles 2 (Silver coverage: approx. 5% by mass)
  • Fig. 3 shows the relationship between the cleavage rate of peptides and the time for which the analytical analysis power of HPLC was also determined.
  • Figure 3 shows that using magnetic particles coated with silver rather than conventional magnetic particles is less likely to cleave the peptide, and there are no misaligned particles. I understand that.
  • FIGS. 4a and 4b show an HPLC chart and a MALDI-TOF MS spectrum of a peptide solution incubated for 2 days in the presence of silver-coated magnetic particles 2, respectively. From the figure, it can be seen that the peptide incubated in the presence of silver-coated magnetic particles is hardly cleaved after 4 days. In addition, when silver-coated magnetic particles 1 were used, the results were almost the same as when silver-coated magnetic particles 2 were used.
  • W represents the D-form of Trp
  • silver-coated magnetic particles (20 mg, silver-coated magnetic material of Example 1) bound with about 36 ⁇ g of MBP—GalT (maltose-binding protein-recombinant protein of galactose transferase) Particles 1) and ImM UDP—500 lOmM HE PES buffer containing Gal (pH 7.4, 10 mM MnCl, O. l% NaN, O. l% Triton— X 100)
  • Fig. 5 shows the incubation time and the transfer rate of galactose. Galactose was transferred over time, and the transfer rate was almost 100% after 8 hours.
  • Figure 6 shows the change in the MALDI-T OF MS spectrum. It can be seen that a difference peak of 162 corresponding to the molecular weight difference of galactose appears before and after the reaction. This indicates that the galactose transferase bound to the silver-coated magnetic particles is functioning. That is, in the silver-coated magnetic particles of the present invention, it is shown that the nuclear component containing the magnetic substance does not easily flow out, so that the enzyme bound to the particles is decomposed or the enzyme reaction proceeds without being inhibited. It was. Industrial applicability
  • the present invention relates to an automatic biomolecule purification apparatus, rapid analysis of biomolecules, long-term storage of biomolecules and biodegradable substances, rapid separation and purification in enzyme reactions, repeated use, continuous enzyme reaction automation apparatus, sugar chain
  • the present invention can be applied to an automatic synthesizer, an analysis pretreatment automation device, and the like.

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Abstract

　粒子担体からの粒子核成分の流出を防止し、生理活性物質を安定に結合できる粒子担体を提供することを目的とする。本発明は、磁性体を含む粒子核成分が銀で被覆されてなる銀被覆磁性粒子に関する。

Description

明 細 書
銀被覆粒子およびその用途
技術分野
[0001] 本発明は、銀被覆粒子、生体物質または生理活性物質が結合した銀被覆粒子、銀 被覆粒子を用いて酵素反応を行う方法、ならびに銀被覆粒子を用いて物質を分離、 検出または保存する方法に関する。
背景技術
[0002] 従来から、核酸、ペプチド、糖質および脂質などを含有する試料から、目的とする 生体物質を単離する方法が種々検討されている。かかる方法としては、有機溶媒を 用いて抽出分離する方法、分子ふるい (フィルター）を用いて分子の大きさを基に目 的物質を単離する方法、特定の生体物質が可逆的に結合し得る担体を利用して単 離する方法などが知られている。中でも粒子担体を利用して単離する方法は、多数 の試料を同時に扱う際に利点が多い (例えば、特許文献 1)。また、粒子担体に酵素 を結合させて酵素反応を行い、反応終了後、担体に結合した酵素を分離'回収して 再利用することもできるため、粒子担体は、酵素反応においても有用である。
[0003] 上記のような粒子担体の中でも、磁性を有する粒子担体 (磁性粒子）は、磁場を与 えることで簡便に回収できるため、遠心分離機などの装置が不要であり、利便性に優 れている（例えば、特許文献 2)。磁性粒子の使用にあたっては、粒子から磁性体成 分が流出することにより反応系が汚染され、生体物質または生理活性物質の活性が 阻害されることが問題であった。このような磁性体成分の流出防止には、もっぱらポリ マーによる被覆技術が利用されてきた。しかし、ポリマーによって被覆された粒子担 体においては、目的とする物質以外の物質が吸着するという非特異的吸着の問題が あった。また、磁性体成分の流出を十分に防止することはできな力つた。磁性体を金 で被覆した微粒子 (例えば、非特許文献 1)についても磁性体成分の流出を十分に 防止することが難しぐさらに、金表面への生体分子の非特異的吸着などを低減する 効果も低力つた。
[0004] 一方、導電性材料または電磁波シールド材料として、銀で被覆した粒子の使用が 報告されている（例えば、特許文献 3および 4)。しかし、銀で被覆した粒子を生体物 質や生理活性物質を結合させる目的で利用した例はない。
特許文献 1 :特開 2003— 116515号公報
特許文献 2 :特開平 7— 82302号公報
特許文献 3：特開平 4— 97912号公報
特許文献 4 :特開平 2— 118079号公報
非特許文献 l : IEEE.Transaction on Magnetics, Vol. 35, No. 5 (1999), p3496- 3498 発明の開示
[0005] 本発明は、粒子担体からの粒子核成分の流出を防止し、生体物質または生理活性 物質を安定に結合できる粒子担体を提供することを目的とする。
[0006] 本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、粒子核成分を銀で 被覆することにより、粒子核成分の流出を防止できることを見いだし、本発明を完成 するに至った。
[0007] すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
[0008] (1)磁性体を含む粒子核成分が銀で被覆されてなる銀被覆磁性粒子。
[0009] (2)粒子核成分が、強磁性体、強磁性体を含む合金またはこれらを含む高分子材料 を含む、（1)記載の銀被覆磁性粒子。
[0010] (3)表面にァフィユティーリガンドを有する、（1)または（2)記載の銀被覆磁性粒子。
[0011] (4)表面に生体物質または生理活性物質が結合した、（1)〜（3)のいずれかに記載 の銀被覆磁性粒子。
[0012] (5)表面にペプチド、核酸、糖質および脂質力 なる群力 選択される生体物質が結 合した、（4)記載の銀被覆磁性粒子。
[0013] (6)表面に生体物質または生理活性物質が結合した銀被覆粒子。
[0014] (7)生体物質がァフィユティーリガンドを介して粒子表面に結合している、（6)記載の 銀被覆粒子。
[0015] (8)表面にペプチド、核酸、糖質および脂質力 なる群力 選択される生体物質が結 合した、（6)または（7)記載の銀被覆粒子。
[0016] (9)生体物質または生理活性物質を結合するための、銀被覆粒子。 [0017] (10)酵素がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて酵素反応を行う方法。
[0018] (11)生体物質がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて、該生体物質と相互作用 する物質を検出する方法。
[0019] (12)混合物から目的の物質を分離する方法であって、該目的の物質を結合する物 質をその表面に有する銀被覆粒子を用いることを特徴とする、前記方法。
[0020] (13)生体物質または生理活性物質を銀被覆粒子の表面に結合させることにより、該 生体物質または生理活性物質を保存する方法。
[0021] (14)銀被覆粒子の核成分が磁性体を含む、（10)〜（13)のいずれか〖こ記載の方法
[0022] 本発明により、粒子担体力 の粒子核成分の流出が防止され、生体物質または生 理活性物質を安定に結合できる粒子担体が提供される。
[0023] 本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願第 2005— 149938号 の明細書、請求の範囲および Zまたは図面に記載された内容を包含する。
図面の簡単な説明
[0024] [図 1]銀被覆を有しな 、磁性粒子の存在下でペプチドをインキュベートした場合の H PLC分析の結果を示す。
[図 2]銀被覆を有しない磁性粒子の存在下でペプチドをインキュベートした場合の M ALDI-TOF MSのスペクトルを示す。
[図 3]銀被覆磁性粒子または銀被覆を有しない磁性粒子の存在下におけるペプチド の切断率と時間の関係を示す。
[図 4a]銀被覆磁性粒子の存在下でインキュベートしたペプチド溶液の HPLCチヤ一 卜を示す。
[図 4b]銀被覆磁性粒子の存在下でインキュベートしたペプチド溶液の MALDI— TO F MSスペクトルを示す。
[図 5]MBP - GalT結合銀被覆磁性粒子および UDP - Galの存在下、糖ペプチドを インキュベートした場合の、インキュベーション時間とガラクトースの転移率の関係を 示す。
[図 6]MBP - GalT結合銀被覆磁性粒子および UDP - Galの存在下、糖ペプチドを インキュベートした場合の、 MALDI—TOF MSスペクトルの変化を示す。
[図 7]本発明の銀被覆粒子の模式図を示す。 (a)は、粒子核成分が銀で被覆された 銀被覆粒子を示す。（b)は、生体物質が結合した銀被覆粒子を示す。（c)は、表面 にァフィユティーリガンドを有する銀被覆粒子を示す。 (d)は、生体物質がァフィ-テ ィーリガンドを介して結合した銀被覆粒子を示す。 (e)は、粒子核成分を含む粒子全 体が銀力 なる粒子にァフィユティーリガンドが結合した粒子を示す。
符号の説明
[0025] 1 · · '銀被覆層、 2· · '粒子核成分、 3 · · ·生体物質、 4· · 'ァフィ-ティーリガンド、 5 · ·
•銀力 なる粒子核成分
発明を実施するための最良の形態
[0026] 本発明の銀被覆粒子は、粒子核成分が銀で被覆された粒子である。核成分は、粒 子を実質的に構成する成分であって、銀被覆層以外の成分である。粒子核成分とし ては、当技術分野で通常用いられるものを使用でき、特に制限されず、無機材料お よび有機材料の!/、ずれも使用できる。
[0027] 無機材料としては、金、銀、銅、アルミニウム、タングステン、コバルト、モリブデン、ク ロム、白金、チタンおよびニッケル等の金属、ステンレス、ハステロイ、インコネル、モ ネルおよびジュラルミン等の合金、マグネタイトおよびフェライト等の金属酸ィ匕物、上 記金属とセラミックスとの積層体、シリコン、シリカ、ガラス、溶融石英、合成石英、アル ミナ、サファイア、セラミタス、フォルステライトならびに感光性ガラス等が挙げられる。
[0028] 有機材料としては、ポリテトラフルォロエチレン (PTFE)およびポリビ-リデンフルォ ライド (PVDF)などのフッ素榭脂、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリブテン、ポリスチ レン、ポリ塩化ビュル、ポリビュルアルコールおよびポリ酢酸ビュルなどのポリオレフィ ン、ナイロン（例えば、ナイロン 6、ナイロン 66、ナイロン 11、ナイロン 12、ナイロン MX D6)などのポリアミド、ポリブチレンテレフタレート、ポリエチレンテレフタレートおよび ポリトリメチレンテレフタレートなどのポリエステル、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリ 乳酸、 ABS榭脂（Acrylonitrile Butadiene Styrene榭脂）、アクリル榭脂、メチル ペンテン榭脂、フエノール榭脂、メラミン榭脂およびエポキシ榭脂などの高分子材料 が挙げられる。 [0029] 本発明にお ヽては、粒子核成分は、磁性体を含む成分が好ま Uヽ。磁性体を含む 成分としては、強磁性体を含む成分が好ましい。強磁性体としては、鉄、コバルト、二 ッケル、ガドリゥム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウムおよびツリウム 、ならびにこれらを含む合金 (例えば、鉄 コバルト合金）、酸化物および複合酸ィ匕 物（例えば、マグネタイト（Fe O )、マグへマイト（γ— Fe O )、マンガン亜鉛フェライ
3 4 2 3
ト（Mn Zn Fe O )、ノリウムフェライト粒子（BaFe O ) )が挙げられる。磁性体を l -x X 2 4 12 19
含む成分は、上記磁性体を含む高分子材料の形態とすることもできる。高分子材料 としては、上記と同様のものを使用できる。本発明においては、磁性体を含む粒子核 成分が銀で被覆されてなる粒子を、銀被覆磁性粒子と称し、本発明において銀被覆 粒子には、銀被覆磁性粒子も包含される。また銀被覆粒子には、粒子核成分を含め た粒子全体が銀で構成される粒子も包含される。粒子核成分として磁性体を含む粒 子は、磁石と組み合わせることにより、簡便に操作することができるため有利である。
[0030] 本発明の銀被覆粒子は、上記粒子核成分が銀で被覆されて ヽることを特徴とする 。核成分を銀で被覆する方法としては、当技術分野で通常用いられている方法を使 用でき特に制限されない。例えば、粒子核成分からなる粒子を無電解めつき処理に 付すことによって実施することができる。無電解めつき処理としては、（1)錯化剤、還 元剤等を含む溶液中に粒子を浸漬し銀イオンを含む溶液を滴下する方法、（2)銀ィ オン、錯化剤等を含む溶液に粒子を浸漬し還元剤溶液を滴下する方法、（3)銀ィォ ン、錯化剤、還元剤等を含む溶液に浸漬し苛性アルカリを滴下する方法等が用いら れる。
[0031] 銀イオンを含む溶液としては、例えば、硝酸銀溶液、硫酸銀溶液、酢酸銀溶液、銀 を硝酸に溶解した溶液、銀を硫酸に溶解した溶液等が用いられる。錯化剤としては、 アンモニアおよび Zまたはエチレンジァミン四酢酸、ニトロ三酢酸、トリエチレンテトラ ミン六酢酸等の塩類が用いられ、還元剤としては、ホルマリン、ヒドラジンおよびその 誘導体、酒石酸、ブドウ糖、アルキルメルカプタンおよびその誘導体、ならびにァリル メルカブタンおよびその誘導体等が用いられる。
[0032] 磁性体としてマグネタイト (Fe O )を含む核成分が銀で被覆された粒子の製造方
3 4
法の一実施態様を以下に示す。 [0033] マグネタイト粒子の調製： 10gの硫酸化第一鉄 (FeSO · 7H O)を 100mlの蒸留水
4 2
に溶解する。この硫酸第一鉄と等モルの水酸ィ匕ナトリウムを 50mlの蒸留水に溶解す る。次に硫酸ィ匕第一鉄水溶液に水酸ィ匕ナトリウム水溶液を撹拌しながらゆっくり滴下 し水酸ィ匕第一鉄の沈殿物を生成させる。滴下後、撹拌しながらこの懸濁液の温度を 85°Cまで上げその後 200LZhrの速度でエアーポンプを使用して空気を吹き込みな 力 8時間酸ィ匕してマグネタイト粒子を生成させる。
[0034] 銀被覆粒子の調製:マグネタイト粒子 10gとドデシル硫酸ナトリウム 0. lgを蒸留水 3 Omlに加えた均一な分散液に、硝酸銀 0. 75gを加え、 10%アンモニア水で pH8に 調製する。この懸濁液を 60°Cまで昇温した後、 36%ホルムアルデヒド溶液 lmlを滴 下し 2時間攪拌する。微粒子をろ取洗浄した後、 100°Cで 3時間乾燥する。得られる 微粒子の銀被覆量は約 5質量％である。
[0035] 本発明の銀被覆粒子にぉ 、て、銀の被覆量は、通常 0. 1〜20質量％、好ましくは 1〜10質量％である。上記の被覆量とすることにより銀イオンの溶出を確実に防止す ることができるとともに、磁性体としての能力も効果的に維持することができる。本発明 の銀被覆粒子の平均粒径は、通常 0. 05〜20 μ m、好ましくは 0. 1〜10 μ mである
[0036] 粒子を銀で被覆することにより、粒子核成分の流出を効果的に防止することができ る。また、銀は他の金属に比べ、安定であり副反応の原因となりにくいという特徴を有 する。さらに、銀は殺菌効果があるため、生体物質を取り扱う場合その微生物分解を 防ぐことができる。たとえ銀イオンが溶出した場合も塩ィ匕物イオンを添加することにより 極めて簡便に沈澱処理 ·分離することが可能である。また、他の金属被覆等と比較し て非特異的吸着が極めて少な ヽと 、う利点を併せ持つ。
[0037] 従って、本発明の銀被覆粒子は、生体物質または生理活性物質をその表面に結 合するために好適である。生理活性物質には、生体内において生物学的活性を有 する各種薬剤が含まれ、例えば、細胞内または細胞膜にあるレセプターと特異的に 結合して生物学的活性を生じる化合物などが挙げられる。生体物質には、ペプチド、 核酸、脂質、糖質、細胞およびウィルス小胞等が包含される。ペプチドには、オリゴぺ プチド、ポリペプチドおよびタンパク質、ならびにペプチド誘導体が包含される。タン パク質には、抗体、酵素およびレセプター等が包含される。ペプチド誘導体としては 、その他のペプチドと融合した融合ペプチド、糖ペプチド、ポリエチレングリコールな どのポリマーに結合させた化学修飾ペプチド、および翻訳後修飾されたペプチドなど が含まれる。ペプチドの翻訳後修飾としては、リン酸化、ァセチル化、メチル化、ミリス トイル化、グリコシル化、アミドィ匕およびュビキチン化などが挙げられる。核酸には、 D NAおよび RNA、ならびに 1本鎖核酸および 2本鎖核酸が包含される。糖質には単 糖、オリゴ糖、多糖、糖脂質、糖ペプチド、糖タンパク質、配糖体等が包含される。細 胞およびウィルス小胞等には細胞内小器官、菌類、リボソーム等が包含される。
[0038] 生体物質または生理活性物質は、当技術分野で通常用いられる方法により、銀被 覆粒子に結合させることができる。結合は、共有結合でもよぐ静電結合などの非共 有結合でもよい。例えば、生体物質または生理活性物質と反応性の化学修飾基を粒 子表面に導入し、該化学修飾基を介して生体物質または生理活性物質を粒子表面 に結合させることができる。粒子表面に導入する化学修飾基としては、例えば、ァミノ 基、カルボキシル基、エポキシ基、ホルミル基、ヒドロキシル基および活性化エステル 基が挙げられる。また、ニッケルキレート、コバルトキレート等の金属キレート基を導入 することも有効である。金属キレート基はペプチドの結合に好適である。化学修飾基 は、スぺーサーを介して粒子表面に導入してもよい。
[0039] 生体物質は、ァフィユティーリガンドを介して粒子表面に結合させることもできる。従 つて、本発明はまた、粒子表面にァフィユティーリガンドを有する銀被覆粒子、ならび に生体物質がァフィユティーリガンドを介して粒子表面に結合した銀被覆粒子に関 する。ァフィ二ティーリガンドは、 目的の生体物質を吸着する性質を有する物質であり 、当業者であれば粒子に結合させようとする物質の種類により適宜選択できる。ァフ ィ-ティーリガンドの具体例としては、例えば、アミロース、抗体、ヒスチジンタグ、シラ ンカップリング剤、ニトロセルロースなどのセルロース誘導体、ポリ陽イオン（ポリリシン 、ポリエチレンィミン等）、反応性末端を有するリンカ一分子等が挙げられる。
[0040] 本発明はまた、酵素がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて酵素反応を行う方 法に関する。本発明の方法は、通常、酵素結合銀被覆粒子を基質と接触させる工程 、酵素結合銀被覆粒子を反応系から分離する工程を含む。酵素結合銀被覆粒子の 反応系からの分離は、ろ過、遠心分離または磁石を用いる方法により実施できる。核 成分に磁性体を含む銀被覆粒子の場合は、磁石を用いる方法により遠心分離等を 実施することなく粒子をより簡便に分離できる。分離した酵素結合銀被覆粒子は、再 度、酵素反応に使用することができるためコストの面力もも有利である。
[0041] 本発明の銀被覆粒子を用いた酵素反応では、粒子核成分の反応系への流出が防 止されるため、当該成分によって酵素が分解されたり、酵素反応が阻害されたりする ことがなぐ特に核成分にペプチドを分解する活性を有する磁性体、例えばマグネタ イトを含む粒子を用いる場合に有利である。また銀は安定であり副反応の原因となり にくいため、酵素反応が阻害されることもない。
[0042] 本発明の酵素反応に使用できる酵素は、特に制限されず、転移酵素、酸化還元酵 素、加水分解酵素、異性化酵素、リガーゼのいずれも使用できる。例えば、転移酵素 としては、糖転移酵素、具体的には、シアル酸転移酵素、ガラクトース転移酵素、 N- ァセチルダルコサミン転移酵素、 N-ァセチルガラタトサミン転移酵素、マンノース転 移酵素、グルコース転移酵素、フコース転移酵素、キシロース転移酵素、グルクロン 酸転移酵素糖等が挙げられる。
[0043] 本発明はまた、混合物から目的の物質を分離する方法であって、該目的の物質を 結合する物質をその表面に有する銀被覆粒子を用いることを特徴とする方法に関す る。目的の物質を結合する物質としては、目的の物質と特異的に相互作用して結合 する物質および目的の物質を吸着する物質が挙げられる。特異的相互作用としては 、抗原抗体反応、アビジン ピオチンの結合反応、酵素と基質の結合反応、核酸相 補鎖間のハイブリダィゼーシヨン、リガンドとレセプターの結合反応、核酸と転写因子 の結合反応および細胞接着因子の結合反応、カルボニル基とォキシァミノ基または ヒドラジド基との結合形成反応等が挙げられる。目的の物質を吸着する物質としては 、上記ァフィユティーリガンドなどが挙げられる。本発明においては、目的の物質を結 合するァフィユティーリガンド、例えばアミロースをその表面に有する銀被覆粒子を用 いるのが好ましい。
[0044] 分離する対象となる混合物としては、銀被覆粒子に結合した物質と結合しうる物質 を含みうるものであれば特に制限されないが、例えば、化合物ライブラリー、遺伝子ラ イブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物 抽出物、植物抽出物等が挙げられる。
[0045] 本発明の分離方法は、目的の物質を結合する物質をその表面に有する銀被覆粒 子と混合物とを接触させる工程、および目的の物質が結合した銀被覆粒子を分離す る工程を含む。粒子の分離は、酵素結合銀被覆粒子の場合と同様に、ろ過、遠心分 離および磁石を用いる方法等により実施できる。銀被覆粒子は非特異的吸着が極め て少ないため、本発明の分離方法では目的の物質のみを分離でき、選択性に優れ ている。
[0046] 本発明はまた、生体物質がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて、該生体物質 と相互作用する物質を検出する方法に関する。生体物質の相互作用としては、抗原 抗体反応、アビジン ピオチンの結合反応、酵素と基質の結合反応、核酸相補鎖間 のハイブリダィゼーシヨン、リガンドとレセプターの結合反応、核酸と転写因子の結合 反応および細胞接着因子の結合反応等の特異的相互作用が挙げられる。本発明の 検出方法は、生体物質がその表面に結合した銀被覆粒子を試料と接触させる工程、 および銀被覆粒子上の生体物質と相互作用した物質を検出する工程を含む。本発 明の検出方法により、銀被覆粒子に結合させた生体物質と相互作用する物質をスク リーニングすることもできる。ここで用いる試料としては、特に制限されないが、例えば
、化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清 、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等が挙げられる。
[0047] 特異的相互作用は、例えば、当技術分野で通常用いられる方法によって検出でき る。例えば、質量分析法や標識を用いる方法が挙げられる。標識を用いる方法として は、放射性同位元素、酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、 ペルォキシダーゼ、 13 ガラクトシダーゼ、グルコース 6—リン酸デヒドロゲナーゼ およびルシフェラーゼ、ならびに蛍光剤、例えば、フルォレセイン、ローダミン、 Cy3、 Cy5、化学発光分子等が挙げられる。また、免疫沈降法によって検出することもでき る。質量分析法としては、例えば、 TOF— MS法を使用できる。
[0048] 銀被覆粒子は非特異的吸着が極めて少ないため、本発明の検出方法では目的の 相互作用のみを検出することができ、選択性に優れている。 [0049] 本発明はまた、銀被覆粒子の表面に生体物質または生理活性物質を結合すること により、該生体物質または生理活性物質を保存する方法に関する。銀被覆粒子にお いては、粒子核成分の流出が防止され、また、銀は安定であるとともに副反応の原因 となりにくいため、粒子に結合した生体物質または生理活性物質が保存中に分解す ることもない。また、銀は殺菌効果があるため、生体物質または生理活性物質の微生 物による分解を防止することもできる。本発明の保存方法においては、生体物質また は生理活性物質を結合させた銀被覆粒子を不凍液などの保存液中で保存するのが 好ましい。
実施例
[0050] 以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例の範囲 に限定されるものではない。
[0051] (比較例）表面にアミロースを有する磁性粒子によるペプチド鎖の切断
アミロースに吸着するペプチド（Mastoparan (Polistes)： VDWKKIGQHILSVL
-NH ) 0. ImMを、ァフィユティーリガンドとして表面にアミロースを有する磁性粒子
2
(MagExtractor— MBP—磁性ビーズ、東洋紡績製） 50mgを含む 500 μ 1の 100m M HEPESノ ッファ（pH7. 4、 0. l%NaN、 0. l%Triton— X 100)中、 48時間
3
室温でインキュベートした。ペプチドの HPLC分析の結果を図 1に示す。その時の M ALDI-TOF MSのスペクトルを図 2に示す。矢印で示した部分がペプチドが切断 されて生じたフラグメントを表して！/、る。
[0052] 上記の結果から、従来の銀被覆を有しな!/ヽ磁性粒子では、粒子核成分であるマグ ネタイトが溶出し、そのマグネタイトの作用によってペプチドが切断されることがわかる
[0053] (実施例 1)従来の磁性粒子と銀被覆磁性粒子の比較
比較例 1と同様の条件で、ペプチド (VDWKKIGQHILSVL— NH )を、ァフィ-
2
ティーリガンドとして表面にアミロースを有する各種磁性粒子の存在下、約 4日間イン キュペートした。用いた磁性粒子を表 1に示す。
[表 1] M a g E x t r a c t o r—M B P—磁性ビーズ （東洋紡績製）
銀被覆磁性粒子 1 (銀被覆量：約 3質量％)
銀被覆磁性粒子 2 (銀被覆量：約 5質量％)
[0054] HPLCの分析結果力も求めたペプチドの切断率と時間の関係を図 3に示す。図 3 カゝら従来の磁性粒子よりも銀を被覆した磁性粒子を用いる方が、ペプチドが切断され にくく、 、ずれの粒子も存在しな 、コントロールに近!、値を示して!/、ることが分かる。
[0055] 図 4aおよび図 4bに銀被覆磁性粒子 2の存在下、 2日間インキュベートしたペプチド 溶液の HPLCチャートと MALDI—TOF MSスペクトルをそれぞれ示す。図から、 銀被覆磁性粒子の存在下でインキュベートしたペプチドは、 4日後においてもほとん ど切断されていないことが分かる。また、銀被覆磁性粒子 1を用いた場合も銀被覆磁 性粒子 2を用いた場合とほぼ同様な結果であった。
[0056] 上記の結果は、銀を被覆した磁性粒子では、核成分であるマグネタイトが溶出し〖こ くぐペプチドが切断されにくいことを示している。
[0057] (実施例 2)固定ィ匕ガラタトース転移酵素を用いた糖ペプチドに対するガラクトースの 伸長反応
0. ImMの糖ペプチド（dWdKdKGE (GlcNAc) dHdLdSdVdL—NH ) (ここで d
2
Wは Trpの D体を表す）を、約 36 μ gの MBP— GalT (マルトース結合タンパク質ーガ ラタトース転移酵素の組換えタンパク質)を結合した銀被覆磁性粒子（20mg、実施 例 1の銀被覆磁性粒子 1)および ImM UDP— Galを含む 500 /z lの lOOmM HE PESバッファ（pH7. 4、 10mM MnCl、 O. l%NaN、 O. l%Triton— X 100)
2 3
中、室温でインキュベートした。
[0058] 図 5にインキュベーション時間とガラクトースの転移率を示す。時間経過とともにガラ クトースが転移され 8時間後にはほぼ 100%の転移率を示した。図 6に、 MALDI-T OF MSスペクトルの変化を示す。反応前と反応後ではガラクトースの分子量差にあ たる 162の差のピークが現れることがわかる。これによつて銀被覆磁性粒子に結合し たガラクトース転移酵素が機能していることが示された。すなわち、本発明の銀被覆 磁性粒子では磁性体を含む核成分が流出しにくいため、粒子に結合した酵素が分 解されたり、酵素反応が阻害されることなぐ酵素反応が進行することが示された。 産業上の利用可能性
[0059] 本発明は、生体分子自動精製装置、生体分子の迅速分析、生体分子および生分 解性物質の長期保存、酵素反応における迅速分離精製，繰り返し使用、連続酵素反 応自動化装置、糖鎖自動合成装置、分析前処理自動化装置などに適用できる。
[0060] 本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本 明細書中にとり入れるものとする。

Claims

請求の範囲
[I] 磁性体を含む粒子核成分が銀で被覆されてなる銀被覆磁性粒子。
[2] 粒子核成分が、強磁性体、強磁性体を含む合金またはこれらを含む高分子材料を 含む、請求項 1記載の銀被覆磁性粒子。
[3] 表面にァフィユティーリガンドを有する、請求項 1または 2記載の銀被覆磁性粒子。
[4] 表面に生体物質または生理活性物質が結合した、請求項 1〜3のいずれか 1項記 載の銀被覆磁性粒子。
[5] 表面にペプチド、核酸、糖質および脂質からなる群から選択される生体物質が結合 した、請求項 4記載の銀被覆磁性粒子。
[6] 表面に生体物質または生理活性物質が結合した銀被覆粒子。
[7] 生体物質がァフィユティーリガンドを介して粒子表面に結合している、請求項 6記載 の銀被覆粒子。
[8] 表面にペプチド、核酸、糖質および脂質からなる群から選択される生体物質が結合 している、請求項 6または 7記載の銀被覆粒子。
[9] 生体物質または生理活性物質を結合するための、銀被覆粒子。
[10] 酵素がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて酵素反応を行う方法。
[II] 生体物質がその表面に結合した銀被覆粒子を用いて、該生体物質と相互作用す る物質を検出する方法。
[12] 混合物から目的の物質を分離する方法であって、該目的の物質を結合する物質を その表面に有する銀被覆粒子を用いることを特徴とする、前記方法。
[13] 生体物質または生理活性物質を銀被覆粒子の表面に結合させることにより、該生 体物質または生理活性物質を保存する方法。
[14] 銀被覆粒子の核成分が磁性体を含む、請求項 10〜13のいずれか 1項記載の方 法。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005091241A (ja) * 2003-09-19 2005-04-07 Hitachi Metals Ltd 磁性粒子

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005091241A (ja) * 2003-09-19 2005-04-07 Hitachi Metals Ltd 磁性粒子

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113171755A (zh) * 2021-04-28 2021-07-27 安徽工业大学 一种镍螯合磁性纳米颗粒、制备方法及用于分离纯化组氨酸标签蛋白的用途

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