TWI774903B - 用於預防及/或改善肺損傷之虎乳靈芝菌絲體活性物質、其製備方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種用於預防及/或改善肺損傷的虎乳靈芝菌絲體活性物質,該活性物質的製備方法包括下列步驟:(a)取一虎乳靈芝菌絲體(Lignosus rhinocerus
mycelia)於平板培養基上,於15-30℃之溫度下培養1-2周;(b)將步驟(a)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種至一燒瓶內,於15-30℃、pH 2-6之環境培養3-14天;(c)將步驟(b)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種於一發酵槽內,於15-30℃、pH 2-6之環境下攪拌培養3-21天,形成含有該虎乳靈芝菌絲體活性物質之一虎乳靈芝菌絲體發酵液。
Description
本發明關於一種虎乳靈芝菌絲體活性物質、其製備方法及用途。具體來說,關於一種用於改善肺損傷的虎乳靈芝菌絲體活性物質,其製備方法,以及其在食品或醫藥品中的用途。
衛生褔利部公布2017年十大死因中,其中第一大死因中惡性腫瘤中第一位的氣管、支氣管和肺癌、第三大死因肺炎、第七大死因慢性下呼吸道疾病,共四項國人十大死因與肺部發炎有著密不可分的相關性。
急性肺損傷(acute lung injury;ALI)與其更嚴重的急性呼吸窘迫症(acute respiratory distress syndrome;ARDS)為臨床常見的急性肺發炎的代表性疾病,皆引發呼吸衰節而導致死亡,並與許多衍生的呼吸道疾病相關。
造成ALI的危險因子分二大類,分別是直接型因子是指危險因子源自於肺臟,包括細菌或病毒引起感染性肺炎、大量吸入胃酸或異物、肺部挫傷等;間接型因子是指危險因子非源自於肺臟,包括敗血症、長期酒精與藥物濫用、輸入人工血漿等。
由於ALI因機制複雜,病死率高,目前臨床上尚無確切有效的控制病死率的藥物。但常用的治療方法有機械通氣、β2腎上腺素受體刺激劑、抗凝、
溶栓、表面活性劑及手術等。
而慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,簡稱COPD)目前居全球死亡原因的第4位,是一種常見、多發、高致殘率和高致死率的慢性呼吸系統疾病。全世界慢性阻塞性肺病的患者有超過三億人。
吸菸是導致COPD的主要原因,然近年因我國機車、汽車的排廢氣以及工業上發電與燃油燃煤的使用增加,導致Particulate Matter(PM)2.5的空氣汙染上升,更加重此一疾病的發生。長期暴露在污染的環境下,會使肺部產生發炎反應,導致氣流通道變窄而產生肺組織功能障礙。
COPD的治療方式目前包含戒菸、肺康復治療、吸入性支氣管擴張藥、使用皮質類固醇、長期供氧或進行肺移植等。2015年最新通過的新藥係合併過去兩種使用於COPD的肌肉鬆弛劑,截至目前仍未有突破性的新藥發展。
因此,研究有效治療ALI及COPD的方法仍是重要的發展方向。
虎乳靈芝(Lignosus rhinocerus),又名老虎奶,屬擔子菌門(Basidiomycota)多孔菌科(Polyporaceae)的植物。虎乳靈芝為馬來西亞傳統醫學用藥,傳統主要用於咳嗽、哮喘、支氣管炎、嘔吐、發燒、食物中毒等症狀。近代藥理研究分析,發現虎乳靈芝具有免疫調節、抗發炎、抗氧化、抗微生物、抗病毒、抗凝血、抗乳癌的功效。綜合上述,可推測虎乳靈芝應具有預防ALI及COPD的潛力。然而,目前尚未有虎乳靈芝對改善ALI及COPD之研究。
本發明之提供一種虎乳靈芝菌絲體活性物質及其製備方法,其可用於製備具改善肺損傷之組合物。相較於一般西藥及治療方法,本發明揭露的液態發酵虎乳靈芝菌絲體活性物質的製備方法更為安全、簡便,製成之虎乳靈芝菌絲體活性物質更天然、安全,並可有效改善如急性肺損傷(ALI)及或慢性阻塞性肺病(COPD)之類的肺損傷。
根據本發明之一實施例,提供用於製備改善肺損傷之虎乳靈芝菌
絲體活性物質的製備方法,其係包括下列步驟:
(a)取虎乳靈芝菌絲體(Lignosus rhinocerus mycelia)於平板培養基上,於15至30℃之溫度下培養1至2周;
(b)將步驟(a)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種至燒瓶內,於15至30℃、pH 2至6之環境培養3至14天;
(c)將步驟(b)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種於發酵槽內,於15至30℃、pH 2至6之環境下攪拌培養3至21天,形成含有虎乳靈芝菌絲體活性物質之虎乳靈芝菌絲體發酵液。
一實施例中,製備虎乳靈芝菌絲體活性物質的方法更包括步驟(d):將虎乳靈芝菌絲體發酵液冷凍乾燥後磨粉,形成含有虎乳靈芝菌絲體活性物質之虎乳靈芝菌絲體凍乾粉。
一實施例中,製備虎乳靈芝菌絲體活性物質的方法更包括步驟(e):將虎乳靈芝菌絲體凍乾粉以至少一溶劑萃取,形成含有虎乳靈芝菌絲體活性物質之虎乳靈芝菌絲體萃取液。
一實施例中,製備虎乳靈芝菌絲體活性物質的步驟更包括步驟(f):將虎乳靈芝菌絲體萃取液乾燥,以獲得虎乳靈芝菌絲體活性物質。
一實施例中,步驟(e)中的溶劑係選自水或醇類。
一實施例中,上述步驟(b)之燒瓶培養為震盪培養,且轉速為110至130rpm。
一實施例中,步驟(c)中的發酵槽進一步通入一氣體,此氣體包括空氣、氧氣、二氧化碳、氦氣或其組合,發酵槽的槽壓為0.5至1.0kg/cm2且通氣速率為0.01至1.5VVM。
根據本發明,另提供一種虎乳靈芝菌絲體活性物質,其係以上述製備方法製造而成。
根據本發明,再提供一種用於改善肺損傷之組合物,其係包含具有效濃度的上述虎乳靈芝菌絲體活性物質,以及藥學上可接受之載劑、賦形劑、
稀釋劑或輔劑。
一實施例中,當萃取溶劑為水時,該虎乳靈芝菌絲體活性物質的有效濃度大於1mg/ml;當萃取溶劑為乙醇時,該虎乳靈芝菌絲體活性物質的有效濃度大於25μg/ml。
根據本發明,再提供一種上述虎乳靈芝菌絲體活性物質的用途,其係用於製備改善肺損傷之組合物。
一實施例中,上述肺損傷包括慢性阻塞性肺病及/或急性肺損傷。
一實施例中,所述組合物為醫藥組合物或食品添加劑。
為使本發明之上述及其它方面更為清楚易懂,下文特舉實施例,並配合所附圖式詳細說明。
第1圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由腹腔注射)之急性肺發炎肺損傷模式測試結果。
第2圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由腹腔注射)之蛋白質滲出測試結果。
第3圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由腹腔注射)的(A)白血球浸潤、(B)吞噬細胞及(C)嗜中性白血球(PMN)測試結果。
第4圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由口服投予)之急性肺發炎肺損傷模式測試結果。
第5圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由口服投予)之蛋白質滲出測試結果。
第6圖繪示虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由口服投予)的(A)白血球浸潤、(B)吞噬細胞及(C)嗜中性白血球(PMN)測試結果。
第7圖繪示虎乳靈芝菌絲體水萃物的香菸煙霧萃取物誘導COPD之肺泡上皮A549細胞傷害測試結果,其中LrH(L)、LrH(M)及LrH(H)係分別指虎
乳靈芝菌絲體水萃物濃度為0.25mg/ml、0.5mg/ml及1.0mg/ml。
第8圖繪示虎乳靈芝菌絲體醇萃物的香菸煙霧萃取物誘導COPD之肺泡上皮A549細胞傷害測試結果,其中LrE(L)、LrE(M)及LrE(H)係分別指虎乳靈芝菌絲體醇萃物濃度為6.25μg/ml、12.5μg/ml及25μg/ml。
實施例一 虎乳靈芝菌絲體培養
本實施例使用之虎乳靈芝菌絲體,係購自馬來西亞野生虎乳靈芝子實體。子實體外表經表面消毒後切一小口以撕裂方式取得無雜菌區,以鎓子夾取一小塊子實體置於平板培養基PDA中進行培養。以此方式進行菌種分離並在菌絲生長於PDA後,將不同型態的菌絲進行純化,經確認菌絲型態皆為一致後進行菌種鑑定。
將菌種液態培養收集菌絲體後以液態氮研磨破菌方式進行DNA萃取,並以ITS-1及ITS-4引子(ITS-1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG/ITS-4:TCCTCCGCTTATTGATATGC)進行ITS基因片段增幅放大。
放大條件為95℃反應5分鐘後,再進行95℃反應30秒、52℃反應30秒、72℃反應1分鐘10秒的35個循環,最後以72℃反應5min的條件,進行聚合酶鏈反應。將增幅後產物進行序列定序分析,並利用NCBI網站資源進行BLAST search進行序列片對比對。序列相似度與虎乳靈芝序列(Lignosus rhinoceros)達99%。此虎乳靈芝菌絲體已於107年12月24日寄存於財團法人食品工業發展研究所,寄存編號為BCRC 930202。
然而,可用於本發明的虎乳靈芝品種並不限定於此單獨一種,亦可使用其他來源的虎乳靈芝,本發明並不對其限制。
(1)平板培養:將虎乳靈芝菌絲體接種於平板上,於15至30℃下培養1至2周(本實施例中,係於25℃下培養7天)。平板培養基的成份可包含馬鈴薯糊精培養基(Potato Dextrose Agar,PDA)、碳源及氮源,並無特別限制。
(2)燒瓶培養:刮取(1)平板上之菌絲體接種於燒瓶中,並以15至30℃、pH 2至6及轉速110至130rpm的條件震盪培養3至14天(本實施例中,於25℃、pH 5、轉速120rpm之下震盪培養7天)。此震盪培養係以下表1所示之培養基進行培養。
上述培養基配方中,綜合性碳氮源可選自穀類(如:麥粉)或豆類(如:黃豆粉、綠豆粉、大豆粉、肉桂粉等);醣類可為葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖等;無機鹽類可為硫酸鎂、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鐵等。特別說明的是,表1培養基配方僅為其中一種範例,使用時成份可依需求調整,或搭配市售培養基使用,並無特別限制。
(3)發酵槽培養:將(2)中燒瓶培養的菌絲體接種於發酵槽內,以15至30℃、槽壓0.5至1.0kg/cm2、pH 2至6及攪拌速度50至150rpm條件下,以0.1至1.5VVM的通氣速率培養3至21天,形成一虎乳靈芝菌絲體發酵液(本實施例中,係在25℃、槽壓0.5kg/cm2、pH 5,攪拌速度80rpm及1.0VVM(空氣)的條件下,培養14天),即得虎乳靈芝菌絲體發酵液。發酵槽培養使用之培養基可與步驟(2)燒瓶培養使用之培養基相同(本實施例之作法),亦可另外配置適當培養基。此虎乳靈芝菌絲體發酵液內即含本發明之虎乳靈芝菌絲體活性物質。虎乳靈芝菌絲體發酵液可進一步藉由冷凍乾燥步驟製備為虎乳靈芝菌絲體發酵液凍乾粉。於本實施例中,100L的虎乳靈芝菌絲體發酵液可製得約2kg凍乾粉。
(4)萃取物製備:將虎乳靈芝菌絲體發酵液凍乾粉分為兩份,分別加入20倍重量之蒸餾水及乙醇進行萃取。以水為溶劑的萃取物以溫度100℃加熱
三十分鐘,待冷卻後離心取上清液,經冷凍乾燥法進行乾燥得虎乳靈芝發酵菌絲體水萃物。以乙醇為溶劑的萃取物,以超音波震盪1小時,離心後取上清液,將上清液經減壓濃縮得虎乳靈芝發酵菌絲體醇萃物。
經由萃取步驟,可取得含較高濃度之虎乳靈芝菌絲體活性物質的水萃物及醇萃物。虎乳靈芝菌絲體活性物質的態樣包含虎乳靈芝菌絲體發酵液(菌絲體與澄清液)、發酵液凍乾粉、水萃物、醇萃物、水萃物及醇萃物之混合物、水萃物或醇萃物凍乾粉或其他劑型。以下實施例二中,係以虎乳靈芝菌絲體凍乾粉作為活性物質態樣;實施例三中,係以水萃物及醇萃物作為虎乳靈芝菌絲體活性物質態樣。
實施例二 虎乳靈芝菌絲體凍乾粉改善急性肺損傷(ALI)之分析
細菌感染為ALI主要的危險因子,革蘭氏陰性菌為其中一大類,其外套膜的主成分為內毒素,又名脂多醣(lipopolysaccride;LPS)。目前已有實驗利用內毒素誘發的ALI疾病動物模式。可參照Yunhe Fu et al.(2017),Protective effect of TM6 on LPS-induced acute lung injury in mice,SCIENTIFIC REPORTS,7:572.根據此篇論文中利用LPS建立老鼠的急性肺部發炎模式,在鼻腔內intranasally(i.n.)引入LPS 50μg/20μL造成急性肺損傷,後續進行肺部病理、肺泡沖洗液總細胞數、蛋白質濃度及各種細胞激素之變化分析,用以評估合成肽(cell-permeable TIR domain-derived decoy peptide)對ALI的改善結果。在許多致病源中LPS是廣泛被接受造成肺部急性發炎最佳的誘發物,也是最接近臨床上急性發炎的模式因此,若能抑制LPS造成的肺部發炎、免疫調解作用及機制即能達到改善ALI的效果。本實驗中亦以LPS建立小鼠的急性肺部發炎模式,進行肺部病理、肺泡沖洗液總細胞數、蛋白質濃度及各種細胞激素之變化分析,評估虎乳靈芝菌絲體活性物質對ALI的改善結果。
(1)運用BALB/c小鼠進行動物實驗,分為腹腔注射及口服投予樣品組兩大組。每大組再分為控制組、LPS組、LR組、Dexamethasone(地塞米松,DEX,溶於生理食鹽水中,濃度為5μg/g,腹腔注射50μL)組,共計4組,每組
使用6隻小鼠。
(2)利用腹腔注射投予虎乳靈芝菌絲體凍乾粉後(虎乳靈芝菌絲體凍乾粉溶於水:酒精=1:1溶液,濃度為0.5mg/g,腹腔注射50μL),30分鐘後由鼻腔投予內毒素(LPS)。24小時後,犧牲動物取後檢體進行後述分析。
(3)利用口服投予虎乳靈芝菌絲體凍乾粉每天一次,共計三次(虎乳靈芝菌絲體凍乾粉溶於水:酒精=1:1溶液,濃度為0.5mg/g,餵食體積為200μL),第3天口服投予虎乳靈芝30分鐘後由鼻腔投予內毒素(LPS)。24小時後,犧牲動物取後檢體進行後述分析。
(4)肺組織病理形態觀察:取一半未進行肺泡灌洗小鼠的右肺立即用福馬林液固定,製成石蠟切片,常規HE染色,在光學顯微鏡下觀察其病理組織學變化。
(5)氣管肺泡灌洗術(Bronchoalveolar lavage;BAL):另一半小鼠用1ml PBS經氣管插管灌洗三次,以取得支氣管肺泡腔中的內含物沖出取得沖洗液(BAL fluid;BALF)。離心後,細胞的部分進行血球分類與計數;上清液的部分,利用布拉德福蛋白質定量法(Bradford protein assay)進行蛋白質濃度分析。
(6)白血球計數與種類分析:利用流式細胞儀分析:為靈敏度高且人為誤差小的分析方法,將血液與BALF檢體利用白血球的表面具有專一性抗原的特性,進行白血球分型,包括有(1)分析BALF中細胞總數;(2)白血球(CD45)總數;(3)吞噬細胞(CD45+/CD11b+)總數;(4)嗜中性球(CD45+/Ly6G+)總數;(5)巨噬細胞[(CD45+/CD11b+)-(CD45+/Ly6G+)]總數。
統計方法:實驗數據皆以平均值及標準差(Mean±standard deviation,SD)表示,統計以one-way ANOVA進行分析,並以LSD事後檢定比較各組差異,分析結果若p小於0.05,視為具有統計上的顯著意義。
第1圖為虎乳靈芝菌絲體活性物質(經由腹腔注射)之急性肺損傷模式測試結果。其中虎乳靈芝菌絲體凍乾粉(Lr mycelia,0.5mg/g)與Dexathemethasone(DEX,5μg/g)組係經由腹腔注射投予至BALB/c小鼠30分鐘
後,再利用內毒素(LPS)經由鼻腔吸入誘發急性肺發炎。結果如第1圖所示,對照組(Control)組未見明顯改變,肺泡結構多數保持完整。LPS only組(負對照組)肺組織病變明顯,肺泡腔結構破壞、融合,而Lr mycelia組及Dex組小鼠肺部病情情況明顯減輕,接近於對照組。上述結果顯示虎乳靈芝菌絲體活性物質可有效改善肺部發炎病理變化。
此外,於腹腔注射虎乳靈芝菌絲體凍乾粉後分析內毒素誘發肺部發炎所導致的蛋白質滲出反應,發現虎乳靈芝菌絲體凍乾粉可有效降低蛋白質滲出反應,參照第2圖及下表2。
於腹腔注射虎乳靈芝菌絲體凍乾粉後分析內毒素誘發肺部發炎所導致的(A)白血球(CD45)、(B)吞噬細胞(CD45+/CD11b+)、及(C)嗜中性球(CD45+/Ly6G+)浸潤反應,發現虎乳靈芝菌絲體凍乾粉可有效改善白血球、吞噬細胞及嗜中性白血球(PMN)浸潤如第3圖(A),(B),(C)及下表3-5。
相似的,虎乳靈芝菌絲體凍乾粉(Lr mycelia,0.5mg/g)可經由口服投予至BALB/c小鼠3天後,再利用內毒素(LPS)經由鼻腔吸入誘發急性肺發炎。其測試結果如第4圖所示,對照組(Control)組未見明顯改變,肺泡結構多數保持完整。LPS only組(負對照組)肺組織病變明顯,肺泡腔結構破壞、融合,而Lr mycelia組及Dex組小鼠肺部病情情況明顯減輕。顯示虎乳靈芝菌絲體凍乾粉以口服方式施用,亦可有效改善肺部發炎病理變化。
於口服投予虎乳靈芝菌絲體凍乾粉後分析內毒素誘發肺部發炎所導致的蛋白質滲出反應,發現虎乳靈芝菌絲體凍乾粉可有效降低蛋白質滲出
反應,請參照第5圖及下表6。
於口服投予虎乳靈芝菌絲體凍乾粉後分析內毒素誘發肺部發炎所導致的(A)白血球(CD45)、(B)吞噬細胞(CD45+/CD11b+)、及(C)嗜中性球(CD45+/Ly6G+)浸潤反應,發現虎乳靈芝菌絲體凍乾粉可有效改善白血球、吞噬細胞及嗜中性白血球(PMN)浸潤如第6圖(A),(B),(C)及下表7-9。
本發明之虎乳靈芝菌絲體活性物質經上述實驗,已證實具有改善急性肺損傷(ALI)之作用。其可與藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑結合,製備醫藥組合物,亦可作為食品添加劑之用。
實施例三 虎乳靈芝菌絲體水萃物及醇萃物改善COPD之分析
目前已有實驗利用香菸煙霧萃取物(Cigarette smoke extract,CSE)及人類肺癌上皮細胞A549成功建立COPD模式。可參照Miaomiao Chen et al.(2015),Azithromycin attenuates cigarette smoke extract-induced oxidative stress injury in human alveolar epithelial cells,MOLECULAR MEDICINE REPORTS,11:3414-3422.此篇論文,其以人類肺癌上皮細胞A549對CSE進行細胞存活率分析(MTT assay),用以評估抗生素Azithromycin對COPD的改善結果。CSE對肺泡上皮的損傷是慢性阻塞性肺病機制中的重要過程。因此,若能抑制CSE對肺泡上皮的傷害即能達到改善慢性阻塞性肺病的效果。本實驗中亦以人類肺癌上皮細胞A549對CSE進行細胞存活率分析(MTT assay),評估虎乳靈芝菌絲體活性物質對COPD的改善結果。
(1)收集人類肺癌上皮A549細胞,調整細胞懸浮液濃度,以50,000-100,000/mL密度植種於96孔盤內;
(2)將(1)之96孔盤置於37℃、5% CO2培養箱培養16-24小時後,以實施例一所獲得,不同劑量的虎乳靈芝菌絲體水萃物(0、0.25、0.5、1mg/ml)及醇萃物(0、6.25、12.5、25μg/ml)處理。虎乳靈芝菌絲體萃取物溶解於二甲基亞石楓(Dimethyl sulfoxide,DMSO)中,檢測時DMSO之濃度不超過0.1v%以避免其毒性影響細胞生長;對照組處理0.1% DMSO,每個濃度進行三重複,結果置於37℃、5% CO2培養箱培養24小時;(3)上述(2)之結果先以400×g離心10min,移除上清液,再加入香菸煙霧萃取物CSE 12.5%誘導A549的細胞毒性,對照組不處理。接著置於37℃、5% CO2培養箱培養6小時;(4)將(3)之上清液移除,每孔加入100μl MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)溶液,於37℃反應2小時後,終止培養,小心移除孔內MTT溶液;(5)於(4)中每孔加入100μl DMSO,震盪2min,於570nm測定吸光值。此吸光度代表細胞還原MTT的能力(甲的形成量),即粒線體的活性(活細胞數目)。於570nm的吸光度越高,表示細胞存活率越高。
統計分析:實驗結果數據以平均值(Mean)±標準差(SD)表示。試驗數據以Student's t-test統計分析其組間差異。若p<0.05則視為具有統計上的顯著差異。
水萃物之實驗結果如第7圖及下表10所示。香菸煙霧萃取物CSE會誘導A549細胞毒性,造成細胞存活率下降。然而,加入虎乳靈芝發酵菌絲體水萃物可顯著性抑制細胞損傷,提昇存活率。採用本發明實施例一中的虎乳靈芝菌絲體水萃物,當施用濃度大於1mg/ml時,具有改善COPD之作用。
醇萃物之實驗結果如第8圖及下表11所示。結果同樣表明,加入本發明實施例一中的虎乳靈芝菌絲體醇萃物,在施用濃度大於25μg/ml時,具有改善COPD之作用。
特別說明的是,上述實驗中,虎乳靈芝菌絲體水萃物、醇萃物的有效濃度僅為示例,實際應用時可能依受測個體差異而有改變。
本發明之虎乳靈芝菌絲體活性物質經上述實驗,已證實具有改善COPD之作用。其可與藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑結合,製備醫藥組合物,亦可作為食品添加劑之用。
實施例四:組合物的製備
本發明提供一組合物,其包含虎乳靈芝菌絲體活性物質,以製備為醫藥組合物,亦可作為保健營養食品。
該組合物進一步包含添加劑。在一較佳的實施態樣中,該添加劑可為賦型劑、防腐劑、稀釋劑、填充劑、吸收促進劑、甜味劑、潤滑劑、黏稠劑、或其組合。該賦型劑可選自檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸鈣、蔗糖或其組合。該防腐劑可延長醫藥組合物的儲藏期限,例如苯甲醇、對經基苯甲酸(parabens)、二氧化矽或其組合。該稀釋劑可選自水、乙醇、丙二醇、甘油或其組合。該填充劑可選自乳糖、牛乳糖、高分子量舉乙二醇或其組合。該吸收促進劑可選自二甲基亞碸(DMSO)、月桂氮卓酮、丙二醇、甘油、聚乙二醇或其組合。該甜味劑可選自安塞甜(Acesulfame K)、阿斯巴甜(aspartame)、糖精(saccharin)、三氯蔗糖/蔗糖素(sucralose)、紐甜(neotame)或其組合。該潤滑劑可選自硬脂酸鎂或阿拉伯膠。該黏稠劑可為玉米澱粉。除上述所列舉的添加劑以外,在不影響組合物的醫藥效果前提下,可依需求選用適合的其他添加劑。
該組合物於醫藥領域中可開發為不同商品。在一較佳實施態樣中,該組合物為一藥品、飼料、飲料、營養補充品、乳製品、食品或保健食品。
該組合物可根據受施予者之需要,而採用不同形態。在一較佳實施態樣中,該組合物的形態為粉劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、安瓶(ampoule/ampule)、液劑噴劑或塞劑。
本發明的組合物可使用於動物或是人類。在不影響效果的前提下,該組合物可製為任何藥物型態,並根據藥物型態以適用的途徑施予該動物或人類。
組合物製備
本發明的虎乳靈芝菌絲體活性物質若應用於食品用途,則以下組合物1的態樣作為例示性實例。
組合物1:取虎乳靈芝菌絲體活性物質凍乾粉(20wt%)與作為潤滑劑的硬脂酸鎂(8wt%)、作為防腐劑的二氧化矽(7wt%)充分混合,並溶於純水(65wt%)中,存放於4℃備用。前述wt%係指各成分佔組合物總重之比例。
本發明的虎乳靈芝菌絲體活性物質若以液體劑型應用於醫藥用途,則以下組合物2的態樣作為例示性實例。
組合物2:取蟬花菌絲體活性物質凍乾粉(20wt%)與作為甜味劑的蔗糖素(8wt%)、作為潤滑劑的阿拉伯膠(7wt%)、作為賦型劑的蔗糖(10wt%)充分混合,並溶於純水(55wt%)中,存放於4℃備用。前述wt%係指各成分佔組合物總重之比例。
雖然本發明已用實施例揭露如上,然其並非用以限制本發明。本領域之通常知識者,於參酌以上教示後,當能對上述實施例的內容進行適當修改,而仍然能達到本案所主張之功效。因此,本發明的保護範圍應以其後所附之申請專利範圍為準。
TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心2018/12/24 BCRC930202
Claims (6)
- 一種虎乳靈芝菌絲體活性物質的用途,其係用於製備預防及/或改善急性肺損傷之組合物;該虎乳靈芝菌絲體活性物質的製備方法包括下列步驟:(a)取一虎乳靈芝菌絲體(Lignosus rhinocerus mycelia)於平板培養基上,於15至30℃之溫度下培養1至2周;(b)將步驟(a)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種至一燒瓶內,於15至30℃、pH 2至6之環境培養3至14天;(c)將步驟(b)培養後之虎乳靈芝菌絲體接種於一發酵槽內,於15至30℃、pH 2至6之環境下攪拌培養3至21天,形成含有該虎乳靈芝菌絲體活性物質之一虎乳靈芝菌絲體發酵液;(d)將該虎乳靈芝菌絲體發酵液冷凍乾燥後磨粉,形成含有該虎乳靈芝菌絲體活性物質之一虎乳靈芝菌絲體凍乾粉;(e)將該虎乳靈芝菌絲體凍乾粉以至少一溶劑萃取,形成含有該虎乳靈芝菌絲體活性物質之一虎乳靈芝菌絲體萃取液;以及(f)將該虎乳靈芝菌絲體萃取液乾燥,以獲得該虎乳靈芝菌絲體活性物質。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中該組合物為醫藥組合物或食品添加物。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中步驟(e)的該溶劑為水,且該虎乳靈芝菌絲體活性物質的有效濃度大於1mg/ml。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中步驟(e)的該溶劑為乙醇,且該虎乳靈芝菌絲體活性物質的有效濃度大於25μg/ml。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中步驟(b)之燒瓶培養為震盪培養,且轉速為110至130rpm。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途,其中步驟(c)中該發酵槽進一步通入一氣體,該氣體包括空氣、氧氣、二氧化碳、氦氣或其組合,該發酵槽 的槽壓為0.5至1.0kg/cm2且通氣速率為0.01至1.5VVM。
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2019
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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期刊 Neeranjini Nallathamby,et al. "Bioactive Activities of Tiger Milk Mushroom Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden", Front. Pharmacol., volume 8, article 998, 1~15, 15 January 2018. * |
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