WO2002075045B1 - Procedimiento para el control enzimático de los depósitos de brea (pitch) formados durante la fabricación de pasta de papel utilizando una esterasa que hidroliza tanto triglicéridos como ésteres de esteroles - Google Patents
Procedimiento para el control enzimático de los depósitos de brea (pitch) formados durante la fabricación de pasta de papel utilizando una esterasa que hidroliza tanto triglicéridos como ésteres de esterolesInfo
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Abstract
Se describe la selección de un hongo, Ophiostoma piceae, que secreta una esterasa de interés comercial, la producción y caracterización de la enzima, y los ensayos de aplicación sobre líquidos de proceso sintéticos y pastas representativos de los procesos de producción de pasta de papel a partir de maderas de frondosas y coníferas. Los resultados obtenidos muestran que la nueva enzima posee elevada afinidad y actividad sobre trioleina y tributirina y oleato y linoleato de colesterol, siendo capaz de reducir las concentraciones de ésteres de esteroles y triglicéridos durante el tratamiento de líquidos de proceso de la fabricación de pastas de eucalipto y pino respectivamente.
Claims
1.- Esterasa füπgica que combina propiedades catalíticas de Hpasas (EC 3.1.1.3) y esteral esterasas (EC 3.1.1.13) caracterizada porque los esteres de esteróles que S hidroliza son esteres de sitosterol, colesterol, stigmastanol, fucosterol,, cicloartcnol, 24- metüeπcicloarteπoi y citrostadienol con ácidos grasos, en particular oleico y linoleico, y los glicéridos que hidroliza son triglicéridos, diglicéridos y monoglicéridos de ácidos grasos, en particular oleico y linoleico.
0 2.- E sterasa se gún lar ei vindicación 1 , c aracterizada p orque es p roducída p or h ot gos ascomicctos productores del llamado "azulado" de la madera.
3.- Esterasa según la reivindicaciones 1 y 2, caracterizada porque es producida por hongos del género Ophiostoma. 5
4.- Esterasa según la reivindicaciones 1-3, caracterizada porque la esterasa aplicada es producida por la especie Ophiostoma piceae.
5.- Esterasa según la reivindicaciones 1-4, caracterizada porque la secuencia N-tcrmirtal 0 es la SEQ.ID.NO l.
6.- Esterasa según las reivindicaciones 1-5, caracterizada porque es una glicoproteína con un 8% de carbohidratos unidos por enlaces N-glico$ídicos y una masa molecular estimada por electroforesis en condiciones desnaturalizantes de 56,5 KDa. 5
7.- Esterasa según la reivindicación 1-6, caracterizada porque es producida por la cepa CECT 20416 de Ophiostoma piceae.
8,- Esterasa según las reivindicaciones 1-7 caracterizada por ser una esterasa 0 recombinante codificada por el gen de la esterasa de Ophiostoma picea CECT 20416.
9.- Procedirπiento para la obtención de la esterasa de Ophiostoma piceae CECT 20416 según las reivindicaciones 1-7, caracterizado por la producción de la enzima en cultivo líquido del hongo, que puede incluir un compuesto Iipídico como inductor; y su posterior purificación mediante cromatografía de interacción hidrofóbica.
10.- Procedimiento para la obtención de la esterasa recombinante según la reivindicación S que incluye: i) La anipliíϊcación por PCR (reacción de polimerasa en cadena) de una sonda utilizando como iniciadores oligonucleótidos que codifican la secuencia N-termirial de la esterasa purificada de Ophiostoma piceae (SBQ.ID.NO 1) y secuencias internas de dicha pτoteína y DNA o cDNA del mismo hongo como molde; ii) la utilización de dicha sonda para realizar el "screening" de una librería de cDNA de Ophiostoma piceae; íii) la clonación del gen que codifica la enzima en un vector adecuado; y i v) su expresión h eteróloga en alguno de 1 os organismos usados p ar l a producción industrial de enzimas.
11.- Utilización de una esterasa según las reivindicaciones 1-8, para el control de los depósitos de brea (pitch) formados durante la fabricación de pasta de papel caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para la fabricación de pasta de papel es madera de frondosas (angiospermas leñosas),
12.- Utilización de la esterasa según la reivindicación 11, caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para la fabricación de pasta de pape] es madera de especies de eucalipto, chopo, álamo, o abedul,
13.- Utilización de la esterasa según las reivindicación 12, caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para la fabricación de pasta de papel pertenece a las especies Eucafypt s globulus, E calypt s camaldulensis, Eucalyptus granáis, Popul s trémula, Pop l s tremuloides, Betula péndula o Bebda trémula.
14-- Utilización de la esterasa según las reivindicación 11, caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para l fabricación de pasta de papel es madera de coniferas (giinnospermas leñosas). 27
15.- Utilización de la esterasa según la reivindicación 14, caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para la fabricación de pasta de papel es madera de especies de Pinus o Picea.
16.- Utilización de la esterasa según las reivindicación 15, caracterizada porque la madera utilizada como materia prima para la fabricación de pasta de papel pertenece a las especies Pinus syhestris, Pinus taeda, Pinus contaría, Pinus virginiana, o Picea abies.
17.- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 11-16, caracterizada porque la pasta de papel se fabrica mediante los procedimientos de pulpeo de la madera denominados mecánicos.
18- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 11-16, caracterizada porque la pasta de papel se fabrica mediante los procedimientos de pulpeo de la madera denominados químicos.
19.- Utilización de la eslerasa según las reivindicación 18, caracterizada porque la pasta de papel se fabrica mediante los procedimientos de pulpeo químicos denominados cocción rafí o cocción al sulfíto.
20.- Utilización de ía csterasa según las reivindicaciones 11-16, caracterizada porque la pasta de papel se fabrica mediante una combinación de los procedimientos de pulpeo de la madera denominados mecánicos y químicos.
21.- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 18-20 caracterizada porque la pasta de papel se blanquea por los procedimientos denominados ECF (libres de cloro elemental). 28
22 - Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 18-20, caracterizada porque la pasta de papel se blanquea por los procedimientos denominados TCF (totalmente libres de cloro).
23,- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 13, 19, 21 y 22 caracterizada porque el control enzimático de los depósitos de "piten" se aplica durante la fabricación de pasta kraft de madera de Eucalyptus globulus blanqueada medíante procedimientos ECF o TCF.
24.- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 11-23, caracterizada porque la esterasa utilizada para el control enzimático del "pitch" se aplica a la pasta tras la cocción, durante el blanqueo o al término de éste a una temperatura comprendida entre 4°C y 60°C y un pH entre 3,5 y 8, preferentemente entre 3,5 y 6,5 por un tiempo entre 10 minutos y 24 horas, preferentemente entre 1 y 6 horas.
25.- Utilización de la esterasa según las reivindicaciones 11-23, caracterizada porque la esterasa utilizada para el control enzimático del "pitch" se aplica a los líquidos de proceso procedentes de la cocción, el lavado de la pasta, o el blanqueo de la misma a ía temperatura comprendida entre 4σC y 60°C y un pH entre 3,5 y 8, preferentemente entre 3,5-6,5 por un tiempo entre 10 minutos y 24 horas, preferentemente entre 1 y 6 horas.
26.- Utilización de la esterasa según la reivindicación 24, caracterizada porque la concentración de la esterasa utilizada está comprendida entre 0,05 - 50 U/g de pasta, preferentemente entre 0,1- 5 U/g de pasta, más preferentemente entre 0,1- 1 U/g de pasta.
27.- Utilización de la esterasa según la reivindicación 25, caracterizada porque la concentración de la esterasa utilizada está comprendida entre 0,050 - 50 U/1 de líquido de proceso, preferentemente entre 0,1-5 U 1 de líquido de proceso, más preferentemente entre 0,1-1 U/1 de líquido de proceso.
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