UA111478U

UA111478U - METHOD FOR THE PREDICTION OF PLATO-CELL PLANT CANCER METASTASES

Info

Publication number: UA111478U
Application number: UAU201605077U
Authority: UA
Inventors: Олександр Васильович Ковтуненко; Ігор Станіславович Шпонька; Богдан Вікторович Шпортько; Сергій Миколайович Тимчук; Олександра Володимирівна Пославська
Original assignee: Державний Заклад "Дніпропетровська Медична Академія Моз України"; Олександр Васильович Ковтуненко; Ігор Станіславович Шпонька; Богдан Вікторович Шпортько; Сергій Миколайович Тимчук; Олександра Володимирівна Пославська
Priority date: 2016-05-10
Filing date: 2016-05-10
Publication date: 2016-11-10

Abstract

Спосіб прогнозування метастазів плоскоклітинного раку гортані включає біопсію пухлин, фіксування зразків у нейтральному формаліні, парафіні, виготовлення з них гістологічних препаратів, забарвлення гематоксиліном, еозином, формування зрізів, їх імуногістохімічне дослідження, з використанням моноклонального антитіла Кі-67 як маркера проліферативної активності, мікроскопію та оцінку. Додатково при імуногістохімічному дослідженні використовують маркер росту ендотелію судин VEGF та маркер васкуляризації CD34, а під час імуногістохімічного дослідження спостерігають реакцію 1000 сусідніх пухлинних клітин на використовувані маркери при 200х мікроскопічному збільшенні мікроскопа, де за реакцією на маркер VEGF, з використанням напівкількісної шкали, при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 1+ визначають слабку експресію та при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 2+ або 3+ - сильну експресію і прогнозують низький або високий ризик метастазування відповідно, або, за реакцією на маркер CD34, що проявляється специфічним забарвленням клітин ендотелію мікросудин, визначають показник щільності мікросудин і, при значеннях якого менше або більше 54 мм2, прогнозують низький або високий ризик метастазування, відповідно.Method for predicting laryngeal squamous cell carcinoma metastases includes biopsy of tumors, fixation of samples in neutral formalin, paraffin, production of histological preparations, staining with hematoxylin, eosin, slice formation, their immunohistochemical study using monoclonal antibody antibody Ki-67 assessment. Additionally, the immunohistochemical study used the vascular endothelial growth marker VEGF and the vascularization marker CD34, and the immunohistochemical study observed the response of 1000 neighboring tumor cells to the markers used at 200x microscopic magnification, where the response to the VEGF marker cells with a gradation of 1+ determine low expression and at the intensity of staining of cells with a gradation of 2+ or 3+ - strong expression and predict low or high risk of metastasis, respectively, or, in response to marker CD34, manifested by specific staining of microvascular endothelial cells. microvascular density and, with values less than or greater than 54 mm2, predict a low or high risk of metastasis, respectively.

Description

Корисна модель належить до медицини, зокрема до способів діагностики, та може бути використаною в пато-, онко- або отоларингології під час доклінічного дослідження прогностично сприятливих або несприятливих імунофенотипів плоскоклітинних раків.The useful model belongs to medicine, in particular to diagnostic methods, and can be used in patho-, onco- or otolaryngology during preclinical research of prognostically favorable or unfavorable immunophenotypes of squamous cell carcinomas.

Відомий спосіб прогнозування виникнення рецидиву і метастазів у хворих на рак гортані (пат. України, Мо ША 61639 МПК АбІК 38/43, АбІК 38/55, 201М 33/49. опубл. 25.07.11), що включає визначення вмісту інгібіторів цистеїнових протеїназ в первинних пухлинах, що додатково визначають активність цистеїнових протеїназ (ЦП), при цьому розраховують коефіцієнт співвідношення (КС) між активністю ЦП та вмістом їх інгібіторів, і при значенні КС»26 ум. од. судять про можливість виникнення метастазів у хворих на рак гортані.A known method of predicting the occurrence of recurrence and metastases in patients with laryngeal cancer (Pat. of Ukraine, Mo SHA 61639 MPK AbIK 38/43, AbIK 38/55, 201M 33/49. publ. 07.25.11), which includes determination of the content of cysteine proteinase inhibitors in primary tumors, which additionally determine the activity of cysteine proteinases (CP), while calculating the correlation coefficient (CR) between the activity of CP and the content of their inhibitors, and at the value of CR"26 um. unit judge the possibility of metastases in patients with laryngeal cancer.

Однак попри оприйнятній специфічності, об'єктивність відомого способу при його використанні є не досить високою, так як оцінюється лише окремий вид протеаз та їх інгібіторів.However, despite the perceived specificity, the objectivity of the known method when using it is not high enough, since only a certain type of proteases and their inhibitors are evaluated.

Це стримує призначення агресивного хіміопроменевого лікування на основі даного методу. Крім того, плазма крові не містить специфічних клітин пухлини і не може повністю відображати імовірність метастазування.This deters the appointment of aggressive chemoradiation treatment based on this method. In addition, blood plasma does not contain specific tumor cells and cannot fully reflect the probability of metastasis.

Найбільш близьким по технічній суті та ефекту, що досягається, є спосіб прогнозування клінічного перебігу раку гортані (Пат. України, Мо ША 18143 МПК АбЄ1В 10/02, СО1М 33/531. опубл. 16.10.06.), що включає біопсію пухлин, фіксування зразків у нейтральному формаліні, парафіні, виготовлення з них гістологічних препаратів, забарвлення гематоксиліном, еозином, формування зрізів, їх імуногістохімічне дослідження, з використанням моноклонального антитіла Кі-67, як маркера проліферативної активності, мікроскопію та оцінку, у відповідності з котрим, під час імуногістохімічного дослідження визначають загальну кількість клітин з пофарбованими і непрофарбованими ядрами, рівні експресії онкосупресорних генів р53 як ключових регуляторів апоптозу та контролерів цілісності геному, рсі-2, як регулятора клітинної смерті та блокатора апоптозу, цитокератинів АЕТ/АЕЗ і 19 як маркерів епітеліального диференціювання клітин, а під час оцінки результатів, по реакції онкосупресорних генів роз мМабо БсІі-- на активацію моноклональними антитілами Кі-67 іабо на цитоплазматичне фарбування, визначають онкологічний статус пухлини, по експресії онкосупресорних генів роз і ре!-2 - імуногістохімічний статус, по реакції ядер пухлинних клітин на моноклональне антитіло Кі- 67 - проліферативну активність, за підвищенням експресії цитокератинів АЕ1Т/АЕЗ і 19 - формиThe method of predicting the clinical course of laryngeal cancer (Pat. of Ukraine, Mo. Sha. 18143 IPC AbЕ1В 10/02, СО1М 33/531. publ. 16.10.06) is the closest in terms of technical essence and the effect achieved, which includes tumor biopsy, fixation of samples in neutral formalin, paraffin, production of histological preparations from them, staining with hematoxylin, eosin, formation of sections, their immunohistochemical study, using monoclonal antibody Ki-67 as a marker of proliferative activity, microscopy and assessment, in accordance with which, during immunohistochemical studies determine the total number of cells with stained and unstained nuclei, expression levels of tumor suppressor genes p53 as key regulators of apoptosis and controllers of genome integrity, psi-2 as a regulator of cell death and blocker of apoptosis, cytokeratins AET/AEZ and 19 as markers of epithelial cell differentiation, and during the evaluation of the results, according to the reaction of onco-suppressor genes, different mAbo BsIi-- to a activation by Ki-67 monoclonal antibodies or cytoplasmic staining determines the oncological status of the tumor, by the expression of the onco-suppressor genes roz and re!-2 - immunohistochemical status, by the reaction of tumor cell nuclei to the Ki-67 monoclonal antibody - proliferative activity, by increasing the expression of AE1T cytokeratins /AEZ and 19 - forms

Зо раку, у залежності від розмірів, інтенсивності збільшення, частоти метастазування, рецидиву пухлин і рівня інвазії - ступені гістологічного диференціювання раку, при виявленні порушень функцій онкосупресорних генів р53 і/або рсі-2 і реакції понад 10 95 ядер пухлинних клітин на моноклональні антитіла Кі-б7 і/або на цитоплазматичне фарбування онкологічний статус пухлини кваліфікують позитивним, імуногістохімічний статус - негативним, якщо експресія онкосупресорних генів р5З і/ або рсі-2 перевищує норму, а проліферативну активність - високою, якщо понад 3095 ядер пухлинних клітин реагує на їх активацію моноклональним антитілом Кі-67, встановлюють високодиференційовану форму раку, якщо спостерігають підвищення експресії цитокератинів АЕТ/АЕЗ в клітині та пригнічення стану проміжних мікротрубочок і філаментів, встановлюють низькодиференційовану форму раку, якщо спостерігають підвищення експресії цитокератину СК19 в клітині та пригнічення простих епітеліїв, усвідомлюють ступені гістологічного диференціювання раку, за рівнями і спектром експресії фракцій цитокератинів АЕ1/АЕЗ і 19 у клітині та прогнозують несприятливий перебіг процесу, щонайменше за погіршенням будь-яких 2 параметрів, у комбінації проліферативної активності онкологічного або імуногістохімічного статусів, і морфологічний варіант раку, з урахуванням форм і ступенів його гістологічного диференціювання.From cancer, depending on the size, intensity of increase, frequency of metastasis, recurrence of tumors and the level of invasion - the degree of histological differentiation of cancer, in case of detection of disorders of the functions of onco-suppressor genes p53 and/or psi-2 and the reaction of more than 10 95 tumor cell nuclei to monoclonal Ki antibodies -b7 and/or cytoplasmic staining, the oncological status of the tumor is qualified as positive, the immunohistochemical status as negative, if the expression of tumor suppressor genes p5Z and/or psi-2 exceeds the norm, and the proliferative activity is high, if more than 3095 nuclei of tumor cells respond to their activation by monoclonal with the Ki-67 antibody, a highly differentiated form of cancer is established if an increase in the expression of AET/AEZ cytokeratins in the cell and inhibition of the state of intermediate microtubules and filaments is observed, a low-differentiated form of cancer is established if an increase in the expression of cytokeratin SK19 in the cell and inhibition of simple epithelia are observed, they are aware of the degrees of histological differentiation of cancer, according to the levels and spectrum of expression of fractions of cytokeratins AE1/AEZ and 19 in the cell and predict an unfavorable course of the process, at least according to the deterioration of any 2 parameters, in a combination of proliferative activity of oncological or immunohistochemical statuses, and a morphological variant of cancer, taking into account the forms and degrees of histological differentiation.

У відомому способі допускається перевершення об'єктивності шляхом збільшення інтенсивності демаскування ракових клітин на ділянці спостереження, розширенню числа інформативних маркерів і посиленню інтерпретаційних можливостей. Натомість, його інформативні властивості позбавлені аналізу неоангіогенезу та васкуляризації, що є важливими факторами в прогнозуванні метастазів плоскоклітинного раку.In the known method, it is possible to surpass objectivity by increasing the intensity of unmasking cancer cells in the observation area, expanding the number of informative markers, and enhancing interpretation capabilities. Instead, its informative properties are devoid of the analysis of neoangiogenesis and vascularization, which are important factors in predicting metastases of squamous cell carcinoma.

До основи корисної моделі поставлена задача вдосконалити спосіб прогнозування метастазів плоскоклітинного раку гортані за рахунок дослідження молекулярних властивостей пухлин та аналізу імуногістохімічних реакцій, що забезпечило би підвищення об'єктивності кінцевого результату та розширення меж переважного використання.The basis of a useful model is the task of improving the method of predicting metastases of squamous cell carcinoma of the larynx through the study of molecular properties of tumors and analysis of immunohistochemical reactions, which would increase the objectivity of the final result and expand the limits of preferred use.

Поставлена задача вирішується тим, що у способі прогнозування метастазів плоскоклітинного раку гортані, що включає біопсію пухлин, фіксування зразків у нейтральному формаліні, парафіні, виготовлення з них гістологічних препаратів, забарвлення гематоксиліном, еозином, формування зрізів, їх імуногістохімічне дослідження, 3 використанням моноклонального антитіла Кі-67 як маркера проліферативної активності, мікроскопію та оцінку, 60 відповідно до корисної моделі, додатково при імуногістохімічному дослідженні використовують маркер росту ендотелію судин МЕСтЕ та маркер васкуляризації СО34, а під час імуногістохімічного дослідження спостерігають реакцію 1000 сусідніх пухлинних клітин на використовувані маркери при 200х мікроскопічному збільшенні мікроскопа, де за реакцією на маркер МЕСЕЕ, з використанням напівкількісної шкали, при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 1-- визначають слабку експресію та при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 2 або З- - сильну експресію і прогнозують низький або високий ризик метастазування відповідно, або, за реакцією на маркер СО34, що проявляється специфічним забарвленням клітин ендотелію мікросудин, визначають показник щільності мікросудин і, при значеннях якого менше або більше 54/мм-, прогнозують низький або високий ризик метастазування, відповідноThe task is solved by the fact that in the method of predicting metastases of squamous cell carcinoma of the larynx, which includes biopsy of tumors, fixation of samples in neutral formalin, paraffin, production of histological preparations from them, staining with hematoxylin, eosin, formation of sections, their immunohistochemical study, 3 using the monoclonal antibody Ki -67 as a marker of proliferative activity, microscopy and assessment, 60 according to a useful model, in addition, during the immunohistochemical study, the vascular endothelium growth marker MEStE and the vascularization marker CO34 are used, and during the immunohistochemical study, the reaction of 1000 neighboring tumor cells to the used markers is observed at 200x microscopic magnification microscope, where according to the reaction to the MESEE marker, using a semi-quantitative scale, at the intensity of staining of cells with a grade of 1-- weak expression is determined, and at the intensity of staining of cells with a grading of 2 or Ж- - a strong expression and progn determine a low or high risk of metastasis, respectively, or, based on the reaction to the CO34 marker, which is manifested by the specific staining of the cells of the endothelium of microvessels, determine the index of microvessel density and, with values less than or greater than 54/mm-, predict a low or high risk of metastasis, respectively

За реакцією на маркер МЕСНЕ, з використанням напівкількісної шкали, оцінюють неоваскулярицію, де визначають статус досліджуваних клітин та здатність останніх до прояву раннього регіонарного метастазування, і прогнозують низьку або високу метастатичну активність пухлини. Реакцію на маркер МЕСЕ оцінюють за напівкількісним методом і при незначному забарвленні випаданні хромогену окремими депозитами, тобто низькій інтенсивності забарвлення, виставляють градацію "1-7" і експресію визначають слабкою. При помірній та високій інтенсивності забарвлення МЕСЕ (градації 2ж, З) визначають високу експресію.According to the reaction to the MESNE marker, using a semiquantitative scale, neovascularization is assessed, where the status of the studied cells and their ability to manifest early regional metastasis are determined, and low or high metastatic activity of the tumor is predicted. The reaction to the MESE marker is assessed by a semi-quantitative method and in the case of slight staining of the chromogen by separate deposits, i.e., low intensity of staining, a gradation of "1-7" is set and the expression is defined as weak. At moderate and high intensity of MESE staining (gradations 2ж, З), high expression is determined.

Завдяки специфічній мембранній імуногістохімічній реакції ендотелію судин з маркеромThanks to the specific membrane immunohistochemical reaction of the vascular endothelium with the marker

СО34 кількісно оцінюють показник щільності мікросудин та використовують для оцінки ризику метастазування в регіональні лімфатичні вузли. Враховуючи значення показника, результати розбиті на дві групи: при менше 54 мм: щільність мікросудин визначають низькою, а при більше 54 мм: високою та визначають низький або високий ризик метастазування, відповідно.CO34 quantifies microvessel density and is used to assess the risk of metastasis to regional lymph nodes. Taking into account the value of the indicator, the results are divided into two groups: at less than 54 mm: the density of microvessels is determined as low, and at more than 54 mm: high and determine a low or high risk of metastasis, respectively.

На відміну від прототипу, інтенсивність забарвлення оцінюють шляхом напівкількісного аналізу, де у одному і тому ж зрізі виявляють рівні інтенсивності забарвлення нормальних епітеліальних і малігнізованих клітин, різниці між ними і оцінюють дійсний рівень інтенсивності імуногістохімічної реакції чим виключають вплив лабораторного процесу на результати дослідження. Поряд із цим, вираження оцінних критеріїв у балах інтенсивності забарвлення і числа пухлинних клітин, що зреагували на маркери більш детально відбиває різні етапи канцерогенезу та клінічний перебіг, що збільшує інформативність, інтерпретацію більшоїIn contrast to the prototype, the intensity of staining is evaluated by means of semiquantitative analysis, where in the same section, the levels of intensity of staining of normal epithelial and malignant cells are detected, the differences between them and the actual level of intensity of the immunohistochemical reaction are evaluated, which excludes the influence of the laboratory process on the results of the study. Along with this, the expression of evaluation criteria in the scores of staining intensity and the number of tumor cells that reacted to the markers reflects in more detail the different stages of carcinogenesis and the clinical course, which increases informativeness, the interpretation of a larger

Зо кількості вихідних параметрів, а відтак і об'єктивність прогнозування, з можливістю оцінки проліферативної активності, неоваскуляризації та щільності мікросудин.From the number of initial parameters, and hence the objectivity of forecasting, with the possibility of assessing proliferative activity, neovascularization and the density of microvessels.

Наведені відомості підтверджують, що застосовані приймання розширюють уявлення про молекулярні властивості плоскоклітинних раків гортані. Шляхом дослідження молекулярних властивостей пухлин та інтерпретації імуногістохімічних реакцій досягається покращення об'єктивності і розширення меж переважного використання способу.The given information confirms that the applied methods expand the understanding of the molecular properties of squamous cell cancers of the larynx. By studying the molecular properties of tumors and interpreting immunohistochemical reactions, it is possible to improve objectivity and expand the limits of the preferred use of the method.

Таким чином, сукупність ознак запропонованого рішення задачі за даними експресії залучених маркерів дозволяє з'ясувати молекулярні властивості плоскоклітинного раку гортані, знайти ступені його гістологічного диференціювання та визначити ризик метастазування.Thus, the set of features of the proposed solution to the problem based on the expression data of the involved markers allows us to find out the molecular properties of squamous cell carcinoma of the larynx, find the degrees of its histological differentiation and determine the risk of metastasis.

Спосіб прогнозування метастазів плоскоклітинного раку гортані здійснюють у наступній послідовності. Під час ларингоскопії виконують біопсію тканини. Узяті ділянки пухлин фіксують у нейтральному забуференому 1095 формаліні та заливають парафіном. Після підготовки, виготовлення та рутинного забарвлення гістологічного препарату за допомогою гематоксилін- еозину, зрізи піддають послідовному імуногістохімічному дослідженню, з використанням моноклонального антитіла Кі-67 і додатково з моноклональними антитілами МЕСЕ (клон Ма) таThe method of predicting metastases of squamous cell carcinoma of the larynx is carried out in the following sequence. Tissue biopsy is performed during laryngoscopy. The taken areas of tumors are fixed in neutral buffered 1095 formalin and embedded in paraffin. After preparation, production and routine staining of the histological preparation with the help of hematoxylin-eosin, the sections are subjected to sequential immunohistochemical examination, using the monoclonal antibody Ki-67 and additionally with the monoclonal antibodies MESE (clone Ma) and

СОЗ34 (клон ОВЕпа 10).SOZ34 (clone OVEpa 10).

Під час імуногістохімічного дослідження спостерігають реакцію 1000 сусідніх пухлинних клітин на використовувані маркери при 200х мікроскопічному збільшенні мікроскопа. За реакцією на Кі-б7 менше чи більше 3095 досліджуваних клітин визначають низьку або високу проліферативну активність досліджуваних клітин, відповідно. При високій проліферативній активності прогнозують ріст пухлинного генезису. За реакцією на маркер МУЕСЕ, з використанням напівкількісної шкали, при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 1 визначають слабку експресію та при інтенсивності забарвлення клітин з градацією 2-- або 3-4 - сильну експресію і прогнозують низький або високий ризик метастазування, відповідно. За реакцією на маркер СО34, що проявляється специфічним забарвленням клітин ендотелію мікросудин, визначають показник щільності мікросудин і, при значеннях якого менше або більше 54 мм, прогнозують низький або високий ризик метастазування, відповідно.During an immunohistochemical study, the reaction of 1,000 neighboring tumor cells to the used markers is observed at a 200x microscopic magnification of the microscope. According to the reaction to Ki-b7, less or more than 3095 studied cells determine the low or high proliferative activity of the studied cells, respectively. With high proliferative activity, the growth of tumorigenesis is predicted. According to the reaction to the MUESE marker, using a semi-quantitative scale, weak expression is determined at the intensity of cell staining with grade 1, and at the intensity of cell staining with grade 2-- or 3-4 - strong expression and a low or high risk of metastasis is predicted, respectively. According to the reaction to the CO34 marker, which is manifested by the specific staining of the cells of the endothelium of microvessels, the microvessel density index is determined and, with values less than or greater than 54 mm, a low or high risk of metastasis is predicted, respectively.

Для здійснення способу прогнозування метастазів раку гортані залучають ротаційний мікротом "Місгот" фірми "Містот Іпіегпайопа! СтрН" (Німеччина), мікроскоп РІ МЕ фірми "Іеіса" (США), моноклональне антитіло Кі-67, МЕСЕ, СО34, виробництва "Тепто5бсієпійіс" (510) (США).To carry out the method of predicting metastases of laryngeal cancer, the rotary microtome "Misgot" of the company "Mistot Ipiegpayopa! StrN" (Germany), the RI ME microscope of the company "Ieisa" (USA), the monoclonal antibody Ki-67, MESE, CO34, manufactured by "Tepto5bsiepiis" ( 510) (USA).

Заявлений спосіб був апробований в умовах ОКЛ ім. І.І. Мечникова. Його використання у більшості випадків призводило до корекції тактики лікування. Переведення хворих на індивідуалізовану форму терапії покращувало ефективність лікування, індивідуалізувало вибір оперативного втручання на лімфатичних вузлах шиї.The proposed method was tested in the conditions of the OKL named after I.I. Mechnikova. Its use in most cases led to correction of treatment tactics. Transferring patients to an individualized form of therapy improved the effectiveness of treatment, individualized the choice of surgical intervention on the lymph nodes of the neck.

Приклад 1. Хворий, 61 рік, перебував у ЛОР-онкологічному відділенні обласної клінічної лікарні їм. І.Ї. Мечникова, м. Дніпропетровська з приводу лікування: раку гортані ІМ ст, ІІ кл.гр., (Т4М2МО). 19.10.12 р. у хворого брали пробу тканин гортані, яку досліджували за стандартним морфологічним методом забарвлення, з використанням гематоксиліну, еозину та імуногістохімічним шляхом, з використанням моноклональних антитіл до Кі-67 (клон 5Рб), МЕСЕ (клон Мат), СО34 (клон ОВЕпа 10), виробництва (Тептозбсієпійіс, США). Оцінюючи експресії маркерів визначали проліферативну активність, неоваскуляризацію, та щільність мікросудин.Example 1. The patient, 61 years old, was in the ENT-oncology department of the regional clinical hospital. I.I. Mechnikova, Dnipropetrovsk regarding treatment: cancer of the larynx, 1st century, 2nd grade, (T4M2MO). On October 19, 2012, a sample of larynx tissue was taken from the patient, which was examined according to the standard morphological method of staining, using hematoxylin, eosin, and immunohistochemical methods, using monoclonal antibodies to Ki-67 (clone 5Rb), MESE (clone Mat), СО34 ( clone OVEpa 10), production (Teptozbsiepiis, USA). Proliferative activity, neovascularization, and density of microvessels were determined by evaluating the expression of markers.

Імуногістохімічний статус: Кі-67 70 95, пухлина швидко росте; МЕСЕ 2, помірна васкуляризація, високий ризик метастазування; СО34 68 /мм?, висока щільність мікросудин, високий ризик метастазування. Висновок моб 7099-107 от 0 22.10.12: плоскоклітинний помірно- диференційований рак. Оцінюючи отримані дані, визначали високий ризик метастазування пухлини. Пацієнту проведене комплексне лікування: ларингектомія та радикальна лімфодисекція (19.10.12); два курси поліхіміотерапії (11.12 та 12.12); курс променевої терапії 01.13. В липні 2013 р у пацієнта відмічається рецидив захворювання у регіонарних лімфатичних вузлах.Immunohistochemical status: Ki-67 70 95, the tumor is growing rapidly; MESE 2, moderate vascularization, high risk of metastasis; СО34 68 /mm?, high density of microvessels, high risk of metastasis. Conclusion mob 7099-107 ot 0 22.10.12: squamous cell moderately differentiated cancer. Evaluating the obtained data, a high risk of tumor metastasis was determined. The patient underwent complex treatment: laryngectomy and radical lymphodissection (19.10.12); two courses of polychemotherapy (11.12 and 12.12); radiation therapy course 01.13. In July 2013, the patient had a recurrence of the disease in the regional lymph nodes.

Приклад 2. Хворий, 40 років, перебував у ЛОР-онкологічному відділенні обласної клінічної лікарні ім. І.І. Мечникова, м. Дніпропетровська з приводу лікування: С-г Іагупаів ІП ст, ТЗМОМО ЇЇ кл.гр. 06.09.12 у хворого брали пробу тканин гортані, яку досліджували за стандартним морфологічним методом забарвлення, з використанням гематоксиліну, еозину та імуногістохімічним шляхом, з використанням моноклональних антитіл до Кі-67 (клон 5Рб), МЕСЕ (клон Мат), СО34 (клон ОВЕпа 10), виробництва (Тептозбсієпійіс, США). Оцінюючи експресії маркерів визначали проліферативну активність, неоваскуляризацію та щільність мікросудин.Example 2. The patient, 40 years old, was in the ENT-oncology department of the regional clinical hospital named after I.I. Mechnikova, Dnipropetrovsk regarding treatment: S-g Iagupaiv IP st., TZMOMO HER kl.gr. On 06.09.12, a sample of larynx tissue was taken from the patient, which was examined according to the standard morphological staining method, using hematoxylin, eosin, and immunohistochemical methods, using monoclonal antibodies to Ki-67 (clone 5Rb), MESE (clone Mat), СО34 (clone ОВеп 10), production (Teptozbsiepiyis, USA). Proliferative activity, neovascularization and density of microvessels were determined by evaluating the expression of markers.

Імуногістохімічний статус: Кі-67 30 95, пухлина повільно росте; МЕСЕ 1, низька васкуляризація, низький ризик метастазування; СО34 47 /мм, низька щільність мікросудин, низький ризик метастазування, Висновок 57279-84 от 07.09.12: плоскоклітинний помірно диференційованийImmunohistochemical status: Ki-67 30 95, the tumor is growing slowly; MESE 1, low vascularization, low risk of metastasis; СО34 47 /mm, low density of microvessels, low risk of metastasis, Conclusion 57279-84 dated 09.07.12: squamous moderately differentiated

Зо рак. Оцінюючи отримані дані, визначали низький ризик метастазування пухлини. Пацієнту проведене комбіноване лікування: ларингектомія (06.09.12); курс променевої терапії 11.12. За період спостереження даних за метастазування пухлини не виявлено.From cancer Evaluating the obtained data, a low risk of tumor metastasis was determined. The patient underwent combined treatment: laryngectomy (September 6, 2012); radiation therapy course 11.12. No data on tumor metastasis were found during the observation period.

Таким чином, пропонований спосіб прогнозування метастазів плоскоклітинного раку гортані сприяє покращенню об'єктивності кінцевого результату та розширенню меж переважного використання. За рахунок дослідження прогностично значущих клініко-морфологічних критеріїв, імуногістохімічних маркерів, як ознак пухлинного процесу, їх систематизації та отримання уявлень щодо біологічних, клінічних і морфологічних властивостей ракових клітин спосіб розв'язує проблеми прогнозування регіонарних метастазів, з можливістю використання отриманих результатів в ефективному лікуванні метастазів раку гортані.Thus, the proposed method of predicting metastases of squamous cell cancer of the larynx contributes to improving the objectivity of the final result and expanding the limits of preferred use. Due to the study of prognostically significant clinical and morphological criteria, immunohistochemical markers as signs of the tumor process, their systematization and obtaining ideas about the biological, clinical and morphological properties of cancer cells, the method solves the problems of predicting regional metastases, with the possibility of using the obtained results in the effective treatment of metastases cancer of the larynx.

Claims

USEFUL MODEL FORMULA The method of predicting metastases of squamous cell carcinoma of the larynx, which includes biopsy of tumors, fixation of samples in neutral formalin, paraffin, preparation of histological preparations from them, staining with hematoxylin and eosin, formation of sections, their immunohistochemical study using monoclonal antibody Ki-b7 as a marker of proliferative activity, microscopy, and evaluation, which differs in that, in addition, during the immunohistochemical study, the vascular endothelium growth marker MESEE and the vascularization marker SOZ4 are used, and during the immunohistochemical study, the reaction of 1000 neighboring tumor cells to the used markers is observed at a 200x microscopic magnification of the microscope, where according to the reaction to the MESE marker, using a semi-quantitative scale, with the intensity of staining of cells with a grade of 1х-, weak expression is determined, and with the intensity of staining of cells with a grading of 2-4 or 3- - strong expression and predict low or high and the risk of metastasis, respectively, or according to the reaction to the CO34 marker, which is manifested by the specific staining of the cells of the endothelium of microvessels, determine the index of the density of microvessels and, with values less than or greater than 54 mm-, predict a low or high risk of metastasis, respectively.