TWI823140B - 新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途 - Google Patents

新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI823140B
TWI823140B TW110133275A TW110133275A TWI823140B TW I823140 B TWI823140 B TW I823140B TW 110133275 A TW110133275 A TW 110133275A TW 110133275 A TW110133275 A TW 110133275A TW I823140 B TWI823140 B TW I823140B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
strain
veleis
present
periodontal disease
bacillus
Prior art date
Application number
TW110133275A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202212565A (zh
Inventor
李炳勳
金玟究
殷秀賢
金亨恩
林Ａｒ
韓致泳
李東勳
Original Assignee
南韓商日東製藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 南韓商日東製藥股份有限公司 filed Critical 南韓商日東製藥股份有限公司
Publication of TW202212565A publication Critical patent/TW202212565A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI823140B publication Critical patent/TWI823140B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/312—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on dental health
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本發明關於新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04及其用途，更具體地，關於新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株，其具有治療齲齒和牙周病以及改善口臭的所有功效；以及所述貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養基；所述貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液；包含所述貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分的用於治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物；以及包含所述貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分的用於治療齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物、保健功能性食品組合物和食品組合物。

Description

新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途
本發明要求於2020年9月7日提交的韓國專利申請10-2020-0114169的優先權，其全部內容為本發明所引用。
本發明關於新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04及其用途；更具體地，關於用於治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其含有具有治療齲齒和牙周疾病以及改善口臭效果的新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、或者所述貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養基或其培養上清液作為活性成分；以及醫藥部外品組合物；以及用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物和食品組合物，所述保健功能性食品組合物和食品組合物含有所述貝萊斯芽胞桿菌菌株、包含其的培養基或其培養上清液作為活性成分。
最近，由於不正確的飲食習慣和衰老、免疫力降低、營養和代謝紊亂增加，導致患牙周病的患者數量增加。牙周病的直接原因是在牙齒中不斷形成的稱為牙菌斑的菌膜，以及在不去除牙菌斑的情況下變硬的牙石。當牙菌斑和牙石沉積時，牙齦從牙齒上脫落，導致牙齒和牙齦之間發炎。
當牙槽骨等隨著年齡的增長而先天性和獲得性降解時，就會發生牙周病，代表性的牙周病包括牙齦炎和牙周炎症。牙齦炎是一種初期牙周病，其牙齦軟組織發生炎症，症狀相對較輕，恢復處於可逆狀態。當牙周炎症和牙齦炎未得到治療且炎症發展在牙齦和恥骨周圍時，慢性炎症反應藉由細菌毒素發展，隔離和感染的牙周袋在牙齦和牙齒之間形成。隨著牙周炎變嚴重，牙周袋深度加深，最終由牙周膜引起炎症，導致骨質流失。
在牙周病中，藉由改善患者的口腔衛生狀況預防是最重要的，且在臨床上，主要藉由非手術或外科除垢、牙根規劃、皮瓣手術以及應用新附著體的牙周組織再生等進行外科治療。然而，在這些外科治療方法中，大多數情況下，治療很麻煩，有效治療很困難，治療僅限於疾病進展到一定程度時的治療，而非預防疾病，如果不進行治療，疾病就會慢性發展。此外，作為輔助治療，使用全身性抗生素和局部緩釋劑甚至會在不必要的部位過量釋放藥物，導致副作用。最近，據報導表現出抗生素耐藥性的牙周病細菌會導致嚴重的問題。
齲齒是指蛀牙，和牙齒硬組織被侵蝕和丟失的症狀，稱為牙科齲齒。齲齒是一種感染性細菌疾病，其會引起疼痛，牙齒的一部分硬鈣化組織溶解和破壞導致牙齒脫落，佔牙科疾病的最大部分，且發病率呈上升趨勢。根據韓國牙科協會的報告，90%以上的兒童患有齲齒，80%以上的成年人患有牙齦疾病。這些疾病的主要原因是口腔內作為微生物感染的細菌、食物和唾液的相互作用。
同時，口臭指的是來自口腔和鄰近器官的氣味，許多人稱口臭給日常生活帶來不便。85%至90%的口臭來自口腔，尤其是舌頭後部。口臭的主要成分是揮發性硫化物，但揮發性硫化物總量的90%由半胱胺酸產生的硫化氫和蛋胺酸產生的甲硫醇組成。這些成分是由厭氧細菌產生的，舌頭的後部成為細菌最重要的棲息地。這一部位沒有被唾液很好地清理乾淨，且有許多小窪地，細菌經常在此生存。厭氧細菌產生的揮發性硫化物是導致口臭的最重要原因，其他口腔疾病例如齲齒和牙周炎也會導致口臭。
口臭患者口腔中常見的細菌有具核梭桿菌( Fusobacterium nucleatum)、中間普氏桿菌 (Prevotella intermedia)和牙齦卟啉單胞菌( Porphyromonas gingivalis)。在相關技術中，擬桿菌和卟啉單胞菌很可能被認為是與普氏桿菌相同屬的細菌。引起口臭的厭氧菌種類很多，但引起口臭的代表性細菌是具核梭桿菌和牙齦卟啉單胞菌。
近年來，有人試圖在試管中用乳酸菌抑制厭氧菌的增殖。乳酸菌是藉由碳水化合物發酵產生乳酸作為最終代謝產物的細菌，乳酸菌存在於人類和動物的口腔和消化道中，通常用於發酵食品（如泡菜或酸奶）的製造過程。然而，當將乳酸菌像金屬鹽或消毒劑一樣藉由唾液稀釋到口腔中時，乳酸菌被立即吞嚥，因此有乳酸菌難以留在口腔中的問題。此外，試管中嗜酸乳桿菌( Lactobacillus acidophilus)和乾酪乳桿菌( Lactobacillus casei)等乳酸菌產生強酸，以抑制厭氧菌的增殖，但在正常人的口腔中，乳酸菌產生的強酸藉由唾液的緩衝作用被中和，因此，其很難抑制其他細菌的增殖。此外，由於強酸會導致牙科齲齒，當這些細菌在口腔中長期使用時，存在不利於口腔衛生的問題。
另一方面，在相關技術中有菌株具有改善齲齒、改善牙周病和改善口臭的功能之一，但幾乎沒有具有改善齲齒、牙周病和口臭的所有功能的菌株。
現有技術 專利文件 （專利文件1）韓國專利註冊號10-1956759。 （專利文件2）韓國專利註冊號10-1629551。
技術問題
因此，本發明人在努力尋找在治療牙周病上具有優異效果的菌株時發現一種特定的貝萊斯芽胞桿菌菌株在治療或預防齲齒和牙周病、以及改善口臭方面具有優異的效果，從而完成本發明。
因此，本發明的一個目的是提供一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株。
本發明的另一個目的是提供一種所述新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養基。
本發明的再一個目的是提供一種所述新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液。
此外，本發明的另一個目的是提供一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的另一個目的是提供一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的另一個目的是提供一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其基本上由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的再一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明的再另一個目的是提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
本發明的再另一個目的是提供一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液在製備用於治療齲齒、牙周病或口臭的試劑中的用途。
本發明的另一個目的是提供一種治療齲齒、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液的組合物。
技術方案
為了實現所述目的，本發明提供了一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種所述新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養基。
為了實現本發明的再一個目的，本發明提供了一種所述新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供一種用於治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的再一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的再另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供了一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其基本上由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的再另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的牙膏組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的口腔清洗劑組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
此外，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
此外，本發明提供一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的漱口劑組合物，其主要由新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液組成。
為了實現本發明的另一個目的，本發明提供了一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液在製備用於治療齲齒、牙周病或口臭的試劑中的用途。
為了實現本發明的再另一個目的，本發明提供了一種治療齲齒、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液的組合物。
除非另有定義，否則本文中使用的所有技術和科學術語具有本發明所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的相同含義。以下參考文獻提供了本發明說明書中使用的各種術語的一般定義：Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY(2th ed. 1994)；THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(Walkered., 1988)；和Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY。
在下文中，將詳細描述本發明。
本發明提供了一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株。
所述菌株可以是由菌株本身、菌株裂解物、菌株濃縮物、菌株提取物和菌株乾燥產物所組成的群組中選擇的至少一種。
在本發明中，術語「芽胞桿菌」是在自然界廣泛分佈的需氧或兼性厭氧革蘭氏陽性芽胞桿菌，屬於該芽胞桿菌的微生物包括貝萊斯芽胞桿菌( Bacillus velezensis)、枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis)等。本發明人將一種屬於貝萊斯芽胞桿菌的新菌株鑑定為芽胞桿菌，其具有如下治療或預防齲齒和牙周病的效果。
本發明的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01（寄存編號：KCTC14180BP）、ID-A02（寄存編號：KCTC14181BP）、ID-A03（寄存編號：KCTC14182BP）和ID-A04（寄存編號：KCTC14183BP）是源自發酵食品的新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株，該菌株於2020年5月11日寄存在KRIBB生物資源中心。
本發明的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液的特徵在於，不僅對牙周病的致病細菌具有抗菌作用，還具有炎性細胞因子分泌抑制作用和生物膜生成抑制作用，還對口臭主要原因的揮發性硫化物(VSC)有抑制作用。
這在本發明的實施方案中得到了很好的展現。
在本發明的一個實施方案中，分別在TYB培養基和RCB培養基中接種和培養從發酵食品中分離的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04，以及牙周病代表性致病菌（牙齦卟啉單胞菌( Porphyromonas gingivalis，PGI)和具核梭桿菌( Fusobacterium nucleatum，FNU)），然後測定吸光度。結果證明貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液對PGI和FNU具有極好的抗菌效果（參見實施例5）。
此外，在本發明的另一個實施方案中，為了確認萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液的生物膜抑制效果，將培養基分配到塗有唾液的96孔板中(4hr，37℃)然後分別以25%和0.5%的濃度接種牙齦卟啉單胞菌( Porphyromonas gingivalis，PGI)和具核梭桿菌( Fusobacterium nucleatum，FNU)，並在37℃下同時處理和厭氧培養樣品4天，確認結果。結果證明貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液具有優異的生物膜抑制效果（參見實施例6和7）。
此外，在本發明的另一個實施方案中，為了確認萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液的炎性細胞因子分泌抑制作用，以1×10 4細胞/孔在96孔板上接種HGF-1細胞培養24小時，候選組處理24小時，然後用50µg/mL牙齦卟啉單胞菌-LPS培養24小時，收集上清液並進行分析。結果證明貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液抑制炎症細胞因子的分泌（參見實施例9）。
本發明的術語「培養基」是指培養本發明的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的液體培養基，包括含有菌株的胰蛋白酶大豆肉湯(Tryptic Soy Broth，TSB)。
「液體培養基」是一種不含瓊脂的液體培養基，用於微生物增殖和檢測細菌的生化試驗、增殖和代謝產物。
使用震盪培養法培養分離的貝萊斯芽胞桿菌菌株。震盪培養法是一種藉由持續搖動固定在往復搖動器或旋轉搖動器上的三角瓶等來有效通風和攪拌的方法。在震盪培養的情況下，菌株培養在含有胰蛋白腖17g/L、大豆腖3g/L、葡萄糖2.5g/L、氯化鈉5g/L和磷酸二鉀2.5g/L的TSB培養基（MB細胞）中、在37℃、200rpm條件下培養40小時。培養完成後，培養基以13,000rpm離心20分鐘，以去除細胞並獲得培養物上清液。使用8.25%鹽酸將所述培養物上清液的pH值校正為6.5，然後使用0.22µm過濾器對所述培養物上清液進行抗菌化以完全去除細胞。
本發明提供了一種所述新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液。 本發明的術語「培養上清液」指培養本發明的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04，然後去除細胞的液體培養基，並且包括不含細胞的胰蛋白酶大豆肉湯(TSB)。
本發明的貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液具有治療或預防齲齒和牙周病的作用。因此，本發明提供了一種治療齲齒、牙周病或口臭的藥物組合物，其包含新型萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液。
本發明的術語「治療」是指獲得有益或更好的臨床結果的方法。就本發明的目的而言，有益或更好的臨床結果包括無限制地減輕症狀、減小疾病範圍、穩定（即，不退化）疾病狀況、延遲或降低疾病進展速度、改善或暫時緩解和減輕疾病狀況（部分或全部），以及是否可檢測；此外，「治療」指治療性治療和預防方法。上述治療不僅包括預防性疾病，還包括已經發生的疾病所需的治療。
本發明的術語「齲齒」是指保護牙齒牙質的牙釉質被棲息在口腔中的細菌分解糖、澱粉等產生的酸破壞。
本發明的術語「牙周病」可以選自，但不限於由牙齦炎、牙周炎、牙齦出血、牙齦收縮、牙周袋、冠周炎和牙周膿腫所組成的群組中的至少一種，優選牙齦炎。
本發明的術語「生物膜」是指多種微生物（包括牙菌斑中的細菌）相互聚集的現象，當生物膜未被去除而變厚，且其中的病理細菌數量增加到我們的身體無法抵禦時，口腔疾病就會發生。
根據本發明，所述藥物組合物可以配製成適當的形式，以單獨包括新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液或與藥學上可接受的載體組合，並且可以進一步包含賦形劑或稀釋劑。「藥學上可接受的」指當給藥於人類時生理上可接受且不會引起過敏反應（如胃腸道紊亂、頭暈等）或類似反應的無毒成分。
藥學上可接受的載體可進一步包括例如用於口服給藥的載體或用於腸外給藥的載體。用於口服給藥的載體可包括乳糖、澱粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等。此外，用於口服給藥的載體可包括用於對肽製劑進行口服給藥的各種藥物遞送材料。此外，用於腸外給藥的載體可包括水、合適的油、鹽水、含水葡萄糖、乙二醇等，並可進一步包括穩定劑和防腐劑。合適的穩定劑包括抗氧化劑，例如氫化鈉亞硫酸鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸。合適的防腐劑包括苯紮氯銨、對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯丙酯和氯丁醇。本發明的藥物組合物還可包括潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、調味劑、乳化劑、懸浮劑等除上述成分外的其他成分。其他藥學上可接受的載體和試劑可指本領域已知的載體和試劑。
本發明的組合物甚至可藉由任何方法對包括人類在內的哺乳動物給藥。例如，本發明的組合物可以口服或腸外給藥。腸外給藥方法可以是，但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、髓內、鞘膜內、心內、經皮、皮下、腹腔內、鼻內、腸道內、局部、舌下或直腸內給藥。
根據如上所述的給藥途徑，本發明的藥物組合物可配製為口服給藥或腸外給藥的製劑。
在用於口服給藥的製劑的情況下，本發明的組合物可以使用本領域已知的方法與口腔崩解膜劑、粉末、顆粒、片劑、藥丸、糖衣片、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、漿體、懸浮液等配製。例如，口服製劑可藉由將活性成分與固體賦形劑混合，粉碎混合物，添加合適的佐劑，然後將混合物加工成顆粒混合物而獲得片劑或糖衣片。合適賦形劑的實例可包括填料，例如包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇和麥芽糖醇等的糖，包括玉米澱粉、小麥澱粉、大米澱粉、馬鈴薯澱粉等的澱粉，包括纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉的纖維素，羥丙基甲基纖維素等、明膠、聚乙烯吡咯啶酮等。在某些情況下，可添加交聯聚乙烯吡咯啶酮、瓊脂、海藻酸或海藻酸鈉作為崩解劑。此外，本發明的藥物組合物還可包括抗凝劑、潤滑劑、潤濕劑、調味劑、乳化劑、防腐劑等。
用於胃腸外給藥的製劑可以以貼片劑、注射劑、乳膏劑、洗劑、外用軟膏劑、油劑、潤濕劑、凝膠劑、氣溶膠和鼻吸入劑的形式藉由本領域已知的方法配製。這些製劑在藥物化學中通常已知的所有處方中均有描述。
為了實現本發明的再一個目的，本發明提供了一種用於預防或改善齲齒、牙周病或口臭的醫藥部外品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
在本發明的一個實施方案中，為了確認從發酵食品中分離的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液對口臭的影響，測試了作為口臭主要原因的揮發性硫化合物(Volatile Sulfur Compound，VSC)的生成抑制活性。結果證明貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液具有優異的VSC生成抑制效果（參見實施例10）。
本發明的術語「口臭」是一種來自口腔和鄰近器官的氣味，通常會引起他人或自己的不快。口臭的主要原因是揮發性含硫化合物(VSC)，其由口腔中存在的細菌降解食物殘渣、唾液、血液、口腔黏膜細胞等中所含的胺基酸和蛋白質而產生。分析揮發性化合物時，甲硫醇(CH 3SH)和硫化氫(H 2S)占90%，其具有臭雞蛋和腐爛洋蔥的氣味。
本發明的「改善」是指至少降低與緩解或治療條件相關的參數（例如，症狀程度）的所有行動。
本發明的術語「醫藥部外品」包括與用於治療、遷移、治癒或預防人類或動物疾病的纖維、橡膠製品或類似製品中的一種相對應的產品，它們對人體作用較弱或不直接作用於人體，且不是機械或機器及其類似物，以及用於滅菌、除蟲和類似目的的用於預防傳染病的製劑。
在本發明中，所述醫藥部外品可以，但不限於選自由口腔清洗劑、漱口劑、抗液體劑、牙膏、衛生墊、一次性襯墊、口罩、眼繃帶、繃帶、彈性繃帶、石膏繃帶、圓柱形彈性繃帶、紗布、藥棉、創可貼、除臭劑、軟膏和巴布劑所組成的群組。
為了實現本發明的再一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的保健功能性食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
本發明的術語「保健功能食品」包括食品組，其賦予食品附加值，以便使用物理、生物化學、生物技術方法為特定目的作用和表達相應食品的功能，或設計和加工以充分表達食品組合物的生物防禦節律調節、疾病預防和恢復等內部調節功能的食品。
本發明的保健功能性食品組合物可用於治療或預防齲齒和牙周病或改善口臭。
在本發明中，保健功能性食品組合物可以，但不限於是由片劑、膠囊、丸劑和顆粒組成的製劑中選擇的至少一種製劑。
此外，所述組合物可以按照各一般方法以口服製劑的形式配製和使用，例如粉末、顆粒、片劑、膠囊、懸浮液、乳劑、糖漿、氣霧劑等、外部製劑、栓劑和無菌注射溶液。可包含在含有化合物的組合物中的載體、賦形劑和稀釋劑可包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、澱粉、阿拉伯膠、海藻酸鈉、明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。在製劑時，所述製劑可藉由使用稀釋劑或賦形劑製備，例如通常使用的填料、填充劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑和表面活性劑。用於口服的固體製劑包括片劑、丸劑、粉末、顆粒、膠囊等，並且固體製劑可藉由將至少一種賦形劑（例如澱粉、碳酸鈣、蔗糖或乳糖、明膠等）與提取物混合來製備。此外，除簡單的賦形劑外，還可使用硬脂酸鎂、滑石粉等潤滑劑。對應於懸浮液、口服液、乳液、糖漿等用於口服的液體製劑，除了通常使用的簡單稀釋劑水和液體石蠟之外，還可以包括各種賦形劑，例如潤濕劑、甜味劑、芳香劑、防腐劑等。用於腸外給藥的製劑包括無菌水溶液、非水溶液、懸浮液、乳液、凍幹劑和栓劑。作為非水溶液和懸浮液，可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油（例如橄欖油）、可注射酯（例如油酸乙酯）等。可使用維替普索、聚乙二醇、吐溫61、可可脂、月桂酸、甘油明膠等作為栓劑的基質。
為了實現本發明的再另一個目的，本發明提供了一種預防或改善齲齒、牙周病或口臭的食品組合物，其含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分。
本發明所述的食品組合物可以以組合物形式與已知活性成分組合製備，已知活性成分對齲齒、牙周病或口臭有效，並包括其所有形式，例如營養補充劑、保健食品、食品添加劑等。可根據本領域已知的一般方法以各種形式製備所述類型的食品組合物。例如，保健食品可以以含有本發明食品組合物的茶、果汁和飲料的形式製備，並且可以藉由將含有新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液作為活性成分的食品組合物造粒、包封或粉化來獲得。
此外，保健功能食品可藉由將本發明的食品組合物添加到如下食品中來製備：飲料（包括酒精飲料）、水果及其加工食品（例如罐裝水果、瓶裝食品、果醬、檸檬醬等）、魚、肉及其加工食品（例如火腿、香腸、醃牛肉等）、麵包和麵條（如烏龍麵、蕎麥麵、拉麵、意大利麵、通心粉等）、果汁、各種飲料、餅乾、糖果、乳製品（如黃油、奶酪等）、食用植物油、人造黃油、植物蛋白、袋裝食品、冷凍食品、各種調味品（如豆瓣醬、大豆醬油、醬汁等）等。
在本發明的食品組合物中，除了貝萊斯芽胞桿菌菌株或其培養基或其培養上清液外，輔助成分可以為含有礦物質的化合物，例如維生素B、C和E、β-胡蘿蔔素、Ca、Mg和Zn，以及化合物，例如磷脂（例如卵磷脂）或麥芽酚、低聚糖、胺基酸等。其中，更優選的是，藉由混合和使用維生素C和E、β-胡蘿蔔素、麥芽醇等2至3種成分，因為可能增強生物活性效果。
此外，除了所述成分外，為了吸引人，可混合已知添加劑：天然香料或天然果汁（如李子味、檸檬味、菠蘿味或香草味）、天然色素（如葉綠素和黃酮）、甜味成分果糖、蜂蜜、糖醇和糖以及酸化劑（如檸檬酸、檸檬酸鈉）。
在本發明的食品組合物中，貝萊斯芽胞桿菌菌株或其培養基或其培養上清液的優選含量可為相對於食品總重量的約0.01-10wt%。優選地，當食品組合物以0.1mg/kg/天-200mg/kg/天的量攝取時，可以展現出預防或改善齲齒、牙周病或口臭的效果。
本發明提供了一種新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株或其培養基或其培養上清液在製備用於治療齲齒、牙周病或口臭的試劑中的用途。
本發明提供一種治療齲齒、牙周病或口臭的方法，包括向有需要的受試者施用有效量的包含新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株、其培養基或其培養上清液的組合物。
本發明的術語「有效量」是指當給藥受試者時，表現出改善、治療、預防、檢測和診斷齲齒、牙周病或口臭的效果，或抑制或減少齲齒、牙周病或口臭的量。「受試者」可以為動物，優選為哺乳動物，尤其為包括人類在內的動物，也可以是來自動物的細胞、組織和器官。受試者可能為需要這些效果的患者。
本發明術語「治療」全部指，但不限於改善齲齒、牙周疾病或口臭或這些疾病的症狀，可包括治療或充分地預防這些疾病或改善其狀況，並包括緩解、治療或預防由疾病引起的症狀或大部分症狀。
本文中術語「包含」的含義與「包括」或「其特徵在於」相同，且不排除根據本發明的組合物或方法中未具體提及的方法的附加成分或步驟。除非另有說明，否則術語「包括」指不包括附加元素、步驟或成分等。術語「主要由……組成」是指除所述物質或步驟外，在組合物或方法範圍內，還包括基本上不影響其基本性質的物質或步驟。
有益效果
根據本發明，貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04或其培養基或其培養上清液表現出抗菌、抗炎，對齲齒和牙周病的致病菌有生物膜抑制作用，對預防或治療齲齒和牙周病或改善口臭有優異的效果。
在下文中，將詳細描述本發明。 然而，以下實施例僅是對本發明的說明，並且本發明的內容不限於以下實施例。
實施例1：分離貝萊斯芽胞桿菌
使用無菌鹽水溶液對發酵食品的液體藉由多級稀釋法稀釋，塗布在固體培養基上，並在37℃下培養2到3天。固體培養基上的單個菌落在37℃的液體培養基中培養2到3天。使用Macrogen Co., Ltd. (Seoul, Korea)對純的分離菌株的16S rDNA進行測序和全基因組測序，並進行鑑定。
實施例2：貝萊斯芽胞桿菌的16s rDNA鑑定
使用MG基因組DNA純化試劑盒（Macrogen，韓國）進行基因組DNA提取。使用27F(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3')(SEQ ID NO: 1)和1492R(5'-TACGYTACGTAGTTACGACTT-3')(SEQ ID NO: 2)引子，藉由聚合酶鏈反應方法進行16S rDNA的鹼基序列擴增。由Macrogen Co.，Ltd使用785F(5'-GGATTAGATACCTGGTA-3')(SEQ ID NO: 3)和907R(5'-CCGTCAATTCMTTRAGTT-3')(SEQ ID NO: 4)引子，對相應位點進行鹼基測序。利用NCBI BlastN(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast)服務的16S數據庫，對藉由鹼基測序完成的每個菌株進行16S rDNA測序鑑定。16S rDNA測序標準鑑定結果顯示，ID-A01與暹羅芽胞桿菌( Bacillus siamensis)的相似性為100%，ID-A02、ID-A03和ID-A04與貝萊斯芽胞桿菌的相似性均為99%。然而，暹羅芽胞桿菌和貝萊斯芽胞桿菌為相似的物種，僅藉由16S rDNA序列難以準確區分，需藉由全基因組測序進行更精確的鑑定。
實施例3：貝萊斯芽胞桿菌的全基因組測序和使用全基因組進行鑑定
藉由Macrogen Co.，Ltd.進行全基因組測序，並使用MG基因組DNA純化試劑盒（Macrogen，韓國）提取基因組DNA，然後使用PacBio RS II(Pacific Biosciences，USA)和Illumina MiSeq(Illumina，USA)進行雜交測序。
使用全基因組訊息的鑑定分析是藉由平均核苷酸同一性(Average Nucleotide Identity，ANI)分析進行的，該分析使用的是暹羅芽胞桿菌SCSIO 05746(CP025001.1)和貝萊斯芽胞桿菌FZB42(CP000560.2)的全基因組序列，其中全基因組測序按常規完成並在NCBI基因組數據庫中登記，ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的全基因組序列完成了全基因組測序。ANI分析使用JspeciesWS(http://jspecies.ribohost.com/jspeciesws/)中的Blast算法(ANIb)進行。使用全基因組序列分析ANIb的結果表明，菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04與暹羅芽胞桿菌SCSIO 05746的同源性分別為94.31%、94.23%、94.08%和94.10%，與貝萊斯芽胞桿菌FZB42的同源性分別為97.78%、97.96%、98.06%和98.13%。經分析，ID-A01、ID-A02、ID-A03、ID-A04均為貝萊斯芽胞桿菌。
本發明的新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01（寄存編號：KCTC14180BP）、ID-A02（寄存編號：KCTC14181BP）、ID-A03（寄存編號：KCTC14182BP）和ID-A04（寄存編號：KCTC14183BP）於2020年5月11日寄存在韓國生物資源中心(KBRC)。
實施例4：樣品的製備
將菌株分別接種在TSB培養基中，並在37℃和200rpm下培養40小時。離心（13,000rpm，20分鐘，4℃）培養基，然後藉由去除細胞獲取上清液，並使用0.22μm過濾器進行抗菌處理以製備樣品。
實施例5：抗菌功效評估（牙周病）
對牙周病的代表性致病菌牙齦卟啉單胞菌(PGI)和具核梭桿菌(FNU)進行了抗菌活性試驗。本試驗中使用的PGI和FNU菌株由從KRIBB的韓國典型培養物收集中心(KCTC)獲得的牙齦卟啉單胞菌KCTC 5352和具核梭桿菌KCTC 2640作為標準菌株使用。PGI在37℃下、TYB培養基中厭氧培養24小時。將PGI和樣品以10%接種於TYB培養基中並培養24小時，然後測定600nm處的吸光度。FNU在RCB培養基中37℃厭氧培養24小時。將FNU和樣品以10%接種於RCB培養基中並培養24小時，然後測定600nm處的吸光度。
結果如下圖1和2所示。在所有菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04中，證實吸光度測定值非常低，因此抗菌效果非常好。
實施例6：生物膜功效評估-預防模型（牙周病）
對牙齦卟啉單胞菌(PGI)抗菌效果最好的菌株樣品進行生物膜效能評估。評估方法採用預防模型法，將培養基分配到塗有唾液的96孔板中（4小時，37℃），分別以25%和0.5%的濃度接種牙齦卟啉單胞菌(PGI)和具核梭桿菌(FNU)，同時處理樣品，然後在37℃下厭氧培養4天，之後確認結果。使用0.1%結晶紫試劑對形成的生物膜進行染色，並測定595nm處的吸光度。形成的生物膜越多，吸光度越高，因此藉由吸光度比較證實了待測樣品的生物膜抑制效果。
結果如下圖3所示，在菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的所有培養基上清液中，證實吸光度測定值較低，因此生物膜形成抑制效果良好。
實施例7：使用SEM掃描電子顯微鏡測定生物膜抑制效應（牙周病）
對於生物膜誘導，唾液塗布在24孔板上（4小時，37℃），放置一張蓋玻片。培養基分配在每個孔中，以25%和0.5%的濃度分別接種牙齦卟啉單胞菌(PGI)和具核梭桿菌(FNU)。同時對樣品進行處理，然後在37℃下進行厭氧培養4天以誘導生物膜的形成。去除每個試驗孔中形成生物膜的培養基成分，然後冷凍乾燥以製備和捕獲SEM樣品。
實施例8：生物膜功效評估-治療模型（牙周病）
在塗有唾液（4小時，37℃）的96孔板中分配培養基，分別以25%和0.5%的濃度接種牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌，37℃厭氧培養4天，以充分形成生物膜。此後，在更換培養基的同時對樣品進行處理，並在37℃下進一步厭氧培養3天，並確認結果。使用0.1%結晶紫試劑對形成的生物膜進行染色，並測定595nm處的吸光度。形成的生物膜越多，吸光度越高，因此藉由吸光度比較證實了待測樣品的生物膜去除效果。
結果如下圖5所示，在菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的所有培養基上清液中，證實吸光度測定值較低，因此生物膜去除效果良好。
實施例9：抗炎功效評估（牙周病）
在牙周炎或口腔健康中，已知牙齦卟啉單胞菌分泌的脂多糖(LPS)分泌炎症細胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α。為了測定候選組的炎性細胞因子分泌抑制能力，HGF-1細胞以1×10 4細胞/孔接種在96孔板中培養24小時。候選組處理24小時，然後以50μg/mL處理LPS24小時，收集上清液用於分析。使用ELISA檢測試劑盒，根據說明書檢測分泌細胞因子的量，並藉由450nm酶標儀測定。
試驗結果如圖6A、6B和6C所示。其證明候選組經治療可抑制LPS分泌細胞因子，並證實候選組經治療可減少所有IL-1β、IL-6和TNF-α三種細胞因子。
實施例10：揮發性硫化物的評估（口臭）
揮發性硫化物(VSC)包括硫化氫(H 2S)、甲硫醇(CH 3SH)、二甲基硫醚(CH 3SCH 3)等，其為口臭的主要原因，其中H 2S和CH 3SH占90%以上。VSC主要由牙周病病原菌產生，在牙周病患者中濃度較高。為了證實對口臭的影響，測試了VSC生成抑制能力。病原菌為牙周病的致病菌，且與具有VSC生成能力的牙齦卟啉單胞菌(PGI)和具核梭桿菌(FNU)菌株共同發揮作用。作為FNU菌株，標準菌株 F.nucleatumKCTC 2640是從韓國典型培養物寄存中心(KCTC)處獲得的。PGI和FNU分別接種在TYB和RCB培養基中，並在37℃的厭氧培養箱中培養24小時。將5%的PGI和FNU以及10%的樣品接種在TYB和RCB以1:1的比例混合的培養基中，並在37℃下培養24小時。為了測定培養後生成的H 2S，藉由亞甲藍法對培養基顯色，然後測定668nm處的吸光度。
結果如下圖7所示，在菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的所有培養上清液中，證實吸光度測定值較低，因此VSC生成抑制效果良好。
實施例11：抗菌功效效果（齲齒）
對齲齒的主要致病菌變形鏈球菌( Streptococcus mutans，SMU)進行了抗菌活性試驗。試驗中使用的SMU菌株，變異鏈球菌KCTC 3065標準菌株從KRIBB的韓國典型培養物收集中心(KCTC)的獲得和使用。SMU在CO 2培養箱的BHI培養基中37℃培養24小時。SMU和樣品以10%接種在BHI培養基中並培養24小時，然後進行活細胞計數分析。
實施例12：生物膜功效評估（齲齒）
對於生物膜誘導，變形鏈球菌(SMU)以10%接種在BHI中的進行培養（5%CO 2培養箱，18小時）。離心（9,000rpm，5分鐘，4℃）培養基以固定細胞，使用反應培養基（含1%蔗糖的BHI）稀釋至約1×10 6CFU/mL，並將細胞接種到包括10%(v/v)樣品的培養基中。每24小時將培養基更換為包括10%(v/v)樣品的反應培養基，並在相應條件下誘導成膜達3天（72小時），該時間為合適的生物膜形成時間。
採用結晶紫染色法對生物膜功效進行評估。在用甲醇固定並用0.1%結晶紫染色後，用乙醇進行重建。每一步都包括清洗過程，並測定595nm處的成膜度。結果如下圖9所示，在使用來自菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液處理的培養基中，證實吸光度測定值非常低，因此生物膜抑制效果非常好。
實施例13：使用SEM掃描電子顯微鏡測量生物膜抑制效應（齲齒）
對於生物膜誘導，以10%SMU接種至BHI（5%CO 2培養箱，18小時）。離心（9000rpm，5分鐘，4℃）培養基以固定細胞，使用反應培養基（含1%蔗糖的BHI）稀釋至約1×10 6CFU/mL備用。為了方便SEM測定所需作為預處理過程的金屬塗層，將蓋玻片放在板壁上進行測試以在蓋玻片上誘導生物膜，並將稀釋的SMU接種在每個孔中以包含10%(v/v)的樣品。每24小時將培養基更換為包括10%(v/v)樣品的反應培養基，並在相應條件下誘導成膜達3天（72小時），其為合適的生物膜形成時間。此後，洗滌生物膜誘導的蓋玻片，並轉移到新的平板上，然後進行冷凍乾燥過程以進行SEM測量。
結果如下圖10所示，在使用來自菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04的培養上清液處理的蓋玻片中，用肉眼確認生物膜的形成程度非常低，因此抗菌效果非常好。
工業實用性 根據本發明，本發明中提供的貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01、ID-A02、ID-A03和ID-A04或其培養基或其培養上清液表現出抗菌、抗炎、以及對齲齒和牙周病病原菌的生物膜的抑制作用，用於治療或預防齲齒和牙周病或改善口臭，因此工業實用性強。
無
圖1顯示牙齦卟啉單胞菌( Porphyromonas gingivalis，PGI)的抗菌試驗結果。 圖2顯示具核梭桿菌( Fusobacterium nucleatum，FNU)的抗菌試驗結果。 圖3顯示對牙齦卟啉單胞菌(PGI)的抗菌評估具有優異效果的菌株樣品的生物膜功效的評估結果。 圖4顯示使用SEM掃描電子顯微鏡測定生物膜抑制效應的結果。 圖5顯示評估生物膜去除效率的結果。 圖6A-6C顯示牙齦卟啉單胞菌(PGI)分泌的LPS的三種細胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的抑制效應的結果。 圖7顯示檢測VSC生成抑制活性的結果。 圖8顯示變形鏈球菌( Streptococcus mutans，SMU)的抗菌試驗結果。 圖9顯示評估變形鏈球菌( Streptococcus mutans，SMU)衍生生物膜形成抑制效果的結果。 圖10顯示使用掃描電子顯微鏡(SEM)評估變形鏈球菌(SMU)衍生生物膜形成抑制效果的結果。
寄存編號 寄存機構名稱：韓國生命工學研究院(KRIBB) 寄存編號：KCTC14180BP 寄存日期：20200511 寄存機構地址：KRIBB，韓國全羅北道井邑市立新街181(56212) 寄存機構名稱：韓國生命工學研究院(KRIBB) 寄存編號：KCTC14181BP 寄存日期：20200511 寄存機構地址：KRIBB，韓國全羅北道井邑市立新街181(56212) 寄存機構名稱：韓國生命工學研究院(KRIBB) 寄存編號：KCTC14182BP 寄存日期：20200511 寄存機構地址：KRIBB，韓國全羅北道井邑市立新街181(56212) 寄存機構名稱：韓國生命工學研究院(KRIBB) 寄存編號：KCTC14183BP 寄存日期：20200511 寄存機構地址：KRIBB，韓國全羅北道井邑市立新街181(56212)
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002

Claims (6)

  1. 一種貝萊斯芽胞桿菌菌株ID-A01(寄存編號：KCTC14180BP)。
  2. 一種如請求項1所述之貝萊斯芽胞桿菌菌株的培養上清液。
  3. 一種如請求項1所述的貝萊斯芽胞桿菌菌株或如請求項2所述的培養上清液在製備預防或治療齲齒、牙周病或口臭的藥物中的應用。
  4. 如請求項3所述之應用，其中，所述牙周病選自由牙齦炎、牙周炎、牙齦出血、牙齦收縮、牙周袋、冠周炎和牙周膿腫所組成的群組中的至少一種。
  5. 一種組合物，其含有如請求項1所述之貝萊斯芽胞桿菌菌株或如請求項2所述的培養上清液作為活性成分。
  6. 如請求項5所述的組合物，其中，所述組合物為藥物組合物、醫藥部外品組合物、保健功能性食品組合物、食品組合物、口腔洗劑組合物或漱口劑組合物中的任何一種。
TW110133275A 2020-09-07 2021-09-07 新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途 TWI823140B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20200114169 2020-09-07
KR10-2020-0114169 2020-09-07

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202212565A TW202212565A (zh) 2022-04-01
TWI823140B true TWI823140B (zh) 2023-11-21

Family

ID=80491329

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110133275A TWI823140B (zh) 2020-09-07 2021-09-07 新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230372414A1 (zh)
EP (1) EP4212612A1 (zh)
JP (1) JP2023540565A (zh)
KR (1) KR20220032506A (zh)
CN (1) CN116457455A (zh)
AR (1) AR123448A1 (zh)
AU (1) AU2021336445A1 (zh)
CA (1) CA3191643A1 (zh)
TW (1) TWI823140B (zh)
WO (1) WO2022050795A1 (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108243988A (zh) * 2018-02-01 2018-07-06 共鳞实业(深圳)有限公司 一种有健齿功能的宠物咬胶及其制备方法
KR102151345B1 (ko) * 2019-04-09 2020-09-02 인천대학교 산학협력단 충치 유발균의 생물막 형성 억제 활성을 나타내는 바실러스 벨레젠시스 균주 및 이를 포함하는 충치 예방 약학적 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060018843A1 (en) * 2004-07-24 2006-01-26 Fine Kenneth D Halitosis, gingivitis, and periodontitis treatment and preventative composition
KR101629551B1 (ko) * 2014-05-16 2016-06-13 씨제이제일제당 (주) 신규한 바실러스 벨레젠시스 cjbv 및 이를 포함하는 항균 조성물
KR101956759B1 (ko) 2018-01-23 2019-03-11 재단법인 발효미생물산업진흥원 항균활성, 항산화활성, 세포외 효소 분비능 및 플라보노이드 생성능이 있고, 유해물질 및 유해효소를 생성하지 않는 바실러스 벨레젠시스 srcm102752 균주 및 이의 용도
KR102258561B1 (ko) 2019-03-27 2021-05-31 주식회사 엘엠이앤에프 알밥성형기용 교반체

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108243988A (zh) * 2018-02-01 2018-07-06 共鳞实业(深圳)有限公司 一种有健齿功能的宠物咬胶及其制备方法
KR102151345B1 (ko) * 2019-04-09 2020-09-02 인천대학교 산학협력단 충치 유발균의 생물막 형성 억제 활성을 나타내는 바실러스 벨레젠시스 균주 및 이를 포함하는 충치 예방 약학적 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
US20230372414A1 (en) 2023-11-23
AR123448A1 (es) 2022-11-30
AU2021336445A1 (en) 2023-04-13
JP2023540565A (ja) 2023-09-25
TW202212565A (zh) 2022-04-01
WO2022050795A1 (ko) 2022-03-10
KR20220032506A (ko) 2022-03-15
EP4212612A1 (en) 2023-07-19
CN116457455A (zh) 2023-07-18
CA3191643A1 (en) 2022-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7674613B2 (en) Live bacterium preparation containing lactic acid bacterium as active ingredient and food containing lactic acid bacterium
WO2013021957A1 (ja) 口腔内疾患の予防又は治療剤
US8057790B2 (en) Treatment of malodour
KR102001074B1 (ko) 충치 억제 활성을 갖는 유산균 조성물
JPWO2003099304A1 (ja) 抗歯周病菌組成物、該抗歯周病菌組成物を含有する抗歯周病用飲食物及び口腔用洗浄剤
TWI383798B (zh) 改善口腔內細菌群的發酵乳酸桿菌ＳＧ－Ａ９５（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ ＳＧ－Ａ９５）及其保健組合物
KR102217525B1 (ko) 치주염 예방 또는 치료용 유산균 및 그의 용도
KR102230517B1 (ko) 충치 억제 활성을 갖는 락토바실러스 살리바리우스를 포함하는 조성물
JP5544234B2 (ja) 歯周病菌生育抑制用組成物
TWI823140B (zh) 新穎貝萊斯芽胞桿菌菌株及其用途
KR102632524B1 (ko) 바실러스 벨레젠시스 균주, 이의 배양액 또는 배양상등액을 유효성분으로 포함하는 치주질환 예방 또는 치료용 조성물
EP4194543A1 (en) Bacillus subtilis strain and use thereof
KR102217518B1 (ko) 치주염 예방 또는 치료용 유산균 및 그의 용도
KR20240100309A (ko) 락티카제이바실러스 파라카제이 유산균 또는 이의 배양액을 포함하는 치주염 예방 또는 치료용 조성물
KR20180072427A (ko) 개똥쑥과 죽염을 포함하는 구강질환 예방 또는 치료용 조성물
NZ546406A (en) Treatment of halitosis with BLIS-producing S. salivarius