TWI774111B - 一種製備單核球衍生的訊息細胞混合物的方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
在含有缺血小板血漿的細胞培養基中培養膚色血球層並收集培養後的該膚色血球層和培養後的該細胞培養基來製備一單核球衍生的訊息細胞混合物。該單核球衍生的訊息細胞混合物包含顆粒性白血球、淋巴球，纖維球和單核球，其中高比例的單核球是CD16陽性單核球。該單核球衍生的訊息細胞混合物用於改善一個體的肝功能指數。
Description
本發明關於一種以含有缺血小板血漿(platelet-poor-plasma)的細胞培養基來培養膚色血球層(buffy coats)並且收集培養後的膚色血球層和培養後的細胞培養基作為製備單核球衍生的訊息細胞混合物的方法。本發明另關於所述單核球衍生的訊息細胞混合物用於一需要肝功能指數改善個體的肝功能指數改良。
肝癌是癌症死亡的第二主要原因(佔癌症死亡總數的8.2%)，僅次於第一主要原因的肺癌(18.2%)。在2018年診斷出有超過84萬新病例，是全球男女合併第七高最常發生的癌症。根據世界癌症研究基金會(World Cancer Research Fund)2019年研究報告，肝癌發病率最高的前10名國家是蒙古，其次是埃及、甘比亞、越南、寮國、柬埔寨、幾內亞、泰國、中國和南韓。
幾乎所有的肝癌或肝細胞癌(hepatocellular carcinoma)都發生在已患有慢性肝病的人身上，而慢性肝炎代表了癌變過程的早期階段。通常，慢性發炎與持續的細胞損傷和連續的再生有關，其最終可能導致纖維化、肝硬化和腫瘤形成。
非類固醇抗發炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)是基於細胞因子的免疫療法，以及間質幹細胞被廣泛的研究且在體外治療或預防肝癌上顯示出有益功效。
人類循環單核球(monocytes)由一組異源族群(heterogeneous population)組成，其基於CD14和CD16抗原表現可分為兩個主要子群。第一群是CD14+CD16-典型單核球(classical monocyte)，佔正常條件下總循環單核球的80-95%，第二群是CD14±CD16+非典型單核球(nonclassical monocytes)，約佔5-20%。循環單核球從骨髓中動員並募集到發炎的位置去執行其各自的促進發炎或幫助組織修復之功能。循環單核球在發炎的位置不斷發展，其中典型單核球可轉變為非典型單核球或針對環境的刺激和發炎訊號進行反應而分化成M1/發炎性巨噬細胞、樹突狀細胞或纖維球。CD16+非典型單核球，號稱巡邏型單核球，能夠主動巡邏血管內皮以將受損的細胞和碎片從血管中清除，並且與傷口癒合和解決發炎相關，同時在受損組織中分化成M2巨噬細胞。
本發明提供一種用於製備單核球衍生的訊息細胞混合物的方法，其包含在一含有缺血小板血漿的細胞培養基中培養膚色血球層；並收集培養後的膚色血球層和培養後的細胞培養基，以得到單核球衍生的訊息細胞(MDSC)混合物。本發明也提供具有高表現量的CD16陽性單核球和CD34陽性纖維球的單核球衍生的訊息細胞混合物的產品。本發明進一步提供一種組合物用於製備一改善一個體中異常肝功能指數之醫藥組合物的用途，其中該組合物包含單核球衍生的訊息細胞混合物。
單核球衍生的訊息細胞(Monocytes Derived Signaling Cells，MDSC)培養方法會導致CD16-和CD16+單核球子群之間的組成變化，也增強了從CD16-單核球的CD34+纖維球的分化。
為方便起見，此處收集了說明書、實施例和所附申請專利範圍中使用的某些術語。除非本文另外定義，否則本公開中採用的科學和技術術語應具有本領域具有通常技藝人員通常理解和使用的含義。另外，除非上下文另外要求，否則應理解單數術語應包括相同的複數形式，而複數術語應包括單數具體而言，如本文和申請專利範圍中所使用的單數形式“一個”和“一種”包括複數形式，除非上下文另外明確指出。
儘管闡述本發明的廣泛範圍的數值範圍和參數是近似值，但是在實施例中所闡述的數值是盡可能精確地被報告出來。但是，任何數值都內涵了某些誤差，這些誤差必定是由各個測試測量中的標準偏差引起的。同樣地，如本文所用，術語“約”通常是指在給定值或範圍的10%、5%、1%或0.5%之內。或者，術語“約”是指當由本領域具有通常技藝人員考慮時在平均值的可接受的標準誤差內。除了在操作/工作實施例中，或者除非另有指明，否則本文所公開的所有數值範圍、數量、值和百分比(例如：材料數量、持續時間、溫度、操作條件和數量比等)均應理解為由術語“約”在所有情況下的改良。因此，除非有相反的指示，否則本公開和所附申請專利範圍中闡述的數值參數是可以根據期望而變化的近似值。至少，每個數值參數至少應該根據報告的有效數字的數量並透過應用一般的捨入技術來解釋。
本發明提供一種製備一單核球衍生的訊息細胞混合物的方
法，包含步驟：(a)離心來自一個體的一周邊血液(peripheral blood)以收集一膚色血球層(buffy coats)和一缺血小板血漿(platelet-poor-plasma)；(b)將該缺血小板血漿與一細胞營養培養基混合以得到一細胞培養基；(c)以該細胞培養基培養該膚色血球層約24-168小時；以及(d)收集從該步驟(c)培養後的該膚色血球層和培養後的細胞培養基以獲得該單核球衍生的訊息細胞(MDSC)混合物。
在一具體實施例中，該個體為動物，較佳為一哺乳動物，更佳為人類。在一較佳具體實施例中，該個體沒有遭受急性病毒、細菌或真菌的感染。在一更佳具體實施例中，該個體的白血球計數(leukocytes count)約為0.5-30×109個有核細胞/公升。在另一具體實施例中，該個體的白血球計數約為1.8-20×109個有核細胞/公升。
在另一具體實施例中，該步驟(a)進一步分為步驟(a1)和步驟(a2)，其中該步驟(a1)包含離心該周邊血液以分離富含血小板和白血球的血漿層以及紅血球層(erythrocytes layer)，並且收集該富含血小板和白血球的血漿層；以及在該步驟(a1)之後進行的步驟(a2)包含離心該富含血小板和該白血球的血漿層以獲得該膚色血球層和該缺血小板血漿。
如本文所用，術語「細胞營養培養基(cell nutrients medium)」通常是指用於培養活細胞的任何物質或製劑。任何適合於體外培養單核細胞的培養基都是合適的。「細胞培養(cell culture)」是指細胞在體外的生長；儘管細胞增生，但增生的細胞本身並不組織成一個組織。然而，進一步將單核球衍生的訊息細胞混合物用於人類患者的特定情況下，該細胞營養培養基較佳使用類似於RPMI 1640培養基。在一具體實施例中，該細胞營養
培養基包含RPMI 1640培養基的成分。在一較佳具體實施例中，該細胞營養培養基的成分包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉(sodium di-H phosphate)、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀(potassium acetate)、氯化鈉和一氧化二氫(dihydrogen monoxide)。
在一具體實施例中，該缺血小板血漿與該細胞營養培養基的體積比率為10：1至1：1。在一較佳具體實施例中，該缺血小板血漿與該細胞營養培養基的體積比率為5：1至1：1。在一更佳具體實施例中，該缺血小板血漿與該細胞營養培養基的體積比率為2：1至1：1。在另一具體實施例中，該缺血小板血漿與該細胞營養培養基的體積比率為2：1。
在另一具體實施例中，該膚色血球層的細胞密度的範圍約為2.8-100×109個有核細胞/公升。在一較佳具體實施例中，該膚色血球層的細胞密度的範圍約為5.6-68×109個有核細胞/公升。在一更佳具體實施例中，該膚色血球層中的細胞密度的範圍約為每9.6-36×109個有核細胞/公升。
在一具體實施例中，其中該膚色血球層包含單核球(monocytes)、纖維球(fibrocytes)、淋巴球(lymphocytes)和顆粒性白血球(granulocytes)。在一較佳具體實施例中，該膚色血球層的細胞比率為約1-14%的單核球、約0.1-5%的纖維球、約20-80%的淋巴球和約10-70%的顆粒性白血球。
該膚色血球層和該細胞培養基在37℃和5%CO2下孵育24-168小時，然後於孵育後進行收集而成為該單核球衍生的訊息細胞混合物。因此，該單核球衍生的訊息細胞混合物的成分包含孵育過後的該膚色血球層和該細胞培養基。在一具體實施例中，在該細胞培養基中培養該膚
色血球層的時間約為24-120小時。在一較佳具體實施例中，在該細胞培養基中培養該膚色血球層的時間約為48-96小時。在一更佳具體實施例中，在該細胞培養基中培養該膚色血球的時間約為96小時。
在本發明中，該單核球衍生的訊息細胞為白血球的混合物，其由典型(classical)、中間型(intermediate)、非典型(non-classical)單核球(monocytes)和纖維球(fibrocytes)所組成來做為主要的活性成分。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.35-10×109個有核細胞/公升。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.7-6.8×109個有核細胞/公升。在一更佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為1.2-3.6×109個有核細胞/公升。
本發明的該單核球衍生的訊息細胞混合物可進一步透過移除該單核球衍生的訊息細胞混合物的上清液進行濃縮或是以0.9%食鹽水來稀釋以調整細胞密度。在另一具體實施例中，用於製備該單核球衍生的訊息細胞混合物的該方法中進一步包含在步驟(d)之後的步驟(e)，其用於透過移除該單核球衍生的訊息細胞混合物的上清液或以食鹽水稀釋來調整該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含顆粒性白血球、淋巴球、纖維球和單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含約25-80%的顆粒性白血球、約15-70%的淋巴球、約0.3-15%的纖維球和約0.5-15%的單核球。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含約0.3-15%的
CD34+纖維球。當將該膚色血球層在該細胞培養基中培養約96(±12)小時，則該單核球衍生的訊息細胞混合物中的該纖維球的細胞比率約為2-6%。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含約2-6%的CD34+纖維球。
在另一具體實施例中，該單核球中的細胞比率包含約1-25%的CD16-單核球和約75-99%的CD16+單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球的細胞比率包含約2-7%的CD16-單核球和約93-98%的CD16+單核球。
在單核球衍生的訊息細胞培養期間，該膚色血球層內的細胞會分泌各種細胞因子。在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞因子包含：血管生成素(angiogenin)、表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)、瘦素(leptin)、血小板衍生的生長因子BB(platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB)、在活化時調節正常T細胞表現和分泌的因子(Regulated on Activation,Normal T Cell Expressed and Secreted，RANTE)、30kDa的脂肪細胞補體相關蛋白(adipocyte complement-related protein of 30kDa，Acrp 30)、介白素6受體(interleukin-6 receptor，IL-6 R)、金屬蛋白酶的組織抑製劑2(tissue inhibitor of metalloproteinases 2，TIMP-2)、膜支架蛋白a(membrane scaffold protein-a，MSP-a)、單核球趨化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)、LIGHT(已知為腫瘤壞死因子超級家族成員14(tumor necrosis factor superfamily member 14，TNFSF14))、基質細胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1，SDF-1)、介白素8(IL-8)、血小板生成素
(thrombopoietin，TPO)、血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)、介白素10(IL-10)、類胰島素生長因子1(insulin-like growth factor-1，IGF-1)、轉化生長因子β(transforming growth factor-beta，TGF-β)、嗜中性球活化胜肽2(neutrophil activating peptide2，NAP-2)、幹細胞因子(stem cell factor，SCF)、細胞間粘附分子1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)和尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化劑受體(urokinase-type plasminogen activator receptor，uPAR)。
在一具體實施例中，用於製備該單核球衍生的訊息細胞混合物的方法進一步包含在步驟(d)之後的步驟(f)，其用於移除該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞以獲得一單核球衍生的訊息細胞條件培養液(MDSC conditioned medium)。因此，該單核球衍生的訊息細胞條件培養液不包含任何細胞。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞條件培養液包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞條件培養液包含但不限於angiogenin、EGF、leptin、PDGF-BB、RANTE、Acrp 30、IL-6R、TIMP-2、MSP-a、MCP-1、LIGHT、SDF-1、IL-8、TPO、VEGF、BDNF、IL-10、IGF-1、TGF-b、NAP-2、SCF、ICAM-1和uPAR。
本發明還提供一種單核球衍生的訊息細胞混合物的產品，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含25-80%的顆粒性白血球、15-70%的淋巴球、0.3-15%的纖維球和0.5-15%的單核球，其中該單核
球的細胞比率包含75-99%CD16+單核球。透過培養膚色血球層的方法以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物，其包含步驟：(a)離心來自一個體的一周邊血液以收集一膚色血球層和一缺血小板血漿；(b)將該缺血小板血漿與一細胞營養培養基混合以得到一細胞培養基；(c)以該細胞培養基培養該膚色血球層約24-168小時；以及(d)收集從該步驟(c)培養後的該膚色血球層和培養後的該細胞培養基以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物。
在一具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在0.5-30×109個有核細胞/公升之間的人類。在一較佳具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在1.8-20×109個有核細胞/公升之間的人類。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.35-10×109個有核細胞/公升。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.7-6.8×109個有核細胞/公升。在一更佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為1.2-3.6×109個有核細胞/公升。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含顆粒性白血球、淋巴球、纖維球以及單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含約25-80%的顆粒性白血球、約15-70%的淋巴球、約0.3-15%的纖維球和約0.5-15%的單核球。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含0.3-15%CD34+纖維球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含2-6%CD34+纖維球。
在另一具體實施例中，該單核球的細胞比率包含約1-25%的CD16-單核球和約75-99%的CD16+單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球的細胞比率包含約2-7%的CD16-單核白血球和約93-98%的CD16+單核球。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的成分包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含但不限於angiogenin、EGF、leptin、PDGF-BB、RANTE、Acrp 30、IL-6 R、TIMP-2、MSP-a、MCP-1、LIGHT、SDF-1、IL-8、TPO、VEGF、BDNF、IL-10、IGF-1、TGF-b、NAP-2、SCF、ICAM-1和uPAR。
本發明也提供一包含一細胞營養培養基和一血漿的組合物。
在一具體實施例中，該細胞營養培養基包含RPMI 1640培養基的成分。在一較佳具體實施例中，該細胞營養培養基的成分包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫。
在另一具體實施例中，該血漿為一缺血小板血漿。在一具體實施例中，該血漿來自一個體。在一較佳具體實施例中，該個體為人類。在一較佳具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在0.5-30×109個有核細胞/公升之間的人類。在另一具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在1.8-20×109個有核細胞/公升之間的人類。
本發明進一步提供一種用於在一患有異常肝功能指數的個體中改善異常肝功能指數的方法，其包含：施予該患有異常肝功能指數的
個體一有效劑量的含有一單核球衍生的訊息細胞混合物的組合物，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含25-80%的顆粒性白血球、15-70%的淋巴球、0.3-15%的纖維球和0.5-15%的單核球，其中該單核球的細胞比率包含75-99%CD16+單核球。透過培養膚色血球層的方法以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物，其包含步驟：(a)離心來自該患有異常肝功能指數的個體的一周邊血液以收集一膚色血球層和一缺血小板血漿；(b)將該缺血小板血漿與一細胞營養培養基混合以得到一細胞培養基；(c)以該細胞培養基培養該膚色血球層約24-168小時；以及(d)收集從該步驟(c)培養後的該膚色血球層和培養後的該細胞培養基以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物。
在一具體實施例中，該個體為人類。在一較佳具體實施例中，該個體沒有遭受急性病毒、細菌或真菌感染。因此，該單核球衍生的訊息細胞混合物是使用於自身提供周邊血液用於培養的個體中。
在另一具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在0.5-30×109個有核細胞/公升之間的人類。在一較佳具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在1.8-20×109個有核細胞/公升之間的人類。
在整個說明書中所使用的術語“給藥”或“施予”是來描述將根據本發明的該單核球衍生的訊息細胞混合物遞送至受試者的過程。透過本領域已知的多種不同路徑將本發明的單核球衍生的訊息細胞混合物施予給該個體。在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物可以由透過局部的、皮下、靜脈內或關節內給藥。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的給藥方法包含靜脈內給藥。
在特定具體實施例中，該個體有需要改善肝功能指數。「改善肝功能指數」是指將肝功能指數改變至正常範圍。在特定具體實施例中，改善的肝功能指數是透過麩胺酸草乙酸轉胺酶(glutamic oxaloacetic transaminase，GOT)、麩胺酸丙酮酸轉胺酶(glutamic pyruvic transaminase，GPT)、總蛋白(total protein)、白蛋白(albumin)、球蛋白(globulin)、鹼性磷酯酶(alkaline phosphatase，ALP)、總膽紅素(total bilirubin)、丙麩胺酸轉移酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)、三酸甘油脂(triglyceride)和膽固醇(cholesterol)等數值的降低來測量。在另一具體實施例中，該肝功能指數包含GOT、GPT、總蛋白、白蛋白、球蛋白、ALP、總膽紅素、GGT、三酸甘油脂和膽固醇。在一較佳具體實施例中，該肝功能指數包含GOT、GPT、總蛋白、白蛋白、ALP、GGT、三酸甘油脂和膽固醇。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.35-10×109個有核細胞/公升。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.7-6.8×109個有核細胞/公升。在一更佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為1.2-3.6×109個有核細胞/公升。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含顆粒性白血球、淋巴球、纖維球和單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含約0.5-15%的單核球。在另一具體實施例中，該MDSC混合物的細胞比率包含約0.3-15%的CD34+纖維球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含約2-6%的CD34+纖維球。
在另一具體實施例中，該單核白血球的細胞比率包含約1-25%的CD16-單核球和約75-99%的CD16+單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球的細胞比率包含約2-7%的CD16-單核球和約93-98%的CD16+單核球。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的成分包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含但不限於angiogenin、EGF、leptin、PDGF-BB、RANTE、Acrp 30、IL-6 R、TIMP-2、MSP-a、MCP-1、LIGHT、SDF-1、IL-8、MSP-a、TPO、VEGF、BDNF、IL-10、IGF-1、TGF-b、NAP-2、SCF、ICAM-1和uPAR。
本發明還提供一組合物用於製備一用於改善異常肝功能指數的醫藥組合物的用途，其中該組合物包含一單核球衍生的訊息細胞混合物，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含25-80%的顆粒性白血球、15-70%的淋巴球、0.3-15%的纖維球和約0.5-15%的單核球，其中該單核球的細胞比率包含75-99%CD16+單核球。透過培養膚色血球層的方法以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物，其包含步驟：(a)離心來自一患有異常肝功能指數的個體的一周邊血液以收集一膚色血球層和一缺血小板血漿；(b)將該缺血小板血漿與一細胞營養培養基混合以得到一細胞培養基；(c)以該細胞培養基培養該膚色血球層約24-168小時；以及(d)收集從該步驟(c)培養後的該膚色血球層和培養後的該細胞培養基以獲得該單核球衍生的訊息細胞混合物。
在一具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在0.5-30×109個有核細胞/公升之間的人類。在一較佳具體實施例中，該個體為一具有白血球計數約在1.8-20×109個有核細胞/公升之間的人類。
在一具體實施例中，該醫藥組合物的給藥方法包含靜脈內給藥。
在另一具體實施例中，該肝功能指數包含GOT、GPT、總蛋白、白蛋白、球蛋白、ALP、總膽紅素、GGT、三酸甘油脂和膽固醇。在一較佳具體實施例中，該肝功能指數包含GOT、GPT、總蛋白、白蛋白、ALP、GGT、三酸甘油脂和膽固醇。本發明的該單核球衍生的訊息細胞混合物可以降低GOP、GPT和GGT的數值以改善異常肝功能指數。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.35-10×109個有核細胞/公升。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為0.7-6.8×109個有核細胞/公升。在一更佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍約為1.2-3.6×109個有核細胞/公升。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含顆粒性白血球、淋巴球、纖維球和單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞比率包含約25-80%的顆粒性白血球、約15-70%的淋巴性球、約0.3-15%的纖維球和約0.5-15%的單核球。在另一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含約0.3-15%的CD34+纖維球。在一較佳具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含約2-6.0%的CD34+纖維球。
在另一具體實施例中，該單核球的細胞比率包含約1-25%的CD16-單核球和約75-99%的CD16+單核球。在一較佳具體實施例中，該單核球的細胞比例包含約2-7%的CD16-單核球和約93-98%的CD16+單核球。
在一具體實施例中，該單核球衍生的訊息細胞混合物包含但不限於胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫、angiogenin、EGF、leptin、PDGF-BB、RANTE、Acrp 30、IL-6 R、TIMP-2、MSP-a、MCP-1、LIGHT、SDF-1、IL-8、TPO、VEGF、BDNF、IL-10、IGF-1、TGF-b、NAP-2、SCF、ICAM-1和uPAR。
圖1顯示單核球池(monocytes pool)組成中CD16-和CD16+單核球的比率。透過流式細胞儀在第0天(D0)、第2天(D2)和第4天(D4)測量經單核球衍生的訊息細胞(MDSC)處理的膚色血球層中CD16抗原的表現。
圖2顯示非紅血球中CD34+纖維球的數量，以及用單核球衍生的訊息細胞(MDSC)體外培養處理從第0天(D0)、第2天(D2)到第4天(D4)的數量變化。
本發明可以用許多不同的形式實現，並且不應被解釋為限於在此闡述的實施例。所描述的實施例不限於申請專利範圍中所描述的本發明的範圍。
材料和方法：
周邊血液收集
透過臨床實驗室的全血球計數(complete blood count，CBC)測試所測得的白血球計數在1.8-20×109個有核細胞/公升之間且沒有急性的病毒、細菌或真菌感染，如：人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、梅毒(syphilis)和活化性B型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)或敗血症(sepsis)的個體接受以下程序。採用嚴格的無菌技術進行標準周邊血液抽取，以避免皮膚上生物體汙染培養物樣本，並使用16-18號針頭規格避免血液樣本溶血。使用三聯血袋收集周邊血液，在初級血袋中與每毫升0.14(ml)抗凝劑混合，並在實驗室處理之前儲存在4-6℃中。
實驗室操作
(1)膚色血球層分離
透過使用冷藏落地式離心機(Sorvall XFR，Thermo Fisher)並遵循血庫流程(blood banking protocol)以梯度離心將膚色血球層(buffy coats)從抗凝的周邊血液中分離出來。進行兩次旋轉以獲得缺血小板血漿(platelet-poor-plasma)和膚色血球層。透過1800×g的速度離心3-5分鐘進行第一次離心，以將全血分離成一富含血小板和白血球的血漿層(platelets and leukocytes rich plasma layer)以及一紅血球層(erythrocytes layer)。透過肉眼觀察到橙黃色來鑑定富含血小板和白血球的血漿層，並使用成分提取器(component extractor)將其轉移到第一個衛星袋(satellite bag)中。然後將血小板和白血球層以2500×g的速度旋轉8-10分鐘以分離出膚色血球層和缺血小板血漿層。透過肉眼觀察淡黃色識別出缺血小板血漿層，並將其轉移到第二個衛星袋中，用於培養基的製備。膚色血球層則保留在第一個衛星袋中，用於細胞培養樣本的製備。
(2)培養基的製備
用人類缺血小板血漿和細胞營養液以2：1的比率製備用於製備單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞培養基。該細胞營養液的製備與RPMI(Roswell Park Memorial Institute)1640培養基的配方相似。該細胞營養液的成分包含：胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀(potassium acetate)、氯化鈉和一氧化二氫。從與收集膚色血球層相同來源的樣本的周邊血液透過梯度離心以製備人類缺血小板血漿。
(3)細胞培養樣本的製備
收集的膚色血球層的細胞密度約為2.8-100×109個有核細胞/公升。收集的膚色血球層中的有核細胞包含約1-14%的單核白血球、0.1-5%的纖維球、20-80%的淋巴球和10-70%的顆粒性白血球。透過混合膚色血球層和該細胞培養基來製備細胞培養樣本。將膚色血球層再懸浮於該細胞培養基中以達到細胞密度為1.2-3.6×109個有核細胞/公升。接著，使用自動血液分析儀(automated hematology analyzer)對該細胞培養樣品取樣以進行總有核細胞(total nucleated cell，TNC)計數，並且轉移到高度透氣的細胞培養容器中進行懸浮培養。
(4)孵育
該細胞培養物樣本在採集前會置於37℃與5%CO2培養24-120小時。在採集前後會對該細胞培養樣品本進行取樣，以觀察培養過程中細胞表型和上清液分佈(supernatant profile)的變化。
(5)採集
培養24至120小時後採集該細胞培養樣本。使用機械振動
將細胞從基底上分離，然後將細胞再懸浮至培養上清液中。將與培養上清液(培養後的細胞培養基)混合的培養後的細胞(膚色血球層)一起整合到單核球衍生的訊息細胞最終產品中。
(6)單核球衍生的訊息細胞
單核球衍生的訊息細胞最終產品包含約1.2-3.6×109個有核細胞/公升；25-80%的顆粒性白血球、15-70%的淋巴球、0.3-15%的纖維球和0.5-15%的單核球(單核球子群：1-15%CD16-單核球和75-99%CD16+單核球)。該單核球衍生的訊息細胞最終產品的其他成分包括胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫，其作為賦形劑提供該單核球衍生的訊息細胞最終產品中的細胞營養、張力調節、稀釋劑/穩定劑和pH緩沖劑的功能。
該單核球衍生的訊息細胞最終產品需要4-6℃的儲存條件，以使細胞下降速率保持在每小時0.5-1.0%左右，並且在細胞採集24小時後不應被使用。
生物學研究
在孵育前後對細胞培養樣本進行取樣以進行樣本分析。按照製造商的步驟準則，透過流式細胞儀、自動血液分析儀和細胞因子陣列(cytokine array)來分析細胞的表型、存活率和上清液分佈。
(a)總有核細胞計數
使用自動血液分析儀(Sysmex XN-2000，Sysmex)中直流鞘流檢測(direct current(DC)sheath flow detection)方法和多角度極化散射分離(multi-angle polarized scatter separation，MAPSS)技術來決定總有核
細胞計數以提供初步的總有核細胞計數、白血球(white blood cell，WBC)和有核紅血球(nucleated red blood cell，NRBC)的總數。透過將初步的總有核細胞乘以樣本的總體積來計算出總有核細胞。
(b)流式細胞儀分析
流式細胞儀(FacsCanto II流式細胞儀，BD Bioscience)用於偵測和測量以螢光標記物標記的細胞之分化群(cluster of differentiation，CD)抗原的表現量。
使用單株抗體：抗人類CD45+螢光異硫氰酸鹽(fluorescein isothiocyanat，FITC，BioLegend)、7-胺基放線菌素(7-amino-actinomycin，7-AAD存活率偵測染劑，BioLegend)、抗人類CD14+異藻藍素(allophycocyanine，APC，BioLegend)和抗人類CD16+螢光異硫氰酸鹽(FITC，BioLegend)以流式細胞免疫表型法(flow cytometric immunophenotyping method)對單核球子群進行分析。該單株抗體：抗人類CD45+螢光異硫氰酸鹽(FITC，BioLegend)、7-胺基放線菌素(7-AAD存活率偵測染劑，BioLegend)、抗人類CD14+異藻藍素(APC，BioLegend)和抗人類CD34+螢光異硫氰酸鹽(FITC，BioLegend)抗體則用於循環纖維球的分析。
(c)單核球池組成分析
人類單核白血球被認為是異質族群，根據其CD14和CD16抗原的表現可分為三個子群。這些族群包括CD14+CD16-單核球(稱為典型單核球(classical monocyte))、CD14+CD16+單核白血球(中間型單核球(intermediate monocyte))和CD14-CD16+單核白血球(非典型單核球
(non-classical monocyte))在表型和功能上有所不同。
用流式細胞免疫表型的結果分析單核球子群的組成，並以總有核細胞計數計算每個單核球亞群的絕對數量，然後除以總單核球數來得出單核球亞群的組成。總單核球數取決於總白血球數和總有核細胞計數中單核球的百分比。根據細胞大小、顆粒性和細胞表面上CD14/CD16標記的表現，來確定總白血球族群中單核球的百分比。
在孵育前、孵育48小時和孵育96小時的時間點對樣本進行測量和分析，以觀察整個單核球衍生的訊息細胞於細胞培養期間內單核球子群組成的變化。
(d)纖維球族群分析
循環纖維球是白血球中的亞群，其特徵為使用流式細胞儀分析具有細胞表型CD45+CD34+。纖維球的族群是以圈選出來的單核球族群中以CD34陽性細胞的數量除以存活的CD45陽性細胞的總數來計算。在孵育前、孵育48小時和孵育96小時的時間點對樣本進行測量和分析，以觀察整個MDSC細胞培養期間內纖維球的族群變化。
(e)細胞因子陣列
人類血漿中含有多種細胞因子/趨化因子和生長因子。該單核球衍生的訊息細胞培養法可增強特定類型的細胞因子和生長因子的分泌，例如：IL-10、TGF-β、VEGF和血管生成素等。
依照製造商的步驟準則，使用細胞因子陣列(Human Cytokine Antibody Array 6 & 7，RayBiotech)透過三明治免疫分析法(ELISA)鑑定並測量來自孵育前的樣本和孵育96小時的樣本之單核球衍生的訊息細
胞培養上清液中的人類細胞因子。人類細胞因子陣列試劑盒由一包含一式兩份的總共120種不同的抗細胞因子/趨化因子的抗體之硝酸纖維素膜組成。該120種細胞因子/趨化因子包括：血管生成素(angiopoietin，ANG)、腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)、骨塑型蛋白4(bone morphogenetic protein 4，BMP4)、BMP6、趨化因子細胞因子配體1(chemoattractant cytokine ligand 1，CCL1)、CCL11、CCL13、CCL15、CCL17、CCL18、CCL2、CCL20、CCL22、CCL23、CCL24、CCL26、CCL5、CCL7、CCL8、纖維神經促進激素(cilinary neuronotrophic factor，CNTF)、聚落刺激因子1(colony-stimulating factor 1，CSF1)、CSF2、CX3CL1、CXCL12、CXCL13、CXCL6、CXCL9、表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)、纖維母細胞生長因子6(fibroblast growth factor 6，FGF6)、FGF7、Fms相關受體酪氨酸激酶3配體(Fms related receptor tyrosine kinase 3 ligand，FLT3LG)、膠質細胞源性神經營養因子(glial cell-derived neurotrophic factor，GDNF)、干擾素γ(interferon gamma，IFNγ)、類胰島素生長因子1(insulin-like growth factor 1，IGF1)、類胰島素生長因子結合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein 1，IGFBP1)、IGFBP2、IGFBP4、IL10、IL13、IL15、IL16、IL1A、IL1B、IL1RN、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、KIT配體(KIT Ligand，KITLG)、瘦素(leptin，LEP)、脂磷壁酸(lipoteichoic acid，LTA)、神經滋養因子3(neurotrophin 3，NTF3)、血小板衍生生長因子次單元B(platelet derived growth factor subunit B，PDGFβ)、原血小板鹼性蛋白(Pro-platelet basic protein，PPBP)、轉化生長因子β1(transforming growth factor beta 1，TGFβ1)、TGFB3、腫瘤壞死因
子(tumor necrosis factor，TNF)、腫瘤壞死因子超級家族成員14(tumor necrosis factor superfamily member 14，TNFSF14)、脂聯素(adiponectin，ADIPOQ)、刺鼠胜肽基因相關蛋白(agouti-related protein，AGRP)、血管生成素2(angiopoietin 2，ANGPT2)、雙調蛋白(amphiregulin，AREG)、AXL、乙胞素(betacellulin，BTC)、CCL16、CCL19、CCL25、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、聚落刺激因子3(colony stimulating factor 3，CSF3)、CXCL1、CXCL11、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL8、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、FAS、纖維母細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2，FGF2)、FGF4、FGF9、胃內在因子(gastric intrinsic factor，FIGF)、人類生長荷爾蒙(human growth hormone，HGF)、細胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM1)、ICAM3、類胰島素生長因子1受體(insulin like growth factor 1 receptor，IGF1R)、IGFBP3、IGFBP6、IL11、IL12A、IL12B、IL17A、IL1R1、IL1RL1、IL2RA、IL6R、IL6ST、巨噬細胞遷移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)、巨噬細胞刺激1(macrophage stimulating 1，MST1)、神經生長因子(nerve growth factor，NGF)、神經營養因子4(neurotrophin 4，NTF4)、抑癌蛋白M(oncostatin M，OSM)、胎盤成長因子(placenta growth factor，PGF)、纖維蛋白溶酶原活化劑尿激酶受體(plasminogen activator urokinase receptor，PLAUR)、血小板生成素(thrombopoietin，THPO)、金屬蛋白酶的組織抑制劑(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMP1)、TIMP2、腫瘤壞死因子受體超級家族成員10C(tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C，TNFRSF10C)、TNFRSF10D、TNFRSF11B、TNFRSF18、
TNFRSF1A、TNFRSF1B、TNFSF18、血小板生成素(thrombopoietin，TPO)、TYRO3、血管內皮生長因子A(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)以及X-C結構區域趨化因子配體1(X-C Motif Chemokine Ligand 1，XCL1)。
用化學發光檢測系統測量結果並用分析軟體工具(Q-Analyzer，RayBiotech)進行分析。數據呈現為孵育96小時後與培養前的單核球衍生的訊息細胞混合物相比，單核球衍生的訊息細胞混合物中的細胞因子/趨化因子表現的變化。
結果：
(i)以體外單核球衍生的訊息細胞培養處理的單核球池的轉變
在人類周邊血液中，循環單核白血球是一個異質性群體，其由佔總體的80-95%的CD16-單核球和5-20%的CD16+單核球所組成。
根據單核球衍生的訊息細胞培養處理的研究，與第0天(培養前)的樣本相比，以單核球衍生的訊息細胞培養方法處理的膚色血球層於48小時後，單核球池(monocytes pool)的組成發生了顯著變化，並持續觀察到96小時。從第0天、第2天和第4天起，每48小時以流式細胞免疫表型法分析樣本，以了解單核球池組成的轉變。
在第0天樣本中，顯示出CD16-單核球為主要群體，佔總單核球族群的84.40%，CD16+單核球平均佔15.6%，這使得CD16-與CD16+的比率約為17：3。在第2天的分析中，CD16-單核球與CD16+單核球的比例約為1：19，CD16-顯著從84.4%降至4.49%；相對的，CD16+單核球從
15.6%增至95.51%。從第2天到第4天保持相似的比率，由佔總單核球族群5.08%的CD16-單核球和佔總單核球族群94.92%的CD16+單核球所組成，比率為1：19(見圖1)。
(ii)以體外單核球衍生的訊息細胞培養處理誘導單核球CD34抗原表現
衍生自CD16-循環單核球的CD34+纖維球佔周邊血液中循環非紅血球約0.1-1.0%。
根據單核球衍生的訊息細胞培養處理的研究，與第0天(孵育前)的樣本相比，以單核球衍生的訊息細胞培養方法處理的膚色血球層於96小時後，CD34+纖維球的族群顯著增加。從第0天、第2天和第4天起，每48小時以流式細胞表型法分析樣本，以了解體外單核球衍生的訊息細胞培養方法中在非紅血球內的CD34+纖維球的族群變化。
基於細胞免疫表型測試結果，在第0天，以單核球衍生的訊息細胞培養法處理的樣本中CD34+纖維球平均約佔總非紅血球的0.75%。在第2天，CD34+纖維球的族群增加至1.05%，大約增加0.3%的族群變化。與第0天相比，在第4天觀察到CD34+纖維球的族群增加了六倍，CD34+纖維球的族群從第0天的0.75%增加到第4天的4.55%(見圖2)。
(iii)以單核球衍生的訊息細胞培養法處理的膚色血球層的細胞因子分佈
使用共有120種不同類型的人類細胞因子(包括趨化因子和生長因子)的陣列試劑來分析單核球衍生的訊息細胞處理的膚色血球層培養物的細胞因子分佈。在第0天(孵育前)和第4天(孵育後)分析樣本。
根據測試結果，22種細胞因子在細胞因子陣列圖像上顯示出具有可見墨點的高量表現。高量表現的細胞因子包括血管生成素(angiogenin)、EGF、NAP-2、瘦素(leptin)、PDGF-BB、RANTE、Acrp 30、IL-6R、TIMP-2和MSP-a等。
根據分析結果，在第0天(D0)和第4天(D4)之間，有8種細胞因子顯示出顯著增加；與第0天相比，第4天的細胞因子的程度超過100%的增加，包括MCP-1、TARC、IL-8、MSP-a、TECK、TPO、VEGF和VEGF-D(見表1)。
案例研究1. 肝功能指數改善
在驗證單核球衍生的訊息細胞改善肝功能指數的治療概念時，對透過標準靜脈內(intravenous，IV)輸注單劑量單核球衍生的訊息細胞細胞產品所治療的臨床案例進行了回顧，並用以下內容來呈現。在單核球衍生的訊息細胞治療前後監控整體肝功能和脂質分佈以評估治療的安全性和有效性。該肝功能指數包括麩胺酸草乙酸轉胺酶(GOT)、麩胺酸丙酮酸轉胺酶(GPT)、總蛋白(total protein)、白蛋白(albumin)、球蛋白(alkaline)、鹼性磷酯酶(ALP)、總膽紅素、丙麩胺酸轉移酶(GGT)、三酸甘油脂和膽固醇。
對有GOT及/或GPT異常的非病毒性肝炎患者的4個案例進行研究，以驗證單核球衍生的訊息細胞的肝功能改善功效。案例1顯示在1.5個月內GPT降低了23.81%、GGT降低了32.65%，膽固醇水平降低了23.68%。在治療後的期間內沒有飲食限制和運動的調整。在案例2中，在3.5個月內GOT和GPT分別下降了21.74%和29.73%。在案例3中，在15天內GOP、GPT和GGT分別下降了37.14%、17.86%和36%。案例4顯示GOT和GPT均顯著改善，在六個月內下降了60%以上。基於這四個案例的治療結果，異常肝功能指數(包括GOT、GPT、總蛋白、白蛋白，ALP、GGT、三酸甘油酯和膽固醇)的降低暗指了單核球衍生的訊息細胞的治療功效。
案例1. 年齡29歲，男性，主訴：食物過敏伴隨皮膚過敏，治療日期：17-01-2019
案例2. 62歲，男性，主訴：代謝性疾病，治療日期：02-22-2019
案例3. 31歲，女性，主訴：月經不調，治療日期：29-06-2019
案例4. 28歲，男性，主訴：慢性疲勞，治療日期：29-03-2019
應理解在具體實施例的以上描述僅透過示例的方式給出說明並且本領域具有通常技藝人員可以做出各種修改。上述的說明書、實施例和數據提供了對本發明的示例性具體實施例之結構和使用的完整描述。儘管以上已經以某種程度的特殊性或參考一個或多個單獨的具體實施例描述了本發明的各種具體實施例，但是本領域具有通常技藝人員可以在不脫離本發明的精神或範圍的情況下對所公開的具體實施例進行多種改變。
Claims (22)
- 一種製備一單核球衍生的訊息細胞混合物的方法，其包含步驟：(a)離心來自一個體的一周邊血液以收集一膚色血球層(buffy coats)和一缺血小板血漿(platelet-poor-plasma)；(b)將該缺血小板血漿與一細胞營養培養基混合以得到一細胞培養基；(c)以該細胞培養基培養該膚色血球層24-168小時；以及(d)收集從該步驟(c)培養後的該膚色血球層和培養後的該細胞培養基以獲得該單核球衍生的訊息細胞(monocytes derived signaling cells，MDSC)混合物。
- 如請求項1所述之方法，其中該個體為人類。
- 如請求項1所述之方法，其中該個體的白血球計數為0.5-30×109個有核細胞/公升之間。
- 如請求項1所述之方法，其中該細胞營養培養基的成分包含胺基酸、葡萄糖、磷酸二氫鈉、氯化鈣、氯化鎂、乙酸鉀、氯化鈉和一氧化二氫。
- 如請求項1所述之方法，其中該缺血小板血漿與該細胞營養培養基的體積比率為10：1至1：1。
- 如請求項1所述之方法，其中該膚色血球層的細胞密度的範圍為2.8-100×109個有核細胞/公升。
- 如請求項1所述之方法，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍為0.35-10×109個有核細胞/公升。
- 如請求項1所述之方法，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含0.5-15%的單核球。
- 如請求項8所述之方法，其中該單核球的細胞比率包含75-99% CD16+單核球。
- 如請求項1所述之方法，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含0.3-15% CD34+纖維球。
- 如請求項1所述之方法，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含2-6% CD34+纖維球。
- 如請求項1所述之方法，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物包含血管生成素(angiogenin)、表皮生長因子(EGF)、瘦素(leptin)、血小板衍生的生長因子-BB(PDGF-BB)、RANTE、Acrp 30、介白素6受體(IL-6 R)、金屬蛋白酶的組織抑製劑2(TIMP-2)、膜支架蛋白a(MSP-a)、單核球趨化蛋白1(MCP-1)、LIGHT、基質細胞衍生因子1(SDF-1)、介白素8(IL-8)、血小板生成素(TPO)、血管內皮生長因子(VEGF)、腦源性神經營養因子(BDNF)、介白素10(IL-10)、類胰島素生長因子1(IGF-1)、轉化生長因子b(TGF-b)、嗜中性球活化胜肽2(NAP-2)、幹細胞因子(SCF)、細胞間粘附分子1(ICAM-1)和尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化劑受體(uPAR)。
- 一種單核球衍生的訊息細胞混合物的產品，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物是由請求項1的方法製備而得。
- 如請求項13項所述之產品，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含25-80%的顆粒性白血球、15-70%的淋巴球、0.3-15%的纖維球和0.5-15%的單核球，其中該單核球的細胞比率包含75-99% CD16+單核球。
- 如請求項13項所述之產品，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍為0.35-10×109個有核細胞/公升。
- 如請求項14所述之產品，其中在該單核球衍生的訊息細胞混合物中的該纖維球包含CD34+纖維球。
- 一種組合物用於製備一改善異常肝功能指數的醫藥組 合物的用途，其中該組合物包含一單核球衍生的訊息細胞混合物，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物是由請求項1的方法製備而得。
- 如請求項17所述之用途，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞比率包含25-80%顆粒性白血球、15-70%淋巴球、0.3-15%纖維球和0.5-15%單核球，其中該單核球的細胞比率包含75-99% CD16+單核球。
- 如請求項17所述之用途，其中該肝功能指數包括麩胺酸草乙酸轉胺酶(glutamic oxaloacetic transaminase，GOT)、麩胺酸丙酮酸轉胺酶(glutamic pyruvic transaminase，GPT)、總蛋白、白蛋白、球蛋白、鹼性磷酯酶(alkaline phosphatase，ALP)、總膽紅素、丙麩胺酸轉移酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)、三酸甘油脂以及膽固醇。
- 如請求項17所述之用途，其中該醫藥組合物的給藥方法包含靜脈內給藥。
- 如請求項17所述之用途，其中該單核球衍生的訊息細胞混合物的細胞密度的範圍為0.35-10×109個有核細胞/公升。
- 如請求項18所述之用途，其中在該單核球衍生的訊息細胞混合物中的該纖維球包含CD34+纖維球。
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Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103805561A (zh) * | 2012-11-13 | 2014-05-21 | 基立福有限公司 | 用于人间充质干细胞的培养基 |
| CN107771079A (zh) * | 2015-07-02 | 2018-03-06 | 阿瑟雷克斯股份有限公司 | 用于制备富集的生物流体的方法和装置 |
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2020
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103805561A (zh) * | 2012-11-13 | 2014-05-21 | 基立福有限公司 | 用于人间充质干细胞的培养基 |
| CN107771079A (zh) * | 2015-07-02 | 2018-03-06 | 阿瑟雷克斯股份有限公司 | 用于制备富集的生物流体的方法和装置 |
| US10207044B2 (en) * | 2015-07-29 | 2019-02-19 | Fenwal, Inc. | Five-port blood separation chamber and methods of using the same |
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