TWI673061B

TWI673061B - 藉由自動免疫療法治療非小細胞肺癌

Info

Publication number: TWI673061B
Application number: TW101108784A
Authority: TW
Inventors: 史坦納艾達爾; 葛斯塔夫高德奈克
Original assignee: 南韓商杰姆維克斯艾恩凱爾有限公司
Priority date: 2012-03-14
Filing date: 2012-03-14
Publication date: 2019-10-01
Also published as: TW201336505A

Abstract

本發明揭露用於治療罹患癌症(諸如非小細胞肺癌(NSCLC))之患者的新穎免疫療法之治療攝生法。該攝生法涉及以衍生自人類端粒酶蛋白之肽及先前已接受化學放射療法之患者的GM-CSF進行的組合治療。

Description

藉由自動免疫療法治療非小細胞肺癌

本發明關於治療癌症療法及免疫學之領域。尤其是，本發明關於藉由自動免疫療法之癌症療法，亦即以源自人類端粒酶之催化性子單位之肽進行自動免疫化的非小細胞肺癌療法。

肺癌仍為造成全球男性及女性癌症死亡的首要原因。非小細胞肺癌(NSCLC)佔約80%之病例，且大多數個體呈現不能手術之第Ⅲ期或第IV期疾病。轉移性疾病(第IV期)之預後極差，5年存活率為1%。第Ⅲ期患者治療成功係取決於對局部疾病和隱匿性轉移二者的控制。若該疾病被包含在適當之放射量內(即，第I-ⅢA期)，以治癒為目的之放射療法(≧60Gy)為選擇之治療。然而，以單獨之放射療法治療時第Ⅲ期患者之5年存活率不到5%。約三分之一的患者會局部復發，三分之一會發展出遠處轉移，而三分之一將發展出此兩種情形。現已研究多模式治療的幾種方法。這些措施包括誘導化學療法和同步化學-放射療法，以及鞏固化學療法(consolidation chemotherapy)。然而，進展一直有限。大多數患者死於復發之疾病，而新的治療策略是必要的。

近幾年，用於肺癌之疫苗的研發已受到更多關注。目前有數個大型之第Ⅲ期臨床試驗在非小細胞肺癌患者中進行，探討不同之疫苗策略。

端粒酶表現在大多數人類癌症中，包括非小細胞肺癌且被視為有吸引力之通用癌症疫苗的標靶。端粒DNA賦予染色體穩定性，正常之體細胞可以進行有限次數之細胞分裂，因為端粒在每次有絲分裂時會縮短。腫瘤細胞經由表現合成新端粒單位之端粒酶而繞過此生物鐘。

肽GV1001(SEQ ID NO：1)係源自hTERT之活性部位的16個胺基酸所組成。先前已報導兩種GV1001試驗。GV1001肽可在數個由DP、DQ及DR亞位點編碼之第Ⅱ型HLA分子上辨識出。此種混雜之HLA-結合略圖暗示GV1001疫苗可能適用於一般患者群，並可能在每一個體中引出廣泛之T-輔助細胞反應。此外，GV1001包含套式第I型HLA抗原決定部位，其促進招募CD8+細胞毒性T細胞。

於先前之非小細胞肺癌疫苗試驗中，26名患有末期疾病(大部分為第Ⅳ期)之經猛烈預治療的患者接受端粒酶肽I540及GV1001之疫苗接種。無化學療法或放射療法伴隨給予。在13名患者中可觀察到對抗GV1001之疫苗特異性T細胞反應，在2名患者中可觀察到對抗I540之反應，其中無與治療相關之嚴重副作用。

本發明之目的

本發明體系之目的係提供用於非小細胞肺癌患者之新穎治療攝生法。

第1圖：GV1001特異性T細胞反應。

在療法開始前、第6、10週及每次接種疫苗之後取得PBMCs。在體外刺激PBMCs一次並對經放射線照射之PBMCs±肽GV1001的增殖進行測試。各欄中呈現平均SI(具GV100之反應除以不具GV1001之反應)。若記錄之SI超過各別圖標之上限，確切之SI係註明在各欄之上端。圖表顯示來自所有可評估之患者在疫苗接種前及後的T細胞反應。在每一受試對象方面，顯示具有最高SI的時間點。SI>2之反應被認為特異於GV1001。

第2圖：GV1001特異性T細胞反應。

在療法開始前、第6、10週及每次接種疫苗之後取得PBMCs。在體外刺激PBMCs一次並對經放射線照射之PBMCs±肽GV1001的增殖進行測試。各欄表示平均cpm或平均SI(具GV100之反應除以不具GV1001之反應)。若記錄之cpm或SI超過各別圖標之上限，確切之cpm或SI係註明在各欄之頂端。B和C顯示長期T細胞記憶。圖表顯示從追踪樣本記錄之T細胞反應的發展。D-F顯示在分離PBMC前存放一整夜(*)之樣本大多呈測試反應陰性，即使其新鮮分離之樣本的測試呈陽性的受試對象亦如此。G描繪在到達時或儲存一整夜後分離出之PBMC樣本的平行測試。

第3圖：患者的生存期。

藉由Kaplan-Meier分析評估PFS，將免疫反應者與非反應者相比較。PFS之定義為此處所描述之方案的臨床終點，因為病情進展後之標準治療似乎會影響OS(第Ⅲ期患者)。該繪圖顯示具有或不具有GV1001 T細胞反應之研究患者的PFS。從免疫反應者所觀測到之PFS延長。

發明揭示

目前對於結合癌症疫苗與常規療法之興趣逐漸增加。先前對於化學療法會妨礙免疫化之擔憂由於可能之協同效應的考量可以被捕足。

在許多病例中，大多數腫瘤細胞係藉由常規療法消除，但腫瘤最後仍復發。癌症疫苗透過不同的機制工作且因此可能有效對抗對化學療法及放射療法具抗性之癌細胞。此外，化學-放射療法可能增強，而非妨礙免疫反應。首先，組織損傷可能誘導提供促炎性微環境之“危險信號”。其次，有證據表明由放射線誘導之基因產物使腫瘤更容易受到T細胞攻擊。第三，肺腫瘤包庇的調節性T細胞被認為抑制宿主之免疫反應，且一些研究建議化學療法可能抑制調節性T細胞及髓源性抑制子細胞。

最後，應用在現今治療攝生法中之多西紫杉醇(Docetaxel)(見下文)有可能透過其他機制加強疫苗反應。

本發明根據數據形成在第Ⅲ期非小細胞肺癌患者中以端粒酶肽GV1001(EARPALLTSRLRFIPK，SEQ ID NO：1)進行之第Ⅱ期疫苗試驗。該研究評估在化學-放射療法後不久進行之GV1001疫苗接種。

尤其是，呈現之結果來自於調查以端粒酶肽GV1001為非小細胞肺癌患者進行疫苗接種之第Ⅱ期臨床試驗。該臨床研究包括23名患者，且未觀察到與治療相關之嚴重不良影響。此研究證明每一方案之免疫反應率為80%。與大多數癌症疫苗試驗(包括那些調查以端粒酶為基礎之方法的試驗)相比較，此反應率是可觀的。此外，該研究證明產生持久性GV1001特異性T細胞記憶反應。

該多模式方法、長期數據之可用性及免疫反應與臨床結果之間的關聯性特別重要。

有許多理論論據暗示癌症疫苗若應用在組合性藥物攝生法中可能是最有效的，但這些模式是如何交互作用的臨床研究數據很少。有趣的是，在本發明試驗中之免疫反應者的頻率優於本發明者正在進行之三個調查以疫苗接種單一療法的GV1001試驗。此一發現表明施用化學-放射療法不會防礙免疫化且可能有利地促進免疫反應。

雖然大多數肽疫苗表現短的第I型HLA-配合抗原決定部位，根據本文之發現，像GV1001之類的長第Ⅱ型HLA-配合肽可能特別適合用於組合的方案中。長肽類募集已知可與其他免疫細胞廣泛交互作用之CD4+ T-輔助細胞。在經放射線照射之腫瘤組織中，GV1001特異性T-輔助細胞可能使APCs呈現來自凋亡之腫瘤細胞的抗原並誘導抗原決定部位散佈。

本發明者在來自GV1001試驗之長期倖存者中所正在進行的研究中解決此一問題且確實鑑定出對抗GV1001外之hTERT抗原決定部位的反應。在非小細胞肺癌患者中之新的第I/Ⅱ期臨床試驗中，我們計劃結合化學療法或放射療法與免疫接種，該免疫接種係以這些新穎之hTERT肽類中的一些肽進行接種。

目前對於癌症疫苗反應的長期發展，以及對於如何設計疫苗加強劑時間表的知識很有限。一些受試對象在目前提出之GV1001試驗中於第一次疫苗接種後之免疫分析中測試結果呈陰性，但在加強劑注射後幾個月發展出可偵測到之T細胞反應。同樣地，我們在先前以GV1001及其他疫苗進行之研究中觀察到T細胞反應似乎可由接種疫苗加強劑增強。這些發現表明在長時間內反複接種可產生較高之免疫反應率和更持久之反應。而接種疫苗加強劑需持續多久的問題仍有待澄清。

然而，本發明者已證明免疫接種6-12個月的患者可在最後一次接種疫苗後長達43個月所得之樣本中保留GV1001反應。此項觀察表明GV1001疫苗接種可能提供持久之T細胞記憶。

關於這種疫苗，其可能足以僅對追踪樣本中無強有力反應之患者提供加強劑注射。

在長期倖存者中之反應的細胞因子分析已顯示出高水準之關鍵Th1效應子細胞因子(cytokine)IFN γ和TNF α，和低水準之IL-4和IL-10。這種細胞因子樣式可能暗示免疫力與T細胞之間的良好平衡。若僅分析這些反應之 IFN γ、IL-4和/或IL-10(如疫苗試驗中常見者)，可簡單地將他們命名為“Th1”。因此，個人可能會注意到本發明者檢測到可觀水準之關鍵Th2細胞因子IL-5及IL-13。此項觀察與其他早期的研究結果一致，在癌症疫苗試驗中的細胞因子略圖經常不遵循Th1/Th2劃定(delineation)。已有暗示Th2細胞因子可能在回應強大之免疫活化作用時上升。在本發明者所觀察之長明倖存者中，廣範圍之Th1/Th2細胞因子亦可能指向多功能反應。幾項研究(特別是傳染病)表明多功能細胞因子略圖與保護性免疫力有關。

在先前無化學療法之GV1001試驗中，免疫反應者之頻率與藉由DTH記錄或T細胞分析所評估者相似。相反地，在目前提出之試驗(其中係於化學療法後不久即進行疫苗接種)中，大多數受試對象為DTH陰性。此觀察指向化學療法對GV1001反應之可能的免疫調節效果。

端粒酶係由正常幹細胞表現。因此，值得注意地，與幹細胞相關之毒性未體現於下列實例中所討論之試驗(其中GV1001疫苗接種係在猛烈之化學-放射療法後不久開始)中。在長期安全性方面，我們已監測19位研究對象超過兩年且未檢測到毒性(見表2)。

此外，來自相關研究中之患者的長期數據(見下文本實例末)已表明加強劑免疫及超過8年之持續性免疫反應的耐受性良好。持續監測骨髓樣本及周圍血液計數並未發現任何毒性。我們亦觀察到經接種GV1001之黑色素瘤和結腸癌患者維持血液計數數年。總之，我們的數據表明接種GV1001疫苗具有輕微毒性之略圖。

不管其免疫反應，大多數患者在非小細胞肺癌試驗中經歷進展性疾病。此觀察反映末期非小細胞肺癌的侵略本質。另一方面，我們在一些受試對象中觀察到持久之腫瘤反應，並發現幾乎所有長期倖存者均屬於免疫反應者。

我們歸結出接種GV1001可使高比例之非小細胞肺癌患者免疫化。高免疫反應率是令人鼓舞的且顯示該疫苗適用於一般患者群而不需預先HLA分型。此外，接種GV1001疫苗可誘導對抗端粒酶抗原之長期T細胞記憶，同時不影響骨髓功能。在第Ⅱ期試驗中所觀察到之高免疫反應率及低毒性支持將疫苗接種與化學療法或放射療法組合的概念。這對GV1001及其他癌症疫苗的臨床研發有利。重要的是，本研究亦提供臨床效果之跡象。

在罹患末期疾病之非小細胞肺癌患者中進行的相關第I/Ⅱ期試驗(在未接受伴隨之放射線或化學療法的患者中進行)顯示出免疫反應與生存之間關聯性強。我們認為該結果有必要進一步調查非小細胞肺癌中之GV1001。高免疫反應率、低毒性及臨床活性跡象為進行較大的隨機試驗提供了基礎。在此背景下，有趣的是，目前為止，存活超過1000天之患者中12/13為免疫反應者。此觀察到之關聯性表明在非小細胞肺癌中評估GV1001的隨機試驗是必要的。在胰腺癌中，目前正在進行第三期之GV1001試驗。

因此，基於以上提及之來自第Ⅱ期臨床試驗的發現，本發明關於用於治療人類患者之癌症的方法，該方法包含投予該患者有效量之肽EARPALLTSRLRFIPK(SEQ ID NO：1)及免疫佐劑，其中該患者已接受放射療法及可選擇之化學療法，且其中該患者在該治療前4-28天已接受放射療法。

從本揭露內容可清楚知道此種組合療法已被證實在非小細胞肺癌患者中有效，咸信SEQ ID NO：1具有潛力在苦於多種其他之癌症類型且正接受放射療法和/或化學療法治療的患者中誘導有益之抗腫瘤免疫力。如本文所指出者，儘管患者最近已接受侵略性抑制細胞生長/細胞毒性藥物和/或放射療法，他們似乎完全有能力提高對疾病之進展有顯著效果的免疫反應。

因此，根據本發明，SEQ ID NO：1在大多數(若不是全部)其中使用化學療法和/或放射療法來對付該疾病的癌症類型中均有用於涉及化學療法和/或放射療法的組合治療中。

較佳地，所討論之患者已經或正在接受化學療法，且該患者開始接受SEQ ID NO：1治療前4-28天內已接受放射療法。

於較佳之體系中，該治療之癌症為非小細胞肺癌(NSCLC)。

於本發明之較佳體系中，該SEQ ID NO：1係經由皮內途徑投予，但亦可應用其他方便之投予途徑。例如， SEQ ID NO：1可經由皮下途徑投予，或經由其他本技藝中常用之腸胃道外途徑投予，諸如經由腹膜內或肌肉內途徑投予。

較佳之投予位置係在下腹部，但投予位置可依方便或實用而改變。此意味可在四肢或背部投予。

通常，該免疫佐劑係投予在與SEQ ID NO：1相同之部位。此處之“相同部位”係指人體上之相同位置及相同之投予類型。因此，若SEQ ID NO：1係經由皮內途徑投予在下腹部，則該佐劑亦經由皮內途徑投予在下腹部。

在實行本發明時，該免疫佐劑通常係在投予SEQ ID NO：1前不久投予，諸如在投予SEQ ID NO：1前1-30、或2-29、或3-28、或4-27、或5-26、或6-25、或7-26、或8-25、或9-24分鐘投予。較佳地，該佐劑係在投予SEQ ID NO：1前10-15分鐘投予。

投予之SEQ ID NO：1的量必須是有效的，這意味著該量為每次投予至少10毫微莫耳，諸如至少50毫微莫耳、或至少200毫微莫耳、或至少250毫微莫耳。另一方面，投予之量通常最多2000毫微莫耳，諸如最多1500毫微莫耳、最多1000毫微莫耳、或最多800毫微莫耳，諸如最多500毫微莫耳。在特佳之體系中，該量為約300毫微莫耳。

該佐劑為任何方便之免疫佐劑，但特別有關的為免疫刺激性佐劑。合適之免疫佐劑的實例廣泛討論於容WO 98/20027中。特別重要之免疫佐劑為顆粒性細胞巨噬細胞-株落刺激因子(GM-CSF)-在本發明之某些體系中，此佐劑每次投予之投予量為75微克，但當經由特殊途徑投予且投予在身體上的特定位置時可依經由測試GM-CSF之效力所決定者來投予較高或較低之劑量。

如前述，根據本發明治療之患者先前已經以化學療法和放射療法治療。任何有用於治療非小細胞肺癌之化學治療攝生法可能已被採用過，但在實行本發明時已觀察到以多西紫杉醇治療後，再以SEQ ID NO：1免疫化的有利效果，尤其是在每週投予20毫克/米²之多西紫杉醇後(其中米²係指經治療之個人的皮膚表面積)。

放射療法之治療攝生法亦可能為任何方便用於治療非小細胞肺癌的攝生法，但在實行本發明時，下文中報告之結果係在由3D放射療法2Gy×30所組成之放射療法後取得。

本發明之方法通常必須在第1次免疫化後重複進行免疫化，以誘導有效之免疫反應。下列實例中所依循之免疫接種計劃需要患者經由與第1次免疫接種相同的途徑且按照以下計劃連續投予相同劑量之SEQ ID NO：1及免疫佐劑：第1次種後一周內投予兩次，第2、3、4、6、8、10、14、18、22週時每週投予一次，第6個月投予一次，並在第9個月投予一次。然而，可將這類免疫接種計劃最優化且如實例中所指示，後續之免疫化或免疫加強劑次數可能可以減少，即，技術熟習之免疫學家將能夠從進一步之實驗測定最優化之免疫計劃。另外，可能監測個別患者之免疫狀態並根據此監測結果為每一個患者個別調整免疫接種計劃。

本發明亦關於用於此處所揭露之方法及如申請專利範圍中所提出之GV1001(SEQ ID NO：1)。此外，本發明亦關於SEQ ID NO：1於製備醫藥組成物之用途，該醫藥組成物可根據上文中揭露之本發明方法及如申請專利範圍中之定義來治療非小細胞肺癌。

定義

“GV1001”係指肽EARPALLTSRLRFIPK(如SEQ ID NO：1)，其係衍生自人類端粒酶蛋白(hTERT)之胺基酸序列。

“放射療法”一般係指利用離子化放射線治療腫瘤，該離子化放射線可局部或系統性施用。有用之放射療法的確切類型根據癌症類型而有不同且大致上為熟習本技藝之人士所熟知。

所使用之“化學療法”通常係指以多種細胞毒性或抑制細胞生長的藥物來治療癌症患者。因此，例如，在本揭露內容中，化學療法係指使用下列群組之藥物進行的抗癌療法：模擬嘌呤或嘧啶(其為DNA之組件)之抗代謝物(L01B)(如：硫唑嘌呤(azathioprine)及巰基嘌呤)。該抗代謝物防止這些物質在細胞週期的“S”期被納入DNA中，停止正常的發展和分化。其亦影響 RNA合成。

植物生物鹼及萜類化合物(LO1C)。這些生物鹼阻止微管作用。主要之實例為長春花生物鹼及紫杉烷類。長春花生物鹼(LO1CA)係衍生自馬達加斯加長春花(Madagascar periwinkle)、長春花(Catharanthus roseus)(原名長春花紅景天(Vinca rosea))，包括長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)及長春地辛(vindesine)。

鬼臼毒素(Podophyllotoxin)(LO1CB)是一種自植物衍生之化合物，據說可幫助消化以並用於產生其他兩種抑制細胞生長的藥物，依托泊苷(etoposide)及替尼泊苷(teniposide)。他們阻止細胞進入G1期(DNA複製的起始)及DNA複製(S期)。

紫杉烷類(LO1CD)係衍生自天然產物太平洋紫杉醇(最初被稱為紫杉醇)且最早係衍生自太平洋紅豆杉樹之樹皮。多西紫杉醇為太平洋紫杉醇之半合成類似物。紫杉烷類增強微管之穩定性，防止染色體在細胞週期後期分離。

拓撲異構酶抑制劑(LO1CB及LO1XX)。這些包括第I型拓撲異構酶抑制劑，諸如喜樹鹼(camptothecins)伊立替康(irinotecan)和拓撲替康(topotecan)，及第Ⅱ型抑制劑，諸如安吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷 (etoposide phosphate)及替尼泊苷(teniposide)。細胞毒性抗生素(L01D)包括蒽環類菌素(L01DA01)，諸如阿黴素(doxorubicin)(LO1DB01)、柔紅黴素(daunorubicin)(LO1DB02)、戊柔比星(valrubicin)、伊達比星(idarubicin)、表阿黴素(epirubicin)(LO1DB03)，及其他細胞毒性抗生素，諸如博萊黴素(bleomycin)(LO1DC01)、普卡黴素(plicamycin)(LO1DCO2)及絲裂黴素(mitomycin)(LO1DCO3)。

“免疫佐劑”具有本技藝中其通常的含義：一種物質或組成物，當將其投予個人時其協助誘導/引出對抗原之特異免疫反應。本發明中，較佳之佐劑為GM-CSF。

材料與方法 患者及研究方案

第二階段試驗之主要目標為免疫反應。毒性及惡化之時間為次要目標。在2006年11月至2008年7月之間共有23位來自挪威3個不同中心的無法手術之第ⅢA/B期NSCLC受試對象登記。12位患者係在挪威Radium醫院登記，4位在聖奧拉夫(St Olav's)醫院登記，7位在挪威克里斯蒂安桑(Kristiansand)之南方醫院登記。本試驗由挪威醫藥局，醫學研究倫理地區委員會及醫院評審委員會核准。其執行係符合世界醫學協會赫爾辛基宣言。從所有患者取得簽署之知情同意書。

研究族群在過去4週內已接受每週20毫克/米²之多西紫杉醇及3 D放射療法2Gy×30之治療。根據研究前之胸部和上腹部CT掃描，以及大腦之核磁共振掃描將具有轉移性疾病的受試對象排除。資格標準亦包括東方腫瘤學組(Eastern Oncology Group)(ECOG)性能狀態0-2，年齡≧18歲，白血球≧1.5×10⁹/升；血小板≧100×10⁹/升，血紅素≧9克/分公升(≧5.6毫莫耳/升)；肌酐≦140微微莫耳/升(1.6毫克/分公升)，膽紅素≦高於正常之上限20%，ASAT及ALAT≦1.5，正常白蛋白之上限≧2.5克/升。排除標準包括其他之前的惡性腫瘤病史，但經治癒性治療之皮膚的基底細胞或鱗狀細胞癌或子宮頸癌第IB期、需要抗生素治療之活性感染或或明顯之心臟或其他內科疾病(諸如嚴重的充血性心臟衰竭、不穩定型心絞痛、嚴重心律失常)、對疫苗之嚴重不良反應(諸如過敏)除外。罹患已知之自體免疫性疾病的患者或B型肝炎、C型肝炎或HIV測試陽性之患者排除在研究外。

研究設計

研究設計背後之策略是為在第Ⅲ期非小細胞肺癌患者中進行之第三階段試驗鋪路，在多模式治療攝生法中評估該疫苗。GV1001之給藥量係根據我們先前在非小細胞肺癌和胰腺癌中進行之劑量遞增試驗的數據。化學放射療法相當於2006年中用於不能手術之第Ⅲ期NSCLC的慣用標準治療。我們決定納入20位可評估之患者係基於下列主要研究目標：證明化學放射療法與GV1001的組合治療是可行的且可能產生免疫化、提供安全性數據並取得PFS及免疫反應率之估計值。在一個給定的樣本大小中，具免疫反應及嚴重不良事件(SAE)之受試對象的數量將遵循二項分佈。統計計算以n=20為根據並顯示出二項分佈。如在第I/Ⅱ階段研究中所觀察者，假設真實之反應率為54%，檢測到5或更多個免疫反應者的機率為99.8%。假設SAE的真實頻率為10%，檢測到1或更多個SAE的機率為87.8%。

治療

在試驗中，在最後一次放射療法後4天至4個星期內開始接種GV 1001。免疫接種係在第1週(週一，週三和週五)接種且在第2、3、4、6、8和10週各接種一次。在第14、18、22週、第6個月及第9個月接種加強劑。經由皮內途徑(i.d.)將GV1001(300毫微莫耳肽，在0.20毫升生理鹽水中)注射在下腹。在注射GV1001前10-15分鐘將GM-CSF(75微克Leukine；拜耳，奧斯陸，挪威)注射在相同位置。

肽類

疫苗肽GV1001對應於hTERT之16個胺基酸殘基611-626(EARPALLTSRLRFIPK；SEQ ID NO：1)。 GV1001係由Pharmexa(Hrsholm，丹麥)提供。其製造符合GMP。在T細胞分析中使用RAS-肽508(KRAS 52-70，Q61H；Norsk Hydro，挪威)作為陰性對照組。

T細胞培養及分析

在療法開始前、第6、10週及每次接種後取得周圍血液單核細胞(PBMCs)。依前述將PBMCs分離出並冷凍。依稍早之描述，在T細胞分析前在體外以疫苗肽刺激解凍之PBMCs一次。在此最初刺激時，將PBMCs與GV1001(25微莫耳/升)一起培養7至10天，從第3天加入IL-2(10單位/毫升)。

基本上依前述進行T細胞增殖分析(³H胸苷)。並行分析疫苗接種前及後之樣本對肽刺激的反應。使用經放射線照射之自體PBMCs作為抗原提呈細胞(APCs)。使用以金黃色葡萄球菌腸毒素C(SEC)進行之刺激作為陽性對照組及免疫能力之測量值。所有患者均對SEC有反應。以一式三份進行T細胞培養之測試。SEM通常低於10%。以無關肽(K-RAS 508)刺激後的增殖計數通常與不含肽之對照組無明顯不同。當刺激指數(SI；具抗原之反應除以無抗原之反應)高於2時，T細胞反應被認為是抗原特異性。

在T細胞刺激48小時後在收穫之上清液上根據製造商的方案(Bio-Rad實驗室)進行Bioplex細胞因子分析。以一式二份/一式三份分析上清液，各並行實驗透過T 細胞刺激和Bioplex分析保持分隔。

遲發型超敏反應

在基線、第2、3、4、6、10週及以後接種疫苗時進行遲發型超敏反應(DTH)皮膚測試。在DTH測試方面，經由i.d.將在0.10毫升生理鹽水中之60毫微莫耳GV1001注射在與接種(沒有GM-CSF)部位分開之部位。患者在給藥後48小時登記DTH皮膚反應。陽性DTH測試之定義為紅斑/硬結的平均直徑≧5毫米。

臨床評估

在每次訪視時評估藥品不良反應及ECOG性能狀態。在開始接種疫苗(第1週)、第2、3、4、6、8、10週及之後所有接種疫苗時進行血液篩檢及一般身體檢查。在開始疫苗接種前、第14週及之後每三個月進行CT掃描。

無疾病進展存活率係定義為CTN-2006方案中的主要臨床終點，因為整體存活率可能受病情進展後之標準治療影響。一般而言，放射線照射纖維化是很難可靠地與腫瘤區別。在開始接種疫苗時，患者具有化學放射療法後殘餘之CT病變，其可能或可能不包括可存活之腫瘤組織。因此，完全有效、部分有效和穩定疾病不適用。進行性疾病之定義為藉由CT掃描、支氣管鏡檢查和/或切片檢查確定之新的或進展性病變。

統計

從開始接種疫苗計算PFS。應用Kaplan-Meyer/對數等級(log-rank)分析比較相關於PFS之免疫反應者與非免疫反應者。為了評估該免疫反應是否代表獨立之預後因素，進行考克斯(Cox)回歸分析(enter法)。除了免疫反應外，疾病階段代表最重要之可識別預後因素。受試對象之疾病階段為第ⅢA或ⅢB期。

結果 患者特徵及對治療的依附

表1列出患者的特徵及治療細節。2007年底，拜耳將液態GM-CSF(Leukine)退出市場。這導致液態GM-CSF突然短缺，直至交付凍乾產品。因此，兩位患者在Radium醫院接受他們的GV1001注射之一(無免疫佐劑GM-CSF)。在聖奧拉夫(St Olav's)醫院，另外兩名患者各錯過兩次組合疫苗接種(第8和10週)。研究監測小組決定更換在兩次疫苗接種時錯過GM-CSF的兩名患者(第203號和第204號)，並從每一方案分析中排除。110號患者亦非在每一個方案中均可評估，因為她在第8週因右肺膿腫和疾病進展而退出。

安全性

安全性族群包括所有接受至少一次疫苗接種之患者(n=23)。共投予323個疫苗劑量(每名患者8-21個疫苗劑量)。有七件來自六名患者之嚴重不良事件的報告。全部七項事件被視為與潛在的疾病有關，而非研究之療法。一項事件，支氣管瘺，最初被報導為可能與研究藥物有關。然而，支氣管鏡切片檢查證明該支氣管瘺係由於腫瘤復發。

免疫反應

與疫苗接種前之樣本中沒有患者顯示出GV1001特異性T細胞反應相比較，接種疫苗後有16名患者顯示出GV1001特異性T細胞反應(第1圖)。僅一名患者中觀察到陽性DTH反應。三個受試對象無法根據方案評估(見上文)。藉由意向治療(ITT)分析，免疫反應率為70%及每一方案為80%。

為了取得可持續之臨床療效，發展T細胞記憶似乎有需要。因此，我們提供加強劑疫苗並監測免疫反應之長期發展。在15/16之免疫反應者中取得追踪樣本。結果證明在13/15受試對象中有持久之GV1001-特異性T細胞反應，最長觀察期為91週(表2及第2A-B圖)。

比較不同的中心，我們記錄來自奧斯陸Radium醫院之9/12(每一方案9/11)患者，來自特隆赫姆聖奧拉夫醫院之1/4(每一方案1/2)患者及來自克里斯蒂安之6/7患者中有GV1001-特異性T細胞反應。來自特隆赫姆及克里斯蒂安之樣本被送往奧斯陸進行T細胞分析。在分離PBMC前將一些首批樣本存放過夜。存放過夜之樣本只產生陰性結果。因此，我們決定在抵達後立即從同一患者中分離出隨後之樣本。有趣的是，大多數先前陰性患者檢測呈陽性。此外，稍後從一些患者取得之樣本存放過夜後再次檢測的結果呈陰性(第2C-E圖)。我們亦並行測試同一天儲存或過夜之樣本，並觀察到新儲存之樣本中的反應顯著較強(第2F圖)。這些觀察說明管理具有T細胞分析之多中心試驗的複雜性，並表明若是在非優化處理的樣本上進行分析則T細胞數據可能會誤導。

臨床反應

表2列出無疾病進展存活率(PFS)、總生存率及復發部位。PFS為每一方案之臨床終點且每隔3個月藉由CT掃描評估。到今天為止，ITT群中已記錄17/23患者具腫瘤進展(中位數PFS為357天)。沒有復發證據之患者中有六分之五為免疫反應者。考慮所有納入之患者，與非免疫反應者相比較，免疫反應者記錄之PFS增加，免疫反應者對非免疫反應者之中位數為371天對182天(第3圖)。

圖1與圖2顯示GV1001特異性T細胞反應。

圖3顯示患者的生存期。

<110> 傑姆維克斯公司(GEMVAX AS)

<120> 藉由自動免疫療法治療非小細胞肺癌/TREATMENT OF NON-SMALL CELL LUNG CARCINOMA BY ACTIVE IMMUNOTHERAPY

<140> 101108784

<141> March 14, 2012

<160> 1

<210> 1

<211> 16

<212> PRT

<213> 人

<400> 1

Claims

一種醫藥組成物組合上放射療法及多西紫杉醇化學療法於製備用於治療有治療需要之人類個體中之非小細胞肺癌(NSCLC)癌症的醫藥組合的用途，其中該醫藥組成物包含有效量之肽EARPALLTSRLRFIPK(SEQ ID NO：1)及免疫佐劑，其中該人類個體先前已接受該放射療法及接受該化學療法以治療該癌症，且其中該人類個體開始接受SEQ ID NO：1治療前4-28天已接受放射療法。
如申請專利範圍第1項之用途，其中SEQ ID NO：1係經由皮內途徑投予。
如申請專利範圍第2項之用途，其中SEQ ID NO：1係在下腹部投予。
如申請專利範圍第1項之用途，其中SEQ ID NO：1之投予量為300毫微莫耳。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該免疫佐劑為顆粒性細胞巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)。
如申請專利範圍第5項之用途，其中GM-CSF之投予量為75微克。
如申請專利範圍中第1項之用途，其中該化學療法需要先前每週投予多西紫杉醇(docetaxel)20毫克/米²。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該放射療法需要3D放射療法2 Gy×30。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該免疫佐劑係投予在與SEQ ID NO：1相同之部位。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該免疫佐劑係在投予SEQ ID NO：1之前10-15分鐘投予。
如申請專利範圍第1項之用途，其中該人類個體接著根據下列方案經由相同途徑投予相同劑量之SEQ ID NO：1及免疫佐劑：第一次投予後的一週內投予兩次，第2、3、4、6、8、10、14、18、22週每週投予一次，第6個月投予一次及第9個月投予一次。