WO1998029111A1

WO1998029111A1 - Carcinogenesis inhibitors

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Publication number: WO1998029111A1
Application number: PCT/JP1997/004765
Authority: WO
Inventors: Takashi Maoka; Kooichi Mochida; Mutsuo Kozuka; Harukuni Tokuda; Yoshihiro Ito; Yoko Okuda
Original assignee: DESIGNER FOODS ASSOCIATION Ltd
Current assignee: DESIGNER FOODS ASSOCIATION Ltd
Priority date: 1996-12-25
Filing date: 1997-12-24
Publication date: 1998-07-09
Anticipated expiration: 1999-06-25
Also published as: US20020032176A1; AU7888498A

Description

明細書発癌抑制剤技術分野

本発明は、発癌抑制剤に関し、さらに詳述すれば、発癌を抑制する植物エキス、及びそれらの植物エキスから得られるカロテノイド物質を有効成分とした発癌化抑制作用を有する発癌抑制剤に関する。背景技術

日本人の死亡原因の第 1位は癌であり、発癌予防は国民の健康上極めて重要な問題になっている。一般に癌はイニシエーションとプロモーシヨンとの異なった二段階を経て起こると考えられている。すなわち、紫外線、放射線や変異原物質などのイニシエータ一によつて、正常細胞の遺伝子の D N Aに修復できない損傷が起こり（ィニシェ一シヨン）、その結果生じた潜在的な癌細胞が、プロモーターと呼ばれる化学物質によって繰り返し刺激され（プロモーション）癌化する。したがってィニシェ一ションまたはプロモ一ションのいずれかの過程を阻止することにより癌を防ぐことができる。

しかし、環境中にはイニシエータ一となる紫外線、放射線や種々の変異原物質が存在するため、イニシエータ一を完全に除去することは不可能である。また、大部分の成人はイニシエーションにかかった細胞を既に保有していると考えられており、ィニシエーション過程の阻害は発癌予防の観点から有効とはいえない。一方、プロモーション過程は長期にわたるので、この過程を阻害することが有効な発癌の予防方法であると考えられる。

差替え用紙（規則 26) 以上の観点から、抗発癌プロモーターを探索する試みが行われ、多くの植物エキス及びその成分などが抗発癌プロモー夕一として作用することが報告されているが、さらなる発癌抑制作用をもつ食用植物を起源とする安全な植物エキスの提供が望まれている。

この様な背景から、黄柏など多くの植物の粗抽出物が実験的発癌の抑制を可能とする例が報告されており、また、その有効主成分が/?一カロテンであることが判明するなど、徐々にその内容が明らかにされつつある。

抗発癌プロモーターの一次スクリーニング試験法としては、ェプス夕イン一バールウィルス · ゲノム活性化抑制試験法がある。この試験法はエブス夕ィンーパールウィルス · ゲノムを内蔵するパーキヅト · リンパ種由来の培養細胞であるラジ（ R a j i ) 細胞の培養系においてテトラデカノィルホルボールアセテート（以下、 T P Aと略記する。）をプロモーターとするウィルスゲノムの発現抑制を指標とするものである。この方法は迅速かつ定量性があり、加えて微量で活性物質の検出が可能である。

ェプス夕イン一バールウィルスは、ヘルべスウィルス科のウィルスで、パ一キットリンパ種や上咽頭癌の原因とされている。該ウィルスは、これらの癌患者のみに検出されるのではなく、世界中に極めて広く潜在し、人の普遍的なウィルスであり、ほとんどすべての成人はェプス夕イン一バールウィルスに感染しているといわれている。ェブス夕イン一パールウィルスは、人の正常 B リンパ球を感染標的として芽球化し、これに無限の増殖能を付与することが明らかになっており、 B リンパ球への腫瘍原生を内蔵する人の常在性ウィルス因子と規定されている。

本発明の課題は、発癌抑制作用を有する新規な発癌抑制剤を提供す

差替え用紙（規則 26) る点にある。発明の開示

発明者はエブス夕ィンーバールウィルス · ゲノム活性化抑制作用を指標に、数多くの微生物、植物を対象として系統的な研究 · 実験を重ねた結果、パラディチヨムパプリカから抽出されるエキス、及びそのエキスに含まれるカロテノィドであるカプサンチン、カブサンチンの脂肪酸エステル、カブソルビンジエステル、カプサンチン 3 , 6 - エポキシド、カプソルビン、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルが強いエブス夕イン一パールウィルス · ゲノム活性化抑制作用を有するという剋目すべき知見を得、本発明を完成した。

また、本発明者は、カプサンチン脂肪酸エステルの構造を検討した結果、カプサンチンの脂肪酸モノエステルのほか、特にカプサンチンの脂肪酸ジエステルがより一層強いェプスタインーパールウィルス · ゲノム活性化抑制作用を有する知見を得た。

さらに、カブサンチン、カブソルビン、ククルビタキサンチンの脂肪酸エステルについて、ェプス夕イン一バールウィルス ' ゲノム活性化抑制作用を詳細に研究した結果、バルチミン酸エステル、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸のエステルが抗癌ウィルス活性化抑制作用を発揮することを見いだした。

上記の有効成分を多く含む植物として本発明者が見出したものにパラディチョムパプリカの果実が挙げられる。パラディチヨムパプリカ ( parad i csom papr ika) は、ハンガリ一を原産とする野菜である。その原種の実はクローパ型で、深い赤色であり、表面は光沢がありロウ質で、加熱しても色が抜けない性質を有している。また、果肉が厚く、糖度が高く、青臭さがない。また、その成分分析例としては、可食

差替え用紙（規則 26) 部 l O O g当りビタミン A効力（ I U) が 7 8 0、ビタミン B ₂が 0 . 2 3 mg、ビタミン Cが 1 8 9 mg、鉄が 0. 6 2 mgである。本発明でいうパラディチヨムパプリカ（paradicsom paprika) は、この原種パラディチヨムパプリカを意味するが、さらに本発明ではこの原種の中のうち特定の果実をつけるものの選抜を繰り返し行いこれを固定し、稔実の確かさを向上させた品種（以下、純系種という。）をも含めて定義づけられる。なお、純系種は、分類学による学名 Capsicu m annuum L.var.grossumに分類されている。例えば、日本国の市場において「トマビ一」という商標名で取り引きされていものが含まれる。また、かかる純系種のパラディチヨムパプリカにラージベルタイプ、ビメント系タイプ、ノヽンガリアンパプリカタイプ、ラージネアポリ夕ン系夕イブのいずれかのビーマンを交配させた種（以下、 F 1種という。）及び F 1種同志の交配による種（以下、四元交配種という。 ) 及びこれらの交配種のとりもどし種（以下、 F 2種という。）をも含めて定義される。すなわち、本発明でいうパラディチヨムパプリカとは、原種のほか、純系種、および、 F 1種、四元交配種、 F 2種並びにそれ以降の交配種のパラディチヨムパプリカを意味する。

本発明の発癌抑制剤の有効成分であるカプサンチン、カプサンチンの脂肪酸エステル、カプソルビンジエステル、カブサンチン 3， 6— エポキシド、カブソルビン、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルのカロテノィドはそれぞれ、いわゆる赤ビーマンなどの Capsicum属の植物の果実から分離することができる。中でもパラディチヨムパプリ力（paradicsom paprika) にはこれらのカロテノイドが多量に含まれており、これから分離したものが好適に使用することができる。本発明においてはパラディチヨムパプリカをァセトン等で抽出したエキスに含まれるカプサンチン、カプサンチンの脂肪酸エステル、カプソル

差替え用紙（規則 26) ビンジエステル、カプサンチン 3， 6 —エポキシド、カプソルビン、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルが好ましい。但し、これから抽出されたものに限定されるものではなく、赤ピーマンの果実など他の植物から抽出されたものであっても、合成品であつても何等問題はない。また抽出方法は特に限定されるものではなく、抽出溶媒も他のものを用いてもよい。

また、カプサンチンの脂肪酸エステル、カプソルビンジエステル、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルを構成する脂肪酸としては少なくともパルミチン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸であることが判明した。

カプサンチン、カプサンチンの脂肪酸エステル、カブソルビンジェステル、カプサンチン 3， 6 —エポキシド、カブソルビン、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルは強い発癌ウィルス活性化阻害作用を示した。したがって、これらのカロテノイドはェプス夕イン一パールウィルス · ゲノムの発現を阻害することから、発癌予防効果を奏する。よって、これらは癌予防の観点から、医薬品、化粧品、健康食品等の分野に広く利用できる。図面の簡単な説明

第 1 図は、パラディチヨムパプリカのエキスを使用したマウス皮膚 2段階発癌抑制試験における実験開始後の経過週とパピロ一マ発生マウスの割合の関係を示すグラフである。

第 2図は、パラディチヨムパプリカのエキスを使用したマウス皮膚 2段階発癌抑制試験における実験開始後の経過週と発生したパピローマ数の関係を示すグラフである。

第 3図は、カブソルビンジエステルの ¹ H— N M Rのチヤ一トであ

差替え用紙（規貝 IJ26) る

第 4図は、カブソルビンジエステルの ¹³ C— NMRのチャートである o

第 5図は、カブソルビンジエステルの UV— V I Sのチャートである。

第 6図は、カブソルビンジエステルの FAB— M Sのチャートである。

第 7図は、カプサンチンジエステルの ¹ H— NMRのチヤ一トであ第 8図は、カプサンチンジエステルの ¹³ C— N M Rのチャートであ ο

第 9図は、カプサンチンジエステルの UV— V I Sのチャートである ο

第 1 0図は、カプサンチンジエステルの FAB— M Sのチャートである o

第 1 1図は、ククルビタキサンチンの ¹ H— NMRのチャ一卜である。

第 1 2図は、ククルビタキサンチンの UV— V I Sのチャートである 0

第 1 3図は、ククルビタキサンチンの FAB— M Sのチャートである o

第 1 4図は、カプサンチン 3， 6—エポキシドの ¹ H— NMRのチヤ — 卜である。

第 1 5図は、カプサンチン 3， 6—エポキシドの ¹³ C— NMRのチャ一トである。

第 1 6図は、カプサンチン 3， 6—エポキシドの UV— V I Sのチ

差替え用紙（規貝 IJ26) ャ一トである。

第 1 7図は、カプサンチン 3， 6—エポキシドの F AB— MSのチヤートである。

第 1 8図は、カブソルビンの ¹ H— NMRのチャートである。

第 1 9図は、カブソルビンの UV— V I Sのチャートである。

第 2 0図は、カプソルビンの FAB— M Sのチャートである。

第 2 1図は、カプサンチンモノエステルの ¹ H— NMRのチャートである。

第 2 2図は、カプサンチンモノエステルの ¹³ C— NMRのチャートである。

第 2 3図は、カプサンチンモノエステルの UV— V I Sのチャートである。

第 2 4図は、カプサンチンモノエステルの FAB— M Sのチヤ一トである。

第 2 5図は、カプサンチンの ¹ H— NMRのチャートである。

第 2 6図は、カプサンチンの ¹³ C— NMRのチャートである。

第 2 7図は、カプサンチンの UV— V I Sのチャートである。

第 2 8図は、カプサンチンの F A B— M Sのチャートである。

第 2 9図は、カプサンチン等を使用したマウス皮膚 2段階発癌抑制試験における実験開始後の経過週とパピ口一マ発生マウスの割合の関係を示すグラフである。

第 3 0図は、カプサンチンなどを使用したマウス皮膚 2段階発癌抑制試験における実験開始後の経過週発生したパピロ一マ数の関係を示すグラフである。発明を実施するための最良の形態

差替え用紙（規貝 IJ26) 実施形態 1

本発明のパラディチヨムパプリカエキスは次のような手順により抽出される。本実施例の抽出には、前述の純系種（学名 Capsicum an nuum L.var.grossumに分類される品種）を用いた。すなわち、パラデイチョムパプリカの可食部 l k gを裁断し、アセトンに浸潰して室温で暗所に静止し、時々振蕩して赤色のアセトン抽出物を得た。抽出残渣に再びァセトンを加えて同じ操作をさらに 3回繰り返してァセトン抽出液を集めた。この抽出液を減圧濃縮乾固しアセトンエキスを得た。また、抽出溶媒にメタノールを用い、この方法と同様にしてメ夕ノ —ルエキスを作成した。これらにへキサンを加えてとかし、へキサンに可溶の区分を集めへキサン抽出物を得た。これを減圧濃縮してへキサン抽出物を得た。

(エブス夕ィンーパールウィルス · ゲノムの発現阻害活性の測定）このアセトン抽出物、及びへキサン抽出物を用い、ェプス夕イン— パールウィルス · ゲノムの発現阻害活性の測定を次の条件で行った。ェプス夕イン一パールウィルス潜在感染ヒトリンパ芽球細胞株、ラジ細胞の培養液として PRM I 1 64 0に胎仔血清及び抗生物質を加えたものを使用した。この培養条件下で、ェプス夕イン—パールウィルス早期抗原の自然発生率は 0. 1 %以下である。 1 X 1 0⁶細胞 m lの濃度に調整したラジ細胞を、 4 mMの n—酪酸、 2 0 n g /m lの T PA、それに 1 0 0 g/m lの被検物質を加えた上記培養液中で 3 7°C；、 4 8時間培養した、上咽頭癌患者血清を用いた間接蛍光抗体法にてェブス夕イン—バールウイルス早期抗原を発現した細胞を検出し、陽性細胞の比率を被検物質を加えなかったコント口一ルに対して算出し、ウィルス ' ゲノムの発現阻害活性とした。さらに

差替え用紙（規貝 IJ26) 被検物質の濃度を 1 0 z g/m l、 l / g/m lに変化させて同活性を測定した。この結果を表 1に示す。

単位％抑制率（％ラジ細胞生存率）上記表 1より、パラディチヨムパプリカをアセトンで抽出したェキス及びそのエキスをへキサンで抽出した抽出物は強い発癌ウィルス活性化阻害作用を示した。その阻害作用は医薬品として用いられている黄柏エキスとほぼ同様の作用を有しており、発癌性ウイルス活性抑制剤としての価値が認められた。また、ラジ細胞生存率も 7 0 %以上を維持しており、細胞に対する毒性はほとんど認められないことが判明した。従ってパラディチヨムパプリカのエキス及び抽出物は発癌抑制作用を有し、発癌抑制剤の有効成分とすることができることが見出された。

(マウス皮膚二段階発癌抑制試験）

上記のようにパラディチヨムパプリカの抽出物は強い発癌ウィルス活性化抑制作用を示すことが確認することができた。そこで、発癌抑制効果を明確にするため、マウスを用いる皮膚癌の抑制試験を行った。すなわち、マウス皮膚二段階発癌抑制試験を次の条件で行った。

1群 1 5匹の I C R雌性マウス（ 6週齢）の背部体毛を剃毛して 2 4時間後、背部皮膚にアセトン（ 0. 1 m l ) に溶解した 7， 1 2—

差替え用紙（規貝リ 26) ジメチルベンズ [ひ] アントラセン（以下、 DMB Aと略記する。） ( 1 0 0 u g , 3 9 O nmo 1 ) を塗布してイニシエーションを行い、一週間後から各実験群を以下のように処理した。

第 1群：アセトン（ 0. 1 ml) に溶解した T P A ( 1 g， 1. 7 nmol) を週 2回、 2 0週間塗布し続けることによりプロモーションを行う。この際、 T P A塗布 1時間前にアセトン（ 0. 1ml) を同部位に塗布する（陽性コントロール群）。

第 2群：第 1群と同様に、週 2回、 2 0週間にわたり T PA ( 1 pi g, 1. 7 nmol) 塗布 1時間前にアセトン（ 0. 1ml) に溶解した被検試料パラディチヨムパプリカエキス（メタノールで抽出したもの） 5 0 gを塗布する。

T P A塗布によるプロモーション開始 2 0週後まで、各週ごとにマウス背部に発生するパピローマを観察し、パピローマの発生したマウスの率と 1匹あたりに発生したパピローマの平均個数とを陽性コントロール群と比較して評価した。その結果を第 1図及び第 2図に示す。試験の結果、第 1図に示すように陽性コントロール群ではプロモーシヨン開始後 7週目に最初の腫瘍が形成され、 1 1週目にはすべてのマウスに腫瘍が形成されたのに対し、第 2群（メタノールエキス処理群）ではいずれも 9週目にはじめて腫瘍の形成が認められ、腫瘍の形成を遅延させることが明らかとなった。また、試験終了時の 2 0週後においても、第 2群では 2 0 %のマウスには腫瘍形成が認められなかつた。

また、第 2図から明らかなように、マウス 1匹あたりの平均腫瘍個数は 2 0週後で陽性コントロール群では 9. 1個であつたのに対し、第 2群では 4. 5個であり、 5 0 %の発癌抑制効果が認められた。

このことから、パラディチヨムパプリカの抽出物は、マウス皮膚二

差替え用紙（規則 26) 段階発癌抑制試験においても発癌抑制作用を有することが見出された

実施形態 2

上記のようにパラディチヨムパプリ力のエキスは生体試験においても発癌ウィルス活性化抑制作用をはじめ、発癌抑制作用を発揮することが認められた。そこで本発明者はかかるエキスに含まれる有効成分を明らかにするためにさらに次の試験を行った。

本発明の発癌抑制剤の有効成分であるカロテノィドは一例として、次のようなパラディチヨムパプリカエキスの分画により次の手順で抽出、分離される。

本試験においては、前述のパラディチヨムパプリカ（paradicsom paprika) の純系種 (学名 Caps icum annuum L . var . grossum に分類される品種）を用いた。すなわち、パラディチヨムパプリカの可食部 8 0 0 gを裁断し、アセトンに浸漬して室温で暗所に静置し、時々振蕩して赤色のアセトン抽出液を得た。抽出残渣に再びアセトンを加えて同じ操作をさらに 3回繰り返してアセトン抽出液を集めた。この抽出液を減圧濃縮乾固しアセトンエキスを得た。これにへキサンを加えて溶かし、へキサンに可溶の区分を集めへキサン抽出物を得た。これを減圧濃縮してへキサン抽出物を得た。

さらにこのエキスを定量した結果、パラディチヨムパプリ力の可食部 8 0 0 gから 1 2 0 m gのカロテノィドを抽出物として取り出すことができることが判明した。これらの成分を分析するため、へキサンエキスをシリカゲルを吸着剤とするカラムクロマトグラフィーに付し、へキサン一エーテル（ 7 ： 3 ) で溶出したフラクションにより A成分（カブソルビンジエステル）を 2 0 m g、へキサン一エーテル（ 8

差替え用紙（規則 26) ： 2 ) で溶出したフラクションにより B成分（カプサンチンの脂肪酸ジエステル）を 4 0 m g、エーテルで溶出したフラクションにより C 成分（ククルビタキサンチン）を 8 m g、エーテル一アセトン（ 9 ：

1 ) で溶出したフラクションにより D成分（カプサンチンエポキシド ) を 8 m g、エーテル一アセトン（ 7 ： 3 ) で溶出したフラクションによりを E成分（カプソルビン）を 5 m g、へキサン一エーテル（ 5

： 5 ) で溶出したフラクションにより F成分（カプサンチンの脂肪酸モノエステル）を 2 4 m g、エーテル一アセトン（ 8 ： 2 ) で溶出したフラクションにより G成分（カプサンチン）を 1 2 m gを分離した ο

これらの分画された A〜 G成分の物質を明らかにするため、各成分について必要に応じて紫外—可視部吸収スぺクトル（以下、 U V— V I S と略記する。）、高速原子衝撃質量分析スペクトル（以下、 F A B— M S と略記する。）、水素核磁気共鳴スペクトル（以下、 — NMRと略記する）。及び炭素核磁気共鳴スぺクトル（以下、 ¹³C— NM Rと略記する。）を用いてその物質が何であるかの検討を行った

( A成分の解析）

上記分析の結果、 A成分はカブソルビンジエステルであることが判明した。なお、本実施形態においては上述のようにパラディチヨムパプリカのエキスから抽出したものであり、かかる場合のその脂肪酸の種類と構成比は表 2のものであることが判明した。そのスぺクトルデ —夕は次の通りである。

UV— V I S ( e t h e r ) え： 4 4 5 , 4 7 9 , 5 1 0 , nm， ¹ H - NMR ( C D C 1 ₃) 6 : 0. 8 6 ( 6 H, s , H— 1 6， 1 6

差替え用紙（規貝 IJ26) ' ) , 0. 8 8 ( 6 H, t , J = 7 H z , C H ₃ f a t t y a c i d ) , 1. 1 8 ( 6 H, s , H - 1 7 , 1 7 ' ) , 1. 2 5 ( s ， C H 2 f a t t y a c i d ) , 1. 3 2 ( 6 H, s , H - 1 8 , 1 8 ' ) , 1. 5 7 ( 2 H , d d , J = 1 5 , 3. 5 H z， H - 4 β , 4 ' ? ) , 1. 7 4 ( 2 H, d d , J = 1 3. 5 , 4 H z , H -

2 β , 2 ' ? ) , 1. 9 6 ( 6 H， s， H - 1 9 , 1 9 ' ) , 1. 9 9 ( 6 H, s， H - 2 0， 2 0 ' ) , 2. 0 9 ( 2 H, d d , J = 1

3. 5， 8 H z， H - 2 α , 2 ' a ) , 2. 2 7 ( 4 H , t， 7 H z

, C H 2 f a t t a c i d ) , 2. 9 9 ( 2 H, d d , J = l 5 , 9 H z , H - 4 A ' ) , 5. 2 4 ( 2 H, m， H— 3 , 3

' ) ， 6. 3 6 ( 2 H m, H - 1 4， 1 4 ' ) , 6. 4 4 ( 2 H， d , J = 1 5 H z , H 7， 7 ' ) , 6. 5 5 ( 2 H , d , J = 1 5 H z， H - 1 2 , 1 2 ) , 6. 5 9 ( 2 H， d , J = 1 1 H z , H 一 1 0 , 1 0 ' ) , 6 6 8 ( 2 H， d d， J = 1 5 , 1 1 H z , H 一 1 1， 1 1 ' ) , 6 7 0 ( 2 H, m, H— 1 5 , 1 5 ' ) , 7. 3 4 ( 2 H， d， J = 1 5 H z ₃ H - 8 , 8 ' ) , ^{I 3} C - NMR ( C D C 1₃) δ : 1 2. 8 0 ( C - 2 0 , 2 0 ' ) , 1 2. 8 7 ( C - 1 9 1 9 ' ) , 1 4. 1 3 ( C H ₃ f a t t y a c i d ) , 2 0. 7 8 ( C - 1 8， 1 8 ' ) ， 2 2. 6 9 ( C H ₂ f a t t y a c i d ) , 2 4. 7 7 ( C H ₂ f a t t y a c i d ) , 2 5. 0 5 ( C一 1 7 , 1 7 ' ) , 2 5. 6 1 ( C— 1 6， 1 6 ' ) , 2 9 4 , 2 9. 2 7 , 2 9. 3 5 , 2 9. 4 7 , 2 9. 6 0 , 2 9.

6 4 , 3 1. 9 1 , 3 4. 6 5 ( C H ₂ f a t t y a c i d ) ,

4 2 , 2 0 ( C— 4 , 4 ' ) , 4 3. 7 3 ( C— 1 , 1 ' 4 7.

6 6 ( C一 2 , 2 ' ) ， 5 8. 5 1 ( C - 5 , 5 ' ) ， 7 3. 2 4 ( C一 3 , 3 ' ) , 1 2 0. 8 0 ( C - 7 , 7； ) , 1 2 4. 6 0 ( C

差替え用紙（規則 26) - 1 1 , 1 1 ' ) ， 1 3 1. 2 1 ( C - 1 5, 1 5 ' ) , 1 3 3. 9 5 ( C— 9， 9 ' ) , 1 34. 9 9 ( C - 1 4 , 1 4 ' ) ， 1 3 6. 9 4 ( C - 1 3， 1 3 ' ) ， 1 4 0. 7 0 ( C— 1 0 , 1 0 ' ) , 1 4 1. 8 2 ( C— 1 2 , 1 2 ' ) , 1 4 7. 0 2 ( C - 8， 8 ' ) ， 1 7 3. 6 3 ( C = 0 f a t t y a c i d) , 2 0 2. 5 1 ( C 一 6 , 6 ' ) ， FAB - MS m/ z : 1 0 7 6 (M ⁺ ) f o r C

72 H 11606 (カブソルビン一ジパルミテート）， 1 0 4 8 ( M ⁺ ) f o r C TO H 1120₆ (カブソルビン一パルミテート、ミリステート） , 1 0 2 0 ( M + ) f o r C ₆₈H IOSO 6 (カブソルビンージミリステート）， 9 9 2 (M + ) f o r C^H ! O e iカプソルビンーミリステート、ラウレート）， 9 64 (M + ) f o r C ₆₄H ₁₀。O ₆ ( カブソルビン—ジラウレート），カブソルビンジエステルの脂肪酸ェステル構成比ジパルミテート体：パルミテート、ミリステート体：ジミリステ一ト体：ミリステート、ラウレート体：ジラウレート体（ 6 : 1 8 : 4 1 : 24 : 1 1 )

第 3図に力プソルビンジエステルの ¹ H— NMRのチャート、第 4 図に ¹³ C— N MRのチャートを示す。さらに、 U V— V I Sによるチヤートを第 5図に示す。第 6図にカブソルビンジエステルの FAB— M Sチャートを示す。

差替え用紙（規貝 IJ26) 表 2

( B成分の解析）

上記分析の結果、 B成分はカプサンチンジエステルであることが判明した。なお、本実施形態においてのその脂肪酸の種類と構成比は表 3の通りであることが判明した。そのスペクトルデータは次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) 入： 4 6 8 , 4 9 6 n m, ¹ H - N M R ( C D C 1 ₃) δ ： 0. 8 6 ( 3 H, s， H - 1 6 ' ) , 0. 8 8 (

6 Η, t， J = 7 H z , C H 3 f a t t y a c i d ) , 1. 0 8 ( 3 H， s， H - 1 6 ) ， 1. 1 1 ( 3 H， s , H - 1 7 ) , 1. 1

8 ( 3 H , s , H - 1 7 ' ) , 1. 2 5 ( s , C H 2 f a t t y a c i d ) , 1. 3 2 ( 6 H, s , H - 1 8 ' ) ， 1. 5 8 ( 1 H， d d , J = 1 2 , 1 2 H z , 2 β ) , 1. 5 7 ( 1 H, d d, J = 1 5， 3. 5 H z , H - 4 ' ? ) , 1. 7 8 ( 1 H , d d， J = 1 3. 5， 4 H z , H - 2 ' 5 ) , 1. 7 2 ( 3 H , s , H - 1 8 ) , 1.

7 7 ( 1 H， d d d， J = 1 2 , 4 , 1. 5 H z , H— 2 ひ）， 1. 9 6 ( 3 H， s， H - 1 9 ' ) , 1. 9 7 ( 6 H, s， H— 1 9， 2

0 ) ， 1. 9 9 ( 3 H, s， H - 2 0 ' ) , 2. 0 9 ( 1 H, d d ,

差替え用紙（規則 26) J = 1 3. 5 , 8 H z , H - 2 ' ひ）， 2. 1 1 ( 1 H， d d, J = 1 5. 5, 1 1 H z , H - 4 ? ) , 2. 4 5 ( 1 H, d d d, J = 1 5. 5， 5. 5, 1 , 5 H z， H - 4ひ）， 2. 2 7 ( 4 H, t 7 H z , C H 2 f a t t y a c i d) , 2. 9 9 ( 1 H, d d, J = 1 5， 9 H z, H - 4 ' cr ) ₃ 5. 0 6 ( 1 H, m， H - 3 ) . 2 4 ( 1 H， m， H - 3, 3 ' ) ， 6. 1 3 ( 2 H， d, A B y p e , H— 7， 8 ) ， 6. 1 6 ( 1 H， d, J = 1 1 H z , H o ) ， 6. 2 3 ( 1 H, d, J = 1 0. 5， H - 1 4 ) , 6. 3 6 (

1 H， d, J = 1 5 H z， H - 1 4 ' ) , 6. 3 6 ( 1 H , d, J = 1 1 H z， H - 1 4 ' ) , 6. 44 ( 1 H, d, J = 1 5 H z， H -

7 ' ) , 6. 5 5 ( 1 H, d， J = 1 5 H z , H - 1 2 ' ) , 6. 5 9 ( 1 H， d， J = 1 1 H z , H - 1 0 ' ) ， 6. 6 4 ( 1 H , d d

, J = 1 5, 1 1 H z , H— 1 1 ) , 6. 6 8 ( 1 H , d d， J = 1 5， 1 1 H z , H - 1 1 ' ) , 6. 7 0 ( 2 H , m , H - 1 5 , 1 5 ' ) , 7. 34 ( 1 H , d， J = 1 5 H z , H - 8 ' ) ， ¹³ C - N M R ( C D C 1₃) δ : 1 2. 7 4 ( C - 1 9 , 2 0 ) , 1 2. 8 0 ( C一 2 0 ' ) , 1 2. 8 7 ( C - 1 9 ' ) ， 1 4. 1 3 ( C H ₃ f a t t y a c i d) , 2 0. 7 8 ( C - 1 8 ' ) , 2 1. 5 3 ( C 一 1 8 ) , 2 2. 6 9 ( C H 2 f a t t y a c i d) , 2 4. 7 7 ( C H 2 f a t t y a c i d) , 2 5. 0 5 ( C - 1 7 ' ) , 2 5 . 5 1 ( C - 1 6 ' ) , 2 8. 6 2 ( C一 1 6 ) , 2 9. 1 4, 2 9. 2 7， 2 9. 3 5 , 2 9. 4 7, 2 9. 6 0， 2 9. 6 4 ( C

H 2 f a t t y a c i d) , 3 0. 1 6 (C— 1 7 ) ， 3 1. 9

1 , 34. 6 5 ( C H 2 f a t t y a c i d) , 3 6. 8 2 ( C

) 3 8. 6 0 ( C - 4 ) , 4 2. 2 0 ( C - 4 ' ) , 43. 7 3

(C - 1 ' ) , 44. 1 1 ( C一 2 ) ， 4 7. 6 6 ( C - 2 ' ) , 5

差替え用紙（規貝リ 26) 8. 5 1 ( C - 5 ' ) ₃ 6 8. 5 0 ( C - 3 ) , 7 3. 2 4 ( C - 3 1 2 0. 8 0 ( C— 7 ' ) , 1 2 4. 0 5 ( C - 1 1 ) , 1 2 5. 5 1 ( C— 7 ) ， 1 2 7. 84 ( C - 5 ) , 1 24. 6 0 ( C - 1 1 ' ) , 1 3 1. 2 0 ( C— 1 0 ) ， 1 3 1. 2 1 ( C - 1 5 ' ) ， 1 3 2. 3 5 ( C - 1 3 ) , 1 3 3. 9 5 ( C - 9 ' ) ， 1 3 4. 9 9 ( C - 1 4 ' ) , 1 3 5. 8 7 ( C— 9 ) , 1 3 6. 1 1 ( C - 1 4 ) ， 1 3 6. 9 4 ( C一 1 3 ' ) ， 1 3 7. 6 0 ( C— 1 2 ) , 1 3 7. 7 1 ( C— 6 ) , 1 3 8. 4 1 ( C— 8 ) , 1 4 0. 7 0 ( C - 1 0 ' ) , 1 4 1. 8 2 ( C - 1 2 ' ) , 1 4 7. 0 2 ( C - 8 ' ) , 1 7 3. 6 3 ( C = 0 f a t t a c i d) , 2 0 2. 5 1 ( C一 6 ' ) , FAB— M S m/z : 1 0 6 0 ( M ⁺ ) f o r C ₇₂H ₁₁₆0₅ (カプサンチンージパルミテート）， 1 0 3 2 (M ⁺ ) f Ο Γ C 7 θ Η 1 ! 205 (カプサンチン一パルミテート、ミリステート） , 1 0 0 4 ( M ⁺ ) f o r C₆₈H ₁₍₎₈0₅ (カプサンチンージミリステ一ト）， 9 7 6 (M + ) f 0 r C ₆₆H ι ο 4 θ 5 (カプサンチン一ミリステ — ト，ラウレート）， 9 4 8 (M ⁺ ) f o r C₆₄H ₁₀。O ₅ (カプサンチンージラウレート）， 9 2 0 (M + ) f o r C 6 2 H 9 605 (カプサンチン一ラウレート、力プレート），カプサンチンジエステルの脂肪酸エステル構成比ジパルミテート体：ノノレミテート、ミリステート体：ジミリステート体：ミリステート、ラウレート体：ジラウレート体：ラウレート、力プレート体（ 4 : 1 4 : 3 5 : 3 6 : 1 0 : 1 ) 第 7図にカプサンチンジエステルの ¹ H— NMRのチヤ一ト、第 8 図に ¹³ C— NMRのチャートを示す。さらに、 UV— V I Sによるチヤートを第 9図に示す。第 1 0図にカプサンチンジエステルの F AB — M Sチャートを示す。

差替え用紙（規貝 IJ26) 表 3

( C成分の解析）

上記分析の結果、 C成分はククルビ夕キサンチン A— 3 ' エステルであることが判明した。なお、本実施形態においてのその脂肪酸の種類と構成比は表 4の通りであることが判明した。そのスペクトルデー夕は次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) 入： 4 2 5， 4 4 4 , 4 7 2 nm₃ ¹ H

- N M R ( C D C 1₃) 6 : 0 . 8 8 ( 3 H， s， H - 1 7 ) , 0.

8 8 ( 3 H， t , J = 7 H z , C H 3 f a t t y a c i d ) , 1 . 0 8 ( 3 H, s , H - 1 6 ' ) , 1 1 1 ( 3 H， s， H - 1 7 '

) ， 1. 2 1 ( 3 H， H - 1 8 ) ， 1 2 5 ( s , C H 2 f a t t y a c i d ) , 1. 4 4 ( 3 H, s H - 1 6 ) , 1. 6 1 ( 1 H

, d , J = 1 1. 5 H z , H - 2 ? ) 1. 7 2 ( 3 H， s , H - 1

8 ' ) , ~ 1. 8 4 ( 2 H, m, H— 2 ひ 2 ' a x ) , 1. 9 5 ( 3 H, s , H— 1 9 ) , 1. 9 7 ( 9 H, s， H— 2 0， 1 9 ' 2

0 ' ) , 2. 2 9 ( 2 H, t， J = 7 , C H 2 f a t t a c

差替え用紙（規貝 U26) d) , 2. 44 ( 1 H, d d， J = 1 6 , 6 H z , H— 4 e q ) , 4. 4 0 ( 1 H, t一 l i k e, J = 7 H z , H - 3 ) , 5. 0 7 ( 1 H， m， H - 3 ' ) , 5. 74 ( 1 H , d, J = 1 6 H z, H - 7 ) ， 6. 1 0 ( 2 H， m， H - 7 ' , 8 ' ) , 6. 1 6 ( 1 H, d , J = 1 1 H z ₃ H - 1 0 ' ) , 6. 2 0 ( 1 H , d , J = 1 1 H z , H - 1 0 ) ， 6. 2 5 ( 2 H, m, H - 1 4, 1 4 ' ) , 6. 3 6 ( 2 H , d, J = 1 5， H - 1 2， 1 2 ' ) , 6. 3 7 ( 1 H， d， J = 1 6 H z , H - 8 ) , 〜 6. 6 2 ( 4 H， m， H - 1 1， 1 1 ' , 1 5， 1 5 ' ) , F AB— M S m/ z : 8 2 2 ( M ⁺ ) f o r C ₅₆H ₈₆04 (ククルビタキサンチン一 A— 3 ' - -ノルミテート）， 7 9 4 ( M ⁺ ) f o r C₅₄H₈₂0₄ (ククルビ夕キサンチン一 A— 3 ' 一ミリステート）， 7 6 6 (M ⁺ ) f o r C ₅ 2 H 7 804 (ククルビ夕キサンチン一 A— 3 ' —ラウレート），ククルビ夕キサンチン一 A— エステルの脂肪酸エステルの構成比パルミテ— 卜：リステ一卜：ラウレート（ 2 0 ： 5 7 ： 2 3 )

第 1 1図にククルビタキサンチン A— 3 ' ェステルの ¹ H— NMR のチャートを示す第 1 2図に UV— V I Sのチヤートを示す。また、第 1 3図に F AB— MSのチャートを示す。表 4

差替え用紙（規貝 IJ26) ( D成分の解析）

上記分析の結果、 D成分は、カプサンチン 3 , 6一エポキシドであることが判明した。そのスぺクトルデータは次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) λ ： 4 6 8 n m, ¹ H - - N M R ( C D C 1₃) (? : 0. 8 4 ( 3 H， s , H - 1 6 ' ) ₃ 0. 8 8 ( 3 H , s , Η - 1 7 ) ， 1. 2 0 ( 3 Η , s , H - 1 7 ' ) , 1. 2 1 ( 3 H , Η - 1 8 ) ， 1. 3 7 ( 3 Η， s , H - 1 8 ' ) , 1. 4 4 ( 3 H ， s， H - 1 6 ) , 1. 4 9 ( 1 H, d d， J = 1 5 , 3. 5 H z , Η - 4 ' 3 ) , 1. 6 1 ( 1 Η , d， J = 1 1. 5 H z， E - 2 /3 ) ， 1. 9 7 ( d， J = 1 1. 5 H z， 4 J3 ) , 1. 7 1 ( 1 H , d d ， J = 1 3. 5 , 4 Η ζ , Η - 2 ' β ) , 1 . 8 4 ( d d d, J = 1 1. 5， 7 , 2 Η ζ , Ε - 2 ) ， 1. 9 6 ( 6 H , s， H— 1 9， 1 9 ' ) , 1. 9 8 ( 6 Η, s , H - 2 0， 2 0 ' ) ， 2. 0 0 ( 1 Η， d d, J = 1 3. 5， 8 Η z， H - 2 ' ひ）， 2. 0 4 ( 1 H, d d d , J = 1 2 , 7 , 2 , H - ) , 2. 9 6 ( 1 H， d d， J = 1 5 , 9 Η ζ , Η - 4 ' α ) , 4. 4 0 ( 1 H, t - 1 i k e , J = 7 Η ζ , Η - 3 ) , 4. 5 1 ( 1 H , m, H - 3 ' ) , 5. 7 6 ( 1 Η, d , J = 1 6 Η ζ , Η - 7 ) , 6. 2 0 ( 1 H， d， J = 1 1 H z , Η - 1 0 ) , 6. 7 0 ( 1 H， d , J = 1 1 H z , H - 1 4 ) , 6. 3 5 ( 1 Η, d , J = l 1 H z , H - 1 4 ' ) ， 6. 3 6 ( 1 Η， d , J = 1 5 Η ζ , Η - 1 2 ) , 6. 3 8 ( 1 H, d , J = 1 6 H z , Η— 8 ) ， 6. 4 4 ( 1 H， d， J = 1 5 H z , H - 7 ' ) , 6. 5 1 ( 1 Η, d， J = 1 5 H z , H - 1 2 ' ) , 6. 5 9 ( 1 H , d， J = 1 1 Η ζ , Η - 1 0 ' ) , 〜 6. 6 6 ( 4 H, m， H - 1 1₅ 1 1 ' , 1 5 , 1 5 ' ) , 7. 3 4 ( 1 H, d , J = 1 5 H z , Η— 8 ' ) , ¹³ C - Ν Μ R ( C D C 1₃) (5 : 1 2. 7 5 ( C - 2 0

差替え用紙（規則 26) ' ) , 1 2. 8 8 ( C - 1 9， 2 0 , 1 9 ' ) ， 2 1. 2 9 ( C - 1 8 ' ) , 2 5. 0 9 ( C - 1 7 ' ) , 2 5. 7 3 ( C - 1 6 ) ， 2 5 . 8 6 ( C— 1 6 ' ) ， 3 1. 5 8 ( C - 1 8 ) , 3 2. 1 6 ( C - 1 7 ) ， 4 3. 9 7 ( C— 1 , 1 ' ) ， 4 5. 2 9 ( C - 4 ' ) , 4 7. 7 1 ( C - 4 ) , 4 8. 4 9 ( C - 2 ) , 5 0. 8 3 ( C - 2 ' ) ， 5 8. 9 3 ( C - 5 ' ) , 7 0. 3 4 ( C - 3 ' ) , 7 5 . 3 8 ( C— 3 ) , 8 2. 4 5 ( C— 5 ) ， 9 1. 6 5 ( C - 6 ) , 1 2 0 . 8 6 ( C - 7 ' ) , 1 2 3. 1 1 ( C一 7 ) , 1 2 4. 0 8 ( C - 1 1 ' ) , 1 2 5. 4 0 ( C - 1 1 ' ) , 1 2 9. 7 2 ( C - 1 5 ' ) , 1 3 1 . 6 0 ( C - 1 0 ) ， 1 3 2. 4 4 ( C一 1 4 ) ， 1 3 3 . 6 2 ( C - 9 ' ) , 1 3 4. 8 1 ( C— 8 ) ， 1 3 5. 1 9 ( C - 9 ) , 1 3 5. 2 4 ( C - 1 4 ' ) , 1 3 5. 9 2 ( C - 1 3 ) ， 1 3 7. 5 1 ( C - 1 3 ' ) ， 1 3 5. 9 2 ( C - 1 2 ) , 1 4 0. 7 1 ( C一 1 0 ' ) , 1 4 1. 9 7 ( C一 1 2 ' ) , 1 4 6. 8 7 ( C - 8 ' ) , 2 0 2. 9 3 ( C - 6 ' ) , F A B - M S m/ z : 6 0

第 1 4図にカプサンチン 3， 6 —エポキシドの ¹ H— NMRチヤ一トを示す。第 1 5図に ¹³ C— NMRのチャートを示す。第 1 6図に U V— V I Sのチャートを示す。第 1 7図に F A B— M Sのチャートを示す。

( E成分の解析）

上記分析の結果、 E成分は、カブソルビンであることが判明した。そのスぺクトルデ一夕は次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) 入： 4 4 5， 4 7 9 , 5 1 0 nm₃ 'Η - N MR ( C D C 1₃) 6 : 0. 8 4 ( 6 H, s， H— 1 6， 1 6 '

差替え用紙（規貝 IJ26) ) ， 1. 2 1 ( 6 H , s , H - 1 7 , 1 7 ' ) , 1. 3 7 ( 6 H， s , H— 1 8， 1 8 ' ) , 1. 4 9 ( 2 H, d d， J = 1 5 , 3. 5 H z， H— 4 ?, A ' β ) , 1. 7 1 ( 2 H， d d , J = 1 3. 5， 4 H z , H— 2 ?， 2 ' β ) , 1. 9 6 ( 6 H, s， H— 1 9 , 1 9 ' ) ， 1. 9 9 ( 6 H, s , H - 2 0 , 2 0 ' ) , 2. 0 0 ( 2 H， d d , J = 1 3. 5 , 8 H z， E - 2 , 2 ' a ) , 2. 9 6 ( 2 H , d d, J = 1 5， 9 H z , H - 4 , 4 ' a ) , 4. 5 1 ( 2 H, m , H - 3， 3 ' ) ₃ 6. 3 6 ( 2 H， m, H - 1 4， 1 4 ' ) , 6. 4 4 ( 2 H， d， J = 1 5 H z , H— 7 , 7 ' ) ， 6. 5 5 ( 2 H , d , J = 1 5 H z , H - 1 2 , 1 2 ' ) , 6. 5 9 ( 2 H , d , J = 1 1 H z , H - 1 0 , 1 0 ' ) , 6. 6 8 ( 2 H, d d , J = 1 5 , 1 1 H z , H - 1 1 , 1 1 ' ) , 6. 7 0 ( 2 H, m , H - 1 5 , 1 5 ' ) , 7. 3 4 ( 2 H， d , J = 1 5 H z , H - 8， 8 ' ) ， F A B - M S m/ z : 6 0 0 (M ⁺ ) f o r C "H ₅₆0₄

第 1 8図にカブソルビンの ¹ H— N MRチャートを示す。第 1 9図に U V— V I Sのチャートを示す。第 2 0図に F A B— M Sのチヤ一トを示す。

( F成分の解析）

上記分析の結果、 F成分はカプサンチンモノエステルであることが判明した。なお、本実施形態においてのその脂肪酸の種類と構成比は表 5の通りであることが判明した。そのスペクトルデータは次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) え： 4 6 8 , 4 9 6 nm， ¹ H - N M R ( C D C 1₃) d : 0. 8 6 ( 3 H , s , H - 1 6 ' ) ， 0. 8 8 ( 3 H， t， J = 7 H z , C H 3 f a t t y a c i d ) , 1. 0 7

差替え用紙（規則 26) ( 6 H, s , H - 1 6 , 1 7 ) , 1. 1 8 ( 3 H, s , H - 1 7 ' ) , 1. 2 5 ( s , C H 2 f a t t y a c i d ) , 1. 3 2 ( 6 H , s , H - 1 8 ' ) , 1. 4 8 ( 1 H, d d , J = 1 2 , 1 2 H z , 2 J3 ) , 1. 5 7 ( 1 H， d d， J = 1 5， 3. 5 H z , H - 4 ' ? ) ， 1. 7 4 ( 1 H, d d , J = 1 3. 5， 4 H z , H - 2 ' ? ) , 1. 7 4 ( 3 H, s， H - 1 8 ) ， 1. 7 7 ( 1 H, d d d , J = 1 2， 4， 1. 5 H z , H - 2 ひ）， 1. 9 6 ( 3 H, s , H - 1 9 ' ) , 1. 9 7 ( 6 H, s， H— 1 9 , 2 0 ) ， 1. 9 9 ( 3 H , s， H - 2 0 ' ) ， 2. 0 9 ( 1 H， d d , J = 1 3. 5 , 8 H z， H - 2 ' a ) , 2. 0 4 ( 1 H, d d , J = 1 5. 5 , l l H z， H - 4 β ) , 2. 3 9 ( 1 H, d d d， J = 1 5. 5 , 5. 5 , 1. 5 H z ， H— 4 ひ）， 2. 2 7 ( 2 H, t , 7 H z , C H 2 f a t t a c i d ) , 2. 9 9 ( 1 H, d d , J = 1 5 , 9 H z , H - 4 ' ひ ) ， 4. 0 0 ( 1 H , m, H - 3 ) , 5. 2 4 ( 1 H， m, H - 3， 3 ' ) ， 6. 1 3 ( 2 H , d , A B - t y p e , H - 7 , 8 ) , 6. 1 6 ( 1 H， d , J = 1 1 H z , H - 1 0 ) ， 6. 2 3 ( 1 H， d， J = 1 0. 5 , H - 1 4 ) ， 6. 3 6 ( 1 H， d , J = 1 5 H z , H 一 1 2 ) , 6. 3 6 ( 1 H, d， J = 1 1 H z , H - 1 4 ' ) ₅ 6. 4 4 ( 1 H， d, J = 1 5 H z , H - 7 ' ) , 6. 5 5 ( 1 H， d， J = 1 5 H z , H - 1 2 ' ) , 6. 5 9 ( 1 H, d， J = 1 1 H z , H - 1 0 ' ) , 6. 6 4 ( 1 H, d d , J = 1 5₅ 1 1 H z , H - 1 1 ) ， 6. 6 8 ( 1 H, d d , J = 1 5 , 1 1 H z , H - 1 1 ' ) , 6. 7 0 ( 2 H, m， H - 1 5 , 1 5 ' ) , 7. 3 4 ( 1 H, d , J = 1 5 H z , H - 8 ' ) , ¹³ C - NM R ( C D C 13 ) 6 : 1 2. 7 4 ( C一 1 9， 2 0 ) ， 1 2. 8 0 ( C - 2 0 ' ) , 1 2. 8 7 ( C — 1 9 ' ) ， 1 . 1 3 ( C H 3 f a t t y a c i d ) , 2 0.

差替え用紙（規則 26) 7 8 ( C - 1 8 ' ) , 2 1. 6 3 ( C一 1 8 ) , 2 2. 6 9 ( C H ₂ f a t t y a c i d) , 24. 7 7 ( C H 2 f a t t y a c i d) , 2 5. 0 5 ( C - 1 7 ' ) , 2 5. 6 1 ( C - 1 6 ' ) , 2 8. 7 2 ( C - 1 6 ) , 2 9. 1 4， 2 9. 2 7， 2 9. 3 5， 2 9 . 4 7 , 2 9. 6 0 , 2 9. 64 ( C H 2 f a t t y a c i d) ， 3 0. 2 6 ( C - 1 7 ) , 3 1. 9 1 , 3 4. 6 5 ( C H 2 f a t t y a c i d) , 3 7. 1 2 (C— 1 ) , 4 2. 2 0 ( C - 4 ' ) , 4 2. 5 4 ( C - 4 ) , 4 3. 7 3 ( C - 1 ' ) , 4 7. 6 6 ( C一 2 ' ) ， 4 8. 4 0 ( C_ 2 ) , 5 8. 5 1 ( C - 5 ' ) , 6 5 . 0 8 ( C— 3 ) , 7 3. 24 ( C - 3 ' ) , 1 2 0. 8 0 ( C - 7 ' ) , 1 24. 0 5 ( C - 1 1 ) , 1 2 5. 5 1 ( C - 7 ) , 1 2 5 . 8 4 ( C - 5 ) , 1 2 4. 6 0 ( C - 1 1 ' ) , 1 3 1. 2 0 ( C - 1 0 ) , 1 3 1. 2 1 ( C - 1 5 ' ) , 1 3 2. 3 5 ( C - 1 3 ) ， 1 3 3. 9 5 ( C - 9 ' ) , 1 34. 9 9 ( C - 1 4 ' ) , 1 3 5 . 8 7 ( C - 9 ) ， 1 3 6. 1 1 ( C— 1 4 ) , 1 3 6. 9 4 ( C - 1 3 ' ) ， 1 3 7. 6 0 ( C - 1 2 ) ， 1 3 7. 7 1 ( C— 6 ) , 1 3 8. 4 1 ( C— 8 ) ， 1 4 0. 7 0 ( C - 1 0 ' ) ， 1 4 1. 8 2 ( C - 1 2 ' ) ₃ 1 4 7. 0 2 ( C - 8 ' ) , 1 7 3. 6 3 ( C = 0 f a t t y a c i d ) , 2 0 2. 5 1 ( C - 6 ' ) , FAB— M S m/z : 8 2 2 (M ⁺ ) : o r C₅₆H₈₂0₄ (カプサンチンー 3， —パルミテート）， 7 9 4 (M十） f o r C₅₄H₈₂0₄ (力プサンチン一 3， — ミリステート）， 7 6 6 (M + ) f o r C ₅₂H₇₈0₄ (カプサンチン一 3，一ラウレート），カプサンチン一 3，一エステルの脂肪酸エステル構成比パルミテート体：ミリステート体：ラウレート体： ( 1 2 : 7 0 : 1 8 )

第 2 1図にカプサンチンモノエステルの ¹ H— NMRチヤ一トを示

差替え用紙（規則 26) す。第 2 2図に ¹³ C— NMRのチャートを示す。第 2 3図に UV— V I Sのチャートを示す。第 2 4図に F AB— M Sのチャートを示す。表 5

( G成分の解析）

上記分析の結果、 G成分はカプサンチンであることが判明した。そのスべクトルデ一夕は次の通りである。

U V - V I S ( e t h e r ) え： 4 6 8， 4 9 6 n m H - NMR ( C D C 1₃) 5 : 0. 8 4 ( 3 H , s， H - ] . 6 ' ) 0 7 ( 6 H , s , H— 1 6， 1 7 ) , 1. 2 1 ( 3 H j s , H一 1 7 ' ) , 1. 3 7 ( 6 H, s , H - 1 8 ' ) , 1. 4 8 ( 1 H， d d , J = 1 2 , 1 2 H z , 2 J3 ) , 1. 4 9 ( 1 H， d d， J = 1 5 , 3. 5 H z , H - 4 ' ? ) ₅ 1. 7 1 ( 1 H, d d, J = 1 3. 5， 4 H z , H - 2 ' ? ) , 1. 7 4 ( 3 H， s , H - 1 8 ) , 1. 7 7 ( 1 H， d d d， J = 1 2 , 4， 1. 5 H z , H— 2 ひ ) ， 1. 9 6 ( 3 H， s , H - 1 9 ' ) ， 1. 9 7 ( 6 H, s , H - 1 9 , 2 0 ) ， 1. 9 9 ( 3 H, s , H - 2 0 ' ) , 2. 0 0 ( 1 H ， d d ， J = 1 3. 5 ， 8 H z , E - 2 ' a ) , 2. 0 4 ( 1 H， d d , J = 1 5. 5 , 1 l H z， H - 4 ? ) , 2. 3 9 ( 1 H, d d d ， J = 1 5. 5 , 5. 5， 1. 5 H z , H— 4 ひ）， 2. 9 6 ( 1 H， d d , J = 1 5 , 9

差替え用紙（規則 26) H z， E - 4 ' ) , 4. 0 0 ( 1 H ₃ m, H - 3 ) , 4. 5 1 ( 1 H， m， H— 3 , 3 ' ) , 6. 1 3 ( 2 H， d， A B— t y P e , H 一 7 , 8 ) ， 6. 1 6 ( 1 H， d , J = 1 1 H z， H— 1 0 ) , 6 · 2 3 ( 1 H, d, J = 1 0. 5 , H - 1 4 ) ， 6. 3 6 ( 1 H , d , J = 1 5 H z , H - 1 2 ) , 6. 3 6 ( 1 H, d， J = 1 1 H z , H - 1 4 ' ) , 6. 4 4 ( 1 H， d , J = 1 5 H z， H - 7 ' ) ， 6 · 5 5 ( 1 H, d , J = 1 5 H z , H - 1 2 ' ) ， 6. 5 9 ( 1 H, d , J = l l H z , H - 1 0 ' ) , 6. 6 4 ( 1 H， d d , J = 1 5 , l l H z , H— 1 1 ) ， 6. 6 8 ( 1 H , d d , J = 1 5， 1 1 H z , H - l l ' ) , 6. 7 0 ( 2 H, m, H - l 5 , 1 5 ' ) , 7. 3 4 ( 1 H, d， J = 1 5 H z， H - 8 ' ) ， ¹³ C - N M ( C D C 1 ₃) (5 : 1 2. 7 8 ( C - 1 9， 2 0 ) , 1 2. 7 5 ( C - - 2 0 ' ) , 1 2. 8 8 ( C— 1 9 ' ) ， 2 1. 3 9 ( C - 1 8 ' ) , 2 1. 6 3 ( C - 1 8 ) , 2 5. 2 0 ( C - 1 7 ' ) , 2 5. 9 0 ( C - 1 6

2 8. 7 2 ( C - 1 6 ) , 3 0. 2 6 ( C - 1 7 ) , 3 7. 1

2 ( C - 1 ) , 4 2. 5 0 ( C - 4 ) ， 4 3. 9 7 ( C - 1 ' ) , 4 5. 4 0 ( C— 4 ' ) ， 4 8. 6 9 ( C— 2 ) , 5 0. 9 3 ( C - 2 ' ) , 5 8. 9 3 ( C - 5 ' ) , 6 5. 0 8 ( C - 3 ) , 7 0. 3 9 ( C一 3 ' ) ， 1 2 0. 8 0 ( C - 7 ' ) , 1 2 4. 0 5 ( C一 1 1 ) ， 1 2 5. 5 1 ( C - 7 ) ， 1 2 6. 2 0 ( C - 5 ) , 1 2 4. 6

0 ( C一 1 ）， 1 3 1. 2 0 ( C— 1 0 ) , 1 3 1 . 2 1 ( C - 1 5 ' ) , 1 3 2. 3 5 ( C— 1 3 ) ， 1 3 3. 9 5 ( C - 9 ' ) ,

1 3 4. 9 9 ( C - 1 4 ' ) , 1 3 5. 8 7 ( C一 9 ) ， 1 3 6. 1 1 ( C一 1 4 ) , 1 3 6. 9 4 ( C - 1 3 ' ) ， 1 3 7. 6 0 ( C - 1 2 ) , 1 3 7. 8 1 ( C - 6 ) , 1 3 8. 4 1 ( C - 8 ) , 1 4 0 . 7 0 ( C— 1 0 ' ) , 1 4 1. 8 2 ( C - 1 2 ' ) , 1 4 7. 0 2

差替え用紙（規貝 IJ26) ( C一 8 ' ) , 2 0 2. 5 1 ( C - 6 ' ) , F AB— M S m/z : 5 84 (M + ) f o r C"H₅₆0₃

第 2 5図にカプサンチンの ¹ H— NMRチャートを示す。第 2 6図に ¹³ C— NMRのチャートを示す。第 2 7図に UV— V I Sのチヤ一トを示す。第 2 8図に FAB— M Sのチャートを示す。

これらのカプサンチン、カブサンチンモノエステル、カプサンチンジエステル、カブソルビンジエステル、カプサンチン 3， 6—ェポキシド、カプソルビン、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルはカロテノイドの一種でありそれぞれ次の構造式を有する。なお、これらのカロテノィドがエステルである場合においては、その脂肪酸 R _tおよび R ₂は特に限定されるものではない。なお、これらのカロテノィドがパラディチヨ厶パプリカから抽出された場合においては上述のようにその構成脂肪酸の種類は上記各表の通りである。化学式 1

力プサンチン

化学式 2

カプサンチンモノエステル

差替え用紙（規則 26) 化学式 3

カプサンチンジエステル

化学式 4

カブソルビンジエステル

化学式 5

力プサンチン 3 6 —エポキシド

差替え用紙（規則 26) 化学式 6

カプソルビン

化学式 7

ククルビタキサンチン A— 3 ' エステル

(ェブス夕イン一パールウィルス ' ゲノムの発現阻害活性の測定）これらのカロテノイドを用い、ェプスタイン一バールウィルス ' ゲノムの発現阻害活性の測定を次の条件で行った。ェプスタインーバ —ルウィルス潜在感染ヒトリンパ芽球細胞株、ラジ細胞の培養液として P RM I 1 64 0に胎仔血清及び抗生物質を加えたものを使用した。この培養条件下で、ェブスタイン一バールウィルス早期抗原の自然発生率は 0. 1 %以下である。 1 X 1 0⁶細胞/ m 1の濃度に調

差替え用紙（規則 26) 整したラジ細胞を、 4 mMの n—酪酸、 2 0 n g/m lの T P A、それに 1 0 0 OMol ratio/TPA(20ng=32pmol/ml)の被検物質を加えた上記培養液中で 3 7°C、 4 8時間培養した、上咽頭癌患者血清を用いた間接蛍光抗体法にてェプス夕イン一バールウィルス早期抗原を発現した細胞を検出し、陽性細胞の比率を被検物質を加えなかったコントロールに対して算出し、ウィルス · ゲノムの再現阻害活性とした。さらに被検物質の濃度を 5 0 OMol ratio/TPA(20ng=32pmol/ml)、 1 0 OMol ratio/TPA(20ng=32pmol/ml) 1 OMol ratio/TPA(20ng=32p mol/ml)に変化させて同活性を測定した。この結果を表 6に示す。表 6

単位 1) Mol ratio/TPA(20ng=32pmol/ml ) 2) %抑制率（％ラジ細胞生存率）

パラディチヨムパプリカから抽出した上記のカロテノイド成分は、

差替え用紙（規則 26) 抗発癌プロモータ一として知られている /?—カロテンとほぼ同様以上の強い発癌ウィルス活性化阻害作用を示した。また、ラジ細胞生存率も 7 0 %を維持しており、細胞に対する毒性はほとんど認められないことが判明した。従って、上記カロテノィド成分は発癌抑制作用を有し、上記カロテノイドは発癌抑制剤の有効成分とすることができることが見出された。

(マウス皮膚二段階発癌抑制試験）

上記のようにこれらのカロテノィドは強い発癌ウイルス活性化阻害作用を示すことが確認することができた。そこで、カプサンチン、力プサンチンモノエステル、カプサンチンジエステルについて発癌抑制効果を明確にするため、マウスを用いる皮膚癌の抑制試験を行った。すなわち、マウス皮膚二段階発癌抑制試験を次の条件で行った。

一群 1 5匹の I CR雌性マウス（ 6週齢）の背部体毛を剃毛して 2 4時間後、背部皮膚にアセトン（ 0. 1ml) に溶解した D MB A ( 1 0 0 g、 3 9 0 nmol) を塗布してイニシエーションを行い、 1週間後から各実験群を以下のように処理した。

第 1群：アセトン（ 0. 1ml) に溶解した T PA ( l〃 g， 1. 7 nmol) を週 2回、 2 0週間塗布し続けることによりプロモーションを行う。この際、 T P A塗布 1時間前にアセトン（ 0. 1ml) を同部位に塗布する（陽性コントロール群）。

第 2〜第 4群：第 1群と同様に、週 2回、 2 0週間にわたり T P A ( l g, 1. 7 nmol) 塗布 1時間前にアセトン（ 0. 1ml) に溶解した被検試料（カプサンチン類）（メタノールエキスの溶媒をとばして分離したもの） 8 5nmolを塗布する。なお、被検試料は第 2群：力プサンチン、第 3群：カプサンチンモノエステル、第 4群：カプサン

差替え用紙（規貝 IJ26) チンジエステルとした。

T P A塗布によるプロモ一ション開始 2 0週後まで、各週ごとにマウス背部に発生するパピ口一マを観察し、パピ口一マの発生したマウスの率と 1 匹あたりに発生したパピ口一マの平均個数とを陽性コントロール群と比較して評価した。その結果を第 2 9図及び第 3 0図に示す。

第 2 9図より試験の結果、陽性コントロール群ではプロモーション開始 7週目に最初の腫瘍が形成され、 1 1週目にすべてのマウスに腫瘍が形成されたのに対し、第 2群（カプサンチン処理群）では 7週目に、第 3群（カプサンチンモノエステル処理群）及び第 4群（力プサンチンジエステル処理群）ではいずれも 9週目にはじめて腫瘍の形成が見られ腫瘍の形成を遅延させることが明らかとなった。また、試験終了時の 2 0週後においても、第 4群では 1 3 . 3 %のマウスには腫瘍形成が見られなかった。

第 3 0図の結果より、マウス 1匹あたりの平均腫瘍個数は 2 0週後で、陽性コントロール群では 9 . 1個であったのに対し、第 2群では 7 . 2個、第 3群では 6 . 5個、第 4群では 5 . 0個であり、それぞれ約 2 3 %、 3 1 %、 4 5 %の発癌抑制効果が認められた。

このことから、カプサンチン、カプサンチンモノエステル、カプサンチンジエステルは、マウス皮膚二段階発癌抑制試験においても発癌抑制作用を有することが見出された。産業上の利用可能性

本発明によれば、ェプス夕インパールウィルス活性化抑制能を有するものを含め、天然由来の優れた発癌抑制剤を提供できる。したがつて、本発明の発癌抑制剤及びパラディチヨムパプリカのエキスは発

差替え用紙（規則 26) 癌予防効果が期待でき、それらの作用から医薬品、化粧品、健康食品の各分野に応じ、多岐にわたる利用が可能となる。

差替え用紙（規則 26)

Claims

請求の範囲

1 . カプサンチンを有効成分とする発癌抑制剤。

2 . カプサンチンの脂肪酸エステルを有効成分とする発癌抑制剤。 3 . カプサンチンの脂肪酸モノエステルを有効成分とする請求の範囲第 2項に記載の発癌抑制剤。

4 . 力プサンチンの脂肪酸ジエステルを有効成分とする請求の範囲第 2項に記載の発癌抑制剤。

5 . カプサンチンの脂肪酸エステルを構成する脂肪酸の少なくとも 1 つがパルミチン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸のいずれかである請求の範囲第 2項乃至第 4項のいずれかに記載の発癌抑制剤。

6 . カブソルビンジエステルを有効成分とする発癌抑制剤。

7 . カブソルビンの脂肪酸エステルを構成する脂肪酸の少なくとも 1 つがパルミチン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸のいずれかである請求の範囲第 6項に記載の発癌抑制剤。

8 . ククルビタキサンチン A— 3 ' エステルを有効成分とする発癌抑制剤。

9 . ククルビタキサンチン A— 3 ，エステルがパルミチン酸エステル、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステルのいずれかである請求の範囲第 8項に記載の発癌抑制剤。

1 0 . カプサンチン 3， 6 —エポキシドを有効成分とする発癌抑制剤 ο

1 1 . カブソルビンを有効成分とする発癌抑制剤。

1 2 . 請求の範囲第 1項、第 2項、第 6項、第 8項、第 1 0項、第 1 1項に記載の有効成分を少なくとも 2以上含む発癌抑制剤。

1 3 . 請求の範囲第 3項及び第 4項に記載の有効成分を含む発癌抑制

差替え用紙（規則 26) 剤。

1 4. パラディチヨムパプリカの抽出エキスを用いる発癌抑制剤。

1 5. パラディチヨムパプリカから抽出されるカロテノイドを有効成分とする発癌抑制剤。

1 6. 有効成分がパラディチヨムパプリカから抽出されたものである請求の範囲第 1項乃至第 1 3項のいずれかに記載の発癌抑制剤。

1 7. パラディチヨムパプリカから抽出された発癌抑制作用をもつ植物抽出エキス。

1 8. 請求の範囲第 1項、第 2項、第 6項、第 8項、第 1 0項、第 1 1項に記載のいずれかの有効成分を少なくとも 1以上含む、パラディチヨムパプリカから抽出された請求の範囲第 1 7項に記載の植物抽出エキス。

1 9. 請求の範囲第第 3項及び第 4項に記載の有効成分を含む、パラディチヨムパプリカから抽出された請求の範囲第 1 7項に記載の植物抽出エキス。

差替え用紙（規貝 IJ26) 補正書の請求の範囲

[ 1 9 9 8年 5月 8日（0 8 . 0 5 . 9 8 ) 国際事務局受理：出願当初の請求の範囲 lは取り下げられた；新しい請求の範囲 2 0— 2 2が加えられた；他の請求の範囲は変更なし。（2 頁） ]

I . (削除）

2 . カブサンチンの脂肪酸エステルを有効成分とする発癌抑制剤。

3 . カプサンチンの脂肪酸モノエステルを有効成分とする請求の範囲第 2項に記載の発癌抑制剤。

4 . カブサンチンの脂肪酸ジエステルを有効成分とする請求の範囲第 2項に記載の発癌抑制剤。

6 . カブソルビンジエステルを有効成分とする発癌抑制剤。

8 . ククルビタキサンチン A— 3 'エステルを有効成分とする発癌抑制剤。

9 . ククルビタキサンチン A— 3 'エステルがパルミチン酸エステル、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステルのいずれかである請求の範囲第 8項に記載の ¾癌抑制剤。

1 0 . カブサンチン 3， 6 —エポキシドを有効成分とする発癌抑制剤

I I . カブソルビンを有効成分とする発癌抑制剤。

1 3 . 請求の範囲第 3項及び第 4頃に記載の有効成分を含む発癌抑制剤。

捕正された^紙（条約第 19条)

1 4 . パラディチヨムパプリカの抽出エキスを用いる発癌抑制剤。 1 5 . パラディチヨムパプリカから抽出されるカロテノィドを有効成分とする発癌抑制剤。

1 6 . 有効成分がパラディチヨムパプリカから抽出されたものである請求の範囲第 1項乃至第 1 3項のいずれかに記載の発癌抑制剤。

1 7 . パラディチヨムパプリカから抽出された発癌抑制作用をもつ植物抽出エキス。

1 8 . 請求の範囲第 1項、第 2項、第 6項、第 8項、第 1 0項、第 1 1項に記載のいずれかの有効成分を少なくとも 1以上含む、パラディチヨムパプリカから抽出された請求の範囲第 1 7項に記載の植物抽出エキス。

1 9 . 請求の範囲第第 3項及び第 4項に記載の有効成分を含む、パラディチヨムパプリカから抽出された請求の範囲第 1 7項に記載の植物抽出エキス。

2 0 . (追加）カプサンチンを有効成分として含むパラディチヨムパプリカから抽出された植物抽出エキス。

2 1 . (追加）請求の範囲第 1 7項、第 1 8項、第 1 9項、第 2 0項の植物抽出エキスを含む化粧品。

2 2 . (追加）請求の範囲第 1 7項、第 1 8項、第 1 9項、第 2 0項の植物抽出エキスを含む食品。

補正された用紙（条約第 I⁹杀) 条約 1 9条（ 1 ) に基づく説明書

請求の範囲 1 は引用例にカプサンチンがェプスタインバールウイルス早期抗原発現抑制試験に対し好結果を発揮する旨が記載されていることから、今回の補正により削除した。引用例 1 (TSUSHIMA Miyuki, et al.，）にはカプサンチン及びククルビタキサンチン Aについての記載はあるが、そのエステルについては記載がない。

弓 I用例 2 ( JOZEF Deli, et al.,J. Agric. Food Chem., Vol40,No.ll) 及び引用例 3 ( JOZEF Deli, et al.,J. Agric. Food Chem., Vol44,No.3 ) (ま capsicum a/272 w /n種に属するパプリカの成熟過程において、カロテノィドの種類及び量を調査した文献であり、これらのカロテノィドのエステルについては一切記載されていない。

引用例 4 (KAPADIA Govind J., et al.,) にはカプサンチンについての記載はあるがそのエステルについては記載がない

引用例 5 ( STAHL, Wilhelm., et al.,) にはカプソルビンが 1 重項酸素の消去作用があることを記載しているにすぎず、そのエステルについては何ら記載がない。

本発明は、カプサンチンの脂肪酸エステルについては in vivo において発癌抑制効果を有していることを明確に記載している。また、そのエステルの発癌抑制効果は、引用例 1 と比較して顕著に優れている。また、ククルビタキサンチン A— 3 ' エステル、カプサンチン 3 , 6 —エポキシド、カプソルビン、カプソルビンジエステルについては、ェプスタインバールウィルス早期抗原発現抑制試験において好結果を示しており、その抑制効果については従来のものと比較して、より顕著な効果を有している。