UA42934C2 - Method for diagnosing endotoxicosis - Google Patents

Method for diagnosing endotoxicosis Download PDF

Info

Publication number
UA42934C2
UA42934C2 UA2000020831A UA200020831A UA42934C2 UA 42934 C2 UA42934 C2 UA 42934C2 UA 2000020831 A UA2000020831 A UA 2000020831A UA 200020831 A UA200020831 A UA 200020831A UA 42934 C2 UA42934 C2 UA 42934C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
sweat
test system
endotoxicosis
cellular test
skin
Prior art date
Application number
UA2000020831A
Other languages
Russian (ru)
Ukrainian (uk)
Inventor
Микола Дмитрович Бех
Николай Дмитриевич Бех
Василь Васильович Дем'яненко
Василий Васильевич Демьяненко
Сергій Михайлович Андрейчин
Сергей Михайлович Андрейчин
Наталя Володимирівна Бігуняк
Original Assignee
Тернопільська Державна Медична Академія Імені І.Я.Горбачевського
Тернопольская Государственная Медицинская Академия Имени И.Я. Горбачевского
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Тернопільська Державна Медична Академія Імені І.Я.Горбачевського, Тернопольская Государственная Медицинская Академия Имени И.Я. Горбачевского filed Critical Тернопільська Державна Медична Академія Імені І.Я.Горбачевського
Priority to UA2000020831A priority Critical patent/UA42934C2/en
Publication of UA42934C2 publication Critical patent/UA42934C2/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

The proposed method for diagnosing endotoxicosis consists in carrying out the analysis, processing the analysis results, and estimating the parameters of the sell rest system for detecting the toxicosis pathogens. For producing the cell test system, the samples of perspiration taken from the patient's skin are used.

Description

Опис винаходуDescription of the invention

Винахід відноситься до медицини, зокрема, до клініко-біохімічних методів дослідження, і може бути 2 використаним в клінічній практиці для об'єктивної оцінки ступеня ендотоксикозу.The invention relates to medicine, in particular, to clinical and biochemical research methods, and can be used in clinical practice to objectively assess the degree of endotoxicosis.

Відомий спосіб визначення ендотоксикозу, який включає постановку, реєстрацію і оцінку реакцій клітинної тест-системи на токсичні чинники внутрішнього середовища організму |1). Відомий спосіб полягає в інкубації ізольованих клітин, наприклад, парамецій, сперматозоїдів, лейкоцитів, еритроцитів або інших тест-систем при певних умовах у сироватці крові або інтерстиціальній рідині пацієнта та наступному дослідженні специфічних 70 реакцій клітин. При збільшенні в зазначених середовищах організму водорозчинних токсичних субстанцій відповідно змінювалися прояви клітинних реакцій, наприклад, у вигляді тривалості життя парамецій, інтенсивності лейкоцитолізу, гемолізу, характеру люмінесценції ядер клітин та ін., на основі чого робилися висновки про рівень ендотоксикозу (21.There is a known method of determining endotoxicosis, which includes setting up, recording and evaluating the reactions of the cellular test system to toxic factors of the body's internal environment |1). The known method consists in the incubation of isolated cells, for example, paramecia, spermatozoa, leukocytes, erythrocytes or other test systems under certain conditions in the blood serum or interstitial fluid of the patient and the subsequent study of specific 70 cell reactions. When water-soluble toxic substances increased in the specified environments of the body, the manifestations of cellular reactions changed accordingly, for example, in the form of the life expectancy of paramecia, the intensity of leukocytolysis, hemolysis, the nature of the luminescence of cell nuclei, etc., on the basis of which conclusions were drawn about the level of endotoxicosis (21.

Недоліком відомого способу є недостатній рівень технологічності, оскільки методика його виконання 72 пов'язана з необхідністю інвазійного взяття рідкого субстрату внутрішнього середовища організму для дослідження, наприклад, сироватки крові або інтерстиціальної рідини (лімфи). Особливі складнощі при цьому виникають у випадках, пов'язаних із взяттям біологічного матеріалу для діагностичного дослідження у дітей, ослаблених хворих та ін. До недоліків відомого способу слід також віднести недостатній рівень інформативності, оскільки традиційний матеріал для виявлення ендогенних токсичних речовин, а саме сироватка крові та інтерстиціальна рідина не в повній мірі характеризують рівень ендотоксикозу хворого організму, оскільки при цьому залишається неврахованим вміст токсичних субстанцій в секреті потових залоз.The disadvantage of the known method is the insufficient level of manufacturability, since the method of its implementation 72 is associated with the need for invasive sampling of the liquid substrate of the internal environment of the body for research, for example, blood serum or interstitial fluid (lymph). Special difficulties arise in cases related to taking biological material for diagnostic research from children, debilitated patients, etc. The shortcomings of the known method should also include the insufficient level of informativeness, since the traditional material for detecting endogenous toxic substances, namely blood serum and interstitial fluid, does not fully characterize the level of endotoxicosis of a sick organism, since the content of toxic substances in the secretion of sweat glands remains unaccounted for.

При розгляді технічного завдання було враховано, що з потом відбувається виділення продуктів обміну, біологічно активних речовин, за вмістом яких можна зробити висновок про рівень окремих функціональних систем та стан організму як цілого |З). с 29 В основу винаходу поставлене завдання удосконалити спосіб визначення ендотоксикозу, в якому шляхом Го) використання поту в ролі інкубаційного середовища для клітинних тест-систем в діагностичних реакціях досягають підвищення технологічності та інформативності способу.When considering the technical task, it was taken into account that with sweat there is a release of metabolic products, biologically active substances, based on the content of which it is possible to draw a conclusion about the level of individual functional systems and the state of the body as a whole |Z). p. 29 The invention is based on the task of improving the method of determining endotoxicosis, in which, by using sweat as an incubation medium for cellular test systems in diagnostic reactions, an increase in the manufacturability and informativeness of the method is achieved.

Поставлене завдання вирішують тим, що у відомому способі визначення ендотоксикозу, який включає постановку, реєстрацію і оцінку реакцій клітинної тест-системи на токсичні чинники внутрішнього середовища З організму, у відповідності до винаходу клітинні тест-системи інкубують із змивом поту з поверхні шкіри. сеThe task is solved by the fact that in the known method of determining endotoxicosis, which includes setting up, registering and evaluating the reactions of the cellular test system to toxic factors of the internal environment of the body, in accordance with the invention, the cellular test systems are incubated with the washing of sweat from the surface of the skin. everything

Спосіб виконують таким чином.The method is performed as follows.

Ділянку шкіри лобної області голови пацієнта попередньо промивають 4095-ним розчином етилового спирту і о двічі протирають марлевим тампоном, просоченим дистильованою водою. ГаThe skin area of the frontal region of the patient's head is pre-washed with a 4095 solution of ethyl alcohol and wiped twice with a gauze swab soaked in distilled water. Ha

Через 60 хвилин з попередньо обробленої лобної ділянки голови роблять змив потових виділень шляхомAfter 60 minutes, sweat secretions are washed from the previously treated frontal area of the head

Зо протирання шкіри зволоженим марлевим тампоном з дотриманням стандартизованих умов. Для цього М користуються тампоном, виготовленим з трьох шарів марлі у вигляді круга діаметром 20мм. Стерильний тампон попередньо занурюють у 0,бмл стерильної дистильованої води в мікропробірці, з допомогою стерильного пінцету або іншого аналогічного інструменту обережно відтискають від залишків води, після чого ретельно « протирають поверхню шкіри з певної площі, наприклад, ЗОсм?, і знову занурюють у воду в мікропробірці, -о 70 ретельно кілька разів відтискують при допомозі пінцету, після чого тампон виймають з мікропробірки, а с отриманий змив використовують для дослідження на предмет вмісту токсичних субстанцій. :з» Для цього на предметне скло вносять 0,05мл змиву і змішують з 0,О05мл зависі ізольованих клітин, інкубують і досліджують характер реакцій клітин тест-системи за однією з обраних методик. Роблять висновок про наявність у потових виділеннях токсичних субстанцій та рівень ендотоксикозу. 1» 15 Приклад 1. Шкіру лобної ділянки голови пацієнта промили 40906-ним етиловим спиртом і двічі протерли марлевим тампоном, змоченим у дистильованій воді. Через 1 годину лобну ділянку голови пацієнта на площі іме) ЗОсм2 ретельно протерли стерильним тампоном, просоченим стерильною дистильованою водою, після чого со тампон занурили у цей же розчин у мікропробірці та витягли його після відтискання.From wiping the skin with a moistened gauze swab in accordance with standardized conditions. For this, M uses a tampon made of three layers of gauze in the form of a circle with a diameter of 20 mm. A sterile tampon is pre-immersed in 0.bml of sterile distilled water in a microtube, with the help of sterile tweezers or another similar tool, it is carefully squeezed from the remaining water, after which the surface of the skin is carefully "wiped from a certain area, for example, ZOsm?, and immersed in water again in microtubes, - about 70 are carefully squeezed several times with the help of tweezers, after which the tampon is removed from the microtube, and the resulting wash is used for research on the content of toxic substances. For this, 0.05 ml of washing is applied to the slide and mixed with 0.005 ml of the suspension of isolated cells, incubated and the character of the reactions of the cells of the test system is examined by one of the selected methods. They draw a conclusion about the presence of toxic substances in sweat secretions and the level of endotoxicosis. 1" 15 Example 1. The skin of the frontal area of the patient's head was washed with 40906 ethyl alcohol and wiped twice with a gauze swab dipped in distilled water. After 1 hour, the frontal area of the patient's head in the area of ЖОСм2 was thoroughly wiped with a sterile swab soaked in sterile distilled water, after which the swab was immersed in the same solution in a microtube and pulled out after squeezing.

При постановці реакції з ізольованими лейкоцитами О0,05мл отриманого водного змиву поту помістили на і95) предметне скло й змішали з 0,О05мл зависі ізольованих лейкоцитів пацієнта і таким же об'ємом флюорохромуWhen setting up the reaction with isolated leukocytes, 0.05 ml of the obtained aqueous sweat wash was placed on a 95) glass slide and mixed with 0.005 ml of the patient's isolated leukocyte suspension and the same volume of fluorochrome

Т» акридину оранжевого в розведенні 1:10000. Отриману суміш накрили покривним скельцем і інкубували при 377С протягом З0 хвилин. Досліджували мікропрепарат у полі зору люмінесцентного мікроскопу: визначали процентний вміст лейкоцитів, ядра яких люмінесціювали зеленим, оранжевим і червоним світлом. Вплив вв ТОКСИЧНИХ чинників на клітини оцінювали за індексом токсичності, який визначали як середню кубічну показників процентного вмісту клітин з поліхромними ядрами в мікропрепараті (2). Результат дослідного мікропрепарату (Ф) порівнювали з контрольним. Останній готували без внесення до води в мікропробірці компонентів поту. При г цьому "зелених" клітин в дослідному мікропрепараті було 6695, "оранжевих" і "червоних" - відповідно 2395 і 11965, що відповідає індексу токсичності 25,3. Аналогічний показник при дослідженні контрольного мікропрепарату бор становив 11,6. Таким чином, токсичність поту в 2,2 рази перевищує токсичний вплив на ізольовані лейкоцити компонентів аутологічної сироватки крові, що є характерним для високого рівня ендотоксикозу.T" of acridine orange in a dilution of 1:10,000. The resulting mixture was covered with a cover glass and incubated at 377C for 30 minutes. The micropreparation was studied in the field of view of a fluorescent microscope: the percentage of leukocytes whose nuclei luminesced with green, orange and red light was determined. The influence of TOXIC factors on cells was assessed by the toxicity index, which was defined as the cubic average of the percentage of cells with polychrome nuclei in the micropreparation (2). The result of the experimental micropreparation (F) was compared with the control one. The latter was prepared without adding sweat components to water in a microtube. At the same time, there were 6,695 "green" cells in the experimental micropreparation, 2,395 and 11,965 "orange" and "red" cells, respectively, which corresponds to a toxicity index of 25.3. A similar indicator in the study of the control micropreparation boron was 11.6. Thus, the toxicity of sweat is 2.2 times higher than the toxic effect on isolated leukocytes of components of autologous blood serum, which is characteristic of a high level of endotoxicosis.

При постановці реакції з ізольованими парамеціями О,05мл отриманого водного змиву поту помістили на предметне скло й змішали з О0,05мл культури парамецій, накрили покривним скельцем і відразу в полі зору мікроскопу визначали характер руху парамецій та середню тривалість життя в мікропрепараті. Результат в5 порівнювали з контролем, тобто без внесення до води в мікропробірці компонентів поту.When setting up a reaction with isolated paramecia, 0.05 ml of the obtained water wash of sweat was placed on a glass slide and mixed with 0.05 ml of paramecia culture, covered with a cover glass, and immediately in the field of view of the microscope, the nature of the movement of paramecia and the average life span in the micropreparation were determined. The result in 5 was compared with the control, i.e. without adding sweat components to the water in the microtube.

В дослідному мікропрепараті парамеції перебували в активному стані в середньому 3,4ж0,4с, тоді як у контрольному мікропрепараті цей показник склав 7,120,8с. Скорочення тривалості життя парамецій під впливом токсичних чинників поту мало місце на 53,4905, тобто, як і в попередньому досліді, фактично в 2 рази.In the experimental micropreparation, paramecia were in an active state for an average of 3.4x0.4s, while in the control micropreparation this indicator was 7,120.8s. The reduction of the life span of paramecia under the influence of toxic sweat factors took place by 53.4905, i.e., as in the previous experiment, in fact by 2 times.

Приклад 2. Запропонованим способом провели оцінку рівня ендотоксикозу у 7 хворих на виразковий Ппілородуоденостеноз. В усіх випадках вищенаведені тести виявили виражений ендотоксикоз, про що свідчать наведені в таблиці усереднені показники тестових проб. 70 Ізольовані лейкоцити (люмінесцентний аналіз); ПарамеціїExample 2. The level of endotoxicosis in 7 patients with ulcerative ppiloroduodenostenosis was assessed using the proposed method. In all cases, the above tests revealed pronounced endotoxicosis, which is evidenced by the average values of the test samples shown in the table. 70 Isolated leukocytes (luminescence analysis); Paramecia

Дослід 0 т334 11934 вкю 223) 2 еюдExperiment 0 t334 11934 vkyu 223) 2 eyud

З наведених даних видно, при ендотоксикозі у потових виділення; хворих збільшується вміст токсичних субстанцій, що є свідченням, перш за все, факту формування у даної категорії хворих ендотоксикозу. Головним висновком з даного прикладу є те, що запропонований спосіб є більш інформативним, ніж спосіб-прототип, оскільки відображує не тільки факт ендотоксикозу, але й вказує на рівень функціональної здатності системи потовиділення як важливої ланки в системі механізмів природної детоксикації організму, надає можливістьFrom the given data, it can be seen that with endotoxicosis there is sweat secretion; patients, the content of toxic substances increases, which is evidence, first of all, of the fact of the formation of endotoxicosis in this category of patients. The main conclusion from this example is that the proposed method is more informative than the prototype method, as it reflects not only the fact of endotoxicosis, but also indicates the level of functional capacity of the sweating system as an important link in the system of natural detoxification mechanisms of the body, provides an opportunity

Контролювати ефективність вжитих детоксикаційних заходів. Крім того, методика взяття матеріалу для аналізу у вигляді змиву потових виділень доступна й неінвазійна, що свідчить про більш високий рівень технологічності способу.Monitor the effectiveness of the detoxification measures taken. In addition, the method of taking the material for analysis in the form of washing off sweat secretions is available and non-invasive, which indicates a higher level of technology of the method.

Джерела інформації: 1.Способ определения токсичности сьтроватки крови / А.с. Мо1476382. 1989. // Бигуняк В.В., Бех Н.Д., счSources of information: 1. The method of determining the toxicity of blood plasma / A.s. Mo1476382. 1989. // Bygunyak V.V., Beh N.D., sch

Романюк А.Н., Мурованьй И.В. 2. Методи дослідження ендогенної інтоксикації організму (методичні рекомендації) / Андрейчин М.А., Бех (о)Romanyuk A.N., Murovany I.V. 2. Methods of studying endogenous intoxication of the body (methodological recommendations) / Andreychyn M.A., Bekh (o)

М.Д., Дем'яненко В.В. та ін. - Київ, 1998. - 32 с.M.D., Demyanenko V.V. etc. - Kyiv, 1998. - 32 p.

З. Слоним АД. Водньй злектролитньйй обмен. Потоотделение и потовье железь». / Зкологическая физиология человека. Адаптация человека к различньм климатогеографическим условиям. / Под ред.О.Г. «т зо Газенко. - Л., 1980. - С.318, 412. (зе)Z. Slonim AD. Water and electrolyte exchange. Sweating and sweating iron". / Zkological human physiology. Human adaptation to various climate-geographical conditions. / Under the editorship of O.G. from Gazenko. - L., 1980. - P.318, 412. (ze)

Claims (1)

Формула винаходу Ме с 35 Спосіб визначення ендотоксикозу, який включає постановку, реєстрацію і оцінку реакцій клітинної « тест-системи на токсичні чинники внутрішнього середовища організму, який відрізняється тим, що клітинну тест-систему інкубують із змивом поту з поверхні шкіри, який одержують протиранням попередньо зволоженим дистильованою водою стерильним марлевим тампоном шкірної поверхні тіла з площі 30 - 40 см7, а з просоченого тампону змив поту відтискають у мікропробірку, після чого на предметне скло послідовно вносять « 0,020 - 0,050 мл клітинної тест-системи у вигляді суспензії клітин, наприклад, лейкоцитів або інфузорій - с парамецій, змішують із рівним об'ємом змиву поту і, залежно від виду внесеної клітинної тест-системи, досліджують реакцію її на токсичні компоненти поту у полі зору люмінесцентного або світлового мікроскопа. . и? Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних Мікросхем", 2004, М 10, 15.10.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і їх науки України. іме) се)The formula of the invention Mes 35 The method of determining endotoxicosis, which includes the setting up, registration and evaluation of the reactions of the cellular test system to toxic factors of the internal environment of the body, which is distinguished by the fact that the cellular test system is incubated with the washing of sweat from the surface of the skin, which is obtained by wiping beforehand moistened with distilled water, a sterile gauze swab of the skin surface of the body from an area of 30 - 40 cm7, and the sweat washed off from the soaked swab is squeezed into a microtube, after which 0.020 - 0.050 ml of the cellular test system in the form of a suspension of cells, for example, leukocytes, is successively applied to the slide or infusoria - with paramecium, mixed with an equal volume of sweat wash and, depending on the type of cellular test system introduced, examine its reaction to toxic components of sweat in the field of view of a fluorescent or light microscope. . and? Official bulletin "Industrial Property". Book 1 "Inventions, useful models, topographies of integrated microcircuits", 2004, M 10, 15.10.2004. State Department of Intellectual Property of the Ministry of Education and Science of Ukraine. name) se) (95) «з»(95) "with" іме) 60 б5name) 60 b5
UA2000020831A 2000-02-15 2000-02-15 Method for diagnosing endotoxicosis UA42934C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA2000020831A UA42934C2 (en) 2000-02-15 2000-02-15 Method for diagnosing endotoxicosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA2000020831A UA42934C2 (en) 2000-02-15 2000-02-15 Method for diagnosing endotoxicosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA42934C2 true UA42934C2 (en) 2004-10-15

Family

ID=74186310

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA2000020831A UA42934C2 (en) 2000-02-15 2000-02-15 Method for diagnosing endotoxicosis

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA42934C2 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2003302906B2 (en) Gelatine-based materials as swabs
Rose et al. Decentralized testing for prothrombin time and activated partial thromboplastin time using a dry chemistry portable analyzer
EP0395642A1 (en) Device and method for the determination of incisional wound healing ability.
JPH07500003A (en) Diagnostic kit and method for measuring granulocytic cell counts
WO1995000064A2 (en) Immediate diagnosis of vaginal yeast infections
CN104007103A (en) Sperm detection method and kit thereof
UA42934C2 (en) Method for diagnosing endotoxicosis
US20050112547A1 (en) Vaginal infection test system and method
EP0883393A1 (en) Self-adhesive indicator
Lokuta et al. Analysis of neutrophil polarization and chemotaxis
CN104040339A (en) Absorbent paper and use thereof for breast cancer detection
Divall et al. Lactate dehydrogenase isozymes in vaginal swab extracts: a problem for the identification of menstrual blood
CN102618494B (en) Nutrient additive for cell culture medium
JP3596658B2 (en) Toxicity evaluation method using cultured cells
Page et al. Prothrombin studies using Russell viper venom: II. relation of clotting time to prothrombin concentration in human plasma
WO2019021150A1 (en) Method for immobilising biological samples for analytical and diagnostic purposes
RU2686107C1 (en) Method of optimal cryoprotector selection having glycogen content in preserved blood leukocytes
RU200701U1 (en) Indicator strip for diagnostics of diseases of the human reproductive system
RU2709517C1 (en) Method for comparative study of the effectiveness of local haemostatic agents in experiment in vitro
Shorrock et al. The exploration of tissue pH in wounds and its relationship to bacterial contamination
RU2037152C1 (en) Method for diagnosing malignant tumors
WO2022114983A1 (en) In vitro diagnostic method and analytical tool for differentiating between eye surface area inflammation of bacterial aetiology and of non-bacterial aetiology, and for staging eye surface area inflammation of bacterial aetiology
DE102004046366A1 (en) Rapid chemical analysis system for urine or other biological fluids has pipette with rubber balloon and chemical reagent on inside surface of balloon or in filter plug
RU2156465C1 (en) Method for diagnosing mycogenous sensitization
Yadav et al. Advancements in Body Fluid Analysis in Forensics: Current and Emerging Methods