TWI723000B

TWI723000B - 靈芝免疫調節蛋白於促進神經突生長之新用途

Info

Publication number: TWI723000B
Application number: TW104134419A
Authority: TW
Inventors: 招名威
Original assignee: 蘑法生物科技股份有限公司
Priority date: 2014-10-20
Filing date: 2015-10-20
Publication date: 2021-04-01
Also published as: TW201625286A; US20160115208A1; WO2016062239A1; US9975931B2

Abstract

本發明令人驚訝地發現靈芝(Ganoderma)免疫調節蛋白可促進神經突生長，表明該靈芝免疫調節蛋白可治療及/或預防神經病症。因此，本發明提供用於促進神經突生長之方法，該方法包含將神經元暴露至有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物。本發明亦提供用於治療及/或預防神經病症之方法，該方法包含將有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物投與個體。

Description

靈芝免疫調節蛋白於促進神經突生長之新用途

本發明係關於自靈芝(Ganoderma)衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物促進神經突生長及治療及/或預防神經病症之新用途。具體而言，免疫調節蛋白衍生自小孢子靈芝(Ganoderma microsporum)。

一旦神經迴路網絡因腦損傷或脊髓損傷而損壞且該網絡由此切斷或導致神經細胞死亡，則失去由神經控制的生理功能及/或運動功能且及難以恢復神經迴路。神經突通常與微管束包裝在一起，其生長受神經生長因子(NGF)以及tau蛋白MAP1及MAP2刺激。US 6,207,639提供增強及/或引導神經突生長之方法，其包含將神經元與細胞黏附調節劑接觸，其中該調節劑增強鈣黏蛋白調介之細胞黏附。US 7,846,438揭示將神經元(例如CNS神經元)與有效量之調節TAJ複合物形成及/或信號傳導之試劑接觸以調節神經元之生長及/或存活。US 8,481,711提供用於使得神經軸突及神經突可伸長之非肽神經軸突及/或神經突生長劑。

已報導靈芝物種(Lingzhi species)之許多治療效應，例如免疫調節、抗腫瘤、肝保護、抗氧化劑及膽固醇降低效應(Jinn等，2006，Biosci Biotechnol Biochem，70，2627-2634)。所有該等治療效應皆歸因於三萜、多糖及糖蛋白(Boh等，2007，Biotechnol Annu Rev，13， 265-301：Jinn等，2006，Biosci Biotechnol Biochem，70，2627-2634)。最近鑑別出了靈芝中稱為真菌免疫調節蛋白(FIP)之新糖蛋白質種類。迄今為止，已自靈芝(Ganoderma lucidum)分離並純化至少4種FIP：LZ-8(靈芝(G.lucidum))、FIP-gts(松杉靈芝(Ganoderma tsugae))及FIP-gja(紫靈芝(Ganoderma sinensis))(Hsu等，1997，Biochem J，323(Pt 2)，557-565；Ko等，1995，Eur J Biochem，228，244-249；Xuanwei等，2008，Planta Med，74，197-200)。根據先前研究，來自亞洲常見化學預防性菌菇松杉靈芝之FIP-gts具有抗癌症功能且涉及調節hTERT/端粒酶表現(Liao等，2006，Mol Carcinog，45，220-229)。另外，FIP-gts抑制A549癌細胞之生長、導致細胞週期停滯，因此在肺癌細胞中誘導早熟性細胞衰老。此外，FIP-gts在植入A549細胞之無胸腺裸小鼠中導致腫瘤生長之顯著抑制(Liao等，2008，Food Chem Toxicol，46，1851-1859)。US 20100009915提供阻抑癌症細胞增殖之方法及阻抑腫瘤細胞移動之方法，其包含將真菌免疫調節蛋白LZ-8之經純化多肽提供至腫瘤細胞。US 7,601,808揭示自小孢子靈芝選殖之免疫調節蛋白且此蛋白質具有免疫調節劑效能。

然而，並無先前技術揭示、教示或顯示靈芝免疫調節蛋白與神經突生長相關。

本發明提供促進神經突生長之方法，該方法包含將神經元暴露至有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物，由此促進神經突生長。具體而言，靈芝免疫調節蛋白或其重組體可促進軸突及樹突之生長。

本發明亦提供自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物之用途，其用於製造用以促進神經突生長之藥劑。

本發明亦提供用於治療及/或預防神經病症之方法，該方法包含將有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物投與個體，由此治療及/或預防神經病症。

本發明亦提供自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物之用途，其用於製造用以治療及/或預防神經病症之藥劑。

在一實施例中，免疫調節蛋白衍生自靈芝、松杉靈芝、小孢子靈芝或紫靈芝。較佳地，免疫調節蛋白係自靈芝衍生之LZ-8、自松杉靈芝衍生之FIP-gts、自小孢子靈芝衍生之GMI或自紫靈芝衍生之FIP-gja或其重組體。較佳地，免疫調節蛋白係自小孢子靈芝衍生(GMI)或係其重組體(reGMI)。更佳地，reGMI具有如SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中顯示之胺基酸序列。

因此，在一實施例中，靈芝免疫調節蛋白或其重組體或組合物係用於例如以下之療法中：神經系統之病症、在神經系統外部具有主要效應之疾病、病況或療法之繼發性神經系統病況、由物理、機械或化學創傷引起的神經系統損傷、記憶喪失或精神病症。在另一實施例中，本發明方法可用於治療由物理損傷(與例如燒傷、傷口、外科手術及事故相關聯)、局部缺血、延長之暴露至低溫(例如凍瘡)引起之周邊神經損傷，由於(例如)中風或顱內出血(例如大腦出血)所致之中樞神經系統損壞、癡呆、阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease)、亨丁頓舞蹈症(Huntington's disease)或帕金森氏病(Parkinson's disease)。

在另一實施例中，靈芝免疫調節蛋白或其重組體可與神經突生長劑組合用於促進神經突生長或治療及/或預防神經病症之組合療法。

圖1顯示使用不同濃度重組GMI處理並刮擦未成熟神經元(組1：同時處理並刮擦)。

圖2顯示於DIV8使用不同濃度重組GMI處理並刮擦未成熟神經元(組2：預處理48h並隨後刮擦)。

圖3顯示於DIV15使用不同濃度重組GMI處理並於DIV17刮擦(組4：預處理48h並隨後刮擦)。

圖4顯示在損傷及重組GMI處理後量測神經突生長之距離。(A)組1：未成熟神經元，後處理；(B)組2：未成熟神經元，預處理；(C)組3：成熟神經元，後處理；(D)組4：成熟神經元，預處理。對於統計學分析，每一實驗均以一式三份實施並重複3次。結果表示為三個獨立實驗之平均值±SD，並藉由使用司徒登氏t-測試(Student t-test)以GraphPad統計軟體分析組間差異。與對照相比，*p<0.05、**p<0.01及***p<0.001指示顯著差異。

圖5顯示在莫裡斯水迷宮任務(Morris water maze task)分析中使用重組GMI處理之動物模型結果。

本發明令人驚訝地發現靈芝免疫調節蛋白可促進神經突生長，表明靈芝免疫調節蛋白可治療及/或預防神經病症。

除非另外定義，否則本文所用全部技術及科學術語均具有與熟習本發明所屬技術領域者通常所瞭解含義相同之含義。雖然類似於或等效於本文所述之彼等方法及材料之任何方法及材料可用於本發明之實踐或測試，但現在闡述較佳方法及材料。本文所提及所有出版物均以引用方式併入本文中。

在本申請案中，除非另外特定說明，否則單數之使用包括複數，冠詞「一」(「a」或「an」)意指「至少一個」，且「或」之使用意指「及/或」。

在本申請案中，詞語「包含」(「comprise」)或變化形式(例如「comprises」或「comprising」)指示在指定方法、結構或組合物中包括任何所列舉整體或整體之群而不排除任何其他整體或整體之群。

如本文所用，術語「神經元」包括神經元及其一或多個部分(例如神經元細胞體、軸突或樹突)。術語「神經元」表示神經系統細胞，其包括中心細胞體或本體及兩種類型之延長或突出：樹突，通常多數神經元信號藉由其傳輸至細胞體；及軸突，通常多數神經元信號藉由其自細胞體傳輸至效應細胞，例如目標神經元或肌肉。

如本文所用，術語神經突涵蓋自神經元生長之所有此等細胞突(包括軸突及樹突二者)。

術語「神經突生長」係指自神經元生長之細胞突，或係指包含神經元生長物之細胞。

如本文所用，「神經病症」意指存在於中樞神經系統或周邊神經系統中之神經元之任何生理功能紊亂或死亡或由神經膠質細胞功能紊亂引起之神經元之任何生理學功能紊亂或死亡。此等病症之非限制性列表包含多發性硬化症、坐骨神經缺損、腦損傷或脊髓損傷、癡呆、額顳葉癡呆、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨丁頓舞蹈症、普裡昂疾病(prion disease)、神經元病及運動神經元病症。「神經元病」特徵在於運動神經元或感覺神經元之神經元細胞死亡，且因此神經元病可細分為運動及感覺神經元病症。

如本文所用，「促進」或「增加」(「promote」或「increase」，或「promoting」或「increasing」)可在本文中交換使用。該等術語係指與未經處理細胞(組織或個體)相比，在經處理細胞(組織或個體)中所量測參數之增加。亦可將相同細胞或組織或個體在處理前與處理後之間進行比較。該增加足以檢測到。在一些實施例中，與未經處理細胞相比，經處理細胞中之增加係至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、1倍、2倍、3倍、4倍或更多。

如本文所用，「抑制」，「防止」或「減少」(「inhibit」、「prevent」或「reduce」，或「inhibiting」、「preventing」或「reducing」)可在本文中交換使用。該等術語係指與未經處理細胞(組織或個體)相比，在經處理細胞(組織或個體)中所量測參數之減少。亦可將相同細胞或組織或個體在處理前及處理後之間進行比較。該減少足以檢測到。在一些實施例中，與未經處理細胞相比，經處理細胞中之減少係至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或完全抑制。

如本文所用，「治療」(「treatment」或「treating」)或「改善」可在本文中交換使用。該等術語係指用於獲得有益或期望結果(包括但不限於治療益處及/或預防益處)之方式。治療益處係關於根除或改善所治療之潛在病症。同樣，藉由根除或改善一或多種與潛在病症相關之生理症狀來達成治療益處，使得在患者中觀察到改善，但患者可能仍受到潛在病症之折磨。「治療」亦可意指與不接受治療之預期存活相比延長存活。彼等需要治療者包括彼等已患有病況或病症者以及彼等傾向於患該病況或病症者或彼等欲預防該病況或病症者。

如本文所用，「治療有效量」意指足以治療受到疾病折磨之個體或減輕與該疾病相關之症狀或併發症之量。

如本文所用，「個體」係指人類或非人類動物。

在一態樣中，本發明提供用於促進神經突生長之方法，該方法包含將神經元暴露至有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物，由此促進神經突生長。本發明之靈芝免疫調節蛋白或其重組體可用於促進神經突生長。具體而言，靈芝免疫調節蛋白或其重組體可促進軸突及樹突生長。藉由將神經元暴露至有效量之靈芝免疫調節蛋白或其重組體，軸突及樹突之長度及密度增加且藉由再生恢復。

在一實施例中，免疫調節蛋白或其重組體係自靈芝、松杉靈芝、小孢子靈芝或紫靈芝衍生。較佳地，免疫調節蛋白係自靈芝衍生之LZ-8、自松杉靈芝衍生之FIP-gts、自小孢子靈芝衍生之GMI或自紫靈芝衍生之FIP-gja或其重組體。

在一實施例中，免疫調節蛋白係自小孢子靈芝衍生(GMI)或係其重組體(reGMI)。更佳地，免疫調節蛋白(GMI或reGMI)具有以下胺基酸序列：(1)-Leu-Ala-Trp-Asn-Val-Lys-(LAWNVK；SEQ ID NO：1)及(2)-Asp-Leu-Gly-Val-Arg-Pro-Ser-Tyr-Ala-Val-(DLGVRPSYAV；SEQ ID NO：2)、以下胺基酸序列：MSDTALIFTLAWNVKQLAFDYTPNWGRGRPSSFIDTVTFPTVLTDKAYTYRVVVSGKDLGVRPSYAVESDGSQKINFLEYNSGYGIADTNTIQVYVIDPDTGNNFIVAQWN(SEQ ID NO：3)或以下胺基酸序列：EAEAEFMSDTALIFTLAWNVKQLAFDYTPNWGRGRPSSFIDTVTFPTVLTDKAYTYRVVVSGKDLGVRPSYAVESDGSQKINFLEYNSGYGIADTNTIQVYVIDPDTGNNFIVAQWNYLEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH(SEQ ID NO：4)。

在一實施例中，用於促進神經突生長之量在每kg體重約0.65μg至約650μg重量之免疫調節蛋白範圍內。介於每kg體重約0.65μg至約6.5μg、約6.5μg至約65μg、約65μg至約650μg免疫調節蛋白之間之量更佳；更佳地，每kg體重約6.5μg至約325μg免疫調節蛋白。

在另一態樣中，本發明提供用於治療及/或預防神經病症之方法，該方法包含將有效量之自靈芝衍生之免疫調節蛋白或其重組體或組合物投與個體，由此治療及/或預防神經病症。本發明靈芝免疫調節蛋白或其重組體或組合物可用於治療及/或預防神經病症。因此，靈芝免疫調節蛋白或其重組體或組合物可用於例如以下之療法中：(i)神經系統之病症(例如神經退行性疾病)，(ii)在神經系統外部具有主要效應之疾病、病況或療法之繼發性神經系統病況，(iii)由物理、機械或化學創傷引起之神經系統損傷，(iv)記憶喪失及(v)精神病症。可根據本發明預防或治療之神經退行性疾病及病況之實例包括肌萎縮側索硬化症(ALS)、三叉神經痛、舌咽神經痛、貝爾氏麻痹症(Bell's Palsy)、重症肌無力症、肌營養不良症、進行性肌萎縮症、原發性側索硬化(PLS)、假性延髓麻痹、進行性延髓麻痺症、脊髓肌肉萎縮症、遺傳性肌萎縮、椎間盤症候群(例如椎間盤脫出症候群、椎間盤破裂症候群及椎間盤突出症候群)、頸椎病、神經叢病症、胸廓出口破壞症候群、周邊神經病變、卟啉症、輕度認知減退、阿爾茨海默氏病、亨丁頓舞蹈症、帕金森氏病、帕金森疊加症候群(Parkinson-plus syndrome，例如、多系統萎縮、進行性核上性麻痹及皮質基底核退化症)、癡呆、額顳葉癡呆、脫髓鞘疾病(例如格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome)及多發性硬化症)、恰克-馬利-杜斯氏症(Charcot-Marie-Tooth disease，CMT；亦稱為遺傳性運動感覺神經病(HMSN)、遺傳性感覺運動神經病(HSMN)及腓骨肌萎縮症)、普裡昂疾病(例如庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克症候群(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)(GSS)、致死性家族性失眠症(FFI)及牛海綿狀腦病(BSE，一般稱為狂牛症))、匹克氏病(Pick's disease)、癲癇及AIDS癡呆綜合徵(亦稱作HIV癡呆、HIV腦病及HIV相關性癡呆)。

另外，本發明方法可用於治療神經損壞，例如周邊神經病。本發明方法亦可用於治療由物理、機械或化學創傷引起之神經系統損傷。因此，該等方法可用於治療由物理損傷(與例如燒傷、傷口、外科手術及事故相關聯)、局部缺血、延長之暴露至低溫(例如凍瘡)所引起的周邊神經損壞以及由於例如中風或顱內出血(例如大腦出血)所致的中樞神經系統損壞。

可將本發明免疫調節蛋白或其重組體單獨或於醫藥組合物(其中其與適宜載劑及賦形劑混合)中投與患者。本發明免疫調節蛋白或其重組體或組合物可非經腸投與，例如藉由靜脈內注射或輸注、腹膜內注射、皮下注射或肌肉內注射來投與。免疫調節蛋白或其重組體或組合物可藉助與載劑及賦形劑適當調配以形成錠劑、丸劑、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿、漿劑、懸浮液及諸如此類來經口或經直腸投與。免疫調節蛋白或其重組體或組合物可局部(例如藉由皮膚貼劑)投與。免疫調節蛋白或其重組體或組合物可調配為適於局部施加至皮膚或黏膜表面之局部乳霜、皮膚或黏膜貼劑、液體或凝膠劑。免疫調節蛋白或其重組體或組合物可藉由吸入器投與呼吸道用於癌症之局部或全身治療。

在一實施例中，用於投與之免疫調節蛋白或其重組體之量可在每kg體重約0.65μg至約650μg重量之免疫調節蛋白範圍內。介於每kg體重約0.65μg至約6.5μg、約6.5μg至約65μg、約65μg至約650μg免疫調節蛋白之間之量更佳；更佳地，每kg體重約6.5μg至約325μg之免疫調節蛋白。

適於根據本發明使用之免疫調節蛋白或其重組體或組合物之劑量可由熟習此項技術者基於本文揭示內容來確定。藥劑將含有有效劑量(取決於活性劑之投與途徑及藥物動力學)之適合於調配物之具體投與路徑(即經口、非經腸、局部或吸入)之適宜醫藥載劑及賦形劑。將免疫調節蛋白或其重組體藉助混合、溶解、顆粒化、製糖丸、乳化、囊封、捕集或凍乾製程混合至醫藥組合物中。用於非經腸投與之醫藥組合物包括呈水溶性形式之本發明多肽之水溶液。此外，可將本發明多肽之懸浮液製備成油性注射懸浮液。適宜親脂性溶劑或媒劑包括脂肪油(例如芝麻油)或合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或三酸甘油酯)或脂質體。水性注射懸浮液可含有增加該懸浮液黏度之物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或聚葡萄糖。該懸浮液可視情況含有穩定劑或增加複合物或組合之溶解性之試劑以允許更濃之溶液。

在另一實施例中，免疫調節蛋白或其重組體可與神經突生長劑組合用於促進神經突生長或治療及/或預防神經病症之組合療法。免疫調節蛋白或其重組體亦可與神經突生長劑組合作為醫藥組合物。換言之，本發明提供包含免疫調節蛋白或其重組體及另一神經突生長劑之醫藥組合物，且該組合物可促進神經突生長或治療及/或預防神經病症。在一實施例中，神經突生長劑係菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)類似物；含有5-醯基-2-胺基-1,3-硒唑類似物之神經營養因子；含有依布硒(ebselen)之神經營養因子；含有至少一種選自由咖啡酸及其衍生物組成之群之化合物之神經突生長劑；含有至少一種選自由迷迭香及含有鼠尾草酸之鼠尾草組成之群之植物提取物之神經突生長劑；含有溶血磷脂醯乙醇胺之細胞死亡阻抑物質；含有細胞器鹼化劑(例如莫能菌素(monensin)或伴刀球黴素A(concanamycin A))之神經突生長組合物；含有聚烷氧類黃酮(例如陳黃皮酮(nobiletin)或橘皮晶(tangeretin))之神經突生長劑；含有糖胺聚多糖衍生物之神經突生長活化劑；含有乳胞素(lactacystin)衍生物之神經突生長劑；含有小分子雜環酮或硫酯化合物之神經突生長劑；含有神經節甘脂衍生物及N-醯基-N-溶解-神經節甘脂、N'-醯基-N'-溶解-神經節甘脂及N,N'-二-或聚-醯基-N,N'-二溶解-神經節甘脂之神經突生長劑；包含含有GlcUA(2S)-GalNAc(4S)二糖(B單元)之硫酸軟骨素/硫酸皮膚素混合鏈之神經突生長劑；含有具有平分型GlcNAc之糖鏈、在其結構中具有上述糖鏈之複雜碳水化合物、上述糖鏈之衍生物等之神經突生長誘導劑；含有低分子量合成化合物作為活性成份之神經突生長誘導劑；Tctex-1相關多肽；TAJ多肽；或神經細胞黏附分子。

據信，無需進一步詳細闡述，熟習此項技術者即可在前文闡述基礎上以最詳盡程度利用本發明。因此，應將下列實例理解為僅具有說明性而並非以任何方式限制本發明範圍。

實例 實例1 神經突再生分析

自小孢子靈芝衍生之重組免疫調節蛋白(以下稱為「重組GMI」)係由Mycomagic Biotechnology Co.,Ltd.根據闡述於US 7,601,808中之方法製造並具有顯示於US 7,601,808之圖3B中之胺基酸序列。

神經元培養物係如前文所述自妊娠18天之兩個性別之大鼠胚胎之海馬體或皮質製備(Firestein BL,Bredt DS(1998),J Neurochem 71：1846-1853；Tseng CY、Firestein BL(2011),J Neurosci 31：15468-15480)。分離海馬體並將細胞以6×10⁵個細胞/孔之密度平鋪於塗佈有聚-D-離胺酸之6孔板上。在補充有B27、青黴素(penicillin)、鏈黴素(streptomycin)及GlutaMax(Invitrogen)之神經基礎培養基中培養神經元。

為測試活體外神經突再生，處理傷口癒合分析，其在先前報導中用於測試細胞遷移及神經突生長(Loh SH、Francescut L、Lingor P、Bahr M、Nicotera P(2008),Cell Death Differ 15：283-298；Wu CL、Chou YH、Chan Tseng CY、Firestein BL(2011)J Neurosci 31：15468-15480g；YJ,Teng NY、Hsu HL、Chen L(2012)PLoS One 7：e34999)。測試分成四組：組1：未成熟神經元，後處理；組2：未成熟神經元，預處理；組3：成熟神經元，後處理；組4：成熟神經元，預處理。所有處理均投與24h。成熟神經元係於D.I.V17至21中之培養神經元，其完全成熟並與其他細胞形成突觸連接。其表示成體腦中之最大細胞群體。未成熟神經元指示於D.I.V 10至12中之培養神經元，其具有已發育神經突但無脊柱調介之突觸連接。其代表腦之特定區域(例如室下區)中之潛在神經元祖細胞。在組1及組3中，在刮擦出傷口的同時用不同濃度之重組GMI處理，而組2及組4則在製造傷口前48h使用不同濃度之重組GMI預處理。傷口係藉由P1000尖端製造並定義為癒合第0天。

結果顯示在組1及組2二組中，1μg/ml重組GMI均對促進神經突再生具有顯著效應(圖1及圖2)。如圖4A及圖4B中所示，量測神經突再生之生長物且定量結果顯示在使用0.1μg/ml重組GMI及1μg/ml重組GMI處理之組1中平均神經突距離分別達到對照之140%及170%。在1μg/ml重組GMI下，組2中之神經突亦可再生高達160%。因此，重組GMI之預處理及共處理二者均可改善損傷後之神經突生長。然而，比較組3及組4(圖3)，在成熟神經元中，重組GMI(<1μg/ml)之預處理增強損傷後之神經突再生，但在共處理組中未增強(圖4C，數據未顯示於影像中)。在組4中，定量數據顯示神經突生長可達到180%(圖4D)。然而，較高劑量之重組GMI(5μg/ml及10μg/ml)對成熟及未成熟神經元二者皆有毒。

實例2 莫裡斯水迷宮任務分析

莫裡斯水迷宮(MWM)係齧齒動物之空間學習測試，其依賴遠端線索自圍繞開放游泳池周長之開始位置行進以定位水下逃生平臺。水迷宮方法係如以下文獻中所述經修改後實施：D'Hooge,R；De Deyn,PP(2001年8月)，「Applications of the Morris water maze in the study of learning and memory」.Brain Research. Brain Research Reviews 36 (1)：60-90。

向直徑160cm且高45cm之黑色圓形塑膠池中填充水(25 +/- 2℃)至27cm之深度。將圓形平臺(直徑12cm)置於自池邊緣之特定位置並浸入水面以下2cm至3cm。對於空間學習，使動物每天經受4次試驗；每次試驗實施1分鐘。訓練程序持續4天，且總共給予16次試驗。對於該等試驗，以隨機順序將大鼠定位於圍繞池周長相等間隔之不同開始點處。大鼠有60s來找到隱藏平臺。若大鼠無法找到平臺，則將其引導至平臺並使其在該處保持20s。將每一動物到達平臺所花費之時間記錄為逃避潛伏期。在第5天給予60s之探索試驗以測試其記憶保持。將大鼠置於池中(已移除平臺)，並記錄其在象限5中花費之時間。象限5係目標象限。對於經訓練及游泳對照實驗，經訓練組中之大鼠經受定期水迷宮學習程序。

在水迷宮訓練程序後，將0.33μg/kg重組GMI(低劑量預處理)、3.3μg/kg重組GMI(中劑量預處理)及33μg/kg重組GMI(高劑量預處理)分別經口投與三組S.D.大鼠(預處理組)持續一個月。使三組大鼠經受腦損傷外科手術。外科手術後，繼續分別向該等大鼠投與0.33ug/kg重組GMI、3.3μg/kg重組GMI及33μg/kg重組GMI持續一個月。在最初4天時，使大鼠經受水迷宮訓練程序持續5天。

其他三組S.D.大鼠在未投與重組GMI之情形下直接經受腦損傷外科手術。外科手術後，將0.33μg/kg重組GMI(低劑量後處理)、3.3μg/kg重組GMI(中劑量後處理)及33μg/kg重組GMI(高劑量後處理)分別經口投與該三組大鼠持續一個月。在最初4天時，使大鼠經受水迷宮訓練程序持續五天。

在投與結束後，使6組大鼠經受水迷宮分析。如圖5中所示，預處理組中之治療效能展現劑量依賴方式，且與假手術組相比，中劑量後處理組展現有利效應。

<110> 蘑法生物科技股份有限公司

<120> 靈芝免疫調節蛋白於促進神經突生長之新用途

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<212> PRT

<213> 小孢子靈芝

<400> 1

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 小孢子靈芝

<400> 2

<210> 3

<211> 111

<212> PRT

<213> 小孢子靈芝

<400> 3

<210> 4

<211> 140

<212> PRT

<213> 小孢子靈芝

<400> 4

Claims

一種自小孢子靈芝(GMI)衍生之免疫調節蛋白或其重組體(reGMI)或組合物之用途，其用於製造用於促進神經突生長之藥劑，其中該免疫調節蛋白包含如SEQ ID NO：3所示之胺基酸序列。
如請求項1之用途，其中該靈芝免疫調節蛋白或其重組體可促進軸突及樹突生長。
如請求項1之用途，促進神經突生長之量介於每kg體重0.65μg至650μg之該免疫調節蛋白範圍內。
如請求項1之用途，其中該藥劑係與另一神經突生長劑組合使用。
一種自小孢子靈芝(GMI)衍生之免疫調節蛋白或其重組體(reGMI)或組合物之用途，其用於製造用於治療神經病症之藥劑，其中該免疫調節蛋白包含如SEQ ID NO：3所示之胺基酸序列；及其中該神經病症係(i)神經退行性疾病、(ii)在神經系統外部具有主要效應之疾病、病況或療法之繼發性神經系統病況、(iii)由創傷引起之神經系統損傷、(iv)記憶喪失或(v)由神經系統損傷所致之精神病症。
如請求項5之用途，其中該神經病症係由物理損傷、局部缺血、延長之暴露至低溫引起的周邊神經損壞、中樞神經系統損壞、癡呆、阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease)、亨丁頓舞蹈症(Huntington's disease)或帕金森氏病(Parkinson's disease)。
如請求項6之用途，其中該中樞神經系統損壞係中風或顱內出血。
如請求項5之用途，治療神經病症之量在每kg體重約0.65μg至約 650μg之該免疫調節蛋白範圍內。
如請求項5之用途，其中該藥劑係與另一神經突生長劑組合使用。