TWI672376B - 用於體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組 - Google Patents

用於體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組 Download PDF

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Abstract

一種體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其包含準備具有多元膠體晶體層的細胞培養容器、準備循環腫瘤細胞的細胞液、以及將細胞液與多元晶體膠體層接觸，使在細胞液中的循環腫瘤細胞附著於多元膠體晶體層並可快速增殖至20倍以上。多元膠體晶體層至少包含粒徑為1000奈米至5000奈米的第一粒子及粒徑為20奈米至400奈米的第二粒子。細胞液中的培養液至少具有血小板裂解液。

Description

用於體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組
本發明關於一種細胞培養技術，特別是一種體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組。
目前癌症治療藥物使用，臨床醫師主要仰賴臨床治療的統計分析，以判斷癌症藥物的選用以及規劃癌症病患療程。這類方式需要等到療程結束一段時間，才能評估病患對藥物的反應。並且，當對病患給予藥物或換藥時，無法依據病患的個體差異判斷合適的藥物。因此，為了提高癌症的治療成功率，依照個體間癌症的特殊性質進行檢測，並且在療程中不間斷地評估藥物的反應，可作為臨床上提供擬定個體化治療方針。
當癌細胞由原生腫瘤脫離進入血管，這些血液中的癌細胞稱為循環腫瘤細胞（circulating tumor cells, CTCs）。CTC計數是一種新興的癌症生物標記方式，許多研究證實此種方法可預測癌症的預後（prognosis），並監控細胞對化學治療及標靶治療的反應。目前與CTC相關的臨床運用，大多以CTC數量來判斷病程進展。然而，在少數研究論文學理上雖然被證實CTC可以即時且直接地反映病患對於藥物的治療反應，但此方式仍無法廣泛應用，受限於缺乏適合的技術可以將CTC數量放大，少量CTC無法進行精確基因檢測與足夠CTC數量進行藥物測試。而且，體外培養CTC的成功率相當低（小於20%）且須耗時長（六個月以上）。
在一實施例中，一種體外擴增循環腫瘤細胞的方法可包含準備具有多元膠體晶體層的細胞培養容器、準備細胞液、以及將細胞液與多元晶體膠體層接觸，使循環腫瘤細胞附著於多元膠體晶體層並擴增至一既定條件。細胞培養容器包含二維平面以及位於二維平面上的多元膠體晶體層。並且，多元膠體晶體層包含粒徑為1000奈米至5000奈米的第一粒子及粒徑為20奈米至400奈米的第二粒子。細胞液包含培養液以及循環腫瘤細胞。並且，培養液包含血小板裂解液。
在一實施例中，一種用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組包含培養液材料及細胞培養容器。培養液材料用以配置包含血小板裂解液的培養液。細胞培養容器用以容置培養液且包含二維平面以及位於二維平面的多元膠體晶體層。多元膠體晶體層可包含粒徑為1000奈米至5000奈米的第一粒子及粒徑為20奈米至400奈米的第二粒子。
綜上所述，本發明實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組，其利用表面形成有適當粒徑範圍的多元膠體晶體層的細胞培養容器，使循環腫瘤細胞得以附著於其上並可有效率地擴增，並且擴增後的循環腫瘤細胞還可適用於藥物的評估。
參照圖1至圖3，在一些實施例中，一種體外擴增循環腫瘤細胞的方法包括以下流程。首先，準備用以放置細胞液的細胞培養容器10（步驟S10）。在一些實施例中，細胞培養容器10包含基材11與多元膠體晶體層12。基材11具有一二維平面110。多元膠體晶體層12則可位於基材11的二維平面110上。其中，細胞培養容器10可為培養皿（culture dish）、培養盤（culture plate）、玻璃片（glass slide、或塑膠片（plastic slide）等形式。換言之，基材11可為一般培養皿、一般培養盤、玻璃片或塑膠片。舉例來說，細胞培養容器10的基材11可例如但不限於具有至少6個孔槽（6-well）的多孔盤或至多96個孔槽（96-well）的多孔盤。
接著，準備細胞液20（步驟S11）。於此，細胞液20包含循環腫瘤細胞21以及含有血小板裂解液的培養液22。在一實施例中，循環腫瘤細胞21可先自生物體的血液中分離出，然後分離出的循環腫瘤細胞21再與培養液22混合成細胞液20。再另一實施例中，循環腫瘤細胞21可不先進行篩選，而直接將具有循環腫瘤細胞21的血液與培養液22混合成細胞液20。
然後，將細胞液20與細胞培養容器10上的多元膠體晶體層12接觸（如圖4所示）（步驟S12），使在細胞液20中的循環腫瘤細胞21附著於多元膠體晶體層12並增殖至一既定條件（如圖5所示）。在一些實施例中，既定條件可為附著於多元膠體晶體層12的循環腫瘤細胞21在短時間內（小於或等於6周）細胞數即可增殖至初始種入細胞數的20倍以上。例如，在三到四週內，附著於多元膠體晶體層12的循環腫瘤細胞21的細胞數可增殖至20倍以上。舉例來說，於步驟S12之後，以光學顯微鏡觀察多元膠體晶體層12的表面，亦可見循環腫瘤細胞21在多元膠體晶體層上增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處），如圖6所示。
在一些實施例中，多元膠體晶體層12包含二種粒子（以下分別稱之為第一粒子與第二粒子）。第一粒子的粒徑為1000奈米（nm）至5000奈米，第二粒子的粒徑為20奈米至400奈米。
參照圖7，在步驟S1的一些實施例中，可先將第一粒子、第二粒子與溶劑混合形成膠體溶液（步驟S101），再將膠體溶液置於基材11的二維平面110上（步驟S102）。接著，在室溫下乾燥基材11上的膠體溶液，以使膠體溶液乾燥成多元膠體晶體層12（步驟S103）。然後，加熱基材11上的多元膠體晶體層12以使多元膠體晶體層12固定在基材11的二維平面110上（步驟S104）。在步驟S103的一實施例中，基材11上的膠體溶液可靜置至少3小時，以使膠體溶液乾燥成多元膠體晶體層12。於此，乾燥步驟可以室溫或高溫（如，置於烘箱內）進行。在步驟S104的一實施例中，乾燥後的多元膠體晶體層12可透過加熱或交聯的方式而固定在二維平面110上。其中，以交聯方式進行固定步驟時，固定步驟所使用的交聯劑可例如但不限於甲苯（toluene）、苯（benzene）、二甲苯（xylene）、丁酮（methyl ethyl ketone，MEK）、三氯甲烷（Chloroform）、四氫呋喃（Tetrahydrofuran，THF）、二甲基甲醯胺（Dimethylformamide，DMF）、或丙酮（acetone）等。
在一實施例中，第一粒子與第二粒子可為不同材質。在另一實施例中，第一粒子與第二粒子可為不同材質。具體而言，第一粒子的材質與第二粒子的材質可為矽（Si）、聚苯乙烯（polystyrene，PS）、羧酸化聚苯乙烯（carboxylated polystyrene，PSC）、聚苯乙烯磺酸（polystyrene sulfonic acid，PSS)、聚甲基丙烯酸甲酯（poly(methyl methacrylate），PMMA）、明膠（gelatin）、聚己內酯（polycaprolactone，PCL）、聚乳酸－羥基乙酸共聚物（poly（lactic-co-glycolic acid），PLGA）、與其他可替代的高分子材質其中任意一種或任意二種。
在一些實施例中，除了第一粒子與第二粒子外，多元膠體晶體層12還可包括一種或多種其他粒子（如，第三粒子及/或第四粒子）。其中，第三粒子的粒徑不同於第一粒子，且第三粒子的材質不同於第二粒子。具體而言，第三粒子的材質可為Si、PS、PSC、PSS、PMMA、gelatin、PCL、PLGA、與其他可替代的高分子材質其中任意一種。第三粒子的粒徑可為20奈米（nm）至400奈米。
在一些實施例中，培養液22可更包含鹼性纖維母細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）以及表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）。在一些實施例中，培養液22包含至少三種10奈克／毫升（ng／ml）的鹼性纖維母細胞生長因子、10奈克／毫升的表皮生長因子以及3%-20% 的血小板裂解液。舉例來說，培養液22的基底液為DMEM／F12培養基，並且在DMEM／F12培養基中添加10奈克／毫升（ng／ml）的鹼性纖維母細胞生長因子、10奈克／毫升的表皮生長因子以及10% 的血小板裂解液以得到培養液22。在一些實施例中，培養液22還可更包括其他添加劑，如B27添加劑（B27 supplement）。
在一些實施例中，可將前述的細胞培養容器10與用以配置前述培養液22的培養液材料作為一整體的套組或套組中的主要元件。舉例來說，用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組包括前述的細胞培養容器10與用以配置前述培養液22的培養液材料。其中，細胞培養容器10與培養液材料可包裝於一包裝材中。於此，此用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組可用於培養循環腫瘤細胞21並藉以進行藥物的篩選評估。例如，參照圖8，利用前述之體外擴增循環腫瘤細胞的方法及/或前述之用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組培養循環腫瘤細胞21，以使循環腫瘤細胞21快速增殖20倍以上（步驟S20）。在步驟S20的一實施例中，以此用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組之培養液材料來配置含有血小板裂解液的培養液22，然後將循環腫瘤細胞21與配置好的培養液22混合以形成細胞液20。接著，將細胞液20置於用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組的細胞培養容器10中進行培養，直到循環腫瘤細胞21增殖至20倍以上。
於完成培養（步驟S20）後，加入欲評估的藥物候選物加入至擴增後的循環腫瘤細胞21的細胞液20中（步驟S21），並檢測細胞液20中循環腫瘤細胞21的存活率（步驟S22）。最後，判斷此藥物候選物是否能降低循環腫瘤細胞21的存活率（步驟S23）。於此，完成評估程序後，經選擇的藥物候選物可作為優選的治療對應癌症的藥物候選物或藥物。
在一些實施例中，循環腫瘤細胞21為來自小細胞肺癌、肺癌、乳癌、胰臟癌、肝癌、肉瘤、黑色素瘤、食道癌、大腸直腸癌或鼻咽癌的腫瘤細胞。
以下舉例說明各種粒子組合之細胞培養容器10的製備。於此，細胞培養容器10的基材採用一般培養盤於此依據下表1所示之粒子組合選用二種或三種粒子，並將選用的粒子混合成膠體溶液。然後，將膠體溶液置於一般培養盤的孔槽內，而後靜置過夜（即，至少12小時），以使其風乾。接著，將風乾後的培養盤放入烘箱中加熱，以揮發膠體溶液中的水（即形成多元膠體晶體層12）且固定在培養盤的孔槽內的底面上。
表1
第一粒子 第二粒子 第三粒子
材質 粒徑(nm) 材質 粒徑(nm) 材質 粒徑(nm)
Si 2000 PS 65 -- --
Si 2000 PS 100 -- --
Si 2000 PSC 24 -- --
Si 2000 PSC 65 -- --
Si 2000 PSC 93 -- --
Si 2000 PSC 100 -- --
Si 2000 PSC 200 -- --
Si 2000 PSC 220 -- --
Si 2000 PM 68 -- --
Si 2000 PM 100 -- --
Si 2000 PMMA 100 -- --
Si 2000 PMMA 400 -- --
Si 2000 PLGA 200 -- --
Si 2000 PCL 200 -- --
Si 2000 gelatin 200 -- --
Si 5000 PS 65 -- --
Si 5000 PS 200 -- --
Si 5000 PS 400 -- --
Si 5000 PSC 100 -- --
Si 5000 PSC 400 -- --
Si 5000 PM 68 -- --
Si 5000 PM 100 -- --
Si 5000 PM 400 -- --
Si 5000 PMMA 100 -- --
Si 5000 PMMA 400 -- --
PS 2000 PSC 100 -- --
PS 2000 PSC 220 -- --
PS 2000 PMMA 400 -- --
PSC 2000 PSC 22 -- --
PSC 2000 PSC 93 -- --
PSC 2000 PMMA 400 -- --
PSS 2000 PSC 24 -- --
Si 2000 PMMA 400 PSC 93
PSC 2000 PMMA 400 PSC 60
由掃描式電子顯微鏡觀測所形成的多元膠體晶體層，如圖9A至圖36所示。
圖9A及圖9B顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑65奈米的PS粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖10A及圖10B顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑100奈米的PS粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖11顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑24奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖12A及12B顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑65奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖13顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑93奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖14A及圖14B顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑100奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖15A及圖15B顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑200奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖16顯示由粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑220奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖17A及圖17B顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑68奈米的PM粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖18A及圖18B顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑100奈米的PM粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖19顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑400奈米的PMMA粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖20顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑200奈米的PLGA粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖21顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑200奈米的PCL粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖22顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑200奈米的gelatin粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖23A及圖23B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑65奈米的PS粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖24A及圖24B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑200奈米的PS粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖25A及圖25B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑400奈米的PS粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖26A及圖26B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑100奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖27A及圖27B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑400奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖28A及圖28B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑68奈米的PM粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖29A及圖29B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑100奈米的PM粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖30A及圖30B顯示粒徑5000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）與粒徑400奈米的PM粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖31顯示粒徑2000奈米的PSC粒子（即，第一粒子121）與粒徑22奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖32顯示粒徑2000奈米的PSC粒子（即，第一粒子121）與粒徑93奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖33顯示粒徑2000奈米的PSC粒子（即，第一粒子121）與粒徑400奈米的PMMA粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖34顯示粒徑2000奈米的PSS粒子（即，第一粒子121）與粒徑24奈米的PSC粒子（即，第二粒子122）所形成的多元晶體膠體層。圖35顯示粒徑2000奈米的Si粒子（即，第一粒子121）、粒徑400奈米的PMMA粒子（即，第二粒子122）與粒徑93奈米的PSC所形成的多元晶體膠體層。圖36顯示粒徑2000奈米的PSC粒子（即，第一粒子121）、粒徑400奈米的PMMA粒子（即，第三粒子123）與粒徑93奈米的PSC所形成的多元晶體膠體層。
在一些示範例中，細胞液的準備可如下進行。分別自乳癌、胰臟癌和小細胞肺癌三種癌症患者取得其5毫升血液。將15毫升的菲科派克（Ficoll-Paque）添加於Leucosep™分離管中離心，將血液以磷酸鹽緩衝溶液（phosphate buffered saline，PBS）緩衝液稀釋後轉移至Leucosep™分離管，接離心。離心後移除Leucosep™分離管中的上層溶液，保留的下層溶液為單核細胞相。將循環腫瘤細胞富集抗體混合物（RosetteSep™ CTC Enrichment Cocktail Containing AntiCD56）添加於單核細胞相中，並在室溫下混和。混合後，將含有2%（v/v）胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）的PBS緩衝溶液添加於其中並混合成單核細胞溶液。並且，將單核細胞溶液添加於Ficoll－Paque，在室溫離心。接著，從離心後所得的中間分層中取出濃縮的細胞，並以含有2%（v/v）FBS的PBS緩衝溶液清洗濃縮的細胞。於此，得到含有循環腫瘤細胞21（小細胞肺癌、乳癌或胰臟癌）的濃縮細胞液。
將此培養液22加入細胞培養容器10的各孔槽中。接著，將含有循環腫瘤細胞21的濃縮細胞液添加於培養液22中以形成細胞液20並開始進行培養。在培養過程中，部分循環腫瘤細胞21會開始附著於多元膠體晶體層12上並持續增殖，使細胞液20中的循環腫瘤細胞21的細胞數達到10 6個以上。其餘循環腫瘤細胞21懸浮於培養液22中。
參照圖37及圖38，其顯示黑色素瘤的循環腫瘤細胞21依據上述程序在圖25A及圖25B所示之細胞培養容器10中進行培養第10天及第31天的生長情形。於此，培養第10天時，細胞培養容器10的多元膠體晶體層上已有循環腫瘤細胞21貼附且形成聚落（圖中箭頭標示處），如圖37所示。培養第31天時，在細胞培養容器10的多元膠體晶體層上的循環腫瘤細胞21所形成的聚落（圖中箭頭標示處）明顯增加，如圖38所示。
參照圖39及圖40，其顯示肝癌的循環腫瘤細胞21依據上述程序在圖24A及圖24B所示之細胞培養容器10中進行培養第17天及第36天的生長情形。於此，培養第17天時，細胞培養容器10的多元膠體晶體層上已有循環腫瘤細胞21貼附且形成聚落（圖中箭頭標示處），如圖39所示。培養第36天時，在細胞培養容器10的多元膠體晶體層上的循環腫瘤細胞21所形成的聚落（圖中箭頭標示處）明顯增加，如圖40所示。
參照圖41及圖42，其顯示乳癌的循環腫瘤細胞21依據上述程序分別進行培養第17天的生長情形。其中，由圖42可見，擴增後的循環腫瘤細胞21表現Pan-CK、上皮細胞黏附因子（Epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）及DPAI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)）的螢光訊號，但未表現CD45的螢光訊號。參照圖43及圖44，其顯示胰臟癌的循環腫瘤細胞21依據上述程序分別進行培養第25天的生長情形。其中，由圖44可見，擴增後的循環腫瘤細胞21表現Pan-CK、EpCAM及DPAI的螢光訊號，但未表現CD45的螢光訊號。參照圖45及圖46，其顯示小細胞肺癌的循環腫瘤細胞21依據上述程序分別進行培養第39天的生長情形。其中，由圖46可見，擴增後的循環腫瘤細胞21表現突觸素（synaptophysin）、TTF-1（thyroid transcription factor-1；甲狀腺轉錄因子）及DPAI的螢光訊號，但未表現CD45的螢光訊號。
由前述圖示可知，來自乳癌、胰臟癌及小細胞肺癌的循環腫瘤細胞21在多元膠體晶體層12上可以生成許多細胞聚落，生長情形良好且增殖快速。
參照圖47至圖52，其顯示乳癌的循環腫瘤細胞在不同種類的細胞培養容器10上的增殖情形。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑5000奈米的Si粒子與粒徑400奈米的PS粒子之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖47所示，可見在多元膠體晶體層12上明顯具有許多循環腫瘤細胞21增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處）。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑5000奈米的Si粒子與粒徑200奈米的PS粒子之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖48所示，可見在多元膠體晶體層12上明顯具有許多循環腫瘤細胞21增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處）。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑5000奈米的Si粒子與粒徑65奈米的PS之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖49所示，可見在多元膠體晶體層12上明顯具有許多循環腫瘤細胞21增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處）。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑5000奈米的Si粒子與粒徑100奈米的PSC粒子之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖50所示，可見在多元膠體晶體層12上明顯具有許多循環腫瘤細胞21增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處）。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑2000奈米的Si粒子與粒徑65奈米的PS之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖51所示，可見在多元膠體晶體層12上明顯具有許多循環腫瘤細胞21增殖所形成的聚落（圖中箭頭標示處）。乳癌的循環腫瘤細胞21在具有粒徑2000奈米的Si粒子與粒徑100奈米的PSC之多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的增殖情形如圖52所示。由前述圖示可知，循環腫瘤細胞21在各種粒子組合的多元膠體晶體層12的細胞培養容器10上的生長情形都相當旺盛，並形成更多且體積更大的聚落。
參照圖53，其顯示19組循環腫瘤細胞21的擴增週數及存活狀態。以體外擴增循環腫瘤細胞的方法進行細胞擴增，五周後細胞擴增數量大於20倍以上且細胞持續生長之組別視為成功個案，而擴增五周後細胞狀態為死亡之組別視為失敗個案。由圖53可知，於此次實驗中實施的19個案例中有18個個案CTC擴增大於20倍且細胞可持續生長，亦即依據前述之體外擴增循環腫瘤細胞的方法擴增循環腫瘤細胞21的成功比例可達95%（18/19*100%）。
依據上述程序自二位小細胞肺癌病患的血液中分離出循環腫瘤細胞21並且培養完成，再將順鉑（cisplatin）、依託泊苷（etoposide）與癌康定注射劑（Topotecan）以投入所得到的細胞液20中。以發光法細胞活力法（CellTiter Luminescent cell viability）檢測細胞活性，並以下列公式計算細胞存活率。
細胞存活率（%）=（給藥組的冷光值／對照組冷光值）×100%。
參照圖54及圖55，其分別顯示來自此二位小細胞肺癌病患的循環腫瘤細胞21對於cisplatin、etoposide與Topotecan所反應的活性變化。投藥組Cis-1與Cis-2分別表示不同投入量的cisplatin，投藥組Eto-1與Eto-2分別表示不同投入量的etoposide，而投藥組Topo-1與Topo-2分別表示不同投入量的Topotecan，Ctrl表示控制組。
由圖54可知，在cisplatin、etoposide與Topotecan的存在下，第一位病患血液中的循環腫瘤細胞21的存活率均大於85%，與控制組Ctrl相比均無明顯的下降。也就是說，檢測結果顯示cisplatin、etoposide與Topotecan此三種藥物無法抑制此位病患血液中的小細胞肺癌的循環腫瘤細胞21的活性。若與此位病患在臨床上使用cisplatin、etoposide與Topotecan的治療情形相互參照，可以進一步確認此三種藥物對此二位病患的小細胞肺癌並無明顯的治療效果。
由圖55可知，在順cisplatin與topotecan的存在下，第二位病患擴增的循環腫瘤細胞21的存活率低於20%，與控制組Ctrl相比存活率明顯下降。並且，在etoposide的存在下，第二位病患擴增的循環腫瘤細胞21的存活率亦低於控制組Ctrl。若與此位病患在臨床上使用cisplatin、etoposide與Topotecan的治療情形相互參照，可以進一步確認cisplatin與topotecan對此二位病患的小細胞肺癌有良好反應，即具有治療效果。
由此可知，將藥物投入細胞液20中並檢測細胞活性的變化，不僅可以得到與臨床上藥物使用情形一致的結果，甚至可藉此評估並能更準確地篩選出對於個別病患更合適的藥物。
總言之，本發明實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組，其利用表面形成有適當粒徑範圍的多元膠體晶體層的細胞培養容器10，使循環腫瘤細胞21得以附著於其上並可有效擴增。此外，本發明實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組可在小於或等於6週的培養時間內快速增殖至20倍以上循環腫瘤細胞21。再者，本發明實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法及其套組於完成循環腫瘤細胞21的擴後可進一步適用於藥物的評估，藉以快速篩選對應癌症治療相關藥物。
10‧‧‧細胞培養容器
11‧‧‧基材
110‧‧‧二維平面
12‧‧‧多元膠體晶體層
121‧‧‧第一粒子
122‧‧‧第二粒子
123‧‧‧第三粒子
20‧‧‧細胞液
21‧‧‧循環腫瘤細胞
22‧‧‧培養液
AA‧‧‧截線
Ctrl‧‧‧控制組
Cis-1‧‧‧投藥組
Cis-2‧‧‧投藥組
Eto-1‧‧‧投藥組
Eto-2‧‧‧投藥組
Topo-1‧‧‧投藥組
Topo-2‧‧‧投藥組
S10~S12‧‧‧步驟
S101~S104‧‧‧步驟
S20~S23‧‧‧步驟
圖1為本發明一實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法的流程圖。 圖2為本發明一實施例的細胞培養容器的上視圖。 圖3為圖2中AA截線之細胞培養容器的斷面示意圖。 圖4為圖3之細胞培養容器加入細胞液後的實施狀態示意圖。 圖5為圖4之細胞培養容器及細胞液經培養後的狀態示意圖。 圖6為在本發明一實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法下，以光學顯微鏡觀察到之其上具有循環腫瘤細胞的聚落之多元膠體晶體層的表面照片。 圖7為圖1中步驟S10之一示範例的細部流程圖。 圖8為本發明一實施例的藥物的篩選方法的流程圖。 圖9A及圖9B為以掃描式電子顯微鏡（Scanning Electron Microscope； SEM）觀察到之第一示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖10A及圖10B為以SEM觀察到之第二示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖11為以SEM觀察到之第三示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖12A及圖12B為以SEM觀察到之第四示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖13為以SEM觀察到之第五示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖14A及圖14B為以SEM觀察到之第六示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖15A及圖15B為以SEM觀察到之第七示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖16為以SEM觀察到之第八示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖17A及圖17B為以SEM觀察到之第九示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖18A及圖18B為以SEM觀察到之第十示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖19為以SEM觀察到之第十一示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖20為以SEM觀察到之第十二示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖21為以SEM觀察到之第十三示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖22為以SEM觀察到之第十四示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖23A及圖23B為以SEM觀察到之第十五示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖24A及圖24B為以SEM觀察到之第十六示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖25A及圖25B為以SEM觀察到之第十七示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖26A及圖26B為以SEM觀察到之第十八示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖27A及圖27B為以SEM觀察到之第十九示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖28A及圖28B為以SEM觀察到之第二十示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖29A及圖29B為以SEM觀察到之第二十一示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖30A及圖30B為以SEM觀察到之第二十二示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖31為以SEM觀察到之第二十三示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖32為以SEM觀察到之第二十四示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖33為以SEM觀察到之第二十五示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖34為以SEM觀察到之第二十六示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖35為以SEM觀察到之第二十七示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖36為以SEM觀察到之第二十八示範例之多元膠體晶體層的表面照片。 圖37為以200X光學顯微鏡觀察到之黑色素瘤的循環腫瘤細胞在第10天的培養情形的照片。 圖38為以200X光學顯微鏡觀察到之黑色素瘤的循環腫瘤細胞在第31天的培養情形的照片。 圖39為以100X光學顯微鏡觀察到之肝癌的循環腫瘤細胞在第17天的培養情形的照片。 圖40為以100X光學顯微鏡觀察到之肝癌的循環腫瘤細胞在第36天的培養情形的照片。 圖41為在本發明一實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法下，以光學顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞的培養情形的照片。 圖42為圖41中之乳癌的循環腫瘤細胞的Pan-CK、CD45及DPAI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)）之免疫螢光染色照片。 圖43為在本發明一實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法下，以光學顯微鏡觀察到之胰臟癌的循環腫瘤細胞的培養情形的照片。 圖44為圖43中之胰臟癌的循環腫瘤細胞的Pan-CK、CD45及DPAI之免疫螢光染色照片。 圖45為在本發明一實施例的體外擴增循環腫瘤細胞的方法下，小細胞肺癌的循環腫瘤細胞的培養情形的照片。 圖46為圖45中之小細胞肺癌的循環腫瘤細胞的突觸素（synaptophysin）、TTF-1（thyroid transcription factor-1；甲狀腺轉錄因子）、CD45及DPAI之免疫螢光染色照片。 圖47為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖25A及圖25B之多元膠體晶體層上的增殖情形的表面照片。 圖48為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖24A及圖24B之多元膠體晶體層的增殖情形的表面照片圖。 圖49為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖23A及圖23B之多元膠體晶體層上的增殖情形的表面照片圖。 圖50為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖26A及圖26B之多元膠體晶體層上的增殖情形的表面照片圖。 圖51為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖9A及圖9B之多元膠體晶體層上的增殖情形的表面照片圖。 圖52為以顯微鏡觀察到之乳癌的循環腫瘤細胞在圖10A及圖10B之多元膠體晶體層上的增殖情形的表面照片圖。 圖53為19組循環腫瘤細胞的擴增週數及存活狀態的關係圖。 圖54為來自二位小細胞肺癌病患的其中一位病患的循環腫瘤細胞對於順鉑、依託泊苷與癌康定注射劑（Topotecan）所反應的活性變化。 圖55為來自二位小細胞肺癌病患的另一位病患的循環腫瘤細胞對於順鉑、依託泊苷與Topotecan所反應的活性變化。

Claims (10)

  1. 一種體外擴增循環腫瘤細胞的方法，包含： 準備一細胞培養容器，該細胞培養容器包含： 一二維平面；以及 一多元膠體晶體層，位於該二維平面，該多元膠體晶體層包含複數第一粒子及複數第二粒子，該些第一粒子的粒徑為1000奈米至5000奈米，該些第二粒子的粒徑為20奈米至400奈米； 準備一細胞液，該細胞液包含一培養液以及複數循環腫瘤細胞，該培養液包含血小板裂解液；以及 將該細胞液與該多元晶體膠體層接觸，使在該些循環腫瘤細胞附著於該多元膠體晶體層並擴增至一既定條件。
  2. 如請求項1所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其中該些第一粒子的材質與該些第二粒子的材質分別為矽、聚苯乙烯、羧酸化聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、明膠、聚己內酯和聚乳酸－羥基乙酸共聚物其中之任意二種。
  3. 如請求項1所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其中該準備該細胞培養容器的步驟包含： 混合該些第一粒子、該些第二粒子與一溶劑以形成一膠體溶液； 將該膠體溶液置於該二維平面上； 乾燥該二維平面上的該膠體溶液，以使該膠體溶液乾燥成該多元膠體晶體層；以及 將該多元膠體晶體層固定在該二維平面上。
  4. 如請求項1所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其中在該培養液中該血小板裂解液的含量為3%-20%。
  5. 如請求項1所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其中該多元膠體晶體層更包含：複數第三粒子，各該第三粒子的粒徑不同於些該第一粒子，且各該第三粒子的材質不同於該些第二粒子。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，更包含： 加入一藥物候選物至擴增後的該些循環腫瘤細胞的細胞液中； 檢測該細胞液的該些循環腫瘤細胞的存活率；以及 判斷該藥物候選物是否能降低該循環腫瘤細胞的存活率。
  7. 如請求項6所述的體外擴增循環腫瘤細胞的方法，其中該循環腫瘤細胞為來自小細胞肺癌、肺癌、乳癌、胰臟癌、肉瘤、黑色素瘤、肝癌、食道癌、大腸直腸癌或鼻咽癌的腫瘤細胞。
  8. 一種用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組，包含： 一培養液材料，用以配置包含血小板裂解液的培養液；以及 一細胞培養容器，用以容置該培養液，其中該細胞培養容器包含： 一二維平面；以及 一多元膠體晶體層，位於該二維平面，該多元膠體晶體層包含複數第一粒子及複數第二粒子，該些第一粒子的粒徑為1000奈米至5000奈米，該些第二粒子的粒徑為20奈米至400奈米。
  9. 如請求項8所述的用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組，其中該些第一粒子的材質及該些第二粒子的材質為矽、聚苯乙烯、羧酸化聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、明膠、聚己內酯和聚乳酸－羥基乙酸共聚物其中之至少一種。
  10. 如請求項8所述的用於體外擴增循環腫瘤細胞的套組，其中在該培養液中，該血小板裂解液的含量為3%-20%。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7423097B2 (ja) * 2019-11-06 2024-01-29 キャンサー フリー バイオテック リミテッド 循環腫瘍細胞を体外で拡大する方法及びキット、複合材料フィルム、その製造方法、薬物検査法、並びに凍結保存液
CN112920999B (zh) * 2019-12-05 2024-02-06 中山大学孙逸仙纪念医院 一种体外培养乳腺癌循环肿瘤细胞的方法
CN113248748A (zh) * 2020-02-12 2021-08-13 精拓生技股份有限公司 用于体外扩增循环肿瘤细胞的培养容器的复合材料薄膜的制备方法
TW202309275A (zh) * 2021-08-30 2023-03-01 精拓生技股份有限公司 提供用藥建議的方法及其裝置

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103154740A (zh) * 2010-10-14 2013-06-12 维里德克斯有限责任公司 使用多特异性捕获和混合物检测试剂检测胰腺患者中的循环肿瘤细胞的方法和试剂盒
US8669044B2 (en) * 2005-08-11 2014-03-11 University Of Washington Methods and apparatus for the isolation and enrichment of circulating tumor cells

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8669044B2 (en) * 2005-08-11 2014-03-11 University Of Washington Methods and apparatus for the isolation and enrichment of circulating tumor cells
CN103154740A (zh) * 2010-10-14 2013-06-12 维里德克斯有限责任公司 使用多特异性捕获和混合物检测试剂检测胰腺患者中的循环肿瘤细胞的方法和试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Zheng, Fuyin, et al. "Aptamer‐Functionalized Barcode Particles for the Capture and Detection of Multiple Types of Circulating Tumor Cells." Advanced materials 26.43 (2014): 7333-7338. *

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