UA134550U - Спосіб отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду trichuris, виділених від овець - Google Patents

Abstract

Спосіб отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду Trichuris, виділених від овець, включає відбір проб калу, внесення наважки калу у склянку, розведення, перемішування та поступове доведення об'єму рідиною до 50 см3, фільтрування через подвійне ситечко, центрифугування при 1000 об./хв., промивання яєць трихурисів. Для отримання щільної фекальної культури яєць Trichuris sp. використовують фекалії від тварин з певним показником інтенсивності інвазії, для чого попередньо визначають кількість яєць трихурисів в пробі калу за методом Котельникова-Хренова з насиченим розчином аміачної селітри в 3-х краплинах флотаційної рідини, при цьому середня кількість яєць в 1 краплині флотаційної рідини повинна становити мінімум 10 екземплярів.

Description

Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної паразитології, а саме до способів отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду

Тиіспигі5, виділених від овець, і може бути використана для вивчення ембріональних стадій розвитку збудників трихурозу овець в лабораторних умовах, визначення дезінвазійних властивостей дезінвазійних та дезінфікуючих речовин та засобів, випробування ефективності антигельмінтних препаратів, та для створення експериментальних моделей паразитозів.

Культури яєць гельмінтів як у ветеринарній, так й у гуманній медицині мають досить важливе значення. Саме за допомогою останніх у лабораторних умовах можна провести експериментальні дослідження, що пов'язані з вивченням ефективності дезінвазійних препаратів, які пропонуються виробниками для знищення ембріональних стадій паразитів у навколишньому середовищі та на виробництві Одночасно їх використовують для експериментального відтворення паразитарних захворювань задля вивчення особливостей патогенезу хвороб. Досить часто при вивченні ефективності антигельмінтних засобів використовують культури яєць паразитів для відтворення хвороб, проти яких препарат застосовують.

У більшості джерел відсутні самі методики отримання культур яєць гельмінтів, особливо з фекалій, проте є ті, що містять фрагменти з накопичення маси яєць. Так, відомий спосіб культивування яєць Ттгіспигіє тигіх описаний у посібнику (Б.А. Астафьев, Л.С. Яроцкий, М.Н.

Лебедева. Зкспериментальнье модели паразитозов в биологии и медицине. - М.: Наука, 1989. - 280 с.), в якому запропоновано методику отримання яєць гельмінтів. Згідно з методикою, яйця гельмінтів отримують із фекалій інвазованих збудником Тгіспигіє типів флотаційно - центрифужним методом. Для цього використовують насичений розчин кухонної солі. Фекалії ретельно розмішують у цьому розчині в співвідношенні 1:10. Отриману суміш розливають у центрифужні пробірки і центрифугують впродовж 5-7 хвилин зі швидкістю 1500 обертів/хв. Яйця, що піднімаються, разом з поверхневою плівкою знімають металевою петлею і струшують у стаканчик з дистильованою водою, після їх осідання на дно, ще 7-8 разів промивають дистильованою водою, переносять на годинникове скло, яке поміщають у чашку Петрі.

Недоліком вказаної методики є використання як флотанту розчин кухонної солі, оскільки вона має питому вагу в межах 1,18-1,22. Саме низька густина розчину зумовлює спливання

Зо малої кількості яєць трихурисів навіть при центрифугуванні.

Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється, є спосіб культивування яєць

Тиспигів тигів (патент України Мо 76434), в якому описана методика отримання яєць гельмінтів та згідно з яким проводять відбір проб калу для дослідження у полієтиленові пакети, розміром 5х7 см. Із загальної проби калу беруть наважку масою 1 г та переносять у склянку, додають 30 см3 дистильованої води та ретельно перемішують скляною палицею. Загальний об'єм поступово доводять до 50 см3. Завись фільтрують через подвійне ситечко в іншу склянку. Потім завись переносять в центрифугальну склянку, додають розчин нітрату амонію та центрифугують 10 хвилин при 1000 об./хв. Яйця, що знаходяться у поверхневій плівці, збирають скляною піпеткою, переносять у чашку Петрі, промивають 2-3 рази стерильним фізіологічним розчином, та переносять на годинникові скельця для подальшого культивування.

Заявлений спосіб і найближчий аналог мають суттєві спільні ознаки: включає відбір проб калу, внесення наважки калу у склянку, розведення, перемішування та поступове доведення об'єму рідиною до 50 см3, фільтрування через подвійне ситечко, центрифугування при 1000 об./хв., промивання яєць трихурисів.

Недоліком вказаного способу є використання фекалій у кількості 1 г, така кількість є досить малою для отримання щільної культури яєць, а також те, що використання проб без встановлення мінімальних показників інтенсивності трихурозної інвазії суттєво впливає на кількісний показник отримуваної культури яєць.

Заявлений спосіб усуває недоліки найближчого аналога та забезпечує отримання щільної фекальної культури - від 22 до 36 яєць трихурисів в одній пробі, протягом 30-40 хв.

В основу корисної моделі поставлена задача розробити новий ефективний спосіб отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду Тгіспигіх виділених від овець за відносно короткий проміжок часу, простий та зручний у використанні.

Поставлена задача вирішується тим, що для отримання щільної фекальної культури яєць

Тпіспигі5 5р. використовують фекалії від тварин з певним показником інтенсивності інвазії, для чого попередньо визначають кількість яєць трихурисів в пробі калу за методом Котельникова-

Хренова з насиченим розчином аміачної селітри в 3-х краплинах флотаційної рідини, при цьому середня кількість яєць в 1 краплині флотаційної рідини повинна становити мінімум 10 екземплярів; при цьому для отримання щільної фекальної культури беруть наважку калу масою 60 3-4 г, яку розводять та доводять до об'єму 50 см3 насиченим розчином аміачної селітри та після фільтрації суспензію калу відстоюють 10-20 хвилин, відбирають поверхневий шар рідини, розбавляють дистильованою водою, відстоюють, зливають надосадову рідину, залишок рідини центрифугують, отриманий осад промивають дистильованою водою та переносять у чашку

Петрі, після чого культура готова для використання; при цьому для ущільнення культури, отриманий осад з яйцями трихурисів з різних проб зливають в одну чашку Петрі до бажаної кількості, яку встановлюють шляхом мікроскопії зразка.

Технічний результат способу обумовлений тим, що відбираються проби калу від тварин з високим показником інтенсивності інвазії та масою не менше 3-4 г, при цьому суспензію калу перед центрифугуванням надосадової рідини з насиченим розчином аміачної селітри залишають для максимальної флотації яєць трихорусів на 10-20 хвилин. Окрім цього запропонований спосіб включає можливість ущільнення фекальної культури трихорусів.

Таким чином, наведені відомості пояснюють технічний результат заявленого способу.

При проведенні патентно-інформаційного пошуку заявником виявлено (Спосіб культивування яєць Тгіспигі5 тигі5, патент України Мо 76434), які містять суттєві ознаки, спільні із заявленим способом, а саме: включає відбір проб калу, внесення наважки калу у склянку, розведення, перемішування та поступове доведення об'єму рідиною до 50 см", фільтрування через подвійне ситечко, центрифугування при 1000 об./хв., промивання яєць трихурисів.

Проте, наявність зазначених, спільних із найближчим аналогом ознак недостатня для отримання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб, та які за сукупністю ознак повністю співпадають із заявленим способом, не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленої корисної моделі критерію винаходу (корисної моделі) - "Новизна".

У патентній і науково-теоретичній інформації не знайдено ознак, що відрізняють заявлений спосіб від найближчого аналога і забезпечують досягнення технічного результату тим, що для отримання щільної фекальної культури яєць Тгіспигіз 5р. використовують фекалії від тварин з певним показником інтенсивності інвазії для чого попередньо визначають кількість яєць трихурисів в пробі калу за методом Котельникова-Хренова з насиченим розчином аміачної селітри в 3-х краплинах флотаційної рідини, при цьому середня кількість яєць в 1 краплині флотаційної рідини повинна становити мінімум 10 екземплярів; при цьому для отримання щільної фекальної культури беруть наважку калу масою 3-4 г, яку розводять та доводять до

Зо об'єму 50 см3 насиченим розчином аміачної селітри та після фільтрації суспензію калу відстоюють 10-20 хвилин, відбирають поверхневий шар рідини, розбавляють дистильованою водою, відстоюють, зливають надосадову рідину, залишок рідини центрифугують, отриманий осад промивають дистильованою водою та переносять у чашку Петрі, після чого культура готова для використання; при цьому для ущільнення культури, отриманий осад з яйцями трихурисів з різних проб зливають в одну чашку Петрі до бажаної кількості, яку встановлюють шляхом мікроскопії зразка.

Заявлений спосіб належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної паразитології, а саме до способів отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду

Тііспигіє виділених від овець і може бути використана для вивчення ембріональних стадій розвитку збудників трихурозу овець в лабораторних умовах, визначення дезінвазійних властивостей дезінвазійних та дезінфікуючих речовин та засобів, випробування ефективності антигельмінтних препаратів, та для створення експериментальних моделей паразитозів, а тому відповідає критерію корисної моделі - "промислова придатність".

Для отримання фекальної культури яєць Тгіспигі5 5р. використовують фекалії від тварин, уражених збудником трихурозу.

Для підготовки зразка попередньо проводять визначення кількості яєць трихурисів в пробі за методом Котельникова-Хренова з насиченим розчином аміачної селітри в 3-х краплинах флотаційної рідини, при цьому середня кількість яєць в 1 краплині флотаційної рідини повинна становити мінімум 10 екземплярів. Після відбору необхідних проб проводять отримання яєць трихурисів. Для цього беруть пробу фекалій масою 3-4 г, поміщають її у склянку об'ємом 50 мл та додають до неї 20 мл насиченого розчину аміачної селітри ретельно розмішують паличкою або пестиком до отримання гомогенної суспензії. Далі об'єм рідини в склянці доводять до 50 мл.

Отриману фекальну суспензію фільтрують через ситечко в іншу склянку й залишають в спокої на 10-20 хвилин. За цей час яйця трихурисів у максимальній кількості підіймаються до поверхневого шару рідини. В подальшому за допомогою піпетки комплектованої спринцівкою (об'ємом 10 мл) відсмоктують поверхневий шар рідини по всій площині склянки та переносять в іншу склянку аналогічного об'єму. До отриманої рідини додають воду та відстоюють 5 хв., після чого надосадову рідину зливають таким чином, щоб у склянці залишилося максимум 2 мл рідини, яку в подальшому переносять в центрифугальну пробірку об'ємом 10 мл, додають воду бо та центрифугують 5 хв. при 1000 об./хв. Отриману надосадову рідину в пробірці зливають, осад добре розмішують та переносять в склянку об'ємом 50 мл, додають невелику кількість води й ретельно розмішують скляною паличкою, поступово доливаючи воду до об'єму 50 мл, залишають у спокої на 5 хвилин, після чого надосадовий шар рідини зливають, а до осаду додають воду. Таких маніпуляцій загалом необхідно зробити 4, що забезпечує добре відмивання яєць від флотаційного розчину. Після останнього відстоювання надосадову рідину зі склянки зливають, осад ретельно розмішують скляною паличкою та переносять в чашку Петрі, після чого культура готова до використання.

Для ущільнення культури, отримані яйця трихурисів з різних проб можна зливати в одну чашку Петрі до бажаної кількості, яку встановлюють шляхом мікроскопії зразка за малого збільшення.

Ефективність заявленого способу і його переваги перед найближчим аналогом підтверджені прикладом конкретного виконання корисної моделі.

Для визначення ефективності запропонованого способу отримання культури яєць трихурисів проведено експериментальне дослідження. З цією для відбирали 50 проб фекалій від овець інвазованих збудником трихурозу з бажаною інтенсивністю: середня інтенсивність трихурозної інвазії в одній краплині флотаційної рідини становила 12,31:0,22 яєць (від 10,33 до 17,00 яєць).

Отримання культури яєць трихурисів проводили двома способами: 1. Найближчий аналог (Спосіб культивування яєць Ттгіспигів тигів, патент України Ме76434); 2. Запропонованій спосіб з різними термінами відстоювання фекальної суспензії (10, 15 та 20 хвилин).

Ефективність способів визначали за показниками кількості отриманих яєць трихурисів та затраченим часом на виконання способу. Отримані результати досліджень відображені в таблиці.

Таблиця

Порівняльна ефективність способів отримання яєць роду Тгіспигі5 з фекалій овець, п-50 . Кількість отриманих яєць Час затрачений на

Час відстоювання, й й й й й тах Хв. (Найближийаналог | - 2... 77171711 19,7440,74/728.4.юЮю-.-/ | 3744023

Пропонований

За використання способу, який вибрано як найближчий аналог, встановлено, що середня кількість отриманих яєць становила 19,74:0,74 екземплярів за коливань від 7 до 28 яєць в одній пробі. На одну процедуру відмивання в середньому затрачається 37,44520,23 хв.

Зо Використання запропонованого способу з терміном відстоювання фекальної суспензії 10 хв призводило до отримання в середньому 22,66:0,59 екземплярів яєць трихурисів за коливань від 11 до 29 яєць з однієї проби, на що в середньому затрачалося 31,16:20,17 хвилин.

Збільшення терміну відстоювання фекальної суспензії до 15 хвилин призводило до збільшення кількості отримуваних яєць - 36,18:-41,50 екземплярів, за коливань від 27 до 58 екземплярів у пробі, при затратах часу на одну маніпуляцію 35,6820,23 хв. Вказаний режим виконання запропонованого способу за показниками ефективності перевищував найближчий аналог за кількістю отриманих яєць на 45,44 9595, за показниками затрат часу на 4,70 95 відповідно.

Встановлено, що виконання запропонованого способу з 20 хвилинним відстоюванням фекальної суспензії дещо знижує його ефективність. Так кількість отриманих яєць зменшилася (на 22,34 95) порівняно з попереднім режимом виконання способу в середньому до 28,1020,90 екземплярів за коливань від 18 до 42 яєць з однієї проби. На одну процедуру відмивання в середньому затрачається 40,8220,20 хв. Одночасно, встановлено, що спосіб за показниками ефективності перевищував найближчий аналог за кількістю отриманих яєць на 29,75 95 відповідно. Проте, в порівнянні з найближчим аналогом, запропонована методика виконання способу виявилася довшою у виконанні на 3,38 хв (8,28 Об).

Таким чином, позитивний ефект заявленої корисної моделі полягає у тому, що: - спосіб дозволяє концентрувати велику кількість яєць трихурисів за всіх запропонованих режимів виконання;

- ефективність способу за показником кількості отриманих яєць з 10-ти, 15-ти та 20-ти хвилинним відстоюванням фекальної суспензії виявилася вищою за спосіб що вибрано як найближчий аналог (на 12,65, 45,44 та 29,75 95 відповідно), за всіх запропонованих режимів виконання;

- ергономічність способу доведено кількісним показником затраченого часу на виконання однієї маніпуляції з отримання культури яєць; - ефективність способу за показниками затраченого часу за режимів з 10-ти, 15-ти та 20-ти хвилинним відстоюванням фекальної суспензії виявилася вищою за спосіб, що вибрано як найближчий аналог - лише за режимів з 10-ти та 15-ти хвилинним відстоюванням фекальної суспензії 16,77 та 4,70 95.

Claims (2)

ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ

1. Спосіб отримання щільної фекальної культури яєць гельмінтів роду Тгіспигі5, виділених від овець, що включає відбір проб калу, внесення наважки калу у склянку, розведення, перемішування та поступове доведення об'єму рідиною до 50 сму, фільтрування через подвійне ситечко, центрифугування при 1000 об./хв., промивання яєць трихурисів, який відрізняється тим, що для отримання щільної фекальної культури яєць Тгіспигі5 5р. використовують фекалії від тварин з певним показником інтенсивності інвазії, для чого попередньо визначають кількість яєць трихурисів в пробі калу за методом Котельникова-Хренова з насиченим розчином аміачної селітри в 3-х краплинах флотаційної рідини, при цьому середня кількість яєць в 1 краплині флотаційної рідини повинна становити мінімум 10 екземплярів.

2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що в склянку вносять наважку калу масою 3-4 г, яку розводять та доводять до об'єму 50 см3 насиченим розчином аміачної селітри та після фільтрації суспензію калу відстоюють 10-20 хвилин, відбирають поверхневий шар рідини, розбавляють дистильованою водою, відстоюють, зливають надосадову рідину, залишок рідини центрифугують, отриманий осад промивають дистильованою водою та переносять у чашку Петрі, після чого культура готова для використання.

З. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для ущільнення культури, отриманий осад з Зо яйцями трихурисів з різних проб зливають в одну чашку Петрі до бажаної кількості, яку встановлюють шляхом мікроскопії зразка.