WO2000023469A2 - Fragments du facteur de croissance proche de l'insuline et de la proteine de fixation du facteur de croissance proche de l'insuline, et utilisations de ces fragments - Google Patents

Fragments du facteur de croissance proche de l'insuline et de la proteine de fixation du facteur de croissance proche de l'insuline, et utilisations de ces fragments

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    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/65—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2

Definitions

  • Figure 4 shows the primary structures of IGFBPs 1-6. Spatially conserved cysteine residues are shown in gray. The underlined sequence indicates the epitope peptide used to generate anti-IGFBP-2 antibodies. Sequences were aligned using the Pileup component of the Wisconsin Package version 9.0 (Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin).
  • variations in the amino acid sequence may arise naturally as allelic variations (e.g., due to genetic polymorphism) or may be produced by human intervention (e.g., by mutagenesis of cloned DNA sequences), such as induced point, deletion, insertion and substitution mutants.
  • minor changes in amino acid sequence are generally preferred, such as conservative amino acid replacements, small internal deletions or insertions, and additions or deletions at the ends of the molecules.
  • Substitutions may be designed based on, for example, the model of Dayhoff, et al, 1978. These modifications can result in changes in the amino acid sequence, provide silent mutations, modify a restriction site, or provide other specific mutations.
  • ERGPLEHLYSLHIPN SEQ ID NO: 106
  • ERGPLEHLYSLHIP SEQ ID NO: 107
  • ERGPLEHLYSLHI SEQ ID NO.108
  • ERGPLEHLYSLH SEQ ID NO: 109
  • the intrasequence disulfide bond can be between the cysteine residues corresponding to residues 249 and 270 of IGFBP-2 or between the cysteine residues corresponding to residues 236 and 247 of IGFBP-2.
  • the reduction will be 100%, 99%, 98%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, or 5%.
  • the fragment of IGF in the present invention can comprise the amino acid sequence of GPETLCG (SEQ ID NO:80) or AYRPSETLCG (SEQ ID NO:81), which are the N-termini of IGF-1 and IGF-2, respectively.
  • the IGF fragment of the claimed invention can further comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80 or SEQ ID NO: 81 linked to the amino acid sequence FRS (SEQ ID NO:82) by a disulfide bond.
  • the lyophilized reaction mixture was dissolved in 0.5 M acetic acid and 10 ⁇ l of trifluoroacetic acid (TFA) and chromatographed on a C18 column equilibrated in 0.1% TF A 24% acetonitrile at a flow rate of 1 ml/min. After 20 min a linear gradient from 24-60% acetonitrile was developed over 60 min to elute IGF-1 and the reaction products. In addition to unreacted IGF-1 (peak 1), 3 major products are obtained. Analysis of these peaks by acidic polyacrylamide gel electrophoresis in 8 M urea has revealed that all three derivatized IGF- Is are monosubstituted, thus exhibiting the loss of 1 net positive charge.
  • TFA trifluoroacetic acid

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Abstract

Cette invention se rapporte aux parties de peptides de la protéine IGFBP (protéine de fixation du facteur IGF) et de peptides du facteur IGF (facteur de croissance proche de l'insuline) qui entrent dans la fixation IGF-IGFBP. Par conséquent, la présente invention propose un domaine de fixation d'IGF isolé d'une protéine IGFBP ou des modifications de ce domaine, qui fixe l'IGF avec au moins approximativement la même affinité de liaison que la protéine IGFBP pleine longueur. Cette invention concerne également un antagoniste d'IGF qui réduit la fixation de l'IGF à un récepteur d'IGF. Sont en outre décrits un fragment du facteur IGF ou une modification de ce fragment, qui se fixe à un domaine de fixation de l'IGFBP, un complexe protéiné contenant le domaine de fixation d'IGF de la protéine IGFBP de cette invention, ainsi que des procédés servant à traiter un sujet souffrant de cancer ou à prévenir le cancer chez un sujet, à traiter un sujet souffrant d'une complication diabétique exacerbée par IGF et à prévenir toute complication diabétique exacerbée par l'IGF et consistant à administrer à ce sujet l'antagoniste d'IGF. Cette invention propose en outre un procédé servant à traiter un sujet souffrant d'une lésion ischémique ou à prévenir une lésion ischémique chez un sujet et consistant à administrer à ce sujet le fragment d'IGF ou l'antagoniste d'IGFBP de cette invention.
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