WO1984001149A1 - Novel polypeptide and its use - Google Patents

Novel polypeptide and its use Download PDF

Info

Publication number
WO1984001149A1
WO1984001149A1 PCT/JP1982/000381 JP8200381W WO8401149A1 WO 1984001149 A1 WO1984001149 A1 WO 1984001149A1 JP 8200381 W JP8200381 W JP 8200381W WO 8401149 A1 WO8401149 A1 WO 8401149A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
arg
antibody
add
ser
peptide
Prior art date
Application number
PCT/JP1982/000381
Other languages
French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Kyozo Tsukamoto
Yuzo Ichimori
Mitsuhiro Wakimasu
Original Assignee
Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Takeda Chemical Industries Ltd filed Critical Takeda Chemical Industries Ltd
Priority to PCT/JP1982/000381 priority Critical patent/WO1984001149A1/en
Priority to US06/534,091 priority patent/US4681848A/en
Priority to AU19345/83A priority patent/AU564620B2/en
Priority to EP83109402A priority patent/EP0103898B1/en
Priority to PH29569A priority patent/PH22559A/en
Priority to CA000437187A priority patent/CA1216807A/en
Priority to AT83109402T priority patent/ATE19088T1/en
Priority to IL69790A priority patent/IL69790A/en
Priority to IE2215/83A priority patent/IE56003B1/en
Priority to NZ205666A priority patent/NZ205666A/en
Priority to DK430583A priority patent/DK430583A/en
Priority to DE8383109402T priority patent/DE3362936D1/en
Priority to KR1019830004438A priority patent/KR910001726B1/en
Priority to ZA837058A priority patent/ZA837058B/en
Priority to JP58176091A priority patent/JPS5980646A/en
Priority to JP59052244A priority patent/JPS6034994A/en
Publication of WO1984001149A1 publication Critical patent/WO1984001149A1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/57—IFN-gamma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/249—Interferons
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6866—Interferon
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the e-t-in (IF if) is slaughtered when it is known that there are at least three types of eves of the anti-inflammatory type> ⁇ , ⁇ (see book-ch. 2 S ⁇ field,, 10 buys, 1380).
  • ⁇ see book-ch. 2 S ⁇ field,, 10 buys, 1380.
  • r3 ⁇ 47-in ( ⁇ -r) My-Gi3: 3 ⁇ , mainly ⁇ 3 ⁇ 4 It is also known as Hue P (Thein-Puen Beng Suen Yoonmu, Spoon: ⁇ -Sha,
  • ⁇ ⁇ is defined as the vegetative action of vegetative vegetation * #, €> plane * C Many creatures (Brapped, 35 Volume 71, 1 Buy, 130 Years; Oki, 58 Volume, 875 Buy, 1380) 3 Cultivation of Rogues The way to pass and the a3 ⁇ 4
  • * 3 ⁇ 4 ⁇ means that * Rickrona plant * for various IFH-r is not only important to establish molecular species correspondence, but also natural or arrested.
  • Parents and parents are ⁇ l l ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ .
  • the present invention is based on the novel polypeptide (I), its S-white ⁇ *, the newly synthesized hybridoma, the new * nota-n-aniline, and the method for producing them.
  • Nok-na is used for the purpose of the present invention. It is preferable to provide arg # Arg Ala Ser (Jin 2: is preferred), and U is mil # I r3 Arg is preferred, and po and peptide (I) are represented as ano groups.
  • the number is 1 S ⁇ 25.
  • the peptide can be produced "by hand" of the peptide peptide.
  • Solid phase synthesis method, 'Liquid phase synthesis method may be based on iMC, but liquid synthesis method may be a bottle association.
  • Peptide association ⁇ is, for example, “The Peptides No. 1 ⁇ (3 ⁇ S!), Schroder and Lu3 ⁇ 4ke »Academic Press, c York, USA, there is a - peptide synthesis ⁇ , AM et al., round ⁇ formula company (, 975 years>, there is ⁇ biochemistry Ryohida ⁇ , ⁇ 1 Spring, 207 purchases-400 purchases "Ya Akira Aya, Bunkyo Chemical Dojin Co., Ltd. (1917 ⁇ * C described, for example, azide method, copper ⁇ -ride method,» ⁇ hydrate method,
  • the peptide is one of two fragments that are bisected at any position of the peptide bond.
  • ⁇ ⁇ ((eg, meth, ⁇ ⁇ , w, ⁇ , t, t,-,-,-,-,-,-, p, p, p) ⁇ , ⁇ ia ⁇ ⁇ X ⁇ , , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ 9 9 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ , ; ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ t t t, t ⁇ t ⁇ ⁇ ⁇ * * ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ .
  • the guadino group of the agin is, for example, -t, t ⁇ , p-methoxybenzenespho-, carpopenzoki ⁇ , i, J-bo; Okipo, 4-Met key 2, 8-Mitzensho group, Pentamethine penzens, etc.! Will be done.
  • the Guadalmedina - Jinomoto is, acid ( «, Bae Nzeshisu; acid, door Enns * phosphate,:! It acid, etc. ⁇ acid):« 3 it may also be coercive ⁇ in ⁇ of
  • the hydroxyl group of threon can be protected by esterification or -monotiation, for example, by 7t.
  • suitable groups for esthetic treatment include aceti groups, lower akanoi groups, ⁇ , and nozoy groups * which are derived from alloy groups, pentoxy groups, and ti ir groups. 3 the group * etc. can be mentioned that - - the Chi of f suitable group,
  • the present butide kneading reaction is performed in the presence of a medium.
  • the porting medium can be selected from those that can be used in peptide conjugation reactions.
  • anhydrous 7 is a water-containing dimethicide. * ⁇ Adide, dimethis! * Oxide, virazine, kuhom, dioxane, dimethy, tet, hide-plan, drunk acid, IT- Suitable ⁇ -compounds such as methabi ⁇ 9 -don *
  • the reaction temperature is selected from the range of which is known to be the ⁇ butyto 'bond formation reaction * C can be used. It is usually about ⁇ 40 to about ⁇ 0, preferably about
  • the product has a protecting group after completion of the fiber-bonding reaction, it will be in a conventional manner.
  • conventional methods include, for example, conventional methods (eg, hydrogenation using a liquid such as PADIUM, the use of sodium metal in a liquid fan), ados ( ⁇ , tripo ⁇ -acid, In the presence of hydrogen peroxide, mensphonic acid, or a compound containing thiol, no, etc., the above-mentioned acids or a mixture of the above-mentioned acids can be mentioned.
  • the driving wheel is released using sheep, goat, rabbit, rabbit, rabbit, mouse, etc., using poitide (I) or protein complex.
  • the immunization method can be performed from subcutaneous, intra-abdominal, intra-static, intra-muscular, intra-dermal, etc. ]) Subcutaneous) preferably injected.
  • the immunity of the septum and the amount of immunity are highly variable, and the method of the species is starvation.
  • immunization is performed 2 to ⁇ times at 2 intervals, and ⁇ to 5 days after the final immunization, preferably A method that uses cells after 2-4 days is often used.
  • Immunization Jfc should be used as the amount of peptide at a time, mouse >> (I ⁇ & more, preferably ⁇ 0 * -30 ⁇ S: :: ? line, Ken ⁇ on Mai ⁇ in ⁇ above, also performs ⁇ experiments using the "flashing" ⁇ 2: and is desirable 3
  • the above-mentioned box S combination of the hepatic fibroid and the spheroid is, for example, the saturation of the excised mouse hypoxanthine-guan-phos * lipo ⁇ trans7Sasease deficiency (a thymidine kinase deficiency (f ⁇ ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ * ⁇ »» »» »» »» »» »» »» »» »» »» »» »» ⁇ »» ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ » ⁇ , Sendita
  • the fusion box sa is transited (Citf Penguin) using Hiboki Santin-Aminobutylin-Thymidine medium (EA Mi Neichia, No. 258 Spring, 435, 975), etc.
  • screening can be performed to determine whether or not the desired it body is produced. You can do it. In other words, at the meeting of t, first, the presence or absence of the t-body production by immunization as the ⁇ S3 »and the J peptide ⁇ ⁇
  • ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ method can be used, but these methods can also use the seed wheat method.
  • An example of a preferred »titration, W Ru one way use the BIA * described C one by 3 cell B - Subi -; ⁇ of the carrier, for example Usagi anti Ma Usuimunogu ⁇ Brin body ⁇ method iC Therefore Kaburingu of *" C 2: After the IC assay, add the culture supernatant and mouse serum.
  • ⁇ is also hunger.
  • «Pimps egrets, mouse murginog Blind bodies were coupled according to the JC standard method, such as cell-beads. Add to the supernatant of the tomato and add to the mouse, and react for a certain period of time. After the reaction, wash the reaction well and add a certain amount of IF Iff-at.
  • IffH-r for example, a culture supernatant, which is induced by lectin and hobo EST from the human lectin ⁇ 2> * 1 and used as a culture supernatant, is used. After adding I ⁇ ir-1 rt, it reacts at a certain time ⁇ and constant S. After ⁇ , the activity of ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ -r contained in i in o ⁇ in the reaction also leaks. I ⁇ ir of the antibody of interest in this way - and to measure the absorption ⁇ of r activity comes ffi 3
  • the antibody of the present invention also has the following properties.
  • I F Natsuichi r is made of purified i, which is, for example, Apige
  • amino acids, peptides, amino acids, activities, etc. are indicated by abbreviations *, and they are according to I USA C-I IJ BCCommisaia on Biological Joaenclature!
  • the ⁇ symbol is based on the resentment symbol * in that part, for example, 3 ⁇ 4Next tC.
  • amino acid * may have tc ⁇ isomer, but if it is specifically specified, it shall show L form.
  • Fig. I shows the melting pattern of the
  • t Ru 3 ⁇ 4 carbonochloridate ⁇ - 3 ⁇ 4 of Na ⁇ migration of H ⁇ 3 ⁇ 4 show ⁇
  • H-HtH c, 55.22 H, 7.07; V, 12.88; S, 3.M
  • the AcOEt layer was , 4 JtFaHG0 3 water, washed ⁇ 1 3 click phosphate solution, dried and lambda 3 Conegliano in S0 4, E - Te also to the ⁇ preparative addition, MeOH - E - Te by re itt ft 7t Yield 1 d5 f
  • Thrust c, 55.39! H, 7.17 ⁇ H, 13.34 ⁇ S, S.20
  • Serum dilution is fXS 300
  • ⁇ r-r activity is,,,, one _hol * body melting

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

A novel polypeptide represented by the following formula: H-Lys-Arg-Lys-Arg-Ser-Gln-Met-Leu-Phe-Arg-Gly-Arg-Arg-Ala-Ser-Gln-OH and a conjugated protein thereof, hybridoma and monoclonal antibody induced from said polypeptide or said conjugated protein, and a method for detecting and purifying gamma-type human interferon.

Description

明 績 害 Harm
^^リベプチド ょびその用途  ^^ Rebeptide and its uses
' 技術分》  'Technology'
本》明は、新 ¾ リペプチド よびその用逾《c«す ，  This book describes the new peptide and its use
背: »技術  Profile: »Technology
ケ-， -とミ ス インによ 翻 ϋされ（ ネイチヤー ，第 258卷， 435¾ , 1 375年）、 近年 SAi * て来 ハイブ Ϊド一 を用い *ノタ -ナ 体の襄遍法は、各 の抗厘決定基 I 対し、単一待異 性を示す《t体が得られる とや、 m m&K して得られ 7t 体 つ て Rtt操作 t必娶とし とまど すぐれ #§ ^もって 3 ま た の他 *C、 «；体取得と う面からも、 ハイブ ドーマの腹水化 I よ 商力優の抗体が、 自由 、多量 it：、 しかも常》 均賈 標 再現性よく 得られる *ど多くの利点がある 3 この様 *意^らハイブ 9 K--^|C 4¾ノク》 -ナ 扰体取得の手法は、多方面 J わ つてその有用 !feWft く 優されて る。 ま 7t、その 方も舉に扰鳳検 にとどまらず、 Λ 体； ·ラム作製を通じて、 «成分の精製 用い Λ]> ( ネィチヤ- 285卷， 44 β買， ， 980年）、 更には、診断薬，治療薬へのお用 (a--ビアン ジャーナ 才ブ ィムノロジー ，第 3場， 34買, ， 373年）も羼藏されて る。 Translated by K.,-and Missin (Nature, Vol. 258, 435, 1375), using the SAi * Hidebead in recent years. of against anti Rin determinant I, shows a single Machikoto property "and t body is obtained and, better Tomado and m m & K was obtained 7t body one by Rtt operation t必娶# § ^ have been 3 or In addition, * C, «; from the aspect of body acquisition, ascites of hive dorma I Free, large amount of it :, and always; advantages there are three such * meaning ^ Luo hive 9 K - ^ | C 4¾ carbonochloridate "- technique of Na扰体acquisition, I many fields J connexion Ru is the useful feWft rather Yu!. 7t, the person also went to Kagyu to go beyond the Otori-ken, Λ body; · Through the production of rum, «purification and use of the ingredients>]> (Neichia-285, 44β, 980) It also contains medicines and treatments (a--Bian Journal, Biology, 3rd Place, 34, 373 years).
eトのイン " "プ t»ン （ I F if ) は、 抗黡的 ΚΛ る Λ > β , τ 型の少くとも 3種の イブが存在するととが知られて屠る（本-チヤ一， 第 2 S β場， ， 10買， 1380年）。 r¾イン ー 7 -ン（ ι ΓΗ -r )につ ては、 マイ -ジ3： ゃ扰摩 激 ょって、 主として τ ンパ¾ ^ら れる 2：とが判って屠 、朋名兔 ¾イン フエ Pンと も呼はれて る（ザ イン -プェ Bン ス尹ム , スプ ン: ίΓ-社,  The e-t-in (IF if) is slaughtered when it is known that there are at least three types of eves of the anti-inflammatory type> β, τ (see book-ch. 2 S β field,, 10 buys, 1380). For r¾7-in (ιΓΗ-r), My-Gi3: 3 摩, mainly τ ¾ It is also known as Hue P (Thein-Puen Beng Suen Yoonmu, Spoon: ίΓ-Sha,
OMPIOMPI
WIPO — jt— WIPO — Jt—
-ュ-重ータ ， 19?ι ).ΐΓ3
Figure imgf000004_0001
糧*©Λ £οεκ とも て！ ^れ基 e:とが予想《れ、 iMiWic重裏 T し ' て 4と考走られて る。ま 3 、 I T夏- r©ft¾としては、 《遍ィ -yxwy ( I.f » - «》ャ 麕イン -プ 《 I 〉と 扰黡性 まる とャ、囊超 が具まる との他 κ、 rn^rn^ する安定 嘉 と * も判って る（ザ イン -: 7 シ ス， ふ ，スブ ン Τ-社，-ュ -a—ク ， 1 373年）。 -Heavy data, 19? Ι) .ΐΓ3
Figure imgf000004_0001
Food * © Λ £ οεκ With! It is expected that the re-e group e: is expected to be 4. Also, as IT summer-r © ft 《, 《uni-yxwy (If »-«》 ャ 麕 プ I I〉 I〉 I I の 他 の 他 の 他 の 他 の 他 の 他 y It is also known that * and ^ are stable (Zine-: 7 cis, fu, subun, -a-ak, 1373).
■ΗΚΛΚΙϊΗは、生体の廬生する植クイ ス作用 ¾もつも として 定義されて *#、 €>鉋 *C多くの生物 «性 もっ と #ΙΕ明されて 、特に it重磨 ^る点 目 3れて^る（ブラプド， 35卷 71 1買， 13き0年；興嫁， 58卷， 875買， 1 380年）3 扈痕の增殖 捭義する方法として、鍾裹Sttの增建 直接抑駕する方法 と、 a¾ 抑 する方^^考え れ^ f 窗主の 分し ■ ΗΚΛΚΙϊΗ is defined as the vegetative action of vegetative vegetation * #, €> plane * C Many creatures (Brapped, 35 Volume 71, 1 Buy, 130 Years; Oki, 58 Volume, 875 Buy, 1380) 3 Cultivation of Rogues The way to pass and the a¾
祢 1る方 ¾が^ 、後者 ^合、ノ  One who is ^
て、 閟接的 t lえばナチュラ キ，一義膽（ US )ャ、マタ ァー ジの活性化、或いはキラ- 1箱》の 化まどが考えられる- m . I Indirectly, if it is possible, it is possible to activate Natura-ki, Uchiha (US), Matage, or Kira-box.
F17« は直接作用の德 κ、 の様《種々の^^ H活 tfed bる とが 8Ε 明されて る（パイオケミ》 エト バイオプイジ * ァク ，第 5，蓦 春， 23，買， 1 37 S年）。 I ϊΐϊ一 rはインビト wでの ¾:れら扰扈 塞につ *がる各重の话性、 よびインピポに於ける it重塞活性が、 IFIt has been revealed that F17 «is a direct action 德 κ, like << various ^^ H activity tfed b (Piochem) etioopuizi * aku, 5th, 蓦 haru, 23, buy, 137 S Year). I ϊΐϊ 一 r is the で in inv w: the nature of each weight following the rarity and the it occlusive activity in impipo
1ί一 βャ ΙΪ3Τ-# *比べ逢か《 高 と ら、その重要性; d¾く指摘 されて *(セ ラーイムノ wジ- ,第43春， 330頁， 1380^)。 然し がら、 イン ト -で讒 «3れる の力優は一WC観1ί1 β ャ ΙΪ3Τ- # * Comparative or << High, its importance; d¾ pointed out * (Cellular Immunology, 43rd Spring, p. 330, 1380 ^). However, the actor who threw in the in-
2：と^！坊 ∑，夏一 r¾Sk樣麵 ほとんどま tと、さら | »^蒙 i iTする安定 tt ^wtめ精製 むつかし とまど め I r ir一 r
Figure imgf000004_0002
Ι ΪΙΤ-*や I，夏- <€ ぺ大幅 t »tて い 2: and ^! Bo ∑ 、 夏 一 r¾Sk 様 麵 Almost t and more | »^ Meng i iT stable tt ^ wt Refined
Figure imgf000004_0002
Ι ΪΙΤ- * or I, summer-<€ ぺ significant t »t I
ごく最近、 5¾»の ΙΓΪ-Τが攀一 lCffi来 Λと う報會があるが <ブ Most recently, a 5¾ »ΙΓΪ-Τ reported that he had visited lCffi.
» ジング 才ブ ナ 蓄ナ ア デミー * サイエンス ,第»Jing Sai Buna
79« 1829JC, 1 382年）、 活性の囲収が大変悪く、 よ乡»条 的 糖製法が傳裏されて る。 79 «1829 JC, 1382], the territory of the activity is very poor, and the sugar production method has been handed down.
—方最近 至 、 ヒ ト I？ Jf - r遣儇子のタ w--ンダが報音され、 少くとも IT- rの一種として、 t 8 δ價のァミノ ら成る約 1 7 キ-ダ トンの分子種が、 大^繭で作られる様 った（ネ-チヤ一， 第 235春， 503買， t 3 S 2年；ヌクレイヅタ ア^プズ サ- チ ，笫， 0春， 2487頁， ， 382年）が、 天然 *C¾^される I y JI -ァにつ ては、驢 の分子量のものが報費されて屠]?、 その分子種 M の対応関係は未だ不明である。  —How recently, I ’m human? The sound of the Jf-r element was reported, and at least as a kind of IT-r, a molecular species of about 17 key-tons consisting of t8δ-valued amino was converted into a large cocoon. It seems to be made (Nichiya, 235th spring, 503 purchases, t3S 2 years; Nuclea Data Search, 笫, 0 spring, 2487 pages, 382 years), but natural * C¾ For I y JI-a, the molecular weight of the ass was paid and slaughtered, but the correspondence between its molecular species M is still unknown.
この様： *¾Ι から、各種の I FH-rに対する *ノクロ-ナ 植体 * 得る とは、分子種開の対応をつけるの 重要 *だけで く、 然の、 或 は逮伝子《み挨ぇ法による大孃菌まどで作らせ 7 を精製 する上 ICSめて強力 ¾武器と る 3 ごく最近に至 ] 天然の i FH - r に対する *ノク--ナル抗体の取得が報告された（ネ-チヤ- ,第 296 春， 258買， 1 382年）が、 一 rが複数の分子麓から成って る場合、 遣伝子の組み換え法 i よ！?ク -ン化された分子霪に对する ノクロ -ナ it体 t取得することは «めて鼋要と る- 発明の閼示 Like this: * ¾Ι means that * Nochrona plant * for various IFH-r is not only important to establish molecular species correspondence, but also natural or arrested.ぇ Method to purify 7 made with large separator fungus and ICS and powerful ¾ Weapons 3 very recently] Acquisition of * noknal antibody against natural iFH-r was reported ( Netya, No. 296 Spring, 258 purchases, 1382), but if one r is composed of multiple molecular bases, the transgene recombination method i! Acquisition of a compound that has been converted into a molecular molecule, which is required to be obtained, is «necessary-
本菊明者らは、 ト末 血リンパ球よ 謙»し ΛΙ Γ Ιί -ァの mBKA をもと it：、 I - r逮伝子のク》 --ング 行 、 そ 基 判を明 らか したが（ 8 β明箱害參簾）、 3とれ *もとに推走されるァミノ纖 ffi^lの c末 ϋ«の!^構造！： る 式 The chrysanthemums of Hon-ki, who are humble from the blood lymphocytes of the end, based on the mBKA of ァ Γ ァ it ： ： ： ： it 行 行 行But (8 β light box damage reference), 3 tore * c-end of the amino fiber ffi ^ l which is propelled based on ϋ «!! : formula
(JA (C)  (JA (C)
H-X-L 3 Arg Ser G-ln Met Leu Ρ1ι· Arg Qly-T-OH ( I ) H-X-L 3 Arg Ser G-ln Met Leu Ρ1ιArg Qly-T-OH (I)
〔式中、 Xは 合手または He <Jln Tal Met Ala <Jl Leu (Where X is a joint hand or He <Jln Tal Met Ala <Jl Leu
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0001
わされるポ ぺブチト'を化学的に合成し、 さら tCキヤ 9ャ-躉白と化学 結合させ蛋白複合体とし 7t3 Chemically synthesized a port pair Buchito 'is I, further tC wire carrier 9 catcher -躉白chemically coupled to form a protein complex 7t 3
で得られ リペプチドま は SI白複会体で嘈現動 免 ¾し、
Figure imgf000006_0002
9ンパ 親 とを麵 sa l会 よ ハイプリドーマとし、 れ タロ ""ン化した。 嘈 リ リ リ リ リ リ リ リ リ リ
Figure imgf000006_0002
9 Parents and parents are 麵 l l 会 ハ イ ハ イ ハ イ ハ イ ハ イ ハ イ ハ イ プ リ.
で得られ ハイブ ドーマ *嗜¾動物に接種し、 ノク -ナ 扰体を^ ί蓄積せしめ、 れ t揮取して前記の^リぺブチド *c対する * ノタ- -ナ «体 »造したコ  Hive dorma * Inoculated to the animal of interest, accumulate the Nok-na body ^^, and then take over and control the above * Libetatide * c * nota-na «body»
さらに、 ここで得られるモノク ナ 找体を利用し、 粗ヒト I？夏 一 r含有 ftからヒト I F if - r 1:糖製する方法 よびラジオイムノア プセィ （ U I A )法 らび IC ンザィムィムノアプセィ （ E I A )法 f よ]? ¾：ト Σ Ϊ Η— rを棱出する方法も し、本発明 ¾¾¾した。  In addition, using the obtained monokuna squirting body, crude human I? Natsuichi: Human IF if-r from ft containing r: sugar production method and radioimmunoassay (UIA) method and IC zymymnoapsey (EIA) method f?]? ¾: to Σ r—r The present invention is also a method for finding out.
す *わち本δ明は、新規ボ ペプチド（ I》 ，その S白 ¾ Η*，新熳 ク ン化 ¾れたハイプリ ドーマ，新規 *ノタ - -ナ 扰体 よび れ らの製造法、 さらに ノク- -ナ 扰体の用途 提供するものであ 前記ポ 9ペプチド（ I )に闥し、 Τは Arg Arg Ala Ser (Jinで ある 2：とが好ましく、 と Uわけ^れに mil#I r3 Argであるととが 好まし 。 また、 ポ，ペプチド（ I )はァ ノ 基数としてと ゎけ  That is to say, the present invention is based on the novel polypeptide (I), its S-white Η *, the newly synthesized hybridoma, the new * nota-n-aniline, and the method for producing them. Nok-na is used for the purpose of the present invention. It is preferable to provide arg # Arg Ala Ser (Jin 2: is preferred), and U is mil # I r3 Arg is preferred, and po and peptide (I) are represented as ano groups.
O PI 1 S~ 25儀であるととが好まし 。 O PI It is preferable that the number is 1 S ~ 25.
当錶ペプチドは、 ペプチド会虞の « 手«で »造しうる。 固相会成法, ' 液相会成法の^ iMCよってもよ が、 液 成法が有 壜会が參 このよ， *ペプチドの会虞の手 βは、 とえば、 " The Peptides 第 1· ( ！ 3 β S ) ， Schroder and Lu¾ke » Academic Press, 賣 York, U.S.A. , ある は-ペプチド合成 Λ , AM ら著 ,丸 ^式会社（ ， 975年〉 ，ある は Μ生化学寮襞饞崖， Μ 1 春， 207買- 400買"矢 A治明著，束京化学同人株式会社（ 1917^ *C記載されて 、 たとえば、 アジド法，ク βライド法，»麵水物法，The peptide can be produced "by hand" of the peptide peptide. Solid phase synthesis method, 'Liquid phase synthesis method may be based on iMC, but liquid synthesis method may be a bottle association. * Peptide association β is, for example, “The Peptides No. 1 · (3 β S!), Schroder and Lu¾ke »Academic Press, c York, USA, there is a - peptide synthesis Λ, AM et al., round ^ formula company (, 975 years>, there is Μ biochemistry Ryohida饞崖, Μ 1 Spring, 207 purchases-400 purchases "Ya Akira Aya, Bunkyo Chemical Dojin Co., Ltd. (1917 ^ * C described, for example, azide method, copper β-ride method,» 麵 hydrate method,
¾合«無水物法， D C C法，活性エスチ 法， ゥプド 7 -ド 讓∑ 用 い基方法，カ ボジィミダゾ- 法，酸化 D C CZアディチイ ブ（ 、 Η0ΗΒ , HOBt , H08u )法 どがあげられる 3 ¾ if «anhydride method, DCC method, active Esuchi method, Upudo 7 - de Yuzuru Σ for have group method, mosquito Bojiimidazo - law, oxidation DC CZ Adichii Bed (, Η0ΗΒ, HOBt, H08u) method etc. can be mentioned 3
当該べブチドは、 そのべプチド結合の任意の位置で 2分される 2種の フラグメントの一方 IC相当する反応性力 ボキ 基を！ Γί"る原料と、 他方のプラグメント《 相当する反応性ァミノ基を有する屎》をべプチド 合成の常裏手 «で糠合させ、生成する縮合 が保護基を有する場合、そ の保護基を常褰手段で 霞させるととによ 製造しうる。  The peptide is one of two fragments that are bisected at any position of the peptide bond. When the raw material is combined with the other plug-in <a waste having a corresponding reactive amino group> in the usual manner of peptide synthesis, if the resulting condensation has a protecting group, the protecting group is always used.う る It can be manufactured by haze by means.
脤料の反応に調与すぺきで * 官餞基の保蘐 よび保護基、 *らぴ tc その保護基の脱戆、反応 4C劂專する窗能基の活性化 どもまた公知のも のあるいは手段から適宜適^しうる。  In preparation for the reaction of the raw material, * protection and protection of the public groups, * tc removal of the protection group, activation of the reaction group for reaction 4C, etc. It can be appropriately adapted from the means.
尿料のァミノ基の保 としては、たとえばカ ボペンゾキシ， t - ブチ ォキ カ ボ- , t一アミ キ^カ ポ- , ィ yポ s 才キ ί カ 51 , ρ—メ トキ^ペンジ ォ ュ , 2ーク w 一ペンヅ 才キ ボュ , ァダマンチ 才キ 力 ポュ , ト 9 フ ォ アセチ , ϋ ,ホ ミ ， ο— -ト プ ι= ス 7ェ 一 β— , ジフ スプイノチオイ； w , 4ーメ トキ^一 2 , 3 , βート メチ ぺンゼ ス どがあげられる。 * ポ年 倮護 基としては、？ とえばア^华 スチ （例、 メチ ， チ ^， ブ wビ -ブチ , t -ブチ まどの スチ 基 ) ,ペ ;^ スチ , p --ト》ペン ^ ス 基 , pーメ トキ ペン^ ス 基 , p一 ク ia ペンジ Xスチ 基，ペンズ K 9 sスチ 基，； »Λ^ίίペンゾ キ κドラヅド基, t一ブチ オキ^ * ボ- ドヲジド基， トリチ ドヲ ド基 どがあげられる。 Examples of the preservation of the amino group in urine include, for example, carbopenzoxy, t-butoxycarbo, t-aminopropyl, and y-pos, 51, ρ-methodine. , 2 w w ヅ ヅ,, ダ, マ ン ァ ト ト ト 9 9 9 9 9 ダ ダ ダ ダ ダ = ト 1β-, diphspinothioi; w, 4-method ^ 1,2,3, β-methodase. * What is your base year? For example, 华 华 （(eg, meth, ^ ^, w, ビ, t, t,-,-,-,-,-, p, p, p)基, ク ia ペ ン X ス ， ， ペ ン, ズ Λ 9 9 基 基 ペ ン, ； Λ ゾ κ 基 t t t t, t 一 t オ キ ^ ^ * * ボ ボ ボ ボ ボ ボ ボ.
ア ギ-ンのグァ -ジノ基の保 j¾¾としては、たとえば-ト-基， ト ^ 基 , pーメ トキシベンゼンス ホ- 基 ,カルポペンゾキ^ , ィ、J ボ； ルォキ カ Λ ϋ- ,ァダマンチ ォキ ポ- , 4ーメ ト キ ー 2 ， 8—ジメチ ぺンゼンス ホ= 基 ,ペンタメチ ペンゼン ス 等が！ ^される。 また、そのグァ -ジノ基は、酸（«、 ぺ ンゼシス;!ホン酸， ト エンス *ン酸，： it酸， ϋ酸 ど）： «の滲で保 謹してもよ 3 The guadino group of the agin is, for example, -t, t ^, p-methoxybenzenespho-, carpopenzoki ^, i, J-bo; Okipo, 4-Met key 2, 8-Mitzenzensho group, Pentamethine penzens, etc.! Will be done. In addition, the Guadalmedina - Jinomoto is, acid ( «, Bae Nzeshisu; acid, door Enns * phosphate,:! It acid, etc. ϋ acid):« 3 it may also be coercive謹in滲of
スレオ-ンの水酸基は、 7tとえばエステ 化または -一チ 化 Κよつ て保護する とができる。 のエステ 化に適する基としては とえば ァセチ 基まどの低級ァ カノイ 基，ぺ、ノゾィ 基 *どのァロイ 基, ペンヅ オキ^カ ボ- 基， チ キ ir ボ- 基 ¾どの戾酸 ら画導される基 *どがあげられる 3 また- -チ 化 f 適する基としては，The hydroxyl group of threon can be protected by esterification or -monotiation, for example, by 7t. Examples of suitable groups for esthetic treatment include aceti groups, lower akanoi groups, ぺ, and nozoy groups * which are derived from alloy groups, pentoxy groups, and ti ir groups. 3 the group * etc. can be mentioned that - - the Chi of f suitable group,
Λとえばぺン ^ 基，チトラ tド ttビラ- 基， t一ブチ 基 iどであ る。 しかし *がらスレオユンの水酸基は必ずしも保裏する必要は * e メチ才ユンはス 傘キサイドの»で保護して tもよ »a ¾料の *ル キ 基の活性化され ¾ものとしては、たとえば对おする酸鶬水《Τ, アジ F ,活性 スチ （ペン ク WWプ ノ -^, ρ-ュト PIフ 3：ノー 0MPIFor example, ^ ^ group, chitra t tt villa group, t-buty group i. However, * It is not necessary to protect the hydroxyl group of threoyun * e- methyst is protected by the umbrella »» a a a a ル た と え ば と し て と し て对 Ossic acid 鶬 water << Τ, horse mackerel F, active stainless steel (Pink WW Puno-^, ρ-Put PI F 3: No 0MPI
W1P0 l fi/ , 夏-ハイド ϊ«キ yサタ ^ンィミ K , Jf 一ハイド βキシペンズト 9ァ ゾ ハイド》年 - 5 -ノ ネン- 2 , % - ^Λ ^ ^W1P0 l fi /, Natsu-Hide ϊ «Ky Sata ^ Nimi K, Jf One Hide βXypenzd 9Azohide》-5 -Nonene-2,%-^ Λ ^ ^
' イミ fまどとの ス尹 ）まどがあげられる。 ペプチド iH »«asは ifc水薦（ 、 ジ^タ βへキ ィミド » ポジィ ダゾー 等の * ポジイミド試案）の存在下 i 実擔しうる場^^あ *a 'Imi f Madou's Su-Youn) Madoka. Peptide iH »« as is ifc water recommendation (*, β-Heximide »Positive Dazo etc. * Positive imide prototype) i.
本ぺブチド練合反 は瀋媒の存在下《€行 2：とがで詹る。港媒として は、 ペプチド編合反応に使用しうる 2：とが られて るものから適 択されうる。 Λとえば無水ま 7 は含水のジメチ *^ ァ ϊド，ジメチ ス ! *キサイド， ビ 9ジン， ク ホ ム , ジォキサン , ジ メ y , テト，ハイ ド-プラン，醉酸ヱチ , IT -メチ ビ β 9 ドンある は tれらの適寬の S合物 *どがあげられる。  The present butide kneading reaction is performed in the presence of a medium. The porting medium can be selected from those that can be used in peptide conjugation reactions. For example, anhydrous 7 is a water-containing dimethicide. * ^ Adide, dimethis! * Oxide, virazine, kuhom, dioxane, dimethy, tet, hide-plan, drunk acid, IT- Suitable β-compounds such as methabi β 9 -don *
反応温度はぺブチト'結合形成反応 *C使用されうる 2：とが知られて る 範通から適 aca択され、通常約 - 4 0 一約 δ 0で，好ましくは約  The reaction temperature is selected from the range of which is known to be the ぺ butyto 'bond formation reaction * C can be used. It is usually about −40 to about δ0, preferably about
- 2 0 一約 0で©«通から適 遷択される。  -2 0 About 0, selected from ©.
本纖合反応終了後、生成物が保護基を有している場合、それは常法に ょ きる。 かかる常法としては、 たとえば «¾的方法（例、パ ジクム黑等の を用いる水素添加，液体ァン ァ中金属ナト ウム Κよる ¾¾ ) ,ア^ド ス（锊、 トリプ ォ β鰺酸，ププ化水素，メ ンス ホン酸ある は、 チオア-、ノー 等の含 ¾化合 存在下、上 記の酸ある は、その混^ *によるァ ドリ ^ス ） *どがあげられる。 上 ¾のよ 5 K して爨 ί造され 3t本 ¾明のぺプチドは、反応終了後毳 から、通常のぺプチドの分離手 S，抽 ¾，分 A3 ,カラムク βマトグ，プ ィー *ど ¾C i: ]> ¾ ¾で食る。  If the product has a protecting group after completion of the fiber-bonding reaction, it will be in a conventional manner. Examples of such conventional methods include, for example, conventional methods (eg, hydrogenation using a liquid such as PADIUM, the use of sodium metal in a liquid fan), ados (锊, tripo β-acid, In the presence of hydrogen peroxide, mensphonic acid, or a compound containing thiol, no, etc., the above-mentioned acids or a mixture of the above-mentioned acids can be mentioned. After the reaction was completed, 5 tons of this peptide was produced, and after the reaction was completed, the peptide of the present invention was separated from the bellows by the usual peptide separator S, extraction, minute A3, column chromatography β matog, pie * Eat ¾C i:]> ¾ ¾.
ボ 9ぺグチト'の蛋白 ¾合体 teaし、 キヤ -蛋 ¾の種類 よびキヤ ヤ-とハブヂン（ の場合ペプチド）との 会 ifeは、 キヤリ ブ ングさ《免療し ftハブ，ン K対して 体が«率よく ffi来れば、 ど の様 ものもどの様 比率で ブ 3ングさせてもよ が、 例 λば牛慮清 ' ァ ブミンャ牛サイ aダ ブ 3ン等 竃量比でハブチン1 tC し 0J -The protein complex of bogutito 'is a tea, and the type of cana-protein and the association between the cana and the havan (in the case of a peptide) さ 《免 免 免 ft ft 療 療 免 療 れ ば れ ば 免 れ ば 療 れ ば 免 療 ft 免 れ ば 療 れ ば 療 療 ft ft ft ft れ ば れ ば れ ば ft ft ft ft れ ば れ ば れ ば ft Beef Rhinoceros a Dub 3 etc.
23、好ましく 一 Sの割合で *ブ Sせる方法が用 られる。 23, preferably at a rate of 1 S.
ま 7 、 ハブ ンとキヤリヤーの;》ブリング t は、種 の趣会 ¾1¾用 る とが ffi来るが、 グ タ ア デヒドャカ ボジィミド等が好赛合 用 られる。  In addition, the Bring-t of Havun and Carrier; >> is used for a special event, but it is better to use Gutada dehyidaka bozimid.
ポ ぺブチド（ I )ま は蛋白複合体を用^て兔 する ί Κし、兔 する 動輪は、 羊，山羊，兎， ¾ ¾プト，，ヅト ，マウス等の  The driving wheel is released using sheep, goat, rabbit, rabbit, rabbit, mouse, etc., using poitide (I) or protein complex.
¾ |¾われるが、 ノク -ナ ¾体 得るためには、 ，ット，マ スが好まし 。 免疫方法は、 例えばマウスを兔 する場合、 皮下，腹 ¾ 内，静«内，筋肉内，皮內等の ずれの -トからでも可能であるが、 主として皮下， 整内舞鼸内に（と])わけ皮下 )注入するのが好まし 。 また、 免疫蘭隔，免疫量等も可変度は高く、種 の方法が可饑であるが、 ^えば 2遷閬隔で 2 ~β回免疫し、最終免疫後、 ， ~5日、好ましくは 2-4日後の ϋ»胞 tr用 る方法がよく用 られる。 免疫 Jfcは 1回にぺ プチド量として、 マウス当] > ( I μ&以上、好ましくは ί 0* - 30Θ S用 ることが望まし :： 又，释藏を摘出する饑 、 ^^採血を行 ， ώ中の铳体儸の上舞を建認し ? 上で、 》滅《跑を用いる緻合実験も行う 2：とが望ましい 3 ¾ | Although it is possible, in order to obtain Nok-Na, you prefer,, and mass. For example, when immunizing mice, the immunization method can be performed from subcutaneous, intra-abdominal, intra-static, intra-muscular, intra-dermal, etc. ]) Subcutaneous) preferably injected. In addition, the immunity of the septum and the amount of immunity are highly variable, and the method of the species is starvation. For example, immunization is performed 2 to β times at 2 intervals, and ~ to 5 days after the final immunization, preferably A method that uses cells after 2-4 days is often used. Immunization Jfc should be used as the amount of peptide at a time, mouse >> (I μ & more, preferably ί0 * -30ΘS: :: ? line, Ken認on Mai铳体儸in ώ above, also performs緻合experiments using the "flashing"跑2: and is desirable 3
上記驊臓細腫と ンバ球様钿跑との箱 S¾合は、 えば摘 ffiしたマウ スの 飽 ヒポキサンチンーグァ -ン-ホス *リポ ^トランス 7 Sヲーゼ欠損 ( ャ、 チミジンキナーぜ欠損（ f ∑一 ）の¾* マ-; » -も^ 7 適切 鬨種または具種（好ましくは鍔種）のミ - マ等の、 リンバ球 ¾»臆株との間で醮会させる。 融僉 は、センダイタ  The above-mentioned box S combination of the hepatic fibroid and the spheroid is, for example, the saturation of the excised mouse hypoxanthine-guan-phos * lipo ^ trans7Sasease deficiency (a thymidine kinase deficiency (f ∑ 一 ¾ マ * マ »» »» »» »» »» »» »» »» マ »» マ マ マ マ マ マ »マ, Sendita
0MPI WI " 1 ィ ス， リ 3：チング 3 - （ P S ）等の纖合 ¾Ι# いられる a も ちろん メチ ス *キ^ド（ PMS 0 )そ0*の IWMiaWlt加える ' とも可餞である。 ，1 aの重食度は、ふつ 10Οβ-ββδβ , 聞は β·5~30分.，濃《ϋΐ 9 ~80 等 用 られ *が、好まし 5 として、 ？ B a 8 (TO 0135 ~ S 5 で 4一 f 0分 A«f 0MPI WI " Fibers such as 1-disc, 3: Ching 3-(PS), etc. ¾Ι # a is also available Meth * Kid (PMS 0) 0 * IWMiaWlt Add 'is also free. , 1a is usually 10 重 β-ββδβ, but is β · 5 ~ 30 min., Concentrated << ϋΐ 9 ~ 80 etc. * is used, but is preferred as 5? B a 8 (TO 0135 ~ S 5 = 4 1 f 0 min A «f
こと itよ ΐ 効率よく融会させる とが i¾来る。 融合箱 saは、 ヒボキ サンチン一アミノブチリ ンーチミジン培地（ EA Mi ネィチヤ一， 第 258春， 435買， ！ 975年）等を用^て、遷択的 (Citf蓬させる That's it. The fusion box sa is transited (Citf Penguin) using Hiboki Santin-Aminobutylin-Thymidine medium (EA Mi Neichia, No. 258 Spring, 435, 975), etc.
CLとが出来る。 Can do with CL.
增殖して来 Λ細胞の培養上淸は、 目的とする it体産生があるか否か ついてスク 一-ングを行ラ とができ が、 ¾t体儀のスタ 9ー-ンダ は次の機 iC行うことが出来る。 即ち、 tの場会には、 まず第 ί S3»とし て免疫し J ペプチド ίθ^する ¾t体麇生の有無を、 3 1 法または31 When culturing cells that have been cultured, screening can be performed to determine whether or not the desired it body is produced. You can do it. In other words, at the meeting of t, first, the presence or absence of the t-body production by immunization as the ίS3 »and the J peptide ίθ ^
¾ ^の方法で調べることが出来るが、 れらの方法 つ ても種 の麦S 法が可能である。 好ましい »定法の一例として、 B I Aを用 Wる一つの 方法 *Cつ て述べる 3 セ ロ -スビ-；^の担体に、例えばゥサギ抗マ ウスィムノグ σブリン 体奁常法 iC従ってカブリングさ *"C き、 2：れ IC澜定し ¾養上清や、 マウスの血清を加え、 一定時閱、 定濃（は下調 べ る ^ method can be used, but these methods can also use the seed wheat method. An example of a preferred »titration, W Ru one way use the BIA * described C one by 3 cell B - Subi -; ^ of the carrier, for example Usagi anti Ma Usuimunogu σ Brin body奁常method iC Therefore Kaburingu of *" C 2: After the IC assay, add the culture supernatant and mouse serum.
4-40 :を示す )で反応させる。 この後、 反お物もよく ¾ 後、 m0 素 T!«讖し べブチド（酵素とぺブチドを常法に従 カブリングさせ 後精製） t加え、一定時 95、定 で反応させる。 反応物をよく つ 後、 顯素基貧を加え、一定時》，定 で反応させ、その後、生成発色物を S 光度ま Λは賛光度等 Τ¾定する Cとが^来る- 培 で場建¾示し、かつ 用 たペプチド I る抗体活性β のみられ タエ の箱おは、蹀界種! ¾¾θ :よ タ-一-ンダを行うと i とが望まし 。 タ-ーン化まれ ¾麵 JBの上淸 I つ て ti Cスク 3 - - グ t ? ¾t体僵の « *ΛΌ*«ϋΗ^ 2：と ICよ ] 免療 ぺ ' ブチ と反 «ί* *rT«ノタ ナ 体 ¾^ イブ 9ドーマク 4-40: is indicated). After this, the material is thoroughly removed, and then m0 element T! Syrup bebutide (coupling the enzyme and peptide in accordance with a conventional method and then purifying) is added. After preparing the reactants, add hydrogen atom and react for a certain period of time, and then react the reaction at a constant level. The peptide activity of peptide I was shown and used, and it was an industrial species! タ θ: i want and. Turned off ¾ 麵 JB 淸 I ti C sk 3--t t? ¾t body rev «* ΛΌ *« ϋΗ ^ 2: and IC yo] Medical treatment ぺ 'Buchi and anti «ί * * rT «Notana body ¾ ^ Eve 9 Dormac
得られる β The resulting β
5 Jfci £れらク -ンの！^る It体が免 fiii 用 itベブチドだけで * く、 I？ i 一 r分^ tのものと反応性 ¾¾ ^否かも調べる がある が、 のため ば、纏績され Ι f s-rも用 I▲法ま Λは s∑ A法も用 て反応性 瓢ぺる方法や、 生物活性（ I Ϊ - r活性）が C の «：体 Kよ 藪収される か 愿る方^が用 られる。後者の SH^0 は I I1 IT - 7* <Γ糖製する必賽がま ので有利 i 用 る とが出来る。 有 利に用 られる一«を次に述べるが、 もちろん の他 * もブ》，イン▲5 Jfci ^ It is not only fbe it for fiii * but also I? It is also possible to check whether i is one r min ^ t and its reactivity ¾¾ ^ no, but in order to do so, it is also compiled Ι f sr also I I method or s∑ A method Also, those who wish to see if the biological activity (I Ϊ -r activity) of C is «: body K or not, are used ^. The latter, SH ^ 0, can be used to advantage because it is necessary to make II 1 IT-7 * <Γsugar. The following are some of the benefits that can be used, but of course other than *
1：用 て兔 ¾ ^物 除 7t上淸中の残存 Ι Γ »- r活性 測定する方1: Use 兔 兔 物 物 物 物-----------
^も哥餓である。 «ぇばゥサギ抹マウスィムノグ ブリン扰体をセ ロ -スビ-ズ等の担体 JC常法に従 カブリングさせて き、 れに澜¾5 した ハイゲ！；ト マ上清ま Λはマウスの愈淸を加え、一定時 {¾、定滠 で反応させる。 の後反応物をよく洗い一定量の I F Iff -ァ t加える。 ^^ is also hunger. «Pimps egrets, mouse murginog Blind bodies were coupled according to the JC standard method, such as cell-beads. Add to the supernatant of the tomato and add to the mouse, and react for a certain period of time. After the reaction, wash the reaction well and add a certain amount of IF Iff-at.
I ff H - rとして、 えばヒト衷 リ ンパ ¾2>*らレクチンとホ ボー エスチ で誘導し ¾1 F ir一 rtr ^む培養上清等を用 る とが ¾ 来る。 I Ϊ ir一 r t加え 後、一定時閬，定 Sで反応さ *Λ後、反応上o 淸中 i 含まれる Ι Ι·Ϊ - rの活性も漏定する。 この様にして目的とする 抗体の I Ϊ ir - r活性の吸収鉻を測定する とが ffi来る 3 As the IffH-r, for example, a culture supernatant, which is induced by lectin and hobo EST from the human lectin <2> * 1 and used as a culture supernatant, is used. After adding I Ϊ ir-1 rt, it reacts at a certain time 閬 and constant S. After 、, the activity of 淸 Ι · Ϊ -r contained in i in o 上 in the reaction also leaks. I Ϊ ir of the antibody of interest in this way - and to measure the absorption鉻of r activity comes ffi 3
のよう 4Cしてク j /化されたハイプリドーマは、マウス等の適切 ま哺 廳 の 内に接種し、麵膽 增殖させ、 3»水 r揮取する と ic よ]?、箱 漪ょ も毫か ic商力慎の扰体 、多量 f 麴率よく取得S する とが ffi来る β の Λめ《 は、铜えばマタスの場合、 ミネ， オイ
Figure imgf000013_0001
C等のマタス t X 104 - 1 ί 07 儷、好ましくは 5ズ t 0s t 8β 俩のハイブ -マ »ΚΛ等 ' t ¾«し、 7~2β3後、好ましぐは！ 0—， 4 腹水液等 ϋ取 する。
Figure imgf000013_0002
備え 分画，： D S▲ S -セ - ース力，ムタ wマト等 « よ 、 容易 ί »ゾタ w -ナ ¾t体 ^ 兔疲 グ》ブ ンとして単赚する とが 来る a The hybrididoma which has been transformed by 4C as described above is inoculated in a suitable place such as a mouse or the like, allowed to inoculate, and bred, and then breached with water 3).毫or ic commerce force Makoto of扰体, a large amount and f麴率well to get S is Me Λ of β come ffi ", in the case of Matas if铜E, Mine, Oy
Figure imgf000013_0001
Matas t X 10 4 of C, and the like - 1 ί 0 7儷, preferably 5's t 0 s t 8 β俩of the hive - and Ma »ΚΛ such as' t ¾«, after 7 ~ 2β3, is Konomashigu! 0—, 4 Ascites fluid, etc.
Figure imgf000013_0002
Preparation Fractionation: DS ▲ S-source force, Muta w Mat, etc. «Oh, easy ί» Zota w-Na
本発明の ノク Τ» -ナ 抗体は、 下 ¾の性状も有する。  The antibody of the present invention also has the following properties.
(1) 免疫に用 Λポ ペプチ （ I )と »会する。  (1) For immunization ΛMeet with Popepuchi (I).
(2) Ι ? 1Τ- Γ分子と鰺合し、 1 ?夏-*ゃ115 - とは錶合し* 。  (2) Combined with Ι? 1Τ- Γ molecule, and combined with 1 夏 summer- * ゃ 115-.
(3) ォクタ 法 よる検定によ jrigC^b のサブタ スの扰体 属する β (3) β belonging to a subclass of jrigC ^ b
(4) S D S -ボリアタリ アミ ドケ、 ¾KC iCおいて、檬率免 ftグ ロブリ ンの H鎖 よび L鎖に完全に る 2本のバンドのみを示 す β (4) β showing only two bands completely in the H chain and L chain of ft globulin in FT globulin in SDS-Boriatamide, ¾KC iC
¾ 本 ノク - -ナ^ *体は安全に製造， Λ用保管することができ 本鋼によ 得られる《ノク ""ナ 扰体は、 31 法¾ぃは1? 1 法 活用する とによ 1 生体中の、 或 は 管内での の I？夏 一 rの検出に用 る とが出来る との他に、 わゆる抗体 *ラム ¾作 製する :とによ j>、 今 大変困tとされて 7天然の、或 は遗伝子鏃 みかえにょ 作られる I ? » - r 、穽常 率良く糖製するのに使用 する 2：とが ffi来る。  ¾ This Noku--Na ^ * The body can be safely manufactured and stored for general use. 1 I in the body or in the tract? In addition to being useful for the detection of Natsuichi r, so-called Antibody * Ram produces: I? »-R made of maple and pits 2 used to make sugar more efficiently.
I yjf -ァの検凼の Jtめには、 ""^として、漏定した Ι Ϊ » - Τ·«Τ む資料叉は標準 Ι Ϊ Η - Τを予め、
Figure imgf000013_0003
一 又は酵素等 * よ 樓纖した当 *ノク i»—ナ 抗体と 5^6；させ次 で *¾¾r^ir»^ させるべく例えばブ aチイシ A ;¾ L、
Figure imgf000014_0001
免 ¾沈 降物の！ ^活^は鏐棄潘性 漏 と t よ ∑？夏一 rの量を画便 t 漏^ とが ffi来る。 ま 7 、 it黡驟議B位の臭まる 2藿 イブ 9 ー タ w
Figure imgf000014_0002
ンの遞 す 4ノク V -ナ i¾体！:用 ま、 わゆる サンドタイプチ法 i よ 、 よ 1>騰便 3： y夏一 r©漏定 可餞と 4る。 In the Jt of I yjf -a detection, "" ^ is used as the "漏", and the data or standard し た Ϊ Τ-し た
Figure imgf000013_0003
* Or enzyme, etc. * 纖 纖 For example, a
Figure imgf000014_0001
Immunity of sediment!活 ^ 鏐 鏐 鏐 t t ∑ ∑? The amount of natsuichi r comes to me. 7 、 it 黡 黡 議
Figure imgf000014_0002
遞 no express 4 no V-na i¾ body! : Use, ゆ, ゆ ゆ 1>>1>>1>>>>.
I F夏一 rの耱製の ¾め iは、精製し 当該 ϋ体 えばァプィゲ I F Natsuichi r is made of purified i, which is, for example, Apige
- I 0の様 遍切 担体 *C常法 iC¾ ^て ブ 9ンダさ 後、 Hf^K 充め、培養上淸 fiいは破さ wし？ t菌体等の粗∑ Ϊ ir-rも含む資料を * ，ム tcaw、 «着さ *Λ後、 洙浄し、その後 «ぇば∑ s c夏の様 ¾*才 トロビプク 或いは I ΓΗ- rの失活の の «酸！ ^件で滲 させる方 S^icよ^、 ¾r率よく精製できる 3 -I 0 遍 遍 遍 担 体 * C C C C C C C C C C菌 ∑ 資料 資料 資料 資料 資料 資料 菌 菌 菌 菌 菌 菌 資料 菌 資料 菌 資料 菌 資料 資料 資料 菌 菌 資料 資料 菌 菌 菌 菌 資料 菌 菌 菌 資料 資料 菌 菌Deactivated «acid! ^ ^ Those who ooze in the matter ^ ^ You can purify with good efficiency 3
本明細害 て、 アミノ酸，ペプチド，保 ,活^! ,その他 闋し略号で表示する * 、それらは I USA C - I IJ BCCommisaia on Biological J oaenclature による！^号ある は当該分 における憤用赂号 *基づくものであ 、その例 ¾次 tC掌げる。 また、 ァ ミノ酸 *ど tc闋し ^異性体があ うる は、特 f 明示しまければ L 体を示すものとする。  In the present specification, amino acids, peptides, amino acids, activities, etc. are indicated by abbreviations *, and they are according to I USA C-I IJ BCCommisaia on Biological Joaenclature! The ^ symbol is based on the resentment symbol * in that part, for example, ¾Next tC. In addition, amino acid * may have tc ^ isomer, but if it is specifically specified, it shall show L form.
Lye ： 9ジン  Lye: 9 gin
Ar g ：ァ ギ=ン  Ar g
： グリ ン  : Green
S β r ：セリ ン  Sβr: Serine
Ala ίァラユン  Ala Dalayun
(Jlu ίグ ミン纖  (Jlu
Qln ίグ ミ ン  Qln
Leu ！ βィ yン  Leu! β y
OMPI He* :メチ才》ン OMPI He *
？ he ：プ ¾¾ ァラ》ン ? he: Para
Tal：バ » ン .. Tal: Bang »
Pr o Pr o
Thr スレ; ί·ユン  Thr thread;
Z ； » ポペンゾキ  Z; »Popenzoki
Bo c t一ブトキ *ル :: ¾  Bo ct One Butoki * ル :: ::
Mt r 4ーメ トキ ー 2 , 3， 8— ト リメチ ペンゼ ス ホ- Pme ペン メチ ペンゼシス ホュ Mt r 4-key 2, 3, 8-Trime pen
OBu t -ブチ^エスチ OBu t
OHB K一 ¾ ドロキシ" >5 -ノ ボ ネンー 2 , 3 - * キシィ ミ ド Xヌチ OHB K ¾ Droxy "> 5 -Nonbonene 2,3-* Kisymid X Nuchi
Dcc:ir, i -ジ タ -へキ * ボジィ ミ κ  Dcc: ir, i-jita- * * bojimi κ
OCXJ : , J - ク t*へキ ルクレア  OCXJ:, J-h t *
H0K1 :ΐί一 itド β年^- 5一ノ ボ ネン - 2 , 3 -ジカ ボキ ィ  H0K1: ΐίit it β years ^-5 -one-bonen -2,3-zika-boki
HOBt: ITーヒ ド Pキ^ペンゾト 9ァゾー HOBt: IT-Head P key ^ Penzoto 9Azo
CHA： タ ϊ»へキ ァミ ン CHA: ϊ »
DCHA:ジ タ ϊ»へキ3 ァミ ン TEA♦· ト リェチ ァミ ン DCHA: へ へ へ 3 3 TEAM
TTA：ト プ ォ 酵縵 TTA: Top Po yeast
Η3Α：メ ンス Α·* 酸 Η3Α: Men Α · * Acid
ΤΗΤ：テトラ 11ド フラン ΤΗΤ: Tetra 11 de franc
： メチ ホ ムアミ ド : Mechiho Muamido
4 Four
ΟΜΡΙ HeOH:メ ノー ΟΜΡΙ HeOH: Menor
AeOSt ：醇酸：チ  AeOSt: Rich acid: Chi
' B面の蟻 説明  '' Ants on the B side
図 iは実 10 | * る本 明の《ノタ I»—ナ A lt体の D E▲ Bセ β -ス *ラムに i ^る溶 ffiパ ーンを示し、 図 2は夷龜例 1 &に *t る ¾ノク τχ -ナ 扰体の ¾ ^泳動の H杲 ¾：示す β Fig. I shows the melting pattern of the | nota I »—Alt body DE ▲ B se β-slam of the 明 body. to * t Ru ¾ carbonochloridate τχ - ¾ of Na扰体^ migration of H杲¾: show β
発明を齊旌するための最良の形餞  The best form of gifting for invention
下の実 ϋ にお て、薄履タ βマトグラフィ -は、 メ ク社製^ ϊ 力ゲ ブレート 63 F2S 又は、 フナ 3 業 S社製セ 0 -スブ ー ト ，アビセ S ϊ¾用い、 下記の農開港媒も用 た。 Are you the real ϋ below, Usu履Ta β Matogurafi - is, menu click Corp. ^ ϊ Chikarage Bureto 63 F 2 S or, crucian carp 3 sector S manufactured by Se 0 - subtilis over door, using showered S ϊ¾, following Agricultural opening medium was also used.
Bf1： クロ口ホ ふ ： メタノー ： 畿ー 9： 1 ： 0.5 Bf 1 : Black mouth F: Methaneau: Kii 9: 1: 0.5
Hf2：静黢ェチ ：ビリジン ：酢酸：水- 33 ： 1 0 ： 3 ： 5 Hf 2: Shizu黢E Chi: Pyridine: acetic acid: water - 33: 1 0: 3: 5
Hf3 ： ク ： メタノー ：水》 7： 3 ： 0.5 Hf 3: Subdivision: methanol: water "7: 3: 0.5
Bf4： n -ブタノ - ： ビリジン ：睜黢：水》 30 ： 20 ： S： 24 ϊίί5 : »酸 チ ： η -ブタノ -ル：醇酸：水》 1 ： 1 ： 1 ： 1 夷維例 1 Bf 4 : n-butano-: pyridine: 睜 黢: water >> 30: 20: S: 24 ϊίί 5 : »acid: η-butano-l: rich acid: water 1: 1: 1: 1: 1 1
( i ) Z-Ser-Gln-OBu* の製造  (i) Manufacturing of Z-Ser-Gln-OBu *
z-ain-OBu* 1 8.1 fをメタノー 50 Ϊ Wに溶解し、パ，ジゥム 黒 frtt媒 IC水棄気琉中で《元した。 »媒をろ去し、溶媒も《去した《« z-ain-OBu * 1 8.1 f was dissolved in 50 Ϊ W of methanol, and then dissolved in water and black frtt medium. »The medium was removed by filtration and the solvent was removed
Z-Ser-OI 7.5 , ΗΟΗΒ δ· 3 f ととも D H？ 250 *AC瀋 解し、氷冷し？ 。 氷冷下に D C C7.1 5 /を加え、 Q で 4時閡室 ¾で 12時藺橋摔しt3 析出し 7t D C II ろ去し、潘媒も «去ののち残 «物 IrAcOBt 308ei|C抽 ffiし、 4!I1 HC¾水， d2s«酸，水で！^、 無水磯酸ナト 9ゥムで乾燥した。 溶媒 曹去し、 柝 し 7 絨 &を： チ でろ取し、乾爆ののち c¾ CJ ]>再綾 A UTto $m&5f t Z-Ser-OI 7.5, DHδ · 3f and DH? 250 * AC Shen, ice-cooled? . Under ice-cooling DC C7.1 5 / was added, and the mixture was 12 Tokii Bridge摔at 4 o'clock閡室¾ t 3 precipitate was removed by 7t DC II filtration in Q, the remaining «products after a Hannakadachi also« removed by IrAcOBt 308ei | C extract, 4! I1 HC¾water, d2s «acid, water! ^, Dried with anhydrous sodium isoform 9um. Solvent Remove the soda, squeeze 7 7 & filter: 、, dry bomb and then c¾ CJ]> Aya AUTto $ m & 5f t
r OMPi —IS— r OMPi —IS—
l 51.2 it , H 1 0.14 mp. 97 - 1 β β X： , « f5-2 .|e ( e - 0.40 ,メ ノ - ） l 51.2 it, H 1 0.14 mp. 97-1 β β X:, «f 5 -2. | e (e-0.40, meno-)
' (¾0 Ηω07 s として '(¾ 0 Η ω 0 7 s
針雾儘： c,5S,72: Ht|.99; v,S.92 Needles: c, 5S, 72: H t | .99; v, S.92
5 Mi c,S$.2l! H.6.T2J »,8.78  5 Mic, S $ .2l! H.6.T2J », 8.78
( i ) Z-Ala-Ser-Gla-OBu* の製遣  (i) Production of Z-Ala-Ser-Gla-OBu *
Z-Ser-Qla-OBu* 4.23 f をメ ノ 303 β /に溶解し、 バ ラジクム黑 媒 ft水素Κ¾中で還元した。 ろ去し、溶媒 《去 した «« も 2.34 # , HOIB 2.27 f とともに、 10 AcOSt 200 Wと 才キサン 20 , DH7 1 00 の 合^1 に溶解し、氷冷した。 冷却下に！） C G 38#を加え 0でで 4時 W、 室 温で， 2時閱 «拌ののち、 D c uをろ去し、港媒 賓去し Λ。 残 sr*tc Z-Ser-Qla-OBu * 4.23 f was dissolved in 303 β / and reduced in a vacuum medium ft hydrogen. The mixture was filtered off, dissolved in a solvent <1% of AcOHt 200 W and DH7 100, together with 2.34 # and HOIB 2.27 f, and then cooled with ice. Under cooling! ) Add C G 38 #, add 0 at 4 o'clock W, room temperature, 2 o'clock, stir, then filter off D cu and remove the port medium. Remaining sr * tc
CH3C1Tと-—， も加え弒巍としろ取、 乾燥ののち cs3 CM X H» Aし 。 《量 72- , 率 75·35ί , Bf1 0.60 , mp. 185- ΐδ 1 «^- i.2e ( c -d50 ,メタノー ） Add CH 3 C1T and -—, and then remove it with cs 3 CM XH »after drying. 《Amount 72-, Rate 75 · 35ί, Bf 1 0.60, mp. 185- ΐδ 1 «^-i.2 e (c -d50, Methanol)
元素分折 CgaHwOs 1 として  Elemental analysis CgaHwOs 1
it M: c.55.86; Η,6.93; Κ,Π.33  it M: c.55.86; Η, 6.93; Κ, Π.33
実験鍾: C,55.58J H.S.74I ir,1，，12  Experimental Zong: C, 55.58J H.S.74I ir, 1,, 12
( 龎 ) Z - Arg(Piae) - Ala - 8er- Gin - OBu* の製造  (龎) Manufacture of Z-Arg (Piae) -Ala-8er-Gin-OBu *
20 Z-Ala-Ser-Gla-OBu ^ をメタノー^^ ^ !) wi^ 灌解 し、 パラ ウム黑も Ii iC水素 中で した。 «ϋ«をろ去し、溶媒 を謇去し 7 残 «*<：、 Z-Apg(Pme)-0H.CHA 4.54 fから調製した Z-Arg(Pme)-0Hf HOB t 3 f とともに D Μ ϊ， 53 Wに灌解し 氷冷し Λ。 冷却下に D c c t, 3 ' 加え、 3 で4時》、 直 i¾で， 5時20 Z-Ala-Ser-Gla-OBu ^ was perfused with methanol ^^^!) Wi ^, and palladium was also in IiiC hydrogen. «Ϋ« was filtered off and, D together with Z-Arg (Pme) -0H f HOB t 3 f prepared from solvent謇去seven remaining «* <:, Z-Apg ( Pme) -0H.CHA 4.54 f灌 灌, irrigate with 53 W and cool on ice Λ. Add D cct, 3 'under cooling, 3 at 4 o'clock>, i¾ at 5 o'clock
*« 躧擾拌した。 D C Uをろ去し、溶纖も窗去し農 «« j 0St を加えゲ の沈戮 得、 ろ取した。 乾像後、 メタノー と Acost x^ t m し ?¾。 «t量 4,55- 率 75·5* , Sf1 57 * 重 Ρ· ! 30- 13 r, C*^ 5-2 l ( a · ,メ ノー * «躧 躧The DCU is removed by filtration, and the molten fiber is also removed from the window by adding «« j 0St. Sinking was obtained, and filtered. After the dry statue, Mehnot and Acost x ^ tm. «T amount 4,55- rate 75 · 5 *, Sf 1 57 * weight !! 30-13 r, C * ^ 5 -2 l (a
Ηβοθχχϊβ S · - HJJOとして  Ηβοθχχϊβ S ·-As HJJO
H-HtH: c,55.22 H,7.07; V, 12.88; S,3.M  H-HtH: c, 55.22 H, 7.07; V, 12.88; S, 3.M
^HH: c,5S.23} H,罄.93; ϊ,!2.54; 3,3.4d  ^ HH: c, 5S.23} H, 罄 .93; ϊ,! 2.54; 3,3.4d
( tV ) Z-Arg(Pme >-Arg( Pme )-Ala-Ser-Gln-OBut の製造  (tV) Production of Z-Arg (Pme> -Arg (Pme) -Ala-Ser-Gln-OBut
Z-Arg < Pme ) -Ala-Ser-Gln-OBu* 4.3 メ ノ - 400 溶解し、パ ジウム晨も 水素 中で し 7t。 ttH ろ去 し、溶媒 tr«去した残 ：、 Z-Arg(Pme)-OH-CHA 3.24 f £ j> L7 Z- Ar g ( Pme ) -OH HOBt L42-ととも 4CDHi 2(J3 W に溶解し永冷した。 冷却下 c c t.41 #を加え 0でで 4時 w、 で 20時閱攬拌した。 D C をろ去し、溶媒を «去し 残葺 ¾i Ac0St を え沈 « 得、 ろ取し Λ。 乾燥後、 メ ノー と Ac OEt よ 、： 截した。 R* 4 f ，収率 71.7 % ， Sf1 0.63 ,ap. 125- 130 , «^- 18.0 ( c一（ 40 ,メタノー A Z-Arg <Pme) -Ala-Ser-Gln-OBu * 4.3 Meno -400 Dissolved, and Pt was also dissolved in hydrogen and 7t. ttH Removed by filtration and solvent tr: Removed residue: Z-Arg (Pme) -OH-CHA 3.24 f £ j> L7 Z-Arg (Pme) -OH HOBt L42- and 4CDHi 2 (dissolved in J3 W Under cooling, add cc t.41 # and stir the mixture at 0 for 4 o'clock and for 20 o'clock.DC was removed by filtration, the solvent was removed, and the litter AcOSt was removed and the precipitate was obtained. Filtration I. After drying, cut the amenity and Ac OEt: R * 4 f, yield 71.7%, Sf 1 0.63, ap. 125-130, «^ -18.0 (c- (40, methanol A
元素分析 0l4 Hl2 s 2 ' Hja Oとして Elemental analysis 0l4 Hl2 s 2 'Hja O
計算值： C,54.9S; H,7.12ι irJ3.59;S,5.15  Calculation 值: C, 54.9S; H, 7.12ι irJ3.59; S, 5.15
¾IMt: c,54.S Η,β.92} ir,13.32?S,5.34  ¾IMt: c, 54.S Η, β.92} ir, 13.32? S, 5.34
( V ) Z-Arg ( Pme ) -Gly-OBut の製遍  (V) Z-Arg (Pme) -Gly-OBut
Z-Glj-OBut I 3.0 f tMeOE 50 とかし、 黒 tMIK として、水素気¾中、捩 |«尤した-敏媒を 别し、 I»液を滅圧濃趣し、 残 « tDH3P 23 OWi とかし 7te tれ i：、 Z-Arg (Ρ«β) -OH* CHA 20·β f ょ^謂製し Z— Arg(Pme) OS, HOSt 5.4 f えて氷冷し、 D C C 8· 2 - ¾Utて 48時園か t «7 。 折 ffiし 2(3ϋ を泸瑰し、濃 ½、 AcOSt 50 とかした。 Aeost Jt4 i if&HCOs 水， t 0 ίίタ -ン讀水で »淨後、 ir so4 で«纖し ο»« 後、石論ペン ン ίίθΛて ¾耀として，取し Λ。 《量 ί ¾骞 f (S«.罄 ji )。 重 P. 71 T ix:, -^ + aa* c c-αι , DMf ) , if1 2 Z-Glj-OBut I 3.0 f tMeOE 50, black tMIK, in a hydrogen atmosphere, screw | 尤 尤-敏 敏 敏, I 液 liquid decompressed, remaining t tDH3P 23 OWi comb 7t e t-re i: Z-Arg (Ρ «β) -OH * CHA 20 · β f so-called Z-Arg (Pme) OS, HOSt 5.4 f 48 o'clock or t «7. Folding ffi 2 (3ϋ The roses were rose, concentrated, and AcOSt 50. A e ost Jt4 i if & HCOs water, t 0 ίί data - in your application讀水»Kiyoshigo, and«纖in the ir so 4 ο »« after, as ¾耀Te stone theory pen down ίίθΛ, were collected by Λ. 《Amount ί ¾ 骞 f (S «. 罄 ji). Heavy P. 71 T ix :,-^ + aa * c c-αι, DMf), if 1 2
元素分析
Figure imgf000019_0001
O? Ss 8 として Elemental analysis
Figure imgf000019_0001
O? S s 8
計算像： c, 58, 33; H,r. t8? if, 11.33; 3,5.0· Calculation image: c, 58, 33; H, r. T8? If, 11.33; 3,5.0
: c,5a.42i H,7.58J ir, 10.951 3,4.34  : c, 5a.42i H, 7.58J ir, 10.951 3,4.34
( Vf ) Z-Phe-Ars ( Pme ) -(Jly-OBu* の製ll  (Vf) Z-Phe-Ars (Pme)-(made by Jly-OBu *
Z-Ar ( Pme →17-0 ν^ 1 αθ f ^MeOH 500 中、 接 元したのち、 D HSV30 OWK:転港した。 titlC Z-Phe-OH 4.72#. HOBt 2·35 f ; SPえて永冷し、 D c C 3·53 を加えて、 1 5 時 l¾ かきまぜた。 折出し J D C ϋ¾泸剁し、泸液を馕纏後、農耆物 AcOEt 400 W*Cとかし 7 。AcOEt 層は、 4 JtFaHG03 水， 1 3 ク ン 酸水で洗滲し、 S04 で乾燥し Λ3 濃練後、 ェ-テ も加えて鎵 として ^取し、 MeOH -ェ-テ よ 再 itt ftし 7t。 収量 1 d5 f Z-Ar (Pme → 17 -0 ν ^ 1 αθ f ^ MeOH After contacting in 500, D HSV30 OWK: Transferred. TitlC Z-Phe-OH 4.72 # .HOBt 2.35 f; SP Cooled forever, added DcC3.53, and stirred at 15 o'clock. Spread out JDC, combined the solution, and then crushed the asbestos-bearing material AcOEt 400 W * C 7. The AcOEt layer was , 4 JtFaHG0 3 water, washed滲1 3 click phosphate solution, dried and lambda 3 Conegliano in S0 4, E - Te also to the鎵^ preparative addition, MeOH - E - Te by re itt ft 7t Yield 1 d5 f
( 8¾35* )。 mp. 101- 1 0 3 , ς«¾8- 39( ο-α9, D Μ F ) , Hf1 0.84 (8¾35 *). . mp 101- 1 0 3, ς «¾ 8 - 3 9 (ο-α9, D Μ F), Hf 1 0.84
元素分析 C ΗΔ408 If 6 S として Elemental analysis C Η Δ4 0 8 As 6 S
11*算值： c, 8 87; »,10.79i s,4.12  11 * Calculation: c, 8 87; », 10.79is, 4.12
突駄鐘： c, 61.8 1,6.56; VJ0.S3I s,4.14  Bad Bell: c, 61.8 1,6.56; VJ0.S3Is, 4.14
( VI > Z-Leu-Phe-Arg(Pme)- i7-0But の製造  (VI> Manufacture of Z-Leu-Phe-Arg (Pme) -i7-0But
Z-Phe-Arg ( Pae )-(Jl7-0B t 5.5 f ^XeOH 30 中、癀  Z-Phe-Arg (Pae)-(Jl7-0B t 5.5 f ^ XeOH 30 medium, 癀
し のち、 2>ΜΪ 3 G 0WiC«i»した。 れ^、 Z-Leu-OH Then, 2> ΜΪ 3G 0WiC «i». Re ^, Z-Leu-OH
DCHA 31 よ^钃製し 7t Z— L«u— OH, E09B 1.4 T f ¾3n "C^ 7t Z—L «u—OH, E09B 1.4 T f ¾3n" C ^
OMPI 1 冷し、 ： D C C 1，蓦8- 加走て48時購か まぜ7¾：。 拆¾5した23( 11¾ 泸瑰し、濃 IHfe、 AcOSt 38 とかし oAcOSt 層は、 4OMPI 1 Cool,: DCC 1, 蓦 8- 23 (11 泸 roses, dark IHfe, AcOSt 38) oAcOSt layer is 4
' »aHC03 水， t 0 Jlタ Iン讀水で！ ¾淨し、 **jsS04 で «*し^。 濃 t.ェ : ¾えて粉末として泸取した。 収量 I2f ( 98.3U) δ »p. 17 t - 1 T ¾ : , C «
Figure imgf000020_0001
- t 5.5° ( c -0.9 , BM? ) , f1 &β 4 ' »AHC0 3 water, t 0 Jl data I emissions at讀水! ¾ ¾ * ** jsS04 4 «* and ^. Concentration t. Yield I2f (98.3U) δ »p. 17 t-1 T ¾:, C«
Figure imgf000020_0001
-t 5.5 ° (c -0.9, BM?), f 1 & β 4
元素分析 σ βΗ6δ° » H7 S Elemental analysis σ βΗ6δ ° » H 7 S
計算僮： c, 81.93; 3,7.34; V, 10.991 3,3.58  Computing child: c, 81.93; 3,7.34; V, 10.991 3,3.58
夷験僮： c,S2.fl2i Η,7.37ι ,1，.08; 3,3.59 Yi Zhen: c, S2.fl2i Η, 7.37ι, 1, .08; 3,3.59
0 ( VS ) Boc-Met-Le -Plie-Arg(Pae)-Sly-OBut の Slfi 0 (VS) Slfi of Boc-Met-Le -Plie-Arg (Pae) -Sly-OBu t
Z-Le -?lie-Arg<Pme)-Gl3r-0But &0 f MeOS 2 (J (J *、 捩) ¾¾¾したのち、 ΒΜΪ 15 に転濠した-、 れに、 Boc-Met -0H-DCHA 3L0 f よ 髑製し 7tBo<s— Met— 0Η， ΗΟίΒ 1.39 f 加えて氷冷し、 ： D C C t.50 を加えて 15時間かきま《ft3 折 ffi し5 TtD C TJを^別し、瀵 »後、 n - BocQS— AcOEtにとかし、 t 0 ク ェン蒙 で洗浄し、 夏 ajjSC^ で乾燥した 3 濃縮後、 エ-尹 を加えて 輸 Aとして^取し Λ。 収量 δ·2 f ( 93J it )。 mp. 192 - 195 , C « - 1 S.7° ( c - I.0 , D H P ) , Rf 1 0.64 Z-Le-? Lie-Arg <Pme) -Gl3r-0Bu t & 0 f MeOS 2 (J (J *, screw) ¾¾¾, then 転 15)-Bore, Boc-Met-0H-DCHA 3L0 f sword made 7tBo <s—Met—0Η, ΗΟίΒ1.39 f and ice-cooled, add DCC t.50 and stir for 15 hours << ft 3 fold and separate 5 TtD C TJ ^ after瀵», n - BocQS- dissolved in AcOEt, t 0 click washed with Meng e down, summer ajjSC ^ 3 was concentrated and dried over, d -. were collected Yoon as import a plus ^ lambda yield [delta] · 2 f (93J it) mp. 192-195, C «-1 S.7 ° (c-I.0, DHP), Rf 1 0.64
元素分析 C^Hマ β0102f8 S2 としてElemental analysis as C ^ H β 0 10 2f 8 S 2
0 It-Sit: c,58.27i H,7.74i irj l.33? 3,6.48 0 It-Sit: c, 58.27i H, 7.74i irj l.33? 3,6.48
夷義钹： c, 38.48; Η,7.79Ϊ H,H.34i 3,5.98  Yi Yi: c, 38.48; Η, 7.797.7 H, H.34i 3,5.98
( ΙΧ ) Bo c-ain-lle t-Leu-Phe-Ar ( Pme ) -dlj-QEの製造  (ΙΧ) Production of Bo c-ain-lle t-Leu-Phe-Ar (Pme) -dlj-QE
B o c - e t-Le -Phe -Ar ( Pme ) -Glj-O Βαί 5.5 f ¾ T F A 5 JW¾iBえ、 室 Sで 10分閱撅 ま のち濱趣し、 エーテ ; ¾え« て泸取し し Λ。 れ 、 Dili 5 とかして氷冷し、 ！T SA 1.8 < 加えた。 itti Boc-aia-OH t.85 f , HOHB 1.49 f , DCC t.90 £ 讕 »(し 3t Boc— (Jla— 0JT3 加え、 I 5 m^t 'ま 。濃 Hf AcOH ί:加え、 OEt 加えて ¾«として 取し Λ·Boc-et-Le-Phe-Ar (Pme) -Glj-O Βαί 5.5 f ¾ TFA 5 JW¾iB, room S for 10 minutes. Λ. Dili 5 and ice-cooled! T SA 1.8 <added. itti Boc-aia-OH t.85 f, HOHB 1.49 f, DCC t.90 £ 讕 »(3t Boc— (Jla— 0JT3 added, I 5 m ^ t '. Concentrated Hf AcOH ί: added, OEt added Take ¾ «as Λ
«量 5·3 , ( S λ-8¾ί )。 邋 P. f 81一 t β 3 （分解） ，〔* «Amount 5.3 · (S λ-8¾ί).邋 P.f 81-t β 3 (decomposition), [*
- 19.8° ( c - t, 0 , D M 1· ) , 2f 1 0.30 -19.8 ° (c-t, 0, DM 1), 2f 1 0.30
元秦分折 C48 H?6012110 S2 として Former Hata split C48 H? 6012110 S 2
計算镇： c,5S.45; H，7.22; ir, 13.20$ s,6.04  Calculation 镇: c, 5S.45; H, 7.22; ir, 13.20 $ s, 6.04
突黢值： c, 55.39! H,7.17ϊ H, 13.34} S,S.20  Thrust: c, 55.39! H, 7.17ϊ H, 13.34} S, S.20
( X ) Z - Ser - lfHHH-Boc の製造  (X) Z-Production of Ser-lfHHH-Boc
Z-Ser-OH I 0.0 / , t -ブチ 力 バゼ一ト |«2 <Γ 5Μ3?  Z-Ser-OH I 0.0 /, t -buty force base | «2 <Γ 5Μ3?
1 53 Wにとかして永冷し、 201ΓΒ 8·0 ί , D c C 9.3 f t加えて  1 53 W, cool forever, add 201ΓΒ 8.0ΓΒ, D c C 9.3 f t
1 5時閱かきまぜた 3 析 ffiし TtDC Uを泸別し、濃趣後、 AcOBt に転 溶した。 AcOEt層は、 4 % KaHC03 水， 1 0 <クェン酸水で洗滲し、 Ha2 SO 4 で乾爆した。濃箱後、 エーテ を加えて結晶として炉取し 収量 7.3, ( 50·" ) mp. 95 - 98 X: , « ^' - 6.2The mixture was stirred at 5:00 o'clock for 3 days, and TtD U was separated. After being concentrated, it was dissolved into AcOBt. AcOEt layer, 4% KaHC0 3 water and washing滲1 0 <Kuen acid water was Inui爆with Ha 2 SO 4. After the thick box, add Ethe and remove it as a crystal. Yield 7.3, (50 ") mp. 95-98 X:,« ^ '-6.2
( 0 -0.8 , 2¥? ) , 3^ as 2 ( 0 -0.8, 2 ¥?), 3 ^ as 2
元素分析 C16H2306 H3 として As Elemental Analysis C 16 H 23 0 6 H 3
計算值： c, 54.38; H,S.56; T, H.89  Calculation 值: c, 54.38; H, S.56; T, H.89
夷 ft值： c, 54.77; Η,β.88$ », 12.23  Yi ft 值: c, 54.77; Η, β.88 $ », 12.23
( Xi ) Z-Ar ( Ρ»β ) -Ser-HHJfH-Bo c の製造  Production of (Xi) Z-Ar (Ρ »β) -Ser-HHJfH-Bo c
Z-Ser-NHKH-Boc 3.9 # ^MeOE 300 中揍) !¾¾元したのち、 DMP 5 瀋し 7 ¾ これに、 Z-Arg (Pae) -OH «CHA 2f ょ 詞製し 2- でさ（？31«)-0^, HOBt ί, 5-を加えて永 し、 DC C 13 , 加えて 1 5時閱かきまぜた， 圻 fflし 7 DC U ^别し、 濃) l H AoOBt ) とかした。 AcOSt層は、 4 % liaHC03 水，， 0 Z-Ser-NHKH-Boc 3.9 # ^ MeOE 300 middle)! ¾¾After the DMP 5 瀋 7 ¾ Z-Arg (Pae) -OH «CHA 2f lyric 2- ? 31 «)-0 ^, add HOBt ί, 5-, add DC C 13, add 15 minutes, stir, qui ffl, then 7 DC U ^ 别, dark) l H AoOBt) . AcOSt layer, 4% liaHC0 3 water ,, 0
OMPI —80— OMPI —80—
クェン酸水で し、 Ka2 S04で乾像した。濃縮後ェ -チ を加えて、 沈 38として^取する。 7.45 ( 93.75* )。 ap.100-tOir, 〔β〕^一 0.3°( c - 1.2 , D ? ) , Bf 1 0.51 And at Kuen acid solution was Inuizo with Ka 2 S0 4. After concentrating, add ech and remove as precipitate 38. 7.45 (93.75 *). ap.100-tOir, [β] ^-0.3 ° (c-1.2, D?), Bf 1 0.51
元素分析 G33S49Q9 7 S として As elemental analysis G 33 S 49 Q 9 7 S
f »値： C，55.0S; Hr6.86; 27.13.62； 3,4.48 f »value: C, 55.0S; H r 6.86; 27.13.62; 3,4.48
夷 IHft: c,55.49; H，8.34r ir,13.t4; 3,3.88  Yi IHft: c, 55.49; H, 8.34r ir, 13.t4; 3,3.88
( I ) Z-Ly 8 ( Ht r ) -Arg ( Pme ) -8 ΘΓ-ΗΗ2ΤΗ-Β o c O t  (I) Z-Ly 8 (Ht r) -Arg (Pme) -8 ΘΓ-ΗΗ2ΤΗ-Β o c O t
Z-Arg<Pme )-Ser-KHJiH-Boc Z.9 f trMeOH 30 OrfiCfcかし、 據 M¾尤し 7 のち、 DM? 50«^に¾»した。 とれに、 Z-Lys(Mtr) -OH · D C H A 3>4 ,ょ 調襲し^2-14ァ3(11；1")-03, HOBt Z-Arg <Pme) -Ser-KHJiH-Boc Z.9 f trMeOH 30 OrfiCfc, but based on M¾7, then DM? 50 «^ ¾». To take, Z-Lys (Mtr) -OH · DCHA 3> 4, and Yo tone prone ^ 2-1 4 § 3 (11; 1 ") - 03, HOBt
0.38^ *加えて永冷し、 D c c 3 #を加えて 10時 {¾かきまぜ た 3 圻出 た D C ϋを泸別し、 澳縦、 AcOEt を加えて粉末として泸 取し、 MeOH-AcOStよ 再結 した。 収量 5· ί / ( 93.4 * ) Add 0.38 ^ * and cool forever, add Dcc3 #, and at 10 o'clock, separate the 3た た ¾ ま 圻 圻 圻 、 、 、 澳 澳 加 え 澳 澳 澳Reunited. Yield 5 · / (93.4 *)
mp. 1 03 - ϊ 05 X , C « ¾ - 7.2° ( c - 0.8 , D 11 F > , Bf 1 0.S 7 mp. 103-ϊ 05 X, C «¾-7.2 ° (c-0.8, D 11 F>, Bf 10 .S 7
元素分折
Figure imgf000022_0001
O iis S;j として Elemental analysis
Figure imgf000022_0001
As O iis S; j
計募值： c,55.53; H,6.94; lfj l .89; s,6.05  Total recruitment: c, 55.53; H, 6.94; lfj l.89; s, 6.05
実験僮： c, 55.70; H,7.15J , H .S0; S,5.S3  Experiments: c, 55.70; H, 7.15J, H .S0; S, 5.S3
(XI) Z-Ar ( Pme ) -LysCMtr)一 Arg ( ae )一 Ser - KH!TH-Socの製 造  (XI) Z-Ar (Pme) -LysCMtr)-Arg (ae)-Ser-KH! TH-Soc
Z-Lj a ( M t r ) - Arg ( Pme ) - S β r-HHITH-Bo c 4.8 f ^MeOH  Z-Lja (Mtr)-Arg (Pme)-Sβr-HHITH-Bo c 4.8 f ^ MeOH
30 とかし、 接驗¾ したのち、 D F 73 Wに転溶した。 れに、 Z-Arg ( Pme )-OH - CHA 8 f よ]?靄製し 7 Z-Arg (： Pae ) - OH, HOBt 0· 74 f えて永冷し、 ： D C C t.， 2 - 加えて t 5 時開かきまぜ 。 析出した D C ϋを 别し ¾鑲後、 AcOS にとかし、 一 SI— After performing the experiment, the solution was transferred to DF 73W. In addition, Z-Arg (Pme) -OH-CHA 8 f] ?? Make 7-Zg-Arg (: Pae) -OH, HOBt 0 · 74 f and keep it cool: DCC t., 2-Add Open at 5 o'clock. After removing the deposited DC, it is melted into AcOS, One SI—
l AcO t 層を 4J*i aco3 水， 10 J{ク：ン酸水で *摩し、 lf*jsS04 で乾燥し Λ。 濃縮後、 X-テ t加えて ¾纖として^取し、 ΙΙβΟΗ -ι ' -チ よ 再沈纖し； e IR量 i羃- ( 8¾8Ji )。 mp.13S-， 37 ， Γ a： ϊ2 '— ie*( c « ， D璽 I· ) , Bf 1 0.58 l AcO t layer 4J * i aco 3 water, 10 J {click: in phosphate water * machine, dried lf * jsS0 4 Λ. After concentrating, add X-te t and remove as ¾ fiber, and re-precipitate ΙΙβΟΗ-ι'--; e IR amount i power-(8¾8Ji). mp.13S-, 37, Γ a: ϊ 2 '— ie * (c «, D seal I ·), Bf 1 0.58
5 元素分析
Figure imgf000023_0001
として 5 Elemental analysis
Figure imgf000023_0001
As
計算值： C,55.5S; ϊ,ί2.7β; 3,6.74  Calculation 值: C, 55.5S; ϊ, ί2.7β; 3,6.74
実 »僮： c, 55.34; Η,7.07ί 12.50; 3,6.59  In fact »ancestor: c, 55.34; Η, 7.07ί 12.50; 3,6.59
( XiV ) Z-L73 ( Mtr )一 Arg ( Pme ) -Ly 3 ( Mtr ) -Arg ( e ) - Ser— HHITH-Boc の製造 (XiV) Z-L73 (Mtr) Arg (Pme) -Ly 3 (Mtr) -Arg (e)-Ser— Production of HHITH-Boc
0 Z-Arg ( me ) -L S ( Mt r ) -Arg ( Pae ) -8e r-H H»H-Bo c 3.0 I ^MeOH 15 にとかし、接触 したのち、 DJif SOWに 転溶し 。 これに、 Z-LysCMtD-OH'DCHA 1· 54 -よ 調 し？ t Z-Lys(Mtr) - OS, HOBt (X 3， fを加えて氷冷し、 D C C 0· 57 , 加えて 15時間かきまぜ Λ3 折 し 7 D C Uを泸獼し、濃縮後、5 AcOEt にとかし、 AcOEt層 45t a3C¾水， 10 ^ク ン酸水で 洗浄し、 》&。304で乾像し7¾：。 濃縮後、 ェ-チ 加えて結 として^ 取し、 AcOilt よ 再結晶し 。 収： t2»70 ( 72.8* ) mp. t 23 - 125¾ ,〔《 8 - 5·3° ( c - 1. ί , DHF ) , Bfi Λ570 Z-Arg (me) -LS (Mtr) -Arg (Pae) -8erHH »H-Boc 3.0 I Dissolved in ^ MeOH 15 and transferred to DJif SOW after contact. And Z-LysCMtD-OH'DCHA 1.54? t Z-Lys (Mtr)-OS, HOBt (X3, f, add ice, cool with DCC 0 · 57, add 15 hours, 折3 fold, add 7 DCU, concentrate, 5AcOEt dissolved, AcOEt layer 45t A3C¾ water, 10 ^ washed with click phosphate solution, "after & .30 4 Inuizo and in 7¾ :. concentrated, E - ^ were collected by Chi added as sintering, the recrystallized by AcOilt. yield:. t2 »70 (72.8 * ) mp t 23 - 125¾, [" 8 - 5 · 3 ° ( c - 1. ί, DHF), Bfi Λ57
0 元素分柝
Figure imgf000023_0002
S4 として 0 elements
Figure imgf000023_0002
As S 4
c,55.73; Η,7.β2; H J 1.89} 3,7.26  c, 55.73; Η, 7.β2; H J 1.89} 3,7.26
教德： c,53.83; H, 7.301 »,lt.72i s,7.08  Teacher: c, 53.83; H, 7.301 », lt.72is, 7.08
( XV ) Bo c - Gin - He t -！ ^eu - Kie - Aarg ( Pae ) - (Jlァー Arg ( Pae》一 Arg(Pae)-Ala-Sep-Gln-OBu* の製遣 (XV) Bo c-Gin-Het-! ^ eu-Kie-Aarg (Pae)-(Jl Arg (Pae)-Arg (Pae) -Ala-Sep-Gln-OBu *
δ Z-Arg(Pme )-Arg(Pme )-Ala-3er-Qln-0But 0 |r δ Z-Arg (Pme) -Arg (Pme) -Ala-3er-Qln-0Bu t 0 | r
( OMPI 一"一(OMPI One "one
OS t 09aiiCと^し、擦 MA^し のち DMf 箱溶し OS t 09aiiC, rub MA ^, then melt DMf box
Cill 、 oe-ein- et-Le -Phe-Arg< Pme )-01y-OH Cill, oe-ein- et-Le -Phe-Arg <Pme) -01y-OH
' &β 5f , HOB 135，*mm し、 se c 2 I え て 28時麵か耄ま 。 if D cutis環し、 k、 ·ΟΗ ¾ jBJfC«蒙として 3P取し β WlLSilf (骞 7·4!Ι〉。 '& β 5f, HOB 135, * mm, then Sec 2 I 28 hours or senile. if D cutis to ring, k, · ΟΗ ¾ jBJfC «taken 3P as Mengniu to β WlLSilf (骞7 · 4! Ι>.
ap. 2 ί ·一 2， 7で（分解） ， 〔 « - f ，♦ 8· < c - I. § , D r ) , af1 & 43 ap. 2 ί · 1 2 and 7 (decomposition), [«-f, ♦ 8 · <c-I. §, Dr), af 1 & 43
尤素分 If C982X5 023夏 22 S4 として  Likelihood If C982X5 023 Summer 22 S4
計算儘： s,7.27; 1,14.42! 8,1.80  As calculated: s, 7.27; 1,14.42! 8,1.80
夷 IHt: c,54.81! H.7.S3! V, 14.23) s,5.T9  IHt: c, 54.81! H.7.S3! V, 14.23) s, 5.T9
( XVf ) H-Lys-Arg-Lye-Arg-Se r一 <Jla Met -I»e -Phe-Ar g— Gly-Arg-Arg-Ala-Ser-ffln-OHの製遗  (XVf) H-Lys-Arg-Lye-Arg-Se r <Jla Met -I »e -Phe-Ar g—Preparation of Gly-Arg-Arg-Ala-Ser-ffln-OH
Boc-ain-Het-Le -Phe-Arg<Pme)-Qly-Arg<Pme)-Arg ( Pae ) -AlA-Ser-Sln-OBut IQ fK T A 10 加え ¾ 室 濾で 5 β分鳙摄 ち、濃纏し、 エーテ ま加えて沈戮として尹 取し、乾燥し 3 Chi Boc-ain-Het-Le -Phe -Arg <Pme) -Qly-Arg <Pme) -Arg (Pae) -AlA-Ser-Sln-OBut IQ fK TA 10 plus 5 beta fraction with ¾ chamber filtration鳙摄, Thicken, Ate, and take Yoon as a slaughter, and dry 3
—方、 Z-Ljs ( Htp ) -Ar ( Pme )-Lys(Mtr)-Arg(Pae)-Ser -IHMH-Boc ( S Z fKT I 10 : ¾えて濠置で t 0分間摄 乡重ぜ; tのち、濃縮し、 - -チ 加えて沈灘として尹取し聰繳し 。 とれ frDHr f とかし、 ドライアイスーァセトシで J 却後、  —Z-Ljs (Htp) -Ar (Pme) -Lys (Mtr) -Arg (Pae) -Ser -IHMH-Boc (SZ fKT I 10: Put in the moat for t 0 min. After that, it was concentrated, and--j was added.
12霣 HCiZJ Olt 0»2 Srf ,重磯 ¾ 、ノアミ （ 8·3 Τ5«<)を ίθえ、 - 2 - 23でで 2 S分画像 ラジンテスト ：讓性〉 β eれ *再び Fライアイス一ア トンで ¾舞し、 Ϊ ΪΑ S.25iffr DJt て中 し Λ· ァ ン成分 tDXl«4&« cとかし、永？！し TSA S.1I 加え 7tのち、先 K属製し Λァ ド灌液 t加えて、 4でで 72時 » 12霣HCiZJ Olt 0 »2 Srf, heavy surf ¾, <example ίθ the, - 2 - 23 2 S content of the image in at Rajintesuto: Yuzurusei Noami (8 · 3 Τ5«)> β e Re * again F dry ice one Aト ン 、.. 成分 iff 成分 DJ S.25iffr DJt ! 7 T after adding TSA S.1I, then add pad irrigation t
OMPI きまぜ 7 。反応 ¾¾、希酵酸水 * そそぎ、 折 ffiし 7 ゲ 泸取し、含水OMPI Mix 7. Reaction ¾¾, diluted enzymatic acid * Pour, fold and remove 7 pieces of water
CH3 cirで洗 し 。 ft* !·40 f (き 1. S Ji〉 ， Bfi (139。 の ' ^ > 00 0. ! 5 n 3 A^ tr T ϊ A -チオア-、入- ーメチ ス プィド（ 8： ， ： 1 ) β OWiCとかし、 室量で 2時 M摄 まぜ のち、 Aeov^ 40 加えて濃縮し、 エーチ 加えて沈灘とし て^取し、乾燥し 。 れ 少量の， * AcOH ICとかしセプアデグタ ヌ (J一 2 Sのカラム（ 2 X 120«〉 付し； t。 1， Ac OH で湊 ίϋし 1 β 0W - 2 S の分画 集めて凍糖乾燥し、 つ でアンバーラ イ ト IB A-4 ί 0 (酴麵）の力，ム 通し、庫港«燥し Λ。 tit* さら : rs∑—！ ·3— 4 t 0の力，ム （ 2.1 7.5 «+ 2.14^30 «)を用 る 3 PLCで精製し、 目的物を得た。 収量 45， Wash with CH 3 cir. ft *! · 40 f (ki 1. S Ji〉, Bfi (139. '^> 00 0.! 5 n 3 A ^ tr T ϊ A -thioa-, input-method speed (8:,: 1 ) Combine β OWiC, mix at room temperature at 2 o'clock, add Aeov ^ 40, concentrate, add ech, remove as a sunken sea, dry, and dry a small amount of * AcOH IC and a small amount of * AcOH IC. Attached to 2 S column (2 X 120 «>; t. 1, min with AcOH 1 β 0W-2 S fraction collected, dried with frozen sugar, and then amberlite IB A-4 ί 0 (酴 麵) power, through, dry the storage port. Tit tit * Further: rs∑—! · 3— 4 t 0 force, 3 PLC using force (2.1 7.5 «+ 2.14 ^ 30«) The desired product was obtained by purification with
C « ^ - 45.9 ( c - α 7 , 0.1 W AcOH)  C «^-45.9 (c-α 7, 0.1 W AcOH)
Bf 4 (cellulose) 0.20 Bf 4 (cellulose) 0.20
アミノ黢分析：！《ァ3 1.71, Arg 4.71, Ser 1.69, (Jl  Amino II analysis! 《A3 1.71, Arg 4.71, Ser 1.69, (Jl
2.12, Gly f .00, Ala 1.03, Met 0.32, Leu 1.30, Piie 1.08 (平均回 率 77* )  2.12, Gly f .00, Ala 1.03, Met 0.32, Leu 1.30, Piie 1.08 (Average frequency 77 *)
夷 2  Ii 2
キヤリヤ-蛋白とポリぺブチド複合体の合成  Synthesis of Carrier-Protein and Polypeptide Complex
実！！^ M (XVI)で得 ¾ リペプチドとサイ グ σプリン（以" FT(J ) との結会を、 ダットプレンドらの方法 準じて行 つ 7 (サイエンス ， ， 44卷， ， 334買， 1 364年）。 揮ち、 当該ポ ペプチド 2· S， ¾Τ(ϊ3.Τ 3 と真合し、 2· /の 50 m Mの 7才スフ-一トバグプア一 を加え、氷水中でよく 捧し Λ：。 2：れ カ ポジイミ F壤酸壤 3 (14， ¾蒸窗水 200^ IC瀋かし Λものを 1漉^ つく Uと加え 3 後、 3 時調永水中で握袢し *がら反 ¾させ Λ3 反応後、 黧 «水で透拆 3fe分 : Real! ! ^ M (XVI) ¾ Repeptide and Sig σ purine (hereinafter referred to as FT (J)) are formed according to the method of Datplend et al. 7 (Science,, 44 vol., 334 purchase, 1 364 2) S, ¾Τ (matched with ϊ3.Τ3, add 2 // 50 mM 7-year-old suttobagpoor, and devote well in ice water Λ: 2: Repo Posiimi F soil acid 3 (14, ¾ 蒸 Window water 200 ^ IC Λ し Λ 1 漉 1 1 1 1 加 え 加 え 加 え 加 え 加 え 3 3 3) After 反 応3 reactions, «« dissolve in water for 3fe minutes:
( ΟΜΡΙ 行 * 、凍 »乾燥 行 って蛋白複合体 «7， 得 。 (ΟΜΡΙ Row *, freeze »dry go to protein complex« 7, get.
実旗 Real flag
ネ の  Of
"^ " 用|«»の調農 For "^" | «»
S I A用 ϋ康の钃軀は: &用らの方法（ジャーナ ォブ バイオケ スト —，第 73卷， 233買， ！ 37 I年） Ο方法 IC準
Figure imgf000026_0001
For SIA, please use the following method: Journal & Bioquest —, Vol. 73, 233,! 37 I
Figure imgf000026_0001
(i) ポ 3ぺブチドへの レイ ミ ド基の導入 (i) Introduction of amide group to 3-butide
夷饑例！ で得 ボリべブチド（ 350 aiftoiee)t1 Wの  A case of hunger! Bolibebutide (350 aiftoiee) t1 W
I 00重 Kフォスプ - トバップア- pH 6.8 IC潘解し、 夏- (4一  I 00 heavy K fosp-tobapua-pH 6.8 IC
^ボキ タ τ»へ年 j メチ ）マレイミドの ir一 tド キ ^サタ - ミ ドエス尹 585声 g ( 1.75 ^aoles>070 μξの！T,Jf -ジメチ ^タ -マミド濬液OBえ真会し、 30 で 30分《持して反応後、セプ アデプクス 一 25力，ムで分画 ¾行まいマレイミ 基の導入され ボ ペプチド分函 t 85n molesを得た。  ^ Bokuta τ »to j j) Maleimide's ir one t ^ ^ Sata-Midoes Yoon 585 voice g (1.75 ^ aoles> 070 μξ! T, Jf-Dimeti ^ Ta-Mamido Jun liquid OB Eshinkai Then, the reaction was carried out for 30 minutes at 30 minutes, and fractionation was performed using Sepadex, a 25-force reactor, and the maleimi group was introduced to obtain a nucleopeptide group t85n moles.
m マレイミド 入ポリペプチドと - Dガ，タ ト ダ -ゼとの 合 ¾ «3H)で得 マレイミト'基導入 リぺブチド， 8.5 nmolee と fi —ガラタ ト ダ-ゼ ISnaoles も 合し、 4¾で 1 8時 反 SS後、 412.5 n moles の ーメ カブトエ ノー で反 ¾¾淨止さ ^ ita -： D -ガ，タ ト ダーゼと結合し 3tポリペプチドは、セファ- ース 8 ラムで分函 ¾行¾ 、以下の実 した。 m Incorporation of maleimide-introduced polypeptide with -D-ga, tatodase 得 obtained with «3H) Maleimito 'group-introduced lipid, 8.5 nmolee and fi-galatatodase ISnaoles combined, 4 1 At 8 o'clock, after anti-SS, anti-purification was completed with 412.5 nmoles of rhinoceros beeteno. ^ It a- : bound to D-ga, tatidase, and 3t polypeptide was separated by 8 rams on Sepharose. The following was performed.
夷^ 14  Yi ^ 14
S I▲法  S I ▲ method
笑 »«2で得 ¾白複合体で免 ¾したマウス血清ある はハイブ 9 Ψ -マ上清申の It体活性の検 ffiは S I 法 用 て行まつ 7t (ィムノファ -マ 3- 一 ， Π春， 3頁， ， 378年）。す ¾わち、血清あ * は ハイブ 9 F一マ上清 ¾rパプファー▲ ( 20鳳滅 霣 *2HPO4 , 1 OOBH Lol »« 2 obtained in ¾ white a mouse serum was immune ¾ in complex hive 9 Ψ - test ffi of Ma on Kiyoshisaru It body activity line pine 7t Te for SI method (Imunofa - Ma 3 - A, Π Spring, p. 3, 378). In other words, serum * is a hive 9F single supernatant ¾r papfer ▲ (20 滅 滅 * 2 HPO 4 , 1 OOBH
OMPl 1 HaCl, H\% Va^ ^ f a M MgCla，pST.(}) で 5t ?し、 の Q Q iをと 、実建 «3で ベブチド »«体 t 00 ^^とよ ' く ¾会し、 24 で24^»5½ 4«：0 KSS^t. タサギ植マタス∑g3 OMPl 1 HaCl, H \% Va ^ ^ fa M MgCl a , pST. (}) 5t?, QQ i of 実 3, Bebtide at «3» «body t 00 ^^ , 24 in 24 ^ »5½ 4«: 0 KSS ^ t.
し ス 100 *加ぇて24で， 4時1«^½させ β. β反 ¾後、 ス 0·3Λグイ -ン 20 含んだバッファ-▲で よく洗净し、 4 -メチレンぺ プエリ - ー ガサタト ド 20 g f 500 (^ 加え、 37%：で 2時熥反応後、 l e OmM力- ネートバタプア- ( pH 10.5 )ま 3 W如えて反応 停止し、上清中の 螢光強度 光針で し （ェキサイチ- ^3ン 3 S 5na ,ェ' 0 ar 450 na )3 In the scan 100 * pressurized Ete 24, after β β anti-¾ to 4 pm 1 «^ ½, scan 0 · 3Λ Gui -. Down 20 inclusive buffer - ▲ well in the lavage, 4 - Mechirenpe Pueri - over After reaction for 2 hours at 20 gf 500 (^ 37%: 37%: Gasatatod), the reaction was stopped with le OmM force-Natebatapua- (pH 10.5) and 3 W, and the fluorescence intensity in the supernatant was measured with a light needle ( Excitation-^ 3 3 S 5na, '0 ar 450 na) 3
龍例 5  Dragon example 5
免 ft  Exempt ft
7~8遷令の3 113 (：^マゥス 8K各 に抗屎として夷 ¾|^12で 得 蛋白複合体の、 ンパタ量として、 40/¾ をフ σイ ン ドコンプ5 - アジュバントとよく潘合し、 皮下に接種した（初回兔¾) 3 初回 免¾の 1職、 鬨量の ¾脤¾：プロイ ン ドインコ ンプリート ァジ ·¾Λ< yト とよく S合し、 皮下に接種した（二次免疫） 3 さらに、その 2週後、 二 次免疫と同接の方法で三 免 行 *つ 3 三 免疫の 8日後、 マウス から血液を！^採取し、血清中の抗体僵 t突沲 4記載の B I A法で漏0 定した 3 2：のうち、 ¾ 抗体懾を示した r - 2マウスに対して 12 a«s の抗《を α 5 wの食¾水に港解させ %のを静»内に接種することによ 最終免疫を行 つた。各 ウスの抗体懾は表 1に示した 3 S 表 t 3 1 1 3 (: ^ 8% of each of the 8th to 8th years) obtained as an antibacterial substance from each of the 8K proteins, and 40 / ¾ as the amount of protein complex protein often used as a σ-indcomp 5-adjuvant Ban healed and inoculated subcutaneously (first immunity) 3 First immunity, one job, prize amount: Proceeding with complete indulge adj. (2nd immunization) 3 2 weeks later, 3 immunizations were performed in the same manner as the 2nd immunization. * 8 3 days after the immunization, blood was collected from the mice! ^ 4 3 was 0 boss leakage at BIA method described 2: among, ¾ antibody懾showed r - 2 mice against 12 a «s anti" the alpha 5 w of by Minatokai% phagocytic ¾ water static »rows by the last immunization to be inoculated into the ivy. antibody懾of each mouse is 3 S shown in Table 1 Table t
兔瘐し マサスの*ぺブチ F «体備  Rabbits Masas's * ぺ Buchi F «Body
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000028_0003
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000028_0003
1 ) 血淸の希！ ¾は i κι o o o  1) Noble blood! ¾ is i κι o o o
2)血清の希 は f XS 300  2) Serum dilution is fXS 300
3)血清の希釈は 1 /7800  3) Dilution of serum is 1/7800
4) -： ^ 4)-: ^
Figure imgf000028_0002
Figure imgf000028_0002
Β/Τ： (»合し 簾素活性/加えた全鏤素活性） χ 100 旄 夷 ¾«S記義の方法で免 ¾を行 、最終免疫の 3 B後の 2マウス から »臟を摘 ffiし、 スヂンレスメッシュで S¾, ^通し、 イーグ ズ， ミ -マム プセン ヤ メディタム（ HSM ) 浮遊させ、 »鼸箱 浮遊液 得え。績 に用 る義臟として、 B A L B Z Cマウス由来 ミエローマ ¾¾Ρ 3 - X 63. Ag 8.ul (P3U1 ) 用 W （；》レ ント トビプクス V マイク wバイオ β ー アンド ィムノ β  Β / Τ: (»合 素素 活性 / 全 加入 的 全部 鏤 素 活性) χ100 旄 ¾ 免 免 免 免 免 免 免 免 S S S» »» »» »» »» »臟 B B ffi, 通 し, ^ through a stainless steel mesh, e-Guz, Mi-Mupsenya meditamu (HSM) floating, »鼸 box to obtain a suspension. Myeloma derived from BALBZC mouse as a prosthesis used for performance ¾¾Ρ 3-X 63. W for use with Ag 8.ul (P3U1) (;) Lent Tobix V Microphone w Bio β-and Imimno β
0MPI 一，笫 β 1春， ί¾, 13 ττ 8年〉。 鑲 laa合は、 厚法（車イチヤー，0MPI 1, 笫 β1 spring, ί¾, 13 ττ 8 years>.鑲 laa is the thickness method (car Ichiya,
25βϋ§, 495X, 1973年）》C率じて行まっ 。 即ち、 25βϋ§, 495X, 1973)》 C That is,
および？ 3ひ t それぞれ血清 有し us Mで 3度 ¾ し、释纖 箱 ISと 数 i ifc* S： 1 まるよ 瀛合して、 808圜«で  and? 3 pcs each have serum 3 times with USM, 释 fiber box IS and number i ifc * S: 1
13分 «I速心 行 *つて 飽 沈《させ】)^ 上清 *充分に》去し 後、 沈慮を篯くほぐし、 45* リェチレングリ3— （？33 )8(100ー  13 minutes «I rushed in * saturate and let it settle down> ^ Supernatant * thoroughly> After removing it, loosen the sinking, 45 * ryetirenguri 3-(? 33) 8 (100-
( 3ッホライト社製）を 13 βί加え、 37 温水 »中で 7分鬮静置して 融合 *行 *つ 3 融合後細跑 2 Wの割会で M E Μを S加し、合計 J の] l£ Mt加え 後 β Q 0回転 1 S分膊遠心して上淸を除去し Add 13 βί (manufactured by 3ch Light Co., Ltd.), settle in 37 minutes with warm water »7 minutes to fuse * line * after 3 fusion, add ME で at 2 W split, and add J Μ After adding l £ Mt, β Q 0 rotation 1 S
の飆胞沈 103ί牛胎 !A澝を含 * ^る Β ΡΜ ΐ， β43メディ ゥム（ i? I ， S 40 -， 01? c s )に: ρ 3ひ ，が， "当 2 I05 倜に *るよう浮遊し、 24穴マ チデイシュ（ リンブ«社製）に，タ ! Of飆胞precipitation 103ί Ushi胎A澝-containing * ^ Ru Β ΡΜ ΐ, β43 media ©-time (i I, S 40 -, 01 cs??) To: ρ 3 shed, but, "This 2 I0 5倜* る よ う 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24
^ 1 wずつ 144ゥェ に播種した。 潘種後、釉胞を 37 χ:で 5 m  ^ The seeds were sown in 144 watts each at 1 watt. After Ban Ban, glaze at 37 m2: 5 m
ガスフラン器中培養した 3 24時間後、 ； S A T (ヒポキサンチン t 3 24 hours after incubation in Gasufuran vessel,; SAT (hypoxanthine t
t 0" * M ,ァミノプテリ ン 4 X 1 (Γ7 Μ ，チミジン，， δ X， 0Γ 3 Μ ) を んだ Ρ H H I 1640- 1 0 F C S培地 ( H A T¾地） ¾： 1ゥェ 当 iM Wずつ添加することによ]?、 H A T選択培養を開始した。 H A T 選択培養は、培養闥始 3 , 5 , 7日後に旧液を 1 W捨て あと、 1 Wの t 0 "* M, Aminoputeri down 4 X 1 (Γ 7 Μ, thymidine ,, δ X, 0Γ 3 Μ) I'm a Ρ HHI 1640- 1 0 FCS medium (HA T¾ land) ¾: 1 © E This iM W HAT selective cultivation was started, and the HAT selective cultivation was started after 3, 5, and 7 days of culture.
3 A T培地を添加することによ 継続した 3 ハイプリ ド-マの增殖は、 細 saa合後 10 ~ 14日で認められ、培養液が黄変したとき（約 ι χ 3 AT medium 3 High Priestess de I was continued to be added to -增殖of Ma, was observed at 10 to 14 days after the fine saa case, when the culture broth turned yellow (about ι χ
19δ )、 上清を»取し、 B I A法で、 抗体の有無を検衆した。 19 δ), was collected by »the supernatant, in the BIA method, was Kenshu the presence or absence of antibody.
のようにして、 ハイブリト '—マの增殖が鑼められ ， tゥ X の上 淸 fr繭べ と ろ、 1 、 τ2- 1 1 , r2- 100 )に強 植体 活性， 2タ- （ァ2 - S2 , r2-TT0 )に 活性 めた。  In this way, the hybrids' breeding of the horses was slowed down, and strong plant activity was observed on the top of the fr cocoon at t ゥ X, 1, τ2-11, r2-100), 2 2 -S2, r2-TT0).
7  7
O PI  O PI
：^—删 ノ — B8— : ^ — 删 ノ — B8—
ク — グ  Qu
抗体活 性 t承し 3t3タ χ （ r 2 - 1 1 , 12 , t 00 )©# ハイグ 3 ーマ 、囊雾*1¾法 よってク ダ 行ま^ t。扉ち ハイブ 9 F - -2價 ZeiiC*るよう B 3E 1 S 40 -20 rCSt 浮 31させ、 3 β穴マイク-プレート（ヌンク社製） タ - 当 (11  Antibody activity t 3t3 tag (r2-11, 12, t00) © # Higgeoma, 囊 雾 * 1¾ method. Door Hive 9 F--2 Price ZeiiC * B 3E 1 S 40 -20 rCSt Floating 31, 3 β-hole microphone-plate (made by Nunc)
住し 。分 ¾Wる磯、 7ィ-ダー續 として B ALBZCマウ スの煦濾箱齒 ¾ゥ 当 5 X t 0° 倒 tC*るよう加え: *:。 のように して、約 2通 HQ後に^ ϋ跑の增道^められるよう 1 上淸 採取 して、抗体の有無 実 倒 4 «の B I▲法で * ·< 。 その銹果、 r 2 - 1 Iでは t 3タ β—ン中 8タ β—ン， ァ 2一 では 54タ w 中 3タ t»-y, r2- l 00では 47タ β- 中 5タローン I H:体活性 認めた（表 2 )。  Dwelling. ¾W 磯 磯 、 7 7 7 7 7 7 7 7 7 A 7 7 A A A A A A A A. As described above, after about 2 copies of HQ, it is necessary to collect 1 upper sample so that it can be used in the course of ^^. The rust, r 3-1 I, t 3 ta β-in, 8 ta β-in, a 21-54 ta, w 3 t-y, r2-l00, 47 ta, β-5 talone IH: Body activity was observed (Table 2).
W1PO ^ 表 2 W1PO ^ Table 2
タ 化 れ ハイブ K  Hive K
マ 植ぺプチ ド ¾t体潘恤  Ma planting de ド t body ban shirt
5  Five
10 Ten
15 Fifteen
20
Figure imgf000031_0001
20
Figure imgf000031_0001
20  20
OMPI 1 *ノク β—ナ I T 31— 7に ^W"る I»会饞 OMPI 1 * Noku β-Na IT 31-7 IW
モノク -一ナ Λ ^体 I y夏一 r « 織僉龍は、 Λの方法" ' し ·扉ち、 ，サギ ¾tマタス is<J «体« ^さ - -ス壽 IK300/r i % -r2- 1 ！ , r2-ll , r2- I SO ¾ϋκο«ιぞ δ れ 2 - S種のク β一
Figure imgf000032_0001
S 0 ύ 4加え、 室&で Monoc -one ナ ^ body I y summer one r «僉 僉 、 方法 方法""""""· 扉 · ¾ ¾ t matas is <J« body «^---shou IK300 / ri % -r2 -1!, R2-ll, r2- I SO ¾ϋκο «ιzo δre 2-S species
Figure imgf000032_0001
S 0 ύ 4 plus, room & in
18-20時調反応させ 。反 後セ - -ス 生理食： »水でよく洗浄 し、 558び 《«の下記にょ1>得 ∑^- 加ぇ、 3一 4時 «反 SS させ 3 反応後、上淸 1:摊取し上淸中の I Ϊ * - r活性 tマイク-プレ -ト ¾用 箱》¾性 ( c P2 ) 9 -デンダ法で »¾し 3t» (アブ18-20 hour reaction. Anti rear cell - - scan physiological saline: washed well with »water, 558 beauty" «of the following Niño 1> obtained Σ ^ - pressurized tut, 3 one 4 o'clock« 3 after the reaction was anti-SS, on the cleansed 1:摊取I Ϊ *-r activity during 淸 マ イ ク t マ イ ク マ イ ク マ イ ク マ イ ク マ イ ク ¾ ¾ ¾ c c c (c P2) 9
10 ライド マイタ》バイオ β - , 1 β耱， t If U 8頁， ί 388年） 3 す«わち、 3 β穴マイク βブレ-ト（ス タ社製〉全て 穸- に 58 ftの MIMを A t、最初のゥ-ルに Ι ϊ夏サンブ # ¾ぇて, 連親的に 2信希釈を行 った 3 のよ にし 各ゥ iMC：、 wisiH 膣を20« 7 (73含有11 夏^：1 «^当芗4ズ 105 價 るよ 調龜し is 載 浮遊液 50 t L 1 , 37¾,炭酸ガスプラン港で 培養し 3培養後、 水泡性口内炎ウイ ス（ -ュ - ャ - -株）を 10 Ride Miter >> Bio β-, 1 β 耱, t If U 8 pages, 388388 Year 3 3, ie, 3 β-hole microphone β-Blato (manufactured by Star Co., Ltd.) the a t, the first © - Le to iota I summer Sambu # ¾ Ete, each to Yo the communicating parent to 3 the 2 signal dilutions Tsu line © iMC :, wisiH vagina 20 «7 (73 containing 11 summer ^: 1 «^ This 4s 10 5 value is fine Toshigumi is mounted Suspension 50 tL 1, 37¾, cultured in carbon dioxide port port, after 3 cultures, vesicular stomatitis virus (- -Share)
2Q 00 TC IZ)5o (チイプ ュー * チュアインプ Xタティンダドー ズ 50 )に¾るよう MIMで m«Eし、その 5 1：各 のゥ s 加 え、 37¾, ½| スフヲン器内"«養し¾。約35時闉後、 Ι Γ»サ 20 ンブ 加えて ゥェ の 0 Q c P s¾¾ しえ畤 で, 各タエ の CPSを顕 察し、 53 の(3 ? ¾：起 して るタ2Q 00 TC IZ) m o MIM as shown in 5 o (chip * tuimp X x Tatin dodos 50), part 5 1: Add ゥ s for each, 37 ¾, ½ | Approximately 35 hours later, the CPS of each fly was observed at 0 Q c P s し え え え 加 え 53 サ サ サ サ 53 53 53 53.
ΧΛΌΙ ΓΪ-サンブ の希 J¾S:の邀数 もって∑ Ϊ 3fの力僅とし 。 邀 ΓΪ-Sambu's rare number of intercepts of J¾S:
ΐϊ夏- rサ yブ として用 ものは、 ト末销叙 f パ球 、 a ン*ナパ， 4 δ声 s /ait 12一 0—チト，デ ノィ * ポー 一！ 3ァ■¾チ-ト， 5 a« で》激して 72時颺後 IC探取した上清で，  ΐϊ 夏-r y y 用 用 用 用 销 用 用 用 用 と し て 用 用 と し て と し て 用 用 用 用 と し て と し て と し て と し て と し て 用 用 用 用 用 用 用 と し て と し て ΐϊ ΐϊ 用 ΐϊ ΐϊ 用 ΐϊ ΐϊ ΐϊ ΐϊ After 72 hours at 3 hours, 5 hours, in the supernatant, the IC probed supernatant was used.
0MP! ^ l 2：の培 ¾Lb清 1 W中 ICは e Μ ϊ*- τ (¾, ΗΛ¾«^¾?¾ ) ¾ 0MP! ^ l 2: の ¾ Lb Qi 1 W IC is e Μ ϊ *-τ (¾, ΗΛ¾ «^ ¾? ¾) ¾
440 &ュ -プト食有して 0 ^レ、 タ w— y舰艤の培養上清中 IC ' i W -rK して H合爐 体が存在して i、後で加え 440 ュ 食 食 食0 0 ' ^' 培養 '' IC IC IC IC IC IC
ΐ ϊϊ-r活性は、 , ，一ス _hol*体 鎔会し、上青申の活性は  ϊϊ r-r activity is,,, one _hol * body melting
β 城される曹である 3 »暴は、 r 2- t ，のタ ンの上清中 i itifc的 Beta Castle Cao 3 »Violent in the supernatant of r2-t, tan
強い I，買一 r»合餽が認 られ、加え^ u»-r ( 550ϋΧ ·ί> の 53~75ίΙが «体 会し Λ (表 3 )。  Strong I, purchase r »synergy was recognized, and ^ u» -r (550ϋΧ · ί> 53-75ίΙ was «encounteredΛ (Table 3).
表 3  Table 3
モノタ β -ナ 抗体 iC AIFH-r活性の ««麓 0  Monota β-na antibody iC AIFH-r activity «« foot 0
5 Five
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000033_0001
0 0
実紐 9  Real string 9
*ノク》 -ナ 抗体 ハイブ gドーマの腹水化  * Noku >> -Na antibody hive g-doma ascites
I，夏一 r 対して錶会龍 ^ 扰体 ¾ ^する r 2- 1 t . I  I, Natsuichi r 錶 龍 龍 ^ 扰 扰 r 2-1 t. I
一 y續 »，χ 106 攝を、 あらかじめ のミネ， ィ t慶 δδΛS に梗与して: 8Η マタスの 0¾Λ 接穗する 2：と JCよ |»鼴 f O PI — S2— 1 y continued », χ 10 6 sets, given in advance to mine, tt δδΛS: 8 Η matas 0 接 接 穗 ： 2: and JC yo |» 鼴 f O PI — S2—
i 水化 tt?^ 。ハイブ 9 マ t«Ki «*して！ 08後、腹水  i hydration tt? ^. Hive 9 Ma t «Ki« *! After 08, ascites
して*体橋 法で漏走し λところ、 1 Q7 被鳙¾まで «体活性 ' 承し 、当鎮タ β - 麵臟 養上瀋申の 体活性は、 1 δ4僚 まで龎められて が、 水化する とによ β 0 a m To * Mohashi and λ place in the body bridge method, 1 Q 7 to approval «body active 'until the鳙¾, To鎮Ta β -麵臟Youe瀋申of body activity, Me龎up to 1 δ 4 colleagues Being hydrated β 0 am
6 体活性が上舞し 。  6 The body activity rises.
*ノク》—ナ^体の精 * Noku >> — The body spirit
夷 例 9で得られ 議水 4 wtt として、 ス尹ー ンら（ ^ャ As the water of 4 wtt obtained in Example 9, Su-Yun and others (^
-ナ *ザ バイ wジ: * ケミスト - · 25 S暴， 3753JC , 10 \ 98，年）の方法に準じて ¾メタ-一ナ^体 した 3 ま " Sl水 からフイブ 9ン様 質 去する め！ 0 , 893S¾6t S分僑遠心し 後、 9ン酸《街液- «I水（？ B S : &， a -M*¾F04 t.5mM IHgPO..2.TaM KC1., 137a ITaCl, H 7.2) "C280 na 禁 »a収 c A23o ) 2~ 1 i lt示す濃度 希釈し 3 . ΐδ サン: ΤΜΟβ和 it驗ァ y -クム溶液 473ίの濃度 るよ に加え、 - Na * The by w di: * Chemist - · 25 S violence, 3753JC, 10 \ 98, year) ¾ according to the method of meta - Ichina ^ be removed by Fuibu 9 down-like quality from the body was 3 or "Sl water 0, 893S¾6t S After centrifugation in a foreign country, 9 acid << city liquid-«I water (? BS : &, a -M * ¾F0 4 t.5mM IHgPO..2.TaM KC1., 137a ITaCl, H 7.2) "C280 na prohibited» a yield c a 2 3o) 2 ~ 1 i lt and concentration diluted shown 3 ΐδ Sun:. ΤΜΟβ sum it驗A y - in addition to Yo Ru concentration of Kum solution 473ί,
4 X：で a拌し *がら 3 d分颼塊析 fr行 * 、その後遠 （ I ( > d 0圃 ， 15分購）を行 *つて沈礞 *得 。沈 S OaM JfaCl含有 20邋11ト ス霸|^|¾(?37.3 )に溶遊し、阈瀋液 2 に対して透 圻 t行 *つ 。 2睁 W後、 2 の新し 同じ透析欲に換 、 さら IC15 20 時 »¾拆 行¾つた。透析後、沈灘 t除去する] t¾»， β , 8 Θ 0圜 4 X: Agitate at * 3d fractionation agglomeration fr line *, then go far (I (> d0 field, 15 minutes purchase)) * sediment * obtained. S OaM JfaCl containing 20-11 Toss bar | ^ | ¾ ( ? 37.3), soaked into the liquid 2 against 阈 Shenzhen solution 2. After 2 睁 W, changed to the same dialysis desire of 2 and at IC15 20 o'clock » ¾Destroyed, removed after dialysis, Shentan t] », β, 8Θ0
15分面遽心 行 * 、上澝 t の僮が 20-33の濃度 ** ように «した。 とのサ ブ tr3fe分量の 50轚 M- CI含 ス 緩 «#«で 化し の セ βー 3»，Jk ( 7，トマン  After fifteen minutes, I tried to make the *** of the above-mentioned t a 20-33 concentration **. 50% of the sub tr3fe content with M-CI containing «#«
D，8¾)i»*t、 S3驚 M »&C1含有ト 3ス纖 澳 用 て Ι·5«ί » 分の »m¾s 分画 ¾行 っ 。 2：の条件下では、 ¾6体洒 ftは主として D, 8¾ ) i »* t, S3 amazing M» & C1 containing toss fiber 3 o 5 · 5 «ί» for »m» s fractionation. Under the condition of 2: ¾6 body ft is mainly
OMPI —83— OMPI —83—
i 棄進 分闥 置め hiiit (31 )a 抗体の纏 KCは 7 -ム 9らの方法 i Abandoned stake holder hiiit (31) a Antibody KC 7-M 9
(ネイチヤー ，第 22 ΤΓ卷， β 80買， 370年） 準じて333 - 9ァ ， アミ
Figure imgf000035_0001
S D S - AG B )法¾用 0す おち、 Λ安^ fc DI
Figure imgf000035_0002
(Nayiyah, Vol. 22, Vol. Β 80, 370) According to 333-9a, Ami
Figure imgf000035_0001
SDS-AG B) Legal 0 s , cheap ^ fc DI
Figure imgf000035_0002
β プチタ y 、各 2 -メ カブトェ ノ - で ¾¾ 行 * I 7 % 3 S3ゲ ， 30ボ ト， 24時 W泳助 ¾行 *つ;^。その 扰体活性 IC 一致して、分子 «¾53キ ダ ト ン前後 iCH钃、約 2·年 wダ ト ン 餺後 JCL鎖の 2つのバンドが重められ （S2 )。 tのよ， iC糖製 3れ た抗体プ，ク 膽 ン ， 7が I F*一 rに して、 I会餞 どうか ^ aの方法 って ΐϊΐτ-r 2200? を加えて梭爾し たと ろ、 1 》-7*0§¾50¾が扰体^：轅合性 示す2：とが判明し β Petit y, each 2-mekabuteno-line * I 7% 3 S3, 30 bot, 24 o'clock W swim assistant line * one; ^. Consistent with its bioactivity IC, two bands of the JCL chain were weighed (S2) after the molecule «{iCH} around 53 chitons, approximately 2 · years after w daltons. t, the iC sugar-made antibody probe, couplant, and 7 were made into IF * -r. , 1 >>-7 * 0§ {50} is 扰 体 ^ ：
(¾4 )o 表  (¾4) o table
Figure imgf000035_0003
Figure imgf000035_0003
m w  m w
ノク β—ナ 4体の厲するサブク ス  Nox β—na
0 PI 0 PI
WIP0 ノ 本 ϋ明の *ノク -ーナ 体の厲する ι&α サブク，スは、夷篇 1 10の方法で精瓤し 7， 邐ン 17*10僂に し、ャギ タ ス igGi , 92a ,a2b,ai it体（マイ ス社）との寒天内 *^5ϋδ 法（オタ —法：ィムノ メ プ F 'ノ y y ゲ 一ディ 7ユージ舊 チタ-プク , ブラプタウ X , プタヌプオード,WIP0 No The ノ & α sub-texts of the * noc-na body of the present invention are refined by the method of Evangelion 110, and are used in the method of 10 17 1710, and are used for the iggis, igGi, 92a, a2b, in agar with ai it body (Mice Corporation) * ^ 5ϋδ method (Ota method: Imnomep F'no yy Ge idi 7Uzi old tita-puku, brapau X, ptanupe,
1384年） Hiし 。 »梟は、《ノク ナ 体とャギ抗マウス1384) Hi. »Owl, 《Nokna body and goat anti-mouse
IgG2 扰体との |«に著明 1つのバンドが靄められ、勉の «：抗体との l«ICは、バンドの滲成はみられ かつ 。 つて、 当該 *ノク- -ナ 扰体は、 lgG2b I 属するものである とが判明した（表 5 )。 One band was obscured with IgG2 扰 | 勉 勉: l «IC with antibody, band bleeding was observed. Therefore, it was found that the * noc-N-body belongs to lgG2bI (Table 5).
表 5  Table 5
モノタ g ナ 《体の画するサブクラス Monota g Na 《Subclass that the body draws
Figure imgf000036_0001
産業上の利用可能性
Figure imgf000036_0001
Industrial applicability
本B明の «f¾ポ ペプチド ¾使用してヒト r型ィンタープェ-ン f » 合する ¾ノタ ナ 扰体を製造することができる。 ノクロ-ナ «：体は、 ヒ ト 7型イ ンターフェロンの検出，糖製に有用である。  Using the «f-peptide» of the present invention, it is possible to produce a rnotana conjugate which is combined with human r-type interferon f ». Noclona: The body is useful for the detection of human type 7 interferon and sugar production.

Claims

一 3 δ— 講 求 の 4S 囲  One 3 δ—4S enclosure of the lecture
1. ¾ 1. ¾
H-X-Lye Arg Ser Oln Met Leu Phe Arg Gly— T-OH 〔式中、 Xは »会手ま 3tは Ι1· σΐη V*l Me t AXa Glu L«u Ser Pro Ala Ala Lya Kir Qlj Lye Arg で: 5?されるペア f HX-Lye Arg Ser Oln Met Leu Phe Arg Gly— T-OH (where X is »mate or 3t is Ι1 σΐη V * l Me t AXa Glu L« u Ser Pro Ala Ala Lya Kir Qlj Lye Arg : 5? Pair f
• cif^ l ) ,お之て l~ |6<iSの ^t^l • cif ^ l), note l ~ | 6 <iS ^ t ^ l
ド鎖の c末端から ミノ酸敷 1 〗 0^^*チト'もしくはアミノ餞残基 を示し、 Ίは ArS Arg Ala Ser Gin で示されるペプチド鎖の If r Kえて ？ From the c-terminus of the amino acid chain represents a amino acid residue 1 チ 0 ^^ * cyto 'or an amino free residue, and Ί indicates the peptide chain represented by Ar S Arg Ala Ser Gin.
末端か ffrミノ餞敷， . Q 、ベブチドもしくはァミノ 基を示す〕で 表わされる ぺブチド。  Terminal or ffr-mino free-standing, indicating .Q, bebutide or amino group].
2. Yが Arg Arg Ala Ser Ginである請求の篇囲笫 1項記 « 0> リぺグチド a 2. Enclosed claim where Y is Arg Arg Ala Ser Gin 笫 1 «0> Regutide a
3. X # L7a Arg である請求の範囲第！ ¾ま走は第 2項記載の リぺ ブチト ' 0 3. Claim #X # L 7 a Arg! Pam running is the lead butit described in section 2 ' 0
4. 鏞求の範囲第 1項〜第 3項 ¾«の リぺプチト'とキヤリヤー蛋白と を化学維会さ 複合体。 4. Scope of Claims 1 to 3 A complex in which a particular lipitite 'and a carrier protein are chemically synthesized.
5. キヤ ヤ-蛋白が牛サイ wグロブリンである請求の範囲第 3項記弒 の 合体 0 5. Canon Ya - protein coalescence ranging third Koki弒according bovine rhino w globulin 0
6. 請求の艇囲第 1項 ~笫 5項記載の リぺブチト'またはその蛋白複合 体で免 ¾した嗨乳動物の 臆と同種または萬種の 9ンパ球機細 »と から *るタ ン化されえハイプリドーマ。 6. The same or all-nine kinds of mammals exempted from the use of “Ribbutit” or a protein complex thereof according to claim 1 to 5 above. High Pridoma.
7. 嘴 ¾励物がマゥスである講求の範囲第 6項記載のハイブリドーマ。 7. The hybridoma according to item 6, wherein the beak is a mouse.
8. 8.
9 ンパ球櫞 がミ e -マである謂求の範囲第 8項記 «<0ハイブ ド-マ 3 9 lymphocytes櫞Gami e - 8 Kouki «range IMotome a Ma <0 hive de - Ma 3
3. 請求の範囲第 1項〜第 3項記載のポ 9ぺブチドに する ノク β - ナ 抗体。 — ¾6— 3. A Nok β-na antibody, which is a po9-peptide according to claims 1 to 3. — ¾6—
10. ト 7型イン #— 7 Wンと U合する譖求の範囲第 3項 ¾載の ノ  10. G7 type in # — 7 W
' It. ォタ -ユー法 I よる核 ¾i よ 1» Ig<J bのサブタ，ス iC» "*講 求 ©«囲 9項紅噴の看ノク - -ナ^ it体 β . 'It O data - User Act I by nuclear ¾i by 1 »Ig <of J b subtype, vinegar iC» "* Lecturer sought ©« enclose 9 Kobeni噴only carbonochloridate - - Na ^ it body β
12.講求の範囲第 8項 «のハイブ F -マ W¾Jt物 f 接糧し、 ¾ノ タ —ナ 扰体 ^J¾¾¾tせしめ、 tれ 探取する とを とする * ノタ σ —ナ 拭体の製造法 3 12. Scope of the training Item 8 «Hive F-ma W¾Jt object f Feed, ¾not — ^ body ¾¾¾J¾¾¾t, search for * nota ——manufacture of wipe Law 3
13.嚏乳動物がマウスである請求の鎵囲笫1 2項 載の製造法。  13. The production method according to claim 12, wherein the milk animal is a mouse.
粗 ト r型イン -プ- -ン噙有物を、譖求の纏囲第 3項〜第 t t 項記敏の *ノク- -ナ 抗体 用 て作成し 扰体 ，ムで ½aす *こ とを特豢とする ト r型イン ーフ の精製法。  A crude r-type impulse is created using the * noc-na antibody of the enclosing sections 3 to tt in the sought response. A method for purifying r-type inflatables.
15.抗体として請求の纏囲笫 3項〜第 1 ！ ¾記載の *ノタ》 -ナ ¾t体 ¾:用 ¾る と 特豢とするヲジ ί·ィムノアタセィ法またはェンザィムィ ムノアプセィ法による トァ型インタープ - σンの検出法。  15. Enclosure of claim as an antibody 項 Paragraph 3-1st! ** Notation >> -Na 体 t body ¾: A method of detecting the toa-type intercept by the ィ imnoatase method or the enzym ム mnoapsey method, which is a specially designed item.
0ΜΡΙ0ΜΡΙ
WIPOT" WIPOT "
PCT/JP1982/000381 1982-09-22 1982-09-22 Novel polypeptide and its use WO1984001149A1 (en)

Priority Applications (16)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP1982/000381 WO1984001149A1 (en) 1982-09-22 1982-09-22 Novel polypeptide and its use
US06/534,091 US4681848A (en) 1982-09-22 1983-09-20 Novel peptide and use thereof
AU19345/83A AU564620B2 (en) 1982-09-22 1983-09-21 Peptides and protein-peptide complexes
EP83109402A EP0103898B1 (en) 1982-09-22 1983-09-21 Novel peptide and use thereof
PH29569A PH22559A (en) 1982-09-22 1983-09-21 Monoclonal antibody and method for purifying human gamma interferon
CA000437187A CA1216807A (en) 1982-09-22 1983-09-21 Peptide and use thereof
AT83109402T ATE19088T1 (en) 1982-09-22 1983-09-21 PEPTIDE AND ITS USE.
IL69790A IL69790A (en) 1982-09-22 1983-09-21 Peptides consisting of a sequence of human ifn-ypsilon and use thereof
IE2215/83A IE56003B1 (en) 1982-09-22 1983-09-21 Novel peptide and use thereof
NZ205666A NZ205666A (en) 1982-09-22 1983-09-21 Peptide derived from c-terminal region of human immune interferon,and conjugate with carrier protein;hybridomas and production of monoclonal antibodies against human immune interferon;purification or detection of human immune interferon
DK430583A DK430583A (en) 1982-09-22 1983-09-21 POLYPEPTIDES AND THEIR PREPARATION AND USE
DE8383109402T DE3362936D1 (en) 1982-09-22 1983-09-21 Novel peptide and use thereof
KR1019830004438A KR910001726B1 (en) 1982-09-22 1983-09-22 Process for preparation of novel peptide
ZA837058A ZA837058B (en) 1982-09-22 1983-09-22 Peptide and use thereof
JP58176091A JPS5980646A (en) 1982-09-22 1983-09-22 Novel polypeptide and use thereof
JP59052244A JPS6034994A (en) 1982-09-22 1984-03-21 Novel polypeptide and its use

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP1982/000381 WO1984001149A1 (en) 1982-09-22 1982-09-22 Novel polypeptide and its use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1984001149A1 true WO1984001149A1 (en) 1984-03-29

Family

ID=13762331

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP1982/000381 WO1984001149A1 (en) 1982-09-22 1982-09-22 Novel polypeptide and its use

Country Status (3)

Country Link
JP (2) JPS5980646A (en)
WO (1) WO1984001149A1 (en)
ZA (1) ZA837058B (en)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1985004420A1 (en) * 1984-03-29 1985-10-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel dna and its use
JPH0653067B2 (en) * 1984-09-11 1994-07-20 武田薬品工業株式会社 Novel hybridoma and method for producing the same

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA814375B (en) * 1980-07-01 1982-07-28 Hoffmann La Roche Interferons and process for their preparation

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mikolos Boanszky et al: "Peptide Synthesis (Second Edition)" (1976) John Wiley & Sons, Inc. (New York) *
Nature, Vol. 295, No. 11, 11. February. 1982 (11.02.1982) P. 503-508 *

Also Published As

Publication number Publication date
JPS6034994A (en) 1985-02-22
ZA837058B (en) 1984-04-25
JPS6234760B2 (en) 1987-07-28
JPS5980646A (en) 1984-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103282502B (en) Small molecule conjugates for Intracellular delivery bioactive compound
ES2705714T3 (en) Methods and uses of domain of Fibronectina type III based on structures of compositions
JP4217004B2 (en) Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
EP3524617B1 (en) Gla domains as therapeutic agents
HUT52784A (en) Process for producing glycine derivatives and pharmaceutical compositions containing them as active components
US20020177226A1 (en) Pharmaceutical dipeptide compositions and methods of use thereof: immunostimulants
CN102596992A (en) Fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses
JPS60202899A (en) High stability recombined gamma interferon
JPS60120900A (en) Lhph homologue nonapeptide and decapeptide useful as lhrh agonist
ES2211877T3 (en) HUMAN LINFOBLASTOID B CELLULAR LINE THAT SECRETS AN ANTI-GANGLIOSIDE ANTIBODY.
CN101297034A (en) PLY-GBS mutant lysins
RU2003121231A (en) SILENT ANTI-CD28 ANTIBODIES AND THEIR APPLICATION
BG98426A (en) Peptides of organoprotective activity, method for their preparation and their therapeutical use
JP2008502323A5 (en)
Biskind et al. Atrophy of ovaries transplanted to the spleen in unilaterally castrated rats; proliferative changes following subsequent removal of intact ovary
JPH02500517A (en) peptide compounds
CN105949282B (en) FAP-targeted anti-angiogenesis peptide Z-GP-V2 and application thereof
JPH10501813A (en) Compositions and methods for treating tumors
WO1984001149A1 (en) Novel polypeptide and its use
CN104558119B (en) YAP albumen inhibits polypeptide and its application
TWI300414B (en) Modified peptide yy and conjugates thereof
JPH01501683A (en) Factor 8 high yield production method
CN106046121B (en) FAP-targeted anti-angiogenesis peptide Z-GP-V1 and application thereof
CN108611371A (en) The preparation method of the Goats Milk gland bioreactor of GP5-M albumen is expressed in milk
Templeton et al. Complete foldback transposable elements encode a novel protein found in Drosophila melanogaster.

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Designated state(s): MC