UA121880C2

UA121880C2 - Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин

Info

Publication number: UA121880C2
Application number: UAA201708271A
Authority: UA
Inventors: Сон-Йон Х. Юн; Кетлін Сордс; Кэтлин Сордс; Д. Рай ВАГНЕР; Сельвасундарам Раджагопал
Original assignee: Агрінос Ас; Агринос Ас
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2016-02-26
Publication date: 2020-08-10
Also published as: US20180235236A1; US11230506B2; NZ734547A; WO2016135698A1; CA2977178A1; CN107787360A; EP3262152A1; RU2017133313A; AU2016224901B2; MX2017010787A; BR112017018115A2; US20190307131A1; AR103799A1; RU2727830C2; RU2017133313A3; CN107787360B; AU2016224901A1

Abstract

Винахід стосується мікробного консорціуму та композиції, які включають мікроби для застосування у сільському господарстві або для біодеградації. У деяких варіантах втілення ґрунт, рослини та/або частини рослин (такі як насіння, сіянці, паростки, корені, листя, плоди, стебла або гілки) контактують з описаними мікробними консорціумами або композицією, що включає мікроби. Мікробні консорціуми або композиції, що містять мікроби, можуть застосовуватися на ґрунті, рослині та/або частинах рослини окремо або у комбінації з додатковими компонентами (такими як хітин, хітозан, глюкозамін, амінокислоти та/або рідке добриво). У додаткових варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції, які включають мікроби, застосовують згідно зі способами розщеплення біологічних матеріалів, таких як хітиновмісні біологічні матеріали.

Description

Дана заявка заявляє пріоритет для попередньої заявки США Мо 62/126,323, поданої 27 лютого 2015 р., яка є включеною до цього опису шляхом посилання у повному обсязі.

Галузь винаходу

Даний винахід стосується мікробних консорціумів та способів застосування мікробів, включених до консорціумів, зокрема, для біодеградації та сільськогосподарських процесів і застосування у сільському господарстві.

Рівень техніки

У світі зростає потреба у продуктах харчування під тиском невпинного росту населення.

Однак працівники сільського господарства, крім інших проблем, постають перед зменшенням земель, доступних для сільського господарства, виснаженням грунтів та зміною умов навколишнього середовища. Таким чином, існує потреба у розробці композицій та способів, які дозволяють збільшувати виробництво продуктів харчування з одночасним зменшенням застосування потенційно шкідливих гербіцидів, інсектицидів та фунгіцидів.

Короткий опис винаходу

Авторами описуються мікробні консорціуми та композиції, які включають мікроби для застосування у сільському господарстві або для біодеградації. У деяких варіантах втілення мікробна композиція згідно з даним винаходом являє собою мікробний консорціум, який був депонований в Американській колекції типових культур (АТСС, Мапаззав5, МА) 25 листопада 2014 р. і отримав номер депонування РТА-121750 (у цій заявці також вказується як А1001), або композицію, яка включає деякі або всі мікроби у А1001. У інших варіантах втілення композиція згідно з даним винаходом включає мікроби п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васійй5 в5рр., Аго5ріпйшт в5рр., Резепдотопа5 зрр., Іасіобасіїйив5 5рр.,

Резинососсив 5рр., Оезипоїотасиїшт 5рр., Магіпобрасієг 5рр., Мігозоритійй5 5рр. ВНитіпососсив 5рр., Адиабасієтцт 5рр., Герюіупдруа з5рр., І еріозрійНит з5рр., Раєпірасійи5 5рр., Містосоїєи5 5рр., Сіовігідіит 5рр., Хепососсив 5рр., Асеїюбасівг зрр., Сапаїдацве 5рр. та Меїйапозавєїа 5рр. У додаткових варіантах втілення композиція включає п'ять або більшу кількість (наприклад, 5, 10, 15, 20 або більше) мікробів, перелічених у Таблиці 1. Описані композиції також можуть включати додаткові компоненти, включаючи, крім інших, один або декілька додаткових видів мікробів, хітин, хітозан, глюкозамін та/або амінокислоти.

Зо Також описується сільськогосподарське застосування описаних мікробних консорціумів або композицій. У деяких варіантах втілення способи (застосування) включають контактування грунту, рослин та/або частин рослин (таких як насіння, сіянці, паростки, листя, стебла або гілки) з описаним мікробним консорціумом (таким як А1001), причому композиція включає деякі або всі мікроби з А1001, або композиція включає п'ять або більше з мікробних видів, перелічених у

Таблиці 1. Мікробні консорціуми або композиції, що містять мікроби, можуть застосовуватися на грунті, рослині та/або частинах рослини окремо або у комбінації з додатковими компонентами (такими як додаткові мікроби, хітин, хітозан, глюкозамін, амінокислоти та/або добавки до грунту або добрива, такі як рідкі добрива).

У додаткових варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції, які включають мікроби, застосовують згідно зі способами розщеплення біологічних матеріалів, таких, як хітиновмісні біологічні матеріали. У деяких прикладах хітиновмісні матеріали змішують з мікробним консорціумом (таким як АТ001) або композицією, яка включає п'ять або більше з мікробних видів, перелічених у Таблиці 1, і ферментують для утворення ферментованої суміші.

Ферментовану суміш необов'язково розділяють на тверду та рідку фракції. Ферментовану суміш або одержані з неї фракції застосовують у сільському господарстві у комбінації з описаними мікробними консорціумами або композиціями або застосовують у процесах подальшого розщеплення, наприклад, для підвищення рівня продуктів розщеплення у фракціях.

Вищезгадані та інші особливості винаходу стануть більш очевидними по ознайомленню з представленим нижче детальним описом, який подано з посиланням на супровідні фігури.

Короткий опис фігур

Фігура 1 схематично представляє типовий процес ферментації, який застосовують для одержання мікробного консорціуму А1001.

Фігура 2 схематично представляє типовий процес біодеградації хітиновмісного біологічного матеріалу (на прикладі креветкових відходів) описаним мікробним консорціумом або мікробною композицією.

Фігура З схематично представляє типовий процес біодеградації хітину описаним мікробним консорціумом або мікробною композицією (такою як А1001).

Фігури 4А-42ї є графіками, які представляють вплив на результат обробки кукурудзи мікробною композицією (Фігури 4А-4С та 4Е), НУТЬ (Фігури 40 та 4Р) або мікробною бо композицією в умовах дефіциту води (Фігура 45).

Фігури БА-50 демонструють вплив обробки пшениці мікробною композицією (ФІГУРИ 5А-58) або мікробною композицією плюс НУТЬ (Фігура 5С). Фігура 50 є цифровим зображенням, на якому показано коріння рослин пшениці, оброблених мікробною композицією плюс НУТЬ (випробування), у порівнянні з контрольними рослинами.

Фігури бА-6Е представляють низку графіків, на яких показано вплив на результат обробки томатів мікробною композицією.

Фігура 7 є графіком, який показує вплив на результат обробки соняшника мікробною композицією.

Фігура 8 є графіком, який показує вплив на результат обробки рису мікробною композицією.

Фігури 9А-9В показують вплив на результат обробки сої мікробною композицією (Фігура 9А) або мікробною композицією плюс НУТЬ (Фігура 9В).

Фігура 10 є графіком, який показує вплив на результат обробки полуниць мікробною композицією плюс НУТ.

Фігура 11 є графіком, який показує вплив на результат обробки столового буряка мікробною композицією плюс НУТ.

Фігури 12А та 128 є графіками, які представляють вплив на результат обробки савойської капусти мікробною композицією плюс НУТЬ у двох випробуваннях (Фігури 12А та 128, відповідно).

Фігура 13 є графіком аналізу життєздатності огірків, на якому показано індекс площі першого листа на 18-й день у рослин, які обробляли НУТа (А1001). "р«е0,001 згідно з аналізом АМОМА. перелік послідовностей

Будь-які нуклеїновокислотні та амінокислотні послідовності, перелічені у цьому описі або у супровідному переліку послідовностей, показано з використанням стандартних літерних скорочень для нуклеотидних основ та амінокислот, як визначено у правилі 37 С.Р.К., 5 1.822.

Принаймні у деяких випадках показано лише один ланцюг кожної нуклеїновокислотної послідовності, але слід розуміти, що комплементарний ланцюг включено шляхом будь-якого посилання на показаний ланцюг.

Послідовності БЕО ІО МО: 1 та 2 є прямими та зворотними праймерами, відповідно, які застосовують для ампліфікації 165 рДНК з АТ001.

Детальний опис винаходу

У природі на баланс мікробних видів у грунті впливають тип грунту, плодючість грунту, вологість, конкуруючі мікроби та рослини (І акхптапагп еї аї., Ріапі Рпузіо!. 166: 689-700, 2014).

Взаємодія між мікробними видами та рослинами також зазнає впливу сільськогосподарської практики, яка може поліпшити або погіршити мікробіом грунту (Адаїг еї аї., Епмігоп. Місгобіо|.

Вер. 5: 404-413, 2013; Сагропецо єї аї., Р о5 Опе 9: е99949, 2014; Ікеда єї а!., Місторев Епмігоп. 29: 50-59, 2014). Плодючі або високопродуктивні грунти мають склад природних мікробів, відмінний від того, який має грунт з вичерпаними поживними речовинами або пов'язаний з низькою врожайністю. Різні мікробні види є тісно пов'язаними з рослинами, на надземних поверхнях рослин у філосфері, на поверхні коріння у ризосфері грунту або безпосередньо як ендофіти. Великомасштабний аналіз ДНК цих мікробних асоціацій виявив несподівану філогенетичну складність (Кіпсоп-Ріоге? еї а!., Оімегейу 5: 581-612, 2013; І акоптапап еї аї., Ріапі

РНузіоі. 166: 689-700, 2014). Дослідження визначили складні мікробіоми, які можуть корелювати з продуктивністю рослин, врожайністю, стресостійкістю, накопиченням вторинних метаболітів та стійкістю до хвороб (Впагамаї еї аї., Місгобіа! СеїЇ Расіогіе5 13: 66-75, 2014; Маснегоп еї аї.,

Егопіїєгв Ріапі 5сівепсе 4: 1-19, 2014). Крім того, рослини можуть специфічно вибирати мікробні суміші з місцевого середовища та мають можливість точного регулювання мікробіому на рівні сорту культури (Нагітаптп еї аї., Ріапі 5оїїЇ 321: 235-257, 2009; ВЮбоотрбоз єї аі!., Адгоп. Зивіаїп. ЮОєм. 32: 227-243, 2012; Магазсо евї аї!., Рі о5 Опе 7: е48479, 2012; РеїНег єї а!., Ргос. Маї!. Асад. 5сі.

ИБА 110: 6548-6553; Виїдагеїії єї а!., Апп. Нему. Ріапі Віо!. 64: 807-838, 2014).

Асоційовані з корінням мікроби можуть сприяти ростові рослини та коріння через сприяння кругообігові та поглинанню поживних речовин шляхом прямої фітостимуляції, шляхом опосередковування біофертилізації або шляхом забезпечення переваг для росту через біологічне регулювання патогенів. До корисних для сільського господарства популяцій належать ризобактерії, що сприяють ростові рослин (РОРК), ризобактерії, що пригнічують патогени, мікоризи, азотфіксуючі ціанобактерії, стресостійкі ендофіти плюс мікроби з різними можливостями біорозщеплення. До мікробів, задіяних у кругообігу азоту, належать азотфіксуючі роди Агоїобасіег та Вгадугпігорішт, азотфіксуючі ціанобактерії, бактерії, що окиснюють аміак (наприклад, родів Мігозотопах5 та Миіїгоз5ріга), окиснюючі нітрити роди, такі як Миігозріга та

Мигобрасіег, та гетеротрофно денітрифікуючі бактерії (наприклад, родів Рзепдотопа5 та 60 А?озріпіит; Ігоре апа Оніє, Містобев Епмігоп. 29: 4-16, 2014). До бактерій, які є активними при солюбілізації та збільшують доступ рослин до фосфору, належать Рхепдотопах, Васійси5,

Місгососси5 та РІамобасіегічт плюс низка грибкових родів (Ріпа еї аї.,. Віотегій. Віоребі. 3: 4, 2012), тоді як види Васійй5 та Сіобігідішт сприяють солюбілізації та мобілізації калію (Мопаттасі єї аї., У. Адгіс. ВіоЇ. сі. 7: 307-316, 2012). Фітостимуляція росту рослин та послаблення біотичних та абіотичних стресів забезпечується численними бактеріальними та грибковими асоціаціями безпосередньо через утворення стимулюючих вторинних метаболітів або опосередковано шляхом викликання захисної реакції рослин низького рівня (сСаїего еї аї.,

Атег. У. Вої. 100: 1738-1750, 2013; Впагама) єї а!., Місторіа! Сеї! Расіогіевз 13: 66-76, 2014).

Крім активності у середовищі, мікроби також можуть забезпечувати унікальні біорозщеплювальні властивості іп мйго в умовах спрямованої ферментації. Застосування певних мікробних сумішей для розщеплення хітину та загального білку може забезпечувати біологічно активні молекули, такі як вільні І-амінокислоти, І-пептиди, хітин та хітозан, які посилюють ріст або стимулюють стресостійкість шляхом активації природного імунітету рослини (НІЇЇ еї аі., РГо5 Опе 6: е19220, 2011; ТапаКа еї аї., Ріапі бБідпаиІ Вейаху. Ег2598-147, 2013).

Конкретні мікробні угруповання можуть виконувати багато завдань шляхом забезпечення унікальних продуктів ферментативного розпаду, які самі є біологічно сприятливими для культур, та утворюваного у результаті мікробного консорціуму, який може забезпечуватись як сільськогосподарський продукт для підвищення продуктивності культури.

Як описано авторами, консорціуми аеробних та/або анаеробних мікробів, взятих з плодючого грунту та морських джерел, були успішно спільно ферментовані та стабілізовані, забезпечуючи прямі переваги росту та врожайності для рослин. Ферментна активність цих мікробних сумішей також забезпечувала продукти ферментації з хітином, глюкозаміном, білком та/або амінокислотами. У деяких варіантах втілення пряме внесення мікробних консорціумів та/або композицій може забезпечувати можливість ранньої колонізації коріння та сприяти утворенню ризосферних або ендофітних асоціацій. У деяких варіантах втілення застосування мікробних консорціумів забезпечує одну або декілька переваг, до яких належать посилений ріст коріння, збільшення продукування кореневих волосків, збільшення площі поверхні коріння, зміцнення рослин для витримування трансплантаційного шоку, прискорення формування стеблостою, протистояння абіотичним стресам та підвищення продуктивності та врожайності

Зо рослин. Комплексні мікробні суміші охоплюють різні види та генотипи рослин, які взаємодіють з мікробними грунтовими угрупованнями, для забезпечення переваг для широкого кола культур, які вирощуються у різних сільськогосподарських умовах.

І. Терміни

Якщо не зазначено іншого, технічні терміни вживаються згідно з традиційними значеннями.

Визначення загальноприйнятих термінів у молекулярній біології можна знайти у публікаціях

Кгебрз еї аї., І ем/іп'є Сепе5 ХІ видавництва ЧЩопех апа Вапей І еагпіпо, 2012 (ІЗВМ 1449659853);

Кепагем/ єї аї. (ваз.), Тпе Епсусіоредіа ої МоїІесшіаг Віоюду видавництва Віаскуеї! Рибіїзпегв, 1994 (І58М 0632021829); Вореп А. Меуєїгв (єд.), Моїесшаг Віоіоду апа Віоїеснпоіоду: а

Сотргепепзіме ЮОезКк Кеїегепсе видавництва Умієу, допп 8 5опв5, Іпс., 2011 (ІЗВМ 8126531 789); та Сеогде Р. Кедеї, Епсусіоредіс Оісіопагу ої Сепеїїіс5, (зепотісв5, апа Ргоїеотісв, 2п4 Еайіоп, 2003 (ІЗВМ: 0-471-26821-6).

Представлені нижче пояснення термінів та способів мають на меті поліпшення опису даного винаходу та надання спеціалістам у даній галузі рекомендацій з практичного втілення даного винаходу. Форми однини можуть стосуватись як однини, так і множини, якщо контекстом чітко не вказується інше. Наприклад, термін "включаючи клітину" охоплює одну або багато клітин і вважається рівноцінним фразі "включаючи принаймні одну клітину." У контексті даного опису "включає" означає "охоплює." Таким чином, "включаючи А або В" означає "охоплює А, В або А та В", не виключаючи додаткових елементів. Усі публікації, патентні заявки, патенти та інші згадані авторами джерела є включеними до цього опису шляхом посилання у повному обсязі у будь-якому сенсі. У разі протиріччя даний опис, включаючи пояснення термінів, має переважну силу.

Хоча для практичного втілення або випробування описаної технології можуть застосовуватися способи та матеріали, подібні або рівноцінні тим, які описуються авторами, прийнятні способи та матеріали описуються нижче. Матеріали, способи та приклади є лише пояснювальними і не мають на меті обмеження обсягу винаходу.

Для полегшення ознайомлення з різними варіантами втілення цього винаходу представлено такі пояснення конкретних термінів:

Водяна тварина: тварина, яка живе у солоній або прісній воді. У описаних авторами варіантах втілення до водяних тварин належать водяні членистоногі, такі як креветки, криль, бо веслоногі ракоподібні, вусоногі раки, краби, омари та лангусти. У інших варіантах втілення до водяних тварин належать риби. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, зокрема, частини, одержані у результаті промислової обробки водяних тварин. Таким чином, у деяких прикладах до побічних продуктів водяних тварин належать головогруди або зовнішній скелет креветок, зовнішній скелет краба або омара або шкіра або луска риби.

Контактування: приведення у прямий фізичний зв'язок, як у твердій, так і у рідкій формі.

Наприклад, контактування може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та біологічним зразком у розчині. Контактування також може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та грунтом, рослинами та/або частинами рослин (такими як листя, стебла, сіянці, коріння та/або насіння).

Культивування: плановане вирощування одного або декількох організмів чи клітин у присутності джерел вуглецю, азоту та мінеральних солей, які піддаються засвоєнню. Згідно з прикладом, такий ріст може відбуватись у твердому або напівтвердому поживному середовищі або у рідкому середовищі, у якому розчиняються або суспендуються поживні речовини. У іншому прикладі культивування може відбуватися на поверхні або із застосуванням зануреної культури. Поживне середовище може складатися з комплексних поживних речовин або може бути хімічно задане.

Ферментація: процес, результатом якого є розклад складних органічних сполук на простіші сполуки, наприклад, мікробними клітинами (такими як бактерії та/або гриби). Процес ферментації може відбуватися у аеробних умовах, анаеробних умовах або і тих, і інших умовах (наприклад, у великому об'ємі, коли деякі частини є аеробними, а інші частини є анаеробними).

У деяких необмежувальних варіантах втілення ферментація включає ферментативне та/або неферментативне розщеплення сполук, присутніх у організмі водяних тварин або побічних продуктах тварин, таких як хітин.

Рідкі добрива: водний розчин або суспензія, що містить розчинний азот. У деяких прикладах розчинний азот у рідких добривах включає органічне джерело азоту, таке як сечовина або сечовина, яка є похідною безводного аміаку (наприклад, розчин сечовини та нітрату амонію (ОАМ)). Також може застосовуватися водний розчин аміаку (20-32 95 безводний аміак). У інших

Зо прикладах розчинний азот у рідких добривах включає азотовмісні неорганічні солі, такі як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або комбінації двох або більшої кількості з них. У деяких варіантах втілення рідкі добрива включають штучне джерело азоту (наприклад, пірофосфат амонію або тіосульфат амонію) та/або інші компоненти, які не зустрічаються у природі.

Зазвичай рідкі суміші штучних добрив вказуються за їхнім вмістом азоту-фосфату-калію (відсотком М-Р-К) та включають додавання інших компонентів, таких як сірка або цинк.

Прикладами штучних сумішей можуть бути 10-34-0, 10-30-0 з 295 сірки та 0,25 95 цинку (хелатні), 11-37-0, 12-30-0 з З Фо сірки, 2-4-12, 2-6-12, 4-10-10, 3-18-6, 7-22-5, 8-25-3, 15-15-3, 17- 17-0 з 2 9о сірки, 18-18-0, 18-18-0 з 2 95 сірки, 28-0-0 САМ, 9-27-0 з 2 Фо сірки та тіосульфат калію.

Мікроб: мікроорганізм, включаючи, крім інших, бактерії, архебактерії, гриби та водорості (такі як мікроводорості). У деяких прикладах мікроби є одноклітинними організмами (такими як бактерії, ціанобактерії, деякі гриби або деякі водорості). У інших прикладах термін "мікроби" охоплює багатоклітинні організми, такі як деякі гриби або водорості (наприклад, багатоклітинні нитчасті гриби або багатоклітинні водорості).

Мікробна композиція: композиція (яка може бути твердою, рідкою або принаймні частково і твердою, і рідкою), яка включає принаймні один мікроб (або популяцію принаймні одного мікробу). У деяких прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (у одній або декількох популяціях мікробів) у рідкому середовищі (такому як середовище для зберігання, культивування або ферментації), наприклад, у формі суспензії у рідкому середовищі. У інших прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (або одну або декілька популяцій мікробів) на поверхні або всередині твердого або желеподібного середовища (включаючи, крім інших, культуральні планшети) або суспензії або пасти.

Мікробний консорціум: суміш, асоціація або сукупність двох або більшої кількості мікробних видів, які у деяких випадках перебувають у фізичному контакті один з іншим. Мікроби у консорціумі можуть впливати один на інший через прямий фізичний контакт або через біохімічну взаємодію, або і те, і інше. Наприклад, мікроби у консорціумі можуть обмінюватися між собою поживними речовинами, метаболітами або газами. Таким чином, у деяких прикладах принаймні деякі з мікробів у консорціумі можуть бути метаболічно взаємозалежними. Характер та ступінь бо такої взаємозалежної взаємодії може змінюватися з часом і зі зміною умов культивування.

ІІ. Мікробні консорціуми та композиції

Авторами описується декілька мікробних консорціумів. Типовий мікробний консорціум згідно з даними винаходом було депоновано у Американській колекції типових культур (АТСС,

Мапаззавз, МА) 25 листопада 2014 р. та отримав номер депонування РТА-121750, який у цьому описі вказується як А1001. Консорціум А1001 включає принаймні Васіїив5 5рр., А2о5рійнНит 5рр.,

Рзепдотопавзх зрр., І асіобасіїїи5 5рр., ОезиГососсив 5рр., ОезиПпоїотасишт 5рр., Магіпобрасієвг 5рр., Мітозоритіїи5 5рр. Нитіпососсиз 5рр., Адоабасієтіит 5рр., І еріоїупоабуа 5рр., І еріозрійНит 5рр., Раєпірасійи5 5рр., Місгосоїєив врр., Сіозтіаішт 5рр., Хепососсив5 5рр., Асейобасієг зрр.,

Сапаїдатшве врр., Меїнапозавїа 5рр., Раєпірасіїїи5 врр., та Вгєемірбасій5 врр., які було виявлено шляхом мікроматричного аналізу та/або секвенування 165 рДНК. Авторами також описуються консорціуми або мікробні композиції, які включають два або більше (наприклад, 2 або більше, 5 або більше, 10 або більше, 20 або більше або 50 або більше) з усіх мікробів у АТ1001. У деяких варіантах втілення описана авторами мікробна композиція є визначеною композицією, наприклад, композицією, яка включає вказані мікробні види та, необов'язково, додаткові немікробні компоненти (включаючи, крім інших, солі, мікроелементи, хітин, хітозан, глюкозамін та/або амінокислоти).

Як обговорюється нижче, ідентичність прийнаймні деяких мікробів, присутніх у А1001, визначили із застосуванням мікроматричного аналізу (Приклад 3) та/або секвенування 165 рРДНК (Приклад 4). Додаткові способи розпізнавання мікробів, присутніх у мікробній суміші або консорціумі, є відомими спеціалістам у даній галузі, включаючи секвенування або ПЛР-аналіз нуклеїнових кислот, таких як 165 рДНК, з окремих мікробних колоній, які ростуть всередині консорціуму або суміші. Додаткові технології розпізнавання мікробів, присутніх у мікробній суміші або консорціумі, також включають 1) способи на основі нуклеїнових кислот, які грунтуються на аналізі та диференціації мікробної ДНК (такому як Аналіз ДНК-мікрочіпів нуклеїнових кислот, метагеноміка або іп 5йи гібридизація у поєднанні з сортуванням флуоресцентно-активованих клітин (БАС5)), 2) біохімічні способи, які грунтуються на відокремленні та ідентифікації низки біомолекул, включаючи аналіз метилових естерів жирних кислот (ЕАМЕ), мас-спектрометричний аналіз часопролітної матрично-активованої лазерної десорбції/онізації (МАГОІ-ТОР) або аналіз клітинної миколевої кислоти шляхом

Зо високоефективної рідинної хроматографії (МУСО-ІС5) та 3) мікробіологічні способи, які здійснюються із застосуванням традиційних засобів (таких як вибіркове вирощування та мікроскопічне дослідження) для забезпечення більш загальних характеристик угруповання у цілому та/або звуження та розпізнавання лише малої підгрупи представників цього угруповання.

У деяких прикладах мікроби у суміші або консорціумі розділяють (наприклад, із застосуванням технологій сортування за фізичним розміром та/або клітинного сортингу) з наступним глибоким секвенуванням ДНК або повного геному одержаних у результаті мікробів (або підгруп або підпопуляцій мікробів). Застосування іншої мікроматриці та застосування інших способів розпізнавання дозволяє розпізнавати присутність інших мікробів (більшої, меншої кількості або інших мікробних таксонів або видів) порівняно з тими, які розпізнаються шляхом мікроматричного аналізу, який виконують на описаному авторами А1001, через відмінності у чутливості та специфічності вибраних способів аналізу. Крім того, різні технології (включаючи мікроматричний аналіз або ПЛР-аналіз ДНК) можуть не виявляти конкретні мікроби (навіть якщо вони є присутніми у зразку), наприклад, якщо аналіз не включає зонди, здатні виявляти конкретні мікроби. Крім того, спеціалістам у даній галузі стане зрозуміло, що класифікація та номенклатура мікробів з часом може змінюватися, що у результаті призводить до перекласифікації та/або перейменування мікробів.

У інших варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції включають, здебільшого складаються або складаються з 2 або більшої кількості (наприклад, 5 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 15 або більшої кількості, 20 або більшої кількості або всіх) мікробів, перелічених у Таблиці 1.

Таблиця 1

Мікроби 101 Мікроб//// | 77777171 ТиповівидиЇ7//://-:(К«( СС

Юевийососсивврр. | 77777777

Оевийоютасиитврр. | (77777771 оМітоворитішв вро. ОЇ 77777777

Аговрійштерр. ОЇ

Васійнє 5!ИиБшШів, Васійи5 сегеи5, Васійиє тедаїегпит, Васйив5 равієцгії, Васі и5 зрпаєгісив меня ЕЛЕ РИН обеК» ни Твен

І асторасійи5 5рр. І асіорасіййи5 рагасабеї, Іасіорасійш5 еїрпескКії, ГасюбасшШив рагагаттадіпів

Витіпососсивврріо/////|Ї77777771111111

Серюідупоруаврр.їо///// ОЇ 77777711

Адиарасіейитерр.ї | 77777777 (Містосоювивврріо/////Ї 77177111

І Сіовітідіит 5рпепоідев, Сіовітідіит рітептепіап5 (Хепососсивврр.о//////Ї 77777711

Сапаїдавшвврр.ї//////Ї7777777111111 (Мешаповавіаврр./// | 77777777

Консорціуми або композиції необов'язково можуть включати один або декілька додаткових мікробів. До додаткових мікробів належать, крім інших, один або декілька таких видів, як

Оеіпососсиз 5рр., Асідізота 5рр., А201орасіег 5рр. (наприклад, Агоїобасіег міпеїапайїї), Тгеропета 5рр. (наприклад, Тгеропета ргітйа), КПпі2орішт 5рр. (наприклад, КПі2обішт |аропісит),

Вгадутпігобішт 5рр., Вподоїегах 5рр., Наіотарадив 5рр., Суїюрнада 5рр., Асііпотусе5 врр.,

Ремовзіа 5рр., Місгососсив 5рр. (наприклад, Місгососсив Іміецй5), Зігеріотусез в5рр., Зігеріососсив 5рр., Гасіососсив 5рр., Міигорасієї 5рр., Мігтобзотопав 5рр., Мітососсив 5рр., Ргоїєи5 5рр. (наприклад, Ргоївив миїдагів), Тгісподегта 5рр. (наприклад, Тгісподегта Пагліапит), Редіососсив5 5рр. (наприклад, Редіососси5 репіозасецв), Вгемірбасіегічт 5рр., засспаготусез 5рр. (наприклад, засспаготусеб сегемізіає), РепісйШіиит 5рр. (наприклад, Репісіййшт годиегогії), Мопавсив5 (наприклад, Мопазсиз гибег), АзрегуйШив 5рр. (наприклад, Азрегойив5 огу7ає), Агіпгоз5ріга 5рр. (наприклад, Агіпго5ріга ріаїепві5), апа Авсорпуйшт 5рр. (наприклад, Азсорпуйшт подозит).

Придатні додаткові мікроби можуть бути розпізнані спеціалістом у даній галузі, наприклад, на основі бажаних характеристик, які мали б бути включеними до консорціумів або композицій.

Описані мікробні консорціуми або композиції можуть включати один або декілька інших компонентів додатково до мікробів, включаючи, крім інших, солі, іони металів та/або буфери (наприклад, один або декілька з КНгРО», КаНРО», СасСі», М950О», ЕРесСіз, МаМоО»: та/або

Маг2МоО»), мікроелементи (такі як сірка, сульфат, сульфіт, мідь або селен), вітаміни (такі як вітаміни В або вітамін К), цукри (такі як сахароза, глюкоза або фруктоза), хітин, хітозан, глюкозамін, білок та/або амінокислоти. До додаткових компонентів, які також можуть бути включені до композицій, належать НУТ, НУТс та/або НУТа, одне або декілька добрив (наприклад, рідких добрив), один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінацій з двох або більшої кількості цих компонентів.

У деяких варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів у описаних авторами мікробних консорціумах, перебувають у рідкому середовищі (такому як культуральне або ферментаційне середовище) або інокулумі. У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів, перелічених у Таблиці 1, є присутніми у твердому або желеподібному середовищі (такому як культуральний планшет), яке містить або підтримує мікроби.

У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів, є присутніми у сухих композиціях, таких як сухий порошок, драже або гранули. Сухі композиції приготовляють шляхом додавання осмопротектора (такого як цукор, наприклад, трегалоза та/або мальтодекстрин) до мікробної композиції у розчині у потрібному співвідношенні. Цей розчин комбінують з сухим носієм або абсорбентом, таким як деревне борошно або глина, у потрібній концентрації мікробної композиції (такій як 2-30 95, наприклад, 2,5-10 96, 5-15 96, 7,5-20 95 або 15-30 95). Гранули утворюють шляхом включення глини або полімерних зв'язувальних речовин, які слугують для утримання гранул від розпаду або забезпечують конкретні фізичні або розщеплювальні властивості. Гранули утворюють із застосуванням роторного гранулятора, змішувача-гранулятора або шляхом екструзії, які представляють декілька можливих способів. Додаткові способи одержання сухих композицій, які включають один або декілька мікробних видів, є відомими спеціалістам у даній галузі, наприклад, як описано у публікації Еогіпціайоп ої Місгоріа! Віоребвіісідеє: Вепеїісіа!

Містоогдапізтв, Метаїйодев апа беей Тгеаїтепів, Вигдев, ейд., Зргіпдег Зсієпсе, 1998; Вазпап,

Віотесппої. Аду. 16: 729-770, 1998; Нац! еї а!., Іпі. Нев. у). Рнапт. 4: 90-95, 2013.

У деяких прикладах композиції, які включають мікроби або мікробні консорціуми, тримають при температурі, яка підтримує ріст мікробу(ів), наприклад, при температурі приблизно 25-457С (наприклад, приблизно 30-35 С, приблизно 30-40С або приблизно 35-40). У інших прикладах композиції зберігають при температурі, при якій мікроб(и) не ростуть або є неактивними, наприклад, нижчій за 25 "С (наприклад, 4 "С, -20 "С, -40 "С, -70 "С або нижчій).

Спеціаліст у даній галузі може створювати композиції для холодного зберігання, наприклад, шляхом включення стабілізаторів (таких як гліцерин). У інших прикладах композиції зберігають при навколишній температурі, наприклад, приблизно 0-35 "С (наприклад, приблизно 10-30 "С або приблизно 15 - 25 С).

І. Процеси біодеградації

Зо Описані мікробні консорціуми або композиції застосовують для розщеплення біологічних матеріалів, таких як багаті на хітин матеріали, наприклад, водяних тварин або побічних продуктів водяних тварин, комах або грибів. Таким чином, у деяких варіантах втілення авторами описуються способи, які включають змішування одного або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій з хітиновмісним біологічним матеріалом для утворення суміші та ферментації суміші. У деяких варіантах втілення способи також включають розділення суміші на тверду, водну та, необов'язково, ліпідну фракції (Фігура 2).

У деяких варіантах втілення описаний авторами процес біодеградації включає змішування мікробного консорціуму (такого як А1001), композиції, яка включає деякі або всі мікроби у А1001, або композиції, яка включає п'ять або більше мікробних видів з Таблиці 1), з одним або декількома хітиновмісними біологічними матеріалами. До хітиновмісних біологічних матеріалів, крім інших, належать водяні тварини або побічні продукти водяних тварин, комахи або гриби. У деяких прикладах хітиновмісним біологічним матеріалом є водяна тварина, така як водяна членистонога тварина (наприклад, представник класу вищих раків). До водяних членистоногих для використання згідно з описаними способами належать креветки, краби, омари, лангусти або криль. У деяких прикладах згідно з описаними авторами способами біодеградації використовують цілих водяних тварин (таких як водяні членистоногі) або побічні продукти водяних тварин. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, наприклад, будь-які частини, одержані шляхом переробки водяних тварин. У деяких прикладах побічним продуктом водяної тварини є цілий зовнішній скелет або частина зовнішнього скелета водяної тварини, наприклад, панцир креветки, краба, лангуста або омара.

У інших прикладах побічним продуктом водяної тварини є частина водяної тварини, наприклад, головогруди креветки.

У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає гриби, такі як гриби Рпуішт 7удотусоїа, Вазідіотусоїа, Азсотусоїа або Оешеготусоїа. Зокрема, прикладами грибів можуть бути такі види, як Азрегодййи5 5рр., Репісійит 5рр., Тгісподегта 5рр., Засспаготусев 5рр. та

Зспігозасспаготусе5 5рр. Таким чином, потоки відходів з хлібопекарських, пивоварних та ректифікаційних підприємств можуть забезпечувати джерела хітиновмісного біологічного матеріалу. У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає комах, які містять хітин у їхніх зовнішніх скелетах, таких як коники, цвіркуни, жуки та інші комахи. Побічні продукти 60 переробки таких комах також розглядаються як джерела хітину.

Хітиновмісний біологічний матеріал змішують з композицією, яка включає мікроби, описані вище у Розділі ІІ (такою як мікробний консорціум А1001 або інший консорціум або композиція, описані у Розділі Ії), для утворення практично гомогенної суміші. У деяких прикладах хітиновмісний біологічний матеріал розтирають, розламують, подрібнюють, перемелюють або іншим чином диспергують перед змішуванням з описаними авторами мікробами або мікробними консорціумами. У конкретних прикладах суміш містить приблизно 10-50 95 (наприклад, приблизно 10-20 95, приблизно 20-30 956, приблизно 30-40 95, приблизно 25-40 95, наприклад, приблизно 2595, приблизно 30 95, приблизно 35 95, приблизно 40 95, приблизно 45 95, або приблизно 50 95) хітиновмісного матеріалу (такого як голови креветок) (маса/об'єм) у інокулумі, що містить приблизно 0,1-5 95 (наприклад, приблизно 0,1-1 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1- 2 ую, приблизно 2-3 95, приблизно 0,1 95, приблизно 0,2 95, приблизно 0,3 95, приблизно 0,5 95, приблизно 0,895, приблизно 1 95, приблизно 1,25 95, приблизно 1,595, приблизно 1,75 95, приблизно 2 95, приблизно 2,5 95, приблизно З 95, приблизно 4 95 або приблизно 5 95) мікробів (об'єм/об'єм).

У деяких прикладах інокулум, хітиновмісний біологічний матеріал та цукор (або інше джерело вуглецю) змішують, наприклад, шляхом перемішування або збовтування. У інших прикладах один або декілька мікробів у мікробній композиції або консорціумі необов'язково активують перед змішуванням з хітиновмісним біологічним матеріалом та ферментацією.

Активація для описаних авторами способів не вимагається. Регулювання часу та/або температури ферментації може здійснюватися спеціалістом у даній галузі залежно від того, чи активуються мікроби перед ферментацією. Активація мікробної композиції може здійснюватися шляхом інкубації інокулуму мікробів з джерелом вуглецю (таким як цукор, наприклад, глюкоза, сахароза, фруктоза або інші цукри) при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів. У деяких прикладах інокулум мікробів (наприклад, описані авторами мікробний консорціум або композиція) має концентрацію приблизно 0,05-5 95 (об'єм/об'єм) (наприклад, приблизно 0,5-5 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1-2 95 або приблизно 2-3 95) у рідкому середовищі. Інокулум розводять у розчині, який містить приблизно 0,1-1 95 цукру (наприклад, приблизно 0,1-0,5 95, приблизно 0,1-0,3 95, приблизно 0,2-0,6 95 або приблизно 0,5- 195, наприклад, приблизно 0,195, приблизно 0,295, приблизно 0,395, приблизно 0,4 95,

Ко) приблизно 0,5 95, приблизно 0,6 95, приблизно 0,7 95, приблизно 0,8 95, приблизно 0,9 95, або приблизно 1 95) та інкубують при навколишніх температурах, наприклад, приблизно 20-40 С (наприклад, приблизно 20 "С, приблизно 25"С, приблизно 30 "С, приблизно 35"С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-5 днів (наприклад, приблизно 24 годин, приблизно 48 годин, приблизно 72 годин, приблизно 96 годин або приблизно 120 годин). У інших прикладах активація мікробної композиції може відбуватися шляхом інкубації інокулуму мікробів при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів, наприклад, інкубації при приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 25-35 "С) протягом періоду від 12 годин до 5 днів (наприклад, 1-4 днів або 2-3 днів). У деяких необмежувальних прикладах мікроби вважаються активованими, коли культура досягає оптичної густини 20,005 при 600 нм.

Після змішування хітиновмісного біологічного матеріалу та мікробів або мікробного консорціуму (які необов'язково активують) суміш піддають ферментації. У деяких прикладах перед ферментацією вимірюють рівень рН суміші. Рівень рН перед ферментацією у разі необхідності регулюють до заданого діапазону (наприклад, рН від приблизно З до приблизно 4 або приблизно від 3,5 до 4). Суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-36 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 С, приблизно 39 "С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-30 днів (наприклад, приблизно 3- 28 днів, приблизно 7-21 днів, приблизно 3, 5, 7, 10, 14, 16, 20, 24, 28 або 30 днів). Суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У деяких прикладах суміш збовтують протягом періоду часу кожні 1-7 днів, наприклад, кожні 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7 днів.

У деяких необмежувальних прикладах ферментація відбувається доти, доки титрована кислотність (ТТА) не становить приблизно 3-5 95, а рівень рН - приблизно 4-5.

Після ферментації одержану у результаті ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідку фракції. У деяких прикладах ферментацію переносять з резервуара до обладнання для осадження. Після цього рідину зливають та центрифугують. У одному необмежувальному прикладі ферментовану суміш центрифугують при 1250 об/хв (930ха) протягом 15 хвилин при приблизно 5"С для одержання рідинної та ліпідної (наприклад, пігментної) фракцій. Рідинна (або водна) фракція, одержана у процесі біодеградації, може зберігатися при навколишній температурі. У деяких необмежувальних прикладах цукор додають 60 до рідинної фракції, наприклад, у кількості 1-10 95 (об'єм/об'єм).

Рідинна фракція може включати такі компоненти, як білок, амінокислоти, глюкозамін, мікроелементи (такі як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець) та/або ферменти (такі, як молочні ферменти, протеази, ліпази та/або хітинази). У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 1-5595 всього амінокислот, приблизно 3-7 95 білку, приблизно 0,1-2 95 азоту, менше, ніж приблизно 0,295 фосфору, приблизно 0,5-1 96 калію, приблизно 4-8 95 вуглецю, приблизно 0,2-1 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,2 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,2 95 натрію та/або приблизно 0,1-0,4 95 сірки. У додаткових необмежувальних прикладах рідинна фракція включає приблизно 0,01-0,2 95 глюкозаміну (наприклад, приблизно 0,1 95 або менше). Рідинна фракція також може містити один або декілька мікробів (наприклад, з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації) та/або слідову кількість хітозану або хітину. Рідинна фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТ."

Тверда фракція, одержана внаслідок процесу біодеградації, містить хітин (наприклад, приблизно 50-70 956 або приблизно 50-60 95 хітину). Тверда фракція також може містити один або декілька мікроелементів (таких як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець), білок або амінокислоти та/або один або декілька мікробів з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації. Тверда фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТс." НУТс необов'язково тонко подрібнюють для утворення тонко подрібненого хітину та залишкового хітину. У деяких необмежувальних прикладах тверда фракція містить (маса/об'єм) приблизно 9-35 95 загальних амінокислот, приблизно 30-50 95 неочищеного білку, приблизно 5- 10 95 азоту, приблизно 0,3-1 95 фосфору, менше, ніж приблизно 0,3 95 калію, приблизно 35-55 95 вуглецю, приблизно 0,5-2 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, приблизно 0,1-0,4 95 натрію та/або приблизно 0,2-0,5 95 сірки.

У деяких прикладах ліпідну фракцію також відокремлюють від твердої та рідинної фракцій.

Ліпідна фракція є верхньою фазою рідинної фракції. Ліпідна фракція містить такі сполуки, як стерини, вітамін А та/або вітамін Е, жирні кислоти (такі, як ОНА та/або ЕНА) та у деяких прикладах каротиноїдні пігменти (наприклад, астаксантин). Ліпідна фракція може використовуватися з різними цілями, включаючи, крім інших, виробництво косметики або харчових приодуктів.

Зо У додаткових варіантах втілення хітин ферментують мікробним консорціумом (таким як

А1001 або деякі або всі мікроби у АТ1001) або композицією, яка містить п'ять або більше мікробних видів з Таблиці 1. У деяких прикладах хітин (такий як НУТс або тонко подрібнений та/або залишковий хітин, утворений, як описано вище) змішують з мікробним консорціумом або композицією, що містить описані авторами мікроби та гідролізат білку (наприклад, НУТЬ), та ферментують для утворення ферментованої суміші. Принаймні частина хітину у вихідній суміші розщеплюється у результаті ферментації. У деяких прикладах суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-35 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 "С, приблизно 39 "С або приблизно 40 С) протягом періоду приблизно від 1 дня до 30 днів (наприклад, приблизно 2-28 днів, приблизно 4-24 днів, приблизно 16-30 днів, приблизно 10-20 днів або приблизно 12-24 днів). У деяких прикладах суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У інших прикладах суміш збовтують безперервно. У одному необмежувальному прикладі суміш збовтують протягом приблизно 1-12 годин щодня (наприклад, приблизно 2-8 годин або приблизно 4-10 годин). Рівень РН ферментаційної суміші періодично контролюють. У деяких прикладах рівень рН необов'язково підтримують на рівні приблизно 4-5. У деяких прикладах ферментація триває доти, доки загальна титрована кислотність (ТТА) не досягає принаймні приблизно 1-10 95 (наприклад, приблизно 2-8 95, приблизно 4-8 95, або приблизно 5-10 95).

Після ферментації утворену ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідинну фракції, наприклад, шляхом декантації, фільтрації тал"або центрифугування. Рідинна фракція, утворена у результаті ферментації НУТЬ та хітину мікробною композицією, у деяких прикладах вказується як "НУТта." У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 0,5-2 95 загальних амінокислот, приблизно 3-7 95 білку, приблизно 0,5- 195 азоту, менше, ніж приблизно 0,1 95 фосфору, приблизно 0,4-1 95 калію, приблизно 3-7 95 вуглецю, менше, ніж приблизно 0,5 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,3 95 натрію і/або менше, ніж приблизно 0,3 95 сірки. Крім того, НУТа містить менше, ніж приблизно 50 95 хітину (наприклад, менше, ніж приблизно 45 95, менше, ніж приблизно 40 95, менше, ніж приблизно 3595 або менше, ніж приблизно 30 95 хітину) та менше, ніж 2 95 глюкозаміну (наприклад, менше, ніж приблизно 1,595 або менше, ніж приблизно 1 95 бо глюкозаміну). У інших прикладах НутТа містить приблизно 25-50 95 хітину та приблизно 0,5-2 95 глюкозаміну.

ІМ. Процеси обробки грунту, рослин та/або насіння

Описані мікробні консорціуми, композиції, які містять мікроби, та/або описані авторами продукти (такі як НУТЬЮ, НМУТс та/або НуУтТа) застосовують для обробки грунту, рослин або частин рослин (таких як коріння, стебла, листя, насіння або сіянці). У деяких прикладах обробка мікробними консорціумами, композиціями, які містять мікроби, та/або продуктами поліпшує ріст рослин, поліпшує стресостійкість та/або підвищує врожайність.

У деяких варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (таких як листя, стебла, коріння, сіянці або інші частини рослин) або насіння з консорціумом (таким як

АТ001) або композицією, що включає мікроби, присутні у одному або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій. Способи також можуть включати вирощування попередньо оброблених рослин, частин рослин або насіння та/або культивування рослин або насіння у обробленому грунті.

Мікроби необов'язково активують перед застосуванням. У деяких прикладах активація мікробів відбувається згідно з представленим вище описом у Розділі І. У інших прикладах мікроби активують шляхом змішування 100 частин води та 1 частини мікробного консорціуму або композиції та інкубації при приблизно 15-40 "С (наприклад, приблизно 20-40 "С, приблизно 15-30 "С або приблизно 25-35 "С) протягом приблизно 12 годин - 14 днів (наприклад, приблизно 1-14 днів, 3-10 днів, 3-5 днів або 5-7 днів). Суміш для активації також необов'язково може включати 1 частину НУТЬ, якщо мікробний консорціум або композиція має застосовуватись у комбінації з НУТЬ.

У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з продуктом описаних мікробних консорціумів або композицій, наприклад,

НУТЬ, НУТс, НУТа або їх комбінацій. У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин або насіння з описаним мікробним консорціумом або композицією, що включає описані мікроби та один або декілька з НУТЬ, НУТс та НуУта (наприклад, одним, двома або всіма з НУТЬ, НУТс та НУТа)» НУТ, НУТс та/або НУТа можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які

Зо містять мікроби.

У деяких прикладах способи також включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з одним або декількома додатковими компонентами, до яких, крім інших, належать хітин, хітозан, глюкозамін, білок, амінокислоти, рідкі добрива, один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінації з двох або більшої кількості цих компонентів. Додаткові компоненти можуть включатися до композиції, яка включає мікроби, або до описаних авторами мікробних консорціумів, або можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які містять мікроби.

У конкретних варіантах втілення мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, водним розчином або суспензією, що містить розчинний азот). У деяких прикладах рідкі добрива включають органічне джерело азоту, таке як сечовина, або азотовмісну неорганічну сіль, таку як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або їх комбінації. Водний розчин аміаку (20-24,6 95 безводного аміаку) також може застосовуватись як розчинний азот. У деяких прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) безпосередньо перед застосуванням або незадовго до застосування (наприклад, від 10 хвилин до 24 годин перед застосуванням, наприклад, приблизно за 30 хвилин, 1 годину, 2 години, З години, 4 години, 6 годин, 8 годин, 12 годин, 16 годин, 18 годин або 24 години до застосування).

У інших прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) принаймні за 24 години до застосування (наприклад, від 24 годин до 6 місяців, наприклад, принаймні 36 годин, принаймні 48 годин, принаймні 72 години, принаймні 96 годин, принаймні один тиждень, принаймні два тижні, принаймні чотири тижні, принаймні вісім тижнів або принаймні 12 тижнів до застосування).

У деяких прикладах розраховують кількість композиції(й) для застосування (наприклад, на акр або гектар) та композицію розводять у воді (або у деяких прикладах у рідких добривах) до кількості, достатньої для обприскування або зрошення площі, яка підлягає обробці (якщо композиція є рідкою, такою як мікробні консорціуми або композиції, НУТЬ або НУТа). У інших бо прикладах композиція може змішуватися з розведеними гербіцидами, інсектицидами,

пестицидами або хімікатами, які регулюють ріст рослин. Якщо композиція для застосування є твердою (наприклад, сухою композицією мікробів, НУТс, хітину, глюкозаміну, хітозану або амінокислот), тверда композиція може бути внесена безпосередньо у грунт, нанесена на рослини або частини рослин або може бути суспендована або розчинена у воді (або іншій рідині) перед застосуванням. У деяких прикладах НУТс висушують та тонко подрібнюють перед застосуванням.

Описані мікробні композиції (окремо або у комбінації з іншими описаними авторами компонентами, такими як НУТЬ, НУТс та/або НУТа), можуть доставлятися різними способами на різних стадіях розвитку рослин, залежно від умов вирощування та сільськогосподарської практики. У деяких прикладах описану мікробну композицію та НУТЬ змішують, розводять рідкими добривами та вносять під час висівання насіння у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НУТЬ змішують, розводять та вносять при висіванні насіння, а також наносять на грунт біля коріння декілька разів під час росту рослин у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на кожен акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НУТЬ розводять та доставляють разом шляхом крапельного зрошення у низькій концентрації під час формування сіянців або розсади, доставляють шляхом зрошення затопленням або розподіляють як розведену суміш з поживними речовинами при дощувальному або крапельному зрошенні у теплицях на сіянцях або укорінених рослинах або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У додаткових прикладах описану мікробну композицію додають до інших засобів обробки грунту у полі, наприклад, додають до засобів інсектицидної обробки для полегшення застосування. У інших прикладах, наприклад, у теплицях, описану мікробну композицію та НУТЬ застосовують окремо або разом, у комбінації з рідкими добривами (такими як рибні добрива) та іншими поживними речовинами та нагнітають у дощувальну зрошувальну систему або крапельні зрошувальні лінії під час росту рослин. У прикладі з тепличним вирощуванням описану мікробну композицію та НУТЬ застосовують разом, наприклад, розводять та застосовують під час дощувального зрошення фертигації у кількості від 0,25 до 1 літра при проростанні сіянців з наступним внесенням від 0,25 до 1 літра у середньому циклі росту під час фертигації та остаточних від 0,25 до 1 літра під час фертигації

Зо протягом кінцевих 5-10 днів циклу росту.

У деяких варіантах втілення описану мікробну композицію або консорціум та НУТЬ застосовують разом або окремо (наприклад, послідовно) для стимулювання росту, життєздатності, відповідності типу, якості, розвитку коріння та стресостійкості культур. У одному конкретному прикладі, у якому культурою є кукурудза, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції додають у борозну з рідкими добривами при висіванні насіння або застосовують як міжрядне підживлення під час внесення добрив після стадії М3, з наступним застосуванням від 0,5 до 2 л/иіакр НЖТЬ для обприскування листя після стадії М5, з додаванням та розведенням з гербіцидами, пестицидами для нанесення на листя, поживними мікроелементами або добривами.

У іншому конкретному прикладі, у якому культурою є картопля, від 1 до З л/акр мікробної композиції розводять і застосовують окремо або з 1-3 л/(акр НУТЬ при висаджуванні бульб; після цього може відбуватися внесення у грунт мікробної композиції та НУТЬ перед бульбоутворенням, окремо (наприклад, послідовно) або спільно. Після появи рослини здійснюють нанесення на листя НУТЬ у кількості від 1 до 2 л/акр, або з окремим розведенням, або у суміші з гербіцидом, пестицидом для нанесення на листя, поживним мікроелементом або добривами і застосовують протягом сезону росту одноразово, двічі, тричі, чотири рази або більше.

У ще одному конкретному прикладі, у якому культурою є бавовна, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції вносять у борозну при висіванні як міжрядне підживлення сабо 2 х 2 (2 дюйми убік і 2

БО дюйми під насінням), з добривами або без них. При появі перших білих квіток бавовни здійснюють обробку листя у кількості від 0,5 до 2 л/акр НУТБЬ, з окремим розведенням або у комбінації з іншою поживною речовиною, гербіцидною або пестицидною обробкою.

У іншому конкретному прикладі, в якому культурою є пшениця, мікробну композицію (від 1 до 2 л/акр) застосовують після зимової сплячки (стадія 54), та НУТЬ наносять на листя (від 0,5 до 2 л/акр; стадії з 54 по 510).

У прикладі, у якому культурою є цукрова тростина, один спосіб застосування передбачає використання описаної мікробної композиції та НУТЬ по 2-4 л/акр, які вносять у грунт під час сівби тростини або як міжрядне підживлення, причому НУТЬ наносять на листя у кількості від 1 до 2 л/акр при змішуванні з водою або добривами або поживними мікроелементами. бо НУТЬ Застосовують окремо для обробки листя в усіх культурах для поліпшення таких властивостей, як стресостійкість, потужність рослини, якість врожаю та врожайність. У прикладі, у якому культурою є кукурудза, НУТЬ застосовують у кількості від 72 до 1 л/акр, один або декілька разів, змішуючи з водою або пестицидами або гербіцидами. У іншому прикладі НУТЬ застосовують для обробки пшениці як засіб обприскування листя, змішаний з водою або пестицидами або гербіцидами у кількості від 752 до 1 л/акр, з одноразовим або багаторазовим застосуванням.

В усіх культурах НУТс додають до грунту у кількості приблизно 0,5-2 кг/акр (наприклад, приблизно 0,5 кг/акр, приблизно 1 кг/акр, приблизно 1,5 кг/акр або приблизно 2 кг/акр) під час формування рослини або садіння. У інших прикладах НУТс додають до розчину описаної мікробної композиції та НУТЬ для крапельного зрошення або додають до добрив, які містять описану мікробну композицію та НУТ, у теплицях, як у наведених вище прикладах.

У додаткових варіантах втілення НУТа (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують у кількості приблизно 1-20 л/га (наприклад, приблизно 1-15 л/га, приблизно 3-10 л/га або приблизно 3-5 л/га). У інших прикладах НУТа (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують як засіб обробки насіння для підвищення врожайності та продуктивності (наприклад, приблизно 1-10 л/кг насіння, наприклад, приблизно 1-3 л/кг, приблизно 3-5 л/кг або приблизно 5-10 л/кг). У альтернативному варіанті НУТа застосовують у грунті (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) у кількості приблизно 1-

З л/га для збільшення росту рослин, наприклад, для сприяння збереженню продуктивності рослин в умовах стресу.

У деяких прикладах обробка грунту, насіння, рослин або частин рослин композицією, яка включає мікроби у описаному мікробному консорціумі збільшує ріст рослин (наприклад, загальний розмір рослини, кількість листя, кількість коренів, діаметр коріння, довжину коріння, утворення пагонів, вироблення плодів, вироблення пилку або вироблення насіння) принаймні приблизно на 5 95 (наприклад, принаймні приблизно на 10 95, принаймні приблизно на 30 95, принаймні приблизно на 50 95, принаймні приблизно на 75 95, принаймні приблизно на 100 95, принаймні приблизно удвічі, принаймні приблизно утричі, принаймні приблизно у 5 разів, принаймні приблизно у 10 разів або більше). У інших прикладах описані способи у результаті

Зо забезпечують підвищену врожайність приблизно на 10-75 95 (наприклад, приблизно на 20-60 95 або приблизно на 30-50 95) порівняно з необробленими культурами. Іншими мірами продуктивності культури є кількість плодів, вихід, вміст крохмалю або сухих речовин, вміст цукру або сухих речовин за шкалою Брікса, термін зберігання плодів або зібраного продукту, вихід товарного врожаю заданого розміру, якість плодів або продукту, кущіння трави та стійкість дернини до витоптування, запилення та зав'язування плодів, цвітіння, кількість квіток, тривалість цвітіння, якість квіток, укорінення та маса коріння, стійкість врожаю до полягання, абіотична стресостійкість до спеки, посухи, холоду та відновлюваність після стресу, здатність до адаптації до бідних грунтів, рівень фотосинтезу та зеленіння та здоров'я рослини. Для визначення ефективності продуктів контроль включає таку саму паралельно здійснювану агрономічну практику, але без додавання мікробів.

Описані способи можуть застосовуватись у зв'язку з будь-якою культурою (наприклад, для прямої обробки культури або для обробки грунту до або після висаджування або сівби).

Типовими культурами, крім інших, є люцерна, мигдаль, банан, ячмінь, броколі, канола, морква, цитрусові та садові деревні культури, кукурудза, бавовна, огірки, квітучі та декоративні рослини, часник, злаки, хміль, плодові культури, цибуля-порей, диня, олійна пальма, цибуля, арахіс та бобові, ананас, тополя, сосна та деревинні дерева, картопля, малина, рис, кунжут, сорго, соя, гарбуз, полуниця, цукрова тростина, соняшник, томат, дернові та фуражні трави, кавуни, пшениця та евкаліпт.

Представлені нижче приклади передбачено для пояснення певних конкретних особливостей та/або варіантів втілення. Ці приклади не слід розглядати як такі, що обмежують винахід конкретними описаними особливостями або варіантами втілення.

Приклад 1

Мікробний консорціум А1001

У цьому прикладі описується утворення мікробного консорціуму А1001.

А1001 було утворено з посівної партії мікробів, яку початково було одержано з плодючих грунтів та додаткових мікробів (таких як Васійй5 5рр.) (див., наприклад, патент США Мо 8,748,124, включений до цього опису шляхом посилання). "Посівну" культуру змішували з суспензією, яка містила 5,595 (маса/маса) білку молочної сироватки та 1,2 95 (маса/маса) йогурту у воді ("С маї"), та суспензією, яка містила 0,1 9о (маса/маса) спіруліни та 0,1 95 бо (маса/маса) екстракту бурої водорості у воді (А маї"). Суспензії А маї та С маї окремо приготовляли за З дні до змішування з посівною культурою та інкубувати при навколишній температурі. Посівну культуру, С маї та А маї змішували у пропорції приблизно 81:9:9. Після змішування суспензію додаткових компонентів, яка містила приблизно 70 95 (об'єм/об'єм) меляси, 0,595 (об'єм/об'єм) НУТЬ, 0,003 95 (маса/об'єм) аравійської камеді та 0,02 95 (маса/об'єм) пивних дріжджів (5. сегемізіае), змішували з сумішшю посівної культури, С маї та А маї та додатковою водою у співвідношенні приблизно 16:34:50. Суміш піддавали ферментації протягом приблизно 7 днів при навколишній температурі (приблизно 19-35 С). Через 7 днів резервуари піддавали аерації протягом 30 хвилин через день. Ще додавали води (ще приблизно 10 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували за таких самих умов протягом ще приблизно 10 днів. Ще додавали води (приблизно ще 4 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували протягом ще приблизно 7 днів, та у цей час зразки збирали для аналізу та депонування у АТСС. Після цього А1001 зберігали у контейнерах при навколишній температурі.

Приклад 2

Аналіз мікробів у А1001 шляхом посіву

У цьому прикладі описується аналіз мікробів, присутніх у АТ001, шляхом паралельного посіву у аеробних та анаеробних умовах.

Зразки (50 мкл) збирали з аерованого контейнера з А1001 (підданим перемішуванню із застосуванням лопаті мішалки з нержавіючої сталі при 120 об/хвил. протягом 8 хвилин) із застосуванням підданого санітарній обробці сифонного роторного насоса. У 1-й день зразок вортексували (наприклад, протягом 60 секунд при 2000 об/хвил.) для забезпечення рівномірного розподілу мікробів. У пробірку з 9,8 мл стерильної води додавали 0,1 мл зразка

А1001 та 0,1 мл НМУТЬ (розведення 10). Пробірку інкубували при 35 "С протягом 72 годин без збовтування. Через 72 години (3-й день) пробірку протягом короткого часу вортексували та здійснювали послідовні 10-разові розведення у стерильній воді від 103 до 10).

Кожен розведений зразок висівали (100 мкл) на планшет з поживним агаром (для аеробного культивування мікроорганізму) та планшет з агаром для стандартних способів (для анаеробного культивування мікроорганізму), з З репліками для кожного. Планшети з поживним агаром культивували при 27 "С протягом 48 годин. Планшети з агаром для стандартних способів інкубували при 35 "С протягом 72 годин у анаеробній камері. Після інкубації для кожної культури вибирали розведення, яке давало на виході менше, ніж 100 колоній. Для вибраного розведення всі з колоній на кожній з реплік планшетів підраховували та розраховували кількість колонієутворюючих одиниць (КУО)/мл. Посів АТ001 показував 4,0 х 107 КУО/мл у аеробних умовах та 4,3 х 107 КУО/мл у анаеробних умовах.

Приклад З

Мікроматричний аналіз мікробів у АТ0О01

Цей приклад описує мікроматричний аналіз мікробів, присутніх у А1001.

Зразок АТ1001 аналізували за допомогою бесопіа Сепоте (5ошцій Зап Егапсізсо, СА) із застосуванням аналізу 3 РпуїоСТір м. ДНК виділяли зі зразка із застосуванням комплекту для виділення ДНК РомжегбБоїйф (Мо Віо Іарогаїйогіє5, Іпс., Сагієрад, СА) згідно з інструкціями виробника. 165 рРНК ампліфікували (35 циклів ПЛР). Гени ампліфікували із застосуванням виродженого прямого праймера 27Р.1 (АСЕСТТТОАТСМТООСТСАСс; 5БО І МО: 1) та невиродженого зворотного праймера 1492К (ССТТАССТІОТТАССАСТТ; 5ЕБЕО ІЮ МО: 2).

Продукти ампліфікації концентрували із застосуванням способу твердофазної зворотної іммобілізації та кількісно визначали шляхом електрофорезу із застосуванням біоаналізатору

Адіепі 2100 Віоапаіулег. До кожного ампліфікованого продукту додавали РпуїоСпПпір Сопігої

Міх м. Амплікони фрагментували, мітили біотином та гібридизували з матрицею РпуЇоСпір м (3, яка включає »1,1 мільйона зондів, спрямованих приблизно на 55 000 окремих мікробних таксонів, з багатьма підтвердженнями на кожну операційну таксономічну одиницю (ОТ).

Матриці промивали, забарвлювали та сканували із застосуванням сканера СепеАіІтау? (комплекту для мікроматричного аналізу СепеСПпіре, АПутеїтгіх).

За допомогою програми для обробки РіуїоСпір від бесопа Сепоте випробували та аналізували приблизно 330 мільярдів молекул. Серія наборів проб з ідеальним спарюванням (РМ) та порушенням спарювання (ММ) забезпечувала дані інтенсивності флуоресценції (РІ), які фіксувались як пікселі на зображенні та збирались як ціле число. Потім програма здійснювала поправку на фонову флуоресценцію та оцінку шуму та нормалізувала результати за рангом.

Після цього результати використовували як вхідні дані для емпіричного виявлення наборів зондів. Емпіричний ОШТ, відстежений набором зондів, після цього отримував таксономічну анотацію з посиланням на опубліковану у травні 2013 р. базу даних Сгеепдепе5 для 165 рРНК (дгеепдепез.ІБІ.дом) з комбінації 8-мерів, які містились в усіх зондах набору. Потім таксони бо розпізнавали за стандартною таксономічною назвою або за допомогою ієрархічного ідентифікатора таксонів.

Після розпізнавання таксонів для включення до аналізу значення, які використовували для кожного зразка таксонів, заповнювали двома різними способами. У першому випадку показник відносного поширення використовували для визначення рангу поширення кожного таксону відносно інших. У другому випадку застосовували бінарну метрику присутності / відсутності для визначення наявності кожного таксону у зразку.

Дані мікроматричного аналізу також використовували для вибору мікробів для включення до описаних авторами композицій (таких як мікроби, перелічені у Таблиці 1 та будь-якій іншій частині цього опису). Мікроби (таксон, рід або вид) розташовували у порядку відносного поширення та ці мікроби відбирали на основі потрібних характеристик.

Приклад 4

Аналіз мікробів у А1001 шляхом секвенування

У цьому прикладі описується аналіз послідовності мікробів, присутніх у АТ1001 шляхом секвенування 165 РрДНК.

Геномну ДНК видобували зі зразка АТ001. 165 рДНК ампліфікували шляхом ПЛР та секвенували із застосуванням мікробної розпізнавальної системи МІСКОЗЕО ІЮ (Арріїєйд

Віозузіет5/і Ше Тесппоїіодіев, сгапа Ізіапа, МУ). Дані секвенування аналізували, застосовуючи програму ЗНЕКГОСК ОМА (МІОІ Гарх, Межагк, ОЕ). Розпізнані очищені ізоляти перелічено у

Таблиці 2. Відповідність на рівні виду присвоювали, якщо 95 видової відмінності (90050) між невідомим зразком та найближчим відповідником була меншою за приблизне середнє значення 9050 між видами у межах конкретної генетичної родини, що зазвичай становить 1 95.

Відповідність на рівні роду присвоювали, якщо послідовність не відповідала вимогам для відповідності на рівні виду, але все ж була зосереджена у межах чітко визначеного роду (50 більше, ніж 1 95, та менше, ніж приблизно 3 95).

Таблиця 2

Мікроби, розпізнані у А1001 шляхом 165 рДНК секвенування. ям | ше | хво. |ретосюя достовірності ла Раепірасіїивсоокїї 0 |Рід | Зб | 537 1716 Раепірасіїйивспірепвівї / |Вид///////// | 084 | 538 1 1с Віемірасійивсповпіпенвівї Рід | 105 | 523

ШИНИ АННИ СНИ ПЕС НС ОО

Вгемібаснизв рагабгемів ле Віемірасійивсповпіпенвів.ї/// (Рід | 105 | 523 га Раепірасіїйивспірепвівї (Вид | 037 | 538 125 Раепірасійиєспірепвіїї // |Вид/////////// | 083 | 539

За |Раепірасійивспірепвівї (Вид | 037 | 538 36 Віемірасійивсповпіпенвівї/// Рід | 105 | 523 111456 оМотают 77777777 17117171 973 | 518 о 4с Раепірасіїйивспірепвівї (Вид | 084 | 538 ба Іасіорасіїив рагаатадіії.// (Вид | 028 | 561 855 Раепірасіїйивспірепвівї // |Вид////////// | 065 | 538 000 5со 0 |Немаєспівладінняд//-//С|777717171717171717111111 | 973 | 518

Приклад 5

Біодеградація хітиновмісних матеріалів

У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітиновмісних біологічних

Зо матеріалів із застосуванням мікробного консорціуму А1Т001. Однак у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітиновмісних біологічних матеріалів.

Побічні продукти креветок одержують від підприємств з переробки креветок та транспортують у закритих охолоджених контейнерах. Після перевірки якості сировини побічні продукти креветок гомогенізують для досягнення розміру частинок приблизно до 3-5 мм.

Попередньо активовані мікробні культури А1001 (приблизно 0,2-100 мл/л) та сахарозу (приблизно 5 г/л) змішують з гомогенізованим побічним продуктом креветок (приблизно 50 г/л) та перемішують до гомогенності суміші. При безперервному перемішуванні температуру підтримують на рівні навколишньої температури (приблизно 19-35 "С) та рівень рН доводять до 3,5-4,0 лимонною кислотою. Змішані інгредієнти переносять до у підданий санітарній обробці ферментаційний чан (25 000 л) і ферментують при 30-36 "С протягом 120 год. Застосовують перемішування протягом 30 хвилин принаймні двічі на день. Під час процесу ферментації відстежують рівень рН і загальну титровану кислотність (ТТА, 95) визначають шляхом титрування з 0,1 М Маон. Ферментацію припиняють, коли ТТА досягає приблизно 3,5 95, та/або рН досягає приблизно 4-5.

Ферментовані культури подають у безперервний декантатор. Відокремлений твердий шар з етапу зціджування піддають центрифугуванню для видалення ліпідного шару. Очищену рідину (НУТЬ) змішують з цукром (таким, як меляса, 10 95 (об'єм/об'єм)), потім зберігають у баках- накопичувачах або розподіляють по контейнерах. Тверді матеріали з етапу зціджування висушують перегрітим повітрям при 120 "С, доки вміст вологи у них не стає нижчим за 8 95, потім перемелюють до 200 меш. Висушений продукт (НУТс) пакують у пакети або мішки.

Приклад 6

Біодеградація хітину

У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітину із застосуванням мікробного консорціуму А1001. Однак спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітину.

Мікробну культуру А1001 попередньо активують цукром (приблизно 2,5 г/л) у чані на 10000 л протягом трьох днів. Активований інокулум змішують з гідролізатом білка, таким, як НУТЬ (приблизно 500 мл/л) та хітином (НУТс, наприклад, одержаним, як описано у Прикладі 5). Суміш обережно перемішують протягом 1 години для досягнення повної гомогенізації. Суміш ферментують протягом 20 днів при навколишній температурі (наприклад, приблизно 19-35 "С) з перемішуванням протягом приблизно 8 годин щодня та контролем рівня рН (рН 4,0-5,0). Зразки збирають періодично, наприклад, кожні два дні, для кількісного визначення глюкозаміну та, необов'язково, хітозану. Після завершення ферментації суміш фільтрують крізь фільтр, який затримує частинки по 300 меш, здебільшого залишки хітину. Фільтрат утримують та поміщують у пляшки після характеризації продукту.

Приклад 7

Обробка польової кукурудзи мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності кукурудзи із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка польової кукурудзи мікробною композицією подібною до А1001, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 здійснювали для оцінки врожаю після додавання мікробної композиції до типового азотного міжрядного підживлення (1 л/акр мікробної композиції; 32 ОАМ рідких добрив; випробувана ділянка) у порівнянні з необробленою контрольною (порівняльною) ділянкою, при застосуванні на стадії М2. У двох великомасштабних реплікованих випробуваннях на смугах (загалом 1 акр) врожаї на випробуваних смугах були на 8-10 95 вищими, ніж на паралельних контрольних (порівняльних) смугах (Фігура 4А).

Випробування 2 продемонструвало, що внесення у борозну та міжрядне підживлення були однаково ефективними для підвищення врожайності кукурудзи. У випробуванні на 1-акровій смузі великі ділянки обробляли мікробною композицією, яку додавали у борозну під час висівання насіння (1 л/акр) або на стадії М2 як міжрядне підживлення (3 галони рідких добрив

МРК, 1 літр суміші поживних мікроелементів). Обидва способи застосування продемонстрували, що випробувані смуги мали приблизно 5 95 підвищення врожаю, приблизно 10 бушелів/акр порівняно з контрольними ділянками (Фігура 48). Додавання суміші промислового виробництва 1095 гумінової кислоти / біостимулятора до випробуваної композиції (Асіцаге) у борозну забезпечувало таке саме 595 підвищення врожаю, що й при додаванні лише мікробної композиції порівняно з необробленими контрольними ділянками (Фігура 48).

Випробування З продемонструвало, що додавання азотних стабілізуючих продуктів або не мало впливу, або трохи збільшувало ефект підвищення врожаю, забезпечуваний мікробною композицією для кукурудзи, та додатково підтверджувало незмінне підвищення врожайності, 60 забезпечуване мікробною композицією, або внесеною у борозну, або змішуваною з композицією для міжрядного підживлення (Фігура 4С). При випробуванні на 1-акровій смузі внесення у борозну та міжрядне підживлення забезпечувало 3 95 підвищення врожайності (8 бушелів/акр) у порівнянні з контрольною (порівняльною) ділянкою. Додавання Асіцаїе викликало невелике підвищення врожайності (4 95 зростання врожайності, на 9 бушелів/акр більше у порівнянні з контрольною ділянкою). Додавання азотних стабілізуючих продуктів, Іпеїіпсі або М-Ктгев55, або не давало ефекту (незначне 2,5 95 зростання врожайності для Іп5ііпсі) або дещо більше зростання врожайності (4,6 95 підвищення врожайності для М-Ктге55, на 11 бушелів/акр більше у порівнянні з контрольною ділянкою).

Випробування 4 продемонструвало, що НЖТЬ при внесенні у борозну також підвищує врожайність порівняно з контрольними ділянками. У 20-акровому випробуванні НУТЬ додавали до добривно-поживної суміші для внесення у борозну (1 л/акр). Порівняно з паралельною контрольною (порівняльною) площею оброблені НУТЬ акри давали підвищену на 3,595 (7 бушелів/акр) врожайність (Фігура 40).

Випробування 5 продемонструвало, що при оцінці у режимі випробування на реплікованих ділянках одноразова бактеризація грунту для вирощування кукурудзи мікробною композицією у кількості 1 л/акр з внесенням у борозну на стадії Мб, яку доставляли з 28 95 азотних добрив через крапельне зрошення, забезпечувала 14 95 підвищення врожайності у порівнянні з необробленою контрольною ділянкою по п'ятьох реплікованих ділянках (Фігура 4Е).

Випробування 6 продемонструвало, що НУТЬ при окремому застосуванні для обробки листя кукурудзи також забезпечує 9,595 підвищення врожайності порівняно з необробленою контрольною ділянкою при випробуванні у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками.

НУТЬ наносили шляхом обприскування на листя двічі по 1 л/акр щоразу на стадіях М8 та МТ (Фігура 4Б).

Випробування 7 також було випробуванням у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками кукурудзи, яке здійснювали в умовах дефіциту води. У цьому дослідженні кількість зрошення була обмеженою до 11 дюймів води у порівнянні з ділянками з належним поливом, які отримували 17 дюймів зрошення. Одноразова обробка із застосуванням 1 л/акр мікробної композиції, яку доставляли на стадії Мб з 28 95 азотних добрив через крапельне зрошення (оброблена ділянка), забезпечувала 38 95 підвищення врожайності у порівнянні з ділянками, які

Зо обробляли лише добривами (необроблена порівняльна ділянка). Збільшення врожаю, яке спостерігалося при обробці мікробною композицією, представляє потенціал збільшення врожайності на 31 бушелів/акр (Фігура 45).

Приклад 8

Обробка пшениці мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності пшениці із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка пшениці мікробною композицією, подібною до А7Т001, або з НУТтЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 продемонструвало значне підвищення врожайності пшениці, якому сприяло внесення мікробної композиції у грунт. У цьому 80-акровому випробуванні мікробну композицію додавали у кількості 1 л/акр до суміші добрив для поверхневого підживлення на стадії 54.

Зібраний врожай демонстрував 11 95 (10 бушелів/акр) підвищення врожайності при застосуванні мікробної композиції (Фігура 5А).

У випробуванні 2 порівнювали три великі випробування у одній географічній зоні із загальною площею 271 акр обробленої мікробною композицією (випробуваної) та 354 акри паралельно вирощуваної необробленої (контрольної) пшениці. Усі випробування виконували однаково, з додаванням мікробної композиції (1 л/акр) до суміші добрив для поверхневого підживлення та застосуваннями на стадії росту пшениці 54. Відносно паралельних контрольних акрів на тій самій фермі оброблена пшениця давала вищі врожаї, з підвищенням врожаю від бою до 1795 ії до 3695, з середнім підвищенням врожаю для трьох показників по фермі приблизно 16 95 (Фігура 5В).

У випробуванні З оцінювали обробку пшениці мікробною композицією та НУТрЬ у комбінації, та було виявлено, що комбінація підвищує врожайність. У великому випробуванні з круговим зрошенням (129 акрів) мікробну композицію вносили до сівби у кількості 1 л/акр, включену до бо нормальної програми підживлення, з наступним круговим доставленням НУТЬ як засобом обприскування листя (1 л/акр) та гербіциду на стадії росту пшениці 56. Порівняно з необробленими контрольними (порівняльними) рослинами оброблена площа давала на 10 95 вищий врожай (14 бушелів/акр), ніж контрольна площа (Фігура 5С). Крім того, типові рослини пшениці з оброблених ділянок візуально мали більше коріння порівняно з необробленими контрольними рослинами (Фігура 50).

Приклад 9

Обробка томатів мікробною композицією

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності томатів із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка томатів мікробною композицією, одержаною подібно до А1001, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бурянами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/акр з одноразовим внесенням при пересаджуванні (у воді для пересаджування) з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (чотири рази). На 10-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 10-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 8 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура бА).

Випробування 2 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/"акр шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (п'ять разів). На 49,6- акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 4,45-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 9 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6В).

Випробування З мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/акр з одноразовим внесенням при пересаджуванні (у воді для пересаджування) з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні

Зо (тричі). На 15,6-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 73,2-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 2995 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6С).

Випробування 4 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/акр шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (чотири рази). На 8,7- акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 6,57-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала знижений врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 60). Однак на це випробування вплинуло серйозне навантаження через хворобу (Ризагішт), яке, очевидно, зумовило результат випробування. Крім того, у цьому випробуванні розмір ділянки був відносно малим, а також воно включало обробку різних культурних сортів.

Випробування 5 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/акр у комбінації з обробкою добривами. Одне внесення здійснювали при пересаджуванні у режимі 8-7-7 з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (тричі) ОАМ. На 33,3-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 16,45-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 5 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6Е).

Приклад 10

Обробка соняшника мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності соняшника із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка культури соняшника мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування АТ001, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

У цьому випробуванні оцінювали обробку соняшника мікробною композицією, яку застосовували у кількості 1 л/акр шляхом крапельного зрошення через 30 днів та 60 днів після сівби. На 93,5-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 97,13-акровою контрольною 60 ділянкою оброблена площа давала приблизно на 5095 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 7). Крім того, обробка у результаті забезпечувала збільшення швидкості проростання.

Приклад 11

Обробка рису мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності рису із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка рису мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1001, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

У цьому випробуванні оцінювали обробку рису мікробною композицією, яку застосовували у кількості 1 л/акр з водним розчином аміаку. На 61,8-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 100,7-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 6 956 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 8).

Приклад 12

Обробка сої мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності сої із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка сої мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування АТ1001, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Зо Випробування 1 продемонструвало підвищення врожайності сої, якому сприяло застосування НУТЬ у кількості 1 л/(акр з фунгіцидом. У двох випробуваннях на одному акрі оброблена площа давала приблизно на 5 95 більший врожай у порівнянні з контрольними рослинами (Фігура 9А).

Випробування 2 мало на меті оцінку обробки сої мікробною композицією або обробки мікробною композицією та НМУТр у кількості 1 л/акр шляхом листового та міжрядного підживлення. Оброблена площа давала знижений врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 98). Однак випробування здійснювали на ділянці малого розміру у поєднанні з проблемами, створеними дикими тваринами (перед збиранням врожаю на ділянці оселились олені, які споживали боби).

Випробування 3 продемонструвало підвищення врожайності сої, якому сприяло застосування НУТЬ у кількості 0,5 л/акр з гербіцидом шляхом нанесення на листя. На 60-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 26,48-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 12 95 підвищений врожай у порівнянні з контрольною.

Приклад 13

Обробка полуниць мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності полуниць, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка полуниць мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування АТ1001 плюс НУТЬ продемонструвала збільшення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Збільшенню сукупної товарної продуктивності сприяло застосування мікробної композиції та

НУТЬ шляхом крапельного зрошення. У цих п'яти незалежних випробуваннях сорт бабгіпа оцінювали в Уельві, Іспанія. За тиждень до пересаджування розсади на ділянках з підвищеними грядками 2 л мікробної композиції та 4 л НУТЬ розводили у воді тай додавали до розчину для крапельного зрошення на гектар при однаковій нормі застосування через 2, 4 та 6 тижнів після бо пересаджування. На 3, 5 та 7-й тижні розведену мікробну композицію додавали у кількості 1 л/га та розведену НУТ у кількості 2 л/га. З 9-го тижня до кінця сезону збирання врожаю розведену мікробну композицію та НЖТЬ додавали по 1 л/га. В усіх п'яти випробуваннях обробка збільшувала врожайність на 5-11 95 порівняно з паралельними необробленими ділянками з середнім підвищенням врожайності приблизно на 8 95 для всіх п'яти випробувань (Фігура 10).

Приклад 14

Обробка столового буряка мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності столового буряка, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка столового буряка мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1001 плюс НУТЬ продемонструвала збільшення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Збільшенню середньої маси зібраних коренеплодів сприяло застосування мікробної композиції (2 л/акр) та НУТЬ (2 л/акр) шляхом крапельного зрошення та НУТЬ (1 л/акр) шляхом нанесення на листя. На 8-акровій випробувальній ділянці порівняно з 9-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно у 2,2 разу вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 11).

Приклад 15

Обробка савойської капусти мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності савойської капусти, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка савойської капусти мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1001, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації,

Зо боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування продемонстрували збільшення врожайності капусти завдяки застосуванню мікробної композиції (2 л/акр) та НУТЬ (2 л/акр)у шляхом крапельного зрошення та НУТЬ (1 л/акр) шляхом нанесення на листя. Капусту збирали у два цикли, представлені як "перший зріз" качанів капусти та наступний "другий зріз" качанів капусти. Як показано на ФІГУРІ 12А, на 10,9- акровій випробувальній ділянці порівняно з 14,9-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 18 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (перший зріз) та приблизно на 31 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (другий зріз). Як показано на

ФІГУРІ 128, на 3,7-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 1,5-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 6195 вищий врожай у порівнянні з контрольною (перший зріз) та приблизно на 64 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (другий зріз).

Приклад 16

Обробка насіння та бульб НУТа

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності пшениці та картоплі із застосуванням попередньої обробки насіння або насінних бульб НУтТа. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка насіння пшениці або насінних бульб перед сівбою композицією НУТа, яку приготовляли із застосуванням мікробного консорціуму у спосіб, подібний до приготування

А1001, продемонструвала підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Для пшениці насіння обробляли у розведеній суспензії НУТа, яку розводили у кількості З мл нНУута у воді на кг насіння. Після вкривання насіння та висушування на повітрі оброблене насіння висівали та порівнювали з ідентичними ділянками необробленого насіння. Паралельно засіяні ділянки площею у один акр демонстрували приблизно 22 95 збільшення зібраного 60 врожаю пшениці (Таблиця 3). Обробку насінних бульб картоплі здійснювали шляхом розведення НУТАа у воді та обробки у кількості 1 мл на кг насінних бульб. Після висушування на повітрі оброблені насінні бульби висівали паралельно з необробленими контрольними бульбами на реплікованих ділянках по 1200 метрів. Оброблені Нута насінні бульби давали збільшення врожаю картоплі на 32-35 95 у двох окремих випробуваннях (Таблиця 4).

Таблиця З

Врожай від обробленого НуУтТа насіння пшениці

Доза (мл/кг Вага соломи / 5 ме площі | Вага зерен / 5 мг площі Врожай

Обробка . насіння) (кг) (кг) (кг/акр) нНУта 7800 7777171717171798 77777777177717171717171717126 77171717 1980

Необробл.ї | -:(/- 2 2 БНфБИ6Ж | (рЗ/20/0/755 щЩщ ЇЇ Б 17 | 160

Таблиця 4

Врожай від оброблених НуУтТа насінних бульб

Доза нище 2 | - ЇЇ вул

Кількість бульб / | Вага бульб / ме |Кінцевий вихід! 905 збільшення

Обробка (мл/кг ослин (ку) (кг/акр) виходу бульб насіння) Р У Р ду су

Випробування 1 нНУта 12448

Необробл.ї | - | 6 | 168 | 940 | 0

Випробування 2 нНУта 700 | 77777877 252 | 10720

Необробл. 7932. | 0

Приклад 17

Підвищена стресостійкість картоплі

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищення якості бульб картоплі шляхом обробки мікробною композицією, подібною до А1001 та НУТ, під час вирощування у стресових польових умовах.

Сорт картоплі Кибхбхеї Виграпк вирощували у традиційних умовах у випробуванні з реплікованими ділянками (чотири ділянки) та обробляли (мікробна композиція та НУТЬ у кількості 1 л на акр під час сівби у борозну, з наступним дворазовим нанесенням на листя НУТЬ у кількості 1 л/акр через 55 днів, а потім через 85 днів після сівби), або не обробляли (контроль).

Сорт Киззеї Виграпк є схильним до зниження якості в умовах нестачі води, поживних речовин або спеки. У цьому випробуванні обробка мікробною композицією та НУТЬ підвищувала толерантність до викликаного стресом зниження якості, яке називається дуплистістю. На ділянках, оброблених мікробною композицією, 1,68 95 зібраних бульб було уражено дуплистістю на відміну від контрольних ділянок, де відсоток дуплистості складав 8,35 95 (Таблиця 5).

Таблиця 5

Дефект дуплистості картоплі

Обробка Врожай (кг/акр) Відсоток дуплистості

Необроблені (контроль) 32,181 8,35 90

Мікробна композиція плюс НУТЬ 32,636 1,68 957 хр«0,01 у порівнянні з необробленими

Приклад 18

Аналіз життєздатності огірків

Швидкі функціональні аналізи рослин застосовують для швидкої оцінки реакції рослини на нові мікробні композиції. із застосуванням аналізу життєздатності та росту огірків цей приклад демонструє, що А1001 посилює ріст та розширення листя рослин.

Після попереднього пророщування сіянців огірків у просоченому поживними речовинами

Зо рулонному папері для пророщування протягом чотирьох днів пророщені та синхронізовані рослини обробляли розведеною сумішшю рідких добрив та мікробного консорціуму. Рослини переносили до підготовленого безгрунтового середовища росту, попередньо обробленого добривами та випробувальним розчином. Мікробну композицію А1001 розводили у співвідношенні 1:2000 у поживному добривному середовищі. Як контрольну обробку для порівняння брали еквівалентну кількість води, яку додавали до поживного середовища.

Принаймні 16 рослин, які представляли кожну обробку й вирощувались у горщиках, включаючи контрольні рослини, рандомізовано розподіляли по планшетах і вирощували у визначених умовах росту з контролем температури та світла. Через 18 днів вимірювали індекс площі листя (ГАЇ) першого справжнього листа кожної рослини. Також записували вологу масу всієї рослини.

Дані аналізували із застосуванням однофакторного аналізу АМОМА (дисперсійного аналізу) та апостеріорного критерію Тьюкі для порівняння зразків у експерименті.

На 18-й день показник ГАЇ першого листа завдяки обробці АТ001 був значно вищим за контрольне значення (Фігура 13).

У альтернативному або додатковому до описаного вище варіанті описуються такі варіанти втілення:

Варіант втілення 1 стосується композиції, яка включає мікроби у депонованому у АТСС зразку РТА-121750 (А1001).

Варіант втілення 2 стосується композиції, яка включає п'ять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж ЮОезиПососси5 зрр., безиМоїтасиїшт з5рр., Магіпорасієї зрр., Мігозоритійи5 5рр., Аго5ріпПит з5рр., Васійни5 в5рр., І асіорасійи5 5рр., Нитіпососси5 5рр., І ерюїупабуа зрр.,

Адиабасієтгіит з5рр., І еріозрійПит 5рр., Раєпірасіїи5 5рр., МістосоЇви5 5рр., Рееидотопавз зрр.,

Сіовігідіит 5рр., Хепососсиз 5рр., Асейобасієг в5рр., Сапаїдатв 5рр., та МеїНапозавїа 5рр.

Варіант втілення З стосується композиції, яка включає десять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж ЮОезиПососси5 зрр., безиМоїтасиїшт з5рр., Магіпорасієї зрр., Мігозоритійи5 5рр., Аго5ріпПит з5рр., Васійни5 в5рр., І асіорасійи5 5рр., Нитіпососси5 5рр., І ерюїупабуа зрр.,

Адиабасієтішт з5рр., І еріозрійПит 5рр., Раєпірасіїив5 5рр., МістосоЇви5 5рр., Рееидотопавз зрр.,

Варіант втілення 4 стосується композиції, яка включає п'ятнадцять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж ОЮезийососси5 врр., ЮОевзиМоїотасиішт 5рр., Магіпобрасієї 5рр.,

Зо Міпо5оритіїш5 врр., Аг2о5ріпПшт врр., Васіїйв5 в5рр., Іасіобасіїйб5 5рр., Нитіпососсив 5рр.,

І ершюіупдбруа 5рр., Адиабасіегішт 5рр., І еріоз5ріпит 5рр., Раєпірбасійи5 5рр., МістосоЇєи5 5рр.,

Реємдотопавз врр., Сіовзійдіит врр., Хепососси5 зрр., Асеїобрасієї зрр., Сапаідатцв 5рр., та

МеїНнапозавіа 5рр.

Варіант втілення 5 стосується з будь-якого з варіантів втілення з 1 по 4, що також включає один або декілька компонентів, до яких належать хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

Варіант втілення 6 стосується способу, який включає: змішування хітиновмісного біологічного матеріалу з композицією згідно з будь-яким з варіантів втілення з 1 по 5 для утворення суміші; ферментацію суміші; та розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

Варіант втілення 7 стосується способу згідно з варіантом втілення 6, причому хітиновмісний біологічний матеріал включає водяну тварину або побічний продукт водяної тварини, комаху або гриб.

Варіант втілення 8 стосується способу згідно з варіантом втілення 7, причому водяною твариною є водяна членистонога тварина.

Варіант втілення 9 стосується способу згідно з варіантом втілення 8, причому водяною твариною є креветка, краб або криль.

Варіант втілення 10 стосується водної фракції, утвореної способом згідно з будь-яким з варіантів втілення з 6 по 9.

Варіант втілення 11 стосується твердої фракції, утвореної способом згідно з будь-яким з варіантів втілення з 6 по 9.

Варіант втілення 12 стосується способу, який включає контактування грунту, рослин, або частин рослин з композицією згідно з будь-яким з варіантів втілення з 1 по 5.

Варіант втілення 13 стосується способу згідно з варіантом втілення 12, який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з компонентів, до яких належать хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

Варіант втілення 14 стосується способу згідно з варіантами втілення 12 або 13, який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з водною фракцією згідно з варіантом втілення 10 або твердою фракцією згідно з варіантом втілення 11. бо Варіант втілення 15 стосується способу згідно з будь-яким з варіантів втілення з 12 по 14,

який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом.

З огляду на багато можливих варіантів втілення, до яких можуть застосовуватися принципи винаходу, слід визнати, що наведені варіанти втілення є лише прикладами та не можуть розглядатись як такі, що обмежують обсяг винаходу. Натомість обсяг винаходу визначається представленою нижче формулою винаходу. Таким чином, ми заявляємо як винахід усе, що охоплюється обсягом та сутністю цієї формули винаходу.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«110» дагіпоз д5 жзоп, ЗцпаД-хопа Н

Змогаз, Касйігеп

Уацпек., В. КУ каїздора! , 5еіуазипіагат «120» МІКРОБНІ КОНСОРЦНІУМИ «130» 9223-95738-02 «1505 5 Б2/126,353 «1515 2015-09-27 «150» 2 «170» РаїептІп мегзіов 3.5 «-10з: 1 «21ї» го «212» ДНК «213» Штучна послідовність «Ве» «223» Синтетичний олігонуклеотидний праймер «МО» 1 аодгасттааї стедостсад 28 «210» 2 «2115 19 «2122 ДНК «213» Штучна послідовність «ВЕ» Й Й Й «геЗ» Синтетичний оліговуклестидний праймер «02 2

Чавтасстта єБасодаєтї 19

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин, яка включає мікроби з патентного депонування мікроорганізмів АТСС під номером РТА-121750.

2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що додатково включає одне або декілька з таких як: хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

3. Спосіб біорозкладання хітиновмісного біологічного матеріалу, який включає: змішування хітиновмісного біологічного матеріалу з композицією за п. 1 або п. 2 для утворення суміші; ферментацію суміші; та розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що хітиновмісний біологічний матеріал включає водяну тварину або побічний продукт водяної тварини, комаху або гриб.

5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що водяною твариною є водяна членистонога тварина.

6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що водяною твариною є креветка, краб або криль.

7. Водна фракція, утворена способом за будь-яким із пп. 3-6.

8. Тверда фракція, утворена способом за будь-яким із пп. 3-6.

9. Спосіб підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин, який включає контактування грунту, рослин або частин рослин з композицією за п. 1 або п. 2.

10. Спосіб за п. 9, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з таких як: хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

11. Спосіб за п. 9 або п. 10, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з водною фракцією за п. 7 або твердою фракцією за п. 8.

12. Спосіб за будь-яким із пп. 9-11, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом.

13. Спосіб за будь-яким із пп. 9-12, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома пестицидами, одним або декількома фунгіцидами, одним або декількома гербіцидами, одним або декількома інсектицидами, одним або декількома рослинними гормонами, одним або декількома еліситорами рослин або комбінаціями з двох або більшої їх кількості. 3 АМАТ ! Змішу» ! - АТО СУА нальний і чай і СО І ! Ффермевчація но | Вода Увсншще Фіг -О7 ть ши Ніпід! г Ї КаенннненнннняЙ ЧО Ї сн Еблеотувахня | й : що ' насіння у. А. Декантаціях Центрифутування ії ЗмННу- тт Пукор | вальний Лимонна м за СК | , хнелота , Н І і нЖтс се Сян Внеупшеування Й і В МОХ Фермензація що , Відходи і Тонке подрізнення креветок шо (за пеобжідності Томотенінцця

Фіг.2 і нУТь Деквнтація І нУте нута Ферментація АТО С СТАН СЗЗ

ФНг.З Цані випробування І на кукурудзі (Айова) Дані випробування І на кукурудзі (Айова!) я ек лагу В ооо 2175 21781 3 ТИ ми пдхніатито титани ху нАКЯ Тл дахи й палат Ан піти Тора хе КОХ Я ре ; я ОКО що ОО КОХ що ожоа - ОКО д МОЄ ш- Ка ї оз 87960000 Контроль п ЩЕ сн нин нн юн в М Оброблеві Ж МО ШКО МОХ. МЕ ОККО МОХ Фіг4А Із жХхжІВхІ Ін хизі«ч її Га пре А тку вили Дані випробування 2 на кукурудзі (Кентуккі) птінк., ся зюд тоб 209,7 КО ОК КО -е КО ХОМ ОБОХ ОКО КОКО ВОК ме Му ж в п У о. ж Контроль Я ОО - ОО - МОХ й ож - о и ЕЕ. ше ТЗ я 00 ЕОМ МО ВО ОК. КОМ , 0 ЕЕ ОО МО ОХ В Ок 100 І ши Ж й ШК... У борозну У борозну Міжралне Асцце підживлення ФігАВв

Дані випробування З на кукурудзі (Кентуккі) де 250.2 о зав.а Б - дк 245,2 МОЯ Фоздо с В ВВІВ я 7100102 Оброблені я 030 сою що вне я й я ЕЕ її о Фо ОХ о. о: М я я т 220 і й її я і й. о Ви Ії о М борозну У борознут Міжрядне У борозну У борозну т сша підживлення Івзйвсі М-Ктевк ФфігАС т Н тв; ; тиву й А а: Дані випробування на кукурудзі (Айова)

206.24 МОНО я ОО ОК т Ох хе 2 199.19 с. ОО і с МЕ шо Мн ОО й КО ня ОХ В за с п вв пиемимимимям о он и шення З Б ю ОО М ОКО

Фіг.40 45 8 - я В 40 п - о ОО

Є. ОО с Ме ОО Я во 0. с 2 с г х ; 0. п. Мк с о: 2 430 пот чани ОХ ння шия плини МО оси нини ХО ОККО МКУ їх ОК о оВя 5 о. о В і в о. і о ВИНО ЕК Бо КОХ Оброблені Контроль Обробка Фіг 4Е

- І ь ї- с г нн: 000 ШИНИ ще о и ги о. - 5 о ОБ с с дос ВН С000ннно її 0 ШИ нив Контроль Обробка

Фіг. 4Е ВО10 б» ОО, на пом п п В Е с х о в 5 0 пн с пон пани з з |! пеня

З. в г . - у в о м ОК о ОО вою шо ШИНИ гі 0 п. 5 с с с З сен он п. . о. Оброблені Обробка Контроль Чнга4в

Дані випробування 1 на пвенннці (Джорджія) сек 2 95 Що оон оленя нн повне дині КУ МОМ щ "Й с АХ Б ОО хо . : В 85 с Ук Порівняльні 12 ен и КН и опо нан ц РПДЧчЕ зок А о: шо Оброблені Ї й ДОБИ МК А МОВО ОВО ння нн 000 НН ХОМ, ОМ КЕ с с Врожай (бушелів/акр) Фіг БА з са - Я , сах - . Дані випробування 2 на пшениці (Меріленя) 92:58 ОВ, одн нти нн ин нн нн ння УЩ яз в 1 пев т жен ші ВО 7479 що г їв нд - - по ни п. долею г ше З о ї х Контродь Є с ші ше шо. меш 0 ше нтроль МОЯ нен С МС НО. С С М ши т -

ее. й ОХ щомик ОХ ко ВОХОХ кощоок В ж Оюроблен з Фон оо пен ВК МУ ВВ я сени МЕНЕ КК іі ОКО я КОВКИ шЕр м. ОО РО МОЯ Е же. й. й. с о. і ші. | о ЩЕ й. б ж й Фо нн й ще й Я Виробник А Виробних Б Варобних С Підсумож

Фі. її х . с-ще г з й ; Дані випробування 2 на яшеникці (Вашингтон) - 147,15 своє ех ОО ОО М ОКОМ їх г ні ОО фо оч

В 0. - Контроль а 133.51 с й є . 33.51 с ЩО Оброблені що 5 с роблені А еркдчкимм им Ще. й МОМ Ффіг.5С

ОМ м МО КК КК НК НК КТ КК о Сх ОК ОО А ОО З о З о. с ОО г ОО ОО ОО ОХ МО ОО КО СЕК - ї п М ОМ ПО АК В ОК ОО ОО Ов ОО ОКО КОКО с КК о ОО о ОО ШО Он ОО ОО Б ОО и В . З АМКУ СК ОО ж ЖЕ МКК ОККО ще МО КК і і ОХ Ох ВУ нн КО о в и В я о ва нн с СК А нн а а ОН ОО ХОМ тки т ме с я Й, Ох ЕС и ОО Ов о о В о ОО 3 о с с с с У я БО ни ОО и Бах кн ОО а пн В о ша: ДМА о М в ЕЕ ВИХ ВЕ ОО щи в я М В м о ОО о ох ПО ФУ з ЕК а 5-5 В божа с я тд ме 5 ХУКМИММОМУ КМ р вн шир ви КК СТУК КУ АКА УК УКХ и п В В и ВИ де п г ШОК НЕ АК . в ОК Випробу вані по ша Коні рольні п о и ОО оо ни и М а и я Ффіг.50 Лані пищОди Що А ЩИТ ; Дані випробування 1 на томатах (Каліфорнія) жк юс о 58 п шо в ин нн и ш-е 000 Як пхиннннконннио Контроль Е 56.047 с є сСИюненй по 78 ОВ я с М Оброблені щ Он Я еВ 0 ша ОО ши нн 00 НН рі ОК и ОКА їх МКК ЕЕ ВО ШК однини и нн ВСУ

Фіг.бА

Дані випробування 2 на томатах (Каліфорнія) дон понят нн пк птн денну мнту нкх тку пк кухня

56.41 че БУХОКОХ ХХ. я пи а а а ОО З они щ Е ор солені Е пенні тек туту ет ту тик жуки ин ям, чих пит родин ли в нКл, ОО БОБЕР док оон с ни

Фіг. Дані випробування 3 на томатах (Каліфорнія) вро ттнннннктння 57 І 54 с ОО ж ОКО оон пон нн няння ря Ж Контроль х с о бутаюлені тах плн я інн АН Алли Ан КН Ам нтекнютямя ше-н-н-о один скит БО Оброблені я 44.41 с ВИ ОО

Фіг.бС ази пізсатззах пак лде люта . ані випробування 4 на томатах (Каліфорнія

А, .

51.94 нан НН ВВ ОВ ХО 3 Ж ши о нн о НН с ОО НН ж 45 с-м ДОК КК м МО ОО я ; . ЛЮМНЕ КМ На юММКОМОМОМО М. Е З і ох . - Контоль а я пс - контро у ке в ОО Я Затон ЖЕО соня ш пн няння В Оброблені дез ОБ Я п ОО о КОХ КОКО да сни У АН НН

Фіг.б0 М сах г зо ч я гм кі т - як Дані випробування 5 на томатах (Капіфорнія)

49.36 ОКХ |! ОКО ПК Ко, ХОМА ЕК я с : В ОО пе ин ВИ ВКя, ЕЛ ши 2 й щк ОО ОО ОС: ВИННА Ж (ідвойлені пері я КК я ВК тин х ї гм п с Й Оброблені із п ОК ОККО У ЯЗ сн КО Ки няття " оо Ко Гі їх со БФ КБ. МОЖОМОО ОК МОХ З Б МОХ зо НН ії ФігбЕ я о шк зе й лі . Дані випробування на соняшнику (Каліфорнія) 1229 о ЕОЯ100 себя ня й ОО ях о. - контроль рів пики но ни ние ХО ОВ м- 0800 3 ВОВОВО В он в бдпакльні М о с я Обробзені З Во Ви ОМ МОНО г ЕЕ: с СО о 2 ВОК вен КВК нені кни КОКО КК Сх інн 500 ОО я ОО дав 222020 С.О Фіг? й - ; й 5? до « І4 Ч Дані випробування на рисі (Каліфорнія) Ддо снення ння ВД ВУ осн ОККО З 7 с ОВО 00 у ню мин п долю пеню ШЕ Контроль - 78.83 с що Оброблені МО яєчню повер тенет ті ше СН: ороолені й нн 0 ник 0000 НН ; Ффіг.8 со й дсп ОВ Моя о ОО ня шк с ххх Пн 5 шо Р пух нк ке ши с З о оденджнннк нн кнетн коки 3. с І дрон мітить БО І в. о ою 346 о г п

З 5.16 38.35 о вс бе що - с 5 Оброблені Ге 35 ря ХО х - о с Шо о: г п. с

ОО. й | с а її о с. СО -х ЩЕ ОО ! - Ж... ЗО ОКО що з станція ! паст дослі Ви підна ст і станція 2

Фіг.ЗА ВО ня В о: 5. 59 вав Е й с ОБ пи з шенням В: сон Кон троль: | Мі "те ШИ кі Ф в, я Мікроб / Мікро В и ікросня ї ше т по Я г вве я км - ! є пече с за ,озиця ше Кк ропна хх Бех с ОО ОХ . еще . : г шпонння г : омиозинія хо 40 с і с еНУТв Щ о 5 с с шо я ОО ше о. МО с ш с піни КОКО 5 о Може Я с о с ---- ВО ОО За о с М ОО КОКО Я пн

О.К о ОК а ПИКА вне п 0 й що ї о | пил

Фіг.

Збільшення врожаю порівняно з контролем - полуниця (серт зайргіва) саше; нн о ан ЩО Вероні рянмнннння рвря д, : й як я п що б бе т щ Я 0 5 ща Ох п п А ї КИМ Лохина ОК ОО КЕМЕИХ САМО - о 55 щих о ж ще Н МИ МО ВЕК о МО ОК 095 ме ше ше не шк шк Вапр. | Випр. 2 Вир. З Бнпр.4 о Внпр,.5 Середнє збільшення врожаю

Фіг.10 Дані випробування на столовому буряку (Гехас) 254 250 А а м м в а ох і ужиями ую жену ик жют т Б зд сонних шин плшннння Ж Оброблені -щ ло0 шини 0 нн 000 ши

Фіг.11 х КІ й ка БК що зи м Дані випробування 1 на савойській капусті (Гехас) о 400 ло 000 я 4400 шк нн ш-- 0 ше 77 я Оброблені щ С ОО . 04 А ОКО 1-Я зріз. Кількість япиків 2-й зріз. Кількість ящиків

Фіг.12А т, ж еру ? прче алу і пл т т Я . Дані випробування 2 на савойській капусті ( Гехас) ЕС еТУ ИН он А НН й ВЕ о я зоб 301 303 с 7 Контроль ШО дитяти подо їі дп 00103 8 Оброблені мк 200 птн й лини що пенею ЕЕ" пре ння

100... ж ії я НИ 00 я 00 шк 1-й зріз. Кількість ящиків 2-й зріз. Кількість ящиків Ффіг.128 ЩООБЖр сонну нини мини нн тихих : тт Ж У ння п а я | пн нин т с о: 5 Ж - - ща. шо шен . шо . о о шо дід нн ння г пий а с с с с дув и - о и Ук ИН с пня с не пн ЯЩОДУ оолотнтихя "й (Й ФГ Фо сіонттчннх чним й щ Контроль Обробка Обробка (розведення КН) Фіг13