TWI736452B - 安非他酮和醫藥組合物在製備治療癌症之藥物的用途及抑制腫瘤細胞遷移的方法 - Google Patents

Abstract

化合物安非他酮在製備治療癌症之藥物的用途，其中此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(CHRNA9)表現。一種醫藥組合物在製備治療癌症之藥物的用途，其中此醫藥組合物包含有效劑量的安非他酮和醫藥學上可接受的賦形劑，且此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9表現。一種抑制腫瘤細胞之遷移的方法，此腫瘤細胞過度表現神經性乙醯膽鹼受體次單元α9，此方法包含：施加一有效劑量的安非他酮於此腫瘤細胞。

Description

安非他酮和醫藥組合物在製備治療癌症 之藥物的用途及抑制腫瘤細胞遷移的方法

本揭示內容係關於以安非他酮作為疾病的治療藥物。

癌症的標靶治療是針對癌症細胞之特定的分子標記來做攻擊和治療；不同於化學治療，標靶治療對於正常細胞的影響較少，病人的副作用及痛苦也較輕。然而，許多癌症尚未開發出適合的標靶藥物。

先前的研究顯示了神經性乙醯膽鹼受體(neuronal acetylcholine receptor，nAChRs)，例如：神經性乙醯膽鹼受體次單元α7(α7-nAChR，或稱CHRNA7)、或神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(α9-nAChR，或稱CHRNA9)，在吸菸所誘發的癌症形 成中，這些蛋白質的表現扮演了決定性的角色。因此，在腫瘤細胞中所偵測到的神經性乙醯膽鹼受體可能可做為臨床應用上之治療的標靶。

安非他酮(bupropion)是一種已知的抗憂鬱藥，並可用於治療其他病症，例如：尼古丁成癮、肥胖症、帕金森病、以及季節性情感障礙等。先前的研究顯示安非他酮可為一些神經性乙醯膽鹼受體的拮抗劑。但是，目前關於安非他酮對於表現這些神經性乙醯膽鹼受體之細胞的影響，尚不明暸。

有鑑於此，本領域極需一種能針對神經性乙醯膽鹼受體而作用的藥物，其可用以開發出藥物，以治療過度表現神經性乙醯膽鹼受體之相關癌症。

本揭示內容提供了一種安非他酮在製備治療癌症之藥物的用途，其中此癌症之腫瘤細胞過度表現神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(CHRNA9)。

本揭示內容亦提供了一種醫藥組合物在製備治療癌症之藥物的用途，其中此醫藥組合物包含有效劑量的安非他酮和醫藥學上可接受的賦形劑，且此癌症之腫瘤細胞過度表現神經性乙醯膽鹼受體次單元α9。

本揭示內容亦提供了一種抑制腫瘤細胞之遷移的方法，此腫瘤細胞過度表現神經性乙醯膽鹼受體次單元α9，此方法包含：施加一有效劑量的安非他酮於此腫瘤細 胞。

第1A圖為依據實驗例1之西方墨點圖。

第1B圖為依據實驗例1之免疫沉澱實驗之西方墨點圖。

第1C圖為依據實驗例1之細胞螢光影像圖。

第1D圖為依據實驗例1之細胞螢光影像圖。

第2A圖為依據實驗例2之西方墨點圖。

第2B圖為依據實驗例2之細胞螢光影像圖。

第2C圖為依據實驗例2之細胞螢光影像圖。

第3圖為依據實驗例3之細胞螢光影像圖。

第4A圖為依據實驗例4，相離螢光素酶互補試驗法的示意圖。

第4B圖為依據實驗例4之西方墨點圖。

第4C圖為根據實驗例4之小鼠以非侵入性體內成像系統(non-invasion in vivo imaging system，IVIS)所照攝之活體螢光影像。

第5A圖繪示尼古丁的分子結構。

第5B圖繪示安非他酮的分子結構。

第5C圖為一局部的蛋白質結構示意圖，繪示在CHRNA9的蛋白質結構中，安非他酮、尼古丁、和CHRNA9中的胺基酸殘基之空間上的相對位置。

第6A圖為根據實驗例6之細胞侵襲試驗，小室之表面的影像圖。

第6B圖為根據實驗例6，第6A圖之量化的細胞數目之長條圖。

第7A圖為根據實驗例7之細胞遷移試驗的細胞影像圖。

第7B圖為根據實驗例7，第7A圖之量化的細胞數目之長條圖。

第7C圖為根據實驗例8之細胞遷移試驗的細胞影像圖。

第7D圖為根據實驗例8，第7C圖之量化的細胞數目之長條圖。

第8A圖為根據實驗例9，以非侵入性體內成像系統(IVIS)所照攝之犧牲後小鼠的肺部螢光影像。

第8B圖為根據實驗例9，第8A圖之量化的光子通量之長條圖。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文將參照附隨圖式來描述本發明之實施方式與具體實施例；但這並非實施或運用本揭示內容具體實施例的唯一形式。以下所揭示的各實施例，在有益的情形下可相互組合或取代，也可在一實施例中附加其他的實施例，而無須進一步的記載或說明。

本文中，術語「治療」意指降低個體經歷癌症症狀之頻率、程度、嚴重性及/或持續時間。「治療」一詞 涵蓋能降低一正受特定疾病或症狀所苦之個體身上，一或多個該特定疾病或症狀相關的病徵或其嚴重程度，或減緩該特定疾病或狀況進程的作為。

「個體」或「患者」(patient)兩名詞在本文中可交替使用，其是指可以本揭示內容之化合物或醫藥組合物治療的動物，包含人類在內。

本文中，術語「有效量(effective amount)」為有效成份足以減少癌症之症狀或病徵的劑量，所述減少癌症之症狀或病徵包括但不限於：疼痛減輕、腫瘤體積縮小、或減少腫瘤細胞的轉移等。其中腫瘤體積可在臨床上以可觸質量(palpable mass)或經由各種醫療影像成像手段測定。

本文中，術語「過度表現」意指在細胞或生物體中，一基因產物的表現量超出正常細胞或正常生物體中的此基因產物的表現量。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供化合物安非他酮在製備治療癌症之藥物的用途，其中此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(CHRNA9)表現。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供一種醫藥組合物在製備治療癌症之藥物的用途，其中此醫藥組合物包含有效劑量的安非他酮和賦形劑，且此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9表現。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供一種抑制腫瘤細胞之遷移的方法，此腫瘤細胞過度表現神經性乙醯 膽鹼受體次單元α9，此方法包含：施加一有效劑量的安非他酮於此腫瘤細胞。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供一種治療癌症的方法，該方法包含施予一有效劑量的安非他酮至一患有癌症的個體，其中此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9表現。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供一種治療方法以治療癌症病患，包含：對癌症病患施予一醫藥組合物，此醫藥組合物包含有效劑量的安非他酮和賦形劑。

根據本揭示內容的一些實施方式，提供化合物安非他酮之用途，用於治療癌症，此癌症之腫瘤細胞具有過度的神經性乙醯膽鹼受體次單元α9表現。

根據一些實施方式，安非他酮在治療癌症之用途中，尼古丁或尼古丁衍生物為此癌症的誘導因子。

在一些實施方式中，安非他酮降低腫瘤細胞的轉移。

根據一些實施方式，安非他酮在治療癌症之用途中，癌症為乳癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肺腺癌、或子宮內膜癌。

根據一些實施方式，安非他酮在治療癌症之用途中，癌症為三陰性乳癌。

根據一些實施方式，包含安非他酮之醫藥組合物為口服劑。

根據一些實施方式，於抑制腫瘤細胞之遷移的 方法中，腫瘤細胞為三陰性乳癌細胞。

根據一些實施方式，於抑制腫瘤細胞之遷移的方法中，此方法施行於體外(in vitro)。

發明人之前的研究顯示尼古丁或尼古丁衍生物會活化神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(CHRNA9)，使得乳房細胞癌化並造成腫瘤生成。但到目前為止，臨床上只有加蘭他敏(Galantamine)是以神經性乙醯膽鹼受體次單元α9為標靶的藥物，作用為治療失智症，尚未有任何用於癌症治療的藥物的標靶蛋白為神經性乙醯膽鹼受體次單元α9。

在一些實施方式中，安非他酮為口服的藥物。本揭示內容之醫藥組合物的口服劑型可以是藥錠、半藥錠、膠囊、或液體(例如：糖漿)劑型。這類劑型包含預定量的活性成分，且可由此領域中熟知的方法來製造。

典型的口服劑型是依照傳統製藥方式，將活性成分與至少一種賦形劑混合製造。賦形劑的選擇視製備形式來決式。

由於口服是較容易使用的方式，又以藥錠和膠囊為最常見的形式。必要的話，還可以標準的溶液或非溶液塗層方式在其外面包覆適當塗層。一般來說，透過將活性成分與液態載體、固態載體、或兩者彼此均勻地混合後，再塑造成適合的形狀來製造。可以在其中加入崩散劑，以幫助其快速溶解；或是加入潤滑劑，以幫助其製造。

根據一些實施方式，安非他酮的劑型可為立即釋放形式、緩釋形式、或是延長釋放形式。

根據一些實施方式，安非他酮的給藥方式為一天一至四次。例如：立即釋放的劑型為一天給藥三次；緩釋的劑型為一天給藥兩次；延長釋放的劑型為一天給藥一次。

安非他酮己知的主要副作用之一是癲癇的發病率，已知這個副作用與安非他酮的劑量正相關。在一些實施方式，患者的每日給藥劑量不超過600毫克。

在一些實施方式中，醫藥組合物所包含的安非他酮的劑量為約25毫克至約600毫克，例如25毫克、50毫克、75毫克、100毫克、125毫克、150毫克、175毫克、200毫克、225毫克、250毫克、275毫克、300毫克、325毫克、350毫克、375毫克、400毫克、425毫克、450毫克、475毫克、500毫克、525毫克、550毫克、575毫克、或600毫克。

為了得知過度表現神經性乙醯膽鹼受體次單元α9之癌症的類型，分析美國癌症基因體圖譜計畫(The Cancer Genome Atlas，TCGA)資料庫中，15種癌症之腫瘤組織的CHRNA9基因表現量，如下表一所示。其中，在所有腫瘤組織中的CHRNA9平均表現量，為所有正常組織的兩倍或者更多，且P值小於0.05時，表示CHRNA9在此癌症類型中，呈現顯著的高表現，例如：乳癌、頭頸部鱗狀細胞癌、肺腺癌、子宮內膜癌。因此，在這些癌症中，神經性乙醯膽鹼受體次單元α9可能可為藥物治療的標的。

表一、比較TCGA資料庫中，CHRNA9於15種癌症中的基因表達量。

因此，本揭示內容的一些實驗例以乳癌之細胞株及模式動物，測試神經性乙醯膽鹼受體次單元α9作為癌症藥物治療之標的。

神經性乙醯膽鹼受體(nAChR)為一些神經傳導物質之細胞膜受器和離子通道。其中，神經性乙醯膽鹼受體次單元α9(CHRNA9)已知與多種吸煙誘導的腫瘤形成相關。例如，發明人的先前研究顯示於276個乳癌樣本中，186(67.3百分比)個樣本有高度表現(平均7.84倍)。然而，與神經性乙醯膽鹼受體次單元α9相互作用的訊息分子和相關的訊息路徑仍待闡明。

發明人以生物資訊的方法分析，初步認為有18個候選蛋白質可能與CHRNA9相互作用，這18個候選蛋白質為：ERBB3、ERBB2、SFN、COPS6、SRC、CSNKID、 ERBB4、INSR、ATXN1、ABCB1、APP、YWHAB、YWHAG、EGFR、HCK、FYN、PLK1、和YWHAH。

以下以一些實驗例，闡述神經性乙醯膽鹼受體次單元α9之機制，以及作為藥物標靶的應用。

於本揭示內容之實驗例中，實驗數據以student’s t-test分析。所有的P值為以雙尾檢定法得出。P值小於0.05以1個星號表示，P值小於0.01以2個星號表示。

實驗例1

為了確認這18個候選蛋白質於人類乳癌細胞中，是否與CHRNA9相互作用，檢視不同類型的乳癌細胞株，利用免疫沉澱(immunoprecipitation，IP)及西方墨點法(Western Blot，WB)檢視。

三陰性乳癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體(estrogen receptor，ER)、黃體素受體(progesterone receptor，PR)呈陰性，同時表皮生長因子受體2(HER2，又稱ERBB2)未呈過度表現的乳癌亞型。

第1A圖為西方墨點圖。所選用的細胞株為2個乳房正常(非惡性)細胞株：MCF-10A和HBL-100；以及6個乳癌細胞株，包括管腔亞型(luminal subtype)：MCF-7和T47D；HER2過度表現亞型(HER2-enriched subtype)：MDA-MB-453和SKBR3；和三陰性乳癌亞型(triple negativesubtype)：MDA-MB-157和MDA-MB-231。第1A圖顯示CHRNA9、5個候選蛋白質(EGFR、ERBB2、ERBB3、FYN、SRC)、ER、以及PR， 在不同的乳癌細胞株中的表現。

第1B圖為免疫沉澱實驗之西方墨點圖，以確認與CHRNA9相互作用的蛋白質。將MDA-MB-231細胞之蛋白裂解物，加入anti-CHRNA9-IgG磁珠，進行沉澱。之後進行西方墨點法檢測沉澱物中的蛋白質，其中GAPDH抗體作為陰性對照。第1B圖顯示18個候選蛋白質中的16個：COPS6、CSNK1D、FYN、ERBB2、ERBB3、SFN、SRC、ERBB4、INSR、ATXN1、ABCB1、APP、YWHAB、YWHAG、EGFR、和HCK，與CNRNA9有結合能力。因此這些蛋白質，有可能與CHRNA9形成複合體。

為了進一步以體外(ex vitro)的方式探討CHRNA9和YWHAG、SFN的作用關係，利用螢光抗體，將MDA-MB-231細胞中的CHRNA9染上Rhodamin(紅色螢光)，以及分別將YWHAG和SFN染上FITC(綠色螢光)。螢光實驗影像合併後黃色表示兩蛋白在同一個位置。進一步使用Förster共振能量轉移(Förster resonance energy transfer，FRET)的技術，觀察CHRNA9和YWHAG、SFN交互作用的強度，當FRET的強度色階越接近黃綠色，表示兩個蛋白質的交互作用強度越強；反之，強度色階呈現越接近藍黑色，表示兩個蛋白質的交互作用越弱，甚至沒有交互作用存在。

第1C圖的上下列顯示兩個MDA-MB-231的細胞，其細胞呈綠色螢光表示YWHAG具有表現，紅色螢光表示CHRNA9具有表現，螢光實驗影像合併後黃色表示兩蛋 白在同一個位置。而黃綠色的Förster共振能量轉移(FRET)活性顯示CHRNA9和YWHAG確實具有交互作用關係。

第1D圖的上下列顯示兩個MDA-MB-231的細胞，其細胞呈綠色螢光表示SFN具有表現，紅色螢光表示CHRNA9具有表現，螢光實驗影像合併後黃色表示兩蛋白在同一個位置。而黃綠色的Förster共振能量轉移(FRET)活性顯示CHRNA9和SFN確實具有交互作用關係。

實驗例2

為了確認CHRNA9是否真的與ERBB2具有交互作用關係，之後進一步檢視乳癌HER2過度表現亞型的細胞株：SKBR3、BT474、AU565、HCC1419、HCC1954，以及三陰性乳癌亞型：MDA-MB-468。第2A圖為西方墨點實驗的結果，顯示CHRNA9以及HER2(包括第2A圖中的p185、HER2、和p95)，在不同的乳癌細胞株中的表現，其中以α-Tubulin作為陽性對照。

為了進一步以體外(ex vitro)的方式探討CHRNA9和ERBB2的作用關係，利用螢光抗體，分別將BT474細胞、從三個HER2過度表現之乳癌亞型的病人檢體的癌細胞、一個三陰性乳癌亞型的病人檢體的癌細胞中的CHRNA9染上Rhodamin(紅色螢光)，以及ERBB2染上FITC(綠色螢光)，並使用Förster共振能量轉移(Förster resonance energy transfer，FRET)的技術，觀察CHRNA9和ERBB2交互作用的強度，當FRET的強度色階 越接近綠色，表示兩個蛋白質的交互作用強度越強，反之，強度色階呈現越接近藍黑色，表示兩個蛋白質的交互作用越弱，甚至沒有交互作用存在。

第2B圖的上下列顯示兩個BT474的細胞，其細胞呈綠色螢光表示HER2具有表現，紅色螢光表示CHRNA9具有表現，螢光實驗合併後黃色表示兩蛋白在同一個位置。而黃綠色的Förster共振能量轉移(FRET)活性顯示CHRNA9和HER2確實具有交互作用關係。

第2C圖顯示乳癌病人的組織，包括三個HER2過度表現之亞型，及一個三陰性亞型。在HER2過度表現之亞型的病人組織，呈現綠色螢光表示HER2具有表現，而三陰性亞型的病人組織則未呈現綠色螢光。呈現紅色螢光表示CHRNA9具有表現，螢光實驗影像合併後黃色表示兩蛋白在同一個位置。而黃綠色的Förster共振能量轉移(FRET)活性顯示CHRNA9和HER2確實具有交互作用關係。

實驗例3

為了進一步以體外(ex vitro)的方式探討CHRNA9和ERBB2的作用關係，建構表現CHRNA9/CFP和ERBB2/YFP融合蛋白的質體，共轉染(co-transfected)至MDA-MB-231細胞。使用的實驗技術為Förster共振能量轉移(Förster resonance energy transfer，FRET)和螢光生命期影像顯微鏡(fluorescence-lifetime imaging microscopy，FLIM)。

為了更進一步闡明，尼古丁暴露後，細胞中的 CHRNA9和ERBB2會分離，使用雙光子螢光生命期影像顯微鏡(two-photon FLIM)，以監測CHRNA9/CFP和ERBB2/YFP這2個融合蛋白之Förster共振能量轉移活性。將表現CHRNA9/CFP融合蛋白和ERBB2/YFP融合蛋白之質體共轉染至MDA-MB-231細胞，兩天後，以10μM尼古丁處理細胞。

第3圖顯示，10μM尼古丁處理細胞前，細胞膜有強的Förster共振能量轉移活性(綠色)，細胞質有弱的Förster共振能量轉移活性(藍色)。尼古丁暴露後，細胞膜上的螢光逐漸轉為藍色，顯示Förster共振能量轉移活性逐漸減弱。

之後以磷酸鹽緩衝溶液(PBS)洗去尼古丁，細胞膜上的螢光逐漸出現綠色螢光，顯示Förster共振能量轉移活性逐漸回復至尼古丁處理前的基態。

實驗例4

以動物模式驗證尼古丁會造成CHRNA9和ERBB2的分離。使用相離螢光素酶互補試驗法(split luciferase complementation assay)，以探討CHRNA9和ERBB2之間的結合和分離。

第4A圖為相離螢光素酶互補試驗法的示意圖。將螢光素酶的靠N端部(Nluc)和靠C端部分(Cluc)分別地與ERBB2和CHRNA9建構成融合蛋白，由於ERBB2和CNRNA9的結合，螢光素酶的蛋白質的兩個部分(亦即Nluc和Cluc)也互相靠近，且正確地組裝並產生活性；因此加入 螢光素(Luciferin)後可以發光。當ERBB2和CHRNA9不再結合時，螢光素酶的靠N端部分和靠C端部分由於相互分離，因此沒有螢光素酶的活性。本揭示內容的一些實驗例為測試尼古丁添加後，螢光素酶有無活性，如果加入螢光素後無法發出螢光，代表尼古丁會導致ERBB2和CHRNA9分離。

第4B圖為轉染表現融合蛋白之質體的細胞的西方墨點圖。以辨識CHRNA9和ERBB2的抗體，分別檢測CHRNA9之融合蛋白和ERBB2之融合蛋白的表現量。第4B圖顯示，CHRNA9/Cluc融合蛋白和ERBB2/Nluc融合蛋白的表現量，與細胞所轉染之質體量相關。

之後以異種移植的動物模式，將表現ERBB2/Nluc融合蛋白和CHRNA9/Cluc融合蛋白之質體，共轉染至MDA-MB-231細胞後，將表現這些融合蛋白的細胞注射至裸鼠的乳腺脂肪墊。之後進行實驗時，以口服的方式，使小鼠接觸尼古丁。於尼古丁暴露前(控制組)和暴露後30分鐘，以非侵入性體內成像系統(IVIS)測量活體螢光影像。第4C圖之控制組影像顯示在腫瘤處，腫瘤細胞表現高的螢光素酶活性。小鼠暴露尼古丁後，腫瘤處的螢光素酶活性明顯地降低，光子通量(photon influx)為控制組之光子通量的26.3百分比；這顯示在此動物模式中，尼古丁明顯地造成CHRNA9/ERBB2複合體的分離。

實驗例5

以上的實驗結果，推知能預防CHRNA9和 ERBB2分離的藥物，可能影響腫瘤細胞之下游的訊息路徑。因此，之後篩選1,543個美國食品藥物管理局(FDA)核准的藥物，以找出能預防CHRNA9和ERBB2分離的藥物。此外，根據蛋白質-藥物間的相互作用，以及從33個神經性乙醯膽鹼受體之蛋白質-配體的結構所得出的保守性鍵結環境，得出安非他酮可能可以預防CHRNA9和ERBB2分離。

第5A圖繪示尼古丁的分子結構。第5B圖繪示安非他酮的分子結構。第5C圖繪示CHRNA9蛋白質之局部的結構，顯示安非他酮(Bupropion)、尼古丁(Nicotine)、和鄰近的胺基酸殘基之空間上的相對位置。安非他酮位於一個異體鍵結位(allosteric binding site)，且安非他酮中的1-(3-氯苯基)丙-1-酮(1-(3-chlorophenyl)propan-1-one)與CHRNA9中所接觸的殘基I140、G141、S142、和D194形成強的凡得瓦力作用。

實驗例6

由於腫瘤的轉移是決定癌症病人存活的重要因素。因此，接下來測試安非他酮是否能做為阻斷劑，減弱尼古丁-誘導的腫瘤轉移作用。

以細胞侵襲試驗，測試安非他酮對於腫瘤侵襲的抑制效應。將MDA-MB-231細胞佈植於不含血清(serum-strved)的培養基中的基質膠侵襲小室(Matrigel invasion chamber)，下方小室的細胞以正常培養基培養。上方小室和下方小室的培養基皆含有0.1μM的安非他酮，或 是皆含有1μM的安非他酮，且細胞以無尼古丁(控制組)或是尼古丁處理。細胞培養48小時後，上方小室以磷酸鹽緩衝溶液清洗，以甲醛固定30分鐘。上方小室的細胞以結晶紫(crystal violet)染色2小時，之後以顯微鏡觀察並拍攝影像。侵襲的腫瘤細胞數目以ImageJ軟體計算。

第6A圖為以結晶紫染色之後，上方小室的影像圖。第6B圖為第6A圖之量化的細胞數目之長條圖。第6A圖和第6B圖顯示0.1μM、和1μM的安非他酮處理皆顯著地抑MDA-MB-231制腫瘤細胞的侵襲。且較低濃度(0.1μM)的安非他酮處理有更為顯著的效果。

實驗例7

以細胞遷移試驗(cell migration assay)，測試安非他酮對於腫瘤細胞遷移的抑制效應。

MDA-MB-231細胞以無尼古丁(控制組)或是以10μM尼古丁處理，分別地加入DMSO、0.1μM的安非他酮、或1μM的安非他酮。於安非他酮添加後12小時，細胞以甲醛固定且以PI(紅色)染色30分鐘，之後拍攝細胞影像。遷移的細胞數目以ImageJ軟體計算。重複此試驗3次。

第7A圖為細胞影像圖，第7B圖為第7A圖之量化的細胞數目之長條圖。第7A圖和第7B圖顯示，0.1μM、和1μM的安非他酮處理皆顯著地抑制MDA-MB-231細胞腫瘤細胞的遷移。

實驗例8

此外，以一HER2過度表現亞型的乳癌細胞 株，MDA-MB-453，測試安非他酮對於腫瘤遷移的抑制效應。實驗方法同上述實驗例7之細胞遷移試驗。

第7C圖為細胞影像圖，第7D圖為第7C圖之量化的細胞數目之長條圖。第7C圖和第7D圖顯示，0.1μM、和1μM的安非他酮處理顯著地抑制MDA-MB-453腫瘤細胞的遷移。

實驗例9

於MDA-MB-231為基礎的自發性肺部轉移動物模式中，測試安非他酮是否能作為尼古丁的阻斷劑。

將帶有冷光報導基因之MDA-MB-231細胞植入重症聯合免疫缺陷(SCID)小鼠。尼古丁處理的方式為於小鼠的飲用水添加尼古丁(10μg/ml)。小鼠接受一週三次的安非他酮的腹腔注射(IP injection)，安非他酮的劑量為100微克/公斤或200微克/公斤。2個月後犧牲小鼠，解剖取出肺臟，以非侵入性體內成像系統(IVIS)拍攝肺部的螢光影像，以量測到的光子通量(photon influx)代表小鼠腫瘤細胞轉移至肺部組織的程度。

第8A圖為小鼠的肺部螢光影像，第8B圖為第8A圖之量化的光子通量之長條圖。

第8A圖及第8B圖顯示以尼古丁處理的小鼠之肺組織中，轉移性腫瘤細胞數目顯著地增加。此外，無尼古丁處理和有尼古丁處理的小鼠接受安非他酮的治療，轉移至肺部的腫瘤細胞皆明顯地減少。這表示安非他酮不僅阻斷來自尼古丁的訊號，也可能抑制其他內生性神經性乙醯膽鹼受 體之拮抗劑的訊息。

三陰性乳癌約佔乳癌的15~20%，為較難治療的癌症類型，它不僅具有較高的轉移及復發機率，據研究統計，復發率高峰期約在治療後的一至三年，且好發於年輕女性(40歲前)，從癌症發現到轉移的速度快且死亡率高。目前臨床上尚無可用之標靶藥物，主要依賴化學及放射線治療，治療策略的選擇明顯較其他類型乳癌少，且具有較差的預後。因此，目前極待開發三陰性乳癌之標靶藥物，及抑制三陰性乳癌復發與轉移的藥物。

由本揭示內容之細胞實驗及動物實驗，證實加入安非他酮之後，三陰性乳癌細胞(如MDA-MB-231)細胞和HER2過度表現亞型乳癌細胞(MDA-MB-453)的遷移或轉移能力顯著下降，且亦有效降低尼古丁誘導之腫瘤細胞的遷移或轉移的效果。因此，安非他酮可為乳癌，例如三陰性乳癌或HER2過度表現亞型乳癌之抗轉移藥物。

本揭示內容之實驗例的結果顯示安非他酮影響轉移相關訊息路徑的基因表現，以及減弱尼古丁所誘導的細胞轉移。因此，安非他酮可為一抗癌藥物，特別是抑制癌症轉移的藥物。

由於安非他酮為一已知具治療用途的化合物，因此對於安非他酮的安全性和副作用有較多的了解。因此，本揭示內容提供了關於癌症治療之一個更方便、有效、且低副作用的治療選擇。

雖然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非 用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (1)

1. 一種安非他酮在製備治療癌症之藥物的用途，其中該癌症為未經尼古丁誘導的乳癌。

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