UA35439C2 - Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби - Google Patents

Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби Download PDF

Info

Publication number
UA35439C2
UA35439C2 UA99105608A UA99105608A UA35439C2 UA 35439 C2 UA35439 C2 UA 35439C2 UA 99105608 A UA99105608 A UA 99105608A UA 99105608 A UA99105608 A UA 99105608A UA 35439 C2 UA35439 C2 UA 35439C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
bovine leukemia
virus
inactivated
vaccine
drug
Prior art date
Application number
UA99105608A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Володимир Олександрович Бусол
Владимир Александрович Бусол
Ольга Вікторівна Шаповалова
Ольга Викторовна Шаповалова
Ніна Василівна Мягких
Петро Петрович Зданевич
Віра Іларіонівна Цимбал
Олександр Валентинович Тертишник
Original Assignee
Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини
Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини, Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины filed Critical Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини
Priority to UA99105608A priority Critical patent/UA35439C2/uk
Publication of UA35439C2 publication Critical patent/UA35439C2/uk

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби, що включає одержання імунізуючого агенту з культуральної рідини перещеплювальної культури клітин нирки ембріона вівці, хронічно інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби. Спосіб передбачає концентрування вірусного матеріалу в 25 разів, інактивацію його формаліном з кінцевою концентрацією 0,1%, з’єднання його з носієм-імуномодулятором, виготовленим з клітинних елементів крові тварин, вільних від лейкозу великої рогатої худоби та сорбцію на ад’юванті.

Description

Запропонований винахід відноситься до ветеринарної вірусології та біотехнології і може бути застосований на підприємствах біологічної промисловості при виготовленні вакцинних препаратів, які використовуються для профілактики лейкозу великої рогатої худоби.
Інактивована вакцина проти лейкозу великої рогатої худоби вміщує інактивований вірус лейкозу великої рогатої худоби, який вирощується в перещеплюваній культурі клітин нирки ембріона вівці, та додатково вміщує сорбент - імуномодулятор і ад'ювант. Вакцина призначена для профілактичної імунізації молодняку великої рогатої худоби віком 6-3 місяців. Позитивний ефект настає при З-разовій імунізації великої рогатої худоби в дозі 2мл підшкірно, з інтервалом 14 діб.
Лейкоз великої рогатої худоби - хронічне інфекційне лімфопроліферативне злоякісне захворювання великої рогатої худоби, яке викликається вірусом, належащим до род. Кеїгомігідає. Лейкоз набув широкого розповсюдження, спричиняє значні економічні збитки тваринництву та є небезпечним для здоров'я людей.
Найважливішим засобом профілактики лейкозу великої рогатої худоби та зменшення збитків від захворювання є вакцинопрофілактика.
Відомі біопрепарати для профілактики лейкозу великої рогатої худоби. Зокрема, аналогічною по вирішенню є інактивована вакцина ВІ-МАСОС-НО (5ресійс ргоїесіоп адаїпві роміпе Іеикетіа мігиз іп'есіоп сопієїтей оп саше Бу Ше Вотапіап іпасіїмагей массіпе ВІ -МАСОС-НО / У.М. Раїгазси, 5. Сотап, 9. Запаи еї аї. // Мійоду. - 1980. - М.31, Ме2. - Р. 95 -102). Препарат одержують із вірусміщуючої культуральної рідини персистентно інфікованих клітин шляхом інактивації 295 етиленіміном, застосовують 2-разово в ад'юванті
Фрейнда в дозі 0,40мг вірусного глікопротеїда. Вакцина викликає у бичків активний синтез антитіл проти вірусу лейкозу великої рогатої худоби та формування резистентності при ін'єкуванні патогенного вірусу. Але недоліком даного препарату є застосування ад'юванту Фрейнда, який може викликати місцеве запалення у вакцинованих тварин. Іншим аналогом пропонуємого препарату є вакцина проти лейкозу великої рогатої худоби (АС 820015, Аб1ік/39/12. Способ получения вакцинь! против лейкоза крупного рогатого скота / Р.А.
Кукайн, Л.И. Нагаева, В.П. Шишков и др.). Згідно запропонованого авторами способу, вакцину виготовляють з культивованих лейкоцитів периферичної крові хворої на лейкоз великої рогатої худоби, при цьому окремі клітини, вірусний матеріал та одночасно нуклеїнові кислоти, які він вміщує, піддають інактивації з наступним виделенням білкових фракцій р25 та др70. Ці фракції використовують як імунізуючий агент. Але даний препарат викликає довготривалу специфічну гуморальну імунну відповідь у вакцинованих тварин і не має імуномодулюючої дії.
Найбільш близькою по суті є ІЗСОМ - вакцина, до складу якої входить глікопротеін др51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби (Спагасіегігайоп ої ригйеа др51 їот роміпе Іеикетіа міги5 іпгіедгаєейа іпіо ІЗСОМ.
Рпузісоспетіса! ргорепієз апа зегпит апіїбоду гезропзе (о Ше іпівдгаїєд дрб51 / М. Мегга, у). Бобег, В.
Зипадниіві єї аї. // Агсп. МігоіЇ. -1991. - 120. - Р. 219-231). В прототипі др51 введений в імуностимулюючий комплекс - ІЗЄСОМ, який являє собою клітиноподібні структури, 195, та вміщує білки вагою 30 і 5окДа.
ІЗСОМ виготовляється із віруса, інактивованого Твін-20 та Твін-80, або октілглікозидом. До складу препарату входить 9ро1 вірусу лейкозу великої рогатої худоби, який має високоіїмуногенну форму, непошкоджену фізико-хімічну структуру та антигенні епітопи РЕ, о та Н. Після дворазового введення вакцина викликає у мишей синтез антитіл проти 9р51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби, титр яких в ЕГІБА складає 100000-500000 (в залежності від дози препарату). Тривалість імунної відповіді у мишей становить 24 місяці. У телят даний препарат призводить до появи антитіл проти д9р51 в титрах 30000-150000, а також синтезу віруснейтралізуючих антитіл. За даними літератури, ІЗЄСОМ-вакцини викликають також активну цитотоксичну відповідь Т-лімфоцитів, що може обумовлювати захист тварин від збудника захворювання.
Основними недоліками прототипу є те, що даний препарат викликає довготривалу гуморальну відповідь у вакцинованих тварин, синтез антитіл проти дро51 вірусу лейкозу великої рогатої худоби в високих титрах. Це не дає змоги серологічним методом (реакція імунодифузії в агаровому гелі, РІД), який передбачений "Інструкцією по профілактиці та оздоровленню великої рогатої худоби від лейкозу" /В.О.
Бусол, В.І. Цимбал, В.В. Кіприч та інш.; Затвердж. Голов. Упр. вет. медицини України 28.09.1992р.; Регістр
Ме15-15/220. - К., 1992. - 5с.), відрізняти вакцинованих тварин від природно інфікованих. Окрім того, вірус лейкозу великої рогатої худоби в прототипі інактивується хімічними реагентами, які дорого коштують, а також використовується синтетичний клітиноподібний імуностимулюючий комплекс, який не має видових антигенів. Відсутність таких антигенів суттєво зменшує імуногенну активність вакцини та ефективність її профілактичної дії.
В основу винаходу, що передбачається, поставлене завдання: одержання високоімуногенної, ефективної, нешкідливої вакцини для профілактики лейкозу великої рогатої худоби, яка викликає активний імунітет проти вірусу лейкозу і підтримується за рахунок імунокомпетентних клітин.
Вакцину виготовляють на основі вірусу лейкозу великої рогатої худоби, який вирощується в перещеплюваній культурі клітин нирки ембріона вівці, хронічно інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби, інактивованого формаліном, з кінцевою концентрацією 0,195. До складу препарату додатково введено сорбент-імуномодулятор, який одержують із клітин крові організму рогатої худоби, вільного від лейкозу, та ад'ювант.
Інактивована вакцина проти лейкозу великої рогатої худоби вміщує комплекс глікопротеідних та протеїдних антигенів інактивованого вірусу лейкозу великої рогатої худоби, тому викликає імунну відповідь, яка направлена проти вірусу в цілому. У вакцинованих тварин в РІД титр антитіл проти глікопротеідного (др51) антигену вірусу лейкозу великої рогатої худоби не перевищує 1:2-1:4, антитіла містяться в сироватці крові лише на протязі З місяців. Такі імуногенні особливості препарату, що обумовлені його антигенним складом та вмістом специфічного сорбенту - імуномодулятора, відрізняють запропоновану вакцину від прототипу. Сорбент-імуномодулятор, який входить до складу вакцини, сприяє формуванню клітинного імунітету, активує неспецифічний ланцюг імунної відповіді, спрямованої проти антигенів вірусінфікованих клітин. Крім того, модифікація алогенних клітин великої рогатої худоби антигенами вірусу лейкозу підвищує імуногенність цих антигенів. Таким чином можна подолати імунологічну толерантність в організмі тварин, яка формується при злоякісних захворюваннях. Вказані вище особливості запропонованої вакцини обумовлюють її високу імуногенність та ефективність. Вакцину готують так: для виготовлення вакцини використовують культуральну рідину перещепленої лінії клітин РІ КаВІМ,
хронічно інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби. Проводять концентрування антигену вірусу лейкозу великої рогатої худоби з культуральної рідини лінії клітин Р Ка-ВІ М до 1:25 по відношенню до початкового об'єму.
Визначення активності і специфічності вірусного антигену з культуральної рідини лінії клітин Р Кві М проводять за допомогою реакції імунодифузії з референтним антигеном з "Набору компонентів для серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби в реакції імунодифузії (РІД)" за ТУУ 46.15.043-94.
Постановку РІД здійснюють згідно "Настанови по застосуванню набору компонентів для серодиагностики лейкозу великої рогатої худоби в реакції імунодифузії" (Ме15-14/53 від 07.07.94). Для виготовлення вакцини застосовують антиген, який дає лінію преципітації в РІД в титрах 1-1:2.
Проводять інактивацію вірусу лейкозу великої рогатої худоби в концентраті антигену вірусу, одержаного з культуральної рідини лінії клітин РІКа-ВІ М. Інактивуючим агентом є формалін. Після додавання інактиватора препарат утримують при ж4"7С на протязі 7 діб.
Перевірка антигену на стерильність здійснюється за загальноприйнятими методами. Для перевірки вірусного антигену, одержаного з культуральної рідини лінії клітин РГКа-ВІ М на повноту інактивації відбирають 6 серонегативних до вірусу лейкозу овець (валухів) у віці 8-24 місяці. Інактивованими вважають антигени досліджуваної серії, після ін'єкції яких у овець на протязі 4 місяців не виявлені в реакції імунодифузії специфічні антитіла проти вірусу лейкозу великої рогатої худоби.
Для виготовлення вакцини застосовують біологічний сорбент-імуномодулятор, виготовлений з клітин організму рогатої худоби. Проводять відбір крові тварин, які клінічно здорові, серонегативні до антигену вірусу лейкозу. Для приготування сорбенту з організму тварин виділяють клітинні елементи, які піддають фіксації формаліном та танізації. Готують 595 суспензію тонізованих клітин.
Сенсибілізацію сорбенту інактивованим антигеном з культуральної рідини лінії клітин РІ КВ М проводять в співвідношенні 1:1. Суміш інкубують протягом 20 хвилин.
До складу вакцини входить ад'ювант - гель гідроокисі алюмінію, який додають в кількості 4095 по відношенню до антигенвміщуючого препарату. Адсорбовані на ад'юванті антигенні препарати витримують протягом 14 діб.
Спосіб пояснюється наступними прикладами.
Приклад 1. Вірусвміщуючу культуральну рідину лінії клітин ЕКяВІ М освітлюють центрифугуванням при 3000об/хв на протязі 30 хвилин та концентрують в 23-25 разів. Підбирають оптимальну концентрацію вірусвміщуючої рідини шляхом перевірки в РІД. Інактивацію вірусу лейкозу великої рогатої худоби в концентраті антигена вірусу проводять формаліном з кінцевою концентрацією 0,05-0,195, при 4"С протягом 7 діб. Повноту інактивації перевіряють в досліді біопроби на б вівцях. З цією метою 3-м вівцям внутришньом'язово вводять по мл вірусвміщуючої рідини інактивованої формаліном з кінцевою концентрацією 0,0895. Другій групі овець (3 голови) вводять вірусвміщуючу рідину в дозі Тмл внутрішньом'язово інактивовану формаліном з кінцевою концентрацією 0,195 (табл.1). Досліджують сироватки крові інокульованих тварин в РІД на наявність антитіл проти вірусу лейкозу великої рогатої худоби та гематологічні показники периферичної крові через 1 та 4 місяці. В таблиці 2 подані результати контролю повноти інактивації біологичних властивостей вірусу лейкозу великої рогатої худоби у вакцині методом біопроби.
Приклад 2. Проводять адсорбцію інактивованого вірусу лейкозу великої рогатої худоби на гідроокисі алюмінію. До вірусвміщуючої рідини, сконцентрованої та інактивованої, як вказано вище, додають 4095 ад'юванту. Проводять інкубацію суміші імуногену з ад'ювантом при повільному перемішуванні при ж4"сС на протязі 24 годин. Адсорбований на ад'юванті антигенний препарат витримують при 4"С протягом 14 діб.
Інактивований препарат з ад'ювантом (препарат Ме1) вводять З вівцям першої дослідної групи в дозі мл, підшкірно, тричі, з інтервалом 14 діб.
Для імунізації овець другої дослідної групи виготовляють сконцентрований інактивований антиген вірусу лейкозу великої рогатої худоби (за прикладом 1) та сорбент - імуномодулятор. Останній готують з клітин організму вільної від лейкозу рогатої худоби. Клітинні елементи піддають фіксації формаліном та танізації. Проводять сенсибілізацію сорбенту інактивованим антигеном з культуральної рідини лінії клітин
ЕСКаВІМ в співвідношенні 1:1 при температурі 18 - 207С протягом 20 хвилин. Сенсибілізований сорбент
Інкубують з ад'ювантом, як описано вище. Інактивований препарат з сорбентом та ад'ювантом (препарат
Мо2) вводять 3-м вівцям другої дослідної групи в дозі мл, підшкірно, тричі, з інтервалом 14 діб.
Досліджують імуногенну активність обох препаратів в РІД на протязі 3-х місяців після останнього введення препаратів Ме1 та Ме2.
В таблиці З подані результати контролю імуногенних властивостей двох препаратів вірусу лейкозу великої рогатої худоби, які виготовлені за різними способами.
Приклад 3. Виготовляють вакцинний препарат, як вказано вище (препарат Ме2). Препарат вводять 8 вільним від лейкозу бичкам віком 6-7 місяців тричі, з інтервалом 14 діб, в дозі 2мл підшкірно. Контрольних 8 бичків не імунізують. Досліджують імуногенні властивості вакцини протягом б місяців. Визначають серологічні показники імунізованих тварин в РІД. В таблиці 4 подані результати контролю імуногенних властивостей комплексної інактивованої вакцини проти лейкозу на великій рогатій худобі.
Приклад 4. Через З місяця проводять контрольне інфікування імунних тварин периферичною кров'ю хворої на хронічний лімфолейкоз великої рогатої худоби в дозі 2500 лейкоцитів. Досліджують гематологічні та серологічні показники тварин на протязі 6 місяців після контрольного зараження. За 6 місячний термін досліджень не визначають змін гематологічних показників у тварин обох груп, а титр антитіл поступово знижується до зникнення. В таблиці 5 подані результати контролю захисних властивостей інактивованої вакцини проти лейкозу на великій рогатій худобі.
Таблиця 1
111111сировавюю,д///://О/|. 77777771 титрії2)
Таблиця 2
РІД та РІДта РІД та
Вид Вид Доза Режим Спосіб - гематологія | гематологія п : : т гематологія ДО Висновок тварин тварин | віруса | інактивації | введення введення через 1 через 4 місяць місяці
Іінактивований
Таблиця З
ПОКАЗНИКИ 1 ГРУПА 2 ГРУПА
Доза препарату
РІД після 1 введення
РІД після 2 введення
РІД після З введення
РІД через 1 місяць
РІД через З місяці
Таблиця 4
Я Я Я Через З Через 6 83,39о 10095
Дослід п-8 1:1,80520,58 1:2,4:20,68 1-1:4 1-14 (Контрольп-8| РІД- | РІД- | РІД- | РіІД- | РІД- | РІД-
Таблиця 5
Групи До Я Через 1,5 щи с, о, тварин | інфікування Через 1 місяць місяці Через З місяці | Через 4 місяці | Через 8 місяців
Дослі РІд- 10095 10095 10095 87,59 па негативні 1:56226,53 1:805227,71 1:16,0250,00 1:16,050,0 РІД-негативні
Й 1:16-11128 1:32-11128 1:16 1:16
Контро 10095 10095 10095 10095 10095 п 1:2,50241,50 | 1800-4400 | 1:4,6741,76 1:8,020,00 1:12,252,50
Ш 1-14 1:4-1:16 1:2-1:8 1:8 1:4-1:16

Claims (1)

  1. Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби, що включає одержання імунізуючого агента культуральної рідини перещеплюваної культури клітин нирки ембріона вівці, хронічно інфікованої вірусом лейкозу великої рогатої худоби, що містить глікопротеїн др51, який відрізняється тим, що вірусний матеріал сконцентровують в 25 разів, піддають інактивації формаліном з кінцевою концентрацією 0,190 та з'єднують з носієм - імуномодулятором, виготовленим з клітинних елементів крові тварин, вільних від лейкозу великої рогатої худоби та сорбують на ад'юванті.
UA99105608A 1999-10-14 1999-10-14 Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби UA35439C2 (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA99105608A UA35439C2 (uk) 1999-10-14 1999-10-14 Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA99105608A UA35439C2 (uk) 1999-10-14 1999-10-14 Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA35439C2 true UA35439C2 (uk) 2004-02-16

Family

ID=74204114

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA99105608A UA35439C2 (uk) 1999-10-14 1999-10-14 Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA35439C2 (uk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pinto et al. Immune response to virus-infection-associated (VIA) antigen in cattle repeatedly vaccinated with foot-and-mouth disease virus inactivated by formalin or acetylethyleneimine
KR20130128450A (ko) 청설병 바이러스 백신 및 면역원성 조성물, 이들의 사용 방법 및 제조 방법
RU2451745C2 (ru) ШТАММ А 2045/КИРГИЗИЯ/2007 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А
JPH09110719A (ja) 実質的には非宿主アルブミンを含有しないアジユバント化ワクチン
CN102631673A (zh) 口蹄疫疫苗浓缩纯化方法
IE46498B1 (en) New vaccine
Hunsmann et al. Active immunization with feline leukemia virus envelope glycoprotein suppresses growth of virus-induced feline sarcoma
KR840001514B1 (ko) 광견병 백신의 제조방법
RU2212895C2 (ru) Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления
RU2220744C1 (ru) Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления
JPH0341034A (ja) ネコ科動物感染性腹膜炎ワクチン
UA35439C2 (uk) Спосіб одержання інактивованої вакцини проти лейкозу великої рогатої худоби
CN107137703A (zh) 一种狂犬病免疫原性结合物和疫苗及其制备方法
RU2297452C2 (ru) Штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов
NZ226353A (en) Feline infectious peritonitus (fip) vaccine
CN111467488B (zh) 一种水溶性复合免疫佐剂及其应用
RU2457859C1 (ru) Вакцина против вирусной диареи крупного рогатого скота
RU2526570C2 (ru) Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная
RU2147892C1 (ru) Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота
RU2056861C1 (ru) Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура
RU2140452C1 (ru) Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов
RU2204599C1 (ru) Штамм № 1734 "приморский-2000" вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов
El-Sayed et al. Effect of Carbopol as an Immune-Stimulant in Bovine Vaccination against Foot and Mouth Disease
RU2722868C1 (ru) Вакцина антирабическая инактивированная эмульсионная культуральная для профилактической иммунизации домашних плотоядных и сельскохозяйственных животных
RU2798283C1 (ru) Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов