UA46668C2 - Method for preparing combined dosage form of human insulin - Google Patents
Method for preparing combined dosage form of human insulin Download PDFInfo
- Publication number
- UA46668C2 UA46668C2 UA2001129231A UA2001129231A UA46668C2 UA 46668 C2 UA46668 C2 UA 46668C2 UA 2001129231 A UA2001129231 A UA 2001129231A UA 2001129231 A UA2001129231 A UA 2001129231A UA 46668 C2 UA46668 C2 UA 46668C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- insulin
- preparation
- combined
- human insulin
- crystals
- Prior art date
Links
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 22
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 title abstract description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 127
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims abstract description 37
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 12
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 48
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 31
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 13
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 7
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims description 7
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 7
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 claims 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 19
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 human insulin ester Chemical class 0.000 description 4
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RCFKEIREOSXLET-UHFFFAOYSA-N disulfamide Chemical compound CC1=CC(Cl)=C(S(N)(=O)=O)C=C1S(N)(=O)=O RCFKEIREOSXLET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N butane-1,1-diol Chemical compound CCCC(O)O CDQSJQSWAWPGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKTYLMNFRDHKIL-UHFFFAOYSA-N copper;5,10,15,20-tetraphenylporphyrin-22,24-diide Chemical compound [Cu+2].C1=CC(C(=C2C=CC([N-]2)=C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(N=2)=C(C=2C=CC=CC=2)C2=CC=C3[N-]2)C=2C=CC=CC=2)=NC1=C3C1=CC=CC=C1 RKTYLMNFRDHKIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K trisodium;phosphate;dihydrate Chemical class O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O CRKADHVTAQCXRA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- ALQSHHUCVQOPAS-UHFFFAOYSA-N 1,5-Pentadiol Natural products OCCCCCO ALQSHHUCVQOPAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RRGBOWXXLBROIW-SNAWJCMRSA-N 6-[(e)-2-[3-(2-hydroxyethyl)phenyl]ethenyl]naphthalene-2-carboximidamide Chemical compound C1=CC2=CC(C(=N)N)=CC=C2C=C1\C=C\C1=CC=CC(CCO)=C1 RRGBOWXXLBROIW-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960001939 zinc chloride Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості Її може бути використаний у виробництві 2 високоочищених комбінованих препаратів інсуліну людини.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry. It can be used in the production of 2 highly purified combined preparations of human insulin.
Відомий спосіб виготовлення комбінованого препарату інсуліну шляхом одержання субстанції інсуліну з підшлункової залози тварин, очищення одержаного екстракту від баластних білків, приготування кристалічної та аморфної часток комбінованого препарату та їх змішування (1951, НаПаз-МоїІег 19561.There is a known method of producing a combined insulin preparation by obtaining the substance of insulin from the pancreas of animals, purifying the obtained extract from ballast proteins, preparing crystalline and amorphous parts of the combined preparation and mixing them (1951, NaPaz-MoiIeg 19561.
Отриманий таким способом комбінований препарат інсуліну містить велику кількість шкідливих для здоров'я 70 людини домішок, які викликають небажані алергічні реакції та ускладнення. Для цього способу також характерні значні втрати інсуліну при приготування його лікарської форми і нестабільність фізичного стану, тому що аморфна частка препарату конгломерується під час зберігання, що значно погіршує якість препарату.The combined insulin preparation obtained in this way contains a large number of impurities harmful to the health of 70 people, which cause unwanted allergic reactions and complications. This method is also characterized by significant losses of insulin during the preparation of its dosage form and instability of the physical state, because the amorphous part of the drug conglomerates during storage, which significantly worsens the quality of the drug.
Найбільш близьким до способу, який заявляється, є спосіб виготовлення комбінованого препарату інсуліну, який включає одержання ефіру інсуліну людини транспептидацією свинячого інсуліну надлишком 12 ді-трет-бутилового ефіру треоніну у водно-органічному середовищі в присутності трипсину, яка проводиться за молярного надлишку ді-трет-бутилового ефіру по відношенню до свинячого інсуліну більше ніж 5 і за вагового співвідношення трипсину і свинячого інсуліну від 1 до 1 - 200, інгібування реакції створенням кислого середовища з рН 3, очищення отриманого ефіру аніонною та/або катіонною хроматографією, зняття захисних груп відомим способом трифтороцтовою кислотою, кристалізацію інсуліну людини, приготування частки короткої дії комбінованого препарату шляхом розчинення певної кількості кристалів інсуліну в розбавленій кислоті та змішування з розчинами консерванту, ізотонічного агента і речовинами з буферною ємністю, приготування частки пролонгованої дії комбінованого препарату шляхом розчинення кристалів інсуліну, які залишилися, також в розбавленій кислоті з наступним додаванням кислих розчинів іонів цинку і протамінсульфату, змішуванням з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину, витримуванням суміші до утворення кристалів та с поєднання отриманих часток комбінованого препарату інсуліну |Саіепісв ої Іпзцііп Ргерагайопв. 9. Вгапде Ге) ейа!., стр. 27, 31, 43, 66)Ї. Цей спосіб дозволяє збільшити вихід ефіру інсуліну людини, який характеризує вихід інсуліну у процесі виробництва готових лікарських форм, до 6095 (а за певних умов і навіть до 90965), суттєво знизити кількість шкідливих домішок, які важко усуваються (до 795), та забезпечити стабільність фізичного стану готової лікарської форми. соClosest to the claimed method is the method of manufacturing a combined insulin preparation, which includes the preparation of human insulin ester by transpeptidation of porcine insulin with an excess of 12-di-tert-butyl threonine ether in an aqueous-organic medium in the presence of trypsin, which is carried out at a molar excess of di-tert -butyl ether in relation to pig insulin is more than 5 and at a weight ratio of trypsin and pig insulin from 1 to 1 - 200, inhibition of the reaction by creating an acidic medium with a pH of 3, purification of the obtained ether by anion and/or cation chromatography, removal of protective groups by a known method trifluoroacetic acid, crystallization of human insulin, preparation of the short-acting part of the combined drug by dissolving a certain amount of insulin crystals in dilute acid and mixing with preservative solutions, isotonic agent and substances with a buffer capacity, preparation of the long-acting part of the combined drug by dissolving insulin crystals that remained, also in dilute acid followed by the addition of acidic solutions of zinc ions and protamine sulfate, mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol, and glycerol, keeping the mixture until crystals form, and combining the obtained particles of the combined insulin preparation. . 9. Vgapde Ge) eya!., pp. 27, 31, 43, 66)Y. This method makes it possible to increase the yield of human insulin ester, which characterizes the yield of insulin in the production of ready-made dosage forms, up to 6095 (and under certain conditions, even up to 90965), significantly reduce the number of harmful impurities that are difficult to eliminate (up to 795), and ensure stability the physical state of the finished medicinal form. co
Але недоліками цього способу все ще залишаються досить високі імунологічні властивості препарату та Ге) значні втрати інсуліну у процесі виробництва.But the disadvantages of this method still remain the rather high immunological properties of the drug and the significant losses of insulin in the production process.
Завданням винаходу є створення ефективного, економічного способу виготовлення комбінованого препарату о інсуліну з низькими імунологічними властивостями, який гарантує збільшення виходу інсуліну в процесі Ге) виробництва.The task of the invention is to create an effective, economical method of manufacturing a combined preparation of insulin with low immunological properties, which guarantees an increase in the output of insulin in the process of production.
Зо Поставлене завдання вирішується тим, що у способі виготовлення комбінованого препарату інсуліну людини, М який включає одержання ефіру інсуліну людини транспептидацією свинячого інсуліну надлишком ді-трет-бутилового ефіру треоніну у водно-органічному середовищі в присутності трипсину, хроматографічне очищення отриманого ефіру, зняття захисних груп, кристалізацію інсуліну людини, приготування частки короткої « дії комбінованого препарату шляхом розчинення певної кількості кристалів інсуліну в розбавленій кислоті та З 70 змішування з розчинами консерванту, ізотонічного агента і речовинами з буферною ємністю, приготування с частки пролонгованої дії комбінованого препарату шляхом розчинення кристалів інсуліну, які залишилися, такожЗ The task is solved by the fact that in the method of manufacturing a combined preparation of human insulin, M, which includes obtaining an ester of human insulin by transpeptidation of porcine insulin with an excess of di-tert-butyl threonine ether in an aqueous-organic medium in the presence of trypsin, chromatographic purification of the obtained ester, removal of protective groups , crystallization of human insulin, preparation of a portion of the short-acting combined drug by dissolving a certain amount of insulin crystals in dilute acid and mixing with solutions of preservative, isotonic agent and substances with a buffer capacity, preparation of a portion of the prolonged action of the combined drug by dissolving insulin crystals, which remained, too
Із» в розбавленій кислоті з наступним додаванням кислих розчинів іонів цинку і протамінсульфату, змішуванням з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину і витримуванням суміші до утворення кристалів, поєднання отриманих часток комбінованого препарату інсуліну, реакцію транспептидації проводять за молярного надлишку ді-трет-бутилового ефіру треоніну від більш ніж 100 до 500 та за вагового співвідношення шк трипсину і свинячого інсуліну від 1 до 300 - 1000, потім розбавляють реакційну суміш водою у 2 - З рази,Iz" in dilute acid followed by the addition of acidic solutions of zinc ions and protamine sulfate, mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol, and glycerol and keeping the mixture until crystals form, combining the obtained fractions of the combined insulin preparation, the transpeptidation reaction is carried out with a molar excess of di-tert- of threonine butyl ether from more than 100 to 500 and at a weight ratio of trypsin and porcine insulin from 1 to 300 - 1000, then the reaction mixture is diluted with water 2 - 3 times,
Ге») проводять очищення рідинною хроматографією високого тиску ефіру інсуліну людини та інсуліну людини, одержаного після прямої кристалізації, при приготуванні обох часток комбінованого препарату розчинення б кристалів інсуліну в розбавленій кислоті проводять поетапно, причім спочатку одержують дрібнодисперснуGe") perform purification by high-pressure liquid chromatography of human insulin ether and human insulin obtained after direct crystallization, during the preparation of both parts of the combined preparation, the dissolution of insulin crystals in dilute acid is carried out step by step, and at first a finely dispersed
Ге»! 20 суспензію кристалів інсуліну у воді, потім до неї додають розбавлену кислоту, і при приготуванні частки пролонгованої дії комбінованого препарату суміш, отриману після змішування з забуференими розчинами со т-крезолу, фенолу і гліцерину, витримують за температури 18 - 2122; протягом 20 - 22 годин.Gee! 20 suspension of insulin crystals in water, then diluted acid is added to it, and when preparing a portion of the prolonged action of the combined drug, the mixture obtained after mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol and glycerin is kept at a temperature of 18 - 2122; within 20 - 22 hours.
Супутніми спорідненими домішками до свинячого інсуліну являються свинячий проінсулін та продукти модифікації і деградації свинячого інсуліну. 99 Водно-органічне середовище являє собою воду з сумішшю апротонних (наприклад, діметілацетамід) таPorcine proinsulin and products of modification and degradation of porcine insulin are concomitant related impurities to porcine insulin. 99 Aqueous-organic medium is water with a mixture of aprotic (for example, dimethylacetamide) and
ГФ) протонних (наприклад, 1,2 етандіол, 1,4 бутандіол, 1,5 пентадіол) розчинників. юю Трипсин у представленому технічному рішенні може бути свинячим або бичачим.HF) protic (for example, 1,2 ethanediol, 1,4 butanediol, 1,5 pentadiol) solvents. Trypsin in the presented technical solution can be porcine or bovine.
В реакції транспептидації може використовуватися ді-трет-бутиловий ефір треоніну або його сіль.In the transpeptidation reaction, threonine di-tert-butyl ether or its salt can be used.
Розбавлення реакційної суміші водою в 2 - З рази дозволяє безпосередньо наносити розбавлену суміш на 60 колонку системи рідинної хроматографії високого тиску або, як вона ще називається, системи високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ), що спрощує спосіб та усуває необхідність виконання ряду технологічних операцій, які описані в прототипі, тобто: осадження реакційної суміші, відокремлення осаду центрифугуванням, розчинення осаду. Необхідність виконання таких операцій також усувається і після зняття захисних груп завдяки прямій кристалізації. бо Окрім того, використання системи ВЕРХ дозволяє ефективно відокремити ефір інсуліну людини від свинячого інсуліну, який не прореагував, та домішок-супутників реакції транспептидації.Dilution of the reaction mixture with water 2-3 times allows you to directly apply the diluted mixture to a 60 column of a high-pressure liquid chromatography system or, as it is also called, a high-performance liquid chromatography (HPLC) system, which simplifies the method and eliminates the need to perform the technological operations that are described in the prototype, that is: sedimentation of the reaction mixture, separation of the sediment by centrifugation, dissolution of the sediment. The need to perform such operations is also eliminated after the removal of protective groups due to direct crystallization. because In addition, the use of the HPLC system allows for the efficient separation of human insulin ester from unreacted porcine insulin and impurities accompanying the transpeptidation reaction.
Заключне очищення кінцевого продукту першої стадії - інсуліну людини, який одержується після зняття захисних груп відомим способом трифтороцтовою кислотою та прямої кристалізації інсуліну людини, також проводиться на колонці системи високоефективної рідинної хроматографії і дозволяє досягти ще кращих результатів.The final purification of the final product of the first stage - human insulin, which is obtained after the removal of protective groups by the known method with trifluoroacetic acid and direct crystallization of human insulin, is also carried out on a column of a high-performance liquid chromatography system and allows to achieve even better results.
Умови реакції транспептидації (фермент-субстратне співвідношення та молярний надлишок ді-трет-бутилового ефіру треоніну), які відрізняють рішення, що заявляється, дозволяють збільшити ступінь конверсії свинячого інсуліну або вихід ефіру інсуліну людини до 9895 та зменшити кількість домішок, котрі /о важко усуваються, до 1,595. На ще більший ступіть усунення домішок спрямоване і додаткове очищення кристалів інсуліну людини - до 0,995.The conditions of the transpeptidation reaction (enzyme-substrate ratio and molar excess of threonine di-tert-butyl ether), which distinguish the claimed solution, allow to increase the degree of conversion of porcine insulin or the yield of human insulin ester up to 9895 and to reduce the number of impurities that are difficult to remove , up to 1.595. Additional purification of human insulin crystals - up to 0.995 - is aimed at an even greater level of impurity removal.
Для приготування лікарської форми інсуліну пролонгованої дії кристали інсуліну спочатку суспендують у воді і добре перемішують до одержання дрібнодисперсної суспензії, а потім додають до неї 1М НОСІ.To prepare the dosage form of long-acting insulin, insulin crystals are first suspended in water and mixed well until a finely dispersed suspension is obtained, and then 1M NOSI is added to it.
Приготування дрібнодисперсної суспензії на першому етапі, тобто коли кожна окрема дрібна частка інсуліну /5 Виявляється вже з усіх боків оточеною водою, створює умови для їх швидкого розчинення у розбавленій кислоті на другому етапі. Таким чином, час контакту кристалів інсуліну з кислотою зменшується, що призводить до зменшення утворення А21-дезаміду інсуліну, а отже до підвищення чистоти препарату. Потім додають кислі розчини іонів цинку та протамінсульфату, змішують з забуференими розчинами, які обов'язково містять і т-крезол, і фенол, а також гліцерин. Одержаний розчин витримують за температури 18 - 2123 протягом 20 - 22 годин. Такий режим вирощування кристалів дозволяє одержати кристалічну суспензію зі звуженим діапазоном довжини кристалів тетрагональної форми порівняно з прототипом (від 1 до 25мкм і від 1 до бОмкм, відповідно), що забезпечує більш рівномірне вивільнення інсуліну в організмі людини, тобто забезпечує одержання препарату більш високої якості.The preparation of a finely dispersed suspension in the first stage, that is, when each individual small particle of insulin /5 is already surrounded by water on all sides, creates conditions for their rapid dissolution in dilute acid in the second stage. Thus, the contact time of insulin crystals with acid decreases, which leads to a decrease in the formation of A21-desamide of insulin, and therefore to an increase in the purity of the drug. Then acidic solutions of zinc ions and protamine sulfate are added, mixed with buffered solutions that necessarily contain t-cresol, phenol, and glycerin. The resulting solution is kept at a temperature of 18 - 2123 for 20 - 22 hours. This mode of growing crystals allows obtaining a crystalline suspension with a narrowed range of tetragonal crystal length compared to the prototype (from 1 to 25 μm and from 1 to bΩm, respectively), which ensures a more uniform release of insulin in the human body, i.e. ensures the preparation of a higher quality drug.
Комбіновані препарати за даним способом можуть бути виготовлені з різними пропорціями розчинної та с Кристалічної часток інсуліну, наприклад, 15/85, 25/75, 50/50. Такі препарати зберігають свої хімічні та фізичні властивості, незалежно від співвідношення розчинної та кристалічної часток, і забезпечують спрощення о процедури введення препарату та збільшують точність дозування.Combined drugs according to this method can be made with different proportions of soluble and crystalline insulin particles, for example, 15/85, 25/75, 50/50. Such drugs retain their chemical and physical properties, regardless of the ratio of soluble and crystalline particles, and provide simplification of the drug administration procedure and increase the accuracy of dosing.
Вирішення поставленого завдання ілюструється прикладами конкретного виконання.The solution of the given task is illustrated by examples of specific implementation.
Приклад 1 с бг сирого свинячого інсуліну суспендували в 24мл води, додали З,Омл оцтової кислоти, 180мл 0,7М ді-трет-бутилового ефіру треоніну в суміші діметілацетаміду та 1,4 бутандіолу, 1У9мг трипсину в 12мл 0,05М о кальцію ацетату, реакційну суміш перемішували протягом 16 годин за температури 232С. Реакцію інгібували «о розбавленням водою у два рази по відношенню до об'єму реакційної суміші і рН суміші довели до 2,5 1095 НОЇ.Example 1 of crude porcine insulin was suspended in 24 ml of water, 3.0 ml of acetic acid, 180 ml of 0.7 M di-tert-butyl threonine ether in a mixture of dimethylacetamide and 1,4 butanediol, 1U9 mg of trypsin in 12 ml of 0.05 M calcium acetate were added. the reaction mixture was stirred for 16 hours at a temperature of 232C. The reaction was inhibited by diluting with water twice the volume of the reaction mixture and the pH of the mixture was brought to 2.5 1095 NOI.
Розбавлену реакційну суміш відфільтрували через фільтр з розміром пор О0,2мкм для нанесення на колонку і-й системи ВЕРХ. В якості нерухомої фази використали сорбент ОІАБОСЕЇ 005 (С 18) з розміром часток 15мкм і «І розміром пор 120А. Для рухомої фази використали 0,05М гліцин-НСІ буфер, який містив 0,015М амонію сульфату і пропанолу-2 з концентрацією від 20 до 35956 за рН 2,5. Фракцію ефірної похідної осадили в присутності іонів цинку за рН від 6,8 до 7,0, віддентрифуговали, одержаний осад промили водою та висушили у « вакуумній сушильній шафі. 5,0г одержаного ефіру інсуліну людини розчиняли в бОмл трифтороцтової кислоти, витримали суміш протягом 40 хвилин за температури 252С, трифтороцтову кислоту відігнали на роторному - с випарнику за температури не вище ніж 302, одержаний залишок сирого інсуліну людини розчинили у воді і и провели пряму цитратну кристалізацію за рН 5,8. є» Кристалічну суспензію профільтрували, кристали промили водою, розчинили в 0,25М оцтовій кислоті та нанесли на колонку системи ВЕРХ. В якості рухомої фази використали 0,05М ацетатний буфер, який містив пропанолу-2 від 10 до 2090 за рН 2,5. Фракцію інсуліну людини відкристалізували за рН 5,8, суспензію кристалів т» профільтрували, промили водою та ліофільно висушили. Вихід інсуліну людини склав 5,05г. Методом бу імуноферментного аналізу було встановлено, що залишок свинячого проінсуліну у отриманому інсуліні людини становив менше мкг/г. Щодо інших споріднених домішок, то за допомогою аналітичної системи ВЕРХ був (е)) встановлений їх вміст - 0,8595.The diluted reaction mixture was filtered through a filter with a pore size of O0.2 μm for application to the column of the i-th HPLC system. OIABOSEI 005 (C 18) sorbent with a particle size of 15 μm and a pore size of 120A was used as a stationary phase. For the mobile phase, a 0.05M glycine-HCI buffer was used, which contained 0.015M ammonium sulfate and propanol-2 with a concentration from 20 to 35956 at pH 2.5. The ether derivative fraction was precipitated in the presence of zinc ions at a pH of 6.8 to 7.0, centrifuged, the obtained precipitate was washed with water and dried in a vacuum oven. 5.0 g of the obtained ester of human insulin was dissolved in bOml of trifluoroacetic acid, the mixture was kept for 40 minutes at a temperature of 252С, the trifluoroacetic acid was driven off on a rotary evaporator at a temperature not higher than 302, the obtained residue of crude human insulin was dissolved in water and a direct citrate crystallization at pH 5.8. is» The crystalline suspension was filtered, the crystals were washed with water, dissolved in 0.25M acetic acid and applied to the column of the HPLC system. A 0.05M acetate buffer containing propanol-2 from 10 to 2090 at pH 2.5 was used as the mobile phase. The human insulin fraction was crystallized at pH 5.8, the crystal suspension was filtered, washed with water and lyophilized. The output of human insulin was 5.05 g. Using the enzyme-linked immunosorbent assay method, it was established that the remainder of porcine proinsulin in the obtained human insulin was less than μg/g. As for other related impurities, their content was determined to be 0.8595 using an HPLC analytical system.
Фу 50 Приготування кристалічної частки пролонгованої дії комбінованого препарату інсуліну, яка складає 8595 від загальної кількості інсуліну.Fu 50 Preparation of the crystalline part of the prolonged action of the combined insulin preparation, which is 8595 of the total amount of insulin.
ІЧ е) Кристали інсуліну людини у кількості 2,295г помістили в 17Омл води, а потім добре перемішали до одержання дрібнодисперсної суспензії додали 71М НС! в такій кількості щоб рН розчину був не нижче 3,1. 0,189г протамінсульфату розчинили у Зімл води, додаючи 1М НСЇ до такого ж рН. 0,135г цинку хлориду додали у розчин протамінсульфату. Потім змішали всі приготовані кислі розчини. Далі приготували буферний розчин з о 3,125г натрію фосфорнокислого однозаміщеного двоводного в 1,235л води, додали ще 23,8г гліцерину, 2,23г т-крезолу і 0,895г фенолу та перемішували протягом 30 хвилин і рН суміші довели до 7,8. Далі буферний розчин їмо) піддали стерилізуючій фільтрації і профільтрували туди суміш кислих розчинів протамінсульфату, цинку хлориду та інсуліну. Отриману суміш витримали, перемішуючи, за температури 202С протягом 21 години для одержання 60 кристалічної суспензії.IR f) Crystals of human insulin in the amount of 2.295 g were placed in 17 Oml of water, and then mixed well to obtain a finely dispersed suspension, 71 M of NS was added! in such an amount that the pH of the solution is not lower than 3.1. 0.189 g of protamine sulfate was dissolved in 1 ml of water, adding 1 M of HCl to the same pH. 0.135 g of zinc chloride was added to the protamine sulfate solution. Then all the prepared acidic solutions were mixed. Next, a buffer solution was prepared from about 3.125 g of monosubstituted dihydrate sodium phosphate in 1.235 l of water, another 23.8 g of glycerol, 2.23 g of t-cresol and 0.895 g of phenol were added and stirred for 30 minutes, and the pH of the mixture was brought to 7.8. Next, the buffer solution was subjected to sterilizing filtration and a mixture of acidic solutions of protamine sulfate, zinc chloride, and insulin was filtered there. The resulting mixture was kept, stirring, at a temperature of 202C for 21 hours to obtain 60 crystalline suspension.
Приготування розчинної частки короткої дії комбінованого препарату, яка складає 1596.Preparation of the soluble part of the short-acting combined drug, which is 1596.
Кристали інсуліну людини у кількості 0,405г помістили в 52,5мл води, а потім добре перемішали до одержання дрібнодисперсної суспензії, додали 1М НОСІЇ в такій кількості, щоб рН розчину був не нижче 3,1. Далі приготували буферний розчин з 0,55г натрію фосфорнокислого однозаміщеного двоводного в 21Омл води, б5 додали ще 4,2г гліцерину, 0,39г т-крезолу і 0,157г фенолу та перемішували протягом ЗО хвилин і рН суміші довели до 7,4. Розчин інсуліну змішали з буферним розчином і провели стерилізуючу фільтрацію в ємність з кристалічною суспензією, перемішали протягом години і розлили в асептичних умовах у флакони та картриджі.Crystals of human insulin in the amount of 0.405 g were placed in 52.5 ml of water, and then mixed well to obtain a finely dispersed suspension, 1 M CARRIER was added in such an amount that the pH of the solution was not lower than 3.1. Next, a buffer solution was prepared from 0.55 g of monosubstituted dihydrate sodium phosphate in 21 Oml of water, 4.2 g of glycerol, 0.39 g of t-cresol, and 0.157 g of phenol were added and stirred for 30 minutes, and the pH of the mixture was brought to 7.4. The insulin solution was mixed with a buffer solution and sterilizing filtration was carried out in a container with a crystalline suspension, mixed for an hour and poured under aseptic conditions into vials and cartridges.
Дослідження комбінованого препарату інсуліну за допомогою аналітичної системи ВЕРХ показали, що препарат має загальну активність 39,9МО/мл, вміст високомолекулярних сполук 0,395, споріднених супутніх домішок 0,990,Studies of the combined insulin preparation using the HPLC analytical system showed that the preparation has a total activity of 39.9 IU/ml, the content of high molecular compounds 0.395, related concomitant impurities 0.990,
А21-дезаміду інсуліну 0,496, активність супернатанту складає 6,5МО/мл.. Кристали, досліджені за допомогою мікроскопа з 400-кратним збільшенням, виявили тетрагональну форму і довжину від З до 21мкм.A21-desamide of insulin is 0.496, the activity of the supernatant is 6.5 IU/ml. Crystals examined using a microscope with a 400-fold magnification revealed a tetragonal shape and length from 3 to 21 μm.
Приклад 2Example 2
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну, як в прикладі 1, за винятком того, що співвідношення розчинної частки до кристалічної складало 25/75. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 2 /о показали, що активність препарату, вміст високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок,The conditions for obtaining a combined insulin preparation are the same as in example 1, except that the ratio of the soluble part to the crystalline part was 25/75. Studies of the combined drug according to example 2/o showed that the activity of the drug, the content of high-molecular compounds, related concomitant impurities,
А21-дезаміду інсуліну і розміри кристалів були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. При цьому активність супернатанту складала 10,3МО/мл.A21-insulin desamide and crystal sizes were at the level described in the first example, but within the error of determination. At the same time, the activity of the supernatant was 10.3 IU/ml.
Приклад ЗExample C
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну, як в прикладі 1, за винятком того, що співвідношення 7/5 розчинної частки до кристалічної складало 50/50. Дослідження комбінованого препарату з згідно прикладом З показали, що активність препарату, вміст високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок,The conditions for obtaining a combined insulin preparation are the same as in example 1, except that the ratio of 7/5 of the soluble part to the crystalline part was 50/50. Studies of the combined drug with, according to example C, showed that the activity of the drug, the content of high-molecular compounds, related concomitant impurities,
А21-дезаміду інсуліну і розміри кристалів були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. При цьому активність супернатанту складала 21МО/мл.A21-insulin desamide and crystal sizes were at the level described in the first example, but within the error of determination. At the same time, the activity of the supernatant was 21 IU/ml.
Приклад 4Example 4
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну, як в прикладі 1, за винятком того, що на першій стадії процесу додали ЗОмг трипсину в 12мл О0,05М кальцію ацетату, а реакцію проводили протягом 10 годин за температури 232С. Вихід інсуліну склав З3,7бг. Дослідження комбінованого препарату з згідно прикладом 4 показали, що активність препарату складає 39,22МО/мл, вміст високомолекулярних сполук 0,795, споріднених супутніх домішок 4,195, А21-дезаміду інсуліну 2,096, а активність супернатанту 6,4МО/мл. Довжина кристалів су складала 2 - 23мкм.The conditions for obtaining the combined insulin preparation are the same as in example 1, except that at the first stage of the process, 3 mg of trypsin was added to 12 ml of 0.05 M calcium acetate, and the reaction was carried out for 10 hours at a temperature of 232C. The output of insulin was 3.7bg. Studies of the combined preparation according to example 4 showed that the activity of the preparation is 39.22 IU/ml, the content of high molecular weight compounds 0.795, related concomitant impurities 4.195, insulin A21-desamide 2.096, and the activity of the supernatant 6.4 IU/ml. The length of the SU crystals was 2 - 23 μm.
Приклад 5 і)Example 5 i)
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну, як в прикладі 1, за винятком того, що на першій стадії процесу додали 4,8мг трипсину в 12мл 0,05М кальцію ацетату, а реакцію проводили протягом 10 годин за температури 232. Вихід інсуліну склав 3,395г. Дослідження комбінованого препарату з згідно прикладом 5 с показали, що активність препарату складає 38,5МО/мл, вміст високомолекулярних сполук 0,896, споріднених супутніх домішок 1,895, А21-дезаміду інсуліну 0,895, активність супернатанту складає 6,8МО/мл. Довжина і-й кристалів складала 2 - 25мМкм. Ге)The conditions for obtaining the combined insulin preparation are the same as in example 1, except that at the first stage of the process, 4.8 mg of trypsin was added to 12 ml of 0.05 M calcium acetate, and the reaction was carried out for 10 hours at a temperature of 232. The yield of insulin was 3.395 g. Studies of the combined drug according to example 5c showed that the activity of the drug is 38.5 IU/ml, the content of high molecular weight compounds 0.896, related concomitant impurities 1.895, insulin A21-desamide 0.895, the activity of the supernatant is 6.8 IU/ml. The length of the i-th crystals was 2 - 25 mm. Gee)
Приклад 6Example 6
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що на першій і-й стадії процесу додали 180мл 0,51М ді-трет-бутилового ефіру треоніну в суміші діметілацетаміду та 14 «Ж бутандіолу. Вихід інсуліну склав З,1г. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 6 показали, що препарат має активність 39,3МО/мл, вміст високомолекулярних сполук 0,890, споріднених супутніх домішок 1,690,The conditions for obtaining the combined preparation of human insulin are the same as in example 1, except that at the first and second stage of the process, 180 ml of 0.51 M di-tert-butyl threonine ether was added in a mixture of dimethylacetamide and 14 g of butanediol. The output of insulin was 3.1 g. Studies of the combined preparation according to example 6 showed that the preparation has an activity of 39.3 IU/ml, the content of high molecular compounds 0.890, related concomitant impurities 1.690,
А21-дезаміду інсуліну 0,895, а активність супернатанту складає 7,0МО/мл. Довжина кристалів складала 1 - « 25МКМм.A21-desamide of insulin is 0.895, and the activity of the supernatant is 7.0 IU/ml. The length of the crystals was 1 - 25 µm.
Приклад 7 - с Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що на першій ц стадії процесу додали 180мл 1,29М ді-трет-бутилового ефіру треоніну в суміші діметілацетаміду та 1,4 "» бутандіолу. Вихід інсуліну склав 3,44г. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 7 показали, що препарат має активність 39,3МО/мл, вміст високомолекулярних сполук 0,7595, споріднених супутніх домішок 1,396, А21-дезаміду інсуліну 1,195, активність супернатанту складає 5,9МО/мл. Довжина кристалів складала 2 - ьч 24мкм.Example 7 - c Conditions for obtaining a combined preparation of human insulin, as in example 1, except that at the first stage of the process, 180 ml of 1.29 M di-tert-butyl threonine ether was added in a mixture of dimethylacetamide and 1.4"" butanediol. Output of insulin was 3.44 g. Studies of the combined drug according to example 7 showed that the drug has an activity of 39.3 IU/ml, the content of high molecular compounds 0.7595, related concomitant impurities 1.396, A21-desamide of insulin 1.195, the activity of the supernatant is 5.9 IU/ml ml The length of the crystals was 2 - 24 μm.
Приклад 8Example 8
Ф Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що розчин,F Conditions for obtaining a combined human insulin preparation, as in example 1, except that the solution,
Ге) одержаний після змішування з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину, витримували за температури 149С. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 8 показали, що активністьGe) obtained after mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol and glycerol, was kept at a temperature of 149C. Studies of the combined drug according to example 8 showed that the activity
Ф препарату, вміст високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок, А21-дезаміду інсуліну, активністьF of the drug, the content of high molecular weight compounds, related concomitant impurities, insulin A21-desamide, activity
ІЧ е) супернатанту були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. Однак при цьому 9590 кристалів мали довжину від 1 до 55мМкм.IR e) of the supernatant were at the level described in the first example, but within the error of determination. However, at the same time, 9590 crystals had a length from 1 to 55 mm.
Приклад 9Example 9
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що розчин, одержаний після змішування з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину витримували за о температури 259С. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 9 показали, що активність їмо) препарату, вміст високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок, А21-дезаміду інсуліну були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. Довжина кристалів дорівнювала від 1 до бо БОмкм і активність супернатанту становила 8,3МО/мл, що свідчило про неповний процес кристалізації.The conditions for obtaining the combined preparation of human insulin are the same as in example 1, except that the solution obtained after mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol and glycerol was kept at a temperature of 259C. Studies of the combined drug according to example 9 showed that the activity of the drug, the content of high molecular compounds, related concomitant impurities, A21-desamide of insulin were at the level described in the first example, but within the definition error. The length of the crystals was equal to 1 to 20 μm and the activity of the supernatant was 8.3 IU/ml, which indicated an incomplete crystallization process.
Приклад 10Example 10
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що розчин, одержаний після змішування з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину витримували протягом 17 годин. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 10 показали, що активність препарату, вміст 65 високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок, А21-дезаміду інсуліну, активність супернатанту були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. Кількість кристалів з довжиною від 1 до 25мкм складала тільки 55905.The conditions for obtaining the combined preparation of human insulin are the same as in example 1, except that the solution obtained after mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol and glycerol was kept for 17 hours. Studies of the combined preparation according to example 10 showed that the activity of the preparation, the content of 65 high-molecular compounds, related concomitant impurities, A21-desamide of insulin, the activity of the supernatant were at the level described in the first example, but within the definition error. The number of crystals with a length from 1 to 25 μm was only 55,905.
Приклад 11Example 11
Умови одержання комбінованого препарату інсуліну людини, як в прикладі 1, за винятком того, що розчин, одержаний після змішування з забуференими розчинами т-крезолу, фенолу і гліцерину витримували протягом годин. Дослідження комбінованого препарату згідно з прикладом 11 показали, що активність препарату, вміст високомолекулярних сполук, споріднених супутніх домішок, А21-дезаміду інсуліну, активність супернатанту були на рівні, описаному в першому прикладі, але в межах помилки визначення. Кількість кристалів з довжиною від 1 до 25мкм складала 9595. Такий же результат одержують і коли розчин витримують 22 години, тобто тут просто 7/0 процес одержання готової лікарської форми необгрунтоване затягується.The conditions for obtaining the combined preparation of human insulin are the same as in example 1, except that the solution obtained after mixing with buffered solutions of t-cresol, phenol and glycerin was kept for hours. Studies of the combined preparation according to example 11 showed that the activity of the preparation, the content of high molecular weight compounds, related concomitant impurities, A21-insulin desamide, the activity of the supernatant were at the level described in the first example, but within the definition error. The number of crystals with a length from 1 to 25 μm was 9595. The same result is obtained when the solution is kept for 22 hours, that is, here simply 7/0 the process of obtaining the finished dosage form is unreasonably delayed.
Отже, аналіз прикладів конкретного виконання (приклади 1 - 3) свідчить, що способом, який заявляється, можуть бути одержані комбіновані препарати інсуліну людини з різним співвідношенням кристалічної та розчинної часток. Використання даного способу дозволяє збільшити вихід інсуліну людини, зменшити кількість домішок, тобто поліпшити чистоту препарату. У той же час аналіз прикладів 4 - 7 показує, що недодержання /5 Діапазонів величин, які заявляються, призводить до зменшення виходу інсуліну та погіршення характеристик комбінованого препарату. Недодержання режиму вирощування кристалів, який заявляється (приклади 8 - 11), не дозволяє одержати більш однорідні кристали за довжиною, а отже не забезпечує більш рівномірне вивільнення інсуліну в організмі людини, тобто одержання препарату більш високої якості.Therefore, the analysis of the examples of specific execution (examples 1 - 3) shows that the claimed method can be used to obtain combined preparations of human insulin with different ratios of crystalline and soluble particles. Using this method allows you to increase the output of human insulin, reduce the amount of impurities, that is, improve the purity of the drug. At the same time, the analysis of examples 4 - 7 shows that non-compliance with /5 Ranges of values, which are declared, leads to a decrease in the output of insulin and deterioration of the characteristics of the combined drug. Non-compliance with the regime of growing crystals, which is claimed (examples 8 - 11), does not allow obtaining more uniform crystals in length, and therefore does not ensure a more uniform release of insulin in the human body, that is, obtaining a drug of higher quality.
Claims (1)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001129231A UA46668C2 (en) | 2001-12-29 | 2001-12-29 | Method for preparing combined dosage form of human insulin |
| RU2002135041/15A RU2261108C2 (en) | 2001-12-29 | 2002-12-26 | Method for preparing human insulin combined preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2001129231A UA46668C2 (en) | 2001-12-29 | 2001-12-29 | Method for preparing combined dosage form of human insulin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA46668C2 true UA46668C2 (en) | 2006-01-16 |
Family
ID=35850192
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2001129231A UA46668C2 (en) | 2001-12-29 | 2001-12-29 | Method for preparing combined dosage form of human insulin |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2261108C2 (en) |
| UA (1) | UA46668C2 (en) |
-
2001
- 2001-12-29 UA UA2001129231A patent/UA46668C2/en unknown
-
2002
- 2002-12-26 RU RU2002135041/15A patent/RU2261108C2/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2261108C2 (en) | 2005-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1040746C (en) | New crystalline form of a vitamin D analogue | |
| RU2007118954A (en) | RECOMBINANT ANTIBODY REFOLDING METHOD | |
| KR920002934B1 (en) | Process for preparing aqueous protein solution | |
| EP1012191B1 (en) | Method for obtaining high-purity vwf or factor viii/vwf complex | |
| PL86966B1 (en) | ||
| AU679012B2 (en) | Process for manufacturing crystals of growth hormone and crystals thereby obtained | |
| JP2002521340A (en) | Method for obtaining cartilage extract using solution containing or not containing organic solvent and extract separated therefrom | |
| EP3077414B1 (en) | Method for preparing crystalline insulin | |
| EP3185887B1 (en) | Method for preparing crystalline insulin or insulin analog compositions | |
| US20230116671A1 (en) | Methods of preparing oligonucleotide compositions using ultrafiltration/diafiltration | |
| UA46668C2 (en) | Method for preparing combined dosage form of human insulin | |
| KR870001071B1 (en) | Process for preparing highly crystalline sodium cefoperazone | |
| JPS62188963A (en) | Moving bed for liquid chromatography and method of purifyingprotein | |
| RU2252782C2 (en) | Method for production of insulin drug of durable action | |
| RU2261107C2 (en) | Method for preparing ready medicinal formulation of insulin with short effect | |
| CN117624335A (en) | Preparation method of insulin aspart crystal | |
| CN109010280B (en) | Preparation method of ceftriaxone sodium powder injection preparation for injection | |
| CN106543283A (en) | Transferrinss and its production and use | |
| CN115768789A (en) | Method for obtaining a composition comprising human plasma-derived immunoglobulins M | |
| CN116261448A (en) | Liquid formulations comprising high concentrations of humanized antibodies for the treatment of IL-6 related diseases | |
| EP3719034A2 (en) | Method for preparing composition containing factor 8 capable of controlling content of von willebrand factor (vwf) and von willebrand factor | |
| CN114933647B (en) | Preparation method of insulin crystal and product | |
| EP1539797A1 (en) | Process for manufacturing crystals of growth hormone | |
| CN102793676A (en) | Sesquiterpene lactone (1 beta, 10 beta-epoxy-13-alpha-dimethylamino-1,2-propanediol 3-(4)-alkene-6,12-lactone) dimethylamine hydrochloride freeze-drying preparation for injection and preparation method for sesquiterpene lactone (1 beta, 10 beta-epoxy-13-alpha-dimethylamino-1,2-propanediol 3-(4)-alkene-6,12-lactone) dimethylamine hydrochloride freeze-drying preparation | |
| RU2252225C2 (en) | Method for production of semisynthetic human insulin |