TWI614021B

TWI614021B - Ｆｐｒ１拮抗劑的衍生物及其用途（一）

Info

Publication number: TWI614021B
Application number: TW104105440A
Authority: TW
Inventors: 黃聰龍; 謝珮文; 黃吟婷; 洪志豪
Original assignee: 長庚大學
Priority date: 2013-10-09
Filing date: 2013-10-09
Publication date: 2018-02-11
Also published as: TW201534322A

Abstract

透過甲醯化胜肽，比如N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸(fMLF)與甲醯化胜肽受體第1型(FPR1)結合，可活化嗜中性白血球；上述反應可以發展成治療無菌性或敗血性發炎疾病的治療標的。如式一之雙胜肽類衍生物，其中R1、R4分別選自氫基(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)、C₁-C₄烷基取代之羥基、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，醯胺基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)氰基之取代、或C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基之取代，酯基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)之取代或苯環上含有C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)其中之一；R2、R3分別選自氫基、羥基、苯基(phenyl group)、吡啶(pyridinyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，或是含有C₁-C₄烷氧基之酯基團，或是在苯環上含有羥基、鹵素、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)或C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)。此外，式一所列的雙胜肽類衍生物其兩對掌中心分別為S與R構型。

Description

FPR1拮抗劑的衍生物及其用途(一)

本申請相關於甲醯化胜肽受體第1型(Formyl Peptide Receptor 1,FPR1)拮抗劑之雙胜肽類衍生物N-(N-芳烷基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters)，及其用於治療涉及FPR1活性之病症。

甲醯化胜肽受體(Formyl peptide receptor,FPR)屬於G蛋白偶聯受體(GPCR)的一種，在人體中FPR受體家族可分成三類；分別為FPR1、FPR2、FPR3。而FPR2與FPR3納入類甲醯化胜肽受體，FPR2又稱為類甲醯化胜肽受體1(FPR-like receptor 1,FPRL-1)，FPR3則稱為類甲醯化胜肽受體2(FPRL-2)。FPR1多存在於單核細胞、多形核白血球(PMN)以及未成熟樹突細胞；而FPR2則存在於肝細胞、肺臟細胞、脾臟細胞、T淋巴球、多形核白血球及單核細胞，其中嗜中性白血球只表現FPR1和FPR2。N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸(N-formyl-L-methionyl-L-leucyl-L-phenylalanine,fMLP或fMLF)屬於N-甲醯胜肽，為一常用於結合在FPR的化學趨化因子進而啟動細胞活化反應並釋放毒殺物質或蛋白酶。fMLF對於FPR三種受體的親和性不同，其中對於FPR1具有較高的親和性(FPR1的EC₅₀為0.1-1nM；FPR2為1M)。當FPR1與配體結合時，使得G蛋白活化，並且依細胞不同可活化下游不同的訊息傳遞路徑，比如鈣離子流、磷脂酵素毒素C、磷脂醯肌醇3-激酶(PI3K)、有絲分裂活化蛋白質激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)及蛋白酪胺酸激酶，使得嗜中性白血球活化進行轉移、呼吸暴破及去顆粒化等作用。因此有文獻指出，FPR1拮抗劑可作為治療嗜中性白血球所誘發的各種發炎疾病；比如氣喘(asthma)、類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis)、乾癬(psoriasis)等。此外，其他文獻亦指FPR1不當的調控會造成牙周炎(periodontitis)、心血管疾病、動脈粥狀硬化、胃癌等疾病。而近年來的研究指出，FPR1能與內生性膜聯蛋白(annexin AI)作用，而活化膠質母細胞瘤癌細胞中表皮生長因子(EGFR)的表現，進而影響該腫瘤細胞的生長與轉移。因此FPR1也可做為膠質母細胞瘤(glioblastoma)的治療標的。

在2010年，Movitz等人的研究指出在多胜肽C端具有色胺酸(tryptophan)與苯丙胺酸(phenylalanine)所形成的雙肽能夠協助此多胜肽選擇性地與FPR1受體結合；然而，此雙肽並無法抑制N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸(fMLF)所誘導的嗜中性白血球細胞的呼吸爆破反應及其相關的超氧自由基的生成。

另外，經由Google專利與Orbit專利資料庫搜尋得知，具有編號EP2490021 A1與WO2012112048 A1等的專利文件載明一系列具有化學式如H-X₁-X₂-OH之雙胜肽類衍生物，其可作用於模式識別受體與G蛋白偶聯受體訊息傳遞路徑。其中兩胺基酸需皆為L(或S)構型。

具有編號US20130109866 A1與WO2013062947 A1的專利文件載明一系列N端具有尿素基團的胺基酸衍生物，其可調節FPRL-1受體，此FPRL-1受體為FPR2受體的別名。

具有編號WO2012074785 A1、WO2013070600 A1、US8440684 B2、WO2013009543 A1、US20120238628 A1、US20110319454 A1與WO2012109544 A1的專利文件皆載明調節FPRL-1受體化合物的技術方案。

由上述可知，FPR1拮抗劑可以調控發炎與腫瘤等疾病，且目前臨床上並無FPR1拮抗劑，故發展FPR1拮抗劑是目前極為重要的。

因此，本發明主要提供一種如式一所示的雙胜肽類衍生物，其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；其中R1、R4分別選自氫基(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)、C₁-C₄烷基取代之羥基、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，醯胺基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)氰基之取代、或C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基之取代，酯基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)之取代或苯環上含有C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)其中之一；R2、R3分別選自氫基、羥基、苯基(phenyl group)、吡啶(pyridinyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，或是含有C₁-C₄烷氧基之酯基團，或是在苯環上含有羥基、鹵素、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)或C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)。其中鹵素係氟、氯、溴、碘等基團。

本發明亦揭露雙胜肽類衍生物對於抑制fMLF所誘導的嗜中性白血球彈性蛋白酶與超氧自由基的生成具有極佳的抑制作用，且具競爭性抑制FPR1下游的訊息傳遞路徑，包含鈣離子、MAPKs以及蛋白質激酶B(protein Kinase B,Akt)。實驗結果指出上述雙胜肽類衍生物具備做為FPR1拮抗劑的潛力。因此本發明所載之雙胜肽類衍生物可進一步開發作為抗發炎疾病藥物。

R₁~R₄‧‧‧雙胜肽類衍生物中的取代基

化合物3-24‧‧‧雙胜肽類衍生物

Sivelestat,EFB-1,Cyclosporin(CycH),WRW4‧‧‧正向控制組

Cs H‧‧‧Cyclosporin H

DMSO‧‧‧二甲基亞碸

HCH6-1‧‧‧雙胜肽類衍生物之某一實施例

FNLFNYK‧‧‧N-formyl-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys-fluorescein

MAPKs(ERK、p38和JNK)及Akt‧‧‧訊息傳遞路徑

圖1(a)~圖1(b)繪示HCH6-1對於人類嗜中性白血球釋放乳酸脫氫酶影響；圖2(a)~圖2(f)繪示HCH6-1選擇性抑制fMLF引發人類嗜中性白血球CD11b表現；圖3(a)~圖3(b)繪示HCH6-1抑制FNLFNYK結合在人類嗜中性白血球膜上的FPR1的效應；圖4(a)~圖4(d)繪示HCH6-1具有顯著的抑制MAPKs(ERK、p38和JNK)及Akt磷酸化。

本發明主要提供一種如式一所示的雙胜肽類衍生物，其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；

其中該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；其中R1、R4分別選自氫基(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)、C₁-C₄烷基取代之羥基、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，醯胺基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)氰基之取代、或C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基之取代，酯基團含有C₁-C₄烷基(alkyl)之取代或苯環上含有C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)其中之一；R2、R3分別選自氫基、羥基、苯基(phenyl group)、吡啶(pyridinyl)、羧酸基團(carboxylic acids group)，或是含有C₁-C₄烷氧基之酯基團，或是在苯環上含有羥基、鹵素、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)或C₁-C₄烷基(alkyl)取代之苯醯基團(benzoyl group)。其中鹵素係氟、氯、溴、碘等基團。

本案之雙胜肽類衍生物N-(N-苄基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylanlanine methyl ester，HCH6-1)是以下列合成方法：流程(scheme)一、流程二、流程三或流程四而得出。流程一可合成化合物2-13，流程二可合成化合物16-24，流程三可合成化合物25-27以及流程四可合成化合物14-15，上述化合物的每一化合物或可進一步區分為主要(major)或次要(minor)產物，於化合物編碼註記主要產物為a與次要產物為b，R₁~R₄為取代基，在藥學上可接受的鹽類溶劑合物或其組合亦可加入雙胜肽類衍生物之中。

流程一是製備N-(N-芳烷基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters)以及其相關衍生物的方法，可合成化合物2-13。該流程一的試劑與反應條件如下：(a)2.0N氫氧化鈉(NaOH)/芳香醯氯(aroyl chlorides)/20小時；(b)D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(D-phenylalanine methyl ester)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時；(c)2.0N氫氧化鈉(NaOH)/苯甲醯氯(benzoyl chloride)20小時；(d)D-苯丙氨醇(D-phenylalaninol)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時。

流程二是製備N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-取代-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-para-substituted-D-phenylalanine methyl esters)與N-(N-苄基-L-色氨醯基)-3-環己基-D-丙氨酸甲酯(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-3-cyclohexyl-D-alanine methyl esters)的方法，可合成化合物16-24。該流程二的試劑與反應條件如下：(a)20%三氟乙酸(TFA)(TFA/DCM=1：4)/30mins；(b)甲醇(MeOH)/濃硫酸(c-H₂SO₄)/迴流2小時；(c)N-苯甲醯-左旋色胺酸(N-benzoyl-L-tryptophan)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時。

流程三是製備N-(N-芳烷基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸氨基乙腈(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine-glycine-nitriles)的方法，可合成化合物25-27。該流程三的試劑與反應條件如下：(a)氨基乙腈(aminoacetonitrile)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(2-(1H-benzotriazol-1-yl-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorophosphate，HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(N,N-Diisopropylethylamine，DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時；(b)20%三氟乙酸(TFA)與二氯甲烷(DCM)依照TFA/DCM=1：4調配之混合物，30mins；(c)N-苯甲醯-左旋色胺酸(N-benzoyl-L-tryptophan)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時。

流程四是製備N-(N-菸鹼基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-nictotinoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters)的方法，可合成化合物14-15。該流程四的試劑與反應條件如下：(a)烟醯氯(nicoinoyl chloride)/吡啶(pyridine)/20小時；(b)1.0M氫氧化鋰/四氫呋喃(THF)1 小時；(c)丙烯酸甲酯D-苯丙胺酸丙烯酸甲酯(D-phenylalanine methyl ester)/苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)/N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/二氯甲烷(DCM)6小時。

本發明中所指賦形劑或稱為『藥學上可接受之載體或賦形劑』、『生物可利用之載體或賦形劑』，係包括溶媒、分散劑、包衣、抗菌或抗真菌劑，保存或延緩吸收劑等任何習知用於製備成劑型之適當化合物。通常此類載體或賦形劑，本身不具備治療疾病之活性，且將本技術所揭示之化合物，搭配藥學上可接受之載體或賦形劑，製備成各劑型，投與動物或人類不致於造成不良反應、過敏或其它不適當反應。因而本技術所揭示之化合物，搭配藥學上可接受之載體或賦形劑，係適用於臨床及人類。『有效劑量』係代表足以改善或防止醫學症狀或生物體狀態之劑量。有效劑量亦說明投與化合物之劑量足供用於診斷之劑量。除非說明書另有敘述，否則『活性化合物』以及『醫藥活性化合物』於此均可替換使用，係指稱一具有製藥學、藥理學或治療以及其他效果之物質。

人類嗜中性白血球彈性蛋白酶(elastase)的釋放測定方法：當嗜中性白血球活化時，會由去顆粒化作用的方式釋放出彈性蛋白酶。將含有彈性蛋白酶專一性受質Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro- Val-p-nitroanilide的嗜中性白血球懸浮液，於37℃與待測化合物作用2分鐘，再加入0.5μg/ml細胞鬆弛素B作用3分鐘來放大反應，最後加入fMLF(30nM)或WKYMVm(1.5nM)反應10分鐘。使用分光光度計於波長405nm下測量吸光值變化，以此評估待測化合物對彈性蛋白酶釋放的影響。測量結果以二甲基亞碸(DMSO)吸光值的改變量作百分比表示。

表一~表六係本案雙胜肽類衍生物、FPR1或FPR2專一性刺激劑所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶(neutrophil elastase)的釋放與超氧自由基(superoxide anion)的生成抑制活性評估結果。

表一係N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters及其衍生物，對於由FPR1專一性刺激劑fMLF所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成抑制活性評估結果。

^a 50%抑制所需的濃度IC₅₀表示成平均值±標準誤差(n=3)

^b Sivelestat & EFB-1為正向控制組

^c 取自文獻值

表二係N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-para-substituted-D-phenylalanine methyl esters與N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-3-cyclohexyl-D-alanine methyl esters對於由FPR1專一性刺激劑fMLF所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成抑制活性評估結果。

^a 50%抑制所需的濃度IC₅₀表示成平均值±標準差(n=3)

^b Sivelestat & EFB-1為正向控制組

表三係N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine-glycine-nitriles對於由FPR1專一性刺激劑fMLP所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成抑制活性評估結果。

^a 50%抑制所需的濃度IC₅₀表示成平均值±標準誤差(n=3)

^b Sivelestat & EFB-1為正向控制組

表四係化合物3、6、24a、與24b分別對於由FPR1專一性刺激劑fMLF與FPR2專一性刺激劑WKYMVm所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成抑制活性評估比較結果。

^a 50%抑制所需的濃度IC₅₀表示成平均值±標準誤差(n=3)

^b Cyclosporin(CycH)& WRW4為正向控制組

表五和表六探討雙胜肽衍生物是否具有抗發炎的作用。由於正鐵細胞色素C無法穿透細胞膜，在細胞外與超氧自由基反應，使正鐵細胞色素C還原，且於波長550nm時有吸光反應，以測量吸光值變化的方式來評估待測化合物對超氧自由基釋放的影響；當嗜中性白血球活化時，會經由去顆粒化作用的方式釋放出彈性蛋白酶。表五和表六是利用具有專一性可與彈性白酶作用的受質(Methoxysucciny-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide)，來評估待測化合物影響彈性蛋白酶的釋放。

表五係化合物3(compound HCH6-1)、化合物6(HCH30-2)、化合物19a(HCH108-4)、化合物19b(HCH108-3)、化合物22a(HCH113-4)、化合物22b(HCH113-3)、化合物24a(HCH99-2)、化合物24b(HCH99-1)、化合物27a(HCH90-2-2)和化合物27b(HCH90-2-1)分別對於由FPR1專一性刺激劑fMLF與FPR2專一性刺激劑WKYMVm所誘導的人類嗜中性白血球超氧自由基的生成抑制活性評估比較結果；表六係化合物3(HCH6-1)、化合物6(HCH30-2)、化合物19a(HCH108-4)、化合物19b(HCH108-3)、化合物22a(HCH113-4)、化合物22b(HCH113-3)、化合物24a(HCH99-2)、化合物24b(HCH99-1)、化合物27a(HCH90-2-2)和化合物27b(HCH90-2-1)分別對於由FPR1專一性刺激劑fMLF與FPR2專一性刺激劑WKYMVm所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放抑制活性評估比較結果。表五和表六之中的IC₅₀表示成平均值±標準誤差(n=4或8)、***p<0.001(相較於控制組)以及Inh%為10μM之下的抑制百分比。

表五

在表五和表六之中，利用fMLF(FPR1活化劑)刺激嗜中性白血球，可得知一系列的雙胜肽衍生物具有抑制人類嗜中性白血球所釋放的超氧自由基及彈性蛋白酶，接著再利用WKYMVm(FPR1/2活化劑)刺激細胞，發現抑制效果減弱，觀察到這些雙胜肽衍生物有選擇性的抑制fMLF所誘導活化的嗜中性白血球。可以從表五和表六觀察到HCH99-2(化合物24a)與HCH6-1(化合物3)抑制效果極佳，IC₅₀分別為0.19±0.07μM和0.32±0.03μM，針對FPR1及FPR1/2選擇性而言，化合物24a相差8倍，化合物3則相差15倍。

以下實施例一~實施例五係本案之雙胜肽類衍生物的製備方法。而實施例六~實施例十三則是針對各種雙胜肽類衍生物進行以下各項活性測試，比如由FPR1專一性刺激劑fMLF與FPR2專一性刺激劑甲醯肽受體(Formyl Peptide Receptor-Like 1 Agonist，WKYMVm)所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶(neutrophil elastase)的釋放與超氧自由基(superoxide anion)的生成抑制活性評估，與其他相關藥理基轉探討等，有關各項活性測試之方法與實驗步驟，及其活性測試結果如下：

【實施例一】N-(N-芳烷基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters，3-7)以及其相關衍生物(化合物8-10、11a及11b)的製備方法：

將1.0當量(equiv)左旋色胺酸(L-tryptophan)或左旋5-羥基色胺酸(L-5-hydroxy-tryptophan)(1.0當量)溶於2N氫氧化鈉(NaOH)溶液中並將反應瓶置於冰浴上，採緩慢滴加方式加入醯基氯化物(acyl chloride)類化合物(1.1當量)於反應液中，滴加完即移至室溫下進行反應。反應3小時後，加入1N氯化氫(HCl)做pH值調整動作，利用pH試紙測定觀察，將pH值調至1~2。接著以氯仿(CHCl₃)進行分配萃取，取得之氯仿層經減壓濃縮後即可得到氮取代左旋色胺酸(N-substituded-L-tryptophan)中間產物。中間產物(1.0當量)與D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(D-phenylalanine methyl ester)(1.0當量)進行反應，以二氯甲烷(dichloromethane)為溶媒，隨後加入HBTU(2.0當量)及DIEA(1.5當量)在室溫下反應6小時，經以溶媒系統正已烷/乙酸乙酯(6：4)或正已烷/丙酮(7：3)分別進行管柱層析純化，即可得到最終產物(化合物3-10、11a及11b)。

N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylanlanine methyl ester(化合物3，又名HCH6-1)

產率52%。白色粉狀固體，熔點：174-176℃。圓二色光譜(c 0.11mM，MeOH)nm(mdeg)：261(-0.43)，253(-0.40)，239(-0.01)，223(0.46)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ 11.79(1H,s,NH),9.41(1H,d,J=8.0Hz, C₁ONH),9.06(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.06(2H,d,J=7.2Hz),7.88(1H,d,J=8.0Hz),7.54(1H,d,J=8.0Hz),7.36-7.12(11H,m),5.67(1H,ddd,J=14.4,7.2,7.2Hz),5.23(1H,ddd,J=14.0,7.2,7.2Hz),3.77(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.63(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.50(3H,s),3.20(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.09(1H,dd,J=13.6,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：

172.9(s),172.5(s),168.0(s),137.7(3×C,s),131.6(d),130.0(2×C,d),129.0(2×C,d),128.9(s),128.7(2×C,d),128.2(2×C,d),127.3(d),124.6(d),122.0(d),119.5(2×C,d),112.2(d),111.4(s),55.5(d),54.6(d),52.0(q),38.2(t),29.20(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：492[M+Na]⁺(100),470[M+1]⁺(44)。高解析度質譜：m/z 492.1901[M+Na]⁺(計算值；C₂₈H₂₇N₃O₄Na 492.1899)。

N-(N-4-氟基苯甲醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-4-Fluorobenzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物4)

產率31%。白色，粉狀固體，熔點：191-193℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ 11.81(1H,s),9.48(1H,d,J=8.0Hz),9.11(1H,d,J=8.0Hz),8.04(2H,dd,J=8.0Hz),7.87(1H,d,J=7.6Hz),7.52(1H,dJ=8.0Hz,H-7),7.32(1H,s),7.26-7.13(7H,m),7.02(2H,t,J=8.6Hz),5.66(1H,ddd,J=14.6,7.2,7.2Hz),5.24(1H,ddd,J=14.2,7.2,7.2Hz),3.75(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.61(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.51(3H,s),3.20(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.09(1H,dd,J=14.2,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ174.4(s),174.0(s),168.4(s),166.4(s,J _C-F=248.0Hz),139.2(2×C,s),133.5(s),132.2(2×C,d,J _C-F=9.0Hz),131.5(2×C,d),130.5(2×C,d),130.4(s),128.8(d),126.1(d),123.5(d),121.0(2×C,d),117.0(2×C,d,J _C-F=22.0Hz),113.7(d),112.9(s),57.1(d),56.1(d),53.6(q),39.7(t),30.7(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：510[M+Na]⁺(100),488[M+1]⁺ (37)。高解析度質譜：m/z 510.1802[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆FN₃O₄Na 510.1805)。

N-(N-4-氯基苯甲醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯 (N-(N-4-Chlorobenzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物5)

產率23%。白色粉狀固體，熔點：191-193℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ 11.82(1H,s),9.48(1H,d,J=7.6Hz),9.18(1H,d,J=8.0Hz),7.96(2H,d,J=8.4),7.85(1H,d,J=8.0Hz),7.51(1H,d,J=8.0Hz),7.28(1H,s),7.26-7.12(9H,m),5.65(1H,ddd,J=14.6,6.8,6.8Hz),5.24(1H,ddd,J=14.0,7.6,7.6Hz),3.74(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.59(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.50(3H,s),3.20(1H,dd,J=13.8,7.6Hz),3.08(1H,dd,J=13.6,7.6Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ 172.8(s),172.5(s),166.9(s),137.7(s),137.3(s),135.7(s),134.2(s),130.0(2×C,d),129.9(2×C,d),129.0(2×C,d),128.9(s),128.8(2×C,d),127.3(d),124.5(d),122.0(d),119.5(2×C,d),112.2(d),111.3(s),55.6(d),54.6(d),52.0(q),38.2(t),29.1(t)。’

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：526[M+Na]⁺(100),504[M+1]⁺(33)。高解析度質譜：m/z 526.1506[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆ClN₃O₄Na 526.1509)。

N-(N-4-甲基苯甲醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-4-Methylbenzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物6)

產率39%。白色粉狀固體，熔點：169-171℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.77(1H,s),9.41(1H,d,J=8.0Hz),8.98(1H,d,J=8.0Hz),8.00(2H,d,J=8.0Hz),7.89(1H,d,J=7.6Hz),7.54(1H,d,J=8.4Hz),7.33(1H,s),7.30-7.14(7H,m),7.05(2H,d,J=7.6Hz),5.69(1H,ddd,J=14.4,6.8,6.8Hz),5.23(1H,ddd,J=14.0,7.2,7.2Hz),3.79(1H,dd,J=14.6,6.8Hz),3.65(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.51(3H,s),3.21(1H,dd,J=13.8, 6.8Hz),3.09(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),2,13(3H,s)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ 174.5(s),174.0(s),169.5(s),143.4(s),139.2(2×C,s),134.3(s),131.5(2×C,d),130.9(2×C,d),130.5(2×C,d),130.4(s),129.8(2×C,d),128.8(d),126.1(d),123.5(d),121.0(2×C,d),113.7(d),112.9(s),57.0(d),56.2(d),53.6(q),39.7(t),30.7(t),22.9(q)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：506[M+Na]⁺(99),484[M+1]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 506.2059[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₄Na 506.2056)。

N-(N-4-甲氧基苯甲醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯 (N-(N-4-Methoxylbenzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物7)

產率47%。白色粉狀固體，熔點：151-153℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.80(1H,s),9.39(1H,d,J=8.0Hz),8.92(1H,d,J=8.0Hz),8.09(2H,d,J=8.4Hz),7.99(1H,d,J=8.0Hz),7.53(1H,d,J=8.0Hz),7.33(1H,s),7.33-7.13(7H,m),6.88(2H,d,J=8.4Hz),5.69(1H,ddd,J=14.4,6.8,6.8Hz),5.23(1H,ddd,J=14.0,7.2,7.2Hz),3.78(1H,dd,J=14.2,6.8Hz),3.64(1H,dd,J=14.6,6.8Hz),3.59(3H,s),3.50(3H,s),3.20(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.09(1H,dd,J=13.6,7.6Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ174.6(s),174.0(s),169.0(s),164.1(s),139.2(2×C,s),131.6(2×C,d),131.5(2×C,d),130.5(2×C,d),130.4(s),129.4(s),128.8(d),126.1(d),123.5(d),121.0(2×C,d),115.6(2×C,d),113.7(d),113.0(s),57.0(q),56.9(d),56.1(d),53.6(q),39.03(t),30.7(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：522[M+Na]⁺(100)，500[M+1]⁺(38)。高解析度質譜：m/z 522.2007[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₅Na 522.2005)。

N-(N-苯乙醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯 (N-(N-Phenylacetyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物8)

產率43%。白色粉狀固體，熔點：182-184℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.76(1H,s),9.34(1H,d,J=8.0Hz),8.98(1H,d,J=8.4Hz),7.81(1H,d,J=8.0Hz),7.53(1H,d,J=8.4Hz),7.33(2H,d,J=7.2Hz),7.27-7.13(11H,m),5.50(1H,ddd,J=14.6,6.8,6.8Hz),5.19(1H,ddd,J=14.0,7.2,7.2Hz),3.75-3.46(4H,m),3.49(3H,s),3.17(1H,dd,J=13.6,6.8Hz),3.05(1H,dd,J=13.8,6.8Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),172.5(s),171.1(s),137.7(s),137.6(s),136.9(s),130.0(2×C,d),129.9(2×C,d),129.0(2×C,d),128.9(s),128.9(2×C,d),127.3(d),127.0(d),124.5(d),121.9(d),119.5(d),119.4(d),112.1(d),111.2(s),54.9(d),54.6(d),52.0(q),43.5(t),38.2(t),29.3(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：506[M+Na]⁺(100),484[M+1]⁺(87)。高解析度質譜：m/z 506.2060[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₄Na 506.2056)。

N-(N-苄基-丙醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-Phenylpropanoyl-L-tryptohhanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物9)

產率24%。白色粉狀固體，熔點：159-161℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.78(1H,s),9.27(1H,d,J=8.0Hz),8.88(1H,d,J=8.4Hz),7.85(1H,d,J=7.6Hz),7.55(1H,d,J=7.6Hz),7.27-7.12(13H,m),5.52(1H,ddd,J=14.8,7.2,7.2Hz),5.21(1H,ddd,J=14.0,7.2,7.2Hz),3.65(1H,dd.J=14.4,6.8Hz),3.50(3H,s),3.50-3.45(1H,m),3.17(1H,J=13.6,6.8Hz),3.09-2.97(3H,m),2.67-2.61(2H,m)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ174.4(s),174.0(s),173.9(s),143.7(s),139.2(2×C,s),131.5(2×C,d),130.5(2×C,d),130.4(d),130.4(d),130.3(2×C,d),128.8(s),128.0(d),126.0(d),123.4(d),121.0(d),120.9(d),113.6(d),112.9(s),56.4(d),56.0(d),53.5(q),39.7(2×C,t),33.7(t),30.8(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：520[M+Na]⁺(100),498[M+1]⁺(39)。高解析度質譜：m/z 520.2215[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₄Na 520.2212)。

N-(N-苄基-碳醯基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-Benzyloxycarbonyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl ester ，化合物10)

產率67%。白色粉狀固體，熔點：147-149℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.76(1H,s),9.32(1H,d,J=7.6Hz),8.63(1H,d,J=8.4Hz),7.88(1H,d,J=7.6Hz),7.54(1H,d,J=8.4Hz),7.32-7.14(13H,m),5.25-5.13(4H,m),3.72(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.55(1H,dd,J=14.8,7.2Hz),3.49(3H,s),3.17(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.07(1H,dd,J=13.8,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.9(s),172.5(s),157.2(s),137.9(s),137.7(2×C,s),130.0(2×C,d),129.0(2×C,d),129.0(d),128.9(2×C,d),128.9(s),128.3(2×C,d),127.3(s),124.6(d),122.0(d),119.5(2×C,d),112.2(d),111.3(s),66.6(t),57.0(d),54.5(d),52.0(q),38.2(t),29.7(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：522[M+Na]⁺(100),500[M+1]⁺(30)。高解析度質譜：m/z 522.2008[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₅Na 522.2005)。

N-(N-苄基-5-羥基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-Benzoyl-5-hydroxy-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters ，化合物11a,11b)

化合物11a：產率23%。白色粉狀固體，熔點：112-114℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.54(1H,s,NH),9.39(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.04(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.06(2H,d,J=7.2Hz),7.74(1H,d,J=2.0Hz),7.47(1H,d,J=8.8Hz),7.35(1H,t,J=7.2Hz),7.29-7.13(9H,m),5.65(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),5.23(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.72(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.59(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.47(3H,s),3.15(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.05(1H,dd,J=13.6,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.3(s),167.7(s),152.4(s),137.4(s),135.5(s),132.2(s),131.4(d),129.8(s),129.8(2×C,d),128.8(2×C, d),128.5(2×C,d),128.0(2×C,d),127.1(d),125.0(d),112.8(d),112.6(d),110.3(s),103.9(d),55.5(d),54.5(d),51.8(q),38.0(t),29.2(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：508[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 508.1850[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₇N₃O₅Na 508.1848)。

化合物11b：產率17%。白色粉狀固體，熔點：110-112℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.53(1H,s,NH),9.41(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.11(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.10(2H,d,J=8.0Hz),7.64(1H,d,J=1.6Hz),7.43(1H,d,J=8.0Hz),7.37(1H,t,J=7.6Hz),7.30(2H,t,J=7.6Hz),7.26(2H,t,J=7.6Hz),7.19-7.13(4H,m),7.08(1H,t,J=8.0Hz),5.65(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),5.21(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.74(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.61(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.55(3H,s),3.27(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.15(1H,dd,J=13.6,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.6(s),172.3(s),167.8(s),152.3(s),137.5(s),135.5(s),132.2(s),131.4(d),129.8(2×C,d),129.7(s),128.7(2×C,d),128.6(2×C,d),128.1(2×C,d),127.0(d),125.0(d),112.8(d),112.5(d),110.3(s),103.9(d),55.2(d),54.5(d),51.9(q),38.2(t),28.9(t)。

【實施例二】N-(N-苄基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨醇(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalaninol，化合物12a-13a及12b-13b)的製備方法如下：

N-苯甲醯-左旋色胺酸(N-benzoyl-L-tryptophan)(1.0當量)或N-苯甲醯-5羥基左旋色胺酸(N-benzoyl-5-hydroxy-L-tryptophan)(1.0當量)各別與DL-2-氨基-3-苯基-1-丙醇(DL-2-Amino-3-phenyl-1-propanol)(1.0當量)及D-phenylalanyl-glycine-nitrile(1.0當量)進行反應，以二氯甲烷(dichloromethane)為溶媒，隨後加入HBTU(2.0當量)及DIEA(1.5當量)在室溫下反應6小時，經分別以溶媒系統甲醇/氯仿(1：20)或乙酸乙酯進行管柱層析純化，即可分別含有化合物12a、12b或13a、13b的混合物；將上述混合物以溶媒系統35%乙腈(MeCN)+0.3%三氟乙酸(TFA)進行高效液相色譜法(HPLC)分離，即可得到最終產物(化合物12a、12b及13a、13b)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-5-羥基-D-苯丙氨醇(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-5-hydroxy-D-phenylalaninol ，化合物12a和12b)

化合物12a：產率16%。白色粉狀固體，熔點：175-177℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.77(1H,s,NH),8.97(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.88(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.05(2H,d,J=7.2Hz),7.89(1H,d,J=8.0Hz),7.51(1H,d,J=8.0Hz),7.36-7.32(4H,m),7.28-7.22(5H,m),7.19(1H,m),7.09(1H,t,J=7.6Hz),5.58(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),5.50(1H,br.s,OH),4.75(1H,m),3.91(2H,m),3.75(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.64(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.15(1H,dd,J=13.4,7.2Hz),3.03(1H,dd,J=13.4,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),167.9(s),139.8(s),137.7(s),135.7(s),131.5(d),130.2(d),129.0(s),128.9(2×C,d),128.7(2×C,d),128.2(2×C,d),126.7(d),124.6(d),121.9(d),119.5(d),119.4(d),112.1(d),111.5(s),63.2(t),55.9(d),53.8(d),37.7(t),29.4(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：464[M+Na]⁺(100),442[M+1]⁺(5)。高解析度質譜：m/z 464.1947[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₇N₃O₃Na 464.1950)。

化合物12b：產率11%。白色粉狀固體，熔點：173-175℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.78(1H,s,NH),9.07(1H,d,J=7.6Hz,NH),8.87(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.09(2H,d,J=7.6Hz),7.85(1H,d,J=8.0Hz),7.52(1H,br.s),7.48(1H,d,J=8.0Hz),7.29(2H,t,J=7.6Hz),7.27(2H,t,J=7.6Hz),7.22-7.15(3H,m),7.09(2H,t,J=8.6Hz),5.62(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),4.71(1H,m),3.87(2H,m),3.80(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.68(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.21(1H,dd,J=13.6,6.8Hz),3.09(1H,dd,J=13.6,6.8Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.5(s),167.8(s),139.6(s),137.5(s),135.5(s),131.4(d),129.9(2×C,d),128.7(s),128.6(2×C,d),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),126.4(d),124.4(d),121.7(d),119.3(d),119.2(d),111.9(d),111.4(s),63.1(t),55.5(d),53.8(d),37.6(t),28.8(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：464[M+Na]⁺(100),442[M+1]⁺(37)。高解析度質譜：m/z 464.1947[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₇N₃O₃Na 464.1950)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨醇(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalaninol ，化合物13a和13b)

化合物13a：產率53%。白色粉狀固體，熔點：151-153℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.53(1H,s,NH),8.96(1H,d,J=7.6Hz,NH),8.82(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.07(2H,d,J=7.6Hz),7.76(1H,s),7.46(1H,d,J=8.4Hz),7.34-7.13(10H,m),5.95(1H,br.s,OH),5.56(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),4.73(1H,m),3.91(1H,dd,J=10.8,5.2Hz),3.85(1H,dd,J=10.8,5.2Hz),3.70(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.60(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.11(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.00(1H,dd,J=13.6,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.5(s),167.6(s),152.4(s),139.5(s),135.5(s),132.2(s),131.4(d),130.1(2×C,d),129.8(s),128.7(2×C,d),128.5(2×C,d),128.0(2×C,d),125.0(d),112.8(d),112.5(d),110.5(s),104.0(d),62.8(t),55.8(d),53.6(d),37.5(t),29.5(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：480[M+Na]⁺(100),458[M+1]⁺(18)。高解析度質譜：m/z 480.1897[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₇N₃O₄Na 480.1899)。

化合物13b：產率25%。白色粉狀固體，熔點：120-122℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.53(1H,s,NH),9.05(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.76(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.10(2H,d,J=7.6Hz),7.71(1H,s),7.55(1H,s),7.46(1H,d,J=8.0Hz),7.38-7.35(3H,m),7.30(2H,t,J=7.6Hz),7.18-7.14(4H,m),7.08(1H,d,J=8.0Hz),5.90(1H,br.s,OH),5.59(1H,dd,J= 14.2,7.2Hz),4.69(1H,m),3.88(1H,dd,J=10.4,5.2Hz),3.82(1H,dd,J=10.4,5.2Hz),3.74(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.64(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.20(1H,dd,J=13.6,7.2Hz),3.07(1H,dd,J=13.6,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.4(s),167.7(s),152.3(s),139.6(s),135.5(s),132.2(s),131.4(d),129.9(2×C,d),129.8(s),128.6(2×C,d),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),126.4(d),125.0(d),112.8(d),112.5(d),110.6(s),104.0(d),63.8(t),55.5(d),53.7(d),37.6(t),28.9(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：480[M+Na]⁺(100),458[M+1]⁺(82)。高解析度質譜：m/z 480.1897[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₇N₃O₄Na 480.1899)。

【實施例三】N-(N-煙醯基-5-羥基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-nicotinoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters，化合物15a及15b)的製備方法如下：

左旋色胺酸丙烯酸甲酯(L-tryptophan methyl ester)(1.0當量)與煙醯氯(nicotinoyl chloride)(1.1當量)進行反應，以吡啶(pyridine)作為溶媒，室溫下反應overnight的時間，經管柱層析進行純化〔溶媒系統MeOH/CHCl₃=1/20〕，得到第一個中間產物N-nicotinoyl-L-tryptophan methyl ester(產率：50.8%)。接著利用1M LiOH(2.0當量)進行皂化反應(saponification)，以四氫呋喃(THF)作溶媒，反應1小時後加入飽和碳酸氫鈉溶液，接著以乙酸乙酯(Ethyl acetate,EA)進行分配萃取，經萃取得到之水層加入1N鹽酸調整pH值至1~2，再做一次萃取動作，得到之EA層經減壓濃縮後即得第二個中間產物N-nicotinoyl-L-tryptophan(產率：93.5%)。最後再將第二個中間產物(1.0當量)與D-phenylalanine methyl ester(1.0當量)進行反應，以二氯甲烷(CH₂Cl₂)為溶媒，在苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)(2.0當量)及N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(1.5當量)作用下在室溫下反應6小時，經以溶媒乙酸乙酯進行管柱層析純化，即可得到最終產物(化合物15a及15b)。

化合物15a：產率30%。白色粉狀固體，熔點：161-162℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ8.88(1H,s),8.66(1H,d,J=4.4Hz),8.21(1H,s,NH),7.98(1H,d,J=8.0Hz),7.72(1H,d,J=7.6Hz),7.35(1H,d,J=7.6Hz),7.31(1H,dd,J=7.8,2.0Hz),7.23-7.12(5H,m),7.08(1H,d,J=7.6Hz),6.85(1H,d,J=6.8Hz),6.35(1H,d,J=8.0Hz,NH),4.95(1H,ddd,J=14.4,7.6,7.6Hz),4.79(1H,dd,J=13.6,6.0Hz),3.63(3H,s),3.40(1H,dd,J=14.4,7.6Hz),3.23(1H,dd,J=14.4,7.6Hz),2.93(1H,dd,J=13.6,6.0Hz),2.82(1H,dd,J=13.6,6.0Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.0(s),171.4(s),165.8(s),152.7(d),148.6(d),136.6(s),136.0(d),135.6(s),129.9(s),129.5(2×C,d),129.0(2×C,d),127.9(s),127.6(d),123.8(d),123.6(d),122.8(d),120.3(d),119.1(d),111.8(d),110.7(d),54.8(d),53.7(d),52.7(q),37.9(t),28.8(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：471[M+1]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 493.1850[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₆N₄O₄Na 493.1852)。

化合物15b：產率6%。白色粉狀固體，熔點：130-132℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ8.88(1H,s),8.69(1H,d,J=4.0Hz),8.25(1H,s,NH),7.99(1H,dd,J=6.0,2.0Hz),7.73(1H,d,J=8.0Hz),7.35-7.31(2H,m),7.20(1H,t,J=8.0Hz),7.13-7.06(6H,m),6.85(2H,d,J=6.8Hz),6.30(1H,d,J=7.6Hz,NH),4.92(1H,dd,J=14.6,7.6Hz),4.73(1H,dd,J=13.6,6.4Hz),3.65(3H,s),3.45(1H,dd,J=14.6,7.6Hz),3.21(1H,dd,J=14.6,7.6Hz),3.01(1H,dd,J=13.6,6.4Hz),2.92(1H,dd,J=13.6,6.4Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ171.8(s),171.1(s),165.7(s),152.8(d),148.6(d),136.7(s),135.9(d),135.5(s),129.9(s),129.5(2×C,d),128.9(2×C,d),127.8(s),127.5(d),124.0(d),123.8(d),122.8(d),120.4(d),119.2(d),111.8(d),110.7(d),54.5(d),53.9(d),52.7(q),38.2(t),28.7(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：471[M+1]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 493.1849[M+Na]⁺(calcd for C₂₇H₂₆N₄O₄Na 493.1852)。

【實施例四】N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-取代-D-苯丙氨酸甲酯(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-para-substituted-D-phenylalanine methyl esters，化合物18a-23a與18b-23b)以及N-(N-苄基-L-色氨醯基)-3-環己基-D-丙氨酸甲酯(N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-3-cyclohexyl-D-alanine methyl esters，24a與24b)的製備方法如下：

二碳酸二叔丁酯-D-苯丙氨酸(Boc-D-phenyl alanine)衍生物(1.0當量)加入20%三氟乙酸(TFA)(TFA/CH₂Cl₂=1/4)切除Boc保護基團，室溫下反應30分鐘，待反應結束後經減壓濃縮除去TFA及溶媒，得到D-苯丙氨酸衍生物。D-苯丙氨酸衍生物或(2R)-2-氨基-3-環己基丙酸(3-Cyclohexyl-D-alanine)加入甲醇(MeOH)做為溶媒，並加入濃硫酸(cone.H₂SO₄)1mL，加熱迴流2小時，進行酯化反應(esterification)。反應結束後加入預先冰浴的逆滲透(RO)水10mL，隨後加入氨水做pH值調整動作，利用pH試紙測定觀察，將pH值調至7-9，接著以氯仿(CHCl₃)進行分配萃取，取得之氯仿(CHCl₃)層經減壓濃縮後即可得到中間產物丙烯酸甲酯D-苯丙胺酸丙烯酸甲酯(D-phenylalanine methyl ester)衍生物。D-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(D-phenylalanine methyl ester)衍生物(1.0當量)與N-苯甲醯-左旋色胺酸(N-benzoyl-L-tryptophan)(1.0當量)衍生物進行反應，以二氯甲烷(CH₂Cl₂)為溶媒，隨後加入苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)(2.0當量)及N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(1.5當量)在室溫下反應6小時，經以溶媒系統正已烷/乙酸乙酯(6：4)分別進行管柱層析純化，即可得到最終產物(化合物18a-24a與18b-24b)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-硝基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-nitro-D-phenylalanine methyl esters(化合物18a和18b)

化合物18a：產率42%。白色粉狀固體，熔點：240-242℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.91(1H,s,NH),9.76(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.24(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.09(2H,d,J=8.0Hz),7.98(2H,d,J=8.0Hz),7.90(1H,d,J=8.0Hz),7.56(1H,d,J=8.0Hz),7.45(1H,s),7.36(1H,t,J=8.0Hz),7.30-7.24(3H,m),7.17-7.14(3H,m),5.66(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),5.31(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.80(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.62(1H,dd, J=14.2,7.2Hz),3.55(3H,s),3.22(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.15(1H,dd,J=13.8,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),171.7(s),167.9(s),147.1(s),145.4(s),137.5(s),135.4(s),131.5(d),130.7(2×C,d),128.6(s),128.6(2×C,d),128.1(2×C,d),124.5(d),123.7(2×C,d),121.9(d),119.4(d),119.3(d),112.1(d),111.2(s),55.5(d),53.8(d),52.1(q),37.5(t),28.9(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：537[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 537.1754[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆N₄O₆Na 537.1750)。

化合物18b：產率8%。白色粉狀固體，熔點：182-184℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.81(1H,s,NH),9.72(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.29(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.10(2H,d,J=8.0Hz),7.97(2H,d,J=8.0Hz),7.74(1H,d,J=8.0Hz),7.49(1H,d,J=8.0Hz),7.44(1H,s),7.41-7.37(3H,m),7.32(2H,t,J=7.6Hz),7.20(1H,t,J=8.0Hz),7.05(1H,t,J=8.0Hz),5.65(1H,dd,J=14.8,7.2Hz),5.31(1H,dd,J=13.6,8.0Hz),3.77(1H,dd,J=14.8,7.2Hz),3.62(3H,s),3.61(1H,dd,J=14.8,7.2Hz),3.39(1H,dd,J=13.6,8.0Hz),3.21(1H,dd,J=13.6,8.0Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ173.0(s),171.9(s),168.0(s),147.1(s),145.4(s),137.5(s),135.4(s),131.6(d),130.9(2×C,d),128.6(2×C,d),128.5(s),128.1(2×C,d),124.4(d),123.7(2×C,d),121.7(d),119.2(d),119.1(d),111.9(d),111.1(s),55.3(d),53.7(d),52.2(q),37.8(t),28.5(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：537[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 537.1753[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆N₄O₆Na 537.1750)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-甲基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-methyl-D-phenylalanine methyl esters ，化合物19a和19b)

化合物19a：產率50%。白色粉狀固體，熔點：185-187℃。圓二色光譜(c 0.18mM,MeOH)nm(mdeg)：232(-1.30),224(-0.28)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.82(1H,s,NH),9.35(1H,d,J=8.0 Hz,NH),9.07(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.04(2H,d,J=8.0Hz),7.87(2H,d,J=8.0Hz),7.53(1H,d,J=7.6Hz),7.36-7.34(2H,m),7.28-7.20(3H,m),7.14(1H,t,J=7.6Hz),7.08(1H,d,J=7.6Hz),6.99(2H,d,J=7.6Hz),5.68(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),5.22(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.80(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.64(1H,dd,J=14.4,6.8Hz),3.52(3H,s),3.16(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.07(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),2.11(3H,s)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.4(s),167.8(s),137.5(s),135.4(s),134.3(s),131.4(d),129.7(2×C,d),129.5(2×C,d),128.7(s),128.5(2×C,d),128.0(2×C,d),124.4(d),121.8(d),119.3(2×C,d),112.0(d),111.2(s),55.3(d),54.5(d),51.9(q),37.6(t),29.0(t),20.9(q)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：506[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 506.2059[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₄Na 506.2056)。

化合物19b：產率16%。白色粉狀固體，熔點：197-199℃。圓二色光譜(c 0.18mM,MeOH)nm(mdeg)：233(1.75),221(-1.81),213(-0.42)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.79(1H,s,NH),9.52(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.16(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.09(2H,d,J=8.0Hz),7.78(2H,d,J=8.0Hz),7.48(1H,d,J=8.0Hz),7.46(1H,d,J=1.6Hz),7.38(1H,t,J=8.0Hz),7.30(2H,t,J=8.0Hz),7.22-7.15(3H,m),7.07(1H,d,J=8.0Hz),6.92(2H,d,J=7.6Hz),5.70(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),5.24(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.80(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.65(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.58(3H,s),3.27(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.14(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),2.04(3H,s)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.5(s),167.9(s),137.5(s),136.2(s),135.3(s),134.3(s),131.4(d),129.7(2×C,d),129.4(2×C,d),128.7(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.7(d),119.2(2×C,d),111.9(d),111.2(s),55.1(d),54.6(d),51.9(q),37.8(t),28.6(t),20.9(q)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：506[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 506.2060[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₉N₃O₄Na 506.2056)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-氟基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-fluoro-D-phenylalanine methyl esters ，化合物20a和20b)

化合物20a：產率45%。白色粉狀固體，熔點：178-180℃。圓二色光譜(c 0.12mM,MeOH)nm(mdeg)：232(-0.76),223(0.68)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.84(1H,s,NH),9.40(1H,d,J=7.6Hz,NH),9.15(1H,d,J=7.6Hz,NH),8.07(2H,d,J=7.6Hz),7.90(2H,d,J=7.6Hz),7.54(1H,d,J=7.6Hz),7.40(1H,s),7.35(1H,t,J=7.2Hz),7.29-7.25(3H,m),7.25-7.20(3H,m),7.15(1H,t,J=7.6Hz),7.08(1H,d,J=6.4Hz),6.89(2H,t,J=8.0Hz),5.68(1H,dd,J=14.2,6.8Hz),5.19(1H,dd,J=13.6,6.8Hz),3.79(1H,dd,J=14.2,6.8Hz),3.65(1H,dd,J=14.2,6.8Hz),3.58(3H,s),3.27(1H,dd,J=13.8,6.8Hz),3.13(1H,dd,J=13.6,6.8Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.1(s),167.9(s),162.1(s,J _C-F=242.2Hz),137.5(s),135.4(s),133.4(s,J _C-F=3.0Hz),131.4(d),128.7(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.9(d),119.3(2×C,d),115.4(2×C,d,J _C-F=21.4Hz),112.0(d),111.2(s),55.4(d),54.4(d),51.9(q),37.1(t),29.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：510[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 510.1808[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆FN₃O₄Na 510.1805)。

化合物20b：產率14%。白色粉狀固體，熔點：184-186℃。圓二色光譜(c 0.12mM,MeOH)nm(mdeg)：233(0.69),221(-0.55)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.80(1H,s,NH),9.60(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.22(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.11(2H,d,J=7.6Hz),7.77(2H,d,J=7.6Hz),7.49(1H,d,J=7.6Hz),7.46(1H,s),7.37(1H,t,J=7.6Hz),7.30(1H,t,J=7.6Hz),7.25-7.20(3H,m),7.06(1H,t,J=7.6Hz),6.89(2H,t,J=8.0Hz),5.68(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),5.22(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.79(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.65(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.58(3H,s),3.27(1H,dd,J=13.8, 7.2Hz),3.13(1H,dd,J=13.8,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),172.3(s),167.9(s),162.1(s,J _C-F=242.0Hz),137.5(s),135.5(s),133.4(s,J _C-F=3.2Hz),131.6(d,J _C-F=8.0Hz),131.5(d),128.6(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.7(d),119.2(d),119.1(d),115.4(2×C,d,J _C-F=21.0Hz),111.9(d),111.2(s),55.2(d),54.4(d),52.0(q),37.3(t),28.6(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：510[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 510.1809[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆FN₃O₄Na 510.1805)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-氯基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-chloro-D-phenylalanine methyl esters ，化合物21a和21b)

化合物21a：產率37%。白色粉狀固體，熔點：190-191℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.86(1H,s,NH),9.42(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.16(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.07(2H,d,J=8.0Hz),7.90(1H,d,J=8.0Hz),7.54(1H,d,J=7.6Hz),7.40(1H,d,J=1.6Hz),7.35(1H,t,J=7.2Hz),7.29-7.23(3H,m),7.19-7.14(3H,m),7.02(2H,d,J=8.0Hz),5.68(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),5.18(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.79(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.64(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.51(3H,s),3.11(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.03(1H,dd,J=14.0,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.0(s),167.9(s),137.5(s),136.2(s),135.5(s),132.6(s),131.5(2×C,d),131.4(2×C,d),128.8(2×C,d),128.7(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.9(d),119.3(2×C,d),112.0(d),111.2(s),55.4(d),54.2(d),51.9(q),37.2(t),29.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：526[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 526.1506[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆ClN₃O₄Na 526.1509)。

化合物21b：產率9%。白色粉狀固體，熔點：174-176℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.80(1H,s,NH),9.62(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.23(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.11(2H,d,J=8.0Hz),7.77(1H,d,J= 8.0Hz),7.49(1H,d,J=8.0Hz),7.46(1H,br.s),7.38(1H,t,J=8.0Hz),7.31(2H,t,J=8.0Hz),7.22-7.19(3H,m),7.14(2H,t,J=8.0Hz),7.06(1H,d,J=8.0Hz),5.68(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),5.22(1H,dd,J=13.8,7.6Hz),3.79(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.64(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.58(3H,s),3.26(1H,dd,J=13.8,7.6Hz),3.12(1H,dd,J=13.8,7.6Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),172.2(s),168.0(s),137.5(s),136.3(s),135.5(s),132.5(s),131.5(d),131.4(2×C,d),128.7(s),128.7(2×C,d),128.6(2×C,d),124.4(d),121.7(d),119.2(d),119.1(d),111.9(d),111.2(s),55.2(d),54.2(d),52.0(q),37.4(t),28.6(t)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-溴基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-bromo-D-phenylalanine methyl esters ，化合物22a和22b)

化合物22a：產率23%。白色粉狀固體，熔點：190-191℃。圓二色光譜(c 0.15mM,MeOH)nm(mdeg)：232(-0.41),223(0.15)nm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.85(1H,s,NH),9.40(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.12(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.07(2H,d,J=7.2Hz),7.90(1H,d,J=7.6Hz),7.54(1H,d,J=7.6Hz),7.41(1H,br.s),7.38-7.32(3H,m),7.28(1H,t,J=7.2Hz),7.24(1H,t,J=7.6Hz),7.15(1H,t,J=8.0Hz),6.97(2H,d,J=8.0Hz),5.67(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),5.17(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.79(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.64(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.51(3H,s),3.09(1H,dd,J=13.8,7.2Hz),3.02(1H,dd,J=13.8,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.0(s),167.8(s),137.5(s),136.7(s),135.4(s),131.8(2×C,d),131.7(2×C,d),131.5(d),128.7(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.9(d),120.9(s),119.3(2×C,d),112.0(d),111.2(s),55.4(d),54.1(d),51.9(q),37.2(t),29.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：570[M+Na]⁺(100),572 [M+2+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 570.1008[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆BrN₃O₄Na 570.1004)。

化合物22b：產率8%。白色粉狀固體，熔點：174-176℃。圓二色光譜(c 0.18mM,MeOH)nm(mdeg)：241(0.49),232(0.24),220(-0.75),214(-0.28)mm。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.81(1H,s,NH),9.62(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.23(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.11(2H,d,J=8.0Hz),7.76(1H,d,J=7.6Hz),7.49(1H,d,J=7.6Hz),7.45(1H,d,J=1.6Hz),7.39(1H,t,J=7.6Hz),7.32(2H,t,J=7.6Hz),7.29(2H,d,J=7.2Hz),7.20(1H,t,J=7.6Hz),7.14(2H,d,J=8.4Hz),7.06(1H,t,J=7.6Hz),5.68(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),5.21(1H,dd,J=13.6,7.6Hz),3.79(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.64(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.58(3H,s),3.24(1H,dd,J=13.6,7.6Hz),3.10(1H,dd,J=13.6,7.6Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),172.1(s),168.0(s),137.5(s),136.8(s),135,5(s),131.8(2×C,d),131.7(2×C,d),131.5(d),128.6(s),128.6(s),128.6(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.7(d),120.9(s),119.2(d),119.1(d),111.9(d),111.2(s),55.2(d),54.2(d),52.0(q),37.4(t),28.6(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：570[M+Na]⁺(100),572[M+2+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 570.1007[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₂₆BrN₃O₄Na 570.1004)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-對-三氟甲基-D-苯丙氨酸甲酯( N-(N-Benzoyl-L-tryptophanyl)-para-trifluoromethyl-D-phenylalanine methyl esters，化合物23a和23b)

化合物23a：產率26%。白色粉狀固體，熔點：233-235℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.88(1H,s,NH),9.50(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.18(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.08(2H,d,J=7.6Hz),7.89(1H,d,J=7.6Hz),7.54(1H,d,J=7.6Hz),7.45(2H,d,J=8.0Hz),7.42(1H,d,J=2.0Hz),7.36(1H,t,J=7.6Hz),7.29-7.23(3H,m),7.19(2H,d,J=8.0Hz),7.15 (1H,t,J=7.6Hz),5.67(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),5.23(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.79(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.63(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.52(3H,s),3.20(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.14(1H,dd,J=14.0,7.2Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.8(s),171.9(s),167.6(s),142.1(s),137.5(s),135.4(s),131.5(d),130.4(2×C,d),128.7(2×C,d),128.6(s,J _C-F=32.2Hz),128.1(2×C,d),125.5(2×C,d,J _C-F=4.0Hz),125.0(s,J _C-F=270.1Hz),124.4(d),121.9(d),119.3(2×C,d),112.0(d),111.3(s),55.4(d),54.0(d),52.0(q),37.5(t),29.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：560[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 560.1776[M+Na]⁺(Calcd for C₂₉H₂₆F₃N₃O₄Na 560.1773)。

化合物23b：產率9%。白色粉狀固體，熔點：187-189℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.81(1H,s,NH),9.72(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.25(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.12(2H,d,J=8.0Hz),7.75(1H,d,J=8.0Hz),7.49(1H,d,J=8.0Hz),7.44(1H,d,J=2.0Hz),7.43(2H,d,J=8.0Hz),7.40-7.37(3H,m),7.31(2H,d,J=8.0Hz),7.20(1H,t,J=8.0Hz),7.05(1H,t,J=8.0Hz),5.67(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),5.25(1H,dd,J=14.0,7.2Hz),3.78(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.62(1H,dd,J=14.4,7.2Hz),3.60(3H,s),3.36(1H,dd,J=13.6,8.0Hz),3.21(1H,dd,J=13.6,8.0Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.9(s),172.0(s),168.0(s),142.2(s),137.5(s),135.4(s),131.5(d),130.5(2×C,d),128.6(2×C,d),128.5(s,J _C-F=32.0Hz),128.1(2×C,d),125.5(2×C,d,J _C-F=4.0Hz),124.9(s,J _C-F=270.0Hz),124.4(d),121.9(d),119.2(d),119.1(d),111.9(d),111.1(s),55.4(d),54.0(d),52.0(q),37.5(t),29.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：560[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 560.1775[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₆F₃N₃O₄Na 560.1773)。

N-(N-苄基-L-色氨醯基)-3-環己基-D-丙氨酸甲酯( N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-3-cyclohexyl-D-alanine methyl esters ，化合物24a和24b)

化合物24a：產率39%。白色粉狀固體，熔點：170-172℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.88(1H,s,NH),9.45(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.07(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.08(2H,d,J=8.4Hz),7.94(1H,d,J=7.6Hz),7.56(1H,d,J=7.6Hz),7.50(1H,br.s),7.35(1H,dt,J=7.6,1.2Hz),7.29-7.23(3H,m),7.14(1H,t,J=7.6Hz),5.72(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),5.00(1H,m),3.86(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.72(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),3.58(3H,s),1.77(1H,m),1.66(2H,m),1.59-1.48(4H,m),1.38(1H,m),1.25-0.96(3H,m),0.84-0.71(2H,m)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ173.7(s),172.9(s),167.7(s),137.5(s),135.5(s),131.4(s),128.7(s),128.5(2×C,d),128.0(2×C,d),124.3(d),121.8(d),119.3(d),119.2(d),112.0(d),111.2(d),55.4(d),51.9(q),50.9(d),39.4(t),34.1(d),33.6(t),32.4(t),29.2(t),26.6(t),26.3(t),26.1(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：498[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 498.2366[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₃₃N₃O₄Na 498.2369)。

化合物24b：產率14%。白色粉狀固體，熔點：109-111℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.82(1H,s,NH),9.67(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.27(1H,d,J=8.0Hz,NH),8.12(2H,d,J=8.0Hz),7.78(1H,d,J=7.6Hz),7.55(1H,br.s),7.49(1H,d,J=7.6Hz),7.35(1H,dt,J=1.2,8.0Hz),7.28(2H,dt,J=1.2,8.0Hz),7.20(1H,t,J=7.6Hz),7.06(1H,t,J=7.6Hz),5.71(1H,dd,J=14.6,7.6Hz),5.12(1H,dd,J=14.6,7.6Hz),3.86(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.71(1H,dd,J=14.6,7.2Hz),3.65(3H,s),1.73(2H,m),1.63(1H,m),1.54-1.41(5H,m),1.13-0.92(3H,m),0.85-0.70(2H,m)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ173.9(s),173.0(s),167.8(s),137.5(s),135.5(s),131.4(s),128.7(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),124.4(d),121.7(d),119.2(2×C,d),111.9(d),111.2(d),55.3(d),52.0(q),50.8(d),39.7(t),34.2(d),33.7(t),32.3(t),28.6(t),26.6(t),26.3(t),26.1(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：498[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 498.2367[M+Na]⁺(calcd for C₂₈H₃₃N₃O₄Na 498.2369)。

【實施例五】N-(N-芳烷基-L-色氨醯基)-D-苯丙氨酸氨基乙腈( N-(N-benzoyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine-glycine-nitriles，化合物27a與27b)的製備方法如下：

二碳酸二叔丁酯-D-苯丙氨酸(Boc-D-phenyl-alanine)(1.0當量)與氨基乙腈(aminoacetonitrile)(1.0當量)進行反應，以二氯甲烷(CH₂Cl₂)為溶媒，隨後加入苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)(2.0當量)及N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(1.5當量)在室溫下反應6小時，經管柱層析進行純化〔溶媒系統乙酸乙酯(EtOAc)/正己烷(n-hexane)=4/6〕，得到第一個中間產物Boc-D-phenylalanyl-glycine-nitrile。接著加入20%三氟乙酸(TFA)(TFA/CH₂Cl₂=1/4)進行切除二碳酸二叔丁酯(Boc)保護基團，室溫下反應30分鐘，經管柱層析進行純化〔溶媒系統甲醇(MeOH)/三氯甲烷(CHCl₃)=1/10〕，得到D-phenylalanyl-glycine-nitrile。N-benzoyl-L-tryptophan(1.0當量)與N-benzoyl-5-hydroxy-L-tryptophan(1.0當量)各別D-phenylalaninol(D-2-amino-3-phenyl-1-propanol)(1.0當量)及D-phenylalanyl-glycine-nitrile(1.0當量)進行反應，以CH₂Cl₂為溶媒，隨後加入苯幷三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)(2.0當量)及N,N-二異丙基乙胺(DIEA)(1.5當量)在室溫下反應6小時，經以溶媒系統正已烷/乙酸乙酯(1：1)進行管柱層析純化，再經過高效液相色譜法(HPLC)分離純化(溶媒系統：65% MeOH+0.3% TFA)，即可得到最終產物(化合物27a與27b)。

化合物27a：產率49%。白色粉狀固體，熔點：167-169℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ1.81(1H,s,NH),9.73(1H,t,J=5.6Hz,NH),9.63(1H,d,J=8.4Hz,NH),8.39(1H,d,J=6.4Hz,NH),8.07(2H,d,J=7.6Hz),7.77(1H,d,J=8.0Hz),7.56(1H,d,J=8.0Hz),7.35(1H,t,J=7.6Hz),7.29-7.23(5H,m),7.20-7.18(3H,m),7.15-7.09(2H,m),5.35-5.29(2H,m),5.00(1H,m),4.47(2H,d,J=5.6Hz),3.70(1H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.61(1H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.33(1H,dd,J=13.6,8.0Hz),3.09(1H,dd,J=13.6,8.0Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ173.2(s),172.7(s),166.8(s),138.1(s),137.5(s),135.5(s),131.7(s),129.7(2×C,d),128.8(2×C,d),128.5(s),128.5(2×C,d),128.2(2×C,d),126.9(d),124.5(d),121.9(d),119.3(d),119.1(d),117.6(s),112.0(s),110.9(s),56.6(d),55.0(d),37.8(t),28.4(t),28.0(t)。

低解析噴灑式質譜(m/z，%)：516[M+Na]⁺(100)。高解析度質譜：m/z 516.2008[M+Na]⁺(calcd for C₂₉H₂₇N₅O₃Na 516.2011)。

化合物27b：產率7%。白色粉狀固體，熔點：195-197℃。

¹H NMR(C₅D₅N)：δ11.80(1H,s,NH),9.76(1H,d,J=8.0Hz,NH),9.63(1H,t,J=5.2Hz,NH),9.10(1H,d,J=7.6Hz,NH),8.07(2H,d,J=8.0Hz),7.74(1H,d,J=8.0Hz),7.49(1H,d,J=8.0Hz),7.44(1H,br.s),7.37(1H,t,J=7.2Hz),7.31-7.25(4H,m),7.18-7.14(3H,m),7.10-7.04(2H,m),5.59(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),5.18(1H,dd,J=14.2,7.2Hz),4.43(1H,dd,J=17.2,5.6Hz),4.32(1H,dd,J=17.2,5.6Hz),3.74(1H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.62(1H,dd,J=14.2,7.6Hz),3.41(1H,dd,J=13.6,8.0Hz),3.18(1H,dd,J=13.6,8.0Hz)。

¹³C NMR(C₅D₅N)：δ172.7(s),172.5(s),168.0(s),137.9(s),137.4(s),135.5(s),131.5(s),129.8(2×C,d),128.8(2×C,d),128.6(s),128.5(2×C,d),128.1(2×C,d),126.9(d),124.5(d),121.7(d),119.2(d),119.1(d),117.5(s),112.0(s),111.0(s),55.4(d),55.3(d),38.4(t),28.5(t),27.8(t)。

【實施例六】人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成抑制活性評估

人類嗜中性白血球的製備：取自年約20-30歲作息正常且禁服藥物達兩周以上之健康捐血者，以含有肝素(heparin)的真空採血管於肘靜脈採血。在室溫下以650g離心8或10分鐘後，移除上層液，再加入等體積3%右旋糖酐(dextran)溶液混合均勻，並於室溫靜置30分鐘。取出含有嗜中性白血球之上層懸浮液加入單核球細胞分離液 (Ficoll-Paque)，於20℃下以400g離心40分鐘。以低張溶液將下層小丸(pellet)中殘餘紅血球脹破，再以4℃、200g離心8分鐘去除上清液，最後將分離出之嗜中性白血球重新懸浮於不含鈣的平衡鹽溶液(HBSS)中進行實驗。

超氧自由基(Superoxide,O₂ ^．-)的釋放測定：由於正鐵細胞色素C(ferricytochrome c)無法穿透細胞膜，在細胞外與超氧自由基反應，使細胞色素c還原，且於波長550nm時有吸光反應，以測量吸光值變化的方式來評估待測化合物對超氧自由基釋放的影響。將含有0.5mg/ml細胞色素c的嗜中性白血球懸浮液(6×10⁵cells/ml)，於37℃與待測化合物作用2分鐘，再加入1μg/ml細胞鬆弛素B(cytochalasin B)作用3分鐘來放大反應，最後加入fMLF(30nM)或WKYMVm(1.5nM)反應10分鐘。使用分光光度計於波長550nm下測量吸光值變化。

【實施例七】細胞毒性測試

在圖1(a)~圖1(b)繪示HCH6-1對於人類嗜中性白血球釋放乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)影響，其實驗條件如下。將嗜中性白血球懸浮液於37℃與不同濃度待測化合物反應15分鐘或固定濃度反應不同時間，另以0.1% Triton X-100反應30分鐘作為總乳酸脫氫酶(Total LDH)釋放量，於4℃、200g離心8分鐘取上清液，加入乳酸脫氫酶試劑於室溫下避光反應15分鐘，於波長492nm下測量吸光值。結果以總乳酸脫氫酶釋放量為100%來計算。

圖1(a)實驗結果顯示HCH6-1抑制fMLF刺激人類嗜中性白血球釋放超氧自由基和彈性蛋白酶的作用，並不是透過毒殺嗜中性白血球所導致的。

圖1(b)顯示：在長時間的狀態下，HCH6-1 30μM與細胞作用至120分鐘仍然不具有顯著的毒性，證明高濃度的HCH6-1與細胞作用120分鐘內是無毒殺細胞的能力。

【實施例八】彈性蛋白酶活性測定

將含有1mM鈣離子的嗜中性白血球懸浮液，於37℃ 下以0.5g/ml細胞鬆弛素B作用2分鐘，最後加入fMLF反應15分鐘後，以4℃、1000g離心5分鐘取上清液。上清液於37℃下與待測化合物作用2分鐘，再加入N-甲氧基琥珀醯-丙醯氨-丙醯氨-脯醯氨-纈氨酸對硝基醯苯胺(N-methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide)100M反應10分鐘。使用分光光度計於波長405nm下測量吸光值變化。

【實施例九】細胞表面CD11b的表現將嗜中性白血球懸浮液在37℃下混勻，預熱5分鐘後加入不同濃度待測化合物，接著加入細胞鬆弛素B(0.5g/ml)反應3分鐘再加入fMLF(30nM)反應10分鐘後置冰上終止反應。離心後去除上清液，將細胞重新懸浮於含5%牛血清白蛋白(BSA)的平衡鹽溶液中，加入異硫氰酸螢光素(FITC)標定的anti-CD11b於冰上避光反應，最後再加入平衡鹽溶液終止反應。利用具異硫氰酸螢光素標定的anti-CD11b，以流式細胞儀來偵測，根據螢光表現量的變化來進一步了解待測化合物是否會影響，受刺激後嗜中性白血球細胞膜上CD11b的表現。結果顯示，在fMLF刺激下，HCH6-1具有濃度相關性的抑制細胞膜上的CD11b的表現，IC₅₀為0.26±0.05μM(請參閱圖2(a)和圖2(b))，然而在Leu-Glu-Ser-Ile-Phe-Arg-Ser-Leu-Leu-Phe-Arg-Val-Met(MMK1)及IL-8刺激之下，HCH6-1並無抑制的作用(請參閱圖2(c)~圖2(f))。

【實施例十】受體測試

嗜中性白血球細胞膜上含有fMLF接受體(formyl peptide receptor 1,FPR1)，藉由會和FPR1結合且具備螢光性質的N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸(Formyl-NIe-Leu-Phe-NIe-Tyr-Lys，FNLFNYK)來與待測化合物做接受體的競爭結合。因此以接受體結合測定，進一步釐清待測化合物是否和接受體作用。在圖3(a)~圖3(b)繪示HCH6-1抑制FNLFNYK結合在人類嗜中性白血球膜上的FPR1的效應，實驗結果顯示，HCH6-1具有濃度相關性的抑制FNLFNYK結合在人類嗜中性白血球膜上的FPR1，IC₅₀為2.02±0.34μM。

【實施例十一】西方墨點法

Mitogen-activated protein kinase(MAPKs)和Akt的磷酸化表現與細胞發炎反應的調控息息相關。藉由專一性抗體的結合，觀察化合物對於不同訊息所激活的蛋白質表現量的影響。在嗜中性白血球中，MAPKs(ERK、p38和JNK)及Akt訊息傳遞路徑參與調控超氧自由基產生以及彈性蛋白酶釋放。並且於先前的實驗得知，HCH6-1具競爭性抑制超氧自由基產生以及彈性蛋白酶釋放。因此，欲探討FPR1下游中MAPKs及Akt訊息傳遞路徑是否參與HCH6-1競爭性抑制超氧自由基產生以及彈性蛋白酶釋放。

圖4(a)~圖4(d)繪示HCH6-1具有顯著的抑制MAPKs(ERK、p38和JNK)及Akt磷酸化，其實驗條件如下：前處理HCH6-1(10μM)5分鐘，接著於fMLF(3-30nM)刺激反應30秒。實驗結果顯示，HCH6-1有抑制細胞內MAPKs及Akt的訊息傳遞，並且在低濃度fMLF(3nM)刺激之下，HCH6-1具有顯著的抑制MAPKs及Akt磷酸化(電泳呈現淺色帶)，間接證明其競爭性的能力(請參閱圖4(a)~圖4(d))。

【實施例十二】統計學分析

本實驗是採用GraphPad Prism軟體(GraphPad Software,San Diego,CA)來進行統計分析。所有的數據是藉由史徒登氏t-試驗(Student’s t-test)或單因子變異數分析(one-way analysis of variance,ANOVA)，並且繼之以特奇氏檢定(Turkey’s test)來作分析，俾以評估各組之間的差異性。若所得到的統計比對結果是p<0.05，則代表有統計學顯著性。

【實施例十三】：一種可治療一嗜中性白血球發炎性障礙的甲醯化胜肽受體第1型(Formyl Peptide Receptor 1,FPR1)拮抗劑，其包括如式一所示的化合物(N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters)：其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R₁選自氫(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)和甲氧基(Methoxy)的其中之一；R₂選自無取代苯基(non-substituted phenyl group)、單取代苯基(mono-substituted phenyl group)、雙取代苯基(di-substituted phenyl group)、三取代苯基(tri-substituted phenyl group)、吡啶(pyridinyl)和C₄-C₆環烷基(cycloalkyl group)的其中之一；R₃選自無取代苯醯基團(non-substituted benzoyl group)、單取代苯醯基團(mono-substituted benzoyl group)、雙取代苯醯基團(di-substituted benzoyl group)和三取代苯醯基團(tri-substituted benzoyl group)的其中之一；以及R₄選自羥基(hydroxyl)、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)和甘氨酸氰(glycin-nitrile)的其中之一。

【實施例十四】：一種具有抑制N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸fMLF所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶釋放與超氧自由基生成的可治療一嗜中性白血球發炎性障礙的甲醯化胜肽受體第1型(Formyl Peptide Receptor 1,FPR1)拮抗劑，其包括如式一所示的化合物(N-(N-aroyl-L-tryptophanyl)-D-phenylalanine methyl esters)：其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R₁選自氫(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)和甲氧基(Methoxy)的其中之一；R₂選自無取代苯基(non-substituted phenyl group)、單取代苯基(mono-substituted phenyl group)、雙取代苯基(di-substituted phenyl group)、三取代苯基(tri-substituted phenyl group)、吡啶(pyridinyl)和C₄-C₆環烷基(cycloalkyl group)的其中之一；R₃選自無取代苯醯基團(non-substituted benzoyl group)、單取代苯醯基團(mono-substituted benzoyl group)、雙取代苯醯基團(di-substituted benzoyl group)和三取代苯醯基團(tri-substituted benzoyl group)的其中之一；以及R₄選自羥基(hydroxyl)、C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)和甘氨酸氰(glycin-nitrile)的其中之一。

【實施例十五】：如實施例十四所述的FPR1拮抗劑，其更包含該式一化合物在藥學上可接受的鹽類溶劑合物或其組合。

【實施例十六】：如實施例十四所述的FPR1拮抗劑，其中該嗜中性白血球發炎性障礙係選自於下列病症所組成之群組：肺損傷、慢性阻塞性肺臟疾病、急性呼吸窘迫症候群、氣喘、缺血性再灌流損傷、關節炎以及敗血病。

【實施例十七】：一種雙胜肽類衍生物，其結構如式一所示，其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R 構型；R₁選自氫(hydrogen atom)、羥基(hydroxyl group)的其中之一；R₂選自無取代苯基(non-substituted phenyl group)、單取代苯基(mono-substituted phenyl group)、雙取代苯基(di-substituted phenyl group)、三取代苯基(tri-substituted phenyl group)、吡啶(pyridinyl)的其中之一；R₃選自無取代苯醯基團(non-substituted benzoyl group)、單取代苯醯基團(mono-substituted benzoyl group)、雙取代苯醯基團(di-substituted benzoyl group)和三取代苯醯基團(tri-substituted benzoyl group)的其中之一；以及R₄選自C₁-C₄烷氧基(alkoxyl)和甘氨酸氰(glycin-nitrile)的其中之一。

【實施例十八】：如實施例十七所述的雙胜肽類衍生物的用途，在於該雙胜肽類衍生物可抑制並拮抗一甲醯化胜肽受體第1型(Formyl Peptide Receptor 1,FPR1)。

【實施例十九】：如實施例十八所述的用途，其中，該雙胜肽類衍生物抑制一類fMIP的衍生物N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸螢光(N-formyl-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys-fluorescein)FNLFNYK結合至該FPR1。

【實施例二十】：如實施例十八所述的用途，其中，該雙胜肽類衍生物抑制FPR1下游鈣離子(Calcium ion)、有絲分裂活化蛋白質激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)和蛋白質激酶B(protein kinase B,Akt)的至少其中之一的訊息傳遞。

【實施例二十一】：如實施例十八所述的用途，其中該雙胜肽類衍生物競爭性抑制一FPR1活化物所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧化基的生成。

【實施例二十二】：如實施例二十一所述的用途，其中：該FPR1活化物係源自於一嗜中性白血球發炎性障礙；以及該嗜中性白血球發炎性障礙係至少一選自於下列病症所組成之群組：肺損傷、慢性阻塞性肺炎、急性呼吸窘迫症候群、氣喘、缺血性再灌流損傷、關節炎以及敗血病。

【實施例二十三】：一種雙胜肽類衍生物，其結構如式一所示，其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R₁選自氫；R₂選自無取代苯基；R₃選自無取代苯醯基團；以及R₄選自C₁烷氧基。

【實施例二十四】：一種雙胜肽類衍生物，其結構如式一所示，其中：該式一化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R₁選自氫；R₂選自C₆環烷基；R₃選自無取代苯醯基團；以及R₄選自C₁烷氧基。

綜上所述，本案以較簡單的合成方法，合成一系列雙胜肽類衍生物，而此雙胜肽類衍生物其兩胺基酸需分別為L(或S)與D(或R)構型，另在N端與C端皆有取代基。實驗發現此系列化合物在人類嗜中性白血球實驗模式下對於抑制由FPR1專一性刺激劑fMLF所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成皆有極佳的抑制作用。但對於由FPR2專一性刺激劑WKYMVm所誘導的人類嗜中性白血球彈性蛋白酶的釋放與超氧自由基的生成雖有抑制效果，但較FPR1專一性刺激劑所誘導的抑制活性明顯降低約3~20倍，顯示此系列新穎的雙胜肽類衍生物對於FPR1具有選擇性的拮抗作用。

若進一步地進行雙胜肽類衍生物的藥理機轉探討，其結果顯示化合物3(HCH6-1)在無細胞系統的實驗中，並無改變超氧自由基和彈性蛋白酶釋放的作用。除此之外，藉由非FPR1刺激劑活化之下，化合物3(HCH6-1)僅具些微的影響。有趣的是，化合物3(HCH6-1)具競爭性抑制FPR1下游的訊息傳遞路徑，包含鈣離子、MAPKs以及Akt。綜合實驗結果可以得知化合物3(HCH6-1)為一選擇性和競爭性地抑制FPR1誘使人類嗜中性白血球活化。符合此假設，HCH6-1具有抑制N-formyl-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys-fluorescein(一種類fMLP的螢光衍生物)結合FPR的能力。於人類嗜中性白血球中，化合物3(HCH6-1)具競爭性的抑制FPR1的能力。

另外，雙胜肽類衍生物在合成的過程中，可分別獲得N端具有(E)-N-benzoyl或(Z)-N-benzoyl取代基團的兩種異構物，上述化合物利用圓二色光譜儀分析結果顯示，具有(E)-N-benzoyl的雙胜肽類衍生物其在波長220nm的科頓效應(Cotton Effect)為負值，而具有(Z)-N-benzoyl的雙胜肽類衍生物其在波長220nm的Cotton effect則為正值。在活性評估上，具有(Z)-N-benzoyl的雙胜肽類衍生物則明顯高於具有(E)-N-benzoyl的雙胜肽類衍生物。

本案雙胜肽衍生物則可抑制fMLF所誘導的嗜中性白血球彈性蛋白酶與超氧自由基的生成具有極佳的抑制作用。且經由進一步藥理活性評估結果顯示，上述雙胜肽類衍生物具競爭性抑制FPR1下游的訊息傳遞路徑，包含鈣離子、MAPKs以及Akt。表一之綜合實驗結果可以得知其中化合物3(HCH6-1)與24a為選擇性和競爭性地抑制FPR1誘使人類嗜中性白血球活化；同時化合物3(HCH6-1)具有抑制一種類fMLF的N-甲醯甲硫氨醯亮氨醯苯丙氨酸螢光衍生物(N-formyl-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys-fluorescein)結合FPR的能力。因此，雙胜肽類衍生物可做為FPR1拮抗劑。

參考文獻

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Claims

一種化合物之用途，其係用以製備可治療經甲醯化胜肽受體第1型(Formyl Peptide Receptor 1,FPR1)媒介之發炎疾病的藥物，該化合物具有如式三所示結構：其中：該式三結構的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R3是苄基(benzyl group)或是環己基甲基(cyclohexylmethyl)。
如請求項1所述化合物之用途，其中該藥物更包含該式三化合物在藥學上可接受的鹽類。
一種化合物，其中：該式三化合物的雙對掌中心(chiral centers)分別為S構型與R構型；R3是苄基(benzyl group)或是環己基甲基。