UA60231A

UA60231A - Ready-for-use dosage form of protamine sulfate

Info

Publication number: UA60231A
Application number: UA2003054657A
Authority: UA
Inventors: Олексій Павлович Лазарев; Валентина Миколаївна Рибачук; Валентина Николаевна Рыбачук; Дмитро Володимирович Андрущик; Павло Павлович Сологуб; Людмила Павлівна Солянік; Дмитро Павлович Прудієв; Віктор Іванович Стаднік
Original assignee: Закрите Акціонерне Товариство "Індар"
Priority date: 2003-05-22
Filing date: 2003-05-22
Publication date: 2003-09-15

Abstract

The ready-for-use dosage form of protamine sulfate comprises the active ingredient – protamine sulfate substance, the preserving agent – cresol, the isotonic agent – sodium chloride, the substance for adjusting pH – hydrochloric acid, and water.

Description

Опис винаходуDescription of the invention

Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості і може використовуватися у виробництві 2 препаратів антигеморагічної дії на основі протамінсульфату.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in the production of 2 antihemorrhagic drugs based on protamine sulfate.

Діюча речовина препаратів такого типу - субстанція протамінсульфату -являє собою полікатіонну пептидну похідну, яку одержують зі сперми лосося. Вона містить аргінін (біля 67 90), серін, аланін та інші амінокислоти. Відомо, що препарат протамінсульфату віднесений до життєво необхідних важливих лікарських засобів і широко використовується при необхідності нейтралізувати дію збиткового екзогенного гепарину, 70 зокрема, при передозуванні гепарину, після операцій з екстракорпоральним кровообігом та використанням гепарину, при "гепариноподібних" порушеннях здатності крові до згортання та як цитостатичний засіб, який подавляє ріст деяких пухлин (М.Д.Машковский, Лекарственнье средства, ч. 1, стр. 469, Москва, 0.0.0. "Новая волна"», 2002 г. МУгідні 9. Сіїпіса! «(гіа! оїргоїатіпе іп (пе ігеайтепі ої таїїдпапі адізеазев5, Вг.).Сапсег, 1968, 22: 415-421). При введенні протаміну в присутності гепарину утворюється стабільна сполука за рахунок 72 взаємодії позитивно заряджених груп аргініну з негативно зарядженими групами гепарину, що нівелює антикоагуляційні властивості гепарину.The active substance of drugs of this type - protamine sulfate substance - is a polycationic peptide derivative obtained from salmon sperm. It contains arginine (about 67-90), serine, alanine and other amino acids. It is known that the drug protamine sulfate is classified as a vitally important medicine and is widely used when it is necessary to neutralize the effect of harmful exogenous heparin, 70 in particular, in heparin overdose, after operations with extracorporeal blood circulation and the use of heparin, in "heparin-like" disorders of the blood's ability to coagulate, and as a cytostatic agent that suppresses the growth of some tumors (M.D. Mashkovsky, Lekarstvennye sreddy, ch. 1, p. 469, Moscow, 0.0.0. "New Wave", 2002. MUhidni 9. Siipisa! "(hi! oirgoiatipe ip (pe igeaitepi oi taiidpapi adizeazev5, Vg.). Sapseg, 1968, 22: 415-421). When protamine is introduced in the presence of heparin, a stable compound is formed due to the interaction of positively charged groups of arginine with negatively charged groups of heparin, which neutralizes anticoagulant properties of heparin.

Існує три типи препаратів протамінсульфату, які окрім активної субстанції містять: 1-ий тип одноразового використання - ізотонічний агент та не містить консервантів; 2-ий тип - стерильний сухий препарат та супроводжуючий розчинник одноразового чи багаторазового використання; і найбільш досконалий та вигідний при багаторазовому використанні препарат, який містить консерванти (фенол, метіл-4-гідроксібензоат, пропіл-4-гідроксібензоат або їх суміші) та може містити або не містити ізотонічний агент, найчастіше, натрію хлорид (в залежності від концентрації протамінсульфату). Для виготовлення готових лікарських форм антидотів гепарину використовуються субстанції протамінсульфату та його похідної: протамінгідрохлориду, а також синтетичні аналоги субстанцій, одержані за допомогою пептидного синтезу, або генно-інженерні продукти. Відомо, що у багатьох пацієнтів використання готової лікарської форми протаміну « часто призводить до виникнення таких побічних ефектів, як алергічні реакції, зниження кров'яного тиску, брадикардія, збільшення легеневого артеріального тиску, зменшення вживання кисню, тромбоцитопенія та лейкопенія (патент МУО 95/13083, кл. АбІК 37/00, 38/00, СО7К 4/00,7/00 "Нові пептиди для усування антикоагуляційної дії гепарину та низькомолекулярного гепарину", 1994 р.; УМО 94/04176, кл. АбІК 37/02, 37/08, -- сСо7К 710 "Нові пептиди для усування антикоагуляційної дії гепарину", 1992 р.; МО 94/04181, кл. АбІК 37/02, соThere are three types of protamine sulfate preparations, which, in addition to the active substance, contain: 1st type of single use - isotonic agent and does not contain preservatives; 2nd type - sterile dry preparation and accompanying solvent for single or multiple use; and the most perfect and profitable drug for repeated use, which contains preservatives (phenol, methyl-4-hydroxybenzoate, propyl-4-hydroxybenzoate or their mixtures) and may or may not contain an isotonic agent, most often sodium chloride (depending on the concentration of protamine sulfate ). The substances of protamine sulfate and its derivative: protamine hydrochloride, as well as synthetic analogues of substances obtained by peptide synthesis, or genetically engineered products are used for the manufacture of ready-made medicinal forms of heparin antidotes. It is known that in many patients, the use of the ready-made dosage form of protamine "often leads to the occurrence of such side effects as allergic reactions, a decrease in blood pressure, bradycardia, an increase in pulmonary arterial pressure, a decrease in the use of oxygen, thrombocytopenia and leukopenia (patent MUO 95/13083 , cl. AbIK 37/00, 38/00, СО7К 4/00,7/00 "New peptides for eliminating the anticoagulation effect of heparin and low molecular weight heparin", 1994; UMO 94/04176, kl. AbIK 37/02, 37 /08, -- сСо7К 710 "New peptides for eliminating the anticoagulation effect of heparin", 1992; MO 94/04181, class AbIK 37/02, so

СО7К 5/10 "Нейтралізація гепарину мультімерними пептидами", 1992 р). Але, як показують дослідження самих авторів цих винаходів, якщо вдається знизити токсичність субстанції протаміну за рахунок, наприклад, зниження сч позитивного заряду аналога протаміну, то не вдається досягти такої ефективної нейтралізації гепаринів та Га») здатності розщеплюватися ферментами крові, як у природних протамінсульфатів, тобто, не вдається 32 задовольнити головні вимоги, які ставляться до цих препаратів: ефективна нейтралізація гепаринів, низька ее, токсичність та здатність розщеплюватись ферментами крові. У той же час, здійснені численні спроби знайти окрім протаміну інші агенти для нейтралізації гепарину та проведені широкі дослідження у цій галузі нічого більш підходящого за протамін не виявили. «СО7К 5/10 "Neutralization of heparin by multimeric peptides", 1992). But, as the researches of the authors of these inventions show, if it is possible to reduce the toxicity of the protamine substance by, for example, reducing the positive charge of the protamine analogue, then it is not possible to achieve such an effective neutralization of heparins and the ability to be broken down by blood enzymes, as with natural protamine sulfates. that is, it fails to meet the main requirements for these drugs: effective neutralization of heparins, low EE, toxicity, and ability to be broken down by blood enzymes. At the same time, numerous attempts have been made to find agents other than protamine to neutralize heparin, and extensive research in this field has failed to find anything more suitable than protamine. "

Найбільш близьким за складом до препарату, що заявляється, є готова лікарська форма протамінсульфату, З 70 яка містить як діючу речовину субстанцію протамінсульфату з наступними характеристиками: це суміш пептидів с А, В,С, О у відсотковому відношенні 16,65:25,54:36,13:21,68, відповідно, у кількості 10,0 -11,5 г/л, якThe closest in composition to the claimed drug is the ready-made dosage form of protamine sulfate, C 70, which contains as an active substance the substance of protamine sulfate with the following characteristics: it is a mixture of peptides with A, B, C, O in a percentage ratio of 16.65:25.54 :36,13:21,68, respectively, in the amount of 10.0 -11.5 g/l, as

Із» консервант - фенол у кількості 2,4 - 3,0 г/л, як ізотонічний агент натрію хлорид у кількості 7,0 - 8,2 г/л, як речовину, яка коригує рН розчину, кислоту хлористоводневу у кількості 0,08 - 0,09 г/л та воду - до 1 л (Сертификат соответствия. Мо 77/6467 ЦС и ККЛ. от 25.01.2000 г.). Недоліками цього препарату є його токсичність за рахунок використання великої кількості субстанції протамінсульфату та фенолу як консерванта. б Завданням винаходу є створення високоефективного препарату протигеморагічної дії зі зниженою ав | токсичністю.From" preservative - phenol in the amount of 2.4 - 3.0 g/l, as an isotonic agent, sodium chloride in the amount of 7.0 - 8.2 g/l, as a substance that adjusts the pH of the solution, hydrochloric acid in the amount of 0, 08 - 0.09 g/l and water - up to 1 l (Certificate of conformity. Mo. 77/6467 CS and KKL dated 01.25.2000). The disadvantages of this drug are its toxicity due to the use of a large amount of the substance protamine sulfate and phenol as a preservative. b The task of the invention is to create a highly effective antihemorrhagic drug with reduced av| toxicity

Поставлене завдання вирішується тим, що готова лікарська форма протамінсульфату, яка містить діючу о речовину, консервант, ізотонічний агент, речовину, яка коригує. рН розчину, та воду, у відповідності з со 20 винаходом у якості консерванту містить м-крезол при наступному співвідношенні компонентів, г/л: субстанція протамінсульфату 7,5-9,22 г, м-крезол -1,0-1,25 г, натрію хлорид - 7,5-8,5 г, кислота хлористоводнева - тя 0,056-0,065 г, вода - до 1 л.The task is solved by the fact that the dosage form of protamine sulfate is ready, which contains an active substance, a preservative, an isotonic agent, and a substance that corrects. pH of the solution, and water, in accordance with CO 20, the invention contains m-cresol as a preservative with the following ratio of components, g/l: protamine sulfate substance 7.5-9.22 g, m-cresol -1.0-1.25 g, sodium chloride - 7.5-8.5 g, hydrochloric acid - 0.056-0.065 g, water - up to 1 l.

Субстанція протамінсульфату, яка використовується в препараті, що заявляється, має наступні характеристики: це суміш пептидів А, В,С, Ю, з молекулярною масою від 4,046 до 4,319 кД, у відсотковому 52 відношенні 18,12:29,54:29,89:21,78, відповідно, з активністю не менше 120 МоО./мг та з залишковою в. протеолітичною активністю не більше 0,075 аб.од. Використання такої високоактивної субстанції дозволяє зменшити її загальну кількість при досягненні потрібної ефективності препарату, а отже знизити токсичність готової лікарської форми. Окрім того, відомо, що крезоли за рН розчину від 2 до 10 є більш ефективними по відношенню до широкого спектру мікроорганізмів, дріжджів та грибків у порівнянні з фенолом ("Технология и 60 стандартизация лекарств' (ГНЦЛС), ФА. Конев и др., г.Харьков, 0.0.0. "Рирег, 1996 г.). Ефективність м-крезола як консерванта у готовій лікарській формі протамінсульфату у кількості 1,1 г/л була перевірена авторами рішення, що заявляється, методами, які описані у Державній фармакопеї України 2001 року.The protamine sulfate substance used in the claimed preparation has the following characteristics: it is a mixture of peptides A, B, C, Y, with a molecular weight of 4.046 to 4.319 kD, in a percentage ratio of 18.12:29.54:29.89 :21.78, respectively, with an activity of at least 120 MoO./mg and with a residual with a proteolytic activity of no more than 0.075 ab. units. The use of such a highly active substance allows you to reduce its total amount while achieving the desired effectiveness of the drug, and therefore reduce the toxicity of the finished dosage form. In addition, it is known that cresols at a solution pH from 2 to 10 are more effective against a wide range of microorganisms, yeasts and fungi compared to phenol ("Technology and 60 standardization of drugs" (HNCLS), FA. Konev et al., Kharkiv, 0.0.0. "Ryreg, 1996). The effectiveness of m-cresol as a preservative in the finished dosage form of protamine sulfate in the amount of 1.1 g/l was checked by the authors of the proposed decision by the methods described in the State Pharmacopoeia of Ukraine in 2001.

Як референтні мікроорганізми були використані Сапаїда аіІрбісап АТСС 10231, Рзедотопаз аетдіпоза АТСОС 9027 і ебарпуіососсиз ацгеиз АТСС 6538 Р. Результати досліджень показали, що препарат має виражену бо антимікробну активність по відношенню до вказаних вище штамів. Отже, можливість використання у готовій лікарській формі протамінсульфату невеликої кількості токсичного консерванту також дозволила зменшити токсичність готової лікарської форми протамінсульфату. Окрім того, рН препарату, який заявляється, дорівнює від більше за 4 до 5,5, в порівняні з 3,14 для препарату-прототипу, що свідчить про більшу фізіологічність препарату, який заявляється.Sapaida aiIrbisap ATSS 10231, Rzedotopaz aetdiposa ATSS 9027 and Ebarpuiosossiz atsgeiz ATSS 6538 R were used as reference microorganisms. The results of the studies showed that the drug has a pronounced antimicrobial activity against the above-mentioned strains. Therefore, the possibility of using a small amount of toxic preservative in the finished dosage form of protamine sulfate also made it possible to reduce the toxicity of the finished dosage form of protamine sulfate. In addition, the pH of the claimed drug is greater than 4 to 5.5, compared to 3.14 for the prototype drug, which indicates a greater physiological nature of the claimed drug.

Досягнення поставленого завдання ілюструється прикладом конкретного виконання.The achievement of the task is illustrated by an example of a specific implementation.

Приклад 1 8 г натрію хлориду розчинили у 800 мл води, при перемішуванні додали 8,4 г протаміну сульфату. Після його розчинення додали 1,1г м-крезолу, та перемішували до повного розчинення. Потім рН розчину довели до 4,5 за 7/0 допомогою хлористоводневої кислоти у кількості 0,059 г. Об'єм суміші довели до 1000 мл водою, піддали стерилізуючій фільтрації, розлили у флакони та закупорили. Активність одержаного препарату визначили при титруванні розчинів протамін сульфату гепарином на титраторі Шотта з використанням фототроду ЮР 550.Example 1 8 g of sodium chloride was dissolved in 800 ml of water, while stirring, 8.4 g of protamine sulfate was added. After its dissolution, 1.1 g of m-cresol was added and stirred until complete dissolution. Then the pH of the solution was brought up to 4.5 by 7/0 with the help of hydrochloric acid in the amount of 0.059 g. The volume of the mixture was brought up to 1000 ml with water, subjected to sterilizing filtration, poured into vials and sealed. The activity of the obtained drug was determined by titration of protamine sulfate solutions with heparin on a Schott titrator using a YuR 550 phototrode.

Виявили, що 1 мл препарату мав активність 1150 ОД. Стабільність одержаного препарату визначили при прискореному зберіганні за температури 37 "С протягом 40 діб. За допомогою аналітичної високоефективної 7/5 Відинної хроматографії визначили відсотковий склад пептидів до і після інкубації. Виявили, що склад препарату залишається у межах помилки досліду, тобто, гідроліз не відбувається. Ефективність готової лікарської форми протамінсульфату іп міго визначали і порівнювали за здатністю нейтралізувати гепарин у перфузаті, взятому з екстракорпорального контуру апарату штучного кровообігу під час перфузії. Критерієм оцінки була мінімальна нейтралізуюча доза досліджуваного препарату та препарату-прототипу. Для проведення досліджень були 2о приготовлені робочі розчини препарату, що заявляється, та препарату-прототипу, які містили по 1 мг/мл порівнюваних препаратів, а потім були приготовлені їх розведення у концентрації від 50 до 400 мкг/мл з інтервалом 50 мкг/мл. Пробірки з розчинами розміщували у термостаті за температури 372С на 15 хвилин.It was found that 1 ml of the drug had an activity of 1150 units. The stability of the obtained preparation was determined during accelerated storage at a temperature of 37 "C for 40 days. Using analytical high-performance 7/5 single chromatography, the percentage composition of peptides was determined before and after incubation. It was found that the composition of the preparation remains within the experimental error, i.e., hydrolysis does not occur . The effectiveness of the finished dosage form of protamine sulfate i.p. was determined and compared by its ability to neutralize heparin in the perfusate taken from the extracorporeal circuit of the artificial blood circulation device during perfusion. The evaluation criterion was the minimum neutralizing dose of the drug under study and the prototype drug. For the research, 2 working solutions were prepared of the claimed drug and the prototype drug, which each contained 1 mg/ml of the compared drugs, and then their dilutions were prepared in a concentration from 50 to 400 μg/ml with an interval of 50 μg/ml. Test tubes with solutions were placed in a thermostat at temperatures 372C for 15 minutes.

Результат зчитувався по пробірці, у котрій відбулося згортання крові за додатку найменшої кількості препарату, що заявляється, або препарату прототипу.The result was read from the test tube in which blood coagulation occurred after the application of the smallest amount of the claimed drug or the prototype drug.

Результати проведених 23 досліджень іп міїго зведені в таблицю.The results of the conducted 23 studies of ip miigo are summarized in a table.

Мінімальна доза (мкг/мл), яка нейтралізує гепарин у перфузаті « - зоThe minimum dose (μg/ml) that neutralizes heparin in the perfusate "- zo

Фо сч пси ни Ін НИ ИН о зв Ф пн ни и НЕ ИН юю « и з с . г» 4Fosch psy ny In NI YN o zv F pn ny i NE YN yuyu « i z s. g" 4

Ф о іх сг з 11 1ююю оо Таким чином препарат, що заявляється, має здатність нейтралізувати антикоагуляційну дію препарату р» "Гепарин" з активністю 5000 МО/мл, котрий використовується для забезпечення незгортання крові під час роботи апарату штучного кровообігу. Препарат, що заявляється, є активнішим за препарат-прототип і, завдяки своєму складу, менш токсичним.Thus, the claimed drug has the ability to neutralize the anticoagulant effect of the drug "Heparin" with an activity of 5000 IU/ml, which is used to ensure blood does not clot during the operation of the artificial blood circulation device. The claimed drug is more active than the prototype drug and, due to its composition, less toxic.

Claims

The formula of the invention is the finished medicinal form of protamine sulfate, which contains the active substance - protamine sulfate substance, a preservative, an isotonic agent - sodium chloride, a substance that adjusts the pH of the solution, - hydrochloric acid and b5 water, which differs in that it contains m-cresol as a preservative at the following ratio of components, g/l:

protamine sulfate substance 7.5-9.2 m-cresol 1.0-1.25 sodium chloride 7.5-8.5 hydrochloric acid 0.056-0.065 water doiyl. Official bulletin "Industrial Property". Book 1 "Inventions, useful models, topographies of integral and" her and . codes and microcircuits", 2003, M 9, 15.09.2003. State Department of Intellectual Property of the Ministry of Education and Science of Ukraine. " - (ze) c "c) (Se) -

with . and? (o) ((c) name) (95) - 60 b5