UA72422C2 - Dna coding consequence of a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, a chimeric gene, a vector, a plant cell, a plant, which are containing such a consequence, a method of transforming plants, a method of selective herbicidal treatment of plants - Google Patents
Dna coding consequence of a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, a chimeric gene, a vector, a plant cell, a plant, which are containing such a consequence, a method of transforming plants, a method of selective herbicidal treatment of plants Download PDFInfo
- Publication number
- UA72422C2 UA72422C2 UA97126425A UA97126425A UA72422C2 UA 72422 C2 UA72422 C2 UA 72422C2 UA 97126425 A UA97126425 A UA 97126425A UA 97126425 A UA97126425 A UA 97126425A UA 72422 C2 UA72422 C2 UA 72422C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- gene
- sequence
- plant
- plants
- fact
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 99
- 108010028143 Dioxygenases Proteins 0.000 title claims abstract description 12
- 102000016680 Dioxygenases Human genes 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 16
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 title claims description 10
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 title 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 title 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 45
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 19
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 9
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 claims description 8
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 claims description 7
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 5
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical compound C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- ZTTKDUXKVPEXCG-UHFFFAOYSA-N 2-cyano-3-cyclopropyl-1-(2-mesyl-4-trifluoromethylphenyl)propan-1,3-dione Chemical group CS(=O)(=O)C1=CC(C(F)(F)F)=CC=C1C(=O)C(C#N)C(=O)C1CC1 ZTTKDUXKVPEXCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005618 Sulcotrione Substances 0.000 claims description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims description 3
- PQTBTIFWAXVEPB-UHFFFAOYSA-N sulcotrione Chemical group ClC1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1C(=O)C1C(=O)CCCC1=O PQTBTIFWAXVEPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 230000001402 polyadenylating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 2
- 235000002848 Cyperus flabelliformis Nutrition 0.000 claims 1
- 235000014968 Peltiphyllum peltatum Nutrition 0.000 claims 1
- 244000104677 Peltiphyllum peltatum Species 0.000 claims 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 abstract description 21
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 16
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 16
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 15
- 102100021324 5-azacytidine-induced protein 2 Human genes 0.000 description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 11
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 5
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 5
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 4
- 241000208128 Nicotiana glauca Species 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- KKADPXVIOXHVKN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyphenylpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KKADPXVIOXHVKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000801924 Sena Species 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 208000006278 hypochromic anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 150000002545 isoxazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 231100001222 nononcogenic Toxicity 0.000 description 2
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 1
- 101100460157 Drosophila melanogaster nenya gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241001024304 Mino Species 0.000 description 1
- 244000004005 Nypa fruticans Species 0.000 description 1
- 235000005305 Nypa fruticans Nutrition 0.000 description 1
- GFRROZIJVHUSKZ-FXGMSQOLSA-N OS I Natural products C[C@@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO)[C@@H]2NC(=O)C)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GFRROZIJVHUSKZ-FXGMSQOLSA-N 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 101150014691 PPARA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000514450 Podocarpus latifolius Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241001464837 Viridiplantae Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 101150087698 alpha gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012170 cDNA-Seq Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000009333 weeding Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
Abstract
Description
Даний винахід стосується гечу гідроксилфенілпіруватдіоксигенази (ГФПД), химерному гену, що містить цей ген як кодуючу послідовність, і його застосування для одержання рослин, стійких до деяких гербіцидів.The present invention relates to hech hydroxylphenylpyruvate dioxygenase (HFPD), a chimeric gene containing this gene as a coding sequence, and its use for obtaining plants resistant to certain herbicides.
Відомі деякі гербіциди, такі, як ізоксазоли, що описуються, зокрема, в заявках на французькі патенти 95 06800 і 95 13570, ізоксафлутол, гербіцид вибіркової дії по відношенню до кукурудзи, дикетонітрили, такі, що описуються в європейських заявках 0496630, 0496631, зокрема, 2-ціано-З-ціклопропіл-1-(2-502 СНз -4СЕз - феніл) пропан-1,3-діон та 2-ціано-З-циклопропіл-1-(2-502 СНз -2,3СІ2 -феніл) пропан-1,3-діон, трикетони, що описуються в європейських заявках 0 625 505 та 0 625 508, зокрема, сулькотріон. Однак, жодного гена, толерантного до таких гербіцидів, описано не було.Some herbicides are known, such as isoxazoles, described in particular in French patent applications 95 06800 and 95 13570, isoxaflutol, a herbicide of selective action against corn, diketonitrile, such as described in European applications 0496630, 0496631, in particular, 2-cyano-3-cyclopropyl-1-(2-502 CH3-4C3-phenyl) propane-1,3-dione and 2-cyano-3-cyclopropyl-1-(2-502 CH3-2,3CI2-phenyl) propane-1,3-dione, triketones described in European applications 0 625 505 and 0 625 508, in particular, sulcotrione. However, no gene tolerant to such herbicides has been described.
Пдроксилфенілпіруватдіоксигеназа є фрагментом, який каталізує реакцію трансформації парагідроксифенілпірувата в гомогентизат.Phydroxyphenylpyruvate dioxygenase is a fragment that catalyzes the reaction of transformation of parahydroxyphenylpyruvate into a homogenizer.
В той же час, одержаної із Рзендотопаз зр. Р. у). 874, була, хоча й не було повідомлень про (Виеївспі єї со :Ешг.). Віоспет. 205, 459-466, 1922). В цьому документі немає опису гена, що кодує цей білок.At the same time, obtained from Rzendotopaz zr. R. y). 874, was, although there were no reports about (Vieivspi eyi so :Eshg.). Viospet. 205, 459-466, 1922). This document does not describe the gene encoding this protein.
Тепер відкрили послідовність гену цього типу і те, що така послідовність після введення в рослинні клітини може викликати надекспресію або активацію ГФПД в рослинах, що надають цим останнім значну толерантність до деяких гербіцидів, що з'явилися нещодавно, таких, як гербіциди родини ізоксазолів або родини трикетонів.It has now been discovered that a gene sequence of this type and that such a sequence, when introduced into plant cells, can cause overexpression or activation of GFPD in plants, giving the latter a significant tolerance to certain herbicides that have appeared recently, such as herbicides of the isoxazole family or triketones
Об'єктом даного винаходу є послідовність ДНК, виділена із гена нелюдського походження та бактеріального неморського походження або ще із рослинного гена, або послідовність, яка може гібридизуватися з цією виділеною послідовністю, яка відрізняється тим, що вона експресує гідроксилфенілпіруватдіокси-геназу (ГФПД).The object of this invention is a DNA sequence isolated from a gene of non-human and non-bacterial non-marine origin or from a plant gene, or a sequence that can hybridize with this isolated sequence, which is characterized by the fact that it expresses hydroxylphenylpyruvate dioxygenase (HPD).
Зокрема, ця послідовність може бути бактеріального походження, особливо з бактерій, що належать до родини Реєпдотопах, або ж рослинного походження, будучи виділеною із однодольної або дводольної рослини, особливо Агарідорві5, або зонтичних, як наприклад, моркви (Юацйсиз сагона). Вона може бути природ- ною або дикою, або, можливо, мутованою із збереженням суттєвої властивості гербіцидної толерантності проти інгібіторів ГФПД, таких, як гербіциди родини ізоксазолів або родини трикетонів.In particular, this sequence can be of bacterial origin, especially from bacteria belonging to the Reepdotopach family, or of plant origin, having been isolated from a monocotyledonous or dicotyledonous plant, especially Agaridorvi5, or umbels, such as carrots (Juatcysis sagona). It can be natural or wild, or possibly mutated with the essential property of herbicide tolerance against GFAP inhibitors, such as herbicides of the isoxazole family or the triketone family.
Винахід включає також спосіб виділення вищеназваного гена, в якому: - декілька олігонуклеотидів, що походять із послідовності амінокислот ГФПД, вибирають праймерами - виходячи з цих праймерів, синтезують фрагменти ампліфікації шляхом ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція); - виділяють ген шляхом створення та скринінгу банка генів і - клонують ген.The invention also includes a method of isolating the above-mentioned gene, in which: - several oligonucleotides originating from the sequence of amino acids of HFPD are selected with primers - based on these primers, amplification fragments are synthesized by PCR (polymerase chain reaction); - isolate the gene by creating and screening a gene bank and - clone the gene.
Переважно використовують праймери, що походять із послідовності ГФПД бактерії роду Рзепдотопазв.Predominantly, primers derived from the GFPD sequence of the bacterium Rzepdotopazv are used.
Особливо переважно вони походять із Рлеендотопазх Пиогезсепв.They mainly come from Rleendotopazh Piogezsepv.
Об'єктом винаходу є також застосування гена, що кодує ГФПД, для трансформації рослин, таким може бути ген-маркер або кодуюча послідовність, що дозволяє надати рослині толерантність до деяких гербіцидів.The object of the invention is also the use of the gene encoding GFPD for the transformation of plants, this can be a marker gene or a coding sequence that allows the plant to be tolerant to certain herbicides.
Його можна також використати разом з іншими генами - маркерами та/або кодуючою послідовністю, якщо це необхідно.It can also be used in conjunction with other marker genes and/or coding sequence if desired.
Кодуючий ген може бути нативним, диким, або, можливо, мутованим, при збереженні суттєвої властивості гербіцидної толерантності проти інгібіторів ГФІПД, таких як гербіциди родини ізоксазолів або родини трикетонів. Як кодуючу послідовність можна, зокрема, використати послідовність відповідно до винаходу, як описано вище.The coding gene can be native, wild-type, or possibly mutated, while retaining the essential property of herbicide tolerance against HFIPD inhibitors, such as herbicides of the isoxazole family or the triketone family. As a coding sequence, in particular, a sequence according to the invention, as described above, can be used.
Трансформація рослинних клітин може бути здійснена за допомогою відомого методу. Ряд методів полягає в бомбардуванні клітин або протопластів частками, до яких прикріплені послідовності ДНК.The transformation of plant cells can be carried out using a known method. A number of methods consist of bombarding cells or protoplasts with particles to which DNA sequences are attached.
Інша серія методів полягає в використанні як засобу переносу в рослину химерного гена, включеного в плазміду Ті Адгорасієйт Шптегасієпз або Ві Адгобасієгійт гпігодепев.Another series of methods consists in the use as a means of transfer into the plant of a chimeric gene included in the plasmid Ti Adgorasieit Shptegasiepz or Vi Adgobasiegiit gpigodepev.
Об'єктом даного винаходу є також химерний ген, що включає по ходу транскрипції, принаймні, одну промоторну регулюючу послідовність, одну гетерологіч-ну кодуючу послідовність, яка експресує гідроксилфенілпіруватдіоксигеназу, і принаймні, одну термінуючу регулюючу або поліаденілуючу послідовність.The object of this invention is also a chimeric gene that includes, during transcription, at least one promoter regulatory sequence, one heterologous coding sequence that expresses hydroxylphenylpyruvate dioxygenase, and at least one terminating regulatory or polyadenylation sequence.
Як промоторну регулюючу послідовність можна використати будь-яку промоторну послідовність гена, яка природно експресується в рослинах, зокрема, промотор бактеріального, вірусного або рослинного.походження, такий, як, наприклад, промотор гена малої субодиниці рибулози-бікарбоксилази (РивізСО) або промотор гена альфа-трибулину (Європейська заявка на патент М 0 652 286), або ще гена рослинного вірусу, як наприклад, вірус мозаїки цвітної капусти (САММ 195 або 255), а також можна використати будь-який відомий підходящий промотор. Переважно використовують регулюючу промоторну послідовність, яка сприяє надекспресії кодуючої послідовності, як, наприклад, послідовність, яка містить, принаймні, один гістонний промотр, що описаний в європейській заявці на патент 0 507 698.Any gene promoter sequence that is naturally expressed in plants can be used as a promoter regulatory sequence, in particular, a promoter of bacterial, viral, or plant origin, such as, for example, the ribulose-bicarboxylase small subunit gene promoter (RyvizCO) or the alpha gene promoter -tribulin (European patent application M 0 652 286), or a plant virus gene, such as cauliflower mosaic virus (SAMM 195 or 255), and any known suitable promoter can also be used. It is preferable to use a regulatory promoter sequence that facilitates the overexpression of the coding sequence, such as, for example, a sequence that contains at least one histone promoter, which is described in the European patent application 0 507 698.
В даному винаході можна також використати разом з промоторною регулюючою послідовністю інші регулюючі послідовності, що знаходяться між промотором та кодуючою послідовністю, такі, як активатори транскрипції "енхансер", як, наприклад, активатор трансляції вірусу мозаїки тютюну (ТЕМ), описаний в Міжна- родній заявці 87/07644, або перехідні пептиди, прості чи подвійні, причому в цьому випадку вони можуть бути розділені проміжною послідовністю, тобто, включають по ходу транскрипції послідовність, що кодує перехідний пептид рослинного гена, який кодує фермент з локалізацією в пластидах, частину послідовності М- кінцевої зрілої ділянки рослинного гена, що кодує фермент з локалізацією в пластидах, потім послідовність, що кодує другий перехідний пептид рослинного гена, кодуючого фермент з локалізацією в пластидах, утвореного частиною послідовності М-кінцевої зрілої ділянки рослинного гена, кодуючого фермент з локалізацією в пластидах, описаних в європейській заявці М 0 508 909.In the present invention, it is also possible to use, together with the promoter regulatory sequence, other regulatory sequences located between the promoter and the coding sequence, such as "enhancer" transcription activators, such as, for example, the tobacco mosaic virus (TEM) translation activator described in International application 87/07644, or transition peptides, single or double, in which case they may be separated by an intermediate sequence, i.e., include during transcription the sequence encoding the transition peptide of the plant gene encoding the plastid-localized enzyme, part of the M sequence - the terminal mature region of the plant gene encoding the enzyme localized in plastids, then the sequence encoding the second transition peptide of the plant gene encoding the enzyme localized in plastids, formed by part of the sequence of the M-terminal mature region of the plant gene encoding the enzyme localized in plastids , described in the European application M 0 508 909.
Як термінуючу і поліаденілуючу регулюючу послідовність можна використати будь-яку відповідну послідовність бактеріального походження, як, наприклад, термінатор Адгорасієпйт іштеїсієп5, або ж рослинного походження, як, наприклад, гістонний термінатор, що описаний у європейській заявці М 0 633 317.As a terminating and polyadenylating regulatory sequence, you can use any suitable sequence of bacterial origin, such as, for example, the Adgorasiepyt istheisiep5 terminator, or of plant origin, such as, for example, the histone terminator described in the European application M 0 633 317.
Об'єктом даного винаходу є також рослинні клітини однодольних або дводольних рослин, особливо культур, трансформованих по одному із описаних вище способів і які містять в своєму геномі ефективну кількість гена, дякуючи якому проходить експресія гідроксифенілпіруватдіоксигенази (ГФПД). Було помічено, що трансформовані таким чином рослини мають значну стійкість до деяких гербіцидів, що з'явилися нещодавно, таким, як ізоксазоли, описані, зокрема, в заявках на французькі патенти 9506800 та 95 13570, і, особливо 4-(4-СЕз -2-(метилсульфоіл) бензоіл)і-5-циклопропілізоксазол, і особливо ізоксафлутол, гербіцид селективної дії по відношенню до кукурудзи, дікетонітрили, описані в європейських заявках 0 496 630, 0 496 631, зокрема, 2-ціано-З-циклопропіл-1-(2-502 СНз-4-СЕз-феніл) пропан-1,3-діон та 2-ціано-3З-циклопропіл-1-(2- 5О» СНз-4-2-, ЗСІ» -феніл) пропан - 1,3-діон, трикетони, описані в європейських заявках и 625 505 та 0 625 508, зокрема, сулькотріон.The object of this invention is also plant cells of monocotyledonous or dicotyledonous plants, especially cultures transformed by one of the methods described above and which contain in their genome an effective amount of the gene, thanks to which the expression of hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HFPD) takes place. Plants transformed in this way have been observed to be highly resistant to some of the more recent herbicides, such as the isoxazoles described in particular in French patent applications 9506800 and 9513570, and especially 4-(4-CEz - 2-(methylsulfoyl)benzoyl)i-5-cyclopropylisoxazole, and especially isoxaflutol, a herbicide with selective action against corn, diketonitrile, described in European applications 0 496 630, 0 496 631, in particular, 2-cyano-3-cyclopropyl-1 -(2-502 CH3-4-SE3-phenyl) propane-1,3-dione and 2-cyano-33-cyclopropyl-1-(2-5O» CH3-4-2-, ЗСИ» -phenyl) propane - 1,3-dione, triketones, described in European applications and 625 505 and 0 625 508, in particular, sulcotrione.
Нарешті, об'єктом винаходу є спосіб прополювання рослин, особливо культурних рослин, за допомогою гербіцида цього типу, в якому цим гербіцидом обробляють трансформовані відповідно до винаходу рослини перед посівом, до проростання і після проростання культури.Finally, the object of the invention is a method of weeding plants, especially cultivated plants, with the help of a herbicide of this type, in which plants transformed according to the invention are treated with this herbicide before sowing, before germination and after germination of the crop.
Об'єктом винаходу є застосування гена ГФПД, як гена-маркера під час циклу "трансформація-регенерація" рослинного виду та селекції на вказаному вище гербіциді.The object of the invention is the application of the GFPD gene as a marker gene during the "transformation-regeneration" cycle of a plant species and selection on the above-mentioned herbicide.
Наведені нижче приклади ілюструють даний винахід, не обмежуючи його об'єм.The following examples illustrate the present invention without limiting its scope.
ПРИКЛАД 1 Виділення гену ГФПД із Р.Поогезсепз АЗ2EXAMPLE 1 Isolation of the GFPD gene from R. Poogezsepz AZ2
Виходячи із послідовності амінокислот ГФОД Реепдотопавх 5р.Р.).874 (опубліковано Ниеєївснпі Ш. еї аї. 1992. Еиг. У. Віоспет. 205:459-466) виділяють послідовність різноманітних олігонуклеотидів для ампліфікації шляхом ПЛР частини послідовності, що кодує ГФПД Р.ПМогезсепе АЗ2 (виділеної Мак Келларом Р.К., 19829.Аррі! Васіепо!. 53:305-316). Ампліфікуючий фрагмент гена цього ГФПД використовують для скринінга неповного банка генів Р.Поогезсепе АЗа2 та виділення таким чином гена, що кодує цей фермент.Based on the sequence of amino acids GFOD Reepdotopavkh 5r.R.).874 (published by Nieeyivsnpi Sh. ei ai. 1992. Eig. U. Viospet. 205:459-466) isolate the sequence of various oligonucleotides for amplification by PCR of the part of the sequence encoding GFPD R .PMogezsepe AZ2 (separated by McKellar R.K., 19829. Arri! Vasiepo!. 53:305-316). The amplifying fragment of the gene of this GFPD is used for screening the incomplete gene bank of R. Poogezsepe AZa2 and thus isolating the gene encoding this enzyme.
А) Одержання геномної ДНК із Р.Пиогезсепе АЗ2.A) Obtaining genomic DNA from R. Piogesepe AZ2.
Бактерію культивують в 40 мл мінімального середовища Мб63 (КН5е Роз 13,6 г/л (МН 4)2 ЗО 2 г/л, Ма5О4 0,2 г/л, Ре5Ох 0,005 г/л, рН-7 плюс І-тирозин 10 мМ як єдиного джерела вуглецю) при 28" С протягом 48 годин.The bacterium is cultivated in 40 ml of minimal medium Mb63 (KH5e Roz 13.6 g/l (MH 4)2 ZO 2 g/l, Ma5O4 0.2 g/l, Re5Ox 0.005 g/l, pH-7 plus I-tyrosine 10 mm as the only source of carbon) at 28" C for 48 hours.
Після промивання, клітини оброблюють 1 мл лізуючого буфера (їв НОСІЇ 100 мМ, рн-8,3; Масі 1,4 М таAfter washing, the cells are treated with 1 ml of lysis buffer (100 mM MEDIA, pH 8.3; Mass 1.4 M and
ЕДТА 10 мМ) та інкубують 10 хв. при 65"С. Після обробки сумішшю фенол/хлороформ (24/1) і обробки хлороформом, нуклеїнові кислоти осаджують шляхом додавання певного об'єму ізопропанолу, потім оброб- ляють 300 мкл стерильної води, потім 10 мкг/мл РНКазою. ДНК знову обробляють сумішшю фенолу з хлороформом, хлороформом і знову осаджують додаванням 1/10 об'єму ЗМ ацетату натрію, рН. і 2 об'ємів етанолу. Потім ДНК обробляють стерильною водою і аналізують.EDTA 10 mm) and incubate for 10 min. at 65"C. After treatment with a mixture of phenol/chloroform (24/1) and treatment with chloroform, nucleic acids are precipitated by adding a certain volume of isopropanol, then treated with 300 μl of sterile water, then with 10 μg/ml of RNase. The DNA is treated again with a mixture of phenol and chloroform, chloroform and precipitated again by adding 1/10 volume of 3M sodium acetate, pH. and 2 volumes of ethanol. Then the DNA is treated with sterile water and analyzed.
Б) Вибір олігонуклеотидів та синтезівB) Selection of oligonucleotides and syntheses
Виходячи з послідовності амінокислот ГФПД, що виділяються із Рзендотопаз 5р.Р.). 874, вибирають п'ять олігонуклеотидів, із яких два орієнтовані в напрямку від МН» - кінця білка до СООН - кінця, а три орієнтовані в зворотному напрямі (див. фіг. 1). Вибір олігонуклеотидів грунтується на двох наступних правилах: - 3-кінець олігонуклеотида є незмінним, принаймні, дві його основи; - найбільш слабке переродження.Based on the sequence of amino acids of GFPD isolated from Rzendotopaz 5r.R.). 874, select five oligonucleotides, of which two are oriented in the direction from the MH end of the protein to the COOH end, and three are oriented in the opposite direction (see Fig. 1). The selection of oligonucleotides is based on the following two rules: - the 3-end of the oligonucleotide is unchanged, at least two of its bases; - the weakest regeneration.
Вибрані олігонуклотиди мають такі послідовності:The selected oligonucleotides have the following sequences:
РІ1:ІБ'ТА(С/Г)БА(О/А)АА(С/Т)ССІАТОаВОЗ: рРо'ЯАД(С/ААСІВаІССТАТаСАВ:RI1:IB'TA(S/G)BA(O/A)AA(S/T)SSIATOaVOZ: rRo'YAAD(S/AASIVaISSSTATaSAV:
РУ:БЧС/)ТОСАТІД(О/АДА(СТО(СИРОВ"RU:BChS/)TOSATID(O/ADA(STO(SYROV)
РА:Б'АЛІССІАС(С/АУТО(С/Т)ТОТ/З/ААТІССЗ: рЕБ'ЯЄССЛ)ТТА/ОАААС) ІСТ С/ УСС"RA: B'ALISSIAS (S/AUTO(S/T)TOT/Z/AATISSZ: rEBYAESSL)TTA/ОАААС) IST S/USS"
Їх синтезують на синтезаторі "Сусіопе ріиз ОМА Зупіпевігег" марки "МІ ОРОВЕ".They are synthesized on the synthesizer "Susiope riiz OMA Zupipeviheg" of the "MI OROVE" brand.
Фрагменти ампліфікації, що утворюються з цими п'ятьма олігонуклиотидами шляхом ПЛР, які теоретично повинні бути отримані за прикладом послідовності М1, мають наступні розміри: з праймерами РІ та Р2 близько 690 п.о., з праймерами РІ та РА близько 720 п.о. з праймерами РІ та Р5 близько 1000 п.о. з праймерами Р2 та РЗ близько 390 п.о. з праймерами Р2 та Р4 близько 420 п.о. з праймерами Ра та Р5 близько 700 п.о.Amplification fragments formed with these five oligonucleotides by PCR, which theoretically should be obtained according to the example of the M1 sequence, have the following sizes: with primers RI and P2 about 690 p.p., with primers RI and RA about 720 p.p. . with primers RI and P5 about 1000 p.o. with primers P2 and RZ about 390 p.o. with primers P2 and P4 about 420 p.o. with primers Ра and Р5 about 700 p.o.
В) Ампліфікація кодуючої частини ГФПД із Р.Порогезсеп5 АЗ2C) Amplification of the coding part of GFPD from R. Porogezsep5 AZ2
Ампліфікації здійснюють на установці ПЛР РЕАКІМ ЕІ МЕНЯ 9600, шляхом Тад полімерази РЕНКІМ ЕІ МЕН з її буфером в стандартних умовах, тобто для 50 мкл реакційної суміші беруть 200 мкм амМтТА, 20 мкм праймерів, 2,5 одиниць Тад полімерази та 2,5 мкг ДНК із Р.Пирогезсепв АЗ2.Amplification is carried out on the REAKIM EI MENYA 9600 PCR unit, by Tad polymerase RENKIM EI MEN with its buffer under standard conditions, that is, for 50 μl of the reaction mixture, take 200 μm of amMtTA, 20 μm of primers, 2.5 units of Tad polymerase and 2.5 μg of DNA from R. Pirogezsepv AZ2.
Використовують програму ампліфікації: 5 хв. при 957С, потім 35 циклів (45 сек. при 957С, 45 сек. при 497С, 1 хв. при 72" С), далі, 5 хв. при 7270.Use the amplification program: 5 min. at 957C, then 35 cycles (45 sec. at 957C, 45 sec. at 497C, 1 min. at 72"C), further, 5 min. at 7270.
В цих умовах всі одержані фрагменти ампліфікації мають розміри, порівняні з наведеними вище теоретичними розмірами, що є чіткою вказівкою на специфічність ампліфікацій.Under these conditions, all the obtained amplification fragments have sizes comparable to the above theoretical sizes, which is a clear indication of the specificity of the amplifications.
Фрагменти ампліфікації, одержані за участю праймерів Р1/Р4, Р1/Р6 та Рг/Р4 лігують з рВ5І! 5К(-) після розщеплення цієї плазміди за допомогою Есо ВАМ та обробки термінальною трансферазою в присутності даттР, як описано НОЇ ТОМ ТА та ОВАНАМ М.М. 1991.М.А.В. мої.19, М 5 р1156.Amplification fragments obtained with the participation of primers P1/P4, P1/P6 and Pg/P4 are ligated with pB5I! 5K(-) after cleavage of this plasmid with Eso VAM and treatment with terminal transferase in the presence of dattR, as described by NOI TOM TA and OVANAM MM. 1991. M.A.V. my.19, M 5 p1156.
Клон кожного із трьох типів частково секвенують, це дозволяє підтвердити, що в трьох випадках дійсно ампліфікували частину, кодуючу ГФПД Р.Пйиогезсепе АЗ2. Фрагмент Р1/Р4 використовують як зонд для скринінга неповного оанку генів Р.ЙПногезсепв АЗ2 й виділяють повний ген ГФПД.The clone of each of the three types is partially sequenced, which allows us to confirm that in three cases the part coding for the GFPD of R.Piogessepe AZ2 was indeed amplified. The P1/P4 fragment is used as a probe for screening the incomplete OANK of P. YPnogezsepv AZ2 genes and isolates the complete GFPD gene.
За допомогою саузерн-блоттінса визначають, що фрагмент із 7 т.п.о. після перетравлення ДНКWith the help of Southern blotting, it is determined that the fragment from 7 t.p.o. after DNA digestion
Р.Пногезсеп5 АЗ2 рестрикційним ферментом Ватні гібридизується із зондом ГФПД Р1/Р4. Розщеплюють 400 мкг ДНК Р.йногезсепе АЗ2 рестрикційним ферментом Ватні і очищують на гелі агарози фрагменти ДНК, ве-R.Pnogezsep5 AZ2 is hybridized with the HFPD P1/P4 probe by Watney's restriction enzyme. 400 μg of DNA of R. inogezepe AZ2 are cleaved with Watni's restriction enzyme and the DNA fragments are purified on an agarose gel,
личиною близько 7 т.п.о.larva about 7 t.p.o.
Ці фрагменти лігують з рВ5І 5К(-), яка розщеплюється шляхом Ватні і де-фосфорилюється шляхом обробки лужною фосфатазою. Після трансформації в Е.соїї ОНІОБ, неповний банк генів піддають скринінгу зондом ГФПД Р1/РА.These fragments are ligated with pB5I 5K(-), which is cleaved by Watney and de-phosphorylated by treatment with alkaline phosphatase. After transformation into E. soybean ONIOB, the incomplete gene bank is subjected to screening with the HFPD P1/RA probe.
Позитивний клон виділяють і називають рАРА. Його спрощена карта приведена на фіг. 2. На цій карті вказано положення кодуючої частини гена ГФПД. Вона складається із 1077 нуклеотидів, які кодують 358 амінокислот (див. послідовність М1). ГФПД Р.Пногезсепз АЗ2 мають високу гомологію по амінокислотному складу зі штамом Рзепдотопаз 5р. Р.0.874, яка складає 9295 між цими двома білками (див. фіг. 3).A positive clone is isolated and called pARA. Its simplified map is shown in fig. 2. This map shows the position of the coding part of the HFPD gene. It consists of 1077 nucleotides, which encode 358 amino acids (see sequence M1). GFPD R. Pnogezsepz AZ2 have a high amino acid composition homology with the strain Rzepdotopaz 5r. P.0.874, which is 9295 between these two proteins (see Fig. 3).
ПРИКЛАД 2 Побудова двох химерних генівEXAMPLE 2 Construction of two chimeric genes
Для надання рослинам стійкості до гербіцидів, інгібуючим ГФПД, конструюють два химерних гена:To give plants resistance to herbicides that inhibit GFPD, two chimeric genes are constructed:
Перший включає кодуючу частину гена ГФПД Р.Пиогезсепз АЗ2. Під контролем подвійного гістонного промотора (Європейська заявка на патент М 0 507 698), за яким слідує енхансер, що посилює трансляцію вірусу тютюнової мозаїки (ТЕМ) (рАТІ-505 (Сагпіпдіюоп апа Егеєд, 1990; У.Мігої. 64: 1590-1597)) з термі-натором гена нопалінсинтази. ГФПД при цьому буде локалізуватися в цитоплазмі.The first includes the coding part of the GFPD gene of R. Piogezsepz AZ2. Under the control of a double histone promoter (European patent application M 0 507 698), followed by an enhancer that enhances the translation of the tobacco mosaic virus (TEM) (pATI-505 (Sagpiop apa Egeed, 1990; U. Migoi. 64: 1590-1597 )) with the terminator of the nopaline synthase gene. At the same time, HFPD will be localized in the cytoplasm.
Другий подібний до першого, з тією різницею, що між активатором трансляції ТЕМ та кодуючою частиноюThe second is similar to the first, with the difference between the TEM translation activator and the coding part
ГФПД вмонтовують пептид для оптимізації переноса (ОТР) (Європейська заявка М 0 508 909). При цьомуGFPDs incorporate a transport optimization peptide (OTP) (European application M 0 508 909). With
ГФПД буде локалізуватися в хлоропласті.GFPD will be localized in the chloroplast.
А) Побудова вектора РАРА-НО-153: - РАРА-НО-11: похідна рАВ5-11 5К(-) (Бігаїадепе саїаюд М 212206), що містить сайт поліаденілювання нопалинсинтази (МОБ роїу А) (Європейська заявка на патент М 0652 286) , клонують між сайтами Крпі та Заїї.A) Construction of vector РАРА-НО-153: - РАРА-НО-11: a derivative of rАВ5-11 5К(-) (Bigaiadepe saiyaud M 212206), containing the polyadenylation site of nopaline synthase (MOB roiu A) (European patent application M 0652 286 ) , are cloned between the Krpi and Zaiya sites.
Сайт Крпі трансформують в сайт МоїЇ шляхом обробки за допомогою ТА ДНК полімерази І! в присутності 150The Krpi site is transformed into the My site by processing with TA DNA polymerase I! in the presence of 150
МКМ дезоксинуклеотидтрифосфатів, потім лігують з лінкером Мої! (бігаїадепе саїаюд М 1029). Таким чином, одержують касету клонування МО5 роїу А. - РАРА-НО-127: похідна рРАРА-ВІ -466 (Європейська заявка на патент М 0 337 899) клонують в РАРА-НО-11 з одержанням касети експресії гена оху та вмістом промотору малої субодиниці рибулози-бікарбоксилази: "промотор (551) - оху ген - МО5 роїу А".MKM of deoxynucleotide triphosphates, then ligated with the linker Moi! (bigaiadepe saiyayud M 1029). Thus, the cloning cassette of MO5 roiu A is obtained. - PARA-HO-127: a derivative of pRARA-VI -466 (European patent application M 0 337 899) is cloned into PARA-HO-11 with the receipt of an expression cassette of the ohu gene and the content of the promoter of the small ribulose-bicarboxylase subunits: "promoter (551) - okhu gene - MO5 roiu A".
Для створення цієї плазміди, РРАА-ВІ -488 обробляють Хваї та Ніпаїй! для виділення фрагмента 1,9 т.п.о., що містить промотор 55Ї та ген оху, який лігу«ое з плазмідою рАРА-ВО-11, обробленої відповідними ферментами. - РАРА-НО-132: її одержують із РАРА-ВІ -488 (Європейська заявка на патент М 0 507 698) клонуванням в рРАРА-НО-127 із створенням касети експресії гена оху з подвійним гістонним промотором: "подвійний гестонний промотор - оху ген МО5 роїу А"To create this plasmid, RRAA-VI -488 is processed by Hwai and Nipai! for the isolation of a 1.9 kbp fragment containing the 55Y promoter and the Okh gene, which is ligated with the pARA-BO-11 plasmid treated with the appropriate enzymes. - РАРА-НО-132: it is obtained from РАРА-ВИ -488 (European patent application M 0 507 698) by cloning into pРАРА-НО-127 with the creation of an expression cassette of the оху gene with a double histone promoter: "double histone promoter - оху gene MO5 swarm A"
Для одержання цієї плазміди, РАРА-ВІ -466 розщеплюють НіпаїйІ, обробляють фрагментом Кленова, потім знову розрізають за допомогою МсоЇ. Очищений фрагмент довжиною 1,35 т.п.о. що вміщує подвійний гістонний промотор НЗА748, лігують з плазмідою рАРА-НО-127, яка була оброблена Хваї, фрагментомTo obtain this plasmid, RARA-VI -466 is cleaved with NipaiI, treated with the Klenov fragment, then cut again with McoI. The purified fragment with a length of 1.35 t.p.o. containing the double histone promoter NZA748, ligated with plasmid pARA-HO-127, which was treated with Hwai, fragment
Кленова й піддана вдруге розщепленню за допомогою Мео1. - РАРА-НО-153: одержують із РАРА-НО-132, яка містить активатор трансляції вірусу гравіровки тютюну (ТЕМ). РАТІ-С05 (Саїгтіпдюп апа Егеєд, 1990; 9У.Мігої. 64: 1590-1597) обробляють Мсо! та ЕсоВі, фрагмент 150 п.о. лігують із РАРА-АО-132, розщепленої тими ж самими ферментами. Таким чином одержують касету експ- ресії, яка містить промотор: "подвійний гістонний промотор - ТЕ/ - оху ген МОБ роїу А".Maple and subjected to a second cleavage with the help of Meo1. - PARA-HO-153: obtained from PARA-HO-132, which contains the tobacco engraving virus (TEM) translation activator. RATI-S05 (Saigtipdyup apa Egeyed, 1990; 9U. Migoi. 64: 1590-1597) process Mso! and EsoVi, a fragment of 150 p.o. ligate with PARA-AO-132 cleaved by the same enzymes. In this way, an expression cassette is obtained, which contains the promoter: "double histone promoter - TE/ - okhu gene MOB roiu A".
Б) Побудова вектора РАРА-НО-185 риС19/ЗЕСА: виділяють із рОС-19 ((3ірсо сайаюд М 15364011), яка містить велику кількість сайтів клонування. рисС-19 обробляють ЕсовВІ й лігують із олігонуклеотидним лінкером 1:B) Construction of the vector RARA-NO-185 рыС19/ЗЕСА: isolated from рОС-19 ((3irso sayayud M 15364011), which contains a large number of cloning sites. рыС-19 is treated with EsovVI and ligated with oligonucleotide linker 1:
Лінкер 1: ААТТаСОССА СОТСАСОССОТ ТТАААСССТА ССОсСОСССОаLinker 1: ААТТаСОССА СОТСАСОССОТ TTAAАССТА ССОсСОСССОа
ССсСват СсАСТоСООсСА ААТТТООСАТ СССССОСОС ТТААSSsSvat SsASToSOOsSA AATTTOOSAT SSSSSSOSOS TTAA
Відібраний клон містить сайт ЕсоВі, за яким йде полілінкер, що містить такіч сайти: ЕсоВіІ, Араї, Ам, Рітеї, 5ІЇ, Зай, Крпі, Зтаї, Ватні, Хваї, Заї!, Ра), ри! та Ніа|.The selected clone contains an EsoVi site, followed by a polylinker containing the following sites: EsoViI, Arai, Am, Ritei, 5II, Zai, Krpi, Ztai, Vatni, Khvai, Zai!, Ra), ry! and Nia|.
РАРА-НАО-185: одержують із риС19/ЗЕСА, що містить модифікований полілінкер. рАРА-НО-185: розрізають з НіпайІ та лігують із олігонуклеотидним лінкером 2.RARA-NAO-185: obtained from ryС19/ZESA containing a modified polylinker. pARA-HO-185: cut with NipaI and ligated with oligonucleotide linker 2.
ЗОМ ТАМ СОУ ЦОZOM TAM SOU TSO
ЧЕ х МОДІ г ісликжхнкю подо союз хУУМуCHE x MODI g islykzhhnkyu podo union hUUMu
Відібраний клон містить сайт Ніпа!ї, розміщений в центрі полілінкера, що містить такі сайти: ЕсоВі, Араї,The selected clone contains the Nipa!i site located in the center of a polylinker containing the following sites: EsoVi, Arai,
АМГІЇ, Р теї, Бій, Зай, Крпі, Зтаї, Ватні, Хваї, Заї!, Ре), 5рпї, Ніпаї|ї, Рад, Авсі Хпої! та ЕхоМІ.AMGII, R tei, Bii, Zai, Krpi, Ztai, Vatni, Khvai, Zai!, Re), 5rpi, Nipai|i, Rad, Avsi Khpoi! and EchoMI.
В) Побудова вектора рАР т: -РАА о: похідна РАРА-НО-153, що містить касету експресії ГФПД, подвійний гістонний промотор - ТЕМ - ген ГФПД - термінатор Моз. Для одержання рАР 0, рАРА-НО-153 розрізають Ніпаї!ї, обробляють фрагментомB) Construction of the vector pAR t: -RAA o: a derivative of PARA-HO-153, containing the HFPD expression cassette, double histone promoter - TEM - HFPD gene - Moz terminator. To obtain pAR 0, pARA-NO-153, Nipai!i are cut, treated with a fragment
Кленова, потім знову обробляють Месо! для вирізання гена оху та його заміни геном ГФПД, що виділений із плазміди РАР шляхом переварювання В5ІЕЇЇ, обробки фрагментом Кленова та Меа |. - РАРА В: для його одержання, плазміду рРАР О обробляють Рмиї та Засі, химерний ген очищають, потім лігують з - РАРА НО-185, яка була розрізана за допомогою Рмці! та Засі. - РАР Т: його одержують лігуванням химерного гена, виділеного із рАР В після його обробки Засі та Ніпагйії в плазміді - РАРА-ВІ 150 альфа 2, розщепленій тими ж ферментами (Європейська заявка на патент ЕР МО 508 909).Klenova, then Meso is processed again! for excision of the ohu gene and its replacement with the HFPD gene isolated from the PAP plasmid by digestion of B5IEII, treatment with a fragment of Klenov and Mea |. - RARA B: to obtain it, the pRARA O plasmid is processed by Rmia and Zasi, the chimeric gene is purified, then ligated with - RARA NO-185, which was cut with the help of Rmtsi! and Zasi. - PAP T: it is obtained by ligation of a chimeric gene isolated from pAP B after its processing by Zasi and Nipagiya in a plasmid - PAP-VI 150 alpha 2, cleaved by the same enzymes (European patent application EP MO 508 909).
Химерний ген вектора рАР Т має, таким чином, таку структуру:The chimeric gene of the pAP T vector thus has the following structure:
Подвійний Кодуюча Термінатор гістнонний ТЕМ область ГФПД пов промоторDual Coding Terminator histological TEM region of the GFPD pov promoter
Г) Побудова вектора рАР МD) Construction of vector pAR M
- РАР Р: одержують із -РАРА-НО-7 (Європейська заявка на патент М 0652 286), що містить пептид оптимізованого переносу, за яким йде ген ГФПД. Його одержують лігуванням кодуючої частини ГФПД, вилученої із ВАР А розрізанням за допомогою В5іЕЇЇ та Мсо!Ї, обробкою фрагментом Кленова та плазміди -- PAP R: obtained from -PAP-HO-7 (European patent application M 0652 286), which contains a peptide of optimized transfer, followed by the HFPD gene. It is obtained by ligation of the coding part of HFPD, extracted from VAR A by cutting with the help of B5iEII and Mso!I, treatment with the Klenov fragment and plasmid -
РАРА-НО-7, розщепленої за допомогою 5рпП! та Ассі й обробленої ДНК-азою полімера-зи Т4. - РАР 0: одержують із -РАР А-КО-153, що містить касету експресії ГФПД, подвійний гістонний промотор -RARA-NO-7 split with 5rpP! and Assi and DNAse-treated polymerase T4. - PAP 0: obtained from - PAP A-KO-153, containing the GFPD expression cassette, double histone promoter -
ТЕМ - ОТР - ген ГФПД - термінатор Моз. Для його побудови плазміду -РАРА-АО-153 обробляють гаї, фрагментом Кленова, потім знову розрізають МсоЇ для видалення гена оху та його заміни геном ГФПД, виділеним із плазміди -рАР Р шляхом обробки Вз5іЕЇїЇЇ, фрагментом Кленова та повторною обробкою Мео). - РАР 5: одержують тим, що плазміду - ВРАВР ОО розщеплюють за допомогою Рмці та Засі для вилучення химерного гена, який лігує з РАРА-АО-185, який сам розщеплений за допомогою Рмці! та Засі. - РАР М: його одержують шляхом лігування химерного гена, вилученого із РАР 5 після розщеплення за допомогою 5асі та Ніпайї, із плазмідою рРАРА"ВІ. 150 альфа 2 (Європейська заявка на патент М 0 508 90).TEM - OTR - gene GFPD - terminator Moz. For its construction, the plasmid -PARA-AO-153 is treated with the Klenov fragment, then the McoY is cut again to remove the Okh gene and replace it with the GFPD gene, isolated from the -pAR P plasmid by treatment with Bz5iEiYII, the Klenov fragment and repeated treatment with Meo). - PAP 5: obtained by cleaving the plasmid - VRAVR OO with the help of Rmtsi and Zasi to extract the chimeric gene that ligates with PARA-AO-185, which itself is cleaved with the help of Rmtsi! and Zasi. - PAP M: it is obtained by ligation of the chimeric gene extracted from PAP 5 after cleavage with 5asi and Nipaya, with the plasmid pPARA"VI. 150 alpha 2 (European patent application M 0 508 90).
Химерний ген вектора реАР о має, таким чином, таку структуру:The chimeric gene of the reAR vector has the following structure:
Подвійний . - Кодуюча Термінатор промотор гістнонний ТЕМОТР: область - повDouble. - Coding Terminator promoter histone TEMOTR: area - level
ГФПДGFPD
ПРИКЛАД З Трансформація промислового тютюну РВОбEXAMPLE C Transformation of industrial tobacco RVOb
Для визначення ефективності цих двох химерних генів їх переносять до промислового тютюну РВОбЄ у відповідності з методами трансформації й регенерації, вже описаними в європейській заявці на патент М 0508 909. 1) Трансформаціямація:In order to determine the effectiveness of these two chimeric genes, they are transferred to industrial tobacco RVObE in accordance with the transformation and regeneration methods already described in the European patent application M 0508 909. 1) Transformation:
Вектор вводять в неонкогенний штам Адгобрасіегцйт ЕНА 101 (Нооа еї аї, 1987), що несе косміду РТГУК291 (Котаї!і та ін., 1986). Спосіб трансформації заснований на методі НогеП В. та ін. (1985), бсіепсе, 227, 1229- 1231. 2) Регенерація:The vector is introduced into the non-oncogenic strain Adhobrasiegcyt ENA 101 (Nooa ei ai, 1987), which carries the RTGUK291 cosmid (Kotai!i et al., 1986). The method of transformation is based on the method of V. NogeP et al. (1985), bsiepse, 227, 1229-1231. 2) Regeneration:
Регенерація тютюну РВОбЄ (походження; 5ЕЇТА,. Франція) із листкових експлантатів здійснюється на основному середовищі Мигазпіде та 5Коод (М5), що включає ЗО мг/л сахарози, а також 200 мкг/мл канаміцину. Листкові експлантати відбирають у тепличних рослин або рослин іп міго й трансформують за методом листкових дисків (бсієпсе 1985, т. 227, б. 1229-1231) в три послідовні стадії: перша включає індукцію проростання на основному середовищі М5, в яку добавлено ЗО г/л сахарози, яка містить 0,05 мг/л нафтилоцтової кислоти (НУК) та 2 мг/л бензиламінопурина (БАП), протягом 15 днів. Паростки, що з'явилися в процесі цієї стадії, потім культивують на середовищі М5, в яке добавлено ЗО г/л сахарози і яке не містить гормону, протягом 10 днів. Потім відбирають паростки, що розвинулися, і культивують їх на середовищі укорінення М5, яке складається наполовину із солей, вітамінів та сахарів і не містить гормону. Через приблизно 15 днів паростки, що вкоренилися, пересаджують у землю.Regeneration of RVObE tobacco (origin; 5EITA,. France) from leaf explants is carried out on the basic medium of Migazpide and 5Kood (M5), which includes 30 mg/l of sucrose, as well as 200 μg/ml of kanamycin. Leaf explants are taken from greenhouse plants or ip migo plants and transformed by the method of leaf disks (bsiepse 1985, vol. 227, p. 1229-1231) in three successive stages: the first includes the induction of germination on the main M5 medium, to which 30 g/ l of sucrose, which contains 0.05 mg/l naphthylacetic acid (NAA) and 2 mg/l benzylaminopurine (BAP), for 15 days. Sprouts that appeared during this stage are then cultivated on M5 medium, to which 30 g/l of sucrose is added and which does not contain the hormone, for 10 days. The developed sprouts are then selected and cultured on M5 rooting medium, which consists of half salts, vitamins and sugars and contains no hormone. After about 15 days, the rooted sprouts are transplanted into the ground.
ПРИКЛАД 4EXAMPLE 4
Вимірювання толерантності тютюну до 4-І(4-СЕз-2(метилсульфоніл)бензоїіл|-5-циклопропілізоксазолу: обробка після проростанняMeasurement of tolerance of tobacco to 4-I(4-SEz-2(methylsulfonyl)benzoyl|-5-cyclopropylisoxazole: treatment after germination
Одержані іп міо трансформовані проростки тютюну акліматизують в теплиці (відносна вологість: 60905, температура: 207С вночі та 23"С вдень) протягом п'яти тижнів, потім обробляють за допомогою 4-І4-СЕз-2- іІметилсульфонілу)бензоілу|-5-циклопропілізоксазолом.The resulting ip myo transformed tobacco seedlings are acclimatized in a greenhouse (relative humidity: 60905, temperature: 207C at night and 23"C during the day) for five weeks, then treated with 4-I4-SEz-2- iMethylsulfonyl)benzoyl|-5- cyclopropylisoxazole.
У випадку контрольних, нетрансформованих, тютюнових рослин, і оброблених 4-(4-СЕз-2- (метилсульфоніл) бензоіл|-5-циклопропілізоксазола в кількості від 50 до 400 г/га, приблизно за 72 години розвиваються хлорози, які посилюються з еволюційним розвитком до дуже різко виражених некрозів за тиждень (що захоплює близько 8095 кінцевих листків).In the case of control, untransformed, tobacco plants, and those treated with 4-(4-SEz-2-(methylsulfonyl)benzoyl|-5-cyclopropylisoxazole in amounts from 50 to 400 g/ha), chlorosis develops in about 72 hours, which intensifies with evolutionary development to very pronounced necroses in a week (which captures about 8095 terminal leaves).
Після трансформації ті ж самі тютюнові рослини, які надекспресують ГФПД Р. Поогезсеп5, дуже добре захищені проти обробки 4-І4-СЕз-2-(метилсульфоніл) бензоіл|-5-циклопропілілзоксазолом в кількості 400 г/га.After transformation, the same tobacco plants overexpressing GFPD R. Poogezsep5 are very well protected against treatment with 4-I4-CE3-2-(methylsulfonyl)benzoyl|-5-cyclopropylylsoxazole in the amount of 400 g/ha.
Якщо надекспресований фермент знаходиться в цитоплазмі, тобто, якщо трансформацію здійснюють за допомогою гена, який переноситься вектором ч. рАР, тоді рослина має дуже невеликі хлорози, локалізовані на проміжних листках.If the overexpressed enzyme is in the cytoplasm, that is, if the transformation is carried out with the help of a gene carried by the pAP vector, then the plant has very small chlorosis localized on the intermediate leaves.
Якщо надекспресований фермент знаходиться в хлоропласті, тобто якщо трансформацію здійснюють за допомогою гена, який переноситься вектором рАР У, то в цьому випадку рослина чудово захищена і не має ніяких симптомів.If the overexpressed enzyme is in the chloroplast, that is, if the transformation is carried out with the help of a gene that is carried by the pAR U vector, then in this case the plant is perfectly protected and does not have any symptoms.
ПРИКЛАД 5EXAMPLE 5
Визначення толерантності тютюну до 4-(4-СЕз-2-(метил-сульфоніл) бензоіл|-5-циклопропілизоксазолу: обробка перед проростанням а) тест іп міно:Determination of tolerance of tobacco to 4-(4-SEz-2-(methyl-sulfonyl)benzoyl|-5-cyclopropylisoxazole: treatment before germination a) test and mino:
Використовують насіння тютюну, зібраного з рослин, що походять із циклу "трансформація-регенерація", стійких до обробки листків ізоксафлутолом в кількості 400 г/га, описаних в прикладах 1-3.Tobacco seeds collected from plants originating from the "transformation-regeneration" cycle, resistant to the treatment of leaves with isoxaflutol in the amount of 400 g/ha, described in examples 1-3, are used.
Це насіння висівають в ящики, які містять фітагар в кількості 10 г/л й ізокса-флутол у різній концентрації від 0 до 1 мг/л. Пророщування проводять потім при температурі 2573 з фотоперіодом 12 годин - світло/12 годин - темнота.These seeds are sown in boxes containing phytagar in the amount of 10 g/l and isoxa-flutol in different concentrations from 0 to 1 mg/l. Germination is then carried out at a temperature of 2573 with a photoperiod of 12 hours - light/12 hours - darkness.
У відповідності до цього протоколу, пророщують насіння дикого тютюну, а також насіння обох типів трансгенного тютюну, тобто тютюну СУ з локалізацією ГФПД в цитоплазмі і тютюну із локалізацією ГФПД в хлоропласті.In accordance with this protocol, seeds of wild tobacco, as well as seeds of both types of transgenic tobacco, i.e. SU tobacco with GFPD localization in the cytoplasm and tobacco with GFPD localization in the chloroplast, are germinated.
Визначення стійкості проводять візуально між 2 та З тижнями після висівання.Determination of resistance is carried out visually between 2 and 3 weeks after sowing.
Результати наводяться в наступній таблиці.The results are shown in the following table.
Концентрація Дикий Тотюнсу Тютюн СО ізоксафлутолу тютюнConcentration of Wild Tobacco Tobacco CO isoxaflutol tobacco
10095 10095 10095 насіння насіння насіння10095 10095 10095 seed seed seed
О мг/л проростає проростає проростає без без без симптомів симптомів" симптомів 209 0 05 мг/п насіння 75905 насіння 7590 насіння ' проростає проростає? проростає і має без без симптоми" симптомів симптомів" 7595 насіння 7595 насіння 01 мг/л сходи. проростає?" проростає" відсутні без без симптомів" симптомів" 7595 насіння 7595 насіння 0,5 мг/л сходи. проростає?" проростає" відсутні без без симптомів" симптомів" 7595 насіння 7595 насіння сходи проростає?" проростає" 1 мг/л : : З З відсутні невеликими невеликими симптомами"симптомами" "симптоми, які мають паростки в ході проростання, являють собою деформацію більш-менш великих сім'ядолей і особливо знебарвлення, звичайно фотосинтетичних і, отже, зелених тканин. -- 7590 насіння проростає, оскільки висівають насіння, що проходить від самозапилення монолокусних рослин, одержаних із циклу "трансформація-регенерація", отже, таких, що не несуть ген толерантності на хромосомі.O mg/l germinates germinates germinates without without without symptoms symptoms" symptoms 209 0 05 mg/p seeds 75905 seeds 7590 seeds ' germinates germinates? germinates and has without without symptoms" symptoms symptoms" 7595 seeds 7595 seeds 01 mg/l seedlings. germinates ?" germinates" absent without without symptoms" symptoms" 7595 seeds 7595 seeds 0.5 mg/l seedlings. germinates?" germinates" absent without without symptoms" symptoms" 7595 seeds 7595 seeds seedlings germinates?" germinates" 1 mg/l : : Z Z absent small small symptoms"symptoms" "symptoms that sprouts have during germination are deformation of more or less large cotyledons and especially discoloration, usually photosynthetic and, therefore, green tissues. -- 7,590 seeds germinate because they sow seeds that pass through self-pollination of monolocus plants obtained from the "transformation-regeneration" cycle, that is, those that do not carry the tolerance gene on the chromosome.
Діючи таким же чином, при використанні продукту Ме51 із патенту США 4 780 127 одержують такі ж результати при концентрації 0 мг/л та 0,1 мг/л у випадку дикого тютюну та тютюну СО.Acting in the same way, using the Me51 product of US Patent 4,780,127 gives the same results at 0 mg/L and 0.1 mg/L in the case of wild tobacco and CO tobacco.
Діють так само, як у прикладі 4, лише здійснюють обробку перед сходами за 24 години до посіву. Дикий посів здійснюють звичайним способом. В цих умовах спостерігають, що у випадку необроблених контрольних посівів немає проростання при будь-якій дозі гербіциду, що принаймні дорівнює 10 г/га. Навпаки, тютюнові рослини СУ не мають ніяких симптомів, як визначено в параграфі а), до 100 г/га включно. Також тютюнові рослини СО не мають ніяких симптомів, як визначено в параграфі а), до 200 г/га включно. Ці результати ясно свідчать, що ген ГФПД Р. Ппогезсепе надає тютюну толерантність проти попередніх обробок перед сходами ізоксафлуктолом. Ця толерантність вища, якщо протеїн локалізується в хлоропласті, а не в цитоплазмі.They act in the same way as in example 4, only they carry out pre-emergence treatment 24 hours before sowing. Wild sowing is carried out in the usual way. Under these conditions, it is observed that in the case of untreated control crops there is no germination at any dose of herbicide, which is at least equal to 10 g/ha. In contrast, SU tobacco plants have no symptoms as defined in paragraph a), up to and including 100 g/ha. Also, CO tobacco plants do not have any symptoms, as defined in paragraph a), up to and including 200 g/ha. These results clearly indicate that the GFPD gene of R. Ppoghesepe confers tolerance to tobacco against isoxafluctol pre-emergence treatments. This tolerance is higher if the protein is localized in the chloroplast rather than in the cytoplasm.
Приклад 6Example 6
З метою дослідження того, чи може ген ГФПД із Р. Яиогезсеп5 бути використаний як ген-маркер під час циклу "трансформація-регенерація" рослинного виду, тютюн трансформують за допомогою гена ГФПД і трансформовані рослини одержують після селекції при використанні ізоксафлутола.In order to investigate whether the GFPD gene from R. Yaiogesep5 can be used as a marker gene during the "transformation-regeneration" cycle of a plant species, tobacco is transformed with the GFPD gene and transformed plants are obtained after selection using isoxaflutol.
Матеріали, методи та результатиMaterials, methods and results
Описаний нижче химерний ген - РАР М переносять в промисловий тютюн РВОб у відповідності з уже описаним в європейській заявці на патент 0 508 909 методами трансформації та регенерації.The chimeric gene described below - PAP M is transferred to industrial tobacco РВОб in accordance with the methods of transformation and regeneration already described in the European patent application 0 508 909.
Химерний ген вектора рАР У має таку структуру: поши Кодуюча й промотор стоннийТЕМ тА область ТермнаторThe chimeric gene of the pAR U vector has the following structure: poshi Coding and promoter stonnyTEM and A region Termnator
ГФПДGFPD
1) Трансформація;1) Transformation;
Вектор вводять в неонкогенний штам Адгобасіегпт ЕМА 101 (Нооса та ін., 1987), що несе косміду СТУК 291 (Котагїі та ін., 1986). Спосіб трансформації заснований на методиці Ноге та ін. (1985). 2) Регенерация:The vector is introduced into the non-oncogenic strain Adgobasiegt EMA 101 (Noosa et al., 1987), which carries the STUK 291 cosmid (Kotagii et al., 1986). The method of transformation is based on the method of Noge et al. (1985). 2) Regeneration:
Регенерацію тютюну РВОбЄ (походження СЕНА, Франція) із листкових експлантатів здійснюють на основному середовищі Мигазпіде та 5с009 (М5), що включає ЗО г/л сахарози, а також 350 мг/л цефотаксину і 1 мг/л ізоксафлутолу. Листкові експлантанти відбирають у тепличних рослин або рослин іп міо й трансформують способом листкових дисків (5сієпсе 1985, т. 227, б. 1229-1231) у три послідовних стадії: перша включає індукцію проростання на середовищі М5 з добавкою ЗОг/л сахарози, яка містить 0,05 мг/л нафтилоцтової кислоти (НОК), 2 мг/л бензиламінопурину (БАП) та 1 мг/л ізоксафлутолу протягом 15 днів. Зе- лені паростки, що з'явилися по ходу цієї стадії, потім культивують на середовищі МО з добавкою 30 г/л сахарози та 1 мг/л ізоксафлутола, але яке не містить гормону, протягом 10 днів. Потім відбирають паростки, що розвилися, й культивують їх на середовищі укорінення М5, яке складається наполовину із солей, вітамінів та сахарів й 1 мг/л ізоксафлутолу, яке не містить гормону. Через приблизно 15 днів паростки, що вкоренилися, пересаджують у землю.Regeneration of RVObE tobacco (origin SENA, France) from leaf explants is carried out on the basic medium of Mygazpide and 5c009 (M5), which includes 30 g/l of sucrose, as well as 350 mg/l of cefotaxine and 1 mg/l of isoxaflutol. Leaf explants are selected from greenhouse plants or ip myo plants and transformed by the method of leaf disks (5siepse 1985, vol. 227, p. 1229-1231) in three successive stages: the first includes the induction of germination on M5 medium with the addition of 30g/l of sucrose, which contains 0.05 mg/l naphthylacetic acid (NAC), 2 mg/l benzylaminopurine (BAP) and 1 mg/l isoxaflutol for 15 days. The green sprouts that appeared during this stage are then cultivated on MO medium supplemented with 30 g/l of sucrose and 1 mg/l of isoxaflutol, but which does not contain the hormone, for 10 days. The sprouts that have developed are then selected and cultured on M5 rooting medium, which consists of half salts, vitamins and sugars and 1 mg/l isoxaflutol, which does not contain the hormone. After about 15 days, the rooted sprouts are transplanted into the ground.
Всі одержані відповідно до цього протоколу паростки аналізують шляхом ПЛР при використанні специфічних праймерів ГФПД Р. Пиогезсепе. Цей аналіз шляхом ПЛР дозволяє підтвердити, що в усіх одержаних таким чином паростках добре інтегрований ген ГФПД.All sprouts obtained in accordance with this protocol are analyzed by PCR using specific primers HFPD R. Piogesepe. This PCR analysis allows us to confirm that the HFPD gene is well integrated in all sprouts obtained in this way.
І нарешті, цей іспит підтверджує, що ген ГФПД можна використати як ген-маркер і що разом з цим геном ізоксафлутол може служити гарним агентом селекції.Finally, this test confirms that the GFPD gene can be used as a marker gene and that, together with this gene, isoxaflutol can serve as a good selection agent.
Приклади 7 та 8Examples 7 and 8
Виділення гена ГФПД Агабідорзів (Наапа й гена ГФПД моркви (ЮОаисиз сагона)Isolation of the GFPD gene of Agabidorza (Naapa) and the GFPD gene of carrots (Juoaisiz sagona)
Матричні РНК, що екстраговані із молодих паростків Агарідорвів (Найіапа та матричні РНК, що екстрагованіMatrix RNAs extracted from young sprouts of Agaridorvya (Naiapa and matrix RNAs extracted
Із клітин культурної моркви, використовують для побудови двох банків КДНК у векторі Опі ар ТМ ХА, .що випускається в продаж фірмою Стратаген, у відповідності з протоколом, що пропонує ця фірма.Cultured carrot cells are used to construct two banks of cDNA in the Opiar TM XA vector, which is sold by Stratagen, in accordance with the protocol offered by this company.
Обидва ці банки піддають скринінгу за допомогою зонда, який відповідає КНДК Агабрідорвів ІНаїїапа неповної довжини, одержаної із Агарідорвів Віоіодіса!І НКезвоигсе Сепіге (Огайо, США) і яка має позначення:Both of these banks are screened with a probe that corresponds to the full-length Agabridorvy INaiiapa KNDC obtained from the Agaridorvy Viiodis!I NKezvoigse Sepige (Ohio, USA) and which is labeled:
Е5Т клон М 9181317. Цей клон складається приблизно із 500 пар основ, із яких лише 228 секвеновані в лабораторії дослідження рослин М5О-РОЕ у рамках секвенування у випадку компліментарних ДНКE5T clone M 9181317. This clone consists of approximately 500 base pairs, of which only 228 have been sequenced in the M5O-ROE plant research laboratory as part of complementary DNA sequencing
Агарідорвзіз ІНайапа. У відповідності до винаходу, секвено-вано повністю 500 пар основ до застосування цього клону для скринінга запропонованих у відповідності до винаходу банків КДНК Агабрідорвів ІПпаїїапа та моркви за допомогою звичайного способу гібридизації міст лізису (посилання?). в) Одержана кД НК Агабідорвів (Найапа (послідовність М 2), що відповідає 1338 парам основ. Ця КДНК включає ініціюючий початок трансляції кодон в положенні 25 та кодон кінця трансляції в положенні 1336. ЦяAgaridorvziz INayapa. In accordance with the invention, fully 500 base pairs were sequenced prior to the use of this clone for screening proposed in accordance with the invention of the cDNA banks of Agabridorvi IPpaiiapa and carrots using the usual method of hybridization of lysis bridges (reference?). c) Obtained cDNA of Agabidorviv (Nayapa (sequence M 2), which corresponds to 1338 base pairs. This cDNA includes the translation initiation codon at position 25 and the translation termination codon at position 1336.
КДНК є таким чином повною й кодує протеїн із 445 амінокислот. г) Одержана кДНК моркви (Оаисиз сагоца) (послідовність М 3), що відповідає 1329 парам основ. Ця КДНК включає ініціюючий початок трансляції кодон в положенні 1 та кодон кінця трансляції в положенні 1329. ЦяThe cDNA is thus complete and encodes a protein of 445 amino acids. d) Carrot cDNA (Oasis sagotsa) obtained (sequence M 3) corresponding to 1329 base pairs. This cDNA includes a translation initiation codon at position 1 and a translation termination codon at position 1329. This
КДНК є таким чином повною й кодує протеїн із 442 амінокислот.The cDNA is thus complete and encodes a protein of 442 amino acids.
Проілюстровані такі послідовності:The following sequences are illustrated:
Послідовність М 1: послідовність гена ГФПД Рзеидотопавз Пиогезсепв А 32;Sequence M 1: sequence of the gene GFPD Rzeidotopavz Pyogezsepv A 32;
Послідовність М 2:Sequence M 2:
Послідовність КДНК ГФПД із Агабідорвів (Наїапа;The cDNA sequence of GFPD from Agabidorvy (Naiapa;
Послідовність М 3:Sequence M 3:
Послідовність КДНК із Оайсаз сагойма.A cDNA sequence from Sagoima Oasis.
Нижче наводяться фігури з метою ілюстрації винаходу.Figures are provided below to illustrate the invention.
На фіг. 1 представлена білкова послідовність ГФПД із Рзендотопавх зр. штаму Р. 4). 874 та теоретична нуклеотидна послідовність відповідної кодуючої частини; п'ять олігонуклеотидів, вибраних для здійснення ампліфікації частини цієї кодуючої області, зображені п'ятьма стрілками.In fig. 1 presents the protein sequence of GFPD from Rzendotopavkh zr. strain R. 4). 874 and the theoretical nucleotide sequence of the corresponding coding part; five oligonucleotides selected to amplify part of this coding region are represented by five arrows.
На фіг. 2 представлена картографія плазміди з геномним фрагментом ДНК довжиною 7 т. н., яка містить ген ГФПД із Р. Пиогезсепев АЗ2.In fig. 2 shows a map of a plasmid with a genomic DNA fragment 7 tn in length, which contains the GFPD gene from R. Piogezsepev AZ2.
На фіг. З приведено порівняння амінокислотних послідовностей ГФПД із Р. Пиогезсепе АЗ2 та ГФПД ізIn fig. C shows a comparison of the amino acid sequences of GFPD from R. Piogezsepe AZ2 and GFPD from
Рзепдотопаз гр штаму Р. у. 874 (вказані лише амінокислоти з відмінностями між обома послідовностями), а також консенсусна послідовність.Rzepdotopaz gr strain R. u. 874 (only amino acids with differences between the two sequences are shown) as well as the consensus sequence.
Перелік послідовностей (1) Загальні відомості (І) Заявник: Зайапа Аїаїп, Роїїапа Аппе, Маїгпде, Міспеї, РаПек Кеппеїй Е. (ІЇ) Назва винаходу: Послідовність ДНК гена гідроксифенілпіруватдіоксигенази та одержання рослин, які містять цей ген гідроксифенілпіруватдіоксигенази, стійких до деяких гербіцидів. (І) Кількість послідовностей: З (ІМ) Адреса для кореспонденції, (а) адресат: Егапсоїв Спгейеп (б) вулиця: 14-20 ше Рієїте ВАІЛЕТ (в) місто: уоп Седех 09 (д) країна: Франція (Егапсе) (є) поштовий індекс: 69263 (М) Редактор на комп'ютері: (а) носій даних: дискета (б) комп'ютер: персональний комп'ютер, сумісний з машинами фірми ІБМ (в) операційна система: ПК-ДОС/МО-ДОС (г) програмне забезпечення: патентна редакція 2 1,0; версія Ж 1,25 (МІ) Відомості про подачу заявки: (а) номер заявки: ЕА РН 95033 (б) дата подання: 2 червня 1995 р. (в) класифікація: (МІ) Патентний повірений: (а) Ім'я: Егапсоїз Спгейеп (ІХ) Інформація про зв'язки: (а) Телефон: 72-29-26-42 (б) Телефакс: 72-29-28-43 (2) Відомості про послідовність М 1: (1) Характеристики послідовності: (а) довжина: 1077 пар основ (б) тип: нуклеїнова кислота (в) число ниток: двониткова (г) топологія: лінійна (ІЇ) Тип молекули: ДНК (геномна) (І) Гіпотетична: ні (ІМ) Антисмислова: ні (МІ) Першоджерело: (а) організм: Рзендотопаз Пиогевсепз (ХІ) Опис послідовності М 1:List of sequences (1) General information (I) Applicant: Zayapa Aiaip, Roiyapa Appe, Maigpde, Mispei, RaPek Keppei E. (II) Title of the invention: DNA sequence of the hydroxyphenylpyruvate dioxygenase gene and production of plants containing this hydroxyphenylpyruvate dioxygenase gene resistant to certain herbicides . (I) Number of sequences: З (IM) Address for correspondence, (a) addressee: Egapsoyiv Spgeyep (b) street: 14-20 şe Riyeite VAILET (c) city: uop Sedeh 09 (e) country: France (Egapse) ( e) zip code: 69263 (M) Editor on a computer: (a) data carrier: diskette (b) computer: personal computer compatible with IBM machines (c) operating system: PC-DOS/MO -DOS (d) software: patent edition 2 1.0; version Ж 1.25 (MI) Application information: (a) application number: EA RN 95033 (b) filing date: June 2, 1995 (c) classification: (MI) Patent attorney: (a) Name : Egapsoiz Spgeyep (IX) Contact information: (a) Telephone: 72-29-26-42 (b) Telefax: 72-29-28-43 (2) Information about sequence M 1: (1) Sequence characteristics : (a) length: 1077 base pairs (b) type: nucleic acid (c) number of strands: double-stranded (d) topology: linear (II) Type of molecule: DNA (genomic) (I) Hypothetical: no (IM) Antisense: no (MI) Primary source: (a) organism: Rzendotopaz Pyogevsepz (XI) Description of sequence M 1:
О-АМДИЕАСАТІ ТАТАСОАААХ СОСЛАТОСОС СТСАТООССТ ТТСАХТТСАТ СОЛАТТАЮСЯ вроO-AMDYEASATI TATASOAAAH SOSLATOSOS STSATOOSST TTSAHTTSAT SOLATTAYUYA vro
ЗОЛОТА СОБОТАСОПТ бОАбССбАТІ ТТІСАСАТІА ТапостТтАС САААОТІВСО 125GOLDEN SATURDAY BOABSSbATI TTISASATIA TapostTtAS SAAAOTIVSO 125
ВИТІАІІЗТТ ТІВАСААСОТ СтАССТОТАХ пОПСВОоосо ВОАХСАМССТ САТССТІЛАЄ. 180VITYAIIZTT TIVASAASOT STASSTOTAH pOPSVOooso VOAHSAMSST SATSSTILAE. 180
АДЕОЛОКИтА АСАОСАТССС СТСОТАСІТІ ОСОССССААС АебоОССЗТо шШОТОТосСоос 240ADEOLOKITA ASAOSATSSS STSOTASITI OSOSSSSSAAS AeboOSSSZTo shSHOTOTosSoos 240
ВІООСЧТТСІ БСОТСАЛОСА СТСбСАЛАН СОСТАСАМС себосстосх Астосососє 0300VIOOOSCHTTSI BSOTSALOSA STSbSALAN SOSTASAMS sebosstosh Astosososie 0300
САССССАТСІ АТАТІБАСАС СОСОСССАТО СААТЕСАЛСС ТОСССОСОАТ САЛОСОТАТО 3650 бОСООСосО СОТУТОТАССТ САТОбАСССТ ТРОБОСОЛАВ ССАССТСБАТХ СТАССАКАТС 420САССССАСТСИ АТАТИБАСАС СОСССССАТО СААТЕСАЛСС ТОСССОСОАТ САЛОСОТАТО 3650 бОСООСоСО SOTUTOTASST SATOBASSST ТРОБОСОЛАВ ССАССТСБАТХ STASSAKATS 420
САСТУСОТИТ АССТОСАВОЄ ТоТООЛОСОХ ААтссостоо СТОСАСОТСТ САЛАСТСАТО 480480
САССАССТУСА СССАСАЛСОТ СТАТСОСОСС СОСАТООТСТ АСТОСОССАА СТІСТАССАЄ 540SSASSASTUSA SSSSALSOT STATSOSOSS SOSATOOTST ASTOSOSSAA STISTASSAE 540
АЛАТТСТІСА АСТТСССТСА АСССССТТАС ТТССАТАТСА АПОСССАСТА САССССССТе 600.ALATTSTISA ASTTSSSTSSA ASSSSSSTTAS TTSSATATSA APOSSSASTA СASSSSSSTe 600.
АСІТССАМИІ ССАТСАСТОС ССССПАСООС АТСАТССОСА ТСССОСТОЛА СБАЛСАОТОВ боASITSSAMII SSATSASTOS SSSSPASOOS ATSATSSSOSA TSSSOSTOLA SBALSAOTOV bo
ТССАВОСССО СООБОСАСАТ СОАЛАСАСТІС СТОАТОСАСТ ТСАСООСВА ДОССАТССАС 720TSSAVOSSSO SOOBOSASAT SOALASASTIS STOATOSAST TSASOOSVA DOSSATSSAS 720
САССТОССОТ ТОСТСАССБА СОАССТООТС АМЗАССТООС АССССТТОАА ОААЛАТОСОС 789SASSTOSSOT TOSTSASSBA SOASSTOOTS AMZASSTOOS ASSSSTTOAA OAALATOSOS 789
АТСОССТТСА ТОАССбСбОС БОСАСАСМСТ ТАТТАССАЛА ТОСТОСАДСО СОбССТбОСТ 810ATSOSSTTSA TOASSbSbOS BOSASASMST TATTASSALA TOSTOSADSO SObSSTbOST 810
БАССАСОИСО АСССССТОБА ТСАВСТОСАб ССАСОСОСТА ТОСТОСТОСА СОБАТСТТСС 900BASSASOISO ASSSSSTOBA TSAVSTOSAb SSASOSOSTA TOSTOSTOSA SOBATSTTSS 900
СТОСААСОСо АСАЛАСОССТ ССТОСТОСАЄ АТСТТСТССО ААЛСССТОАТ бобсСсосте БоСТОСААСОСо АСАЛАСОССТ ССТОСТОСАЕ АТСТТСТССО AALSССТОАТ bobsSsoste Bo
ТІСІТСОААТ ТСАТССАбСС САЛОСОССАС ОАТОбСТТТС бОСАСОССАХ СТІСААОССо 1020TISITSOAAT TSATSSAbSS SALOSOSSAS OATObSTTTS bOSASOSSAH STISAAOSSo 1020
СІСТТООАСІ ССАТСОЛАСС ТОАССАСОТО СОТОбТООТО ТАТТСЛССОС ССАТТАХ 1977 (2) Відомості про послідовність М 2: ШИ (1) Характеристики послідовності: (а) довжина: 1338 пар основ (б) тип: нуклеїнова кислота (в) число ниток: двониткова (г) топологія: лінійна (ІЇ) Тип молекули: КДНК (І) Гіпотетична: ні (ІМ) Антисмислова: ні (МІ) Першоджерело: (а) організм: Агародорзіз (Найііапа (б) штам: Соїштбіа (г) стадія розвитку: молода зелена рослина (МІЇ) Безпосереднє джерело: (а) бібліотека: Опігар ХР БТВАТАСЕМЕ (ХІ) Опис послідовності М 2:SISTTOOASI SSATSOLASS TOASSASOTO SOTObTOOTO TATTSLSSOS CSATTAH 1977 (2) Sequence information M 2: SH (1) Sequence characteristics: (a) length: 1338 base pairs (b) type: nucleic acid (c) number of strands: double-stranded (d) topology: linear (II) Type of molecule: cDNA (I) Hypothetical: no (IM) Antisense: no (MI) Primary source: (a) organism: Agarodorzis (Naiiiapa (b) strain: Soishtbia (d) developmental stage: young green plant (MII ) Direct source: (a) library: Opigar ХР БТВАТАСЕМЕ (ХИ) Description of sequence M 2:
АТСОБССАСС ААААССсСоС ССТІТСАБА АМІСАКАРСС АТОАТОЛССО СбСТОСОоТОо боATSOBSSASS AAAASSsSoS SSTITSABA AMISAKARSS ATOATOLSSO SbSTOSOoTOo bo
ТСООССОСАТ ТСААССТОСТ СОСАТІТТСС ААСТТССТАА САЛАСАКТОС КААВСТСТОАТ 120TSOOSSOSAT TSAASSSTOST SOSATITTSS AASTTSSTAA SALASAKTOS KAAVSTSTOAT 120
ЗДАТТІАЛОЯ ТТАЛОСОСТТ ССАТСАСАТС САСТІСТОСТ ПСОСССАСОС ААССВАСОТС 180 слІШОТОООТ ЛОТОСТОООО ТОТОООСАТО АОАТТСТОСС ССАДАТСССА ТеттТосАСС 2410ZDATTIALOYA TTALOSOSTT SSATSASATS SASTISTOST PSOSSSSASOS AASSVASOTS 180 slISHOTOOOT LOTOSTOOOO TOTOOOSATO AOATTSTOSS SSADATSSSSA TettTosASS 2410
ІБОРЕКТІВ ТТТАКОТТІ ТІАСТТАЄТИ АССТОСОСТО ЛОСТОСОХТІ оттТТТсАСТ зайIBOREKTIV TTTAKOTTI TIASTTAYETY ASSTOSOSTO LOSTOSOHTI ottTTTsAST zay
ЛТІШТТАЦЛ СТІСОСТІТСТ ПІПТОССООА ОАСАІТАВАЄ СЗАСААЄТАВ АОСТТСТАТС звоLTISHTTATSL STISTOSTITST PIPTOSSOOA OASAITAVAYE SZASAAETAV AOSTTSSTATS zvo
ПсІРАЮТТТТО АТОАОФОСТЄ ТТбТОСТТОС ТТСТІСТСТТ САСАТОСІСТ СООТЄТТАСА 429PSIRAYUTTTTO ATOAOFOSTE TTbTOSTTTOS TTSTISTSTTT SASATOSIST SOOTETTASA 429
СОСЗІТОСТА ТІСАМОТАСА АСЛСОСЛОД ТСАССТТТСТ ССАТСМОТОТ АеСТААТСОВС 480SOZHITOSTA TISAMOTASA ASLSOSLOD TSASSTTTTST SSATSMOT AeSTAATSOVS 480
СПТАТІССТТ ССІССОСТОС ТАТОСТОСТЕ ААТОАЛОСАЄ ТІАСОКТССО ТОАСОТТАРА 540SPTATISSTT SSISSOSTOS TATOSTOSTE AATOALOSAE TIASOKTSSO TOASOTTARA 540
СТАТАСООО ВТОТТСТТСТ ССОАТАТОТТ АСТТАСАААЄ САСАЛСАТАС СОААЛААТСС 600STATASOOO VTOTTSTTST SSOATATOTT ASTTASAAAAE SASALSATAS SOAALAATSS 600
ПАДТТСТТОС САПОСТТСОА ОООТОТАСМО САТОССТОСТ ССТІСССАТТ СОАТТАТООТ 560PADTTSTTOS SAPOSTTTSOA OOOTOTASMO SATOSSSTOST SSTISSSATT SOATTATOOT 560
АІССТКОСС ТТОАССАСОС ССТоспААВС СТтСсТоВоС ТІбстососе ТРІААСТТАТ 720AISSTKOSS TTOASSASOS SSTospAAVS STtSsToVOS TIBstosose TRIAASTTAT 720
СІАБСООССТ ХСАСТОСТТІ ТСАССАЛТТС ССАСАСТТСА САБСАСАССХ ССІТОСАЛОС 180 "БІСБАБАССО СТТІТАААТТС КБСОСТОСТО ССТАБСААЛТО АТОЛААТОСТ ТСТІСТАССо 840SIABSOOSST ХСАСТОСТТИ TSASSALTTS ССАСАСТТСА САБСАССХ ССИТОСАЛОС 180 "BISBABASSO STTIAAATTS KBSOSTOSTO SSTBSAALTO ATOLAATOST TSTISTASSo 840
МІТААСОМОС САСТОСМКОС ААСАДАСМЛО ААСАСТСЛЄХ ТТСЛОАССТА ТТТОСААСАТ ЗооMITAASOMOS SASTOSMKOS AASADASMLO AASASTSLYEH TTSLOASSTA TTTOSAAASAT Zoo
КАССАНОСОС СКОСОСТАСА АСАТСТОССТ СТЕАТОМТС МАСЛОХТАТТ САССАСССТЕ 960KASSANOSOS SKOSOSTASA ASATSTOSST STEATOMTS MASLOHTATT SASSASSSTE 960
АПНСАСКТСА СОПАХПАОСМО САСТАТТССА СПАТТСбАЄСТ ТСАТОССТТС ТОСТОСОССТ 1620APNSASKTSA SOPAHPAOSMO SASTATTSSA SPATTSbAEST TSATOSSTTS TOSTOSOSST 1620
АСТІАСТАЮС МОДМТСТСАА слАвоосСТе СССОАСОТОС ТСАБССАТОА ТСАСАТСАА 1080ASTIASTAYUS MODMTSTSAA slAvoosSTe SSSOASOTOS TSABSSATOA TSASATSAA 1080
САС схSAS school
АБ АКТТМБОСМТ ТСТІСТАБМС АСАСАТОМТС АМСОСАССТІ ОСТТСАЛАТС 1140AB AKTTMBOSMT TSTISTABMS ASASATOMTS AMSOSASSTI OSTTSALATS 1140
ТІСАСАЛАЛС САСТАСЄТОА САСОСССВСВ АТАТІТАТМ: АСАТААТССЬ САПАСТАЄСА 1200TISASALALS SASTACEETOA SASOSSSVSV ATATITATM: ASATAATSSS SAPASTAESA 1200
ТОСАТ зTOSAT from
ЗАТСА АМПАТОКОСА МЕОСААСОСТ ТАССАСАСТО САССЛІСТОС ТОСТІТІТООЄ 1265ZATSA AMPATOKOSA MEOSAASOST TASSASASTO SASSLISTOS TOSTITITOYE 1265
АКРПОСАМТТ ТСТСТОАССТ СТТСАЛОТСС ХТІСААСААТ АССААЛАСАС ТСТТОЛАСВСС 1320AKRPOSAMTT TSTSTOASST STTSALOTSS HTISAASAAT ASSAALASAS TSTTOLASVSS 1320
МААСКОТТАЄ ТОПОАТО тосолтех 1338 (2) Відомості про послідовність М 3: (1) Характеристики послідовності: (а) довжина: 1329 пар основ (б) тип: нуклеїнова кислота (в) число ниток: двониткова (г) топологія: лінійна (ІЇ) Тип молекули: КДНК (І) Гіпотетична: ні (ІМ) Антисмислова: ні (МІ) Першоджерело: (а) організм: Оаисизв сагоїа (г) стадія розвитку: суспензія клітин (МІЇ) Безпосереднє джерело: (а) бібліотека: Опі гар ХР ЗТААТАСЕМЕ (ХІ) Опис послідовності М З:MAASKOTTAE TOPOATO tosoltech 1338 (2) Information on sequence M 3: (1) Sequence characteristics: (a) length: 1329 base pairs (b) type: nucleic acid (c) number of strands: double-stranded (d) topology: linear (II) Type of molecule: cDNA (I) Hypothetical: no (IM) Antisense: no (MI) Primary source: (a) organism: Oaisizv sagoia (d) developmental stage: cell suspension (MII) Direct source: (a) library: Opi har ХР ZTAATASEME (XI) Description of the M Z sequence:
АТБОСОХААА МАСААТСССА АССТСАААТІ СТСТСАЛССА АТТСАТСААА САССТСТОСТ оATBOSOHAAA MASAAATSSSSA ASSTSAAATI STSTSALSSA ATTSATSAAA ASSSTSTOST o
ПІРАЛАТТТА АСПТОЗТОсо ТІТІААСААС ТТСОТТООу ПСААСІСІМА СТоСоАТОМ :36PIRALATTTA ASPTOZTOso TITIAASAAS TTSOTTOOu PSAASISIMA STOSoATOM :36
ТОПОЛІ СА АбССОТТОСА ССАСАТТОзМа ТТсТОСтТоСе СобАсВисАЄ СААСаСОТОО 120TOPOLI SA ABSSOTTOSA SSASATTOSMA TTsTOStToSe SOBASVISAE SAASASOTOO 120
СОбСССТТСТ СОІбООСССТ СООСАТОССТ ТТОСТОБССА ААТСССАТСТ СТСТАСТОСА 140СОбСССТСТСТ СОИбООСССТ СООСАТОССТ ТТОСТОБССА AATSССАТST СТСТАСТОСА 140
МАСТСТСТТС АСОСТТСТТА ТСТІСтТтобс ТОСОСОААТС ТСАСТІТОСТ СТІСАСООСТ з0о0MASTSTSTTS ASOSTTTSTTA TSTISTTtobs TOSOSOAATS TSASTITOST STISASOOST z0o0
ССТТАСТСТС ССТССАКСАС САСТТССТСТ ООТТСАССТЄ ССАТОСОСТС ТТІТТОСОСА 350ССТТАСТСТС ССТССАКСАС САСТТССТСТ ООТТСАССТЕ СSATOSOSTS TTITTOSOSA 350
ТСобстТТІтТС АСТСТТТТОС СОССАААСАС ООССТТОСТо ТІСОСОСТАТ ТОСТСТТОАА я20TSobstTTItTS ASTSTTTTTOS SOSSAAASAS OOSSTTOSTo TISOSOSTAT TOSTSTTOAA i20
СТТОСТОАСЄ ТСОСТОСТОС СТТТОАСОСС АСТеТТСсосС бІбБооСсАЄ ССсооСтТоо 480STTOSTOASSE TSOSTOSTOS STTTTOASOSS ASTeTTSSosS biBBooSsAE SSsooStToo 480
ССТССТСТІб АЛІТССАССЯ ССАбСсСТос ТТОбСТОЛОЯ ТОСАСТТОТА СООЛОАТаТО. 540SSTSSTSTIB ALITSSASSYA SSAbSsSTos TTObSTOLOYA TOSASTTOTA SOOLOATaTO. 540
СІСТТСАССТ ТТСТТАСТІТ ТООСАСССАБ САСОСТТІТСТ ТТТТОССТОО АТТОБАВОСЮ боSISTTSASSST TTSTTASTIT TOOSASSSSAB SASOSTTTITST TTTTOSSTOO ATTOBAVOSYU bo
СТОСАСПССА СООССТОСТТ ТССОСАТІТ ОАТТАТОСАА ТІАСЛАСАСТ ТСАТСАХоСо воSTOSASPSSA SOOSSSTOSTTT TSSOSATIT OATTATOSAA TIASLASAST TSATSAHoSo vo
СТОСОСААТО ТТАСССАСТІ ССОСОСТОТО СТОСАСТАТА ТТАЛАБССТТ ТАССОСОТТТ 720STOSOSAATO TTASSSASTI SSOSOSTOTO STOSASTATA TTALABSSTT TASSOSOTTT 720
САТОЛАТІТЯ СССАСТІТАС АБОСОЛОСАТ СТОБОБАСТТ ТОСЛОАСТОС СТТОЛАТТСС 780SATOLATITYA SSSASTITAS ABOSOLOSAT STOBOBASTT TOSLOASTOS STTOLATTSS 780
СТСОТСТТОС ОСАЛТАЛТОА СОАСАТОСТТ СТСТТССОСТ ТСАВТОАССС ТОТСТАТОСО 840STSOTSTTOS OSALTALTOA SOASATOSTT STSTTTSSOST TSAVTOASSS TOTSTATOSO 840
АССААСАЦОА АСЛСТСАСАТ АСАБАСТІАС ТТОСАССЬСА АІСААСОСОС ТбОАСТОСАЄ 900 "(САТТТОССТІ ТАСТСАСТСА ССАТАТТТТТ ЛОСАСТТТАА СОСЛОАТОАЄ СААСАССАСТ теоASSAASATSOA ASLSTSASAT ASABASTIAS TTOSASSSA AISAASOSOS TbOAASTOSAE 900 "(SATTTOSSTI TASTSASTSA SSATATTTTT LOSASTTTAA SOSLOATOAYE SAASASAST teo
ТОССТІССТо СТІТІСАСТТ ТАТСОСТТСС ССАСССОСТА СОТАТТАСАА СААТІТСАМІ: 1020 (ААТАСОСТСО СОСАТСТОТТ САСТОАТОАЛ САСАТСААСС АСТОТСААСА ТІТбобоАтт 1080TOSSTISSTO STITISASTT TATSOSTTSS SSASSSOSTA SOTATTASAA SAATITSAMI: 1020 (AATASOSTSO SOSATSTOTT SASTOATOAL SASATSAASS ASTOTSAASA TITboboAtt 1080
ТІСОТОСАТА СОСАТОАТСА БОСІАСАТТО СТТСАААТСТ ТТАССАМУХ ТОТАБОТОАС 1140TISOTOSATA SOSATOATSA BOSIASATTO STTSAAATST TTASSAMUH TOTABOTOAS 1140
АОООСТАССТ ТАТТСАТАСА САТСАТТСАС АСосСТАСОсТ СОРТОСТСАА СФЛОБАТОСА 1200AOOOSTAST TATTSATASA SATSATTSAS ASOSSTASOst SORTOSTSAA SFLOBATOSA 1200
СОПСАСАТОТ АССАПААСОЇ СООСТОСОСА ООАТТТОСОА АООООЛАСТЕ СТСАрАССТЬ 1260SOPSASATOT ASSAPAASOI SOOSTOSOSA OOATTTOSOA AOOOOLASTE STSArASTST 1260
ТІСААСТССА ТССАДСААТА ТОААЛАААСА СТТСАЛССТА ААСАААТСАЄ ТОСАТСТОСТ 01320TISAASTSSA TSSADSAATA TOAALAAASA STTSALSALSTA AASAAATSAE TOSATSTOST 01320
ФСТОСАТСА 1329FSTOSATSA 1329
ССУСАТТКТАТЗАКМАТССНАТаЄ СМУТКАТООСНТТУСАВТТТАТНОА ДУТНОСКНЗНССНАСНССМААТАСЯ 75SSUSATTKTATZAKMATSSNATaYE SMUTKATOOSNTTUSAVTTTTATNOA DUTNOSKNZNSSSNASNSSMAATASYA 75
А ОС Я ЕЕ Я РК в їн б ЕЕ Е І Е КА 5 РТРНКТ : пило пи ливантння йA OS I EE I RK v yin b EE E I E KA 5 RTRNKT : dust pi livantnia and
УТНСАДССНАТКІТТСАВАТНА ТО СКТТАСНААВИТНОСНАСНСАУНО МИ5НААДСАТТМСАТОТТАТНОМ удUTNSADSSNATKITTSAVATNA TO SKTTASNAAVITNOSNASNSAUNO MY5NAADSATTMSATOTTATNOM ud
У ЕРІ ЕІ ЕТКМХАТНА ХУIN ERI EI ETKMHATNA HU
- САКССНЕСКАТНААУТТНАТНИТНА АТААУСАСОКАУКУНИТИОСНИ МІАУТТТЕСНОСНСАНСАТОСНОСЯ 225 д54ЇІКІ ІК ЖЕРН5МУАВ5 ХЕ ААЕНР- SAKSSNESKATNAAUTTNATNYTNA ATAAUSASOKAUKUNITIOSNI MIAUTTTESNOSNSANSATOSNOSYA 225 d54IIKI IC ZHERN5MUAV5 XE AAENR
Ж5МСТУТСубОНАТСССНТТУНОМО ПОЛАСАТКОНАНААКОСНТАТАА КАСНОСКУТНСАКУТНИСНОСНСАВ: зва «У Сс4МАЕВВУ ХОо59КАТУК НАЦ Еї АВ .Zh5MSTUTSubONATSSSNTTUNOMO POLASATKONANAAKOSNTATAA KASNOSKUTNSAKUTNISSNOSNSAV: zva "U Ss4MAEVVU HOo59KATUK NATS Ei AV .
СОМАТНСАТАТИСАКАСНОСНССНА ТОСАКТТНАХТТТНОСНОСНАТНАХ КобНАТНЕСНООНе СОСНУ ТНТАУ 373373
РІЯНІЕТИРИ ЕІ НІРАТІК сІ6(АРІУ нн а ,RIANIETYRY EI NIRATIK sI6(ARIU nn a ,
ЯПАТНОАУКОКТТИССНСАКСОМИ ЗМИ5НАТНТАХСАТАТИСАХТТІТ КТТОТНСАВОСНОТНОАУМОНОУ 4юYAPATNOAUKOKTTISSNSAXOMY ZMY5NATNTAHSATATISAHTTIT KTTOTNSAVOSNOTNOAUMONOU 4u
КІОАЕСЕ 5 51010 ЕУ ЕТЕСУОАНKIOAESE 5 51010 EU ETESUOAN
СЕНСТНОСНОСНОСМУТНААКАТНА ТНСАТСАТУТКАСНСАУААУаТКТА УЧОМССМНОМАТОВСКТАТТОСОСХ 525 рувбаАФ1КІЇїЇВвНЕТННнНУт кбАНАТНА : АДТТТУТАТБАВААКТТНТТТААТТ ТУМОНСАВАТМОМТАУТТУСАЧАТ НАДАССХСАКТАТАСНОСМИТНАСН БеSENSTNOSNOSNOSMUTNAAKATNA TNSATSATUTKASNSAUAAUaTKTA UCHOMSSMNOMATOVSKTATTOSOH 525 ruvbaAF1KIIiYIVvNETNNnNUt kbANATNA: ADTTTUTATBAVAAKTTNTTTTAATT TUMONSAVATMOMTAUTTUSACHAT NADASSHSAKTATASNOSMITNASN Be
КЕТЕКИЬ ВЕ НЕ КЕЇІЇВУЕОЇ КбЕТ ТВ - МеКААНОСНАТОАСНОСНОСНОАТС БКАТОАТННСНАТНОСМУТНАЛУСА КСАКИЗКИЗНААДОСНОСНОСНОКА 625 «КАХ ТАРОЄб КІЛІРІ НЕ Е 55 ХА " ХТНСАВСАКТТУТТНАТССАЯТТУА ХУССНСАДСОИТНСАВСАУЄТКСС УТТУТУНЗНОАУСАТТНАТНАДЯ 758 «ХЕЕРІИОЕН СЕСІОНУМУ ЕЕ 505 ІК АСНТФФСУЄТНААКИЗНАТНО СНАТОСНТТТАТОАСНОСНССНОС НОАУАСНТАТТАТСАВАТСТТИСАК 5КЕТЕКИЬ ВЕ НЕ КЕЇІЇВУЕОЇ КбЕТ ТВ - МеКААНОСНАТОАСНОСНОСНОАТС БКАТОАТННСНАТНОСМУТНАЛУСА КСАКИЗКИЗНААДОСНОСНОСНОКА 625 «КАХ ТАРОЄб КІЛІРІ НЕ Е 55 ХА " ХТНСАВСАКТТУТТНАТССАЯТТУА ХУССНСАДСОИТНСАВСАУЄТКСС УТТУТУНЗНОАУСАТТНАТНАДЯ 758 «ХЕЕРІИОЕН СЕСІОНУМУ ЕЕ 505 ІК АСНТФФСУЄТНААКИЗНАТНО СНАТОСНТТТАТОАСНОСНССНОС НОАУАСНТАТТАТСАВАТСТТИСАК 5
ТЯ 0 НК 5 716 НАВИ ТАРРЮТУТЕМ СЕTYA 0 NK 5 716 NAVY TARRUTUTEM SE
ССНМСМУТНССНАДУСАТССМСАВС СНОТНССМСАКУТНСАВОСНИСНОЇ КАТНУТИТТНСА СОМ МУЗНОАЯ, ЗооSSNMSMUTNSSNADUSATSSSMSAVS SNOTNSSMSAKUTNSAVOSNYSNOI KATNUTITTNSA SOM MUZNOAYA, Zoo
Є Ж ЕРНКНІЕР УСЕ ОАН ІВ Ю0а55ЕTHERE IS THE ERNKNIER OF ALL OF THE OAN IV Yu0a55E
УБНОСНСАТААВНОКУ ТКУ ТНУТНС АВАТНТГГКЗКСАВАСКУТМАТОС КОСНОТКТТТТУСАТТТАТНОВ 875UBNOSNSATAAVNOKU TKU TNUTNS AVATNTGGKZKSAVASKUTMATOS KOSNOTKTTTTUSATTTATNOV 875
ОХ ІЕБЕТІ НЯ РУРЕЕЕТОOH IEBETI NYA RUREEETO
МСКАДАСОМОАУСАХООНТТТССНО АДСОХАДУТТУЛАКССКУТНТТУСА КИЗМАТНСАКНСКОАТСАКОТНМОМ 1550MSKADASOMOAUSAHOONTTTTSSNO ADSOHADUTTULAKSSKUTNTTUSA KIZMATNSAKNSKOATSAKOTNMOM 1550
Я Х 4006 ЕСЕ б НЕХАЙ ЕЕ 5ІЕКНОЮМВ пф ненняI X 4006 ESE b LET EE 5IEKNOYUMV pf nenya
НОСНССНСТКИТНКОНАСНОКУ нлNOSNSSNSTKITNKONASNOKU nl
ВсіAll
Фіг. 1Fig. 1
Кон, ев;Kon, ev;
Беду : спе ї БеОВBedu: spe i BeOV
Тк н се Вані р! ва ай "ще ; Жсону е Ь еTk n se Vani r! va ay "still; Zhsonu e b e
ЕРАERA
І ЕсоВуAnd EsoVu
ХH
ВаVa
ЕсеEssay
БссВі " ДеBssVi " Where
ЕооНуУ ей ЦеEooNuU hey This
КО я вені | Ук ий ваші толоження кодуючої частини гена иKO I veins | List your interpretations of the coding part of the gene
Фі. 2Fi. 2
Сопхепіих -АОСТЕМРИЄ ЦМСЕЕРІЕ.А 5РТІР,ТЦЕРІ ЕЕЇМОЕТКУА тлНАЗКОУНіУ 50Sophepiih -AOSTEMRYE CMSEERIE.A 5RTIR,TCERI EEIMOETKUA tlNAZKOUNiU 50
Р. Еішогезселя ни А А 5аR. Eishogessela ny A A 5a
Рзеодотопаз 5р. плач план оВ. ча К. их чну ан... 43Rzeodotopaz 5 years. crying plan oV. cha K. ih chnu an... 43
Сопзепви5 КОС.ІНТІН НЕР.5.АБУЕ ДАЕНСРУУСЬ МАРАУКОЗОК АТ. КАЦЕС СА 199Sopzepvy 5 KOS.INTIN NER.5.ABUE DAENSRUUS MARAUKOZOK JSC. KACES SA 199
Р. іпогехсепх зе Еуихлах чаМИ сини визстачннт знечачаняях 4иН..чич. 169 з Рхеціовопох зр. сенАсеню НМ. печеланнюя чзеженнитью з«Кувичнся 99R. ipogehseph ze Euikhlah chaMY sons vyzstachnnt znechachanayah 4yN..chich. 169 from Rhetsiovopokh zr. senAsenyu NM. profitable exchange with "Kuvychnsya 99".
Сопзепзих ОРІНІ.ТЧРМ ЕН РАЇКОЕ осАРЕТІІОВ ЕСЕО55ІУОХ ОРМ. ЕОМ. 158Sopzepzykh ORINI.TCHRM EN RAIKOE osARETIIOV ESEO55IUOH ORM. computer 158
Р. Ясогезсепе межах юча вівкувєани венвавноче вечаєаєнчни висо. 158 о Рхеціствах зр, сен Есуаю челкаянвни вивчається звевєтєняє «Кг .В. 15R. Jasogezsepe within the boundaries of the vykuveana venvavnoche vechaeyaenchni viso. 158 about Rhetsistva zr, sen Esuayu chelkayanvna is studied and becomes "Kg .V. 15
Сопзепзи? "РУСАСІК.І ОНСТИНУУКа ВМ.УКАКЕТЕ КОЕНЕКЕ.КУ ЕОІКсЕТ Тс. 292Sopsepzy? "RUSASIK.I ONSTYNUUKa VM.UKAKETE KOENEKE.KU EOIKsET Ts. 292
Р. Єшогезсейз Ми ДА М НН:R. Yeshogezseyz We YES M NN:
Рхеціокопа5 зр. Нескоячої. нчіаханелає поДстехнось зевнениТею ввтзнчноть 199Rhetsiokop5 zr. Neskoyachoi 199
Сопзепзих Т5КАН.АРЕИ МІКІРІНЕЕВ ЗКСАСОТЕЕЕ 1ЩОРКбЕСІО НМАРІ.ООВ. 259Sopzepzyh T5KAN.AREY MIKIRINEEV ZKSASOTEEE 1SHORKbeSIO NMARI.OOV. 259
Р, ЄЕіцогезсепе зазлобивиь вежаячкажав чаінствтяв леяковнови, чна Тени 250R, Yeitsogezsepe zazlobyvyh vezhayachkazhav chainstvtyav leyakovnovy, chna Teny 250
Регидотопає р. соки канатна ноя плуєжняяко огнканання сени Ї 7249Regidotopae river juices rope noya pluzhnyayako ognkananya sena Y 7249
Сопзепзи КТЖО.ІК.І6 НАРКТАРРОТ УТЕНСЕСЯЬР .НСЕРМ..ї) АКСІНОа55 390Sopsepzy KTZHO.IK.I6 NARKTARROT UTENSESYAR .NSERM..i) AKSINOa55 390
Р. Ріцогеєсепе ечнА. Ку. звижаиюває пнхжитєтяа ОоненоЙМа віхчничних 00 390R. Ritsogeyesepe echnA. Ku. increases the life expectancy of children 00 390
Рееціопюпах зр. и м нм м м По 299Reeciopyupah zr. and m nm m m Po 299
Сопзепзиз «ОККО ІВЕ5ЕТЬНОРУ ЕРЕРІОККСО ОСЕЗЕОНЕКА БРЕЗІЕКОМ ззаSopzepziz "OKKO IVE5ETNORU ERERIOKKSO OSEZONEKA BREZIEKOM zza
Р, Єіцогезсева МЕ нканнини жжчиуажюуча звична чнях ловчничнох внежчининя 358R, Yeitsogezseva ME nkanniny zzhchiuazhyuucha familiar to hunting foreign bodies 358
Рхеціосююпах р, Еб.счнеких янанвяачнояє влчечнитяи внввячнтив ясчкичняєсь 349Rhetsiosyuyupakh r.
Сопсепецяї вябмі..О 355Sopsepetsiai vyabmi..O 355
Р. Єіогехсепз іілноТА. 358R. Yeogehsepz iilnoTA. 358
Рзеціотюпів зр. нет. 357Rzetsiotyupiv zr. no 357
Фіг. ЗFig. WITH
Claims (28)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9506800A FR2734840B1 (en) | 1995-06-02 | 1995-06-02 | GENE OF HYDROXY-PHENYL PYRUVATE DIOXYGENASE AND PRODUCTION OF PLANTS CONTAINING THIS GENE RESISTANT TO HERBICIDES |
| PCT/FR1996/000831 WO1996038567A2 (en) | 1995-06-02 | 1996-06-03 | Dna sequence of a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase and production of plants containing a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase and which are tolerant to certain herbicides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA72422C2 true UA72422C2 (en) | 2005-03-15 |
Family
ID=9479769
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA97126425A UA72422C2 (en) | 1995-06-02 | 1996-03-06 | Dna coding consequence of a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, a chimeric gene, a vector, a plant cell, a plant, which are containing such a consequence, a method of transforming plants, a method of selective herbicidal treatment of plants |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2734840B1 (en) |
| UA (1) | UA72422C2 (en) |
| ZA (1) | ZA964381B (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2803592A1 (en) | 2000-01-06 | 2001-07-13 | Aventis Cropscience Sa | NOVEL DERIVATIVES OF 3-HYDROXYPICOLINIC ACID, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND FUNGICIDAL COMPOSITIONS CONTAINING SAME |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2673643B1 (en) * | 1991-03-05 | 1993-05-21 | Rhone Poulenc Agrochimie | TRANSIT PEPTIDE FOR THE INSERTION OF A FOREIGN GENE INTO A PLANT GENE AND PLANTS TRANSFORMED USING THIS PEPTIDE. |
| FR2673642B1 (en) * | 1991-03-05 | 1994-08-12 | Rhone Poulenc Agrochimie | CHIMERIC GENE COMPRISING A PROMOTER CAPABLE OF GIVING INCREASED TOLERANCE TO GLYPHOSATE. |
| FR2712302B1 (en) * | 1993-11-10 | 1996-01-05 | Rhone Poulenc Agrochimie | Promoter elements of alpha tubulin chimeric genes. |
-
1995
- 1995-06-02 FR FR9506800A patent/FR2734840B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-03-06 UA UA97126425A patent/UA72422C2/en unknown
- 1996-05-29 ZA ZA9604381A patent/ZA964381B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2734840B1 (en) | 1997-08-01 |
| FR2734840A1 (en) | 1996-12-06 |
| ZA964381B (en) | 1997-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100431366B1 (en) | Dna sequence of a gene of hydroxy phenyl pyruvate dioxygenase and production of plants containing a gene of hydroxy phenyl pyruvate dioxygenase and which are tolerant to certain herbicides | |
| US5767361A (en) | Imidazolinone resistant AHAS mutants | |
| US6833449B1 (en) | Expression of the toxic portion of Cry1A in plants | |
| MXPA97009310A (en) | Dna sequence of a hydroxypenyl-piruvate-dioxygenase gene and obtaining plants containing a gene of hydroxypenyl-piruvate-dioxygenase, tolerants at certain herbici | |
| Indurker et al. | Genetic transformation of chickpea (Cicer arietinum L.) with insecticidal crystal protein gene using particle gun bombardment | |
| CN109971880B (en) | Nucleic acid sequence for detecting corn plant DBN9508 and detection method thereof | |
| US20210230626A1 (en) | Plants with increased yield and method for producing said plants | |
| EP3696188A1 (en) | Gene for resistance to plant disease | |
| US11814633B2 (en) | Plant terminator for transgene expression | |
| US10443065B2 (en) | Plant promotor and 3′ UTR for transgene expression | |
| US20220154206A1 (en) | Gene for resistance to plant disease | |
| CN110291199B (en) | Plant promoters for transgene expression | |
| US20190040404A1 (en) | Plant promoter and 3' utr for transgene expression | |
| US11913004B2 (en) | Plant promoter for transgene expression | |
| Mushtaq et al. | Isolation of biotic stress resistance genes from cotton (Gossypium arboreum) and their analysis in model plant tobacco (Nicotiana tabacum) for resistance against cotton leaf curl disease complex | |
| US20220090111A1 (en) | Plant promoter for transgene expression | |
| US7241878B1 (en) | Modified cellulose synthase gene from Arabidopsis thaliana confers herbicide resistance to plants | |
| US20220282271A1 (en) | Herbicide resistant plants and methods of making and using | |
| US20220098606A1 (en) | Plant promoter for transgene expression | |
| UA72422C2 (en) | Dna coding consequence of a gene of hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, a chimeric gene, a vector, a plant cell, a plant, which are containing such a consequence, a method of transforming plants, a method of selective herbicidal treatment of plants | |
| CN109415738B (en) | Plant promoters and 3' UTRs for transgene expression | |
| CN108473997B (en) | Plant promoters for transgene expression | |
| US20200277621A1 (en) | Use of a maize untranslated region for transgene expression in plants | |
| Walter et al. | Genetic Engineering of Pinus Radiata and Picea Abies, Production of Transgenic Plants and Gene Expression Studies | |
| KR20230046577A (en) | Recombinant vector for base transversion of plant and uses thereof |