UA63744A - Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 - Google Patents
Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 Download PDFInfo
- Publication number
- UA63744A UA63744A UA2003065305A UA2003065305A UA63744A UA 63744 A UA63744 A UA 63744A UA 2003065305 A UA2003065305 A UA 2003065305A UA 2003065305 A UA2003065305 A UA 2003065305A UA 63744 A UA63744 A UA 63744A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- index
- apoptosis
- cells
- hypertrophy
- induction
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 title claims abstract description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 40
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 10
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 claims description 8
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 6
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 4
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 claims description 4
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 claims description 4
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 3
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 claims description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 claims description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 claims 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 claims 1
- 208000015210 hypertensive heart disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до галузі кардіології та імунології.The invention relates to the field of medicine, namely to the field of cardiology and immunology.
Відомий "Спосіб виявлення та/або кількісного визначення та/або відділення апоптичних клітин у зразку або частині зразка" (патент на винахід М/О9527903 АТ, від 19.10.95, Изобретения стран мира (1996). - Вьіпуск 084,Known "Method of detection and/or quantitative determination and/or separation of apoptotic cells in a sample or part of a sample" (patent for invention M/O9527903 JSC, dated 10.19.95, Izobreteniya stran mira (1996). - Vipusk 084,
Мо17. - С.48) передбачає контакт досліджуваного зразка клітин або тканини з реагентом - поліпептидом або білком з класу анексинів, який має спорідненість до фосфатиділсеріну плазматичної мембрани апоптичних клітин. Виявлення та/або кількісна оцінка апоптичних клітин прямим способом здійснюється детекцією мітки, яка 70 зв'язана з анексином. Такими мітками можуть бути радіоактивні маркери, флуоресцентні, ензимні, протеїнові, окремі барвники, імуноглобуліни. Для виявлення наявності або відсутності мітки використовують, наприклад, проточну цитометрію, цитометрію зображення або аналіз зображення. При непрямому способі детекції зразок контактує з неміченим реагентом з високою спорідненістю до фосфатиділсеріну та кількість зв'язаного агента визначають за допомогою специфічних до реагенту антитіл. В цьому випадку може бути використана будь-яка 12 техніка імуноаналіза. Запропоновано визначати якісно та кількісно апоптичні клітини після інкубації проби з субстанціями, що можуть індукувати або гальмувати апоптоз. Спосіб дає можливість проводити діагностику, вивчати ефекти лікування або вивчати вплив реагентів, які посилюють або послаблюють апоптоз.Mo17. - P.48) involves the contact of the studied sample of cells or tissue with a reagent - a polypeptide or protein from the class of annexins, which has an affinity for phosphatidylserine of the plasma membrane of apoptotic cells. Detection and/or quantification of apoptotic cells in a direct way is carried out by detection of a label that is linked to annexin. Such labels can be radioactive markers, fluorescent, enzyme, protein, individual dyes, and immunoglobulins. For example, flow cytometry, image cytometry or image analysis is used to detect the presence or absence of a label. In the indirect method of detection, the sample comes into contact with an unlabeled reagent with a high affinity for phosphatidylserine, and the amount of bound agent is determined using reagent-specific antibodies. In this case, any immunoassay technique can be used. It is proposed to qualitatively and quantitatively determine apoptotic cells after incubation of the sample with substances that can induce or inhibit apoptosis. The method makes it possible to carry out diagnostics, to study the effects of treatment or to study the influence of reagents that increase or decrease apoptosis.
Недоліком використання абсолютних величин апоптозу для діагностики є залежність величини апоптозу від часу, що пройшов від моменту забору клітин до початку дослідження та лабільність цих величин - залежність від функціонального стану організму. Також величини спонтанного, індукованого апоптозу та індукція апоптозу характеризують кожна окрему ланку патогенезу.The disadvantage of using the absolute values of apoptosis for diagnosis is the dependence of the value of apoptosis on the time that has passed from the moment of the collection of cells to the beginning of the study and the lability of these values - the dependence on the functional state of the organism. Also, the values of spontaneous, induced apoptosis and induction of apoptosis characterize each separate link of pathogenesis.
Задачею заявляємого способу є об'єктивізація методу дослідження для усунення впливу факторів зовнішнього та внутрішнього середовища.The task of the proposed method is to objectify the research method to eliminate the influence of factors of the external and internal environment.
Задача досягається тим, що визначають індекс індукції апоптозу, а саме відношення апоптичних індексів 22 спонтанного та індукованого апоптозу. «The task is achieved by determining the apoptosis induction index, namely the ratio of apoptotic indices 22 of spontaneous and induced apoptosis. "
Заявлений спосіб виконують наступним чином. З гепаринізованої крові виділяють мононуклеарні клітини за допомогою центрифугування з прискоренням 4009 протягом 25-35 хвилин у градієнті щільності фікол-верографіну (в - 1077 -10781 л Знімають кільце мононуклеарів. Отримані клітини піпетують та двічі « зо центрифугують по 8-12 хвилин з прискоренням 20049 у розчині нейтрального буфера, наприклад рпозрпаїе рибПег зоїшіоп з рН7,2. З відмитих клітин в концентрації 5-6х109 клітин/мл готують подвійні культури, які поміщають у З живильне середовище, що містить 1095 ембріональної телячої сироватки, у співвідношенні 1:1. До однієї з - подвійних культур додають розчин дексаметазону в кінцевій концентрації 1072-1077М. Культури клітин інкубують протягом 12-24 годин при температурі 37"С. Після інкубації клітини піпетують у розчині нейтрального буфера, о наприклад рпозрпайе риПег зоЇшіоп з рН7,2, центрифугують 3-7 хвилин з прискоренням 4009. Підраховують (Се) відсоткове співвідношення живих та мертвих клітин за допомогою стандартного тесту з трипановим синім.The claimed method is performed as follows. Mononuclear cells are isolated from heparinized blood by centrifugation with an acceleration of 4009 for 25-35 minutes in a ficol-verografin density gradient (in - 1077-10781 l. A ring of mononuclear cells is removed. The resulting cells are pipetted and centrifuged twice for 8-12 minutes with an acceleration of 20049 in a solution of a neutral buffer, for example, rpozrpaie ribPeg zoishop with pH 7.2. Double cultures are prepared from the washed cells at a concentration of 5-6x109 cells/ml, which are placed in a nutrient medium containing 1095 embryonic calf serum in a 1:1 ratio. a dexamethasone solution with a final concentration of 1072-1077M is added to one of the double cultures. The cell cultures are incubated for 12-24 hours at a temperature of 37"C. After incubation, the cells are pipetted into a neutral buffer solution, for example, rpozrpaye riPeg zoYisiop with pH7.2, centrifuged for 3 -7 minutes with an acceleration of 4009. Calculate (Se) the percentage ratio of live and dead cells using a standard trip test new blue
Відмиті клітини інкубують 25-35 хвилин при температурі 377С з розчином барвника Ноеспзі 33342 в концентрації 0,05-0,15мкг/мл у співвідношенні суспензія клітин/розчин барвника - 1:1-2:1, потім центрифугують з додаванням « розчину нейтрального буферу, наприклад рпозрпайе риїег зоіЇшіоп з рН7,2, протягом 3-7 хвилин з прискоренням 470 4009. Клітини фіксують фіксуючою сумішшю, поміщають на предметне скельце, покривають покривним скельцем - с та запаюють. Препарати переглядають при освітленні люмінесцентною лампою при збільшенні 7х90. а Визначають апоптичний індекс як відсоткове співвідношення кількості клітин з ознаками апоптозу та 2000 "» клітин, виявлених у полях зору мікроскопу. Апоптичний індекс визначають як в клітинах, які інкубувались тільки у живильному середовищі - індекс спонтанного апоптозу, так і в клітинах, які інкубувались в живильному середовищі в присутності дексаметазону - індекс індукованого апоптозу. Індекс індукції апоптозу визначався як (о) співвідношення індексів спонтанного та індукованого апоптозу у даного хворого. У хворих з гіпертонічною о хворобою 2-го ступеня без супутніх захворювань серця при індексі індукції апоптозу меншому 0,5064 діагностувалась гіпертрофія міокарда, виразність якої зростала при зменшенні величини індексу індукції - І апоптозу. При індексі індукції апоптозу від 0,5064 до 0,4375 діагностують незначну гіпертрофію міокарда, при їз 50 індексі індукції апоптозу від 0,4374 до 0,3556 - діагностують помірну гіпертрофію, при індексі індукції апоптозу від 0,2860 до 0,3555 - виражену гіпертрофію.Washed cells are incubated for 25-35 minutes at a temperature of 377C with a solution of Noespzi 33342 dye at a concentration of 0.05-0.15 μg/ml in a ratio of cell suspension/dye solution - 1:1-2:1, then centrifuged with the addition of a neutral buffer solution , for example, zoiZhiop culture medium with pH7.2, for 3-7 minutes with an acceleration of 470 4009. Cells are fixed with a fixing mixture, placed on a glass slide, covered with a coverslip - c and sealed. The preparations are viewed under the illumination of a fluorescent lamp at a magnification of 7x90. a The apoptotic index is determined as the percentage ratio of the number of cells with signs of apoptosis and 2000 "" cells detected in the field of view of the microscope. The apoptotic index is determined both in cells that were incubated only in a nutrient medium - the index of spontaneous apoptosis - and in cells that were incubated in nutrient medium in the presence of dexamethasone - the index of induced apoptosis. The index of induction of apoptosis was determined as (o) the ratio of the indices of spontaneous and induced apoptosis in a given patient. In patients with hypertensive disease of the 2nd degree without concomitant heart diseases, with an index of induction of apoptosis less than 0.5064 hypertrophy of the myocardium was diagnosed, the expression of which increased with a decrease in the value of the induction index - apoptosis I. With an index of induction of apoptosis from 0.5064 to 0.4375, slight myocardial hypertrophy is diagnosed, with an index of induction of apoptosis from 0.4374 to 0.3556, moderate hypertrophy is diagnosed hypertrophy, with an apoptosis induction index from 0.2860 to 0.3555 - you affected hypertrophy.
Я» Приклад 1I" Example 1
Хворий Т-лі Г.Т., обстеження 17.04.02, діагноз - гіпертонічна хвороба 1 ступеня, цукровий діабет 2-го типу, дисциркуляторна енцефалопатія. Індекс маси міокарда, визначений методом радіоізотопної вентрикулографії, становив 92,3г/м2 - гіпертрофія міокарда відсутня. Величина індексу індукції апоптозу - 0,6800. р» Приклад 2Patient T-li G.T., examination 04/17/02, diagnosis - hypertension of the 1st degree, diabetes of the 2nd type, dyscirculatory encephalopathy. Myocardial mass index determined by radioisotope ventriculography was 92.3 g/m2 - there was no myocardial hypertrophy. The value of the apoptosis induction index is 0.6800. Example 2
Хворий К-р В.С., обстеження 16.04.02, діагноз - гіпертонічна хвороба 2-го ступеня. Індекс маси міокарда, визначений методом радіоіїзотопної вентрикулографії становив 144г/м2 - незначна гіпертрофія міокарда.Patient V.S., examination 16.04.02, diagnosis - hypertension of the 2nd degree. The mass index of the myocardium, determined by the method of radioisotope ventriculography, was 144 g/m2 - slight hypertrophy of the myocardium.
Величина індексу індукції апоптозу - 04375. бо Приклад ЗThe value of the apoptosis induction index is 04375. Because Example C
Хворий Р-к А.Б., обстеження 18.04.02, діагноз - гіпертонічна хвороба 2-го ступеня. Індекс маси міокарда, визначений методом радіоіїзотопної вентрикулографії становив 289г/м? - виражена гіпертрофія міокарда.Patient R-k A.B., examination 04/18/02, diagnosis - hypertension of the 2nd degree. Myocardial mass index determined by radioisotope ventriculography was 289g/m? - marked hypertrophy of the myocardium.
Величина індексу індукції апоптозу - 0,2909.The value of the apoptosis induction index is 0.2909.
Таким чином, використання заявляємого методу в ЦНДЛ КМАПО ім. П.Л. Шупика дозволило діагностувати бо різні ступені гіпертрофії міокарда у хворих з гіпертонічною хворобою 2-го ступеня. Крім того, заявляємий метод дозволив об'єктивізувати оцінку результатів дослідження апоптичного індексу за рахунок культивування клітин та використання для діагностики індексу індукції апоптозу.Thus, the use of the claimed method in the National Center for National Development and Reform of the KMAPO named after P.L. Shupyk made it possible to diagnose different degrees of myocardial hypertrophy in patients with 2nd degree hypertension. In addition, the claimed method made it possible to objectively evaluate the results of the apoptotic index study due to cell cultivation and the use of the apoptosis induction index for diagnosis.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003065305A UA63744A (en) | 2003-06-09 | 2003-06-09 | Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003065305A UA63744A (en) | 2003-06-09 | 2003-06-09 | Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA63744A true UA63744A (en) | 2004-01-15 |
Family
ID=34516720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2003065305A UA63744A (en) | 2003-06-09 | 2003-06-09 | Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA63744A (en) |
-
2003
- 2003-06-09 UA UA2003065305A patent/UA63744A/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6916626B1 (en) | Detection of Candida | |
| JP4151986B2 (en) | Method for measuring lymphocyte function | |
| Waters et al. | Detection methods for neural autoantibodies | |
| US10921322B2 (en) | Methods for detecting a marker for active tuberculosis | |
| KR0126236B1 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| JP4272431B2 (en) | Diagnostic test method | |
| US10191048B2 (en) | Fluorometric immunoassay for detection of anti-dsDNA antibodies | |
| US6461825B1 (en) | Immunometric assay kit and method applicable to whole cells | |
| KR101138343B1 (en) | Quick test for the diagnosis of alzheimer's disease | |
| WO1986005591A1 (en) | Method for the immunological determination of a biological substance in a sample | |
| UA63744A (en) | Method for assessing degree of myocardial hypertrophy in patients with hypertension, grade 2 | |
| RU2329507C1 (en) | Method of acute bacterial enteric infections express-diagnostics | |
| UA63745A (en) | Method for detecting hypertrophic or destructive processes in patients with cardiovascular diseases | |
| RU2769578C1 (en) | Method for producing a fluorescent immunoglobulin diagnostic agent for detecting pathogens of rickettsioses and coxielloses, fluorescent immunoglobulin diagnostic agent and application thereof | |
| JPS5995460A (en) | Method and kit for diagnosing rheumatic sickness | |
| US20050260563A1 (en) | Methods for measurement of lymphocyte function | |
| RU2251701C1 (en) | Method for predicting the stages of hiv-infection | |
| US20070243576A1 (en) | Method to confirm immunosuppression in human patients by measuring lymphocyte activation | |
| Nairn et al. | Fluorescent probes: a new way to study lymphocyte activation | |
| RU2757078C1 (en) | Method for potentiometric diagnosis of bovine leukemia | |
| RU2112243C1 (en) | Test set for diagnosing neurologic diseases | |
| CN108387745B (en) | Application of CD4+ T lymphocyte characteristic protein in identification of latent tuberculosis infection and active tuberculosis | |
| UA13174U (en) | Method for determining the efficiency of treating patients with tuberculosis | |
| Rao et al. | A Review on History and Detection of Salmonella Enterica Typhi | |
| UA13175U (en) | Method for diagnosing changes in lungs at tuberculosis |