UA123820C2 - Хлоридна сіль пептиду tat-nr2b9c - Google Patents

Хлоридна сіль пептиду tat-nr2b9c Download PDF

Info

Publication number
UA123820C2
UA123820C2 UAA201613470A UAA201613470A UA123820C2 UA 123820 C2 UA123820 C2 UA 123820C2 UA A201613470 A UAA201613470 A UA A201613470A UA A201613470 A UAA201613470 A UA A201613470A UA 123820 C2 UA123820 C2 UA 123820C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
tat
composition
trehalose
lyophilized
concentration
Prior art date
Application number
UAA201613470A
Other languages
English (en)
Inventor
Джонатан Девід Гарман
Джонатан Дэвид ГАРМАН
Original Assignee
Ноно Інк.
Ноно Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ноно Інк., Ноно Инк. filed Critical Ноно Інк.
Publication of UA123820C2 publication Critical patent/UA123820C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • C07K14/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • C07K14/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
    • C07K14/163—Regulatory proteins, e.g. tat, nef, rev, vif, vpu, vpr, vpt, vpx
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/10—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a tag for extracellular membrane crossing, e.g. TAT or VP22
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
    • C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Abstract

Винахід стосується хлоридної солі пептиду, який являє собою TAT-NR2B9c, де хлорид становить більше, ніж 95 % молів усіх аніонів, що містяться в солі. Винахід також стосується попередньо ліофілізованого складу для лікування інсульту, церебральної ішемії, черепно-мозкової травми або субарахноїдального крововиливу, що містить таку хлоридну сіль, буфер та цукор, де ацетат та трифторацетат окремо і разом складають менше ніж 5 % молів аніонів складу, cпособу отримання складу, що включає зберігання зразка ліофілізованого складу протягом щонайменше тижня при температурі щонайменше 20 °C; та відновлення ліофілізованого складу, а також до застосування хлоридної солі пептиду у виготовленні лікарського засобу для зниження руйнівних наслідків інсульту або іншого ішемічного стану.

Description

Посилання на споріднену заявку
Дана заявка являє собою звичайну заявку на видання патенту США Мо 62/004142, подану 28 травня 2014 року, включену за допомогою посилання в усій своєї повноті для усіх цілей.
Посилання на перелік послідовностей
Перелік послідовностей, позначений як 4468495ЕБО1 І5Т Хі, 16618 біт, створений 28 травня 2014 року, включений за допомогою посилання.
Попередній рівень техніки даного винаходу
ТаЇ-МК2В9с (також відомий як МА-1) є засобом, який інгібує РЗО-95, порушуючи таким чином зв'язування з рецепторами М-метил-О-аспартату (ММОАК) та з нейрональними синтазами оксиду азоту (пМО5), а також знижуючи ексайтотоксичність, індуковану ішемією головного мозку. Лікування знижує розмір інфаркту та функціональні дефіцити. ТАТ-МК2ВОУс успішно проходить ІЇ фазу випробовування (див. МО 2010144721 та Аагів еї аІ., Зсіепсе 298, 846-850 (2002), НІЇ еї а!., І апсеї Мешгої. 11:942 - 950 (2012)).
Оскільки ТАТ-МК2ВОс не викликає тяжких побічних ефектів, його можна вводити при підозрі на інсульт або інші ішемічні стани або геморагічні стани без діагнозу згідно з прийнятими у даній галузі критеріями для підтвердження відсутності крововиливу. Наприклад, ТАТ-МК2ВОс може бути введений на місці, де відбулися інсульт або травма нервової системи (наприклад, дома у хворого) або в машині швидкої допомоги, що транспортує суб'єкта у лікарню.
ТАТ-МА2ВОс раніше був описаний як рідка композиція нормального сольового розчину або фосфатно-буферного сольового розчину або композиція, ліофілізована з нормального сольового розчину (МО 2010144721).
Коротке розкриття даного винаходу
Даний винахід відноситься до хлоридної солі пептиду, який являє собою ТАТ-МА2ВОс (5ЕО
ІЮ МО: 6) або відрізняється від ТАТ-МК2ВОсС не більш ніж 5 амінокислотними замінами, вставками або делеціями, або будь-якого іншого пептиду, що розкривається у даному документі як активний засіб. Хлоридна сіль може бути отримана шляхом обміну трифторацетату на хлорид у трифторацетатній солі ТАТ-МК2ВОУс. Хлоридна сіль також може бути отримана шляхом обміну трифторацетату на ацетат, а потім ацетату на хлорид, виходячи з трифторацетатної соли ТАТ-МК2ВОс. Необов'язково, більш ніж 99 95 аніонів в солі складає хлорид.
Даний винахід, крім того, відноситься до попередньо ліофілізованого складу, що містить хлоридну сіль, що описується вище, буфер та цукор. Необов'язково, хлоридною сіллю є хлоридна сіль ТАТ-МК2ВОс. Необов'язково, буфером є гістидин, цукром є трегалоза, а рн становить 6-7. Необов'язково, кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 1 95 за масою аніонів у складі. Необов'язково, кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі. Необов'язково, хлоридна сіль пептиду має концентрацію 70-120 мг/мл, гістидин має концентрацію 15-100 мМ, а трегалоза має концентрацію 80-160 мМ.
Необов'язково, хлоридна сіль пептиду має концентрацію 70-120 мг/мл, гістидин має концентрацію 20-100 мМ, а трегалоза має концентрацію 100-140 мМ. Необов'язково, ТАТ-
МК2ВУсС має концентрацію 70-120 мг/мл, концентрація гістидину становить 20-50 мМ, а концентрація трегалози становить 100-140 мМ. Необов'язково, концентрація гістидину становить 20 мМ, концентрація трегалози становить 100-200 мМ, переважно 120 мМ, а концентрація ТАТ-МК2ВОс становить 90 мг/мл.
Даний винахід, крім того, відноситься до ліофілізованого складу, отриманого шляхом ліофілізації будь-якого з попередньо ліофілізованих складів, що описуються вище.
Необов'язково, кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 1 95 за масою аніонів у складі. Необов'язково, кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі.
Даний винахід, крім того, відноситься до відновленого складу, отриманого шляхом об'єднання будь-якого з ліофілізованих складів, що описуються вище, з водним розчином.
Необов'язково, водним розчином є вода або нормальний сольовий розчин. Необов'язково, об'єм відновленого складу становить 3-6-кратний об'єм попередньо ліофілізованого складу.
Даний винахід, крім того, відноситься до відновленого складу, що містить ТАТ-МК2ВОс або інший активний засіб, що описується у даному документі, при концентрації 15-25 мг/мл, буфер та цукор. Необов'язково, буфером є гістидин при концентрації 4-20 мМ, цукром є трегалоза при концентрації 20-30 мМ, а рН становить 6-7. Необов'язково, відновлений склад за пунктом 19 являє собою склад, у якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 1 95 за масою аніонів у складі. Необов'язково, кожний з ацетату та трифторацетату містить менш ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі. 60 Даний винахід, крім того, відноситься до способу отримання складу, що передбачає зберігання зразка ліофілізованого складу, що описується вище, протягом щонайменше тижня за температурою щонайменше 20 С; та відновлення ліофілізованого складу. Необов'язково, ліофілізований склад відновлюють у воді або сольовому розчині. Необов'язково, спосіб також передбачає введення хворому відновленого складу, необов'язково, після додаткового розбавлення нормальним сольовим розчином. Необов'язково, склад зберігають протягом щонайменше року. Необов'язково, зберігання здійснюють при навколишній температурі.
Необов'язково, зберігання передбачає періоди, при яких температура перевищує 37 "С. Згідно з деякими способами хворий страждає на інсульт або травматичне пошкодження СМ5 (центральної нервової системи). Згідно з деякими способами ліофілізований зразок зберігають в машині швидкої допомоги. Згідно 3 деякими способами хворий страждає на субарахноїдальний крововилив. Згідно з деякими способами хворого піддають ендоваскулярній репарації аневризми.
Короткий опис графічних матеріалів
На фіг. 1 представлений графік, що демонструє зону інфаркту головного мозку щура після інсульту ЗРМО після лікування різними складами ТАТ-МН2ВОс.
На фіг. 2А, В А) представлена стовпчикова діаграма, що демонструє стабільність різних складів ТАТ-МК2ВОсС при -20 "С та 40 "С. На вісі М представлена чистота Та-МКк2Вос після 1 тижня при температурі зберігання, як виміряно за 95 загальної площі із застосуванням КР-НРІ б.
В) Ті самі дані, що і для А, але відсортовані за буфером та рн.
На фіг. З представлена стовпчикова діаграма, що демонструє стабільність (за допомогою
НРІС) 20 мг/мл ТАТ-МК2ВОсС у тгістидиновому буфері, рН 6,5, у присутності різних об'ємоутворювальних засобів та солі при -20 "С та 40 "С.
На фіг. 4А, В представлені графіки диференційної сканувальної калориметрії для 20 мг/мл
ТАТ-КНК2В9Ос у гістидиновому буфері, рН 6,5, у присутності маніту (А) або маніту та масі (В).
На фіг. 5А, В представлені графіки диференційної сканувальної калориметрії для 20 мг/мл
ТАТ-МК2ВОс у гістидиновому буфері, рН 6,5, у присутності трегалози (А) або трегалози та Масі (В).
На фіг. 6А, В представлений графік диференційної сканувальної калориметрії для 20 мг/мл
ТАТ-МК2В9Ос у гістидиновому буфері, рН 6,5, у присутності декстрану-40 (А) або декстрану-40 та
Коо) масі (В).
На фіг. 7А, В А) показаний зовнішній вигляд осаду після ліофілізації З мл 90 мг/мл ТАТ-
МК2Вос в 100 мМ гістидині, рН 6,5, з 120 мМ трегалозою. В) Показаний зовнішній вигляд осаду альтернативних складів ТАТ-МК2ВОс з різними кількостями гістидину та трегалози.
Визначення
Разом з активними інгредієнтами ліофілізовані склади можуть містити один або декілька наступних класів компонентів. Класи не є взаємовиключальними; іншими словами, один і той самий засіб може відноситися до кількох класів. "Об'ємоутворювальний засіб" забезпечує структуру висушеного заморожуванням пептиду.
Об'ємоутворювальні засоби передбачають маніт, трегалозу, декстран-40, гліцин, лактозу, сорбіт та цукрозу, серед інших. Крім забезпечення фармацевтично прийнятного осаду об'ємоутворювальні засоби також можуть забезпечувати корисні властивості у відношенні модифікації температури колапсу, забезпечення захисту при заморожуванні та відтаванні, температури склування та посилення стабільності білка протягом тривалого зберігання. Ці засоби також можуть служити як модифікатори тонічності.
Буфер являє собою засіб, який підтримує рН розчину в прийнятному діапазоні до ліофілізації. Переважним буфером є гістидин. Інші буфери передбачають сукцинат (натрію або калію), гістидин, цитрат (натрію), глюконат, ацетат, фосфат, Тгі5 та подібне. Переважні буфери є ефективними у діапазоні рН від приблизно 5,5 до приблизно 7 або від приблизно б до приблизно 7; переважно рН становить приблизно 6,5. Приклади буферів, що контролюють рН у даному діапазоні, передбачають сукцинат (такий як натрію сукцинат), глюконат, гістидин, цитрат та інші буфери на основі органічних кислот. "Кріопротектор" забезпечує стабільність пептиду при індукованих заморожуванням впливах, вірогідно, у результаті переважного витиснення з поверхні білка. Він також може забезпечувати захист в ході первинного та вторинного сушіння і тривалого зберігання продукту. Прикладами є полімери, такі як декстран та поліетиленгліколь; цукри (у тому числі цукрові спирти), такі як цукроза, глюкоза, трегалоза і лактоза; поверхнево-активні речовини, такі як полісорбати; та амінокислоти, такі як гліцин, аргінін і серин. "Ліопротектор" забезпечує стабільність пептиду у ході процесу сушіння або дегідратації (циклів первинного та вторинного сушіння), вірогідно, шляхом забезпечення аморфної матриці у бо склуватому стані та шляхом зв'язування з білюьом за допомогою водневого зв'язку із заміною молекул води, які видаляються в ході процесу сушіння. Це допомагає зберігати пептидну конформацію, мінімізувати розщеплення пептиду в ході циклу ліофілізації та поліпшувати довгочасну стабільність продукту. Приклади передбачають багатоатомні спирти або цукри, такі як цукроза та трегалоза.
Крім тих, що вже згадувалися, інші стабілізатори або інгібітори розщеплення можуть передбачати інгібітори деамідування, поверхнево-активні речовини, деякі з яких являють собою складні ефіри жирних кислот і сорбітанполіетоксилатів (наприклад, полісорбат 20 або полісорбат 80), полоксамер 188 та детергенти.
Терміні "ліофілізація", "ліофілізований" та "висушений заморожуванням" відносяться до процесу, за допомогою якого матеріал, що підлягає сушінню, спочатку заморожують, а потім лід або заморожений розчинник видаляють шляхом сублімації у вакуумному середовищі.
Термін "фармацевтичний склад" або "композиція" означає препарат, який забезпечує ефективність активного засобу та не містить додаткові компоненти, що є токсичними для суб'єктів, яким будуть вводити склад.
Термін "час відновлення" означає час, необхідний для регідратування ліофілізованого складу розчином до розчину, який не містить частинки, помітні неозброєним оком.
Термін "стабільний" ліофілізований пептидний склад означає склад без суттєвих змін, що спостерігаються при 20 "С протягом щонайменше одного тижня, місяця або переважно більш ніж щонайменше трьох місяців, щонайменше шести місяців або року. Зміни вважають незначними, якщо руйнується не більш ніж 10 95, переважно 595 пептиду, як виміряно за допомогою ЗЕС-НРІ С. Регідратований розчин при візуальному аналізі виглядає безбарвним або прозорим - злегка опалесцентним. Концентрація, рН та осмоляльность складу характеризуються не більш ніж ж/-10 95 зміною після зберігання. Ефективність знаходиться у межах 70-130 95, переважно 80-120 95 або іноді 80-100 95 свіжовиготовленого контрольного зразка. Спостерігається не більш ніж 10 95, переважно 5 95 фрагментація. Утворюється не більш ніж 10 95, переважно 5 95 агрегація. Стабільність може бути виміряна різними способами, що розглядаються в Рерійде апа Ргоїеіп Огид Оеїїмегу, 247-301, Міпсепі І ее Еа., Магсеї! ОеккКег", Іпс.,
Мем Хогк, М.У., Рирз. (1991), та допев, А. Адм. ЮОгид Оеєїїмегу Кем. 10:29-90 (1993).
Термін "ізотонічний" означає, що склад, який становить інтерес, має, по суті, той самий осмотичний тиск, що і кров людини. Ізотонічні склади, як правило, будуть мати осмотичний тиск від приблизно 270 до 328 мОсм. Злегка гіпотонічний тиск становить 250-269, а злегка гіпертонічний тиск становить 328-350 мОсм. Осмотичний тиск може бути виміряний, наприклад, із застосуванням парового осмометра або осмометра заморожувального типа.
Модифікатори тонічності: Солі (Масі, КСІ, МосСі», СаСі») можуть бути використані як модифікатори тонічності для контролю осмотичного тиску. Крім того, кріопротектори/ліопротектори та/або об'ємоутворювальні засоби, такі як цукроза, маніт або гліцин, можуть служить модифікаторами тонічності.
Числові значення, такі як концентрації або рН, приводяться у межах допуску, що відображують точність, з якою значення може бути виміряне. Якщо контекст не вимагає іншого, дробові величини округляються до найближчого цілого числа. Якщо контекст не вимагає іншого, наведення діапазону значень передбачає, що можуть бути використані будь-які ціле число або піддіапазон у межах діапазону.
Терміни "захворювання" та "стан" використовуються синонімічно із зазначенням будь-якого порушення або переривання нормальної структури або функції у суб'єкта.
Докладне розкриття даного винаходу
І. Загальні відомості
Пептиди, що синтезуються твердофазними способами, як правило, отримують у вигляді трифторацетатних солей, оскільки трифтороцтову кислоту (ТЕА) використовують для зняття захисту з пептидів та/(або для видалення пептидів зі смол. Для фармацевтичного застосування трифторацетат, як правило, замінюють ацетатом як протиіїоном, оскільки ацетат є нетоксичним, та заміна трифторацетату ацетатом є ефективною. Так було у випадку з пептидом ТАТ-МА2ВО9с, що синтезується на даний час, як описано в МО 2010144721 або в М/О-А-2014/085349, а також в інших документах.
Ацетат часто є переважним протиїбном для фармацевтичних пептидів, оскільки трифторацетат може бути замінений ацетатом з незначною зміною у типовому процесі очищення пептиду, що отримують твердофазним синтезом, при якому кінцеве промивання виконують з оцтовою кислотою замість трифтороцтової кислоти з наступним елююванням ацетонітрилом. Іноді замість цього застосовують інші протиіони. Наприклад, іноді застосовують хлорид для погано розчинних пептидів, оскільки він поліпшує їх розчинність. Однак заміна бо трифторацетату або ацетату на хлорид призводить до втрати деякої кількості пептиду. Більш того, наявність НОСІ, що утворюється при хлоридному обміні, як повідомляли, модифікує структуру та знижує термічну стабільність деяких пептидів (Віоспетівігу, Бій еайіоп, Вегоу еї аї. ед5, Егеетап; 2002); У Рері Зсі. 2007 дап; 13(1):37-43). ТАТ-МК2ВОс вже є високорозчинним пептидом у вигляді ацетатної соли. Отже, заміна трифторацетатної або ацетатної солі хлоридом, як, здавалося б, має недоліки, що полягають у зниженні виходу та у можливому зменшенні стабільності без будь-якої компенсувальної переваги.
Неочікувано було виявлено, що хлоридна сіль ТАТ-МК2ВОс забезпечує значно більшу стабільність у ліофілізованій формі, ніж ацетатна сіль ТАТ-МК2ВОс у тому самому складі або ацетатна сіль ТАТ-МК2В5с, ліофілізована з сольового розчину. Хлоридна сіль може залишатися достатньо стабільною для клінічного застосування, навіть при зберіганні при навколишніх температурах літнього періоду, що досягають або навіть перевищують 379С, протягом кількох років. Більш ніж висока стабільність хлоридної солі у порівнянні з ацетатом більш ніж компенсує будь-які більші витрати або зниження виходу, що потребуються при заміні трифторацетату як солі. Даний винахід відноситься до ліофілізованих складів активних засобів, зокрема, ТАТ-
МК2ВО9с, у вигляді хлоридної солі. Такі склади є стабільними при навколишній температурі (наприклад, щонайменше 209), що, таким чином, полегшує забезпечення постачання такого складу в машинах швидкої допомоги або подібному, або персоналом служби негайної допомоги для введення на місці захворювання або нещасного випадку, або між таким місцем та медичним закладом.
Ліофілізовані склади отримують з попередньо ліофілізованого складу, що містить активний засіб, буфер, об'ємоутворювальний засіб та воду. Можуть бути присутніми, а можуть не бути присутніми, інші компоненти, такі як кріо- або ліоконсерванти, засіб регулювання тонічності, фармацевтично прийнятні носії та подібне. Переважним активним засобом є хлоридна сіль
ТАТ-МК2В9с. Переважним буфером є гістидин. Переважним об'ємоутворювальним засобом є трегалоза. Трегалоза також служить кріо- та ліоконсервантом. Типовий попередньо ліофілізований склад містить активний засіб (наприклад, хлоридну сіль ТАТ-МК2В9с), гістидин (10-100 мМ, 15-100 мМ, 15-80 мМ, 40-60 мМ або 15-60 мМ, наприклад, 20 мм або необов'язково 50 ММ або 20-50 мМ) та трегалозу (50-200 мМ, переважно 80-160 мМ, 100-140 мМ, більш переважно 120 мМ). рН становить 5,5-7,5, більш переважно 6-7, більш переважно 6,5.
Зо Концентрація активного засобу (наприклад, хлоридної солі ТАТ-МК2ВОс) складає 20-200 мг/мл, переважно 50-150 мг/мл, більш переважно 70-120 мг/мл або 90 мг/мл. Таким чином, типовий попередньо ліофілізований склад містить 20 мМ гістидину, 120 мМ трегалози та 90 мг/мл хлоридної солі ТАТ-МК2ВОс. Необов'язково може бути включений скавенджер ацетилування, такий як лізин, як описується у заявці Мо 057769-446850, що знаходиться на одночасному розгляданні, для додаткового зниження будь-якого остаточного ацетату або трифторацетату у складі.
Після ліофілізації ліофілізовані склади характеризуються низьким вмістом води, переважно приблизно 0 95 - 595 води, більш переважно менш ніж 2,595 води за масою. Ліофілізовані склади можна зберігати у морозильній камері (наприклад, при -20 або -70 "С), у холодильнику (при 0-4 "С) або при кімнатній температурі (при 20-25 75).
Активні засоби відновлюють у водному розчині, переважно у воді для ін'єкції або необов'язково в нормальному сольовому розчині (в 0,8-1,0 95 сольовому розчині та переважно в 0,9 95 сольовому розчині). Відновлення може бути до того самого або до меншого або більшого об'єму, ніж об'єм попередньо ліофілізованого складу. Переважно, об'єм після відновлення більше, ніж до відновлення (наприклад, більше у 3-6 разів). Наприклад, об'єм при попередній ліофілізації, що складає 3-5 мл, може бути відновлений до об'єму 10 мл, 12 мл, 13,5 мл, 15 мл, або 20 мл, або 10-20 мл, серед інших. Після відновлення концентрація гістидину становить переважно 2-20 мМ, наприклад, 2-7 мМ, 4,0-6,5 мМ, 4,5 мМ або 6 мМ; концентрація трегалози становить переважно 15-45 мМ або 20-40 мМ або 25-27 мМ або 35-37 мМ. Концентрація лізину складає переважно 100-300 мМ, наприклад, 150-250 мМ, 150-170 мм або 210-220 мм. Активний засіб переважно має концентрацію 10-30 мг/мл, наприклад 15-30, 18-20, 20 мг/мл активного засобу (наприклад, ТАТ-МК2ВОс) або 25-30, 26-28 або 27 мг/мл активного засобу. Типовий склад після відновлення містить 4-5 мМ гістидину, 26-27 мМ трегалози, 150-170 мМ лізину та 20 мг/мл ТАТ-МК2В9с (при цьому концентрації заокруглюють до найближчого цілого числа). Другий типовий склад після відновлення містить 5-7 мМ гістидину, 35-37 мМ трегалози, 210-220 мМ лізину та 26-28 мг/мл ТАТ-МК2ВОс (при цьому концентрації заокруллюють до найближчого цілого числа). Відновлений склад може бути додатково розбавлений перед введенням, наприклад, шляхом додавання у мішок для рідини, що містить нормальний сольовий розчин для внутрішньовенної інфузії. бо Будь-який опис складу у вигляді зазначених компонентів, що містяться або включені (або зазначених подібною термінологією), слід розуміти як альтернативний або додатковий опис складу, що складається з цих указаних компонентів, або що складається, по суті, з таких.
Способи сушіння заморожуванням викладені, наприклад, в Мейїйод5 іп Епгутоїоду, Мої. 22,
Раде5 33-39, Асадетіс Рге55, Мем/ Могк (1971), а також в Егеее-ЮОгуїпо, Е. МУ. НРіозаої,
АпеїппоіЯ, Мем Моїк (1949). ТАТ-МК2ВО9с переважно ліофілізують у тому самому флаконі, у якому його будуть відновлювати для застосування. Водний розчин ТАТ-МК2ВОс додають у флакон необов'язково після фільтрування через стерильну систему фільтрації, таку як 0,22- мікронний фільтр, що зазвичай застосовують для пептидів. Склади можуть бути ліофілізовані в контрольованому циклі, такому як цикл, що описується у прикладах. Попередньо ліофілізований склад може бути поміщений до флакону та ліофілізований при понижених температурі та тиску.
Після ліофілізації флакони можуть бути заткнуті. Для застосування ліофілізат відновлюють водою для ін'єкції, нормальним сольовим розчином або іншим фармацевтично прийнятним носієм або розріджувачем.
Ряд контейнерів є прийнятним для ліофілізації. Контейнер повинен витримувати зовнішній тиск при його затиканні та зберіганні в умовах часткового вакууму. Контейнер повинен бути зробленим з матеріалу, який забезпечує прийнятний теплообмін між зовнішнім та внутрішнім середовищем. Розмір контейнера повинен бути таким, щоб розчин, що підлягає ліофілізації, займав не більш ніж 20 95 корисного об'єму або міг перевищувати його з надлишком згідно з рекомендаціями ОБР по об'єму в контейнері, що мають переважну силу. Наприклад, 3-мл флакон може бути наповнений 0,5 мл розчину. Флакони можуть бути зроблені зі скла, наприклад, боросілікату, або пластику, наприклад, поліпропілену.
Можуть бути використані скляні пляшки, що зазвичай застосовують для ліофілізації біологічних матеріалів. ІНШим прийнятним контейнером є двохкамерний шприц, у якому одна камера містить ліофілізований осад пептиду ТАТ-МК2ВОс, а інша камера містить водний розріджувач. Після завершення ліофілізації вакуум у флаконах або ампулах може бути послаблений шляхом заповнення системи інертним газом, з затиканням на місці із застосуванням стандартного обладнання, а потім з обтискним запечатуванням. Такий спосіб забезпечить стерильний кінцевий продукт. Також можуть бути застосовані інші рішення з двох частин, такі як мішок з руйнівною перегородкою між камерою з ліофілізованим лікарським
Зо засобом та розріджувачем.
І. Активні засоби
Хоча велика частина опису відноситься до активного засобу ТАТ-МК2ВОс, з метою ілюстрації, інші активні засоби, що описуються нижче, можуть бути отримані у вигляді хлоридних солей або складені згідно з принципами, що описуються для ТАТ-МК2ВОс. Конкретні концентрації, що наводяться для ТАТ-МК2ВОс, можуть бути використані як є для інших засобів або перетворені з отриманням еквімолярних концентрацій для іншого засобу та ТАТ-МА2В9с.
Активні засоби інгібують взаємодію між РБЗО-95 та одним або декількома ММОАК (наприклад, 2А, 28, 2С або 20) або пМо5 (наприклад, Зм/і55-Ргої Р29475) шляхом зв'язування з
РБО-95. Такі засоби застосовні для зменшення одного або декількох пошкоджувальних ефектів інсульту та інших неврологічних станів, опосередкованих, щонайменше частково, ексайтотоксичністю ММОАБР. Такі засоби включають пептиди з амінокислотною послідовністю, що містить мотив РІ ММОА-рецептора або домен РО2 в РБЗО-95 або грунтується на ньому. Такі пептиди також можуть інгібувати взаємодії між РБЗО-95 і пМО5 та іншими глутаматними рецепторами (наприклад, каїнітиновими рецепторами або АМРА-рецепторами), такими як КМ1.4 та сСІшШКб. Переважні пептиди інгібують взаємодію між доменами РО2-1 та -2 у білку постсинаптичної щільності-95 (РБО-95) (амінокислотної послідовності людини, що надана
ЗіаїШйакКкізт, Ссчєпотісв 44(1):71-82 (1997)) та С-кінцевою Рі. послідовністю однієї або декількох субодиниць ММОА-рецептора 2, у тому числі субодиниці МК2В нейронального рецептора М- метил-О-аспартату (Мапаїсп еї аї., бепотіс5 22, 216-8 (1994)). ММОАК2В має ІЮО СепВапк 4099612, 20 С-кінцевих амінокислот ЕМОЗ5МОНММУЕКІ З5ІЕ5ОМ (ЗЕО ІО МО: 11) та РІ. мотив
ЕБЗОМ (5ЕБО ІО МО: 12). Переважні пептиди інгібують людські форми РБО-95 та людські рецептори ММОАБРЕ. Однак інгібування також може бути показано видовими варіантами білків.
Нижче представлений перелік ММОА- та глутаматних рецепторів, які можуть бути використані.
ММОА-рецептори з РІ. послідовностями . . . С-кінцева ни
Назва СІ або Мо | С-кінцева послідовність з 20 послідовність з 40 | РІ? Внутрішній доступу мономерів : ІО РІ мономерів
НРТОІТОРІ МЕЗОРБУБЗТММ | БЗТУМ (5ЕО ІО МО:
ММОАНІ1 307302 ФЕО ІЮ МО: 13 АА2г16
НРТОІТОРІ МЕЗОРБУБЗТММ | БЗТУМ (5ЕО ІО МО:
ММОАНВІ1-1 292282 ЕО І МО: 13 АА2г16
НРТОІТОРІ МЕЗОРБУБЗТММ | БЗТУМ (5ЕО ІО МО:
ММОАНВІ1-4 472845 ЕО І МО: 13 АА2г16
НРТОІТОРІ МЕЗОРБУБЗТММ | БЗТУМ (5ЕО ІО МО:
ММОАН1-3Б 2343286 ФЕО ІЮ МО: 13 АА2г16
НРТОІТОРІ МЕЗОРБУБЗТММ | БЗТУМ (5ЕО ІО МО:
ММОАНІ1-4р 2343288 ФЕО ІЮ МО: 13 АА2г16
ВАВАВАІЕВЕЕСОЇ ОЇ СЗАНАЕЗІНВЕВ (5ЕБЕО Ір
ММОАВІ-2 | 11038634 ННАІЄНЕЕООЇ НАЕВ, п
ВАВАВАІЕВЕЕСОЇ ОЇ СЗАНАЕЗІНВЕВ (5ЕБЕО Ір
ММОАВІ-3 | 11038636 НАЛІЄНЕЕООЇ НАЕВ, п
ТОСЕРОРСТМУВВІЗ5ІЕЗЕМІЕЗЕМ (5ЕБО Ір
ММОАН2С 6006004 ЄЕО ІЮ МО: 15 МО: 29 АА180
ЕМаЗБОМОаНУМЕКІ 55ІЕЗОМ ЕОМ (5ЕО Ір
ММОАНЗ 560546 ФЕО І МО: 11 МО: 12 ААЗА,1
АУМ5ЗАКТЕГ ЕЕМОВТЗАТСЕЗІТСЕВ (5ЕБО Ір
ММОАВЗА О| 17530176 АУОАКТЕСЕРУ цей п
ЕМаЗБОМОаНУМЕКІ 55ІЕЗОМ ЕОМ (5ЕО Ір
І/М5СЗМАВУУККМРОЇЕБЗОМ | ЕОМ (ЗЕБЕО І
ММОАН2гА 558748 ФО Ю МО: 17 МО: 12 ААЗа 2 аарсатТАВаЗАНЕЗ5ОІ ЕБЕМИЕЗЕМ (5ЕБЕО І
Глутаматний І рецептор АЕО09014 ОРТРП-ОСМОМОРОВОТВІ СТ5І (5ЕО ІЮ МО: Х (ЗЕО ІЮ МО: 19) 31) дельта 2
Глутаматний І28953 МО5ІРСМЗНЗЗОаМРІ САТОЦ АТаї (ЗЕО ІЮ МО: Х рецептор 1 ЗЕО ІЮ МО: 20 32
Глутаматний І 20814 ОМЕАТУКЕСУМУМСІЕБЗМУКІ |5УКІ (5ЕО ІО МО: Х рецептор 2 ЗЕО ІО МО: 21 З
Глутаматний ОММАТУВЕСУМУМИТЕБЗУКІ | БУКІ (ЗЕО ІО МО:
Глутаматний у16129 НТатАІВО55ИЇ АМІАБОЇ Р. | ЗОЇ Р (ЗЕО І МО: рецептор 4 ЗЕО ІЮ МО: 23 34
Глутаматний у16125 ЗЕТБІ"ТСНОВАТОВКЕТУМА |ЕТМА (5ЕО ІО МО: Х рецептор 5 ЗЕО ІО МО: 24 35
Глутаматний у16126 ЕМІММНТЕМОВАВІ РАОКЕТМА|ЕТМА (5ЕО Ір Х рецептор 6 ЗЕО ІЮ МО: 25 МО: 36
Пептиди можуть містити або можуть грунтуватися на Рі мотиві з С-кінця будь-якої з вищезгаданих субодиниць та мають амінокислотну послідовність, що містить (5/11-Х-(М/ |. Ця послідовність переважно зустрічається на С-кінці пептидів згідно з даним винаходом. Переважні пептиди мають амінокислотну послідовність, що містить (Е/О/М/О1-(5/1-(0/ЛЕ/С/МІ-ІМ/ЦІ (ЗЕО 10
МО: 38) на своєму С-кінці. Типові пептиди містять ЕБОМ (ЗЕО ІЮ МО: 12), ЕЗЕМ (ЗЕО ІЮ МО: 29),
ЕТОМ (ЗЕО ІО МО: 39), ЕТЕМ (5ЕО ІЮ МО: 40), ОТОМ (ЗЕО ІО МО: 41) та ОТЕМ (ЗЕО ІО МО: 42) у вигляді С-кінцевих амінокислот. Двома особливо переважними пептидами є КІ З5ІЕБОМ (5ЕО
ІО МО: 5) та КГ55ІЕЄТОМ (5ЕО ІО МО: 43). Такі пептиди, як правило, містять 3-25 амінокислот (без пептиду інтерналізації), пептиди довжиною 5-10 амінокислот та особливо 9 амінокислот (також без пептиду інтерналізації) є переважними. В деяких таких пептидах усі амінокислоти отримані з С-кінця ММОА-рецептора (не включаючи амінокислоти з пептиду інтерналізації).
Пептиди та пептидоміметики згідно з даним винаходом можуть містити модифіковані амінокислотні залишки, наприклад, залишки, які є М-алкільованими. М-кінцеві модифікації алкілом можуть містити, наприклад, М-метил, М-етил, М-пропіл, М-бутил, М-циклогексилметил,
М-циклогексилетил, М-бензил, М-фенілетил, М-фенілпропіл, М-(3,4-дихлорфеніл)-пропіл, М-(3,4- дифторфеніл)-пропіл та М-(нафтален-2-іл)-етил).
В Васи, У. Мед. Спет. 51, 6450-6459 (2008), та МО 2010/004003 описуються серії аналогів
МК2ВУс (5ЕБЕО ІО МО: 6). Активність зв'язування РОЛ демонструється пептидами, що мають тільки три С-кінцевих амінокислоти (ЗОМ). У Васпй також повідомляється про аналоги з амінокислотною послідовністю, що містить Хї5Х2М або складається з такої (5ЕО ІЮ МО: 68), при цьому Її та 5 являють собою альтернативні амінокислоти, Хі вибраний з Е, О та А або їх аналога, Х»2 вибраний з А, 0, 0, М, М-Ме-А, М-Ме-О, М-Ме-О і М-Ме-М або їх аналога.
Необов'язково пептид є М-алкільованим у положенні РЗ (третя амінокислота з С-кінця, тобто у положенні, яке займає 15). Пептид може бути М-алкільованим з циклогексаном або ароматичним замісником та додатково містить спейсерну групу між замісником та кінцевою аміногрупою пептиду або пептидного аналога, в якому спейсером є алкільна група, переважно вибрана з метилену, етилену, пропілену та бутилену. Ароматичним замісником може бути нафтален-2-ільний фрагмент або ароматичне кільце, заміщене однією або двома галогеновими та/або алкільними групами.
Також можуть бути включені інші модифікації без несприйнятливого впливу на активність, та вони передбачають заміну однієї або декількох амінокислот у природній І -ізомерній формі амінокислотами в О-ізомерній формі. Таким чином, будь-яка амінокислота, що зустрічається у природі в І-конфігурації (яку також можна назвати К або 5 в залежності від структури хімічного об'єкта) може бути замінена амінокислотою того самого типу хімічної структури або пептидоміметика, але протилежної хіральності, що зазвичай називають ЮО-амінокислотою, але яку, крім того, можна називати К- або 5-формою. Таким чином, пептидоміметик може містити 1, 2, 3, 4, 5, щонайменше 50 95 або усі ЮО-амінокислотні залишки. Пептидоміметик, що містить декілька або усі О залишки, іноді називають "інвертованим" пептидом.
Пептидоміметики також передбачають ретропептиди. Ретропептид має зворотну амінокислотну послідовність. Пептидоміметики також передбачають ретроінвертовані пептиди,
Зо у яких порядок амінокислот є протилежним таким чином, що первісно С-кінцева амінокислота знаходиться на М-кінці, а ЮО-амінокислоти застосовуються замість І-амінокислот. В УМО 2008/014917 описується ретроінвертований аналог Та-МКка2Вес з амінокислотною послідовністю мазеїіввік-птдпкКгауїп (ЗЕО І МО: 69) (строчні літери вказують на О-амінокислоти), та повідомляється, що він є ефективним у інгібуванні ішемії головного мозку. Іншим ефективним пептидом, що описується у даному документі, є Ку-Та-МВ2В9с (АВВОВАККАРИУКІ 551ЕОМ;
ЗЕО І МО: 70).
Лінкер, наприклад, поліетиленгліколевий лінкер, може бути використаний для димеризації активного фрагмента пептиду або пептидоміметика з метою посилення його афінності та селективності у відношенні білків, що містять тандемні домени РОЇ. Див., наприклад, Васі єї аІ,, (2009) Апдемж. Спет. Іпі. Ед. 48:9685-9689, та УМО 2010/004003. Пептид, що містить Рі. мотив, переважно є димеризованим шляхом з'єднання М-кінців двох таких молекул, при цьому
С-кінці залишаються вільними. В Васі, крім того, повідомляється, що пентамерний пептид
ІЕЗОМ (ЗЕО ІО МО: 71) з С-кінця ММОАК 2В був ефективним в інгібуванні зв'язування ММОАК 28 з РБО-95. ІЕТОМ (5БО 10 МО: 73) також можна використовувати замість ІЕБОМ.
Необов'язково, приблизно 2-10 копій РЕС може бути з'єднано у тандемі як лінкер.
Необов'язково, лінкер також може бути приєднаний до пептиду інтерналізації або ліпідований для посилення клітинного поглинання. Приклади типових димерних інгібіторів приведені нижче (див. Васі еї аІ., РМАЗ 109 (2012), 3317-3322). Будь-який з інгібіторів РЮ-95, що розкриваються у даному документі, може бути застосований замість І(ЕТОМ, та будь-який пептид інтерналізації або ліпідувальний фрагмент може бути застосований замість їаї Також можуть бути використані інші лінкери, окрім тих, що показані.
о о очах А Ще й ков ца р ще ; ре То ТАМ де те ЧЕМ росою ра г ї х ем
Мн ння 'нИщи - я тру
Сі. й М бите ТАМ в; 7 пити ЕТО /
І
І; Го.
Кднмев (Ж х Твікідимер В т КОВЕКНВКА деамев ЇХ М Бета иморі х СПЕ)
ІЕТАМ визначається в 5ЕО ІЮ МО: 26, УЗКККАКОМКК в 5ЕО ІО МО: 2, а ггагтКкКг в ЗЕО ІЮ
МО: 10, при цьому строчні літери вказують на О-амінокислоти.
Відповідна фармакологічна активність пептидів, пептидоміметиків або інших засобів при необхідності може бути підтверджена із застосуванням щурячих моделей інсульту, що описувалися раніше, перед тестуванням на приматі та клінічних іспитах, що описуються у даній заявці. Пептиди або пептидоміметики також можуть бути скриновані за здатністю інгібувати взаємодії між РЗЮО-95 та ММОАК 28 із застосуванням аналізів, що описуються, наприклад, у заявці на видання патенту США Мо 20050059597, яка включена за допомогою посилання.
Застосовні пептиди, як правило, характеризуються значеннями ІС5О менш ніж 50 мкМ, 25 мкМ, 10 мкм, 0,1 мкМ або 0,01 мкМ у такому аналізі. Переважні пептиди, як правило, характеризуються значеннями ІС5О 0,001-1 мкМ та більш переважно 0,001-0,05, 0,05-0,5 або 0,05-0,1 мкМ. Якщо пептид або іншій засіб характеризують як такий, що інгібує зв'язування однієї взаємодії, наприклад, взаємодії Р2Ю-95 з ММОАКЗВ, то такий опис не виключає того, що пептид або засіб також інгібує іншу взаємодію, наприклад, інгібування зв'язування РЗО-95 з
МОБ.
Пептиди, подібні тільки що описаним, необов'язково можуть бути дериватизовані (наприклад, ацетильовані, фосфорильовані, міристоїльовані, геранільовані, пегільовані та/або глікозильовані) для поліпшення афінності зв'язування інгібітору, для поліпшення здатності інгібітору транспортуватися через клітинну мембрану або для підвищення стабільності. Як конкретний приклад, для інгібіторів, у яких третій залишок з С-кінця являє собою 5 або Т, даний залишок може бути фосфорильований перед застосуванням пептиду.
Фармакологічний засіб може бути зв'язаний з пептидом інтерналізації для полегшення поглинання клітинами та/або проходження крізь гематоенцефалічний бар'єр. Пептиди інтерналізації складають добре відомий клас відносно коротких пептидів, які дозволяють багатьом клітинним або вірусним білкам перетинати мембрани. Пептиди інтерналізації, також відомі як пептиди трансдукції крізь клітинну мембрану або пептиди проникнення у клітину, можуть містити, наприклад, 5-30 амінокислот. Такі пептиди, як правило, мають катіонний заряд
Зо від вищезгаданої нормальної представленості (відносно білків у цілому) залишків аргініну та/або лізину, який, як вважають, полегшує їх проходження крізь мембрани. Деякі з таких пептидів містять щонайменше 5, 6, 7 або 8 залишків аргініну та/або лізину. Приклади включають білок
Апіеппаредіа (Вопіапії, Сапсег Нев. 57, 1442-6 (1997)) (та його варіанти), білок їаї вірусу імунодефіциту людини, білок МР22, продукт гена 0149 вірусу простого герпесу 1 типа, пенетратин, ЗупВІ та 3, транспортан, амфіпатичний, др41МІ 5, роїуАгу та деякі білкові токсини рослин та бактерій, такі як рицин, абрин, модесин, дифтерійний токсин, холерний токсин, сибіревиразковий токсин, термолабільні токсини та екзотоксин А Рхепдотопах5 аегидіпоза (ЕТА). Інші приклади описуються у наступних посиланнях: Тетзатапі, Огид Різсомегу Тодау, 9(23):1012-1019, 2004; Ое Соцмраде, Віоспет .)., 390:407-418, 2005; ЗааїїкК Віосопіддаїє Спет. 15: 1246-1253, 2004; 7Ннао, Медісіпа! Везеагсй Веміємв 24(1):1-12, 2004; ЮОезНнауєз, СеїйІшаг апа
МоїІесшаг І йе Зсієпсе5 62:1839-49, 2005); бао, АС5 Спет. Віої. 2011, 6, 484-491, 503 (ВІЗОММЕМІ 5ЕНМУ! (5ЕБО 10 МО:9)) еаійтапе Ріоб5 ОМЕ 2013, 8(8) е71752, 1-11 апа зирріетепі; Рідивігедо еї аїІ., ІШВМВ те 66, 182-194 (2014); Сороїйомісі еї аІ., АС5 Мапо, 8, 1972- 94 (2014); І иКапомувкі Віоїесі .). 8, 918-930 (2013); ЄосКмеїІ, Спет. Віо!. Огид Оез. 83, 507-520 (2014); єіап7і єї аі. Ассоипіз. Спет. Нез/ 46, 2944-2954 (2013); (усі включені за допомогою посилання).
Переважним пептидом інтерналізації є їаї з вірусу НІМ. Пептид їаї, описаний у попередній роботі, містить стандартну амінокислотну послідовність МОЗКЕККАВОВАА (5ЕО ІО МО: г), знайдену в білкові Таї НІМ, або складається з такої. Якщо присутні додаткові залишки, що фланкують такий мотив їаї (рядом з фармакологічним засобом), то такими залишками можуть бути, наприклад, натуральні амінокислоти, що фланкують цей сегмент від білка їаї, спейсерні або лінкерні амінокислоти, як правило, застосовувані для зв'язування двох пептидних доменів виду, наприклад, діу (5ег)« (ЗЕО ІЮ МО: 44), ТаЕКР (ЗЕО ІЮ МО: 45), СЯВННОСОЗ (5ЕО І МО: 46) або І КОКОСЕРР (ЗЕО ІЮ МО: 47) (див., наприклад, Тапод еї аї. (1996), у. Віої. Спет. 271, 15682-15686; Неппеске еї аї. (1998), Ргоїєїп Епа. 11, 405-410)), або можуть бути будь-які інші амінокислоти, що суттєво не знижують здатність забезпечувати поглинання варіанта без залишків, що фланкують. Переважно, число амінокислот, що фланкують, відмінних від таких активного пептиду, не перевищує десяти на будь-який стороні УЗЕККАКОРК (ЗЕО ІО МО: 2).
Одним прийнятним пептидом їаї, що містить додаткові амінокислотні залишки, що фланкують
С-кінець ХОКККАККОККА (ЗЕО ІО МО: 2), є МОКЕККАеКОКАККРО (5ЕБО ІЮ МО: 48). Однак, переважно, амінокислоти, що фланкують, відсутні. Інші пептиди їаї, які можуть бути використані, передбачають СОКККАЕКОРРЕРО (ЗЕО ІЮ МО: 4) та ЗЕККККОККЕР (5ЕО І МО: 72).
Варіанти вищезгаданого пептиду їаї що мають знижену здатність зв'язуватися з кальцієвими каналами М-типа, описуються в УМО 2008/109010. Такі варіанти можуть містити амінокислотну послідовність ХОКККАККОРКК (ЗЕО ІО МО: 49) або складатися з такої, в якій Х являє собою амінокислоту, відмінну від М, або відсутній (у цьому випадку б являє собою вільний М-кінцевий залишок). Переважний пептид їаї має М-кінцевий залишок У, заміщений Р.
Таким чином, переважним є пептид їаї, що містить ЕСЄЕККАКОКА (ЗЕО ІО МО: 3) або що складається з такої. Іншій переважний варіантний пептид їаї складається з ЗКККАКОККК (5ЕО
ІЮ МО: 1). Іншій переважний пептид їаї містить КККОКЕКККО або КККОКЕКККОУ (амінокислоти 1-10 або 1-11 з 5ЕО ІЮ МО: 70) або складається з таких. Інші отриманні з їаї пептиди, які полегшують поглинання фармакологічного засобу без інгібування кальцієвих каналів М-типа, передбачають такі, що представлені нижче. х-еЕаВККАВОВВВ (Е-Таю (ЗЕО І МО: 8) х-аккккКкОкКкКкК (5ЕО І МО: 50) х-ВККАВОВВВ (5ЕО ІО МО: 51) х-аАККАВОВВАВ (5ЕО ІО МО: 52) х-АККАВОВАВ (5ЕО ІО МО: 53) х-авкдАввВОВАвВ (5ЕО І МО: 54) х-ВКАВВОВВАВ (5ЕО ІО МО: 55) х-авкКкКАВОВВАВ (5ЕО ІЮ МО: 56) х-ВККАВОВАВ (5ЕО ІО МО: 57) х-авккВвВОАВВ (5ЕО ІЮ МО: 58) х-ВККАВОАВЕВ (5ЕО ІО МО: 59) х-авккАВОВАВ (5ЕО ІО МО: 60) х-АККАВОВАНВ (5ЕО ІЮ МО: 61) х-ВАРАВАВРАВРАВ (5ЕО І МО: 62) х-ВВАВВАВВАВВ (5ЕО ІО МО: 63) х-ВАВВАВВАВВАВЕВ (5ЕО ІО МО: 64) х-ВАВАРАВАРАВ (5ЕО ІО МО: 65) х-ВАРАВРВАВ (5ЕО ІО МО: 66) х-ВВАВВАВЕВ (5ЕО ІО МО: 67)
Х може представляти собою вільний амінокінець, одну або декілька амінокислот або кон'югований фрагмент. Пептиди інтерналізації можуть бути використані у інвертованій, або ретро-, або інвертованій ретроформі зі зв'язаним пептидом або пептидоміметиком, що
Зо знаходиться у такій формі, або без такого. Наприклад, переважний химерний пептид має амінокислотну послідовність, що містить УОКККККОКАКК-КІ З51Е5ОМ (5ЕБЕО ІО МО: 6, також відому як ТАТ-МК2В9с або Та-МК2вВ9с) або УСЕККАеКОККК-КІ З55ІЕТОМ (ЗЕО ІО МО: 7), або складається з такої. Інші переважні химерні пептиди відрізняються від 5ЕО ІЮ МО: 6 або МО: 7 не більш ніж 1, 2, 3, 4 або 5 амінокислотними замінами, делеціями або додаваннями (внутрішніми або на кінцях). Інші переважні пептиди передбачають КЕеЕКОКЕККККОУ-
КІ5БІЕБОМ (5ЕБО 10 МО: 70), також відому як КмУТа-МК2В9с, або мають амінокислотну послідовність, що містить КККОКККККОМ-КІ 55ІЕТОМ (5ЕБО ІЮО МО: 37) або складається з такої.
Пептиди інтерналізації можуть бути приєднані до фармакологічних засобів традиційними способами. Наприклад, засоби можуть бути з'єднані з пептидами інтерналізації хімічним зв'язком, наприклад, через з'єднувальний або кон'югувальний засіб. Багато таких засобів комерційно доступні та розглядаються в 5. 5. УУМопо, Спетівігу ої Ргоївіп Сопідайоп апа Стго55-
МпКіпо, СКС Ргез5 (1991). Деякі приклади зшивальних реагентів передбачають .)-сукцинімідил- 3-(2-піридилдитіо)- пропіонат (ЗРОР) або М, М'-(1,3-фенілен)-біс-малеїмід; М, М'-етилен-біс- (йодоацетамід) або іншій такий реагент з метиленовими місточками з 6-11 атомами вуглецю (які відносно специфічні для сульфгідрильних груп) та 1,5-дифтор-2,4-динітробензол (який утворює необоротні зв'язки з аміногрупами та тирозиновими групами). Інші зшивальні реагенти передбачають п, п'-дифтор-м, м'-динітродифенілсульфон (який утворює необоротні поперечні зв'язки з аміногрупами та фенольними групами); диметиладипімідат (який є специфічним для аміногруп); фенол-1,4-дисульфонілхлорид (який реагує переважно з аміногрупами); гексаметилендіїзоціанат або діїзотіоціанат або азофеніл-п-діїзоціанат (який реагує переважно з аміногрупами); глутаральдегід (який реагує з кількома різними боковими ланцюгами) та дисдіазобензидин (який реагує, головним чином, з тирозином та гістидином).
Для фармакологічних засобів, які є пептидами, приєднання до пептиду інтерналізації, може бути досягнуто шляхом створення білка злиття, що містить пептидну послідовність, злиту, переважно на своєму М-кінці, з пептидом інтерналізації.
Замість або на додаток до зв'язку пептиду (або іншого засобу), що інгібує РБЮО-95, з пептидом інтерналізації, такий пептид може бути зв'язаний з ліпідом (ліпідизація) для підвищення гідрофобності кон'югату у порівнянні з окремим пептидом та полегшення тим самим проходження зв'язаного пептиду крізь клітинні мембрани та/або крізь бар'єр головного мозку.
Ліпідизацію переважно виконують на М-кінцевій амінокислоті, але вона також може бути виконана на внутрішніх амінокислотах, за умови, що здатність пептиду інгібувати взаємодію між
РБО-95 та ММОАБЕ 28 не знижується більш ніж на 50 95. Переважно, ліпідизацію виконують на амінокислоті, відмінній від однієї з чотирьох крайніх С-кінцевих амінокислот. Ліпіди є органічними молекулами, більш розчинними в ефірі, ніж у воді, та включають жирні кислоти, гліцериди та стерини. Прийнятні форми ліпідизації передбачають міристоїлювання, пальмітоїлювання або приєднання інших жирних кислот, переважно з довжиною ланцюга 10-20 атомів вуглецю, таких як лауринова кислота та стеаринова кислота, а також геранілювання, геранілгеранілювання та ізопренілювання. Переважними є ліпідизації типа, що зустрічається при посттрансляційній модифікації природних білків. Ліпідизація жирною кислотою за
Зо допомогою утворення амідного зв'язку з альфа-аміногрупою М-кінцевої амінокислоти пептиду також є переважною. Ліпідизація може бути здійснена пептидним синтезом, що передбачає попередньо ліпідовану амінокислоту, може бути здійснена ферментативно іп мйго або шляхом рекомбінантної експресії, за допомогою хімічного зшивання або хімічної дериватизації пептиду.
Амінокислоти, модифіковані шляхом міристоїлювання та іншими ліпідними модифікаціями, є комерційно доступними.
Ліпідизація переважно полегшує проходження зв'язаного пептиду (наприклад, КГ. 551Е50М (ЗЕБЕО ІО МО: 5) або КІ55БІЕЄТОМ (ЗЕБЕО ІЮ МО: 43)) крізь клітинну мембрану та/або гематоенцефалічний бар'єр, не викликаючи тимчасового зниження кров'яного тиску, як це спостерігається при введенні стандартного пептиду їаї за високого дозування (наприклад, при З мг/кг або більше), або щонайменше з менш значним зниженням, ніж з тим самим пептидом, зв'язаним зі стандартним пептидом їаї.
Фармакологічні пептиди, необов'язково злиті з пептидами їаї, можуть бути синтезовані твердофазним синтезом або рекомбінантними способами. Пептидоміметики можуть бути синтезовані із застосуванням ряду процедур та методів, описаних в науковій та патентній літературі, наприклад, в Огдапіс Зупіпезе5 СоПесіїме Моїштевз, Сіїтап еї аї. (баз) дУопп УМіеу зЗопв, Іпс., МУ, аІ-ОбБеїді (1998) Мої. Віоїеснпої. 9:205-223; Ниибу (1997) Сит. Оріп. Спет. Віо). 1:114-119; Овіегдаага (1997) Мої. Оімегв. 3:17-27; Овіге5П (1996) Меїйодв Епгутої. 267:220-234.
ІП. Солі
Пептиди типа, що описується вище, як правило, отримують твердофазним синтезом.
Оскільки при твердофазному синтезі використовується трифторацетат (ТЕА) для видалення захисних груп або видалення пептидів зі смоли, пептиди, як правило, спочатку отримують у вигляді трифторацетатних солей. Трифторацетат може бути заміщений іншим аніоном, наприклад, шляхом зв'язування пептиду з твердою підкладкою, такою як колонка, промивання колонки для видалення наявного протиіїону, урівноваження колонки розчином, що містить новий протиіон, а потім елююванням пептиду, наприклад, за допомогою введення гідрофобного розчинника, такого як ацетонітрил, у колонку. Заміщення трифторацетату ацетатом може бути виконано ацетатним промиванням, як останньою стадією перед елююванням пептиду в іншому традиційному твердофазному синтезі. Заміщення трифторацетату або ацетату хлоридом може бути виконано промиванням амонію хлоридом з наступним елююванням. Застосування 60 гідрофобної підкладки є переважним, та препаративна обернено-фазна НРІС є особливо переважною для іонного обміну. Трифторацетат може бути заміщений хлоридом безпосередньо або спочатку може бути заміщений ацетатом, а потім ацетат заміщений хлоридом.
Протиїони, будь то трифторацетат, ацетат або хлорид, зв'язуються з позитивно зарядженими атомами в ТАТ-МК2В5с, зокрема, в М-кінцевій аміногрупі, а також в аргинінових та лізинових залишках бокових ланцюгів амінокислоти. Хоча здійснення даного винаходу не залежить від розуміння точної стехіометрії взаємодії пептиду з аніоном у солі ТАТ-МН2ВОс, вважають, що в молекулах приходиться до приблизно 9 протиіонів на молекулу солі.
Хоча заміщення одного протиїона іншим відбувається ефективно, чистота конечного протиїона може складати менш ніж 100 95. Таким чином, згадування хлоридної солі ТАТ-МН2ВОс або іншого активного засоби означає, що у препараті солі хлорид є аніоном, переважним за масою (або молями) над усіма іншими аніонами, що присутні в усій солі. Іншими словами, хлорид складає більш ніж 50 95 та переважно більш ніж 75 9», 95 Фо, 99 Фв, 99,5 95 або 99,9 95 за масою або молями усіх аніонів, що присутні в солі. В таких соли або складі, отриманому з солі, ацетат та трифторацетат у комбінації та окремо складають менш ніж 50 95, 25 Фо, 5 95, 0,5 У5 або 0,1 95 аніонів в солі або складі.
ІМ. Захворювання
Ліофілізовані склади застосовні у лікуванні ряду захворювань, зокрема, неврологічних захворювань, та особливо захворювань, опосередкованих частково ексайтотоксичністю. Такі захворювання та стани передбачають інсульт, епілепсію, гіпоксію, субарахноїдальний крововилив, травматичне пошкодження СМ5, не асоційоване з інсультом, таке як травматичне пошкодження головного мозку та пошкодження спинного мозку, інша ішемія головного мозку, хвороба Альцгеймера та хвороба Паркінсона. Інші неврологічні виліковні засобами згідно з даним винаходом захворювання, як відомо, не асоційовані з ексайтотоксичністю, передбачають тривожність та біль.
Інсульт є станом, що викликається порушенням кровотоку в СМ5 незалежно від причини.
Можливі причини передбачають емболію, крововилив та тромбоз. Деякі нейрональні клітини гинуть відразу у результаті порушення кровотоку. Ці клітини вивільняють свої складові молекули, у тому числі глутамат, який, у свою чергу, активує ММОА-рецептори, що підвищують
Зо рівні внутрішньоклітинного кальцію та внутрішньоклітинні рівні ферментів, що призводить до подальшої загибелі нейрональних клітин (каскад ексайтотоксичності). Загибель тканини СМ5 називають інфарктом. Об'єм інфаркту (тобто об'єм нейрональних клітин, що загинули у результаті інсульту у головному мозку) може бути застосований як показник ступеню патологічного пошкодження в результаті інсульту. Симптоматичний ефект залежить як від об'єму інфаркту, так і від того, в якій частині головного мозку він спостерігається. Індекс інвалідності може бути використаний як міра симптоматичного пошкодження, наприклад, шкала
Ренкіна оцінки наслідків хворих, що перенесли інсульт (КапкКіп, 5сої Мей ;2:200-15 (1957)), та індекс Бартела. Шкала Ренкіна грунтується на оцінюванні безпосередньо загальних станів хворого наступним чином: 0: відсутність симптомів; 1: відсутність суттєвого порушення життєдіяльності, незважаючи на наявність деяких симптомів; здатен виконувати усі повсякденні обов'язки; 2: легксе порушення життєдіяльності; не здатен виконувати усі дотеперішні обов'язки, але здатен обслуговувати себе без сторонньої допомоги;
З: помірне порушення життєдіяльності, що потребує деякої допомоги, однак здатен ходити без сторонньої допомоги; 4: порушення життєдіяльності від помірного до тяжкого; не здатен ходити без сторонньої допомоги та не здатен справлятися зі своїми фізичними потребами без сторонньої допомоги; 5: тяжке порушення життєдіяльності; прикутий до ліжка, нетримання сечі та кала, потребує постійної допомоги та догляду персоналу.
Індекс Бартела грунтується на серіях запитані про здатності хворого виконувати 10 основних повсякденних дій з надавання балу від 0 до 100, при цьому більш низькій бал вказує на більше порушення життєдіяльності (Мапопеу єї а!Ї, Магуїапа 5іаїеє Медіса! доштаї! 14:56-61 (1965)).
Як альтернатива, тяжкість/наслідки інсульту можуть бути виміряні із застосуванням шкали інсульту МІН, доступної у всесвітній сітці Інтернет на піпавз.піп.дом/досіог5/МІН БігоКе зЗсаІе9ВоокКіеї. раї.
Шкала грунтується на здатності хворого виконувати 11 груп функцій, що передбачає оцінювання у хворого рівня свідомості, рухових, сенсорних та язикових функцій. 60 Ішемічний інсульт, більш конкретно, відноситься до типу інсульту, який викликається затиканням кровотоку до головного мозку. Основною умовою для цього типа затикання найчастіше є розвиток жирових відкладень, що вистеляють стінки судин. Цей стан називають атеросклерозом. Такі жирові відкладення можуть викликати два типа обструкції. Церебральний тромбоз відноситься до тромбу (кров'яного згустку), який розвивається у заткнутій частині судини. "Церебральна емболія" відноситься в цілому до кров'яного згустку, який формується в іншому місці серцево-судинної системи, як правило, у серці та великих артеріях верхньої частини грудної клітини і шиї. Потім частина кров'яного згустку відривається, потрапляє у кров та проходить по кровоносним судинам головного мозку, доки не досягає судин, занадто дрібних, щоб його пропустить. Другою важливою причиною емболії є нерегулярне серцебиття, відоме як артеріальна фібриляція. Це створює умови, при яких згустки можуть утворюватися у серці, переміщуватися та доходити до головного мозку. Додатковими потенційними причинами ішемічного інсульту є крововилив, тромбоз, розсікання артерії або вени, зупинка серця, шок будь-якої етіології у тому числі крововилив, та ятрогенні причини, такі як безпосереднє хірургічне пошкодження кровоносних судин головного мозку або судин, що ведуть до головного мозку, або хірургічне втручання на серці. На ішемічний інсульт приходиться приблизно 83 відсотка усіх випадків інсульту.
Транзиторні ішемічні приступи (ТІА) є незначними або провісними інсультами. При ТІА присутні стани, що вказують на ішемічний інсульт, та розвиваються типові ознаки, що передвіщають інсульт. Однак затикання (кров'яний згусток) виникає протягом короткого періоду часу та має тенденцію розчинятися за допомогою нормальних механізмів. Хворі, піддані хірургічному втручанню на серці, особливо схильні до ризику транзиторного церебрального ішемічного приступу.
Геморагічний інсульт становить приблизно 17 відсотків випадків інсульту. Він виникає в результаті ослабленої судини, яка розривається та кровоточить у навколишній головний мозок.
Кров накопичується та стискає навколишні тканини головного мозку. Двома основними типами геморагічних інсультів є внутрішньомозковий крововилив та субарахноїдальний крововилив.
Геморагічний інсульт виникає через руйнування послабленої кровоносної судини. Потенційні причини розривання послабленої кровоносної судини передбачають гіпертонічний крововилив, при якому високий кров'яний тиск викликає розривання кровоносної судини, або іншу основну
Зо причину послабленої кровоносної судини, таку як мальформація головного мозку, що руйнує судини, у тому числі аневризма головного мозку, артеріовенозна мальформація (АММ) або кавернозна мальформація. Геморагічні інсульти також можуть бути результатом геморагічної трансформації ішемічного інсульту, що послабляє кровоносні судини при інфаркті, або крововиливу з первинних або метастатичних пухлин в СМ5, які містять патологічно слабкі кровоносні судини. Геморагічний інсульт також може виникати з ятрогенних причин, таких як пряме хірургічне втручання на кровоносних судинах головного мозку. Аневризма є балонуванням послабленої ділянки кровоносної судини. Якщо її не лікувати, аневризма буде продовжувати слабнути до розриву та крововиливу у головний мозок. Артеріовенозна мальформація (АММ) являє собою скупчення аномально сформованих кровоносних судин.
Кавернозна мальформація являє собою венозну патологію, яка може викликати крововилив з послаблених венозних структур. Будь-яка з таких судин може розірватися, що також викликає кровотечу у головний мозок. Геморагічний інсульт також може виникати у результаті фізичної травми. Геморагічний інсульт в одній частині головного мозку може призвести до ішемічного інсульту в іншій через нестачу крови, втраченої при геморагічному інсульті.
Один клас хворих, що підлягають лікуванню, складають хворі, піддані хірургічній процедурі, яка порушує або може порушувати кровоносну судину, що живить головний мозок, або іншу у головному мозку або СМ5. Деякі приклади передбачають хворих, підданих серцево-легеневому шунтуванню, стентуванню сонної артерії, діагностичній ангіографії головного мозку або коронарних артерій аортальної дуги, процедурам судинної хірургії та нейрохірургічним процедурам. Додаткові приклади таких хворих обговорюються у приведеному вище розділі ІМ.
Особливо підходять хворі з аневризмою головного мозку. Таких хворих можна лікувати за допомогою ряду хірургічних процедур, що передбачають кліпірування аневризми для припинення крові або виконання ендоваскулярного хірургічного втручання для блокування аневризми невеликими спіралями або введенням стента у кровоносну судину, у якій виникає аневризма, або введенням мікрокатетера. Ендоваскулярні процедури є менш інвазивними, ніж кліпірування аневризми, та асоціюються з кращим наслідком для хворого, але наслідок все ще передбачає виникання невеликих інфарктів. Таких хворих можна лікувати інгібітором взаємодії
РБО-95 з ММОАК 2В та, зокрема, засобами, що описуються вище, у тому числі пептидом
УСКККАКОККАКІ 55ІЕБОМ (5БО ІЮО МО: 6, також відомим як Таг-МК2ВОс). Часові рамки бо введення відносно здійснюваного хірургічного втручання можуть бути такими, як описуються вище для клінічного випробування.
Іншій клас хворих, що підлягають лікуванню, складають хворі, що страждають на субарахноїдальний крововилив з аневризмою або без такої (див. ММО2013088382).
ІМ. Ефективні режими введення
Після відновлення ліофілізований склад вводять так, що активний засіб (наприклад,
МК2В9с) вводиться у кількості, при частоті та шляху введення, ефективних для виліковування, зниження або інгібування подальшого погіршення щонайменше однієї ознаки або симптому захворювання у хворого, що страждає на захворювання, що підлягає лікуванню. Терапевтично ефективна кількість означає кількість активного засобу, достатню в значній мірі для виліковування, зниження або інгібування подальшого погіршення щонайменше однієї ознаки або симптому захворювання або стану, що підлягає лікуванню, у групи хворих (або тваринних моделей), що страждають на захворювання, яке лікують засобом згідно з даним винаходом, у порівнянні з ураженням у контрольної групи хворих (або тваринних моделей), що страждають на це захворювання або стан, які не отримують лікування даним засобом. Кількість також вважається терапевтично ефективною, якщо хворий, що отримує індивідуальне лікування, досягає більш ніж сприятливий наслідок, ніж середній наслідок у контрольній групі порівнюваних хворих, які не отримують лікування способами згідно з даним винаходом. Терапевтично ефективний режим передбачає введення терапевтично ефективної дози при частоті та шляху введення, необхідних для досягнення поставленої мети.
Для хворих, що страждають на інсульт або іншій ішемічний стан, активний засіб вводять при режимі, що передбачає кількість, частоту та шлях введення, ефективні для зниження пошкоджувальних впливів інсульту або іншого ішемічного стану. Якщо станом, що потребує лікування, є інсульт, то наслідок може бути визначений за об'ємом інфаркту або індексом інвалідності а дозування вважають терапевтично ефективним, якщо хворий, що отримує індивідуальне лікування, показує непрацездатність у два бали або менше за шкалою Рознкина та 75 або більше за шкалою Бартела, або якщо група хворих, що отримують лікування, показують суттєво поліпшене (тобто менше порушення життєдіяльності) розподілення балів за шкалою порушення життєдіяльності, ніж порівнювальна група, що не отримує лікування, див. І еез еї аї
І, М Епо! У Мей 2006; 354:588-600. Однієї дози засобу, як правило, достатньо для лікування
Зо інсульту.
Даний винахід також відноситься до способів та складів для профілактики розладу у суб'єкта з ризиком даного розладу. Як правило, такий суб'єкт характеризується підвищеною вірогідністю розвитку розладу (наприклад, стану, хвороби, розладу або захворювання) у порівнянні з контрольною групою. Контрольна група, наприклад, може містити одного або декількох індивідуумів, довільно вибраних з загальної групи (наприклад, підібраної за віком, статтю, расовою та/або етнічною приналежністю), у яких даний розлад не був діагностований або не спостерігався у сімейному анамнезі. Суб'єкта можна вважати схильним до ризику розладу, якщо виявляють, що "фактор ризику", асоційований з даним розладом, асоціюється 3 даним суб'єктом. Фактор ризику може передбачати будь-яку активність, ознаку, подію або властивість, асоційовані з даним розладом, наприклад, за допомогою статистичних або епідеміологічних досліджень на групі суб'єктів. Суб'єкт, таким чином, може бути класифікований як схильний до ризику розладу, навіть якщо дослідження, що ідентифікує основні фактори ризику, не передбачають суб'єкта конкретно. Наприклад, суб'єкт, підданий хірургічному втручанню на серці, схильний до ризику транзиторного церебрального ішемічного приступу, оскільки частота транзиторного церебрального ішемічного приступу підвищується у групі суб'єктів, підданих хірургічному втручанню на серці, у порівнянні з групою суб'єктів, що не піддавалися такому.
Інші широко поширені фактори ризику інсульту передбачають вік, сімейний анамнез, стать, число попередніх випадків інсульту, транзиторний ішемічний приступ або серцевий приступ, високий тиск крові, паління, діабет, захворювання сонної або інших артерій, фібриляцію передсердя, інші захворювання серця, такі як хвороба серця, серцева недостатність, дилятаційна кардіоміопатія, захворювання серцевого клапана та/(або уроджена вада серця; високий вміст холестерину у крові та харчування з високим вмістом насиченого жиру, трансжиру або холестерину.
При профілактиці ліофілізований склад після відновлення вводять хворому, який схильний до ризику захворювання, але ще не страждає на захворювання, при кількості, частоті та шляху, достатніх для попередження, затримання або інігібування розвитку щонайменше однієї ознаки або симптому захворювання. Профілактично ефективна кількість означає кількість засобу, достатню в значній мірі для попередження, інігібування або затримання щонайменше однієї ознаки або симптому захворювання у групі хворих (або тваринних моделей), схильних до ризику 60 на захворювання, яке лікують даним засобом, у порівнянні з контрольною групою схильних до ризику на захворювання хворих (або тваринних моделей), які отримували лікування химерним засобом згідно з даним винаходом. Кількість також вважають профілактично ефективною, якщо хворий, що отримує індивідуальне лікування, досягає наслідку, більш ніж сприйнятливого, ніж середній наслідок в контрольній групі порівнювальних хворих, що не отримували лікування способами згідно з даним винаходом. Профілактично ефективний режим передбачає введення профілактично ефективної дози при частоті та шляху введення, необхідних для досягнення поставленої мети. Для профілактики інсульту у хворого, схильного до ризику інсульту, що насувається (наприклад, у хворого, підданого хірургічному втручанню на серці), однієї дози засобу, як правило, достатньо.
В залежності від засобу введення може бути парентеральним, внутрішньовенним, назальним, пероральним, підшкірним, внутрішньоартеріальним, внутрішньочерепним, інтратекальним, внутрішньочеревним, місцевим, інтраназальним або внутрішньом'язовим.
Внутрішньовенне введення є переважним для пептидних засобів.
Для введення людям переважна доза активного засобу (наприклад, Та-МК2В9с) складає 2-
З мг/кг та більш переважно 2,6 мг/кг. Зазначені дозування слід розуміти як такі, що включають межу погрішності, характерну для точності, з якою дозування можуть бути виміряні у типових умовах стаціонару. Такі кількості відносяться до введення однією дозою, тобто однією дозою на приступ хвороби.
Активні засоби, такі як Таї-МК2Во9с, переважно доставляють шляхом інфузії у кровоносну судину, більш переважно шляхом внутрішньовенної інфузії. Час інфузії може впливати як на побічні ефекти (наприклад, через дегрануляцію огрядних клітин та вивільнення гістаміну), так і на ефективність. Як правило, для даного рівня дозування більш короткий час інфузії, ймовірніше, приведе до вивільнення гістаміну. Однак більш короткий час інфузії також може забезпечити поліпшену ефективність. Хоча здійснення даного винаходу не залежить від розуміння механізму, останній результат можна пояснити як затримкою, що є суттєвою, у відношенні розвитку патології у хворого, так і затримкою, що є суттєвою, у відношенні періоду напіввиведення з плазми химерного засобу, у результаті чого химерний засіб не досягає оптимального терапевтичного рівня. Для химерного засобу ТаЇї-МК2В9с переважний час інфузії, що забезпечує баланс між даними причинами, складає 5-15 хвилин та більш переважно 10
Зо хвилин. Зазначені часові проміжки слід розуміти як такі, що включають погрішність ж/- 10 95.
Часові проміжки інфузії не передбачають додатковий час для виведення дифузії з метою виведення будь-яких невеликих кількостей, що залишилися, від початкової дифузії, яка іншим чином протікала до кінця. Часові проміжки для інфузії ТамМмк2ВоОУс також можуть служить нормою для інших активних засобів.
Хоча даний винахід описано докладно для ясності розуміння, можуть бути здійснені деякі модифікації у межах об'єму доданої формули винаходу. Усі публікації, номера доступу та патентні документи, що цитуються у даній заявці, тим самим включені шляхом посилання в усій своїй повноті для усіх цілей у тому самому ступені, як якщо б кожний був зазначений індивідуально. В тих випадках, коли більш ніж одна послідовність асоціюється з номером доступу у різні моменти часу, мається на увазі, що послідовності зв'язані з даним номером доступу станом на дійсну дату подання даної заявки. Дійсною датою подання вважають дату самого раннього пріоритету заявки, яка розкриває номер доступу, що становить інтерес. Якщо контекст не вимагає іншого будь-які елемент, варіант здійснення, стадія, ознака або аспект даного винаходу можуть бути здійснені в поєднанні з будь-якими іншими.
Приклади
В прикладах 1-7 показано, що ацетатна сіль ТАТ-МК2ВОс може бути складена у ліофілізованій формі з гістидином та трегалозою. У прикладі 9 показано, що хлоридна сіль ТАТ-
МА2ВУсС забезпечує значно більшу стабільність, ніж ацетатна сіль в іншому аналогічному ліофілізованому складі. У прикладі 8 показано, що хлоридна сіль ТАТ-МК2ВОс, складена у гістидині та трегалозі, також забезпечує поліпшену стабільність у порівнянні з раніше описаним ліофілізованим складом ТАТ-МК2ВОс з нормального сольового розчину.
Приклад 1. Демонстрація того, що стандартні буфери та допоміжні засоби не впливають на ефективність ТАТ-МН2ВОс іп мімо
Складали п'ять рідких токсикологічних складів, орієнтованих на концентрацію 20 мг/мл ТАТ-
МАК2В9с. Таблиця 1 включає композицію середовища, номер партії, а також ефективність, чистоту та рН на момент складання. Приблизно 5 мл кожного складу розливали по флаконам для тестування. Флакони заморожували при -20 "С для імітації умов транспортування або зберігання у рідкому стані.
Таблиця 1
Композиція складів ТАТ-МК2ВОс для тестування ефективності іп мімо . Ме партії | Ефективність" | Чистота: (95 площі з
Мо складу | Композиція середовища РТек (мг/мл) піка МА-1 рн 50 мМ натрію фосфат, 76,9 44 1 мМ масі, рн 7,0 1205-1-17-1 20,5 97,87 6,7 50 мМ натрію фосфат, 154 44 2 2 ММ маніт, рН 7,0 1205-1-17-2 20,0 96,34. 6,5 50 мМ гістидин, 154 мМ 445. маніт, рН 6,5 1205-1-17-3 19,9 98,38 6,4 50 мМ гістидин, 154 мМ 44 трегалоза, рН 65 1205-1-17-4 20,8 99,16 6,4 50 мМ гістидин, 5 95 440 декстран-40, рН 6,5 1205-1-18-1 19,4 98,81 6,4 "Ефективність та чистоту оцінювали за допомогою ЕР-НРІ С аналізу із застосуванням способу ТЕА. 2гЧистота складу Мо 2 помітно нижче, ніж у інших складів. зрН фосфатно-буферних складів помітно відрізняється від начального рН буфера 7,0.
Було відмічено, що фосфатно-буферний склад не підтримує рН, також як гістидинові буфери, від складання до тестування, що вказує на то, що гістидин може бути чудовим буфером для складу.
Склади МоМо 1-5 тестували на моделі інсульту 3-РІАЇ Мев55є! Оссіизіоп5 (ЗРМО) у щурів.
Щурам, підданим інсульту, давали один зі складів шляхом внутрішньовенного введення в стегнову вену, а потім тварин вбивали через 24 години після інсульту. Збирали головний мозок, фіксували та фарбували трифенілтетразолію хлоридом (ТТ) для візуалізації ішемічних частин головного мозку. Усі тестовані склади могли забезпечувати значну нейропротекцію у тварин у порівнянні з контролем у вигляді тільки сольового розчину (фіг. 1).
Способи
Модель ішемії з оклюзією трьох піальних судин
Експерименти виконували на щурах. Тривалу оклюзію трьох піальних судин (ЗРМО) здійснювали, як описувалося раніше (Апдіодепіс ргоїесіоп їот осаї ізспетіа м/йй апдіоїепвіп ІЇ їуре 1 гесеріог ріосКаде іп Ше гаї. Рогаег еї аі,, Ат У РНузіої Неап Сігс РНувіої. 2005 Арі; 288(4):Н1989-96). Коротко, щурів масою від 250 г до 350 г анестезували внутрішньом'язовою ін'єкцією 0,5 мл/кг кетаміну (100 мг/кг), ацепромазину (2 мг/кг) та ксилазину (5 мг/кг), доповненою однією третьою від початкової дози за потреби. Тваринам встановлювали анальний термометр та поміщали їх на грілку, яку підтримували при приблизно 37 "С. Череп розкривали шляхом серединного розрізу та очищали від тканини. Із застосуванням препарувальної лупи та пневматичної бормашини проробляли у черепі 6-8-мм віконце над правою соматосенсорною корою (2 мм каудально та 5 мм латерально по відношенню до брегми) шляхом висвердлювання прямокутника у черепі та витягання шматочка черепа, залишаючи тверду мозкову оболонку непошкодженою. Відгалуження З піальних середніх мозкових артерій артеріольної системи каутеризували навколо колончастого кору, вибирали та електрично каутеризовали крізь тверду мозкову оболонку. Після каутеризацій скальп зашивали. Кожного щура повертали до його індивідуальної клітки під нагрівальною лампою для підтримування температури тіла до повного відновлення щура. Подавали корм та воду. Через одну годину після ішемії ЗРМО щурам
Зо вводили ін'єкцію зі складами МА-1 при З нмоль/г в «0,45 мл сольового розчину з розрахунку на масу щура. Дози вводили протягом 5 хвилин.
Через двадцять чотири години після хірургічного втручання головний мозок швидко збирали.
Брали коронарні зрізи (2 мм) через головний мозок та інкубували в 2 95 трифенілтетразолію хлориді (ТТС) (Бідта-Аїйгісн 5 оці МО) протягом 15 хвилин при 37 "С. Зображення сканували (Сапобсап 4200Е Сапоп) та оцінювали кількісно.
Приклад 2. Визначення стабільності ТАТ-МК2В9с в різних буферах та при різних значеннях рн
Скринінг буферів
Десять буферів складали при 1 мг/мл ТАТ-МК2Вос для скринінгу допоміжних засобів. Зразки зберігали при 25 "С/60 95 відносної вологості (КН) та 40 "С/7595 КН. Зразки тестували на предмет стабільності (чистоти) при ї-0, а при 1-1 тиждень на предмет чистоти за допомогою
ВР-НР'ГС (способів ТЕА та М5А), результати показані в таблицях 2 та 3.
Результати вказують на поліпшену стабільність для ТАТ-МК2ВОс в рідкому середовищі, буферизованому від рН 6,0 до рН 6,5. Розщеплення, очевидно, посилюється за межами цього діапазону у будь-якому напрямку. Дані, отримані способом М5А, що демонструють чіткі патерни розщеплення, залежали як від рН, так і від буферних компонентів, та забезпечили цінну інформацію для розробки майбутнього складу. Результати для основного піка чистоти за 95 площі НРІ С із застосуванням способу МЗА представлені в таблиці 2, тоді як результати для основного піка чистоти за 95 площі НРІ С із застосуванням способу ТЕА представлені в таблиці
З.
Таблиця 2
Фо площі основного піка чистоти за способом М5А, ТАТ-МН2ВОс
Рпоб,7,0 | 77777717 985.ЮЙ М | щк .979.юЮюЮ..КА ї..юЙИ. 960 щ
Таблиця З
Фо площі основного піка чистоти за способом ТЕА, ТАТ-МН2ВОУс сво 77777777/71777717171717117995... | .ЮюЮюЮюЮЙмх990..ю.Юю..ю.17.юЮ717171711982 2
Результати вказують на те, що стабільність розчину ТАТ-МН2ВОс найкраще підтримується у буферному середовищі з рН 6,0-6,5, та при цьому середовище добре стерпне при ІМ введенні.
Як правило, буферні системи гістидину та цитрату могли підтримувати ТАТ-КМК2ВОс в інтактній формі, навіть при зберіганні в умовах прискорених іспитів стабільності при 25 "С або 407 протягом 1 тижня.
Існує декілька факторів, які слід враховувати при виборі буферних компонентів: специфічні патерни розщеплення, які спостерігаються у кожному середовищі, та будь-які дані про ідентифіковані супутні домішки або токсикологічну настороженість можуть спростити процес прийняття рішень, якщо уникати зазначених супутніх домішок. За період тестування буфери з гістидином та цитратом з рН від б до 6,5 демонстрували незначну кількість продуктів розщеплення. Буфер з гістидином окремо, застосовний у даному дослідженні, містив домішку, яка була присутня у гістидиновому буфері при відсутності доданого ТАТ-МК2В9с. Таким чином, пошук постачальника гістидину без такої домішки спростив би аналіз. В таблиці 4 представлений короткий опис буферних компонентів з точки зору стабільності ТАТ-МА2В9с.
Таблиця 4
Вибір буферних компонентів
Відмінна стабільність, традиційне Хроматографічна інтерференція,
Гістидин використання у застосуваннях але хроматографія, можливо, була ліофілізації, добре себе проявляє в би краще з новим постачальником буферному діапазоні гістидин використання у застосуваннях
Цитрат пу ліофілізації, добре себе проявляє в буферному діапазоні
Ше Я - використання у застосуваннях але хроматографія, можливо, була
Гістидин бі ліофілізації, добре себе проявляє в би краще з новим постачальником буферному діапазоні гістидину
СД В С використання у застосуваннях межі ідеального буферного
Цитрат бі . ліофілізації, добре себе проявляє в діапазону для цитратних буферному діапазоні компонентів
Поліпшена стабільність, традиційне Історично уникали фосфатних
Фосфат 6,5 | використання фосфатних компонентів | компонентів для ліофілізованих в складах МА-1 складів
Приклад 3. Визначення стабільності ТАТ-МК2ВОс в гістидинових та цитратних буферах, а також при різних значеннях рН з кількостями натрію хлориду, що варіюють
Мета даного дослідження полягала у демонстрації ефектів натрію хлориду (масі) на рН та стабільність ТАТ-МК2В9с у рідких складах. Буферні склади з 1 мг/мл ТАТ-МК2В9с приведені в таблиці 5, а результати по рН представлені в таблиці 6. Дані показують достатньо стабільні результати протягом дослідження. Однак помітні зміни спостерігалися у цитраті з додаванням масі, у якому була порушена буферна здатність, та рН падало на -- 0,2 одиниці. Вибрані рН 6,0 та 6,5 потрапляють у верхню межу ідеального буферного діапазону для цитрату (рН 2,5-5,6) так, що можуть спричиняти ускладнення з різними добавками у ході процесу складання та мають враховуватися при оцінюванні стійкості складу.
Таблиця 5
Буферні склади для перевірки ефекту солі на рн 21111111 5б0мМЦитрат// | 60 немаєданих/ЗО 771772 | 5бмМЦитрат/// | -/|( (60 1777777 200мММшШ 7771775... | 5бмМГістидин// | 60 немаєданих/З 7771776 | 5бмМгстидин/// | -: 60777717 200мММшШЩ 77171768. | 5бмМгістидин// | -:( 65 | - 200мММ
Таблиця 6
Стабільність рН складів ТАТ-МК2ВОс при заморожуванні та в умовах прискорених іспитів
Мо Цільове Виміряне рн, Виміряне рн, Виміряне рН, середо- Буфер Н 1-0, І-0, 1-1 тиждень, вища р середовище середовище я МА-1 середовище ж МА-1 11111111 сРос 40 сло ВН 60 ЇЇ 61 | 60 2 5БюкмЙз | бі 1 (60 г Ф ( нн""'нЬЬНЬШКИООЗИИЬООВИВВМНКОІ ІІТ 60 | щв60 | щМх5Б | 62 | 60 нн"н"ШН6"И ЕИЛЛООВОЛЛОІЬЛМІИВВОВОЛОЛОЛОЬИОООЗООВОВИВОВОЛВВЛВВЛВЛВЛТЛТОВОВОВОВОТЛИОТИТИТИЦИТИТМВИВЦИУМЦИІТЛОТЛОТИТИОТИТИТИ 60 | ющющ5Бв | (58 | 59| 58 нн"нШШ;ІНІОВОЛЗІТОЬИСТЬТЬТНТЬНШЬЬНТШЬИИНННККНИНИОТИООТТ 60 ЇЇ 61 | 60 | 62 | 60
Результати вказують на те, що додавання 200 мМ Масі у забуферені гістидином та цитратом розчини ТАТ-МК2ВОс суттєво не впливає на рН розчинів ні при зберіганні протягом тижня при заморожуванні, ні при температурних умовах прискорених іспитів 40 "с.
Далі перевіряли стабільність ТАТ-МК2ВОс в даних складах при зберіганні протягом 1 тижня при заморожуванні та температурних умовах прискорених іспитів. В таблиці 7 показані результати тестування із застосуванням способу КР-НРІС з градієнтом М5А. Дані також представлені на фіг. 2А та 2В. На фіг. 2А представлена стабільність в умовах прискорених іспитів складів, відсортовані зліва направо (від низької до високої стабільності). На фіг. 28 показана відносна стабільність в умовах прискорених іспитів з буферним засобом.
Таблиця 7
Чистота (спосіб М5ЗА), ТАТ-МН2ВОс
Середовище рн во реловил ів 77/19 Ї771717117928.777 17171711 9865 6юЮЖщ Зм | 9682 щ
Нів-масі
С 7/7177771717117975 2 | щ(я3607777771717171711109950 |. 975 РР
Сіт-масі
Дані результати вказують на те, що стабільність розчину ТАТ-МК2ВОс найкращим чином підтримується при рН 6,5, та додавання МасСі може забезпечувати невелике поліпшення стабільності (фіг. 2А та 28). Завдяки поліпшеній буферній здатності та порівнянній стабільності гістидинового буфера, особливо якщо домішка, що переміщається з відносним часом утримування (ККТ) 0,28, виключається (ділянка домішки, включена до приведеної вище таблиці, що призводить до більш ніж низького значення стабільності для площі піка Таї-
МК2В9с), гістидинові буферні компоненти при рН 6,5 представляють найкращий склад для переходу до досліджень ліофілізації.
Середовища при рн 6,5 є добре стерпними при ІМ введенні.
Приклад 4. Відбір об'ємоутворювальних засобів для ТАТ-МК2ВОс з метою формування стабільного ліофілізованого осаду
Для ідентифікації об'ємоутворювальних засобів, які забезпечували б гарний осад при ліофілізації та поліпшену стабільність, складали декілька розчинів з 20 мг/мл ТАТ-МК2В9с в 50
ММ гістидиновому буфері, об'ємоутворювальному засобі та Масі, як зазначено в таблиці 8. Для імітації часу та температур маніпуляцій, яким можуть піддаватися склади ТАТ-МК2ВОс у ході процесу ліофілізації, данні зразки зберігали при -20 "С (контроль) і 40 "С/75 95 КН (тест) та аналізували після одного тижня зберігання на предмет чистоти за допомогою НРІС (способу
М5А) та рН. Результати, що представляють стабільність рн, показані в таблиці 9, а результати стабільності ТАТ-МК2ВОс в різних рідких складах показані в таблиці 10 та на фіг. 3.
Таблиця 8
Матриця зразка об'ємоутворювального засобу
Ме середовища Буфер Об'ємоутворювальний засіб 50 мМ гістидин, рН 6,5 120 мМ маніт ши 50 ММ гістидин, рН 6,5 120 мМ маніт 50 мМ гістидин, рн 6,5 120 мМ трегалоза ши 50 мМ гістидин, рн 6,5 120 мМ трегалоза 50 мМ гістидин, рн 6,5 5 95 декстран-40 ши 7771176 | 50мМегістидин, рНнб5 5 95 декстран-40
Таблиця 9 рН, зразки об'ємоутворювального засобу
Середовище рН, -207с рН, 402с
Маніт я масі
Трегалоза я Масі
Декстран-40
Декстран-40--Масі
Таблиця 10
Чистота за 95 площі піка ТАТ-МК2В9с, спосіб МБА
Ме середовища Середовище З5 площі піка МАТ 7 бередовил реловил
Маніт я масі
Трегалоза я Масі 1.6 |Декстран-404Масі 111890... | ..ЮюЮюЮр.97и
Результати рідких складів об'ємоутворювального засобу у відношенні стабільності ТАТ-
МА2гВУс
Маніт, трегалоза та декстран-40 добре підтримують рН при 6,5 (таблиця 9), та спостерігається приблизно 1 95 зниження чистоти (таблиця 10) за 1 тиждень при зберіганні рідкого складу при високій температурі. З точки зору хімічної стабільності ліофілізованого розчину ТаЇ-МК2Вос для заповнення маніт та трегалоза є переважними об'ємоутворювальними засобами, оскільки вони забезпечують кращу стабільність для ТАТ-МА2ВОс, ніж розчини декстрану-40 (фіг. 3).
Приклад 5. Термічний аналіз об'ємоутворювальних засобів для полегшення розробки циклів ліофілізації
В рамках розробки циклів ліофілізації для ліофілізованого лікарського продукту ТАТ-МВ2ВОс запропоновані розчини для заповнення з матриці зразків об'ємоутворювального засобу (таблиця 8) оцінювали за допомогою диференціальної сканувальної калориметрії (0552) за термічними характеристиками, у тому числі за склуванням (79) у складі. Результати приведені в таблиці 11, а сліди О5С включені до фіг. 4А-68В.
Таблиця 11
Склування розчинів для заповнення ТАТ-МК2ВОс, що ліофілізують
При концентрації ТАТ-МК2ВОс 20 мг/мл тестовані склади ТАТ-МК2ВОс демонстрували термічний профіль, що характеризується широким явищем плавлення з початком при низькій температурі. Таке розширене плавлення маскується явищем кристалізації, що, як правило, спостерігається у складах з манітом, та може вказувати на те, що має бути виконаний жорсткий цикл сушіння заморожуванням, якщо продукт ніколи не перевищує температуру склування. У цьому випадку, на підставі спостережуваних склувань розчину для заповнення лікарського продукту Та-МКк2ВОУс застосування маніту як об'ємоутворювального засобу потребує температури первинного сушіння нижче -40 "С, типової межі можливості для масштабовуваного циклу. З точки зору термічних профілей трегалоза та декстран-40 відмінно підходять для застосування як об'ємоутворювального засобу. Однак, з врахуванням того, що стабільність
ТАТ-КМК2ВОс в рідких складах, що містять трегалозу, перевищувала таку у складах, що містять декстран, трегалоза була б переважним об'ємоутворювальним засобом із тестованих.
Через відносно низькі температури То, які, ймовірно, будуть потрібними для більш ніж тривалого циклу ліофілізації для сушіння, розглядали більш широкий діапазон стандартних об'ємоутворювальних засобів та слідкували за зниженням об'єму заповнення у системі контейнер/закупорка так, щоб там був знижений об'єм рідини для ліофілізації. У спробі зменшити об'єм заповнення та підтримати 270 мг/флакон проводили дослідження розчинності
ТАТ-КМК2ВОс у гістидині, рН 6,5, та у гістидин «т трегалоза, рН 6,5. Зразки аналізували візуально при 35, 50, 75 та 100 мг/мл. Усі розчини були прозорими при 1-0 та 1-24 години. На підставі цих даних могли використовувати об'єм заповнення нижче З мл, який із застосуванням складу ТАТ-
МА2Вос 90 мг/мл забезпечував би 270 мг у цільовому флаконі. У флаконі може бути потрібний широкий діапазон кількостей, але 270 мг забезпечить дозу 2,6 мг/кг для хворого масою 100 кг.
За умови, що, якщо цільова концентрація відновлення для введення хворому все ще складає 20 мг/мл (але може складати від 1 мг/мл до 100 мг/мл), то 20-мл флакон для ліофілізації, що містить 270 мг ТАТ-МК2ВОс, може бути використаний з об'ємом відновлення 13,5 мл. Таким чином, оптимальні об'єми рідини для ліофілізації ТАТ-МК2В9с у флаконі будуть складати від 2,5 мл до 10 мл.
Перед тем, як приступити до розробки ліофілізації, тестували широкий діапазон
Зо об'ємоутворювальних засобів, і Тд показані в таблиці 12. Також оцінювали 100 мг/мл ТАТ-
МА2Вес в гістидині, рН 6,5, за допомогою О5С, дані включені в таблицю 12.
Таблиця 12
Дані О5С, склади сни| снтянтюннн | тех ТЕШЕЬ , - й заповнення ОР
Склад Об'ємоутворювальний засіб 9 9 кристалізації 1 ЇСорбї//////77777777777777777111 | оС Ї!11 2 |Декстроза.///////77777777777 | 387811 Ї11111ИС2
З |ЩЦукроза./////777777777777777777 | 30911111 05 |Трегалова.///////77777777777771111 | 29931111 11севевс 06 |Лактоза.////77777777777711111111 | 2793 СЇ11Ї1 7 (75:25 ТрегалозагДекстран-40 | -25.07"С | | се507с 8 50:50 ТрегалозаДекстран-40 | -2260С | .рюрИол7лоо0|се26бос і 9 (25:75 ТрегалозаДекстран-40 | л855"С | щ | -лвБ5'є сни| снтянтюннн | тех ТЕШЕЬ , - й заповнення ОР
Склад Об'ємоутворювальний засіб
Температура кристалізації ло |Декстран40/////777777777717111111Ї11111111111Ї1111111111111111111иов с 1 Моб мумлМмА-івгістидинірНЄб,; | ЇЇ 77777777 | се167с
На підставі даних Ю5С в таблиці 12 спостерігається декілька варіантів складів для лікарських продуктів, як з активним засобом, так і з плацебо. Як правило, склади МоМо 5 та 11 є найбільш перспективними для активного продукту з точки зору Т9. Будь-який об'ємоутворювальний засіб може бути прийнятним для застосування у плацебо продукті, але склад Мо 4 (маніт) буде мати найменшу тривалість циклу, якщо виконується відпал, та може бути найбільш придатним для відповідного зовнішнього вигляду активного засобу.
Оскільки визначається оптимальний активний склад, важно розглянути питання про стабільність розчину, стійкість циклу ліофілізації та хімічну стабільність. Склад Мо 5 з таблиці 12 (трегалоза) демонструє добру стабільність розчину та хімічну стабільність ліофілізату при умовах прискорених іспитів (дані показані нижче), але потребує більш тривалого циклу ліофілізації при конфігурації заповнення 13,5 мл. Такий більш тривалий цикл не може бути ідеальним для комерційного виробництва у майбутньому, при якому бажаний більш короткий цикл. Склад Мо 11 з таблиці 12 (без об'ємоутворювального засобу, при 100 мг/мл ТАТ-МА2ВОс) характеризується більш високою температурою склування, ніж склад Мо 5, що створює можливість для більш гарячого, більш короткого циклу. Крім того, понижений об'єм заповнення дозволить суттєво скоротити час виконання, оскільки треба буде сублімувати менше льоду з кожного флакона.
Приклад 6. Стабільність ТАТ-МК2ВОс з об'ємоутворювальними засобами, масштабами та умовами ліофілізації, що варіюють
Стабільність об'ємоутворювального засобу в умовах прискорених іспитів
Невелику партію лікарського продукту ТАТ-МК2ВОс ліофілізували для оцінювання стабільності у твердому стані після 1 тижня при 25 "С, 40 "С та 60 "С. ТАТ-МК2В9с складали при концентрації активного засобу 20 мг/мл у трьох різних середовищах. Зразки оцінювали за зовнішнім виглядом, відновленням, рН, кількістю та чистотою за допомогою НРІС (способу
М5А) при 1-0 та (1-1 тиждень. Вміст води оцінювали тільки при 1-0.
Все лікарські продукти ТАТ-МК2ВОсС виглядали як білі ліофілізовані осади та відновлювалися у межах менш ніж 10 секунд при 1-0 та 1-1 тиждень.
Зо Середовища лікарського продукту описуються в таблиці 13 та наведені з відповідними результатами за температурою склування та вмістом води. Результати рнН, кількості ТАТ-
МАК2В9с та чистоти ТАТ-МК2ВОс описуються в таблицях 14-16.
Таблиця 13
Матриця зразка об'ємоутворювального засобу: Т9 та 95 вмісту води трегалоза -28,25 "С з МА-1 мк 50 мМ Ніб, рН 6,5-4-1:1 120 мМ о о
Таблиця 14 рН, експеримент малого масштабу ліофілізації Мо 1 з об'ємоутворювальним засобом
Виміряне рн ' й -«| Теоретичне - т -
Об'ємоутворювальний засіб Н ї-0 1-ЇІ тиждень, 1-ЇІ тиждень, 1-Ї тиждень, й - 25С 402с 60 ес н?нИЬОВІИТОЛВОВВОВВВЛЬЖЬСХИИИВВВВИВВВВИВВВИИИИИИИИИИИОНИ
Декстран-40 н""''ІІ ИТЬТЬВВОИИИИВОВООВВЦДЛДЛДЛБЛОЕОЕЕНІОСЕІМЛОВТТООТИ 11 Трегалоза:Декстран
Таблиця 15
Кількість (мг/флакон), експеримент малого масштабу Ме 1 ліофілізації з об'ємоутворювальним засобом
Об'ємоутворювальний засіб І-І тиждень, 25 "С (-ї тиждень, 40 "С((-І тиждень, 60 С ннЮТТЛЛЛООВООИИИЛЬБОДИООВИММХПМЗОТОЛВВОВИЛВОВИЛМІВІЛВОЛВЛЛОЛОТООЛВЛОИШІІВІВВВВВВВН
Декстран-40 н""'нкШТККОІЛЯОІЛТООТОТІТОЛОВОООЛОВОВООЛЬТЛООЛОІЖИОИТИВОВОВЛВЛВЛВВЛВИТЛИЛОЛОТЛВОТЛОТЖИТИТИОИВОТОТИОВИОТОТИОТООТТИ 11 Трегалоза:Декстран-40
Таблиця 16
Чистота (95 площі за допомогою НРІ С), експеримент малого масштабу Мо 1 ліофілізації з об'ємоутворювальним засобом
Об'ємоутворювальний засіб | 1-0 П-Ї тиждень, 25 "С(-| тиждень, 40 "С(-І тиждень, 60 С н?НИЬСОТСООЛОИВВОХОТТОТТОТЛООВОИОТИЛЛІМІМВОВВОВОООВООЛВВЛВЛВЛЛОЛОЛОЛООЛОТЛТОИЛОТВОВОЛВОЛВОЛОЛОТОИТИООТТНИ
Декстран-40 н""'нкИИНВНИПннннннннннншш 11 Трегалоза:Декстран-40
Усі три об'ємоутворювальних засоби - трегалоза, декстран-40 та трегалоза:декстран-40 - підтримують рН при 6,5 (таблиця 14), та спостерігається діапазон 0,5-2,5 95 зниження чистоти при 60 "С після 1 тижня (таблиця 15). Обидва лікарських продукта, що містили декстран-40 та зберігалися при 60 "С, показали збільшення супутніх домішок при часі утримування (ВТ) з 6,0.
Данні супутні домішки не були присутні в зразках трегалози, що підтверджує те, що трегалоза забезпечує стабілізувальний ефект у ліофілізованому лікарському продукті, а декстран-40 може викликати специфічне розщеплення продукту.
Включення декстрану-40 в об'ємоутворювальний засіб забезпечує більш високу температуру первинного сушіння, але декстран-40 як об'ємоутворювальний засіб демонстрував найгіршу стабільність. Комбінація трегалози та декстрану-40 (1:11) призводить до температури склування, яка на приблизно 10 "С вище, ніж з трегалозою окремо. Однак виявилося, що стабільність при 60 "С є проміжною для зразків з трегалозою і декстраном окремо, так що трегалоза є переважним об'ємоутворювальним засобом.
Розробка ліофілізованого складу ТАТ-МК2ВО9с: експеримент малого масштабу Мо 2
Невелику партію лікарського продукту ТАТ-МК2ВОУс ліофілізували для оцінювання умов температури зберігання при 5"С у ході первинного сушіння. ТАТ-МК2ВОс складали при концентрації активного засобу 27 мг/мл в 50 мМ гістидину, рН 6,5, та 120 мМ трегалози.
Параметри циклу приведені в таблиці 17. Чотири 20-мл скляних флакона для ліофілізації заповнювали на 10 мл. Два флакона зондували датчиками температури.
Таблиця 17
Експеримент малого масштабу Мо 2, розробка складу ТАТ-МН2ВОс . Температура . Швидкість Час Тиск
Функція (с) Утримування/швидкість ("С/хвилина) | (хвилини) то (Завантажування | 5 |Утримування./// | - | 0 |Навколишній (Зрівноважування | 5 |Утримування./// | - | 120 |Навколишній (Заморожування | -40 |Швидкість | 05 | 90 |Навколишній (Заморожування | -40 |Утримування./// | - | 240 |Навколишній сушіння сушіння
Вториннесушіння| 25 |Утримування.//-/-:/ | - | 1440 зни 00290 ння 10000030 он навколишній (Вивантажування | 20 |Утримування.//-/- | - | - |Навколишній "Температура первинного сушіння з урахуванням великого розміру флакона та об'єму заповнення безпосередньо не зв'язана з температурою склування.
Через великий об'єм заповнення необхідно встановити температуру зберігання суттєво вище, ніж температура склування, щоб компенсувати випарне охолодження. Температура розчину у ході первинного сушіння становила -29 "С, що близько до температури склування - 28 С згідно з термічним аналізом О5С.
Стабільність ліофілізату 90 мг/мл ТАТ-МК2В9с в умовах прискорених іспитів (експеримент малого масштабу Мо 3)
До складання розчину для заповнення у малому масштабі Мо З 90 мг/мл ТАТ-МК2В9с у буфері (50 мМ гістидин, рН 6,5) оцінювали за рН. рН розчину складало 6,04. Було встановлено, що із збільшенням концентрації ТАТ-МК2ВО9с силу буферизації також необхідно підвищувати.
Розчини отримували при 150 мМ, 100 мМ, 75 мМ та з водою і оцінювали за рн. Значення рн приведені в таблиці 18. Експеримент малого масштабу Мо З виконували у буфері з 100 мМ гістидином при рн 6,5, та рН доводили до 6,5 після додавання ТАТ-МА2ВО9с.
Таблиця 18 рН, 90 мг/мл ТАТ-МК2ВОс в гістидинових буферах, рн 6,5
Буфер 100 мМ 150 ММ
Невелику партію лікарського продукту ТАТ-МК2ВОс ліофілізували для оцінювання стабільності у твердому стані після 1 тижня зберігання при 25 "С та 60 "С. Складали два склади з 90 мг/мл ТАТ-МК2ВОс (буфер та буфер з трегалозою). Зразки оцінювали за зовнішнім виглядом, відновленням, вмістом води та чистотою за допомогою НРІ С (способу М5А) при ї-0 таї-1 тиждень.
Усі лікарські продукти ТАТ-МК2В9с виглядали як білі ліофілізовані осади. Деякі осади були розтрісканими. Склади плацебо були візуально схожі на склади активного засобу.
Час відновлення становив приблизно 1,5 хвилини у порівнянні з менш ніж 10 секундами для попередніх складів. Збільшення часу відновлення, швидше за все, пояснюється підвищенням концентрацій ТАТ-МК2ВОсС та гістидину. Подальші тести показали гарну стабільність ТАТ-
МА2Вос з концентраціями гістидинового буфера 50 та 75 мМ при зменшенні часових періодів ресуспендування. Також через розмір 2-мл флакона, застосовуваного для даного дослідження, добавляли тільки 1 мл води у ліофілізат. Фактичний об'єм відновлення складає 4,5 мл у даній конфігурації малого масштабу. Час відновлення, ймовірніше за все, збільшиться при застосуванні більшого об'єму розріджувача.
Флакони поміщали в умови випробування стабільності при 25 "С та 60 "С та тестували після 1 тижня зберігання.
Згідно з даними зовнішнього вигляду зразок трегалози давав більш ніж прийнятний осад.
Цикл ліофілізації проводили консервативно протягом 5 днів з температурою первинного сушіння -32 "С. На підставі даних температурних датчиків цикл може бути скорочений, що демонструє той факт, що при більш ніж високій концентрації та більш ніж низькому об'ємі заповнення оптимізований цикл буде коротшим.
Результати чистоти представлені в таблиці 19.
Таблиця 19
Чистота (95 площі за допомогою НРІ С), експеримент малого масштабу Мо З й Розчин для 1-Ї тиждень, 1-їЇІ тиждень, 100 мМ Ні, рН 6,5--120
На підставі цих даних стабільності в умовах прискорених іспитів трегалоза демонструє стабілізувальний ефект на склад Таі-МК2ВОс, що поліпшує хімічну стабільність ліофілізату.
Незвичайним є те, що трегалоза здатна забезпечувати такий стабілізувальний ефект, тоді як інші стандартні об'ємоутворювальні засоби, такі як декстран та маніт, застосовні для інших пептидів, не можуть.
Знижений об'єм заповнення мінімізує конкурувальне випарне охолодження навколишніх флаконів та мінімізує опір потоку води, що сублімується.
Розробка циклу ліофілізації - експеримент малого масштабу Мо 4 (плацебо та активний засіб)
Експеримент малого масштабу Мо 4 розробки циклу ліофілізації здійснювали для тестування зовнішнього вигляду осаду та умов ліофілізації для З-мл заповнення. Тестовими зразками були 100 мМ Ні, рН 6,5, з 120 мМ трегалози та 90 мг/кг ТАТ-МН2ВОс або аналогічний зразок без трегалози. Консервативний 4-денний цикл виконували, як описано в таблиці 20. Флакони з плацебо та активним засобом включали з конфігурацією заповнення З мл в 20-мл скляний
Зо флакон для ліофілізації замість маленьких флаконів, що застосовували у попередніх експериментах. Активний датчик температури застосовували для підтвердження температури у ході циклу ліофілізації. Отримані в результаті флакони з активним засобом показані на фіг. 7А.
Таблиця 20
Параметри ліофілізації для малого масштабу Мо 4 й Температура й Швидкість Час Тиск (Завантажування | 5 |Утримування.//-/-:: | - 2 | 0 /|Навколишній! (Зрівноважування | 5 |Утримування.//-/-://////- | 120 Навколишній! (Заморожування | -40 |Швидкість | 0,5 | 90 /|Навколишній (Заморожування | -40 Ц|Утримування.//-/-://////- 2 /-// | 120 Навколишній!
Первиннесушіння! -30 Ц|Утримування.//-/-: | - 2 2-/- | 3400 | 50 (Вториннесушіння|! 25 Ц|Утримування.//-/-: | - | 1440 | 50 занесення 10300103 шннь навколишній (Вивантажування | 20 |Утримування.//-/-: | - | - Навколишній!
Склад при 90 мг/мл у 20-мл флаконі формував прийнятний осад при 4-денному циклі, та дані датчика температури підтверджували, що цикл може бути скорочений до З днів.
Вміст води для плацебо та активного засобу становив 0,01 95 та 0,00 9».
Розробка циклу ліофілізації - експеримент малого масштабу Мо 5 (плацебо та активний
Б засіб)
Експеримент малого масштабу Мо 5 виконували для розглядання розробки відповідного флакона плацебо для клінічних випробовувань, а також для розглядання часових періодів ресуспендування для складів при потенційному промисловому масштабі (270 мг/флакон).
Оцінювали 10 складів плацебо та 1 склад активного засобу за зовнішнім виглядом та часом відновлення. Осади активного засоби представляли собою "елегантні", білі осади з незначним осіданням в результаті тріщини біля поверхні стінки флакона. Осади плацебо були білими з більшою кількістю тріщин в осадах, що містять кількості трегалози, що зростають.
Флакони відновлювали за допомогою 13,5 мл води. Час розчинення приведено в таблиці 21.
Ліофілізат активного засобу негайно ресуспендували, але він був мутним протягом 17,6 секунди перш, ніж стати прозорим, безбарвним розчином. Усі плацебо представляли собою прозорий, безбарвний розчин.
Таблиця 21
Відновлення плацебо та активного засобу (555)
Мо скла й Усього, Флакон Флакон 7771776 7.1 712017. .20 | 133 | «лОсекудд | «10 секунд 77728777 171113007 17.20 | 317 | «лОсекудд | «10 секунд 7777791 .400 1 20 | 420 | «лОсекудд | «10 секунд полоса ненні еннсня нат | онкжни | знюнг-
Трегалоза, мм |Гістидин, мМ МА-1, мг Флакон Мо 1 Флакон Мо 2 активного засобу
Л(контрольбї | 7120. | 700 | 90 | 17 секунди | немає даних
На підставі стабільності, часових періодів ресуспендування та часових періодів ліофілізації переважним комерційним складом для ТАТ-МК2В9с з попередньою ліофілізацією буде 20-100
ММ гістидин, 120 мМ трегалоза, рН 6,5. Концентрації трегалози можуть бути збільшені без втрати стабільності або "елегантності" осаду, але не часових періодів ресуспендування.
Перевірка підвищеного вмісту трегалози в утворенні осаду та плацебо, відповідного за зовнішнім виглядом та часом ресуспендування
Для кращої відповідності плацебо тестували концентрації трегалози, що варіюють, з ТАТ-
МАК2ВОс та без такого, а також при об'ємах заповнення або 3, або 5 мл.
По-перше, будуть коротко описані склади активного засобу та склади плацебо. Потім будуть відмічені основні візуальні відповідності для З-мл заповнення та 5-мл заповнення. На даний момент аналізуються аналітичні зразки (розчин для заповнення та один ефективний зразок). В
Зо таблицях 22 та 23 показана підгрупа тестованих складів.
Таблиця 22
Склади активного засобу
СЯ т ПИ ХНИ
Склад Композиція заповнення
На фіг. 7В показаний зовнішній вигляд складів активного засобу, приведених вище.
Таблиця 23
Склади плацебо
Склади активного засобу
Склади плацебо - 270 мг/флакон 500 мМ Трегалоза « 20 мМ Гістидин (п-:7 500 мМ Трегалоза я 20 мМ Гістидин (п-2 400 мМ Трегалоза « 20 мМ Гістидин (п-3 400 мМ Трегалоза я 20 мМ Гістидин (п--1 300 мМ Трегалоза «з 20 мм Гістидин (п-3) 300 мМ Трегалоза «з 20 мм Гістидин (п--1
В таблиці 24 показані умови циклу ліофілізації для приведених вище зразків.
Таблиця 24
Параметри циклу . Температура . Швидкість Час Тиск
Функція (с) Утримування/швидкість ("С/хвилина) | (хвилини) то (Завантажування | 5 (|Утримування./-:/ | - | 0 | Навколишній (Зрівноважування | 5 (|Утримування.//-/-: | /- | 120 | Навколишній (Заморожування | -40 |Утримування.//-/-: | - | 120 | Навколишній
Відпал. | 0-27 |Утримування.//-/-:/ | /- 2 | 120 | Навколишній (Заморожування | -40 |Утримування.//-/-: | - | 120 | Навколишній
Первиннесушіння!ї -30 |Утримування.//-/-: | - | 4406
Вториннесушіння| 25 |Утримування.//-/-:/ | - | 1440 зни | 020 вне 1030000 овйютни, навколишній (Вивантажування | 20 |Утримування.//-:/ | - | - | Навколишній
Таблиця 25
Короткий опис основних відповідностей
Характер поверхні:
Колір та наприклад, й
Назва фактура: верхній шар, Структура: . . Час
В щільна або | Осідання | Пухкість . зразка |(блискучий або горбки, відновлення о . пориста матовий) тріщини, випинання, вигини 556 - заповнення З мл
Активний засіб Мо 2 500 мМ брудно-білий, г. . . 2 хвилини 30
В тонкі тріщини | щільна мінімальне | див. фото трегалоза |матовий секунд
ММ гістидин
Характер поверхні:
Колір та наприклад, й
Назва фактура: верхній шар, Структура: . . Час
В щільна або | Осідання | Пухкість . зразка |(блискучий або горбки, відновлення . : пориста матовий) тріщини, випинання, вигини
Плацебо Р2 500 ММ с. брудно-білий, : . г. трегалоза В розтріскана |щільна мінімальне 1 хвилина матовий 20 ММ гістидин 557 - заповнення 5 мл
Активний засіб 500 брудно-білий, .
В розтріскана, 2.
ММ матовий З напівщільна, з горбистим є, низ осаду 1 хвилина трегалоза |блискучими шарувата дном 20 мМ плямами гістидин нт.
Плацебо брудно-білий напівщільна, 500 мМ Ма овий з розтріскана, | більш 20 секунд трегалоза | Здискучими з горбистим |пориста, ніж мінімальне невідпалений: 20 ММ У дном у активного 38 секунд і плямами гістидин засобу н.т. - не тестували.
Приклад 7. Стабільність ліофілізованого ТАТ-МК2ВОс, 270 мг, у буфері з 20 мМ гістидином, рН 6,5, і 120 мМ трегалозою
Отримання ліофілізованого лікарського продукту
Складали невелику партію лікарського продукту ТАТ-МК2ВОс при 90 мг/мл в 20 мМ гістидині, рН 6,5, і 120 мм трегалозі та ліофілізували для оцінювання стабільності у твердому стані після 4 тижнів при -20 "С, 40 "С та 60 "С. В таблиці 25 показані умови ліофілізації.
Таблиця 25
Умови циклу ліофілізації для приклада 7
Функція Температу-| Утримування/ Швидкість Час Тиск ункц ра СС) швидкість С С/хвилина) (хвилини) т Гог (Завантажування | 5 |Утримування/ | - | 0 | Навколишній (Зрівноважування | 5 |Утримування./ | | 120 | Навколишній (Заморожування | -40 |Швидксть | 0,5 | 90 | Навколишній (Заморожування | -40 |Утримування | - | 7120 | Навколишній
Первиннесушіння | -28 |Утримування | 177 3412
Вториннесушіння | 25 |Утримування | - (| 1140 зн 0002о ран | 02000000 шани, навколишній (Вивантажування | 20 |Утримування/ | - | - | Навколишній
Зразки зберігали в термостатах при постійній температурі та оцінювали чистоту, ефективність і час відновлення в 13,2 мл (для кінцевого об'єму 13,5) після 0, 1, 2 та 4 тижнів.
Дані для кожної температури зберігання та часу представлені в таблицях 26А-0.
Таблиця 26А
Стабільність при -20 С 0,02 96 до заявленого вмісту, спосіб ТЕА 99,0 90 101,3 95 1 о,
Загальна чистота, спосіб МА (95 99,2 9, 99,2 9, площі) 11111105 171296 0,02 9ь 11111111 |немаєданих немаєданих| 095 | 00195 111111111097 11 боб 0,21 96 ипІнхІппппИ и ЕЕ ЕТ 0,32 96
Інни ЕІ ЕЕ 0,04 96 ро 111 оз 0,12 96 11111111 |немаєданих немаєданих| 114 | 0,0395
ІІІ а ЕЕ СИ У 0,02 9ь
Деамідований МА-1, о спосіб ЗСХ (95 площі) «0,05 о тво
Таблиця 268
Стабільність при 40 "С осад осад осад осад 0,02 зо
Фо заявленого вмісту, о о о о спосіб ТЕА 99,0 95 97,0 95 100,6 95 100,6 95
Загальна чистота, спосіб о о о о
МА (95 площі) 99,2 95 99,1 95 98,9 Фо 99,0 Фо 0,02 зо 0,02 96 0,02 96 0,02 96 0,26 95 0,26 95 0,21 96 0,01 9о 0,26 95 0,25 96 0,21 96 0,17 9е 0,09 96 0,13 96 0,33 96 0,27 Зо немає | немає немає ) немає | немає | немає | 98. 019 5/ даних | даних | даних даних | даних | даних " " 2
Окремі домішки оМЗ зе 0,15 96 0,17 96 0,19 95 даних | даних даних даних | даних | даних | даних 0,01 9е 0,01 9е 0,01 9е 0,01 96 0,01 9е 0,02 зо 0,04 9о 0,07 9е
Деамідований МА-1, о спосіб ЗСХ (95 площі) «0,05 95 нт. нт. тво
Таблиця 26С
Стабільність при 60 С осад осад осад осад 0,02 9
Фо заявленого вмісту, о о о о спосіб ТЕА 99,0 95 97,3 95 101,5 95 101,5 95
Загальна чистота, спосіб о о о о
М5А (95 площі 99,2 95 98,8 95 98,3 95 98,0 95 даних | даних 0,02 9 0,03 96 0,02 9 0,02 зо даних | даних даних | даних 0,26 95 0,26 95 0,25 95 0,20 9о ; ломі 0,26 95 0,23 95 0,33 96 0,28 зо
Окремі домішки немає даних 0,13 96 0,23 95 0,37 96 0,44 9о даних | даних 0,02 9 0,02 9 0,10 95 0,05 95 даних | даних | даних | даних даних 0,01 9 0,01 9 «0,01 оо 0,01 бо 0,01 96 0,08 95 0,17 96 0,29 95
Деамідований МА-1, о спосіб ЗСХ (95 площі) «0,05 95 немає даних немає даних тво 1 Втрата розділення біля основного пика.
Даний склад ТАТ-МК2ВОс є стабільним при -20 "С. Для температур зберігання 40 С та 60"С вміст потенційних домішок з відносним часом утримування (ККТ) 1,07, 1,1 та 1,29 повільно підвищувався із застосуванням аналізу НРІС М5А, при цьому найбільший ріст спостерігали при ККТ 1,07. Для температури зберігання 40 "С вміст домішки підвищувався від 0,09 95 до 0,27 95 за 1 місяць, а для температури зберігання 60 "С вміст домішки підвищувався від 0,0995 до 0,5995. Домішку не спостерігали при -20 "С. Домішки, інтерпольовані із застосуванням рівняння Арреніуса, складали менш ніж 0,5 95 через 16 місяців при 25 "С або через 123 місяці при 5 "С та менш ніж 2 9о через » 60 місяців при кімнатній температурі та через багато років при 5 "С. Таким чином, даний склад та споріднені склади придатні для зберігання ліофілізованого лікарського продукту при кімнатній температурі.
Дане дослідження розщеплення проводили ще один місяць для підтвердження того, що продукти розщеплення, що спостерігаються при 60 "С, також спостерігаються і при 40 с.
Вважали, що ці три домішки з'являються при більш низькій температурі, що вказує на те, що, ймовірно, вони є продуктами розщеплення, які не специфічні для сильно підвищених температур. Ідентичності цих компонентів визначали за допомогою ІС/М5/М5 досліджень та виявили, що усі вони містять продукти ацетилювания сполуки ТАТ-МК2ВОс повної довжини. Такі явища ацетилювания відбувалися як на М-кінці пептиду, так і на лізинових бокових ланцюгах.
Таким чином, стабільність ТАТ-МН2ВОсС може бути збільшена за рахунок додавання або скавенджера, або інших допоміжних засобів для зниження ацетилювання ТАТ-МК2ВОсС в ліофілізованому стані або за рахунок зниження або видалення ацетату таким чином, щоб знижувалася ймовірність ацетилювання.
Загальні висновки
На підставі стабільності, часових періодів ресуспендування та часових періодів ліофілізації переважним комерційним складом для ТАТ-МК2ВОс є 20-100 мМ гістидин, 120 мМ трегалоза, рН 6,5. Концентрації трегалози можуть бути підвищені без втрати стабільності або "елегантності" осаду, але часові періоди ресуспендування збільшуються при підвищенні концентрації трегалози.
Приклад 8. Розробка та стабільність хлоридної солі ТАТ-МН2ВОс (ТАТ-МА2ВОс-СІ)
Отримання ліофілізованого лікарського продукту
У зв'язку з нестабільністю раніше розроблених складів сольових розчинів ТАТ-МК2ВО9с та спостеріганням того, що в ліофілізованих складах може відбуватися ацетилювання ацетатної соли ТАТ-МК2ВОУс, ацетатну сіль міняли на хлоридну сіль. Це виконували за допомогою препаративной КР-НРІ С із застосуванням амонію хлориду. Мета даного способу полягає у ідентифікації нової композиції об'єкту, що заявляється, та нового складу, які забезпечать поліпшену стабільність для ТАТ-МК2В9с, переважно поліпшену стабільність, як при кімнатній температурі, так і при 379С. Оскільки ТАТ-МБ2ВОс є ефективним при введенні потенційним жертвам інсульту та інших неврологічних розладів, та особливо важливе значення має раннє лікування цих розладів, склад, що є стабільним позалікарняними умовами, допоміг би мільйонам людей, що страждають на ці розлади щорічно. Наприклад, такий лікарський засіб можна було б зберігати в машинах швидкої допомоги або невеликих клініках, кабінетах лікарів або навіть доступними для окремих осіб, та надавати суб'єктам, що страждають на неврологічні розлади, такі як інсульт, або інші захворювання, що підлягають лікуванню нейропротекторними засобами, набагато раніше, ніж вони могли би бути введені за потреби поїздки до лікарні для лікування.
Загальний протокол процесу
Буфер А: вода
Буфер В: ацетонітрил
Зо Колонка: Оаізоде! О05 С-18 (1 кг), 120 А, 15 мкм, 10 см (об'єм шару: «1 л)
Швидкість потоку: 250 мл/хвилина
Довжина хвилі: 230 нм
Градієнт: виключення з 20 95 В 1) Колонку промивали 2 об'ємами шару (ВМ) 80 95 СНЗОН. 2) Пропускали 2 ВМ 0,025 95 НСЇІ у воді або 0,1 95 ТЕА у воді, що було переважним. 3) Завантажений зразок: 30 г ацетату ТАТ-МА2ВОУс (РРІ-МА11301) розчиняли в 1,5 л води згідно з ОБР (20 г/л) при умовах зв'язування ТАТ-МК2ВОс з колонкою. 4) Ополіскували 200 мл води згідно з О5Р (також завантаженої у колонку) з видаленням наявного ацетатного протиіону. 5) Пропускали З ВМ 0,1 М амонію хлориду (МНаАСІ) для подавання нового хлоридного протиіону. 6) Пропускали 2 ВМ 2 95. 7) Пропускали 20 95 В (ацетонітрилу) для елюювання продукту. 8) Збирали фракції при елююванні піка продукту. 9) Фракції аналізували за допомогою аналітичної НРІ С. 10) Колонку знову промивали за допомогою З ВМ 80 95 СНЗОН.
Аналітична система НРІ С
УМО О05-А С18 колонка, 5 мкм, 120А; швидкість потоку: 1,5 мл/хвилина; довжина хвилі: 210 нм; температура: 50 "С; градієнт: 20 95 - 35 95 В за 15 хвилин; буфер А-0,1 М МасіОх, рН 3,1, буфер В-100 95 АСМ.
Результати синтезу та обговорення
Два основних пула, зібраних при циклах, змішували та ліофілізували (- 5 л). Збирали 23,4 г кінцевого продукту з чистотою 99,01 95. Залишковий ацетат становив менш ніж 1 95. Стандартні уточнення протоколу повинні збільшувати вихід від 78 95 до » 95 95. Дана процедура подібним чином може бути застосована для обміну ТЕА солі ТАТ-МК2В9с на хлоридну сіль, оскільки ТЕА сіль буде зв'язуватися з колонкою на стадії З аналогічним чином.
Складання ліофілізованої форми ТАТ-МА2ВОС-СІ та тестування стабільності
ТАТ-МА2ВОсС-СІ складали в 20 мМ гістидині та 120 мМ трегалозі, рН 6,5, для безпосереднього порівняння з попереднім переважним ліофілізованим складом при тих самих бо умовах ліофілізації при 270 мг/флакон (маса активного засобу). Також порівнювали стабільність
Зо даного складу зі складом ТАТ-МН2ВОс-Ас, що попередньо розкривається, ресуспендованим у сольовому розчині та ліофілізованим. Для останнього складали невелику партію лікарського продукту ТАТ-МА2ВЗс-ацетат при 90 мг/мл в сольовому розчині (без інших допоміжних засобів) та ліофілізували при 270 мг/флакон. Стабільність складів у ліофілізованому стані оцінювали після 4 тижнів при -200С (контроль), 409С та 60090.
Таблиця 57: ЄСтабіньність ТАТ-МКОВОЄ Є (20 мМ сстидин, 120 ММ трегапозві у порізнянні з ТАТ-МКОВОЄ Ас (совьовий розчині
Дані залізн хверваної сен КАН зоовея бив етасі винне созвовово поети МАО в ши 0 ши зем Пд с ІІ. ЩІ Н 1 Я НЯ ШИ ВО)
І МИШ МИНЕ НИМ шк жк М шк он ШЕ Я ША ши ШЕ ЕК ШЕ УНІ ще зав 1 І ше: не ВШ ЕТ : ря зо 348 а і Ї Е ши шк | і т мів. : К м Ддкнлллчатнкк функ, олккнякаканннний Вей рен ни ВК шк ої і як ! і 535 | 5515 | За Е і ТОБІ оч 0 ОКО,
Манн нин ме КК УК У у 5 я ет чяя УК фу шко ї02 І 0.05 Ж ог В: Й НЕ НВ СІ ше з ух Мекюкуююююююююмя шини нн ча ит нення винна кх пон
СІ МНЕНИЯ ше шле їк 313 ! сін
Ж сова оон вано ХЕ СКК я кю юки я я я ую шк НЕ й й 4 Ї їх | пок ВО
Ел ЩІ іш Н | зак ; і
Табпиця й Стабільність ТАТ-МКОВОСИ (20 ММ пстидин, 150 ММ трегапозв) у перенянніз ТАЛМКУВЯсАЄ (сольовий розчині через їі місяц о Клорнови зідь МАСІ ОМА ВАЄ У сольовому. возчнН
Шк. а нн в с шен ВИННИМИ ЯМИ НН КИ КК шини шини ши шш ше шин НИ ши: ши ши ше ше
А ї ОЗНА ОК не ши Ж ЖИ НН ШЕУ КЕ М 3 ВВ ОВ СВО вн ше ши МИШКИ МИ в ЕН ши сш шашки ше ща о шли ше ши ше щен шини ши ишши шин с ШОН ЩІ М: М пи я
ПЕЖО ЕХ рт
ПИШИ пу ВК, мання пи МИНА ИН дян с шен нення МН
ПИШЕ, їх що ще Коли ЕК
М, май С: ПЕ ОН і ПОН КОМ КАН
МО ОН І В ши ши МНК ни ШИНИ ши: ши шешш ши ши же
ЕКО та як С І Ва 8 ПОВ 0 с шен МИМО ше ИМОЗ
ВА й Кв нн ними но Мен ни Во пек ши нини НИКИ МИ НА в ШК НН ї і вл В і ПИ:
ШОН пи ни нн
ШИШКИ як Б и в СС: нн зн меча пеня с шен ВИШ ше я МНС шоснн МОшИшШНЕнИИ КК В ше ше ни МИНЕ СНИ ИН п нн нннійЙ м ИНА ИН ШЕ с ВО
В таблиці 27 показана відносна площа кожного пика, що спостерігали у кожному НРІ С аналізі при кожній температурі після 1 місяця зберігання та при кожному відносному часі утримування (ідентичність піків) для безпосереднього порівняння. Для обох складів та способів вихідна чистота була дуже схожа (98 95 для ТАТ-МНА2ВОс-СІ у порівнянні з 97,93 95 для ТАТ-
МА2ВОУс-Ас за допомогою способу ТЕА та 99,3 95 у порівнянні з 99,13 95 для способу із застосуванням метансульфонової кислоти (М5А)). З даних при 609С видно, що композиція Таї-
МАгВос-СІ, гістидину та трегалози, по суті, більш стабільна, ніж склад сольового розчину Таї-
МК2ВО9с, при обох способах. Для способу ТРА після 1 місяця зберігання при 609С сіль Таї-
МА2ВОс-СІ зберігає 98,6 906 основного піка, тоді як склад сольового розчину ТамМн2гВОс-Ас зберігає тільки 96,8 95 вихідного матеріалу. При способі М5А різниця ще більш чітко виражена,
при цьому сіль Та-МА2ВОс-СІ зберігає 99,495 свого вихідного матеріалу, тоді як склад сольового розчину ТаЇ-МА2ВОс-Ас зберігає тільки 97,2 95 свого вихідного матеріалу.
В таблиці 28 показана відносна площа кожного пика, що спостерігали у кожному НРІ С аналізі в однакових зразках після 11 місяців при різних температурах зберігання. Ці дані підтверджують поліпшену стабільність складу солі МА-1-СІ у порівнянні зі складом МА-1-Ас у хлориді. При порівнянні площі основних піків МА-1 в ТРА аналізі при 409С, який проводили в умовах прискорених іспитів за вказівками ІСН для підтвердження зберігання ліофілізованого лікарського засоби при кімнатній температурі, МА-1-СІ зберігає 98,14 95 чистоти від вихідної чистоти 98,58 95, тоді як чистота МА-1-Ас в сольовому розчині падає від 98,57 956 чистоти до 96,48 95, що нижче специфікації по чистоті 97 95, та склад не буде вважатися стабільним через приблизно рік. Ту саму тенденцію спостерігали при аналізі М5А від 99,3 95 чистоти до 98,71 95 чистоти для МА-1-СІ та 97,08 95 для МА-1-Ас у сольовому розчині. При вивченні результатів чистоти при 609С після 11 місяців (таблиця 28) відмінності були суттєво більш глибокими, при цьому МА-1-СІ є значно стабільнішим, ніж МА-1-Ас.
З клінічної точки зору, рекомендовані межі чистоти лікарського засобу для людей можуть складати 97 95 чистоти без неохарактеризованої домішки, що перевищує 0,5 95, при умовах прискорених іспитів зберігання. За допомогою рівняння Арреніуса можна застосовувати дані стабільності при 409С та 609С для прогнозування падіння основного піка чистоти або росту домішок, що спостерігаються при різних температурах зберігання (наприклад, при 259С або
З379С, у порівнянні з даними, що спостерігаються при 409С або 609С). Якщо припустити, що лікарський засіб буде зберігатися при навколишній температурі було б корисно продемонструвати стабільність при 379С, оскільки при багатьох навколишніх умовах без холодильника навколишня температура влітку може знаходитися у даному діапазоні. З урахуванням вимоги чистоти 97,0 95 при 379С та з використанням типових даних стабільності з аналізу ТЕА для основного піка чистота, оскільки він є найбільш чутливим (тобто демонструє найбільше зниження чистоти при 409С та 609С), прогнозують термін зберігання складу сольового розчину 29,8 місяця (або трохи більше ніж 2 роки), тоді як для складу Та-МА2ВОс-СІ прогнозують термін зберігання - 500 місяців або приблизно 41 рік. Це є суттєве поліпшення стабільності.
Зо З точки зору росту найбільшої домішки (за винятком домішки при відносному часі утримування (КТТ) 1,02 за способом ТЕА, яка є ідентифікованою домішкою), ріст найбільшої домішки через 1 місяць для складу Та(-МН2ВОс-СІ становить 0,17-0,43 (КЕТ 0,99 за способом
ТЕА), тоді як ріст найбільшої домішки для складу сольового розчину Таї-МА2гВО9с-Ас становить 0,05-0,72 (1,13 ККТ за способом ТЕА). З урахуванням межі домішок вище 0,5 95 при 379С та за допомогою рівняння Арреніуса разом з даними при 409С та 600С по кожній з цих домішок, прогнозують термін зберігання складу сольового розчину « 4,8 місяця при 379С, тоді як для композиції ТаМА2Во9с-СІ прогнозують термін зберігання » 10 років. Таким чином, з точки зору або загального рівня ТАТ-МК2ВОс, або росту найбільшої домішки композиція Та-МА2гВОс-Сї представляє суттєве поліпшення у порівнянні зі складом сольового розчину.
Приклад 9. ТАТ-МА2ВОсС-СІ є більш стабільним, ніж ТАТ-МН2ВОс-Ас, в складах гістидину, трегалози
Як ТАТ-МНА2ВОсС-СІ, так і ТАТ-МН2ВОс-Ас складали при 90 мг/мл в 20 мМ гістидині, 120 мМ трегалозі, рН 6,5. Трьох-мілілітрові аліквоти (270 мг) кожного ліофілізували за тією самою програмою, що представлена вище, та по закінченні поміщали до інкубаторів з постійною температурою та вологістю при -20 "С (контроль), 40 "С та 60 "С. Через 4 тижні тестували стабільність кожного складу із застосуванням двох незалежних один від одного НРІ С способів - один з ТЕА як носієм, а іншій з М5А як носієм.
В таблиці 29 показана відносна площа кожного пика, що спостерігали у кожному з двох
НР'І С аналізів при кожній температурі після 1 місяця зберігання та при кожному відносному часі утримування (ККТ; ідентичність піків), для безпосереднього порівняння. На лівій панелі представлений склад Таг-МН2гВоОс-Ас, а на правій панелі показані результати складу солі Таї-
МА2ВОс-СІ. Пік при ККТ 1 відповідає інтактному пептиду ТАТ-МК2ВОс в кожному аналізі та в кожній колонці. Для обох складів та способів вихідні показники чистоти дуже схожі (98 95 для
ТАТ-МА2ВОс-СІ у порівнянні з 98,3 956 для ТАТ-МНА2ВОс-Ас за способом ТЕА, та 99,3 95 у порівнянні з 99,2 95, відповідно, за способом М5А). З даних при 609С видно, що композиція Таї-
МА2Вос-СІ суттєво стабільніша, ніж склад Та(-МН2ВОс-Ас, при обох способах. При способі ТЕА після 1 місяця зберігання при 609С сіль Та-МА2В9с-СІ зберігає 98,6 95 основного піка (96,64 95, розділеного на 98 95 вихідної), тоді як склад сольового розчину ТаМН2ВоОс-Ас зберігає тільки 96 95 вихідного матеріалу (94,44 95, розділеного на 98,3 95 вихідної чистоти). За способом М5А бо різниця ще більш помітна, при цьому сіль Таг-МА2ВоОс-СІ зберігає 99,4 95 вихідного матеріалу
(98,68 95/99,3 95), тоді як склад сольового розчину Таї-МА2ВоОс-Ас зберігає тільки 95,6 95 свого вихідного матеріалу (94,81 95/99,2 95). При розгляданні найбільших домішок для кожної композиції стає зрозумілим, що для умов прискорених іспитів стабільності як при 40 "С, так і при 60С сіль ТаМА2ВОУс-ацетат має більше домішок і, таким чином, є менш стабільною.
Незвичайно, що хлоридна сіль ТАТ-МК2В9с більш стабільна, ніж ацетатна сіль при аналогічних умовах.
В таблиці 30 показана відносна площа кожного пика, що спостерігали у кожному НРІ С аналізі в однакових зразках після 11 місяців при різних температурах зберігання. Ці дані підтверджують поліпшену стабільність складу солі МА-1-СІ у порівнянні зі складом МА-1-Ас при складанні у тому самому буфері (20 мМ гістидин/120 мМ трегалоза, рН 6,5). При порівнянні площі основних піків МА-1 в ТЕА аналізі при 409С, який проводили в умовах прискорених іспитів за вказівками ІСН для підтвердження зберігання ліофілізованого лікарського засобу, МА-1-СЇ зберігає 98,14 95 чистоти від вихідної чистоти 98,58 95, тоді як чистота МА-1-Ас в сольовому розчині падає від 98,57 95 до 95,91 95, що нижче специфікації по чистоті 97 9о, та склад не може вважатися стабільним. Ту саму тенденцію спостерігали при аналізі М5А: від 99,3 95 чистоти до 98,71 95 чистоти для МА-1-СІ та 96,85 95 для МА-1-Ас в сольовому розчині. При вивченні результатів чистоти при 600С після 11 місяців (таблиця 30) відмінності були суттєво більш глибокими, при цьому МА-1-СІ є значно стабільнішим, ніж МА-1-Ас (- 95 95 чистота для обох аналізів для хлоридної солі у порівнянні з «- 83 906 чистотою для ацетатної соли). Таким чином, хлоридна сіль МА-1, як передбачали, несподівано та суттєво є більш стабільною, ніж ацетатна сіль у тому самому буфері.
но
Таблиця 9. бтзбільні
Мйоть ТАТ-МКаНО
МКзвоссів еталон ян в ХО ММ гістидині орви в лет
КЕ В. вес й ши Шо мя трегалов " Щі
ШКЕООКАЖК КО ви я- В в
Е я ОК о пово шо й - а Н . в о що ще СВЙ шо и о нини 5 ЕК ОО ве 7 по вон пон : їв зве НН
З я длллкк кни ї ша : 8 м Я 0.31 нин нин й ЕВ пом НИ плуг сн о ун сжжжжя М.З : тт - я й ШО ши шини ис : й век свв жк в Ж Ж ж ж ж ж пок ж ж жур ж жів | З з | о . шо ї виш НЕ Ш її пото
В нм Бк : ши НЕ НсЯ осаю ЛУ ЕЕ ща ВОК КН Кн з її
Пш а ШЕ: зв кс не Е гі ние ие СИ у. | Ах я з т А
Я стен 1:33 ДЗЗ СКЕНОО ях дн а ща | ї не. ЕЕ Не: др - ков. МЕ ШИ -й в Її 5, хе Кн ЗО и мо СИС і о КАЖУ НМ ОЇ пі - Жах Дуенчнчккккнкіння 3 - Я х іч нн ин ті дея - ше ши Ж ха лети онов |: шо. СТВ ШЕ хе ва; ЩІ ОО. КО
ЗО шк: чи венрн В Її шо т ОВ в С Я З і одне днк утннннфедннттня шия ше ке ЕН в 5 ох і 0 имени З
Ех х Ко їв М з анна КУМ хи 1 Ж Е ) Е й ! Й і їй Боя
Б : ев п ШЕ НЕ Кф о і
З їх пАккАаккквтфкккююююкккюкю ІЧ і я Ж АС Я 3 В ШИ з. хх Х : «пк дк хх у ХО ше и ! ' шк Кканя : с: не Н ВК
Я 1.3 фен І: ФО офенннняя В
А о | Шк і а вх ру птн Ї он сн і
ВАХ 5 З МК хі Оу о оса Н ТАМ ЯМАХ р 05
Ах Мун роду їх ДАК МОВ І
Я К пока Н шт ЗХ З Н ря 8 М Фен под З С й во нене | ук ння З А. ї шо ї нен А Я У фуумя ц ї І че самі ї плалавна льний Я з ї шик М гЕ- ; | -ї ення нини х ши й У й сюжетне дню няння ! ваш ШО зв Донннннюннню НІ зав. фу фея у | 8 ши : ном ма В -о зв | -ш
ОО й кн - панна ше шіншии зав ее .- ен м 1 пфкеннння
Б : ек зи шення
Оу пеееснтоофннння в ссрх З АН НН і ЗМ зе ї нашавк нин ЗННННЕ ЗЕ й ше шини ан них Ще | ТЯ, ! : кв : ДУЖЕ це ши о СИ щи ; по ння ек й ши ан ШАЯН ой: паж а панк ккктнжяй 3.51 ЯК БОЖКО Я КО ще ши Б я шини ВА Я їх Пенн АЙ ш з ся з --к ох НИ ше я 55515 н пішки х пе
З с З ЩІ Ей й ме у З рої лм ша ж Ек роз рт
Ж «ет рення і ее ж 3.5 ох ї етше шие
Е | п ЕК гомо ня Н о ї й й Ве еВ ї пики ши зам 1? нт хОрух з сек ВВ ща її ОО Во ї с | ї В СК | вк х УК МОМ в х. р з Кк салававааиня ивиланя Н в шо во ; 5 :
Ор п ни сажки ши кеш В че ї ву дк 5 м че БІ Аа а С, Е з пЕ нео ени НАУ Н
ЕК М ни НЕ САН НЕЯШЕ нЕва ше ; я ге ние ШИН КЕ 5 1.5 що Ей в Ка
Не : в! С ї 5 уч лм хи.
Ух То прм : 4 : ви лі : ЛВ Ко х 13 но я : но : од Ея Щ 3418 в і
ВЕ нинннни нин. п.ї5 їх Й ши шк 1.15 Н кад мен. ЗИНЕХ пи т. френч ї Н я ше ; х5 ши : : ШИ | -
ЗК Н ТАК КУН ЕКЗ ря
В пд ААААМКАМААНАЯ НИ зи М " її пе длеккофенкуюнчаанку би пеооеюкдчн РОоблУх Бо і С фшчннннння її шк й і! ж нн нн 1.53 алла ДА Н Ше 2 КЕ ї ІВ ї : нама 3.38 пр КА, Х : і Я ше - н- | З т Й «7 і с вовна ву і ЇЇ і оон 18 : КЕ я ення Те ; жи Де В Ше Ка ни ши че фен ПО З 3 "ожини ши се оо У ї і | З - - - - в І хоскюкккнкккіе не
ПОЖКрікккквжюия : шля яти юю юю
Таблиця 30 імя 30. сСтабі табільніст с нова ть ТАТ-НЕ2В ве Я У ше я ч І ЗВее і» мі : | си КУ ІЗ ША
ЯМ сістидині зорівнянні динітг івнянні з ліюофі ніта о ММ тре пні з люфіплова
І | ві: сх ; і с, х. 3 кн. | Й регалозі, ВН 6,5, пі ним ТАТ» шин Б. півня Ті місяців сода «Вам БИ 13 м Ше
Гео Трержнхя як " Яані ше зання грегаенхка, ВЕ б вай стабіникні ох ЕН ПНЯ ЗК: ; й ни пк шк ОВ фо пост хворнанки
ОВ Ме її ще селі ВА 7
ПН г же В я НЕ ПЕ - нання
В овБ с я поши й
ШИНИ ж ви Вк КМ ПОВ дао Її -:
ШИШІЕНЕМ ВВ Дн ПОТ ВОВК дея ооо фін
ПЕС В ххенкфнюннитн А КО ОККО ня
В ЯКЕ ше КАК онов ще п ав а В шо ее інш виш пн
ПИПИЕИНН ик У Ден щп45 т: ! не
СН яЕ зах (кн кіюююфеннх они в рентні ! о. ие о. дюючнюкнни а, У пф дофучннууюььнкх ї
КЕ п: нини ще ши пефення ше
ПИШИ КУ. С рвав пишне за і М сн
ПО За пленкккннф ша Ме о и, Ще
ПЕКИ З з ск, ТИ савани о 14 Іс вавввввн ше - ! . Зоя дитяти ек ннам вх пан т ме чан і й мопднрнуеьфн мери ни ходи А
ПІШКИ х НИ У ЕВДЕКЯ УКХ КАК я ери о о о що о Зв. МАКУХА і Її мем ДК ння плн ВВ ! і хо вх ся КМ мне отчи ше дллллляьднккнн й Хоененнї ін 1 маш па НК пк пики А і
В чл шик їз пн м ЗК ВУ ді
ЖЕО 35 ССЗ НЯНЯ шин От СЕМА ЗВ.1Я нні
ПЕШЖИЕНИИЕ ї ке вн щ Н ен ПИТИ ее вах ка З '
Бе п ВЕ в шен і нн пес М її тов |і 5 ше дюденфнннн шк ШКІВ : ЕК Кінний в ж Зі но ши ГеМе в Мн КУ:
ОКО із а. ТК очко сення па: ниття
ПОВНІ А; ВХ ОДУ Н док до ПОМ ая ї ду
Б 4 ох а ен вия а і мно НКИ Днях 0,5. : її зов ШІ ПИ Покунннифн л.415 Дт ТО меккин ин що 1.68 З ОА НІ пунк ях нен 3 АД. ення її Ка с. чем Я м Овна не оо ї ї
Б за В ши ПІТ шк те ше т ОСИ пн ї
ПИЛИ з г м у дн ни ШИНИ НН НАНУ су і В панно Й сти ши Ї МЖреня С . 13 щ- я донесення Вшшн ш З Анні
ПО т КО нео ня У и ви нини: мовна :
КЕШ п сс: вв ОВ седан КК» дя пан плетених Я
ВИШНЮ їй Я пуф ме З :
ОО 48 Дня пої ще чн КЕ о ДИ похчеежккнчня крконвнох ПИШИ пк удо ааньи ЗД же Й па 5 Й си Кд З С вва Н си ку пущі ї . 17 5 поч кжж юн оон З поогефеттоттеттнях З зма
Ше Б. пи и ши перен шН ЛШ вшшн шнни о 123 с ння оооефсесо Кк інеенн СОС днях дххжююккккки
ПЕН 3 ТИПИ сх Х ПИШИ щи ї о. і ше ПЕС данння : пофнееенетятит ! о. ще шк пок діяння КОЖ пен нена дея
ПІПИИИНМИНИ оохеух ШИ ск щ пра у Вянняя пря с І їх о ШИ пехччжеккх се КА Зх посчесетттедчн секс вин не Ох пок Кк сиди З вна ма ! г ПИ сн М М ше п сення ПИШНЕ а; нн Сн с ХВО вав: ке вв Е " омннначанеентося ши ше -3 х В пен Ї ;
ШИЯ х М ШІ М
ЕЕ ОХ с «С ідо Н пня
Вон ВХ жнункя НОЯ ен дея і
ШО ща мання сти Ж п ши
КИНЕ й КТК аа т жі 1
ИН тр ПИШНЕ Н кн ни ци ВоНоВ ОО ПОМ ЕК
Оу по: Доддреннннннняк» ї ори В 3:
ПЕШИЕНИВ В Й КК ви я ги ДКОО хеня І й вишня що шк ! шишка ше шк о. : ; в «око кн полою юю і
З з . НИ: щ ВУ ЗК Я соююкююкяй
ПЕНЯ а в КЕ ТутиАе щі щ Що п в ца В де СоООНВ погооетттююк фотку ПА по о. кА чну ПІ КС нннннннкни ПО му ня і пек ща погуєкеттня ї пені БОМ ДОД ель Її, десесі
ЕЕ я пи НЯ шк НМ ВО ї дО ї Ко пав пря Ен я НИ - Ж ес
ПЕНЯ ; Ж У ік ляян м БО ШИ Ж рн іх КО МОНУ «Фе учи ХРУТ т ВВ ни вини і б3 . я З, за ? поніс ПЕ в Хукююєююю ж
ШИНИ З ОНИ й лю ни ШИ А ші Я !
ЕВ 1 шен з шин ШО Ноя щи
ПН гу я-е ОБ аа пух с НБК Сон
ОО їде ше т нн нини В я Зб ЕТ ши ше ші ше шия шо
БЕ я ПЕКИ де Какя порно КЕ У у - и
ДАНЕ - ВО ккд дян Ор нсесе ВВ. тах її орех ща :
Бо зда шишнннни Мн ПЕЕЕс Кон х пня
Б : ща покеттофухссерюєтехтня я МНН. СЕ ШИ '
В МЕН шини ср шко Інни ще ТЯ
ПЕ і ВУХ ВИНИ НК С щу Де Боже НИ те '
ШИ ше Еш ( ши шо: вис
ШЕ ШИ весни НУ ее ше б ншщ 45 В -ВЕ шо шин о. 115 ши дя и Ко ря Її паж
ПЕНЯ хх ВУХ гокюююьм фе ооо ВУ ря й о 15 о. ниш З я сови вк ння р о ї їв почннаннянаннннн Во ши В па і нккккккккккя
ПЕН ; КО меня А Дню м зву :
ОО їла 85 полю Ї сфе сно нн нан т Ду
З Ше - пишне я п. Ск 134 в я пккккжин й хакі
З ШЕ ння пд се, Дрю ши вне о. 1.2 З ПАНА НА ом тннни Я соккннфеюин кокос 114 же с ОТЕ З тяжкий ПОЖИ Ди Мн Е х зх дення нена «555 пи АКлякляни
ПН У не сення У С ОБ
ЕЕЕО 1,25 СО нини шо ше о шок
ПЕ М ко печін СВ пря не о нон о. па с вів пек АХКН тн Анжннн
ШЕ сп ишни дн дчфчкмучнкмм яяккня й с. оон зни НЕ Дня пуття. ши. вини ну ун зи сш с перен «В... Ан Зх ВВ ни т ще дкжкедяютюсютьх я евостюннння зе НИ В три : 1 Вишниш пхкжккккннтннн
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«3» БОНО ІНК.
ТтАРМАБ пЖОНАТАН ДЕВІД «120» ХЛО РИидДнНА СІЛЬ ТАт-МВоВає «1302 057769/446849 «Іво 73 -Ї7ах жтавс5БО пля Міпдояз версії 4,0 «ій» 1 «1153 10 «кидиз Вілок «3» штучна посліщцевнксть ке «23» синтезований «апп» 1 5іу Ач пу дув ка Ага біл Акт АгоУ АК ї 5 19 «8105 .9 ка1ї 11 «12» Білак «к«Ріш» Штучна лосліповноєть ч«О» «ше бинтазований «дп 2
Тух Бі ду був цу Ася вку бів Агсо Ву Ако 1 5 10 «2105 З «аріїв 11 «2125 Біпак «813» Штучна послілеовнаіст» «280» «вої синтезований «ЗП З
Ре ЄЬУ Агц пуб ру дк да бів Ага с АгУу дга 1 5 15 «и а «тії» 15 «Вам Білок.
Кей» Штучна цослідаовністеь «Ву «й синтезований
«800» 4
ОР Ако Був Був Ака Аку біп Аха Ак Ака ко сів 1 З 10 «цк 5 «вві а ке иж Бізісне «ІЗ» Шуузчвна послідовність краб сигіх синтезований ха» 5 пуя їецп бек бек ІїТїТе бійш Бек дво уві ії З «2105 6 «118 Зо «12» Білою «гі32 Штузна послідовність
Й
«ве» синтвзовакий «00» 5
Туєг біу йсу Був гув дк Ах іп дка Аку Аа Був їецобБех Бех Т1е 1 5 10 15 бій Бех Авр уаї за «- й щур 7 «к«-ї15 20 «21-х Білою твї13» Штучна посліІдавніств «Веде «ей» синтезований «а
ТУк біу Акч Був Бу акЧ Ако біп Ах Ака Ак о пу пен Беж Бег 118 ї 5 тб ІЗ біз Так блю Уа 3 «От В «112» 19 «вік Бідою «213» Штучна поплідовність ких «гий синтаезовавий «вай» «рак? БАРІДНТ «вах і «ЗУ Хза є зіпсутній або будь-яка амінокислота
«айоз 8
Хаа пре сі Ага буз Гув Аа Аг біб аку г Ага 1 х 10 «їй» 5 «І 18 ке1и» Білак «вій» їтучна поснтдовність «ах «аг пйвнееасвавнй «400 я йха їей бек о сіу Мебє Ази біз уаї Ге) ех Рпе АкЯ Тер цен 1 5 10 «ака То «1 5 «ді» Білок «Жхїі4» Штучне послудовнісаь «8202 «ВИЗ» сичтевований «Або 10
Ака Ага все бсіп АКЯ Ак пух Був оАКЯ 1 5 к1ї0з ЗІ «-21їз 20 «2195 Бізск кеї3» Штучна послїдовнусть «27 «?ф3»м синтезований «40» 11 вве Авпосіу бек Бек ап сіу Нів уі тує бій цув Гео бек обет їіїв 1 5 Ід ї5 сій Бек Авромаї о «210 12 ев «фіз» вінсЕ «йі»е Шетущне. послідавнастие «Же кив3» синтезиаванийЙ «4005 17
Слб век Анроуві 1 «г1й2 З чеїї» 95
«2125 Відок ч«ві3» Штучна послідовність ку» «виЗ» синтєзований «00 КЗ
Нів РЕо Тк Авроїїеа те біУу Вко їву АвпоГеи бек Дар о Бхо бек Уаї ї 5 10 І5
Бек тат Уві Уві жо «10» 14 «вії ЗО «Іа» Біляк «135 ПБвучна посльдовні сь «й «ей» синтєзованкихя «гай 14
Аху АкУ АтТа 116 біз Ага біч біб с1у біб Пеа біп бе Сув бек АКа 1 5 10 15 нів Ага Бій Бер «?210 15 «11 й «їй» нілОоК «ее Штучна посладовністяі «дв» «З» синтезований «аа» 15
ТвВкбіп сту рве рго біу реко був ТПк тТхр ойхо Ако ї185 Бех бек бТеи 1 З 18 15 бій бек січ Уві «вік 16 «вії» во «За» Білак «213 Штучна поеслілювн ств «0 «вий» сипшезаваний
Аіз уві Бех Аг Був ТК біз бем бій бій Туг біп Ах Та Бе оАКУ ї 5 12 158 тв був їм Бех 20 «вій» 17 сві 0 «3185 Білок
«гії» Штучна пЗелійовВиксть «и «2238 синтезовавни «вай І7 їв) Авповек був веїг лЛепоАтоа Аа Чаї тТук був був Мебє РО обех ТТ ї 5 їй 15 сій Бех дБроуаії 29 «8102 18 «тії й -122 Білок ква» штучна послідовність чего» «вазах синтезований «епох ІВ сіу з1іУу Авропем біу Так вгУ Ака сСіУу Бек Аза НівББ Вп ББЖ ВеХ Цей ї В 15 І5 січ Бех бій Уяі 2о «вух о «81ї» 20 «1» Вілок «йі3» іуучна песлідевнаитть «аг» «їз синтевований «00 19 сів РЕ ТтВвЖ о рКо ТЕ без біу ей дво пед біу Ап оАБр оБто дно аку і а Ії 15 біу тлу бек те «10» во «-ав15 г сивим БІВОаЖ «ІЗ» ШЩеучна послідовність «ДВ» «233» синтезований «ай» 30
Мек пій ех ї1е рго був Мебє Бек Нів бек Бех біу Меб Рго без СТУ ї 5 10 15 віз тах біу Бей йо «йи10» 21 «21їх 20 «іш» Білок «й13» Штучна лпослідсвність
А
«й» ка2й» синоеввований «яп 1 сій дп Ре АТ отТнк ТуУук Був біз біу тує два Уві ук сі тіє біз 1 а 16 ї5
ЗеЕ Хаї Був їїв «рій» «115 20 «із Білок «13 Щвучив поплтлевність «их пе?йа» синтезований «40 2 бів Ввп о тТух Аза тТпе Ту Ахку 51ч4 Сіу Ту Азп Уа) Тух сі ТпкКобів ї 5 19 15 бБву маї був'тіє о «0» в «їх дО -2122 Білож «В ех послі ден єть
ДЯ
«223» синтезований епох нів ть бу ТвКоАта гі Ага бів бек бек піУу Івм дів Уві т1ї6 Аїа 1 їх 18 15 й вех АБ: без вк 20 «10» 24 «11» 9 «Фгійв Вілок сеї уча послідовність «ох кага3» синтезовані «апп ий
Бєх Бе Тк обес тів ей Тв Су Вів бхуп оАКЧ Ахо Так біло АхЯ пу 1 5 ха та
Сі тТвх уві дів 2 «10» 5 кха1ї2 ий «12 Біпох «13» Щйтучив поспіпевність сво»
«ух сидтезований «ПО 5 біз уаї Ті Авп меж Нів ТНх Ре аАБа Або Аго гу їбец Бко 01у ух 1 5 її: 15 біз тк Ме діа «ві 26 шжіїм 5 «та Білок «ІЗ Штучна послідоЗаність си «ві» сяантєвований. «а00» 25
Тів бів тах АтТа туаї ї 5 «2105 57 «1124 «ій БІЛОК «ІЗ» Штучна послідовнасть я Ця «шум сицдтевовпавий кад 27
Бех тас Уаї маї 1 «210 258 -хїх «1» Білок. «уз» ШщеУучна послідовність «ша «ад синтезований «айви В
НЕ Ак обо вет 3 «аїр и «Фі ж а кій Білок «ді» Мтучна досліловнісу» «гоп сей» шинтезнезваций кап» га бі; Бек єтц Уві ї
«Ох 30 «01ї 4 «г1йх Біле. «13» Штучна цпослідевнасть их «ве3ЗмМ сянтезованимМ «поп. за тв був бід Бех 1 «ій» 3 «їз а «-912з Білою «9135 Штучна послідовність «ВО «йват синтезований «ап Ук біУ тТвт Бек їІ1Є і кер З 52112 4 вї2» пімст «213» Штучна послідовність се» «23» синтезеваний «ап зо діа ТЕ сту цей ї «ВІі0» 43 «вії 4 чиїй Білок «від Штучна послідовність чо х тваЗ» пинтевеваний «00» З вах Уа«ії Був тїе
З
«10» 34 «їз «ій пілОоК «ІЗ Штучна песлідовнієть в «03 синтезований «вах 38 век Аяр без Рко йя «им 55 свії5 4 вІйх Білок «йіЗ» Штучна послідзвністев «ех к223» Синтезований бів тп Уві дів 1 «ВР» 35 «2115 4 кеїшй» Білок «віз штучна поснедовність «ва» «й» синтезований «40й 35 січ тис Ме дід 1 «щІйх З «2112 2 2122 Білок «3» Щтучна послідсовиїовь «5905 «Бай» сивтезований «4002 37
Ак Ач дхд Сіп Ага ага Був Бу Ако біу Тух ру ей бег Бех 11е 1 5 10 15
Сі вах Авр оуві 2 «805 38 «-81ї» й «вій» Бідожк «213» Штучне послідовніств кг» сива» синтезований квЕйх «дах» ВАЕТАНТ «ай» і крвеаю Хай я Ж, Б, М 8005 0 «ах «2піх ВАРІДНТ «ййй з
«гі Хаа - 5 або т пив ВАБЕАКТ -авиж З «й» Хай є Пп, В, б або М «гай «221» ВАВІДНТ «вай 4 пада» хва з М во «30 38
Ха Хва Хав Хай 1 «від» З -«1ї 4 кій» Білож «|З» Црвусєма послідовність «ай «ве? слитезвований «ап За іш тТнх АБО Уві ї «2102 40 ч«азїії» й ситах БілЛУуК «2135 Штучна ПОсСЛІідОовніств «во «аж синтезований ко» 40 бі тех бі; Уаї 1 «гій» 41 камі а сити піна «2155 Штучна послідевнисть ках «ви» синтезований «йо» 4
Авр о тТпт Ар У 1 кій» 45 ст11з 4 «-2125 Білок «213 Штучна послідовна сть кох «ше? синтезований «400 49
Аввотапх бі Уаї ї «під» 43 «115 «аз БІЛОК кв1З» Штучна поОснідовність «Ріо» чеше» синтезований «400» 43 їув цей Бек Бек тів с15 тТпх дер Уваї 1 5 еї05 44 «ЗІ 5 «ші БІідоК ки» Штучна лпаслідовність -2202 крам сивтезчуваний «оо» да бі Бек Бек бек бег 1 5 «вій» ах -в11» 5 «Ей» Біл зе «из Штучна послідавнішть ха «Тез» динтецчеваний «400» 45
Таг о соЇУу біб Був рго ї 5 «210 4 «2115 8 12» Біло «жі» Штучна послідовність «об» «232» синтевований «400» 45 піт біу дез вка біу пі бі1у Бех 1 а о У
-1ї 9 «війх ВілеВ сі» Щеучна послідовншсвь «й й «ай» синтезований «з 4002 47 реп дк біб АКЯ АБО біу біз Ак СрЕо 1. 5 «?102 48 -в1ї2 13 «газ БідОК крізи Цеучна поспілеовність «ДВ «шезк синтезований чадо» 48
Тух Біу ВгЯЧ пув Був Аг АтУ Біб АкУ КУ Аа о РгОо бій 1 5 16 59 «Ії 11 «212 Білок «215» Штучна послідоввість «Ро кара» синтевований «ий «йе1» ВАРІДНТ «вва і «ша хай є відсутній або вмінсюислотва, відмінна від ї «ПО 5
Хаа піу са вуз ув агЯ Аку бій дру Ах АЄЕд 1 В 10 «10 50 «їх її «щем Відок. «КА» Штучна ПОСлЛіцавнаість «2302 «ве сиве новамий: «их «ойї» ВАВІБИІ край» і «иїам Хаа ст відсутній збо будь-яка вмунакистета «кА» 50 ха біу ув Був цу Пув Був бів Був Був цуУВ ї 5 10
«віз ВІ «й 0 «підт Білею «213» Штучна послідовність «ке «23-х синтезований «990» «а2ї1з ВАТА «й 1 «га» Хаа ж ВІДСУТНІЙ або будь-яка дмавокислота кад» ці
Хаз вч БУ ву Аква Ах БІВ Ага АКЧ АК ї В о «10 ай хжі11» 11 «ФиТ0х Білож «210» Штучна послідовність «йо» «35 синтезований «800 ке ВАРІВИТ «вй «везе Хай ст вілсутвій або будь-яка амівОокислота «4005 55
ХхХаг Сі АТа Був пу вка Ак біп Ак Ака АК 1 З 19 «210» 53 -в11х ТО «ей» Бінпак «513» Штучна неслідовниість «й «га» синтезований «ше0» «їз ВАРІАВЕТ «айи їі «вра аа т відсутній айй бунль-яка пмінокисмьга «00 53
Хва йіа Був уз Ага Ач БіпсаКо АКЧ АКкФ 1 5 10 «2105 58 ка1ї» ІЕЕ «кий» БІЛОК «233» Штучна послідовність «ради «шйав синтезований
«Р? «де ВАРІАНТ «ат 1 «пт» Ха - відсутній або будь-яка амікоМислеопа «4005 54
Хаа сі Ага бує іа дк Ага бій Ака ко АКко 1 іі 5 «тах 55 «11 а «122 Білок «іа» Штуєна послідовність «вих «ах синтезований «ве «им ВАБІДЦТ «ВИйт 1 «сесії ква ох відсутній або будь-яка змінокиснлота «або» У
Хав АхчЧ ув Аза Ак Ага Сі АкУ АБУ ЕФ 1 5 16 «аІ0»вь «112 11 «ийх Кілох «вах Штучна послідовність «йо» сти Фип'теЗОвВаВиЙ «й «ТІ» ВАРІАНТ «ев 1 «232 Хай х відсутній вОбо будь-яка амінокислота каз В каа бі Ака Був ув Аїа хо б1іп Ат о Аха Аг 1 5 ІЗ «ВІ 57 2115 15 «вій Вілик «213 Штучий пеоспідвсннісять каз пий» сдиптезсвЗний ках «геї» ВАРІАНТ «Ей «Раз Хай - віьдоутній або йудь-яка гмінокислота «4002 57
Хва-Аку Був Му Аа АкКу бій Аа Ак АКУ
1 З 10 «10 58 «вії» 11 «рій Білок «із» Штучна послідовність «ай» «ла синтезований «ах «РІЇ» ВАВТАВТ «ит 1 «ад ха ее відсутній збо будь-яка амінокислота «ре яд
Хва с1у ка пуз Був Ака Ака Чіп дів Ака Аку 1 5 10 «0 53 ч-ві1ї» 10 «дій Білок «вій Шетузнва їнльдовність «вах ке» синтезований «Тай» «в21м вАБІДНІ «то 1 чпеам Кай г Бідпутній збо будь-яка вмінБокКислота «оп сво
Хаз Аг БУВ БУВ АКа АКУ сій Атїта Ак Аа 1 5 то -і0 Б «11 11 «їн» ій «зак Штучна послідовність «ад кагїх синтезований «2 «сгшї»М ВАРІДНІТ «ой 1 «аа» да є відсутній оо будь-яка амімокислата «ах БО
Хай біу дго Був пу АК Аа ОТ Абу вія Акб 1 й 18 «2102 51 кіїх 10 свій» Білик
ВУХ Штучна послідовна кер «по Ух стпизуаазований кине «У2ї1з ВАРІДЕТ кад» 1 «гай» Ха: з відсутнів або йурь-яка амівокислота квТо0х 1
Хва Ага бу Був Аку Ага Бій Акб діа ва 1 5 38 -« 210 52 її 19 «дій ділсек. «від» шШтучиа послідов лть ки «ай синтезований чав «Ей1м ВАРІДНТІ «вай 1 «гі Хаз з відсутній або булде-неа амівскислета капа» 52
ХхХаа Ахч Ага ВЕОо вс Ах рКо вч гц го вка Аг ї З 15 «210» 53
Р» 17 чик Білок
ЕВ» Штучна посСслудсвністе «а «шгй» синтезований «820 «рах ВАРІАНТ «вза У касі» ква з вівсУтній абс будь-яка змінокислота ска 63
Хзва ДЕ Бо Ат Ак Ас Аза Ахч о АгуУ ів АжЯ АК 1 5 то че10 ба «1» 1 «щій» Білок «кіЗв штучна послійсвнісуєь «ев их «23 синтезований «а «тйіїх» ВАВХАНТ «ва» 1
2323 Хаа з відсутній або будь-якяи амімсвиснота «400» Ба
Хаа Зко Ах Аху Віа вко зх Ага Аза Ака Ага і З їй «віх 5 ких ТІ «г185 Білок кій» Штучна поспіповніств «йййм «еВ синтезований «й «різ ВАРІАНТ «ур 1 са» Жах т відсутній або будь-яка амінокислота «дО» бо ач АкчЧ Ахч Ага РКО сАКа Ака Ак Ро Ака Аго 1 З то «ар Бе «їх З «Вібх Білож «пі» Щтучна поса цевмстк ше «ах синтезований «00 «гаї ВАРІБНУТ «вий «шах хай ях відсутній або будь-яка амінокислета «оз ев
Хас АхчЧч АкЯ ВКос зка Ах РКО Ака Аку
І 5 «10 657 кеїії» З «Вій Білак «Вій» Штучна пеосльдовність «ав» «ший спинтезеваний «280» «Різ ВАРІДНТ кайам 1 «2735» Хва е віцоутній ваз будь-яка амінокислеата. «(Ну 67
Хаз АкЯ дка Атїа Ак Агу АТа Ака Ах їх В
«фі 68 «вії» 4 «піз Бійск «23» Штучне послідовність «202 ква» сивтевований «290» «гі ВАрРІДАТ кайих «ака Жава т ЖЕ, 0, А абш їх авалог «ВХ «иМ1м ВАРІАНТ «айй «ге3» Хай - т або й «0 «ее1ї1У ВАВІДНТ край. З «23» Хай от в, 0, 0, М. М-Ме-А, М-Ме-о, М-Ме-, М-Ме-й вбо хх аналог «Оп» БВ
ХхХав Хай кай Чаї я «аа З «11 и «рій» Білок «13 Штучна послідеввхств сад «ай синтезовамий «400 59
Щі дар бех сів ті Бек бет Пен Бубз Аа АхЯ ка іп АЖУ Ах Був 1 2 іо 15 пуз вах біу туш тів Аве о «-й105 т «пр й «ага» Білок «йі3» Штучна послідлевнУсть «й квиї» тинтезований «ВО 79 дкз Ага Ага сій Аа Аго Був цу Ака сіу Туг Буя Бей Зег бек Т1е 1 | З 15 і15 біз Бек Авр уві «2105 71 «вт 1оїь
«Вій» Білак «2132 Штучна послідсвніств «Зах «аа: синтезований «аа ті
ІБе сій Бек Ар Уві 1 В «їм 7 «ві «125 рілоЖ «3 Штучна дсаслійовнисть «арх «3» синтезовакий «400» 72 сі АкЯ ГУ Бу АБЯ АК бій вка АхЯ Ах ВКго 1 5 19 «2105 73 «11» 5 свій» Білож кві» Штучна послідовність «оо кий» синтевований «ЩО» 73
Іїв піц тот о Авроуаї

Claims (31)

1 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Хлоридна сіль пептиду, який являє собою ТАТ-МК2Вос, де хлорид становить більше ніж 95 95 молів усіх аніонів, що містяться в солі.
2. Хлоридна сіль за п. 1, отримана шляхом обміну трифторацетату на хлорид в трифторацетатній солі ТАТ-МК2ВО9с.
3. Хлоридна сіль за п. 1, отримана шляхом обміну трифторацетату на ацетат, а потім ацетату на хлорид, виходячи з трифторацетатної солі ТАТ-МК2В9с.
4. Хлоридна сіль за п. 1, в якій більше ніж 99 95 молів аніонів в солі являють собою хлорид.
5. Попередньо ліофілізований склад для лікування інсульту, церебральної ішемії, черепно- мозкової травми або субарахноїдального крововиливу, що містить хлоридну сіль за будь-яким з попередніх пунктів, буфер та цукор, при цьому ацетат та трифторацетат окремо і разом складають менше ніж 5 95 молів аніонів складу.
6. Попередньо ліофілізований склад за п. 5, в якому буфером є гістидин, цукром є трегалоза, а рН становить 6-7.
7. Попередньо ліофілізований склад за п. 5 або 6, в якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 1 95 за масою аніонів у складі.
8. Попередньо ліофілізований склад за п. 5 або 6, в якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі.
9. Попередньо ліофілізований склад за будь-яким з пп. 5-8, в якому хлоридна сіль пептиду має концентрацію 770-120 мг/мл, гістидин має концентрацію 15-100 мМ, а трегалоза має концентрацію 80-160 мМ.
10. Попередньо ліофілізований склад за п. 9, в якому хлоридна сіль пептиду має концентрацію 70-120 мг/мл, гістидин має концентрацію 20-100 мМ, а трегалоза має концентрацію 100-140 мм.
11. Попередньо ліофілізований склад за будь-яким з пп. 5-8, в якому ТАТ-МК2ВОс має концентрацію 70-120 мг/мл, концентрація гістидину становить 20-50 мМ, а концентрація трегалози становить 100-140 мМ.
12. Попередньо ліофілізований склад за будь-яким з пп. 5-8, в якому концентрація гістидину становить 20 мМ, концентрація трегалози становить 100-200 мМ, переважно 120 мМ, а концентрація ТАТ-МК2ВОс становить 90 мг/мл.
13. Ліофілізований склад для лікування інсульту, церебральної ішемії, черепно-мозкової травми або субарахноїдального крововиливу, отриманий шляхом ліофілізації попередньо ліофілізованого складу за будь-яким з пп. 1-12.
14. Ліофілізований склад за п. 12, в якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 1 95 за масою аніонів у складі.
15. Ліофілізований склад за п. 12, у якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі.
16. Відновлений склад для лікування інсульту, церебральної ішемії, черепно-мозкової травми або субарахноїдального крововиливу, отриманий шляхом об'єднання ліофілізованого складу за будь-яким з пп. 6-15 з водним розчином.
17. Відновлений склад за п. 16, в якому водним розчином є вода або нормальний сольовий розчин.
18. Відновлений склад за п. 16, в якому об'єм відновленого складу являє собою 3-6-кратний об'єм попередньо ліофілізованого складу.
19. Відновлений склад, що містить хлоридну сіль ТАТ-МК2ВОс при концентрації 15-25 мг/мл, буфер та цукор, де хлорид становить більше ніж 95 95 молів усіх аніонів, що містяться в солі.
20. Відновлений склад за п. 19, в якому буфером є гістидин при концентрації 4-20 мМ, цукром є трегалоза при концентрації 20-30 мМ, а рН становить 6-7.
21. Відновлений склад за п. 20, в якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 1 95 за масою аніонів у складі.
22. Відновлений склад за п. 20, в якому кожний з ацетату та трифторацетату містить менше ніж 0,1 95 за масою аніонів у складі.
23. Спосіб отримання складу, що включає: Зо зберігання зразка ліофілізованого складу за будь-яким з пп. 6-15 протягом щонайменше тижня при температурі щонайменше 20 "С; та відновлення ліофілізованого складу.
24. Спосіб за п. 23, в якому ліофілізований склад відновлюють у воді.
25. Спосіб за п 23, в якому ліофілізований склад відновлюють у сольовому розчині.
26. Спосіб за п. 23, в якому склад зберігають протягом щонайменше року.
27. Спосіб за п. 26, в якому зберігання здійснюють при навколишній температурі.
28. Спосіб за п. 27, в якому зберігання передбачає періоди, при яких температура перевищує 37
"б.
29. Спосіб за п. 23, в якому ліофілізований зразок зберігають в машині швидкої допомоги.
30. Застосування хлоридної солі пептиду за будь-яким із пп. 1-4 у виготовленні лікарського засобу для зниження руйнівних наслідків інсульту або іншого ішемічного стану.
31. Склад, приготований з хлоридної солі пептиду, за будь-яким із пп. 1-4, в якому ацетат та трифторацетат у поєднанні або окремо складають менше ніж 5 95 молів аніонів складу.
Ефективність різних складія МА-1 у відношенні ЗРМО ж пн а а ння у Б ! пн ЩО з х Дунннтнннннняннннкннкннтнннн ши Е «іш "ши ши ще тв вв Н З З « М : іх ої
2. ке М. . кіно -- - зкекекккююєння шк яко о щ-к . Е З шк шк усослоююттсо псомосореін В ши ші й Фк Скла МеЯїА 0 бющаМмеЗ (В) Сольозий мучив о Скала Мі бкнаА МУК Склах Ме 5 ОВУ У Види лікування
Фіг. 1
Чистота (спосій МА: ЇЇ міїмил МА-Ї в 50 мМ буферах т 200 мМ Масі ОЗ ак КОП Ох ЗХ СИ В Я се ше ше о ш-иее ш ш 5 Мене МИШКИ Б 085 0 БО 0 З, і зе З ще ЗК В ОЗ ШШЕ 5 МОРЕ в3 В ен ВВ КБ В ВА В В В не б - -щешн 3 ши -Щ Б - не - рили ше шнек НК НН ЗИ жен Я СОЯ В нон В-ВО ВВ ВА, Ей века вВАБО рн ща НЕ вне вн Ме Бо СЕ а не ве Ся Ся м ка
Фіг. М. Графік результатів чистоти, спосіб МЗА (за рн) в Чистота (спосіб МОДА): Я міїми МАЯ я 50 ММ буферах х 200 мМ масі у нини: ни в що ин ше НН сн не НН Не НН Не Ши ООН СОН : Ж Ко ЕХ я де ЗХ СМ КЕ жи ше ше - шен - 5 яка я Но шк нин н- б о А ше - - - ши - ще же - - - ши 5-5 5 БЕ же - - - -не - се ше ше - нн о. ш ща дк НИ: НЕ НЕ ШИ 0-Х... В... БО РНБО рах вах щбаш вм вм внНКХ вна вовна яко Меежа БЕЗ рух се ЩЕ» ве чі Фіг, 2А, В
Чистота (спосіб МБА): 20 мі/ми МА-Ї в 50 ММ гістидину, рН 65,5 ши шщ ш щ щш ши ше що щ. о. Сх . З со ар м - В-во о -'і ше ш- що В ши шщ щ щ щ зва ЯКО Я СВ КК 00... Маніт Манітї Трегалоза Трегалоза Декстран-4О Декстран-ою «масі часі «масі
Фіг. З
UAA201613470A 2014-05-28 2015-05-28 Хлоридна сіль пептиду tat-nr2b9c UA123820C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462004142P 2014-05-28 2014-05-28
PCT/IB2015/053995 WO2015181756A1 (en) 2014-05-28 2015-05-28 Chloride salt of tat-nr2b9c

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA123820C2 true UA123820C2 (uk) 2021-06-09

Family

ID=54698210

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201613470A UA123820C2 (uk) 2014-05-28 2015-05-28 Хлоридна сіль пептиду tat-nr2b9c

Country Status (26)

Country Link
US (4) US10206973B2 (uk)
EP (2) EP3757134B1 (uk)
JP (4) JP6622222B2 (uk)
KR (3) KR102407856B1 (uk)
CN (2) CN114057895A (uk)
AU (2) AU2015265487B2 (uk)
BR (1) BR112016027814A2 (uk)
CA (1) CA2950395C (uk)
CY (1) CY1122793T1 (uk)
DK (1) DK3149048T3 (uk)
ES (1) ES2784500T3 (uk)
HR (1) HRP20200462T1 (uk)
HU (1) HUE049074T2 (uk)
IL (1) IL249252B (uk)
LT (1) LT3149048T (uk)
ME (1) ME03790B (uk)
MX (2) MX2016015457A (uk)
PL (1) PL3149048T3 (uk)
PT (1) PT3149048T (uk)
RS (1) RS60625B1 (uk)
RU (2) RU2019138024A (uk)
SG (2) SG10202001285XA (uk)
SI (1) SI3149048T1 (uk)
UA (1) UA123820C2 (uk)
WO (1) WO2015181756A1 (uk)
ZA (1) ZA201608843B (uk)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2172211B1 (en) * 2008-10-01 2014-12-03 Immatics Biotechnologies GmbH Composition of tumor-associated peptides and related anti-cancer vaccine for the treatment of glioblastoma (GBM) and other cancers
US10251935B2 (en) * 2012-11-28 2019-04-09 Nono Inc. Lyophilized formulation comprising tat-NR2B9C, histidine and trehalose
GB201319446D0 (en) 2013-11-04 2013-12-18 Immatics Biotechnologies Gmbh Personalized immunotherapy against several neuronal and brain tumors
CN114057895A (zh) 2014-05-28 2022-02-18 诺诺公司 TAT-NR2B9c的氯盐
US10206878B2 (en) 2014-05-28 2019-02-19 Nono Inc. Lyophilized formulation of TAT-NR2B9C with acetylation scavenger
MY191654A (en) 2015-07-01 2022-07-05 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
GB201511546D0 (en) 2015-07-01 2015-08-12 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against ovarian cancer and other cancers
GB201620611D0 (en) * 2016-12-05 2017-01-18 Univ Of Lancaster Treatment of neurological diseases
US11767344B2 (en) 2017-07-05 2023-09-26 Biocells (Beijing) Biotech Co., Ltd. Pharmaceutically acceptable salts of polypeptides and methods of inhibiting the interaction between psd-95 and n-methyl-d-aspartic acid receptor (nmdar)
CN110627877A (zh) * 2019-09-25 2019-12-31 成都奥达生物科技有限公司 一种psd-95抑制剂
CN111560050A (zh) * 2020-05-25 2020-08-21 成都圣诺生物制药有限公司 一种Nerinetide的制备方法

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6685940B2 (en) * 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
PT2275119E (pt) * 1995-07-27 2013-11-21 Genentech Inc Formulação de proteína liofilizada isotónica estável
US7510824B2 (en) 1999-06-02 2009-03-31 Nono Inc. Method of screening peptides useful in treating traumatic injury to the brain or spinal cord
US9101590B2 (en) * 2005-07-29 2015-08-11 Yale University Defined culture conditions of human embryonic stem cells
JO3324B1 (ar) * 2006-04-21 2019-03-13 Amgen Inc مركبات علاجية مجففة بالتبريد تتعلق بالعصارة الهضمية
EP1884521A1 (en) 2006-07-31 2008-02-06 Xigen S.A. Fusion peptide for inhibiting interaction of neuronal NMDA receptor (NMDAR) and NMDAR interacting proteins
DK2120987T3 (en) 2007-03-02 2014-02-24 Nono Inc Treatment of stroke and other diseases without inhibiting N-type calcium channels
WO2008150479A2 (en) * 2007-06-01 2008-12-11 Acologix, Inc. High temperature stable peptide formulation
US8008253B2 (en) * 2007-07-03 2011-08-30 Andrew Tasker Treatment for anxiety
DK2320927T3 (en) * 2008-07-09 2015-09-14 Univ Copenhagen Modified peptides as potent inhibitors of the PSD-95 / NMDA receptor interaction
EP2440230B1 (en) * 2009-06-10 2020-11-11 NoNO Inc. Treatment regimes for treatment of neurological disease
CA2807946C (en) * 2010-08-12 2018-09-25 Nono Inc. Treatment of penetrative injury to the brain
EP2621945B1 (en) * 2010-09-28 2018-04-11 NoNO Inc. Nd2 peptides and methods of treating neurological disease
AU2012257774C1 (en) * 2011-05-13 2016-11-03 Kobenhavns Universitet (University Of Copenhagen) High-affinity, dimeric inhibitors of PSD-95 as efficient neuroprotectants against ischemic brain damage and for treatment of pain
CN102241745A (zh) * 2011-05-19 2011-11-16 南京医科大学 多肽类似物Tat-HA-NR2B9C及其制备方法和应用
HRP20220519T1 (hr) * 2011-06-24 2022-05-27 Nono Inc. Kombinacijska terapija ishemije
KR20200057802A (ko) 2011-12-13 2020-05-26 노노 인코포레이티드 지주막하 출혈 및 허혈에 대한 치료법
US9241970B2 (en) * 2011-12-13 2016-01-26 Nono Inc. Therapy for subarachnoid hemorrhage and ischemia
GB201220474D0 (en) * 2012-11-14 2012-12-26 Sagetis Biotech Sl Polypeptides
US10251935B2 (en) 2012-11-28 2019-04-09 Nono Inc. Lyophilized formulation comprising tat-NR2B9C, histidine and trehalose
DK2925338T3 (da) 2012-11-28 2019-05-06 Nono Inc Frysetørret formulering af tat-nr2b9c
CN114057895A (zh) 2014-05-28 2022-02-18 诺诺公司 TAT-NR2B9c的氯盐
US10206878B2 (en) 2014-05-28 2019-02-19 Nono Inc. Lyophilized formulation of TAT-NR2B9C with acetylation scavenger

Also Published As

Publication number Publication date
DK3149048T3 (en) 2020-04-14
LT3149048T (lt) 2020-05-11
IL249252B (en) 2021-06-30
KR102311038B1 (ko) 2021-10-07
KR20220082113A (ko) 2022-06-16
MX2020009633A (es) 2020-10-08
ES2784500T3 (es) 2020-09-28
US20220175880A1 (en) 2022-06-09
CN114057895A (zh) 2022-02-18
JP2022023122A (ja) 2022-02-07
AU2015265487B2 (en) 2020-08-13
US11911438B2 (en) 2024-02-27
RU2019138024A (ru) 2019-12-05
KR102407856B1 (ko) 2022-06-10
MX2016015457A (es) 2017-06-30
CN106661126A (zh) 2017-05-10
PT3149048T (pt) 2020-04-21
AU2015265487A1 (en) 2017-01-12
SG11201609911YA (en) 2016-12-29
AU2020267304B2 (en) 2023-10-05
US11266714B2 (en) 2022-03-08
EP3757134A1 (en) 2020-12-30
US10206973B2 (en) 2019-02-19
US10758589B2 (en) 2020-09-01
AU2020267304C1 (en) 2024-03-14
CA2950395A1 (en) 2015-12-03
CY1122793T1 (el) 2021-05-05
RU2016150678A3 (uk) 2018-12-25
US20190175689A1 (en) 2019-06-13
SG10202001285XA (en) 2020-04-29
SI3149048T1 (sl) 2020-08-31
CA2950395C (en) 2023-03-21
US20200384071A1 (en) 2020-12-10
PL3149048T3 (pl) 2020-06-29
HUE049074T2 (hu) 2020-08-28
EP3149048B1 (en) 2020-01-29
EP3757134B1 (en) 2024-03-06
ZA201608843B (en) 2019-04-24
JP6961661B2 (ja) 2021-11-05
JP7338890B2 (ja) 2023-09-05
CN106661126B (zh) 2021-12-10
KR102605540B1 (ko) 2023-11-22
AU2020267304A1 (en) 2020-12-10
JP2023113751A (ja) 2023-08-16
KR20210125109A (ko) 2021-10-15
KR20170020820A (ko) 2017-02-24
HRP20200462T1 (hr) 2020-10-16
RU2707885C2 (ru) 2019-12-02
JP6622222B2 (ja) 2019-12-18
JP2017517517A (ja) 2017-06-29
BR112016027814A2 (pt) 2017-10-24
EP3149048A4 (en) 2018-01-03
JP2020045352A (ja) 2020-03-26
US20170119845A1 (en) 2017-05-04
IL249252A0 (en) 2017-02-28
WO2015181756A1 (en) 2015-12-03
ME03790B (me) 2021-04-20
RU2016150678A (ru) 2018-07-02
EP3149048A1 (en) 2017-04-05
RS60625B1 (sr) 2020-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA123820C2 (uk) Хлоридна сіль пептиду tat-nr2b9c
KR102166374B1 (ko) Tat-nr2b9c의 동결건조된 제형
US20220096383A1 (en) Lyophilized formulation of tat-nr2b9c with acetylation scavenger