TWI611809B - 治療或預防氣喘的有效成分 - Google Patents

Abstract

本發明關於一種治療或預防氣喘的有效成分，其中該有效成分為甘油 醛-3-磷酸脫氫酶(G3PDH)之蛋白質片段。也提供該蛋白質片段用於製備具有治療或預防氣喘藥劑的用途。

Description

治療或預防氣喘的有效成分

本發明是關於一種抑制氣喘相關症狀之活性物質的用途，特定而言，該包含該活性物質可用於製備預防或治療氣喘的藥劑。

氣喘是一種常見的呼吸道的慢性炎症性疾病，主要特徵是多變和復發的症狀、可逆性氣流阻塞，和支氣管痙攣。常見症狀表現為喘息、咳嗽、胸腔緊迫胸悶和氣短。

針對氣喘的治療，目前仍以藥物治療為主：如類固醇和抑制肥大細胞釋放發炎物質的藥物、氣管擴張劑和免疫療法等。然而，包括抗發炎藥物和氣管擴張劑在內的藥物治療仍無法真正的改變過敏免疫反應，僅為一種治標的方法。

另一方面，減敏療法雖能改變過敏免疫體質，但是通常需要較長的一段時間，且有時會出現一些副作用，並非所有的病人都能夠使用。

甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde 3-phosphate Dehydrogenase，G3PDH)係自由加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株(簡稱「PM-A0005菌株」)所分離純化而來。根據先前研究，發現甘油醛-3-磷酸脫氫酶具有抗過敏活性，可降低個體過敏反應，因而可開發為治療或預防過敏性疾病之藥劑，例如氣喘。但未進一步探悉其活性部位。

本發明基於發現甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde 3-phosphate Dehydrogenase，G3PDH)具有抗過敏活性，可降低個體氣喘反應，因此進一步探討其調節免疫系統、抑制氣喘症狀的功效及更明確的活性部位，開發其中活性部位為治療或預防氣喘之藥劑。

因此，本發明提供一種甘油醛-3-磷酸脫氫酶之蛋白質片段或其具相同功能的變異體或更小片段用於製備治療或預防氣喘藥劑的用途。

除此此外，本發明所提供之甘油醛-3-磷酸脫氫酶係選自由加氏乳酸桿菌(Lactobacillus gasseri)PM-A0005菌株(簡稱「PM-A0005菌株」)及其萃取物、區分物、次區分物或有效成分所組成的群組；其中該PM-A0005菌株為具有與寄存於台灣新竹食品工業發展研究所寄存編號BCRC 910304菌株功能相同的性質。

根據本發明實施例，係以pET303/CT-PMA5P40-His表現載體為模板，設計3組RCR primer製作出3段約20kD蛋白質片段分別為PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2、及PMA5P40-Frag-3，其中PMA5P40-Frag-3有較好的抑制過敏、氣喘效果，並命名為PMA5P20。其中PMA5P40及各個蛋白質片段之胺基酸序列及DNA序列如下：

PMA5P40胺基酸序列(序列編號：1)：

PMA5P40 DNA序列(序列編號：2)：

PMA5P40-Frag-1胺基酸序列(序列編號：3)：

PMA5P40-Frag-1 DNA序列(序列編號：4)：

PMA5P40-Frag-2胺基酸序列(序列編號：5)：

PMA5P40-Frag-2 DNA序列(序列編號：6)：

PMA5P40-Frag-3胺基酸序列(序列編號：7)：

PMA5P40-Frag-3 DNA序列(序列編號：8)：

根據本發明實施例，PMA5P40-Frag-3可有效誘發小鼠樹突細胞表現IL12p40、IL-10及刺激脾臟細胞表現IFN-γ，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功效。此外，PMA5P40-Frag-3對塵蟎致敏小鼠具有改善呼吸系統阻力、降低氣管壁增厚、減少肺泡細胞浸潤、抑制支氣管內淋巴球增加、及調控發炎因子的功效。因此，本發明提供重組蛋白PMA5P40-Frag-3或其具相同功能 的變異體或片段用於製備降低個體氣喘反應藥劑的用途。

本發明的各種具體實例於下文詳述。本發明的其他特徵將可由下文有關該等各種具體實例的詳細敘述、圖式及申請專利範圍而清楚呈現。

在本發明中所呈現的較佳具體實施例圖示係以闡述本發明為目的。應被理解的是，本發明並不侷限於所示之較佳具體實施例。數據以平均值±SD表示之。其中*：P<0.05、**：P<0.01、***：P<0.001(Student’s t-test)。

圖式中甘油醛-3-磷酸脫氫酶以命名之PMA5P40表示，在小鼠氣喘模型實驗中PMA5P40-Frag-3以PMA5P20表示。

圖1為依據PMAP40製作之3段重組蛋白PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2、及PMA5P40-Frag-3的示意圖。

圖2顯示，PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2、PMA5P40-Frag-3、及PMA5P40(A5P40)重組蛋白與小鼠樹突細胞於37℃共同培養48小時後，取培養液進行IL12p40(圖2A)及IL-10(圖2B)含量測定。

圖3顯示，PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2、PMA5P40-Frag-3、及PMA5P40(A5P40)重組蛋白與小鼠脾臟免疫細胞於37℃共同培養48小時後，取培養液進行IFN-γ含量測定。

圖4顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠呼吸系統阻力(Invasive)的治療性效果測定。(圖4A)呼吸系統阻力(Rrs)，(圖4B)呼吸系統順應性(Ers)。

圖5顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠肺部組織之影響。

圖6顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠之支氣管肺泡細胞之影響。(圖6A)支氣管沖洗液(BALF)總細胞數量，(圖6B)支氣管沖洗液淋巴細胞數量。

圖7顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠血清抗體及DreP專一性抗體之影響。(圖7A)總IgE、(圖7B)專一性IgE、(圖7C)專一性IgG1、及(圖7D)專一性IgG2a。

圖8顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠以PHA刺激脾臟細胞分泌之細胞激素的影響。(圖8A)INF-γ、(圖8B)IL-13、(圖8C)IL-10、(圖8D)IL-12、及(圖8E)IL-4。

圖9顯示PMA5P20(Frag-3)和PMA5P40(P-F)對於塵蟎致敏小鼠以DreP刺激脾臟細胞分泌之細胞激素的影響。(圖9A)INF-γ、(圖9B)IL-13、(圖9C)IL-10、(圖9D)IL-12、及(圖9E)IL-4。

除非另有定義，此處所始有使用的技術及科學名詞具有與本發明所屬技術領域中熟習此技藝者一般所了解的相同含義。此處所使用，如有矛盾的情形，以本文件(包括定義)為準。

本文所使用的「一」乙詞，如未特別指明，係指該冠詞的文法上受詞為一個或一個以上(即至少為一個)。例如「一成份」係指一成份或多於一成份。

本文所使用的「氣喘」乙詞，是指因吸入具有誘發性的過敏原引起無法控制的氣道過度反應，並伴隨呼吸道結構的改變，包括但不限於上皮的增生、黏膜組織的變形、呼吸道平滑肌的增生、以及細胞外基質的增生。

本文所使用的「具相同功能的變異體」乙詞，是指一使用例如重組基因技術而得，藉由一或若干個胺基酸插入、缺失或取代不同於已知蛋白質胺基酸序列但不影響其功能的多肽。例如，胺基酸取代是以另一具有相似結構及/或化學性質之胺基酸置換一胺基酸之結果(意即保守胺基酸置換)。而保守胺基酸取代可基於涉及殘基之極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性及/或兩親性質之相似性而進行。胺基酸插入或胺基酸缺失則較佳在約1至20個胺基酸範圍內，更佳為1至10個胺基酸。允許之變化可係藉由使用重組基因技術在多肽分子中系統地使胺基酸插入、缺失或取代及檢定所得重組變異體之活性及功能實 驗而找出具相同功能之變異體。本文所使用的「具相同功能的片段」乙詞，是指已知蛋白質或具相同功能變異體中提供相同功能的部位的胺基酸片段。例如，抗原決定部位的胺基酸序列。

本文所使用的「可接受」乙詞，是指該載劑必需與組合物的活性成分相容(較佳為能穩定該活性成分)且對被治療個體無害。

本文所使用的「有效量」乙詞，是指相較於未接受此量的對應個體，藥物或藥劑的用量造成所欲的藥理或生理上的結果，或疾病、異常或副作用的治療、治癒、預防、或改善，或減少疾病或異常的發生。服用的有效量或有效劑量可根據所使用的特定有效成分、服用模式、年齡、體型、以及所欲治療個體的條件而改變。藥劑的精確服用量則係依醫師的判斷進行投藥且依個體差異而異。

根據本發明，該重組蛋白PMA5P40-Frag-3係以pET303/CT-PMA5P40-His表現載體當作模板，設計PCR Primers進行甘油醛-3-磷酸脫氫酶片段的序列放大。

根據本發明，發現根據甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde 3-phosphate Dehydrogenase,G3PDH)所製作大小約為20kD之重組蛋白PMA5P40-Frag-3具有非可預期的治療氣喘活性，其具有如序列編號：7或依序列編號：8之核苷酸序列編碼之胺基酸序列。在本發明一具體實例中，針對重組蛋白PMA5P40-Frag-3進行小鼠樹突細胞共培養實驗，顯示重組蛋白PMA5P40-Frag-3可有效誘發小鼠樹突細胞表現IL12p40、IL-10及刺激脾臟細胞表現IFN-γ，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功效。此外，PMA5P40-Frag-3對塵蟎致敏小鼠具有改善呼吸系統阻力、降低氣管壁增厚、減少肺泡細胞浸潤、及調控脾臟發炎因子的功效。因此，本發明提供重組蛋白PMA5P40-Frag-3或其具相同功能的變異體或片段用於製備降低個體氣喘反應藥劑的用途。

依本發明，PMA5P40-Frag-3可依相關重組基因工程技術製備或合成。

因此，本發明提供重組蛋白PMA5P40-Frag-3或其具相同功能的 變異體或片段用於製備降低過敏性疾病以及氣喘藥劑的用途。

根據本發明，以重組蛋白PMA5P40-Frag-3為活性成分可進一步與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物，或一食品組合物。

根據本發明，可依本發明技術領域具有一般通常知識者習知或標準的方法，依需要選用適當的飲食用材料製成口服藥物、食品或飲品。該食品或飲品包括但不限於乳品、發醛乳製品、飲料、運動飲料、營養添加物或保健食品、糖果或是膠質。

一些適當賦形劑的實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、褐藻酸鹽、黃蓍樹膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素、滅菌水、糖漿和甲基纖維素。該組合物可另外包括潤滑劑，例如，滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化和懸浮劑；保存劑，例如，羥基苯甲酸甲酯和丙酯；甜味劑；以及調味劑。

本發明進一步以下列實例說明，其係提供示範的目的而非用以限制本發明。

實例1 蛋白質片段之質體構築

以pET303/CT-PMA5P40-His表現載體當作模板，設計三組PCR Primers進行甘油醛-3-磷酸脫氫酶(PMA5P40)片段的序列放大。甘油醛-3-磷酸脫氫酶為大約40kD的重組蛋白，將其依據(圖1)製作出三段約20kD蛋白質片段，分別是PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2和PMA5P40-Frag-3。以PMA5P40的DNA序列去設計PCR引子(表1)，進行PCR放大DNA片段。再以XbaI和XhoI限制醛素切割表現載體和DNA片段末端，使用T4 DNA連接酶進行結合。最後以XbaI和XhoI進行確認PMA5P40-Frag-1、Frag-2和Frag-3 DNA片段已成功與pET302/CT-His表現載體結合。

實例2 蛋白質片段之表現和純化

將成功結合好之pET303/CT-PMA5P40-Frag-1、pET303/CT-PMA5P40-Frag-2、pET303/CT-PMA5P40-Frag-3轉殖到BL21(DE)宿主菌中，選出含有表現載體ZBL21(DE)菌落放大至5ml含有2mg/ml氨芐青黴素(Ampicliin)的LB培養基，置於37℃培養箱中震盪培養16小時。隔天再由5ml培養菌液中取1ml加入含有2mg/ml氨芐青黴素的200ml LB培養基，置於37℃培養箱中震盪培養，直到OD600到達約0.4時，加入IPTG使最後濃度到達0.1mM，並置於25℃培養箱中震盪培養5小時，5小時後離心以8000rpm 15分鐘將菌泥集中收集後，使用1x PBS清洗過後以4000rpm離心30分鐘後，存放於-20℃。將沉澱菌體懸浮於30ml含6M尿素之binding buffer中，並加入0.3g的lysozyme使濃度達到10mg/ml，少量的DNase以及RNase防止核酸聚集所產生的黏稠，使用sonicator(Misonix Sonicator 3000)進行破菌，每間隔10秒反應10秒，進行15分鐘，功率約在30W-36W之間。將破菌完成之菌液以13500rpm離心25分鐘後，取出上清液使用0.45μm孔徑進行過濾後置於冰上待用，並收集約500μL進行跑膠。接著取上清液加入帶有Ni-NTA膠體的管柱中進行純化，將流過管柱之粗萃取蛋白質液收集500μL待跑膠，接著使用Binding buffer(含6M尿素)50ml及Washing buffer(20mM NaH2PO₄,500mM NaCl,6M尿素，pH6.0)100mL將非專一性蛋白質沖洗出來，並收集500μL待跑膠。使用帶有30mM Imidazole清洗管柱中的雜蛋白，最終使用150mM Imidazole 50mL將目標蛋白質流洗出來後，進行16% SDS-PAGE確定重組蛋白質之純化狀況， 接下來使用1倍的PBS進行透析直到尿素的濃度低於1mM後再使用10kD濃縮管進行濃縮透析。經由到蛋白質定量後確定蛋白濃度。結果顯示成功純化出20kD的PMA5P40-Frag-1約21.71mg、PMA5P40-Frag-2約12.85mg和PMA5P40-Frag-3約36.3mg。

實例3 甘油醛-3-磷酸脫氫酶及其片段蛋白質之功效分析

材料與方法

1.小鼠樹突細胞功效性評估

本實例中甘油醛-3-磷酸脫氫酶以命名之PMA5P40表示。

將小鼠以頸椎脫臼法死亡後，剝除腿部毛皮部份，以剪刀將小鼠腿骨剪下並去除肌肉。準備5~10ml針筒，以culture medium將細胞沖出來，4℃、1500rpm離心10分鐘沉澱細胞。加入1ml的4℃ RBC Lysis buffer處理細胞中之紅血球1分鐘，再加入9ml 1×PBS 4℃、1500rpm離心10分鐘沉澱細胞。用1×PBS在清洗2次後，將細胞懸浮在培養基中，加入1μl/ml之細胞激素IL-4和1.5μl/ml之生長激素GM-CSF混合均勻，促使細胞分化成樹狀細胞。培養8天後將細胞液吸起4℃、1500rpm離心10min沉澱細胞，計算並紀錄樹狀細胞數量，調整細胞數為4×10⁶/ml。並且加入重組蛋白濃度為0.25mM,0.5mM,1mM於37℃共同培養48小時，取培養液以ELISA分析小鼠樹突細胞表現IL-12p40及IL-10情況。

2.小鼠脾臟免疫細胞功效性評估

取老鼠脾臟加入約有200μl 1X PBS的試管中以玻棒搗碎至無脾臟碎片，取2ml 1×PBS到15ml離心管中，將其Pipet均勻後，離心500rpm、1分鐘，使臟器殘渣沉底，將上層液移至事先分好Ficolll的離心管中(需小心沿管壁加入，力道要控制，速度要緩慢)，此時會有分層，不可晃動。以eppendorf垂直式之Rotor離心，720g、25分鐘、溫度設定16℃，離心完後吸取其中間白色塊狀細胞部份到新的15ml離心管。以5ml Pipet將細胞均勻沖散後，離心1500rpm、5分鐘，取6ml 1×PBS，將細胞均勻沖散後，離心1000rpm、5分鐘，取6ml 1×PBS，將細胞均勻沖散後，離心1000rpm、5分鐘去掉上層液。取6ml RPMI-1640 medium，將細胞均勻沖散後，吸取0.1~0.2ml至新的1.5ml tube中，並吸取10μl至另一新1.5ml離管心內含並且加入重組蛋白濃度為0.25mM,0.5mM,1mM於37℃共同培養48小時，取培養液以ELISA分析小鼠脾臟免疫細胞表現IFN-γ情況。

結果

PMA5P40及其片段PMA5P40-Frag-1、PMA5P40-Frag-2、及PMA5P40-Frag-3，均會提高樹突細胞IL-12p40(圖2A)和IL-10(圖2B)及脾臟免疫細胞IFN-γ的分泌量(圖3)，其中PMA5P40-Frag-3提高程度明顯高於其他片段，故確定其功效性。因此，將PMA5P40-Frag-3命名為PMA5P20。

實例4 PMA5P40-Frag-3可治療及預防塵蟎致敏小鼠之過敏氣喘發炎

材料與方法

1.以塵螨致敏小鼠的動物模式製備

本實例中甘油醛-3-磷酸脫氫酶以命名之PMA5P40表示；PMA5P40-Frag-3以PMA5P20表示。

本發明選用6-8週大BALB/c小鼠，每個組別6隻，除空白組外，其餘組別皆以塵螨過敏原(Derp extrat)致敏，兩週後以氣管內投予大量塵螨過敏原誘發氣喘，再依組別進行治療，後測呼吸系統功能並犧牲。

以致敏組小鼠動物模式作為評估PMA5P40對於塵螨過敏原誘發過敏氣喘小鼠的治療性改善效果。不做任何動作，一般正常飼養模式，至第17天測呼吸系統功能並犧牲，稱為空白組(N)；第0天及第7天於腹腔注射Derp(IP)，第8天起連續5天鼻腔滴入Derp(IN)，第14天由氣管嗆入Derp，至第17天測呼吸系統功能並犧牲，稱為致敏DerP組；第0天及第7天IP注射Derp，第8天起連續5天IN滴入Derp，第14天IT嗆入Derp，第15、16天IP注射10ug PMA5P20(Frag-3)，第17天測呼吸系統功能並犧牲，稱為Frag3組；第0天及第7天IP注射Derp，第8天起連續5天IN滴入Derp，第14天IT嗆入Derp，第15、16天IP注射10ug PMA5P40，第17天測呼吸系統功能並犧牲，稱為P-F組。

2.支氣管肺泡沖洗液的收集及白血球分類

以1ml低溫無菌生理食鹽水經由針頭慢慢注入肺部致整個肺完全膨脹再回抽，如此反覆三次後，將沖洗液置於冰上暫存。重複此沖洗步驟，將收集到的肺泡沖洗液(2次共約1.8ml)，以1,200rpm、4℃離心10分鐘。收集上清液保存於-70℃冰箱。將沉澱的細胞經伊紅Y(eosinY)染色並計算細胞數目。取50-100μl支氣管肺泡沖洗液，以cytospin離心機製作細胞抹片，進行劉氏染色(Liu’s stain)並以油鏡觀察白血球及計數。

3.組織切片染色

已固定的組織切片首先脫臘並復水(rehydrate)，浸於蒸餾水後，以0.5%過碘酸反應15分鐘，以自來水沖洗5分鐘，再次浸於蒸餾水後，用希夫氏(Schiff’s)試劑反應5分鐘，自來水沖洗5分後脫水並封片。在光學顯微鏡觀察，醣蛋白及中性黏液呈紅色，細胞核呈現藍色。

4.小鼠呼吸道阻力測量

利用小動物無創呼吸道高反應系統(Unrestrained Whole Body Plethysmography)(BUXCO)進行呼吸道阻力(enhance pulsed)測量，以噴霧的方式給予老鼠0mg/ml，6.25mg/ml，12.5mg/ml，25mg/ml，50mg/ml溶於PBS的甲基膽鹼後，量測呼吸道阻力值(Penh value)做為評估標準。

結果

1.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠呼吸系統阻力(Invasive)之測定

圖4A顯示，相較於N組，經DerP誘導氣喘小鼠呼吸系統阻力(Rrs)顯著地上升，以PMA5P20治療具有顯著改善的功效，P-F組和DerP則無統計上的差異。圖4B顯示，相較於N組，經DerP誘導氣喘小鼠呼吸系統順應性(Ers)顯著地上升，以PMA5P20或PMA5P40治療皆能顯著地降低氣喘小鼠呼吸系統順應性。

2.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠肺部組織之影響

相較於N組，經DerP誘導氣喘小鼠出現嚴重氣管增厚、肺泡細胞浸潤的症狀，以PMA5P20或PMA5P40治療DerP誘導氣喘小鼠明顯降低氣管壁增厚、減少肺泡細胞浸潤(圖5)。

3.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠支氣管肺泡細胞之影響

從支氣管沖洗液(BALF)計算致敏小鼠支氣管肺泡細胞總數及淋巴細胞數量。相較於N組，經DerP誘導氣喘小鼠支氣管肺泡細胞顯著地增加(圖6A)，尤其是巨噬細胞和嗜酸性球(圖6B)，以PMA5P20或PMA5P40治療DerP誘導氣喘小鼠明顯降低嗜酸性球的增加。

4.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠血清抗體及DerP專一性抗體之影響

經DerP誘導氣喘導致小鼠血清中免疫抗體包含總IgE、專一性IgE、專一性IgG1、及專一性IgG2a大幅地增加(圖7A-D)，以PMA5P40治療DerP誘導氣喘小鼠能抑制血清中專一性IgE的產生量；以PMA5P20治療DerP誘導氣喘小鼠能抑制血清中專一性IgE及總IgE的產生量。

5.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠利用PHA刺激脾臟細胞分泌之細胞激素的影響

以PHA刺激塵蟎致敏小鼠之脾臟細胞，導致其分泌之細胞激素包含INF-γ、IL-13、IL-10、及IL-14增加(圖8A-C、E)，以PMA5P20、PMA5P40治療能顯著抑制INF-γ的產生量。

6.PMA5P20對於塵蟎致敏小鼠利用DerP刺激脾臟細胞分泌之細胞激素的影響

以DerP刺激塵蟎致敏小鼠之脾臟細胞，導致其分泌之細胞激素包含INF-γ、IL-13、IL-10、及IL-14顯著地增加(圖9A-C、E)，以PMA5P20治療能顯著抑制INF-γ的產生量；以PMA5P20治療能顯著抑制INF-γ及IL-13的產生量。

總結，經由體外及體內試驗的結果證實甘油醛-3-磷酸脫氫酶之蛋白質片段PMA5P40-Frag-3具有效誘發小鼠樹突細胞表現IL12p40、IL-10及刺激脾臟細胞表現IFN-γ，顯示其具有刺激免疫細胞、調節免疫反應的功效。此外，PMA5P40-Frag-3對塵蟎致敏小鼠具有改善呼吸系統阻力、降低氣管壁增厚、減少肺泡細胞浸潤、及調控脾臟發炎因子的功效。因此可用於治療或預防氣喘的症狀。

咸信本發明所屬技藝中具一般知識者基於本文的敘述，無須進一 步的例示即可將本發明應用至其最廣泛的範圍。因此，應了解此處所提供的敘述及申請專利範圍係供例示目的而非以任何方式限制本發明的範疇。

<110> 東宇生物科技股份有限公司 國立成功大學

<120> 治療或預防氣喘的有效成分

<130> PMD0010TW

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 338

<212> PRT

<213> Lactobacillus gasseri

<400> 1

<210> 2

<211> 1014

<212> DNA

<213> Lactobacillus gasseri

<400> 2

<210> 3

<211> 163

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-1

<400> 3

<210> 4

<211> 489

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-1

<400> 4

<210> 5

<211> 168

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-2

<400> 5

<210> 6

<211> 504

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-2

<400> 6

<210> 7

<211> 175

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-3

<400> 7

<210> 8

<211> 525

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-3

<400> 8

<210> 9

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-1正股引子

<400> 9

<210> 10

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-1反股引子

<400> 10

<210> 11

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-2正股引子

<400> 11

<210> 12

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-2反股引子

<400> 12

<210> 13

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-3正股引子

<400> 13

<210> 14

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> PMA5P40-Frag-3反股引子

<400> 14

Claims (5)

1. 一種甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde 3-phosphate Dehydrogenase，G3PDH)之蛋白質片段PMA5P40-Frag-3用於製備預防或治療氣喘之醫藥組合物的用途，其中該蛋白質片段PMA5P40-Frag-3具有序列編號：7之胺基酸序列或依序列編號：8之DNA序列編碼之胺基酸序列。
2. 如請求項1的用途，其中該蛋白質片段PMA5P40-Frag-3為以包含如序列編號：2之DNA序列為模板，以分別包含序列編號：13及序列編號：14之DNA序列為引子選殖而得。
3. 如請求項1的用途，其中該蛋白質片段PMA5P40-Frag-3可與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑製成一醫藥組合物。
4. 一種具有預防或治療氣喘功效之組合物，包含蛋白質片段PMA5P40-Frag-3與生理上可接受的賦形劑或稀釋劑，其中該蛋白質片段PMA5P40-Frag-3具有序列編號：7之胺基酸序列或依序列編號：8之DNA序列編碼之胺基酸序列。
5. 如請求項4的組合物，其為一食品組合物。