UA34560A - method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants - Google Patents

method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants Download PDF

Info

Publication number
UA34560A
UA34560A UA98020978A UA98020978A UA34560A UA 34560 A UA34560 A UA 34560A UA 98020978 A UA98020978 A UA 98020978A UA 98020978 A UA98020978 A UA 98020978A UA 34560 A UA34560 A UA 34560A
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
cultivation
cultures
tuberculosis
mycobacteria
growth
Prior art date
Application number
UA98020978A
Other languages
Russian (ru)
Ukrainian (uk)
Inventor
Юрій Якович Кассіч
Юрий Яковлевич Кассич
Андрій Іванович Завгородній
Андрей Иванович Завгородний
Валерій Федорович Бабкін
Валерий Федорович Бабкин
Наталія Василівна Калашник
Наталия Васильевна Калашник
Original Assignee
Інститут Експериментальної Та Клінічної Ветеринарної Медицини
Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Інститут Експериментальної Та Клінічної Ветеринарної Медицини, Институт Экспериментальной И Клинической Ветеринарной Медицины filed Critical Інститут Експериментальної Та Клінічної Ветеринарної Медицини
Priority to UA98020978A priority Critical patent/UA34560A/en
Publication of UA34560A publication Critical patent/UA34560A/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Proposed is a method for cultivation of tuberculosis and atypical micobacteria pathogens on synthetic nutrient medium. For adaptation of tuberculinogen strains to synthetic nutrient media preliminary cultivation thereof is performed on the medium, which contains: Potato-water 100-150 cm3 Chemically pure glycerin 1.0-1.5 cm3 at pH – 7.0.

Description

Передбачаємий винахід відноситься до ветеринарної мікробіології для адаптації туберкуліногенних штамів культур мікобактерій до росту на синтетичному живильному середовищі і може бути використаним в ветеринарній медицині та біологічній промисловості для вирощування збудників туберкульозу і атипових мікобактерій з метою прискореного накопичення бактерійної маси та виготовлення препарату для алергічної діагностики туберкульозу у сільськогосподарських тварин.The intended invention relates to veterinary microbiology for the adaptation of tuberculinogenic strains of mycobacterial cultures to growth on a synthetic nutrient medium and can be used in veterinary medicine and the biological industry for the cultivation of tuberculosis pathogens and atypical mycobacteria for the purpose of accelerated accumulation of bacterial mass and the production of preparations for the allergic diagnosis of tuberculosis in agricultural animals

Є живильне середовище для вирощування мікобактерій туберкульозу, що містить калій фосфорнокислий однозаміщений, натрій фосфорнокислий двозаміщений, магній сірчанокислий, залізо лимоннокисле аміачне, Л- аспарагін, гліцерин, твін-380, сироваточний бичачий альбумін, ДЛ-метіонін, натрій лимоннокислий (А. с. Мо 1473343, С12М1/20, 1986 г.)There is a nutrient medium for the cultivation of mycobacterium tuberculosis, which contains monosubstituted potassium phosphate, disubstituted sodium phosphate, magnesium sulfate, ammonium citric acid iron, L-asparagine, glycerin, Tween-380, bovine serum albumin, DL-methionine, sodium citric acid (A. p. Mo 1473343, C12M1/20, 1986)

Існує спосіб вирощування на синтетичному живильному середовищі збудника туберкульозу бичачого виду, що містить ферментолізат дріжджів, лізат галатобактерій, амоній лимоннокислий, калій фосфорнокислий двозаміщений, лимонну кислоту, магній сірчанокислий, залізо сірчанокисле, цинк сірчанокислий, гліцерин (А. с. Мо 1659472, С12М1/20, 1991 г.).There is a method of growing the causative agent of bovine tuberculosis on a synthetic nutrient medium containing yeast fermentolysate, lysate of Galatobacteria, ammonium citric acid, disubstituted potassium phosphate, citric acid, magnesium sulfate, iron sulfate, zinc sulfate, glycerol (A. s. Mo 1659472, С12М1/ 20, 1991).

Найбільш близьким за технічною суттю до заявляемого об'єкту є синтетичне живильне середовище Сотона, яке використовують у біологічній промисловості для вирощування збудника туберкульозу бичачого виду.The closest in terms of technical essence to the claimed object is Soton's synthetic nutrient medium, which is used in the biological industry to grow the causative agent of bovine tuberculosis.

Недоліком цього середовища є те, що після 5-6 послідовних пасажів виробничий штам довго накопичує бактерійну масу, а також втрачає морфологічні, біологічні та туберкуліногенні властивості. Для підтримки цих властивостей такі культури пасажують через організм великої рогатої худоби. Виділені від цих тварин культури погано ростуть на синтетичних середовищах і мало виділяють протеїну. Відновлення цих властивостей у мікобактерій потребує багаторазових пасажів з метою їх пристосування до синтетичних середовищ, на що витрачається багато часу і коштів. Аналогів пропонованому винаходу у доступній літературі немає.The disadvantage of this environment is that after 5-6 consecutive passages, the production strain accumulates bacterial mass for a long time, and also loses its morphological, biological and tuberculinogenic properties. To maintain these properties, such cultures are passed through the body of cattle. Cultures isolated from these animals grow poorly on synthetic media and secrete little protein. Restoration of these properties in mycobacteria requires repeated passages in order to adapt them to synthetic environments, which takes a lot of time and money. There are no analogues of the proposed invention in the available literature.

В основу винаходу поставлене завдання - пошук способу адаптації туберкуліногенних штамів до синтетичного живильного середовища, яке використовують у біологічній промисловості з метою виробництва туберкуліну для ссавців, та комплексного алергену із атипових мікобактерій.The main task of the invention is to find a way to adapt tuberculinogenic strains to a synthetic nutrient medium that is used in the biological industry for the purpose of producing tuberculin for mammals and a complex allergen from atypical mycobacteria.

Ця задача вирішується шляхом попереднього висіву туберкупіногенних штамів та епізоотичних культур мікобактерій на середовище, що містить відвар з 4 95 гліцерину. При появі росту цих культур на поверхні середовища у вигляді плівки, їх пересівають на синтетичне живильне середовище Сотона. Це забезпечує більш інтенсивний ріст і накопичення бактерійної маси мікобактерій.This task is solved by pre-sowing tubercupinogenic strains and epizootic cultures of mycobacteria on a medium containing a decoction of 4 95 glycerol. When the growth of these cultures appears on the surface of the medium in the form of a film, they are transplanted onto the synthetic nutrient medium of Soton. This ensures more intensive growth and accumulation of the bacterial mass of mycobacteria.

Спосіб виконується при слідуючому співвідношенні компонентів:The method is performed with the following ratio of components:

Картопляний відвар 100-150 см?Potato broth 100-150 cm?

Гліцерин хімічно чистий 1,0-5,0 см? при рН -7,0Glycerin chemically pure 1.0-5.0 cm? at pH -7.0

Аналіз відомих синтетичних живильних середовищ для вирощування туберкуліногенних штамів і епізоотичних культур мікобактерій показав, що при посіві на ці середовища збудників туберкульозу і атипових мікобактерій не у всіх випадках виростають культури мікобактерій у першій адаптивній генерації.Analysis of known synthetic nutrient media for the cultivation of tuberculinogenic strains and epizootic cultures of mycobacteria showed that when tuberculosis pathogens and atypical mycobacteria are sown on these media, cultures of mycobacteria in the first adaptive generation do not grow in all cases.

Проте, використання способу адаптації туберкуліногенних культур мікобактерій шляхом попереднього їх висіву на картопляний відвар з 4 95 гліцерину і послідуючим їх пересівом на синтетичне живильне середовищеHowever, the use of the method of adaptation of tuberculinogenic cultures of mycobacteria by preliminary sowing them on potato broth with 4 95 glycerol and their subsequent transplanting on a synthetic nutrient medium

Сотона, дозволяє прискорити час та поліпшити пристосування культур мікобактерій і інтенсивність росту та накопичення бактерійної маси.Sotona, allows you to speed up the time and improve the adaptation of mycobacterial cultures and the intensity of growth and accumulation of bacterial mass.

Порівняння заявляємого способу з прототипом свідчить про те, що цей спосіб з адаптацією туберкуліногенних штамів мікобактерій, відрізняється від відомого інтенсивністю росту культур та прискоренням часу накопичення бактерійної маси.Comparison of the proposed method with the prototype shows that this method with the adaptation of tuberculinogenic strains of mycobacteria differs from the known one by the intensity of growth of cultures and acceleration of the accumulation time of the bacterial mass.

Для виконання цього способу беруть 500 грамів картоплі, яку ретельно миють водопровідною водою, очищають від шкірки, здрібнюють і протягом однієї години витримують у 1 95 розчині бікарбоната натрія. Потім цей розчин зливають, а шматочки картоплі промокають фільтрувальним папером і розміщують у колбу ємкістю 2000 см, в яку заливають 1000 см? дистильованої води і кип'ятять протягом 30 хвилин. Шматочки картоплі відкидають, а картопляний відвар фільтрують через паперовий фільтр. До фільтрату добавляють хімічно чистий гліцерин до 4 95 концентрації його у відварі, ретельно перемішують і у флакони ємкістю 500 см3 розливають по 100-150 сму, а потім стерилізують при температурі 1202С протягом 30 хвилин. Стерильність картопляного відвару перевіряють шляхом витримування його у термостаті при 37"С протягом трьох діб.To perform this method, take 500 grams of potatoes, which are thoroughly washed with tap water, cleaned of the skin, crushed and kept for one hour in 1 95 sodium bicarbonate solution. Then this solution is drained, and the potato pieces are soaked with filter paper and placed in a flask with a capacity of 2000 cm, into which 1000 cm? of distilled water and boil for 30 minutes. The potato pieces are discarded, and the potato broth is filtered through a paper filter. Chemically pure glycerin is added to the filtrate to a concentration of 4.95% of its concentration in the decoction, mixed thoroughly and 100-150 cm3 are poured into bottles with a capacity of 500 cm3, and then sterilized at a temperature of 1202C for 30 minutes. The sterility of the potato broth is checked by keeping it in a thermostat at 37"C for three days.

У флакони з стерильним картопляним відваром бактеріологічною петлею роздільно висівають культури збудників туберкульозу та атипові мікобактерії, що виросли на щільному яєчному живильному середовищі для культивування мікобактерій.Cultures of tuberculosis causative agents and atypical mycobacteria grown on dense egg nutrient medium for the cultivation of mycobacteria are sown separately in bottles with sterile potato broth using a bacteriological loop.

Флакони з посівами закривають ватно-марлевими пробками і розміщують в термостаті при температурі 37,5- 38". За посівами ведуть спостереження протягом 60 діб.Bottles with crops are closed with cotton-gauze plugs and placed in a thermostat at a temperature of 37.5-38". The crops are observed for 60 days.

Приклад 1. Картопляний відвар готують, як вказано вище, при такому співвідношенні компонентів. мас. 9оExample 1. Potato broth is prepared as indicated above, with this ratio of components. mass 9 o'clock

Картопляний відвар - 100,0Potato broth - 100.0

Гліцерин хімічно чистий -1,0 рН - 7.0Chemically pure glycerin -1.0 pH - 7.0

Приклад 2. Теж, що і в прикладі Ме 1, при слідуючому співвідношенні компонентів, мас. 9УоExample 2. The same as in example Me 1, with the following ratio of components, wt. 9Uo

Картопляний відвар - 100,0Potato broth - 100.0

Гліцерин хімічно чистий -20 рн-7,0Glycerin is chemically pure -20 pH-7.0

Приклад 3. Теж, що і в прикладі Ме 1, при слідуючому співвідношенні компонентів, мас. 9оExample 3. The same as in example Me 1, with the following ratio of components, wt. 9 o'clock

Картотвиланий віднар - КОPotato-wrapped vednar - KO

Глікерюн жіміено чести - В вн -А 7,Glyceryun family of honor - В вн -А 7,

Приклад 4. Теж, що і в прикладі Ме 1, при слідуючому співвідношенні компонентів, мас. 9оExample 4. The same as in example Me 1, with the following ratio of components, wt. 9 o'clock

Картопляний відвар - 100,0Potato broth - 100.0

Гліцерин хімічно чистий -40 рн-7,0Glycerin is chemically pure -40 pH-7.0

Приклад 5. Теж, що і в прикладі Ме 1, при слідуючому співвідношенні компонентів, мас. оExample 5. The same as in example Me 1, with the following ratio of components, mass. at

Картопляний відвар - 100,0Potato broth - 100.0

Гліцерин хімічно чистий -5,0 рНн-7,0Glycerin is chemically pure -5.0 pHn-7.0

Показники інтенсивності росту культур мікобактерій на картопляному відварі з гліцерином приведені в таблиці 1.Indicators of the intensity of growth of mycobacterial cultures on potato broth with glycerin are given in Table 1.

Таблиця 1Table 1

Інтенсивність росту культур на картопляному відваріGrowth intensity of cultures on potato broth

Штам Інтенсивність росту культур в днях мікобактеря | Прикладі | Пришадт | ПрикладіStrain Intensity of culture growth in days of mycobacterium | Examples | Prishadt | Examples

М. бовінус-8 - іM. bovinus-8 - i

М. бовіс(епізо- отична культура) - іM. bovis (epizootic culture) - i

М. авіум іM. avium and

М. скрофуляцеум і МM. scrofulaceum and M

М. фортуїтум щ щшM. fortuitum sh shsh

І 41- поганий рістAnd 41 - bad growth

Я - задовільний рістI am a satisfactory growth

ЩІ - хороший рістSHI - good growth

Ц - відмінний рістC - excellent growth

Вихід бактерійної маси в мг на середовищі Сотона після та без попереднього посіву на картопляний відвар приведено в таблиці 2.The yield of bacterial mass in mg on Soton's medium after and without prior inoculation on potato broth is shown in Table 2.

Таблиця 2Table 2

Вихід бактерійної маси на синтетичному живильному середовищі Сотона в мг сухої речовини (СР)The yield of bacterial mass on Soton's synthetic nutrient medium in mg of dry matter (SR)

Штам мікобактерій Кількість бакмаси в МАС) на середовищі Сотона тStrain of mycobacteria Amount of bacmass in MAC) on Soton's medium t

Після попереднього посіву на Без попереднього посіву на картопляний відвар картопляний відвар (контроль)After pre-sowing on Without pre-sowing on potato broth potato broth (control)

М бовінус-8 242 225M bovinus-8 242 225

М. бовіс(епізоотична культура) 240 230M. bovis (epizootic culture) 240,230

М. авіум 393 340M. avium 393,340

М скрофуляцеум 567 420M scrofulaceum 567 420

М. фортуїтум 689 678M. fortuitum 689 678

З матеріалів таблиці 17 видно, що при посіві культур мікобактерій на картопляний відвар з гліцерином, інтенсивність росту мікобактерій у вигляді плівки була кращою там, де містилось 4 95 гліцерина.From the materials in Table 17, it can be seen that when cultures of mycobacteria were inoculated on potato broth with glycerin, the intensity of the growth of mycobacteria in the form of a film was better where 4 95 glycerol was contained.

При посіві культур мікобактерій із картопляного відвару де було 4 95 гліцерина, на синтетичне живильне середовище Сотона (табл. 2) в першій генерації культури швидко пристосовувались до росту на цьому середовищі, виростали у вигляді плівки, а накопичення бактерійної маси становило у шт. бовінус-8 - 242 мг, шт.When cultures of mycobacteria from potato broth containing 4 95 glycerol were inoculated on Soton's synthetic nutrient medium (Table 2), in the first generation, the cultures quickly adapted to growth on this medium, grew in the form of a film, and the accumulation of bacterial mass was in pcs. bovinus-8 - 242 mg, pcs.

Бовіс (епізоотична культура) - 240, шт. М. авіум - 393, шт. М скрофуляцеум - 567, шт М. фортуїтум - 689 мг. При посіві цих культур на середовище Сотона без попередньої їх адаптації на картопляному відварі, інтенсивність росту культур була значно меншою, а накопичення бактерійної маси становило у шт. М. бовінус-8 - 225 мг, шт. М. бовіс -230. шт. М. авіум - 340, шт. М. скрофуляцеум - 420, шт. М. фортуїтум - 678 мг.Bovis (epizootic culture) - 240 pcs. M. avium - 393, pcs. M. scrofulaceum - 567 pieces, M. fortuitum - 689 mg. When these cultures were sown on Soton's medium without prior adaptation to potato broth, the growth intensity of the cultures was significantly lower, and the accumulation of bacterial mass amounted to M. bovinus-8 - 225 mg, pcs. M. bovis -230. piece M. avium - 340, pcs. M. scrofulaceum - 420 pcs. M. fortuitum - 678 mg.

Результати проведених досліджень свідчать про те, що попередня адаптація культур мікобактерій сприяє росту культур у вигляді плівки та кращому пристосуванню до росту на синтетичному середовищі Сотона. Про це свідчать також дані таблиці 2 де показано, що накопичення бактерійної маси у культур мікобактерій бичачого виду було більше на 10-17 мг, пташиного - на 53 і атипових мікобактерій - на 11-147 мг, в порівнянні з прототипом, де висів культур проводили без адаптації на картопляному відварі з гліцерином.The results of the conducted studies indicate that the preliminary adaptation of mycobacterial cultures contributes to the growth of cultures in the form of a film and better adaptation to growth on Soton's synthetic medium. This is also evidenced by the data in Table 2, which shows that the accumulation of bacterial mass in cultures of bovine mycobacteria was 10-17 mg, avian - by 53, and atypical mycobacteria - by 11-147 mg, compared to the prototype, where cultures were sown without adaptation on potato broth with glycerin.

Claims (1)

Спосіб культивування збудників туберкульозу і атипових мікобактерій на синтетичному живильному середовищі, який відрізняється тим, що для адаптації туберкуліногенних штамів до синтетичних живильних середовищ проводять їх попереднє культивування на середовищі, що містить:The method of cultivation of causative agents of tuberculosis and atypical mycobacteria on a synthetic nutrient medium, which differs in that for the adaptation of tuberculinogenic strains to synthetic nutrient mediums, their preliminary cultivation is carried out on a medium containing: Картопляний відвар 100-150 см? Гліцерин хімічно чистий 1,0-5,0 см? прирн -7,0Potato broth 100-150 cm? Glycerin chemically pure 1.0-5.0 cm? prirn -7.0
UA98020978A 1998-02-25 1998-02-25 method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants UA34560A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA98020978A UA34560A (en) 1998-02-25 1998-02-25 method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UA98020978A UA34560A (en) 1998-02-25 1998-02-25 method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA34560A true UA34560A (en) 2001-03-15

Family

ID=74204305

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UA98020978A UA34560A (en) 1998-02-25 1998-02-25 method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA34560A (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gray et al. A new technique for isolating Listerellae from the bovine brain
Egwuatu et al. Effect of blood agar from different animal blood on growth rates and morphology of common pathogenic bacteria
Merritt et al. The changes in protein concentration and bacteria of fleece and skin during the development of fleece‐rot and body strike in sheep
Ajello A cytological and nutritional study of Polychytrium aggregatum. Part II. Nutrition
Firstenberg-Eden et al. Electron microscopic investigations into attachment of bacteria to teats of cows
CN108184890A (en) It is a kind of for thimerosal of animal primitive cell culture and preparation method thereof
CN104673701A (en) Preparation and application of enterobacter radicincitans and inoculant of enterobacter radicincitans
Russell The effect of gentian violet on protozoa and on tissues growing in vitro, with especial reference to the nucleus
Pattyn The problem of cultivation of Mycobacterium leprae: a review with criteria for evaluating recent experimental work
Marston Observations on L forms of staphylococci
US3983003A (en) Mycobacteria culture medium and method for in vitro cultivation of leprosy mycobacteria employing same
RU2661117C1 (en) Method of long-term storage of fastidious microorganisms
UA34560A (en) method for cultivation OF tuberculosis and atypical micobacteria infestants
JP2884487B2 (en) Controlling agent and control method of rice seedlings using a novel microbial strain
Zinsser et al. A Textbook of Bacteriology: A Practical Treatise for Students and Practitioners of Medicine and Public Health
RU2213779C2 (en) Nutrient medium for isolation of lactobacilli
Antychowicz et al. Infection of African catfish (Clarias gariepinus) in an intensive culture facility Mycobacterium marinum
Head et al. On the bacteriology of apical abscesses a preliminary report
CN109097321A (en) A kind of primary separation method of hair follicle stem cells
US20180030408A1 (en) Culture Medium for In-Vitro Cultivation of Mycobacterium Leprae (M. Leprae)
CA1060368A (en) Process for preparing a product having a biological activity
RU2350648C1 (en) Method of estimation of probiotics opposing activity on basis of lyophilised biomass of anaerobic bacteria in relation to pathogenic micobacteria
Kato et al. In vitro cultivation of mycobacteria from human lepromas and from an armadillo infected with Mycobacterium leprae
RU2328526C1 (en) Method for revealing cattle tuberculosis mycobacteria
CN101117620A (en) Method for acquiring tangible Taisui bacterial strain