WO2006002602A1 - Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations - Google Patents

Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations Download PDF

Info

Publication number
WO2006002602A1
WO2006002602A1 PCT/CN2005/000988 CN2005000988W WO2006002602A1 WO 2006002602 A1 WO2006002602 A1 WO 2006002602A1 CN 2005000988 W CN2005000988 W CN 2005000988W WO 2006002602 A1 WO2006002602 A1 WO 2006002602A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
solvent
compound
stalk
canopy
extracted
Prior art date
Application number
PCT/CN2005/000988
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Baizhen Yang
Songjiang Wang
Congfu Zhao
Original Assignee
Baizhen Yang
Songjiang Wang
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35782474&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO2006002602(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Baizhen Yang, Songjiang Wang filed Critical Baizhen Yang
Priority to US11/631,637 priority Critical patent/US9884884B2/en
Publication of WO2006002602A1 publication Critical patent/WO2006002602A1/zh
Priority to US14/750,349 priority patent/US10160780B2/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • ⁇ 3 ⁇ 4 (Xantocaas Sobifolia) is a subfamily: 3 ⁇ 43 ⁇ 4 ⁇ Xinjiang, a genus, mainly divided into 3 ⁇ 4ffl Liaoning, the inner point is @» ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ », The knot ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ ⁇ long and anti-J3 ⁇ 4l3 ⁇ 4 ⁇ point, currently ⁇ HE ⁇ ⁇ more than 70 million mu.
  • the oil contains 14 and does not delete 3 ⁇ 4m for cooking oil.
  • the object of the present invention is that a type of surface ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ m m ⁇ m ⁇ mm mm, and ⁇ ⁇ ⁇ will open a willow 3 ⁇ 4M scare ⁇ 3 ⁇ 4 « art
  • the compound is white needle crystal with a melting point of 267-268 ⁇ , a pale red dark spot at 254 nm, a purple color of sulfuric acid, and a positive Mdish reaction.
  • the solvent is water, methanol, ethanol, propanol, butanol and z or acetone, and the solvent has a volume concentration of methanol, ethanol, propanol, butanol or acetone of 35% to 85% ;
  • the mixture is stirred at intervals, that is, every 10 to 20 minutes, stirring for 1 to 5 minutes, and the leaching temperature is 60 to 10 (TC, the leaching time is 1 to 3 hours.
  • the invention extracts a novel compound from the discarded cultivar and stalk of the genus Corolla, and is searched by CA-CS (Chemical Substance Index) and SCIFINDER. The compound has not been reported, and a compound is added to the triterpenoid saponin compound.
  • New member animal experiments of the compound show that it has the function of improving brain function, ie promoting memory, reducing cerebral ischemia and hypoxia, and the in vitro cancer cell experiment of the compound shows that it has the effect of inhibiting cancer cells in vitro;
  • the invention not only greatly improves the biological development and utilization value of discarded canopy fruit husks and fruit stalks, but also saves valuable natural resources, and is expected to develop a drug for treating brain diseases and anti-tumor and its function in the future medical field.
  • the product has a broad application prospect.
  • Figure 1 is a flow chart showing the process of extracting a new compound from the canopy and stalk of the present invention. .
  • Fig. 2 is a diagram showing the ultraviolet spectrum of the fruit husk glycoside of the present invention (wavelength: 211.6 nm, absorbance of 0.4554, peak height of 0.1920).
  • Fig. 3 is a hydrogen chromatogram of the fruit husk glycoside of the present invention. Test conditions: solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0.
  • Figure 4 is a magnified view of the hydrogen spectrum of the fruit husk glycoside of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated. pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 (temperature: S5.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), Relax delay : 2.000 Sec (relaxation delay: 2.000 seconds), Pulse: 47.0degrees (pulse excitation: 47.0°), Acq time: 1.892sec (single acquisition time: 1.892 seconds), Width: 7998.4HZ (spectral width: 7998.4 Hz) , 32 repetitions (repeated acquisition 32 times), FT size: 65536 (Fourier transform points: 65536), Total time: 2min 4sec (total time: 2 minutes 4 seconds). ( ⁇ - ⁇ , ⁇ is 3.0 ⁇ 7.0ppm (chemical shift)). '
  • Fig. 5 is a second enlarged view of the hydrogen spectrum of the fruit husk.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K)), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), Relax delay : 2.000 Sec (relaxation delay: 2.000 seconds), Pulse: 47.0degrees (pulse excitation: 47.0°), Acq time: 1.892sec (single acquisition time: 1.892 seconds), Widtk7998.4HZ (spectral width: 7998.4 Hz), 32 repetitions (repeated acquisition 32 times), FT size: 65536 (Fourier transform points: 65536), Total time: 2min 4sec (total time: 2 minutes 4 seconds). (BMIWOO- 1 !!, ⁇ is 0.4 ⁇ 2.4ppm (chemical shift)).
  • Fig. 6 is a carbon spectrum diagram of the fruit husk glycoside of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 29 S.
  • Figure 7 is a magnified view of the carbon spectrum of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298-.lK (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), Relax delay : l .OOOsec (relaxation delay: 1.000 seconds), Pulse: 30.0degre.es (pulse Excitation: 30.0° ), Acq time : 0.600sec (single acquisition time: 0.600 seconds), Width: 31421.8HZ (spectral width: 31421.8 Hz), 8896 repetitions (repeated acquisition 8896 times), Line broadening: 3.5 HZ
  • Figure 8 is a second enlarged view of the carbon spectrum of the fruit husk glycoside of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500 "BMU500” (instrument model), Relax delay : l.OOOsec (relaxation delay: 1.000 seconds), Pulse: 30.0degrees (pulse excitation: 30.0°), Acq time: 0.600sec (single acquisition time: 0.600 seconds), Width: 31421.8HZ (spectral width: 31421.8 Hz), 8896 repetitions (Repeat 8896 times), Line broadening: 3.5 HZ (line width: 3.5 Hz), FT size: 65536 (Fourier transform points: 65536), Total time: 7hr 19min 20sec (Total time: 7 hours 19 minutes 20 seconds) .
  • BMU-500- 13 C, ⁇ is 51
  • Figure 9 is a third enlarged view of the carbon spectrum of the fruit husk glycoside of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500 "BMU500” (instrument model), Relax delay : l.OOOsec (relaxation delay: 1.000 seconds), Pulse: 30.0degrees (pulse excitation: 30.0°), Acq time: 0.600sec (single acquisition time: 0.600 seconds), Width: 31421.8HZ (if width: 31421.8 Hz), 8896 repetitions (Repeat 8896 times), Line broadening: 3.5 HZ (line width: 3.5 Hz), FT size: 65536 (Fourier transform points: 65536), Total time: 7hr 19min 20sec (Total time: 7 hours 19 minutes 20 seconds) .
  • BMU-500- 13 C S is 100 to 155
  • Figure 10 is a carbon-hydrogen correlation map of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Bruker-ARX-300 (instrument model), TE: 300K (temperature: 300K), Dl: l.OOOOOOOOsec (relaxation delay: 1 .00000000 #), P1 : 9.80 ⁇ sec (pulse excitation: 9.80 microseconds), AQ: 0.1311220 sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds), NS: 48 (repeated acquisition 48 times), SWH: 3906.250 HZ (spectral width: 3906.250 Hz), SI : 1024 (Fourier transform points: 1024x) 024).
  • solvent pyd (solvent: deuterated pyridine)
  • Bruker-ARX-300 instrument model
  • TE 300K (temperature: 300K)
  • Dl l.OOOOOOOOOOOOsec
  • P1 9.80
  • Figure 11 is one of the carbon-hydrogen related enlarged maps of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Bruker-ARX-300 (instrument model), TE: 300K (temperature: 300K), D1: l.OOOOOOOOsec (relaxation delay: 1.00000000 seconds) .
  • P1 9.80 sec (pulse excitation: 9.80 microseconds)
  • AQ 0.1311220 sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds)
  • NS 48 (repeated acquisition 48 times)
  • SI 1 ⁇ 24 (Fourier transform points: 1024x1024).
  • FIG. 12 is a second enlarged view of the carbon-hydrogen correlation of the fruit husk glycoside of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent pyridine), Bruker-ARX-300 model), TE: 300K (temperature: 300K), D1: l.OOOOOOOOsec (relaxation delay: 1.00000000 seconds), P1: 9.80 ⁇ sec (pulse excitation: 9.80 microseconds), AQ: 0.1311220 sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds), NS: ' (repeated acquisition 48 times), SWH: 3906.250 HZ (spectral width: 3906.250 Hz), SI: 1024 (Fourier transform points: 1024x1024).
  • ARX-300 ⁇ is 0.2 to 3.4 ppm
  • 13 C-: ⁇ is 5 to 60 ppm).
  • Figure 13 is a third enlarged view of the carbon-hydrogen correlation of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Bruker-ARX-300 (, instrument model), TE: 300K (temperature: 300K), D1: l.OOOOOOOOsec (relaxation delay: 1.00000000 seconds), PL- 9.80 ⁇ sec (pulse excitation: 9.80 microseconds), AQ: 0.1311220 sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds), NS: 48 (repeated acquisition 48 times), SWH: 3906.250 HZ (spectral width: 3906.250 Hz), SI: 1024 (Fourier transform points: 1024x1024).
  • solvent pyd (solvent: deuterated pyridine)
  • TE 300K
  • D1 l.OOOOOOOOOOsec
  • PL- 9.80 ⁇ sec pulse excitation: 9.80 microseconds
  • AQ 0.131
  • Figure 14 is a carbon-hydrogen remote correlation map of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), Relax delay: l.OOOsec (relaxation delay: 1.000 seconds), Acq time: 0.206sec (single acquisition time: 0.206 seconds), Width: 4973.9HZ (spectral width: 4973.9 Hz), 2D Width: 30165.9HZ (two-dimensional spectrum width: 30165.9 Hertz), FT size: 2048 x 2048 (Fourier transform points: 2048 x 2048), Total time: 2 r 18min 44sec (total time: 2 hours 18 minutes 44 seconds).
  • BMU -500, 3 ⁇ 4-: F 2 is 0.6 to 9 ppm
  • 13 C-: ? 1 is 10
  • Figure 15 is one of the carbon-hydrogen remote correlation magnification maps of the genus Phyllantrein of the present invention. Test conditions: solvent: pyd
  • Figure 16 is a second perspective view of the carbon-hydrogen remote correlation of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 ° C / 298.1 K (temperature: 25.0 ° C / 298.1 K), I NOVA-500.
  • BMU500 instrument model
  • elax delay l.
  • Figure 17 is a third perspective view of the carbon-hydrogen remote correlation of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: py4 (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 °C / 298.1K (temperature: 25.0 °C / 298.1K), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), Relax delay: l.
  • Figure 18 is a fourth aspect of the carbon-hydrogen remote correlation amplification map of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Temp: 25.0 °C / 298.1K (temperature: 25.0 °C / 298.1K), I NOVA-500 "BMU500" (instrument model), elax delay: l. OOOsec.
  • Figure 19 is a hydrogen-hydrogen correlation map of the genus Citrus aurantium in the present invention.
  • Test conditions solvent pyd (solvent: deuterated pyridine), Bruker-ARX-300 (instrument model), TE: 300K (temperature: 300K), Dl: 1.50000000sec (relaxation delay: 1.50000000 seconds), P1: 9.80 u see (pulse excitation: 9.80 microseconds), AQ: 0.1311220sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds), NS: 48 (repeated acquisition 48 times), SWH: 3906.250 HZ (spectral width: 3906.250 Hz), SI: 512 (Fourier transform points: 512 x 512). (ARX-300, ⁇ is 0 ⁇ 10ppm).
  • Figure 20 is a hydrogen-hydrogen correlation map of the genus Phyllantrein of the present invention.
  • Test conditions solvent: pyd (solvent: deuterated pyridine), Bruker-ARX-300 (instrument model), TE: 300K (temperature: 300K), Dl: 1.50000000sec (relaxation delay: 1.50000000 seconds), P1: 9.80 sec (pulse excitation: 9.80 microseconds), AQ: 0.1311220 sec (single acquisition time: 0.1311220 seconds), NS: 48 (repeated acquisition 48 times), SWH: 3906.250 HZ (spectral width: 3,906.250 Hz), SI: 512 (Fourier transform points: 512x512).
  • ARX-300, 5 0.5 ⁇ 7ppm o
  • Figure 21-1 is the first-order mass spectrum (MS) of the crown flavonoids. .
  • Figure 21-2 is a second-order mass spectrum (MS) of the genus Citrus. detailed description
  • the above-obtained target compound, Guanguan was taken for animal experiments.
  • mice both male and female, weighing 18-23 g, were divided into two groups.
  • the drug-administered group was administered with a dose of 9 mg/kg of the mice, and the control group was given an equal volume of normal saline.
  • the two groups of mice were placed in a Y-maze and the experiment was performed.
  • the number of false responses before the mouse learned to reach the correct 10 consecutive responses was recorded.
  • the number of false responses was more than 30 times, and the results are shown in Table 1:
  • mice were trained according to the Y-maze three-arm random method.
  • the pre-selected mice with less than 30 false responses before the 10 consecutive correct reactions were used for the experiment.
  • the pre-selected mice were randomly divided into two groups after 24 hours of rest, and the scopolamine was injected intraperitoneally. Mg/kg, causing memory impairment in mice.
  • the drug-administered group was intraperitoneally injected with guanosine glucoside at a dose of S g/kg, and the control group was intraperitoneally injected with normal saline for 20 minutes after administration.
  • the two groups of mice were placed in a Y-maze for the experiment, and the number of error reactions before the 10 consecutive correct responses were recorded.
  • Table 2 The experimental results are shown in Table 2:
  • the experiment was divided into two batches: each control group and the Wenguan catechin administration group, and the death time was evaluated by three indicators.
  • Oral canopy glycosides twice daily, 2mg / time, a total of 6 days.
  • Super-mean death time (x p) Calculate the death time (x p) of some animals larger than x c and average them based on the mean death time (x c) of the control group;
  • methanol, propanol or acetone may also be used as the leach solvent of the present invention.
  • Example 3 The Xanthoceraside extracted in Example 3 was used for in vitro tumor cell experiments. The experimental methods and results are shown in Table 4. Table 4 Screening results of the activity of scutellaria saponins on six types of tumor cells in vitro
  • the target compounds extracted in Examples 1, 2, 3 and 4 of the present invention were subjected to structural identification by chemical and spectral analysis methods (including: UV, ID-NMR, 2D-DMR, EI-MS, ESI-MS, etc.). And data attribution: according to its UV, ESI-MS, 1H-NMR, 13 C-NMR, HMQC, HMBC, TOCSY map data (see Figure 2 ⁇ 21 for details), and refer to the literature [l] Chen YJ, Talceda T , Ogihara Y, et al. Studies on the constituents of Xanthoceras sorbifolia Bunge. III. Minor prosapogenins from the fruits of Xanthoceras sorbifolia Bunge. [J].
  • the discovery of the new compound adds a new member to the triterpenoid saponin compound, which greatly increases the utilization value of the discarded cultivar and fruit stalk, and is expected to develop treatment in the future medical field.
  • New drugs for brain diseases and tumors are also included in the discovery of the new compound.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

—种 ^贿幅處 厨是賴去和調 技术令贓
本发日 开凝赚术，
Figure imgf000003_0001
用。 背: Sfe^
^¾ (Xantocaas Sobifolia)为无患子科: ¾¾Η^τΜ∑^疆物，一属一种，主 要分^ ¾ffl辽宁、 内點以 @»有抗 而捧、耐鶴、 碱、病虫 »、 结^ ¾ ^^长和防 J¾l¾ ^点， 目前 ^HE ^咅 70余万亩。
Figure imgf000003_0002
油中含 14禾不删 ¾m可作食用油。 ¾¾¾禾 二可食， 味甘，可治 小 ji t¾然而，迄今为止
Figure imgf000003_0003
¾*観凝麵。 发明内容
本发明的目赃于繊一种 ^麵 繊 灘離細本发 m^m^ mm mm, ,并且^ ^爵将开 一种 柳藤的 ¾M吓^ ¾«藝
eraside), 为三
Figure imgf000003_0004
确认本 3-0- ( a -L-arabinofuranosyl ( 1→3 ) -5-D-galactop yrano sy 1 (、 1→2 ) ) -9-D-glucuronopyranosyl-;21 , 22-diangeloyl- Rpbarrigenol, 即 3-0-. (？ -L-呋喃阿拉伯 糖基（1→3 ) 吡喃半乳糖基 （1→2') ) - - D-吡喃蔔萄糖醛酸基 -24^ 22-二当归酰 基- Ri-barrigenolo
该化合物为白色针晶， 溶点为 267- 268Ό， 在 254nm波长下呈浅红色暗斑， 硫酸 显色呈紫色， Mdish反应为阳性。
其提取方法为： 将文冠果果壳和 /或果柄粉碎， 用溶剂浸提， 过滤， 回收溶剂得 浓缩液， 浓缩液过大孔树脂， 用溶剂 脱，.以富集有效成分， 去除杂质， 回收溶剂得 浓缩物， 蒸干， 得到褐色固体， 即总皂苷； 将总皂苷用水溶解，.用正丁醇萃取， 干燥 得褐色粉末， 经反复硅胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60进行梯度洗脱， 回收洗 脱液， 精制， 得到白色针晶， 即为目的化合物文冠果壳苷；
所述溶剂为水、 甲醇、 乙醇、 丙醇、 丁醇和 z或丙酮， 溶剂甲醇、 乙醇、 丙醇、 丁醇或丙酮的体积百分浓度为 35%~85%; '
所述溶剂浸提过程中， 采用间隔搅拌， 即每隔 10~20分钟， 搅拌 1〜5分钟， 浸提 温度为 60~10(TC， 浸提时间 1〜3小时。
化合物的应用： 用于制备治疗脑疾病及肿瘤（实体瘤）的药物和预防、 治疗脑疾 病及肿瘤的功能保健食品。
本发明具有如下优点：
本发明从废弃的文冠果果壳及果柄中提取出一种全新化合物， 经 CA— CS (化 学物质索引）和 SCIFINDER检索， 该化合物未见报道， 为三萜皂苷类化合物增添了 一名新成员； 该化合物的动物实验表明： 其具有提高脑功能即促进记忆、减轻脑缺血 和缺氧的功效， 该化合物的体外癌细胞实验表明：其具有抑制体外癌细胞的功效； 因 而，本发明不但大大提高了废弃的文冠果果壳及果柄的生物开发利用价值，节约宝贵 的自然资源，而且有望在今后的医药领域中开发出一种治疗脑疾病和抗肿瘤的药物及 其功能保徤品， 其应用前景十分广阔。 附图说明
. 图 1为本发明从文冠果壳和柄中提取新化合物的工艺流程图。 . .
. 图 2为本发明文冠果壳苷紫外光谱图 （ 波长为 211.6nm， 其吸收度为 0.4554， 峰高度为 0.1920)。 图 3为本发明文冠果壳苷氢谱图。 测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代吡啶）， Temp: 25.0。C/298.lK' (温度： 25.0°C/298.1K)， I NOVA-500 "BMUSOO'" 器型号）， Relax delay ： 2.000sec (驰豫延迟： 2.000秒）， Pulse.- 47.0degrees (脉冲 ' 发： 47.0° )， Acq time: 1.892sec (单次采集时间： 1.892秒）， Width:7998.4¾Z (谱宽： 7998.4赫兹）， 32 repetitions (重复采集 32次）， FT size: 65536 (傅立叶变换点数： 65536 ) , Total time: 2min 4sec (总耗时间： 2分 4秒）。 （BMU- 500-1H, S为 0〜12ppm (化学位移））。
图 4为本发明文冠果壳苷氢谱放大图之一。 测试条件： solvent pyd (溶剂： 氘代. 吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1 (温度： S5.0°C/298.1K)， I NOVA-500 "BMU500" (仪 器型号）， Relax delay ： 2.000sec (驰豫延迟： 2 .000秒）， Pulse: 47.0degrees (脉冲 激发： 47.0° ) , Acq time ： 1.892sec (单次采集时间： 1.892秒）， Width:7998.4HZ (谱 宽： 7998.4赫兹）， 32 repetitions (重复采集 32次）， FT size: 65536 (傅立叶变换点 数： 65536)， Total time: 2min 4sec (总耗时间： 2 分 4秒）。 (ΒΜυ^ΟΟ-^, δ为 3.0~7.0ppm (化学位移））。 '
图 5为本发明文冠果壳苷氢谱放大图之二。 测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代 吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度: 25.0°C/298.1K) )， I NOVA-500 "BMU500 " (仪 器型号）， Relax delay ： 2.000sec (驰豫延迟: 2 .000秒）， Pulse: 47.0degrees (脉冲 激发： 47.0° )， Acq time ： 1.892sec (单次采集时间： 1.892秒）， Widtk7998.4HZ (谱 宽： 7998.4赫兹）， 32 repetitions (重复采集 32次）， FT size: 65536 (傅立叶变换点 数： 65536)， Total time: 2min 4sec (总耗时间： 2 分 4秒）。 （BMIWOO-1!!, δ为 0.4~2.4ppm (化学位移））。
图 6为本发明文冠果壳苷碳谱图。 测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度: 25.0°C/29S.1K) , I NOVA-500 "BMU500 " (仪器型号）， Relax delay ： l.OOOsec (驰豫延迟： 1.000秒）， Pulse: 30.0degrees (脉冲激发： 30.0° )， Acq time ： 0.600sec (单次采集时间: 0.600秒）， Width:3142】.SHZ (谱宽: 31421.8 赫兹） ， S896 repetitions (重复采集 8896次）， Line broadening: 3.5 HZ (线宽： 3.5 赫兹）， FT size: 65536 (傅立叶变换点数： 65536) , Total time: 7hx l 9min 20sec (总 耗时间： 7小时 19分 20 秒）。 (BMU-500-13C, δ为 10~180ppm (化学位移））。
' 图 7为本发明文冠果壳苷碳谱放大图之一。 测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代 吡啶）， Temp: 25.0°C/298-.lK (温度: 25.0°C/298.1K) , I NOVA-500 "BMU500 " (仪 器型号）， Relax delay ： l .OOOsec (驰豫延迟： 1.000秒）， Pulse: 30.0degre.es (脉冲 激发： 30.0° )， Acq time ： 0.600sec (单次采集时间: 0.600秒）， Width:31421.8HZ (谱宽：31421.8赫兹）， 8896 repetitions (重复采集 8896次）， Line broadening: 3.5 HZ
(线宽： 3.5赫兹）， FT size: 65536 (傅立叶变换点数： 65536)， Total time.- 7hr 19min
_ r
20sec (总耗时间：7小时 19分 20秒）。 (BMU-500-13C， S为 10〜50ppm (化学位移））。
图 8为本发明文冠果壳苷碳谱放大图之二。测试条件： solvent pyd (溶剂： 氘代 吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度: 25.0°C/298.1K), I NOVA-500 "BMU500" (仪 器型号）， Relax delay ： l.OOOsec (驰豫延迟: 1.000秒）， Pulse: 30.0degrees (脉冲 激发： 30.0° )， Acq time: 0.600sec (单次采集时间： 0.600秒）， Width:31421.8HZ (谱 宽： 31421.8赫兹）， 8896 repetitions (重复采集 8896次）， Line broadening: 3.5 HZ (线 宽： 3.5赫兹）， FT size: 65536 (傅立叶变换点数: 65536), Total time: 7hr 19min 20sec (总耗时间: 7小时 19分 20秒）。 (BMU-500-13C, δ为 51~94ppm (化学位移））。
图 9为本发明文冠果壳苷碳谱放大图之三。测试条件： solvent pyd (溶剂： 氘代 吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度： 25.0°C/298.1K)， I NOVA-500 "BMU500" (仪 器型号）， Relax delay ： l.OOOsec (驰豫延迟： 1.000秒）， Pulse: 30.0degrees (脉冲 激发： 30.0° )， Acq time: 0.600sec (单次采集时间： 0.600秒）， Width:31421.8HZ (if 宽： 31421.8赫兹）， 8896 repetitions (重复采集 8896次）， Line broadening: 3.5 HZ (线 宽： 3.5赫兹）， FT size: 65536 (傅立叶变换点数: 65536), Total time: 7hr 19min 20sec (总耗时间: 7小时 19分 20秒）。 (BMU-500-13C, S为 100〜155ppm (化学位移））。
图 10为本发明文冠果壳苷碳-氢相关图谱。 测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代 吡啶）， Bruker-ARX-300 (仪器型号）， TE:300K (温度： 300K)， Dl : l.OOOOOOOOsec (驰豫延迟: 1 .00000000 #), P1 : 9.80 μ sec (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单次采集时间: 0.1311220秒）， NS: 48 (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽：3906.250赫兹）， SI: 1024 (傅立叶变换点数： 1024x] 024)。 (A X-300, 1H- ： δ为 0~10ppm， 13C-: δ为 0〜180ppm：)。
图 11为本发明文冠果壳苷碳-氢相关放大图谱之一。 测试条件： solvent pyd (溶 剂： 氘代吡啶）， Bruker-ARX-300 (仪器型号）， TE: 300K (温度： 300K)， D1 : l.OOOOOOOOsec (驰豫延迟: 1 .00000000秒) .， P1 : 9.80 sec (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单次采集时间： 0.1311220秒）， NS: 48 (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽： 3906.250赫兹）， SI: 1Θ24 (傅立叶变换点数： 1024x1024)。 (ARX-300, 1H-: δ为 0.7~2.3ppm， 13 C-. δ为 10~40ppm)。 图 12为本发明文冠果壳苷碳-氢相关放大图谱之二。 测试条件： solvent: pyd (溶 齐 ^ 氘代吡啶）， Bruker-ARX-300 型号）， TE:300K (温度： 300K )， D1： l.OOOOOOOOsec (驰豫延迟： 1 .00000000秒）， P1 : 9.80 μ sec (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单次采集时间： 0.1311220秒）， NS: ' (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽 :3906.250 赫兹）， SI: 1024 (傅立叶变换点数: 1024x1024 )。 (ARX-300, δ为 0.2~3.4ppm， 13C-: δ为 5~60ppm)。
图 13为本发明文冠果壳苷碳-氢相关放大图谱之三。 测试条件： solvent: pyd (溶 剂： 氘代吡啶）， Bruker-ARX-300 (,仪器型号）， TE: 300K (温度： 300K) , D1 : l.OOOOOOOOsec (驰豫延迟: 1 .00000000秒）， PL- 9.80 μ sec (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单次采集时间： 0.1311220秒）， NS: 48 (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽: 3906.250 赫兹）， SI: 1024 (傅立叶变换点数: 1024x1024 )。 (ARX-300, δ为 3~7ppm， 13C-: δ为 60~140ppm)。
图 14为本发明文冠果壳苷碳 -氢远程相关图谱。 测试条件： solvent pyd (溶剂： 氘代吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度: 25.0。C/298.1K)， I NOVA-500 "BMU500" (仪器型号）， Relax delay: l.OOOsec (驰豫延迟： 1 .000秒）， Acq time: 0.206sec (单 次采集时间： 0.206秒）， Width:4973.9HZ (谱宽： 4973.9赫兹）， 2D Width: 30165.9HZ (二维谱宽： 30165.9赫兹）， FT size: 2048 x 2048 (傅立叶变换点数: 2048 x 2048), Total time: 2 r 18min 44sec (总耗时间： 2小时 18分 44秒）。 (BMU -500, ¾-： F2 为 0.6~9ppm， 13C-: ?1为 10~180ppm)。
图 15为本发明文冠果壳苷碳-氢远程相关放大图谱之一。 测试条件： solvent: pyd
(溶剂: 氘代吡啶）， Temp:25.0 °C/298.1K (温度: 25.0°C/298.1K )， I NOVA-500 "BMU500" (仪器型号）， Relax delay: l.OOOsec (驰豫延迟： 1 .000秒)， Acq time: 0.206sec (单次采集时间： 0.206秒）， Width:4973.9HZ (谱宽： 4973.9赫兹）， 2D Width: 30165.9HZ (二维谱宽： 30165.9赫兹）， FT size: 2048 x 2048 (傅立叶变换点数: 2048 x 2048), Total time: 2hr 18min 44sec (总耗时间： 2小时 18分 44秒）。 (BMU -500, 1H'-: F2为 0.8~5.1ppm， 13C-: Fi为 100~180ppm)。
图 16为本发明文冠果壳苷碳-氢远程相关放大图谱之二。 测试条件： solvent pyd (溶剂: 氘代吡啶）， Temp: 25.0°C/298.1K (温度: 25.0 °C/298.1K) , I NOVA-500. "BMU500" (仪器型号）， elax delay: l.OOOsec (驰豫延迟： 1 .000秒）， Acq time: 0.206sec (单次采集时间： 0.206秒）， Width:4973.9HZ (谱宽： 4973.9赫兹）， 2D Width: 30165.9HZ (二维谱宽： 30165.9赫兹）， FT size: 2048 x 2048 (傅立叶变换点数: 2048 x 2048 ), Total time: 2hr 18min 44sec ( 、耗时间： 2小时 18分 44 秒）。 (BMU -500, 'H-: F2为 0.54~2ppm， 13C-: 为 15〜90ppm)。 '"'
图 17为本发明文冠果壳苷碳-氢远程相关放大图谱之三。 测试条件： solvent: py4 (溶剂： 氘代吡啶）， Temp:25.0 °C/298.1K (温度： 25.0 °C/298.1K )， I NOVA-500 "BMU500" (仪器型号）， Relax delay: l.OOOsec (驰豫延迟： 1.000秒）， Acq time: 0.206sec (单次采集时间： 0.206秒）， Width:4973.9HZ (谱宽： 4973.9赫兹）， 2D Width: 30165.9HZ (二维谱宽： 30165.9赫兹 .,)， FT size: 2048 x 2048 (傅立叶变换点数： 2048 x 2048), Total time: 2hr 18min 44sec (总耗时间: 2小时 18分 44秒）。 （BMU— 500， F2为 2.8~6.8ppm， 13C-: F!为 10~94ppm)。
图 18为本发明文冠果壳苷碳-氢远程相关放大图谱之四。 测试条件： solvent: pyd (溶剂: 氘代吡啶）， Temp:25.0 °C/298.1K (温度: 25.0 °C/298.1K)， I NOVA-500 "BMU500" (仪器型号）， elax delay: l.OOOsec. (驰豫延迟： 1.000秒）， Acq time: 0.206sec (单次采集时间： 0.206秒）， Widtli:4973.9HZ (谱宽： 4973.9赫兹）， 2D Width: 30165.9HZ (二维谱宽： 30165.9赫兹）， FT size: 2048 x 2048 (傅立叶变换点数: 2048 x 2048), Total time: 2hr 18mi 44sec (总耗时间： 2小时 18分 44秒）。 (BMU-500, F2为 3.4~6.4ppm， 13C-: 为 10~94ppm)。
图 19为本发明文冠果壳苷氢-氢相关图谱。测试条件： solvent pyd (溶剂： 氘代吡 啶)， Bruker-ARX-300 (仪器型号）， TE: 300K (温度： 300K)， Dl : 1.50000000sec (驰 豫延迟： 1 .50000000秒）， P1 : 9.80 u see (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单 次采集时间： 0.1311220秒)， NS: 48 (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽： 3906.250赫兹）， SI: 512 (傅立叶变换点数: 512 x 512)。 (ARX-300, δ为 0~10ppm)。
图 20为本发明文冠果壳苷氢-氢相关图谱。测试条件： solvent: pyd (溶剂： 氘代吡 啶)， Bruker-ARX-300 (仪器型号）， TE: 300K (温度： 300K), Dl : 1.50000000sec (驰 豫延迟： 1 .50000000秒）， P1 : 9.80 sec (脉冲激发: 9.80微秒）， AQ: 0.1311220sec (单 次采集时间： 0.1311220秒)， NS: 48 (重复采集 48次）， SWH: 3906.250 HZ (谱宽: 3,906.250赫兹）， SI: 512 (傅立叶变换点数： 512x512)。 (ARX-300, 5 0.5~7ppm)o 图 21-1为本发 文冠果壳苷一级质谱图 （MS)。 .
图 21-2为本发明文冠果壳苷二级质谱图 （MS )。 具体实施方式
实施例 1
如图 1所示，将 2000g文冠果果壳粉碎至粒度为 30目， 用 10倍果壳体积的浓度 为 35% (V/V) 的乙醇浸提， 浸提温度为 60°C， 浸提时间为 3小时 ^浸提过程中每隔 10分钟搅拌 1分钟，然后过滤， 回收乙醇得浓缩液， 浓缩液过 101大孔树脂， 用 35% 乙醇洗脱， 以富集有效成分， 去除杂质， 回收乙醇得浓缩物， 蒸干， 得到褐色固体， 即总皂苷； 将总皂苷用水溶解， 用正丁醇萃取， 回收正丁醇， 干燥得褐色粉末， 经反 复硅胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60 进行梯度洗脱， 回收洗脱液， 重结晶， 得 到约 50mg的白色针晶， 即为目的化合物文冠果壳苷。
取上述提取的目的化合物文冠果壳苷， 做动物实验。
小鼠 20只， 雌雄兼用， 体重 18-23g， 分两组， 给药组按小鼠体重 9mg/kg的剂 量， 灌胃给予文冠果壳苷， 对照组灌胃给予等容量的生理盐水， 给药后 40分钟， 将' 两组小鼠分别放入 Y型迷宫中， 进行实验。 记录小鼠学习达到连续 10次正确反应这 一标准之前错误反应的次数， 超过 30次者以 30次计， 实验结果见表 1 :
表 1 文冠果壳苷具有促进小鼠学习记忆作用的实验数据表
Figure imgf000009_0001
'由表中可见， 文冠果壳苷组小鼠错误反应次数明显少于生理盐水组 （P<0.01 )， 表明文冠果壳苷具有促进小鼠学习记忆作用。
实施例 2
如图 1所示， 将 2000g文冠果果柄粉碎， 用 8倍果柄体积的浓度为 85% (V/V) 的正丁醇浸提， 浸提温度为 75°C， 浸提时间为 1小时， 浸提过程中每隔 20分钟搅拌 5分钟， 然后过滤， 回收正丁醇得浓缩液， 浓缩液过 101大孔树脂， 用 85%正丁醇洗 脱， 以富集有效成分， 去除杂质， 回收正丁醇得浓缩物，浓缩物蒸干， 得到褐色固体， 即总皂苷； 将总皂苷用水溶解， 用正丁醇萃取， 回收正丁醇， 干燥得褐色粉末， 经反 复硅胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60进行梯度洗脱， 回收洗脱液， 重结晶， 得 到约 45mg的白色针晶， 即为目的化合物文冠果壳苷。
取上述提取的文冠果壳苷， 做动物实验。 ' 按 Y型迷宫三臂随机法训练小鼠， 预选达到连续 10次正确反应之前错误反应少 于 30次者用于实验， 预选小鼠休息 24小时后， 随机分为两组， 均腹腔注射东莨菪碱 2.0mg/kg, 造成小鼠记忆障碍， 15分钟后， 给药组按小鼠体重 S g/kg的剂量， 腹腔 注射文冠果壳苷， 对照组腹腔注射等容量生理盐水， 给药后 20分钟， 将两组小鼠分 别放入 Y型迷宫中进行实验， 记录达到连续 10次正确反应之前错误反应次数， 实验 结果见表 2:
表 2文冠果壳苷对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍有促进记忆再现作用的实验数据表
Figure imgf000010_0001
从表中可以看出文冠果壳苷对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍有促进记忆再现作用。 实施例 3
将 1000g文冠果果壳及 1000g果柄粉碎， 用 10倍果壳及果柄体积的浓度为 50%
(V/V) 的乙醇浸提， 浸提温度为 90°C， 浸提时间为 2小时， 浸提过程中每隔 15分 钟搅拌 3分钟， 然后过滤， 回收乙醇得浓缩液， 浓缩液过 101大孔树脂， 用 50%乙醇 洗脱， 以富集有效成分， 去除杂质， 回收乙醇得浓缩物， 蒸干， 得到褐色固体， 即总 皂苷； 将总皂苷用水溶解， 用正丁醇萃取， 回收正丁醇， 干燥得褐色粉末， 经反复硅 胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60 进行梯度洗脱， 回收洗脱液， 重结晶， 得到约 50mg的白色针晶， 即为目的化合物文冠果壳苷。
取上述提取的文冠果壳苷， 做常规密闭瓶静态缺氧实验，观察文冠果壳苷对死亡 时间的影响。
实验分两批： 各设对照组与文冠果壳苷给药组， 用三项指标评价死亡时间。 口服 文冠果壳苷， 每日二次， 2mg/次， 共 6天。
全组平均死亡时间 （x t);
超均值死亡时间 （x p): 以对照组平均死亡时间 （x c) 为标准， 计算大于 x c的 部分动物的死亡时间 （x p) 并求平均值；
延长死亡时间 （x p- x c): 即超均值死亡时间 （x p) 减去 x c并求平均值。
实验结果见表 3。 . 表 3 文冠果壳苷对小白鼠缺氧死亡时间的影响
Figure imgf000011_0001
为动物数
由表 3可以看出对照组与给药组两批实验的三项死亡时间都有明显的差别，给药 组的死亡时间长于对照组， 证明文冠果壳苷具有提高动物对缺氧的耐受性。脑对缺氧 极为敏感， 因为缺氧时首先累及大脑， 文冠果壳苷提高了缺氧的耐受性， 从而延长了 小白鼠的死亡时间。 （提高了缺氧的耐受性是否与治疗其它脑疾病有关？ ？， 如果有, 请给予适当描述）
' 实施例 4
如图 1所示， 将 2000g文冠果果壳粉碎， 用 15倍果壳体积的水进行煮沸浸提， 浸提时间为 3小时， 浸提过程中每隔 10分钟搅拌 2分钟， 然后过滤， 滤液过 101大 孔树脂， 用水洗脱， 以富集有效成分， 去除杂质， 蒸发浓缩， 浓缩液用正丁醇萃取， 回收正丁醇， 干燥得褐色粉末， 经反复硅胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60 进行 梯度洗脱， 回收洗脱液， 重结晶， 得到约 40mg 的白色针晶， 即为目的化合物文冠 果壳苷。
另外， 本发明浸提溶剂也可以使用甲醇、 丙醇或丙酮。
实施例 5
取实施例 3提取的文冠果壳苷， 做体外肿瘤细胞实验， 实验方法及结果见表 4。 表 4 文冠果壳苷对体外六种类型肿瘤细胞的活性筛选结果
序号 试模型 剂量（ug/ml) 1 观察指标 测试效应 结果 I IC5。 (ug/ml)
MTT法（HL-60 0. 5 抑制率（％) 9. 34 + 41. 29 人白趙） 5. 0 17. 68
50 0 56. 90
率（％) +
SRB 法 0. 5 抑制 -13. 90 40. 98
( PC-3M1E8人 5. 0 -7. 63
前列腺癌） 50 0 92. 03
40. 24
SRB BGC-823 0. 5 -11. 71
抑制率（％) +
人胃癌） 5. 0 -5. 92
50 0 92. 45
SRB 法 0. 5 抑制率（％) -4. 50
+ 18. 58
(MDA- B435-A 5. 0 2. 92
？赚） 50 0 93. 14
SRB 法 0. 5 -9. 78 + 39. 32
( Bel-7402 Aflf 5. 0 抑制率（％) -1. 24
癌） 50 0 92. 96
0. 5 -12. 72 + 34. 23
SRB法（Hela人 抑制率（％)
5. 0 -4. 05
宫颈癌） 50 0 95. 49
注： MTT: 四甲基偶氮唑盐 （染色）， SRB: 硫氰胺 B (染色)
IC50 细胞半数抑制浓度。
从表中可以看出：文冠果壳苷对体外六种类型肿瘤细胞抑制作用效果显著。从计 算出的 IC5o (半数抑制浓度） 可以看出， 文冠果壳苷的浓度仅为 18.58 ug/ml时， 对 乳腺癌细胞即有抑制作用， 其次是对宫颈癌， 肝癌， 胃癌， 前列腺癌和白血病细胞的 抑制效果，其半数抑制浓度分别为 34.23ug/ml， 39.32ug/ml， 40.24ug/ml, 40.98 ug/ml, 41.92 ug/ml。 由此可知， 文冠果壳苷对实体瘤细胞在较低的浓度下即有很好的抑制效 果， 经深入研究， 可开发出治疗肿瘤的新药。
对本发明实施例 1、 2、 3和 4提取的目的化合物， 应用化学法和光谱分析法（包 括： UV、 ID-NMR、 2D-DMR、 EI-MS、 ESI-MS等）， 进行了结构鉴定和数据归属： 根据其 UV， ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, HMQC, HMBC， TOCSY图谱数据 （详 见说明书附图 2~21 )， 并参阅文献 [l] Chen Y J， Talceda T, Ogihara Y, et al. Studies on the constituents of Xanthoceras sorbifolia Bunge. III. Minor prosapogenins from the fruits of Xanthoceras sorbifolia Bunge.[J]. Chem. Pharm. Bull, 1985, 33 ( 1 ) :127-134； [2] Yoshikawa M, Harada E, Matsuda H, et a Elato sides A and B, potent inhibitors of ethanol absorption in rats from the bark of Aralia elata Seem.: The structure-activity relationships of oleanolic acid oligoglycosid [J]. Chem.Phami.Bull.1993 ,41(11) ： 2069-2071. [3] Yoshikawa M. Harada E, Murakami T, et al. Camelliasaponins Bl. B2 ,C1 and C2 ,new type inhibitors of ethanol absorption in rats from the seeds of Camellia japonica L.[J]. Chem.Pharm.BulL 1994, 42(3) ： 742-744. 鉴定出该化合物结构为 3- O- ( α -L-arabinofurano syl ( 1→3 ) -J-D-galactopyranosyl ( 1→2) )-?-D-glucuronopyranosyl-21， 22-diangeloyl- Rpbarrigenol, 即 3-0- ( a -L-呋喃阿拉伯糖基 (1→3) - -D-吡喃半乳 糖基 （1→2) )- -D-吡喃葡萄糖醛酸基 -21， 22-二当归酰基- R bairigenol, 其化学结
Figure imgf000013_0001
经化学法和光谱分析对目的化合物所进行结构鉴定的详细数据归属见表 5:
' 表 5 文冠果壳苷核磁数据归属表
No 1JCNMR ¾NMR No "CNMR ¾NMR
Agl cone moiety Sugar moiety
3-0- glucuronopyranosyl moiety
39.7 1 ' . 105.2 4.89(lH,d，J=l 0.2Hz)
26.7 2 ' 78.9 -
89.9 3.21(lH,m) ？ ' 86.4 4 39.0 4 ' 71.7
5 55.7 5 ' 77.3
6 18.9 6 ' 172.0
7 36.4 2 ' -O-e-D-galactopyranosyl moiety
8 41.1 1 104.9 5.32(lH,d,J=7.5Hz)
9 47.2 ' 2 73.5
10 37.0 3 75.2
11 24.0 4 69.8
12 125.5 5.48(lH,brs) 5 76.7
13 143.7 6 61.9
14 47.8 3 ' -O- a -L-arabinofuranosyl moiety
15 67.6 1 111.2 6.03(lH,brs)
16 73.4 2 83.6
17 48.4 3 77.7
18 41.5 4 85.5
19 47.0 5 62.4
20 36.8 Angeloyl moiety
21 78.6 6.70(lH,d,J=10.2Hz) 1 167.8
22 73.6 6.32(lH,d,J=10.2Hz) 2 129.0
23 28.0 1.26(3H,s) 3 137.4 5.96(lH,q,J=7.0Hz)
24 16.8 1.16(3H,s) 4 15.9 2.09(3H,dq,J=7.0Hz)
25 15.8 0.81(3H,s) 5 21.0 2.00(3H,m)
26 17.6 0.98(3H,s) 1 168.2
27 21.3 1.84(3H,s) 2 129.2
28 63.2 3.73,3.50(lH,d,J=10.2Hz) 3 136.6 5.76(lH,q,J=6.6Hz)
29 29.6 1.09(3H,s) 4 15.7 1.93(3H,dq,J=6.6Hz)
30 20.3 1.31 (3H,s) 5 20.7 1.72(3H,m)
综上所述，新化合物的发现为三萜皂苷类化合物增添了一名新成员，从而将废弃 的文冠果果壳及果柄的利用价值大大提高，有望在今后的医药领域中开发出治疗脑疾 病和胂瘤的新药。

Claims

权 利 要 求 书
1 . 一种从文冠果壳和柄中提取的化合物， 其特征在于： i¾化合物定名为文冠果 壳苷， 其化学结构式如下： +
Figure imgf000015_0001
2. 一种从文冠果壳和抦中提取的化合物的方法， 其特征在于： 将文冠果臬壳和 /或果柄粉碎， 用溶剂浸提， 过滤， 回收溶剂得浓缩液， 浓缩液过大孔树脂， 用溶剂 洗脱， 并回收溶剂得浓缩物， 蒸干， 得到褐色固体， 即总皂苷； 将总皂苷用水溶解， 用正丁醇萃取， 千燥得褐色粉末， 经硅胶柱层析， 以氯仿 /甲醇 =100: 35-60进行梯 度洗脱， 回收洗脱液， 精制， 得到白色针晶， 即为目的化合物文冠果壳苷。
3. 根据权利要求 2所述从文冠果壳和柄中提取的化合物的方法， 其特征在于： 所述溶剂为水、 甲醇、 乙醇、 丙醇、 丁醇和 /或丙酮。
' 4. 根据权利要求 2所述从文冠果壳和柄中提取的化合物的方法， 其特征在于： 所述溶剂甲醇、 乙醇、 丙醇、 丁醇或丙酮的体积百分浓度为 35%~85%。
' 5. 根据权利要求 2所述从文冠果壳和柄中提取的化合物的方法， 其特征在于： 所述溶剂浸提过程中， 采用间隔搅拌， 即每隔 10~20分钟， 搅拌 1~5分钟， 浸提温度 为 60~100°C， 浸提时间为 1~3小时。
6. 一种从文冠果壳和柄中提取的化合物的应用， 其特征在于 ·： 用于制备治疗脑 疾病的药物。
7. 一种从文冠果壳和柄中提取的化合物的应用， 其特征在于： 用于制备预防、 治疗脑疾病的功能保健食品。
8. 一种从文冠果壳和柄中提取的化合物的应用， 其特征在于： 用于制备治疗肿 瘤的药物。
9. 一种从文冠果壳和柄中提取的化合物的应用， 其特征在于： 用于制备P页防、 治疗肿瘤的功能保健食品。
PCT/CN2005/000988 2004-07-07 2005-07-05 Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations WO2006002602A1 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11/631,637 US9884884B2 (en) 2004-07-07 2005-07-05 Compound extracted from husk and fruit stem of xanthoceras sobifolia and its extracting method and use thereof
US14/750,349 US10160780B2 (en) 2004-07-07 2015-06-25 Compound extracted from husk and fruit stem of Xanthoceras sobifolia and its extracting method and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200410020921.0 2004-07-07
CN200410020921 2004-07-07

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US11/631,637 A-371-Of-International US9884884B2 (en) 2004-07-07 2005-07-05 Compound extracted from husk and fruit stem of xanthoceras sobifolia and its extracting method and use thereof
US14/750,349 Continuation US10160780B2 (en) 2004-07-07 2015-06-25 Compound extracted from husk and fruit stem of Xanthoceras sobifolia and its extracting method and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2006002602A1 true WO2006002602A1 (fr) 2006-01-12

Family

ID=35782474

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2005/000988 WO2006002602A1 (fr) 2004-07-07 2005-07-05 Compose d'extraits d'enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations

Country Status (2)

Country Link
US (2) US9884884B2 (zh)
WO (1) WO2006002602A1 (zh)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7524824B2 (en) * 2003-09-04 2009-04-28 Pacific Arrow Limited Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof
US7727561B2 (en) * 2001-08-31 2010-06-01 Pacific Arrow Limited Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof
EP1670491B1 (en) * 2003-10-09 2015-07-29 Pacific Arrow Limited Composition comprising xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof
US7488753B2 (en) 2003-10-09 2009-02-10 Pacific Arrow Limited Composition comprising triterpene saponins and compounds with angeloyl functional group, methods for preparing same and uses thereof
US8614197B2 (en) * 2003-10-09 2013-12-24 Pacific Arrow Limited Anti-tumor compounds with angeloyl groups
US7514412B2 (en) * 2003-10-09 2009-04-07 Pacific Arrow Limited Anticancer biangeloyl saponins
US8735558B2 (en) * 2005-02-14 2014-05-27 Pacific Arrow Limited Blocking the migration or metastasis of cancer cells by affecting adhesion proteins and the uses of new compounds thereof
US10213451B2 (en) * 2004-09-07 2019-02-26 Pacific Arrow Limited Methods and compounds for modulating the secretion or expression of adhesion proteins or angiopoietins of cells
US9382285B2 (en) 2004-09-07 2016-07-05 Pacific Arrow Limited Methods and compounds for modulating the secretion or expression of adhesion proteins or angiopoietins of cells
US8586719B2 (en) * 2005-04-27 2013-11-19 Pacific Arrow Limited Triterpenes for modulating gene expression and cell membrane, and as antiprotozoal agents
US20120277308A1 (en) 2010-07-16 2012-11-01 Pacific Arrow Limited compounds for treating cancer and other diseases
US9499577B2 (en) 2009-07-16 2016-11-22 Pacific Arrow Limited Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
US9434677B2 (en) 2009-07-16 2016-09-06 Pacific Arrow Limited Natural and synthetic compounds for treating cancer and other diseases
CN102250195B (zh) * 2011-07-05 2012-08-29 杨柏珍 一种文冠果壳苷的生产方法
CN115260143B (zh) * 2022-08-31 2023-06-23 河北瑞龙生物科技有限公司 从文冠木中提取杨梅素的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1081369A (zh) * 1992-07-24 1994-02-02 中国科学院沈阳应用生态研究所 以文冠果子提取“提高脑功能”药物的制备方法
CN1349820A (zh) * 2001-10-31 2002-05-22 杨柏珍 文冠果果壳提取物在制备提高脑功能食品和药品中的应用
CN1413724A (zh) * 2001-08-31 2003-04-30 银泉科技有限公司 防治脑病和益智的脑活性作用物质及其制备方法
WO2005037200A2 (en) * 2003-10-09 2005-04-28 Pacific Arrow Limited Composition comprising xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1052636C (zh) 1993-03-29 2000-05-24 中国科学院沈阳应用生态研究所 文冠果子的醇提取物在制备治疗智力低下的药物中的应用
CN1092992A (zh) 1993-03-29 1994-10-05 中国科学院沈阳应用生态研究所 提高脑功能的药物及其制备方法
US7524824B2 (en) * 2003-09-04 2009-04-28 Pacific Arrow Limited Composition comprising Xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1081369A (zh) * 1992-07-24 1994-02-02 中国科学院沈阳应用生态研究所 以文冠果子提取“提高脑功能”药物的制备方法
CN1413724A (zh) * 2001-08-31 2003-04-30 银泉科技有限公司 防治脑病和益智的脑活性作用物质及其制备方法
CN1349820A (zh) * 2001-10-31 2002-05-22 杨柏珍 文冠果果壳提取物在制备提高脑功能食品和药品中的应用
WO2005037200A2 (en) * 2003-10-09 2005-04-28 Pacific Arrow Limited Composition comprising xanthoceras sorbifolia extracts, compounds isolated from same, methods for preparing same and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
VOUTQUENNE L. ET AL: "Haemolytic acylated triterpenoid saponins from Harpullia austro-caledonica", PHYTOCHEMISTRY, vol. 66, no. 7, April 2005 (2005-04-01), pages 825 - 835, XP004846755 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20150368285A1 (en) 2015-12-24
US20080058273A1 (en) 2008-03-06
US10160780B2 (en) 2018-12-25
US9884884B2 (en) 2018-02-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2006002602A1 (fr) Compose d&#39;extraits d&#39;enveloppe et de tiges de fruits de xanthoceras sorbifolia, son procede de preparation et ses utilisations
EP1800685B1 (en) Steroidal saponin pharmaceutical composition, its preparation method and use
CN105168235B (zh) 偏诺皂苷类化合物在制备治疗老年痴呆以及阿尔茨海默病药物中的应用
CN103342729B (zh) 咖啡酰基取代的五环三萜类衍生物及其用途
CN102212093B (zh) 黄酮苷类化合物及其制备方法和用途
EA030048B1 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения головной боли, синдрома травматического поражения черепно-мозгового нерва, головокружения и вертиго, раздражения и возбудимости, бессонницы и/или сонливости и способ ее получения
CN109575099A (zh) 达玛烷皂苷元衍生物及其制备方法和应用
CN101899082B (zh) 三萜皂苷类化合物、用途及制备方法
EP3461486B1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating dementia and improving cognitive function, comprising acanthoside b extracted from glasswort
KR100205045B1 (ko) 신규한 트리테르펜 글리코사이드 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 항암제 조성물
CN111018877B (zh) 一种土木香中倍半萜类衍生物、其制备方法及应用
CN103169696A (zh) 黄皮有效成分抗神经退行性疾病的用途
Lamidi et al. Structural and antimalarial studies of saponins from Nauclea diderrichii bark
CN111454317A (zh) 具有抗炎活性的人参二醇型三萜皂苷、三七叶提取物、药物组合物和化妆品组合物
CN102462727A (zh) 玉郎伞总黄酮及其单体成分在制备抗肿瘤药物中的作用
CN105079011A (zh) 一种具有抗肿瘤作用的药物的制备和应用
CN103054889A (zh) Hederagenin-3-O-arabinopyranoside抗肿瘤的应用
US2552896A (en) Methanol extraction of cascara sagrada bark
US20040247698A1 (en) Erectile Dysfunction Treatment
CN101851271A (zh) 蓝萼丁素衍生物、制备方法及其用途
CN113061153B (zh) 吲哚苷类化合物、其制备方法及其应用
Rosa et al. Analge-sic and Anti-Pyretic Activities of the Root Bark of Rutidea Parviflora (Rubiaceae)
CN1095669C (zh) 含原人参二醇组分皂甙的药物组合物,其制备方法及应用
CN110857285B (zh) 取代吡唑类化合物、其制备方法、药物组合物及用途
CN109265467B (zh) 一种中药女贞子来源的七环内酯化合物及其作为抗老年痴呆药物的应用

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
DPEN Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11631637

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase
WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 11631637

Country of ref document: US