TWI577662B - E - Structureally Benzamide Compounds and Their Pharmaceutical Preparations and Applications - Google Patents

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Description

E構型苯甲醯胺類化合物及其醫藥製劑與應用
本發明係關於一種E構型苯甲醯胺類化合物及其醫藥製劑與應用。
組蛋白去乙醯化酶(histone deacetylase,HDAC)係一種催化脫去組蛋白的賴氨酸(lysine)上乙醯基的酵素，其在染色體濃縮(chromosome condensation)、染色體重排(chromosome rearrangement)及基因調控上扮演著關鍵角色，係表觀遺傳調控(epigenetic regulation)之重要組成部分。HDAC包括四大類(第I至IV類)、18個不同之亞型(第I類：HDAC1、2、3、8；第II類：HDAC4、5、6、7、9、10；第III類：Sirt1-7；第IV類：HDAC11)。HDAC與組蛋白乙醯基轉移酶(histone acetyltransferase,HAT)共同調節組蛋白之乙醯化修飾，HAT對組蛋白上特定賴氨酸殘基進行乙醯化，而HDAC負責移除該賴氨酸殘基修飾。組蛋白之乙醯化會使染色體結構變得鬆弛，從而有利於其它DNA結合蛋白(如轉錄因子等)之結合，因此組蛋白之乙醯化可以啟動特定基因之轉錄過程(染色體之重排)。同時，HDAC亦調節部分非組蛋白類蛋白質受質(substrate)之乙醯化修飾，如轉錄調控因子(P53、NF-κB等)、熱休克蛋白(heat shock protein,Hsp70/90等)以及微管蛋白 (tubulin)等，進一步影響細胞增生及其它生物學過程(Haberland M,Montgomery RL,Olson EN.The many roles of histone deacetylases in development and physiology：implications for disease and therapy.Nat Rev Genet 2009；10(1)：32-42；Khan O,La Thangue NB.HDAC inhibitors in cancer biology：emerging mechanisms and clinical applications.Immunol Cell Biol 2012；90(1)：85-94)。
組蛋白去乙醯化酶抑制劑(histone deacetylase inhibitor,HDAC inhibitor)係近年來抗腫瘤藥物研究領域中的熱點之一。研究顯示，組蛋白去乙醯化酶抑制劑可以有效地抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞分化、誘導腫瘤細胞凋亡和抗腫瘤血管生成，且對於腫瘤細胞之遷移、侵襲和轉移具有抑制作用(Kim HJ,Bae SC.Histone deacetylase inhibitors：Molecular mechanisms of action and clinical trials as anti-cancer drugs.Am J Transl Res 2011；3(20：166-179；John RW.Histone-deacetylase inhibitors：Novel drugs for the treatment of cancer.Nat Rev Drug Discov 2002；1(4)：287-299；Tan J,Zhuang L.Apoptosis signal regulating kinase 1 is a direct target of E2F1 and contributes to histone deacetylase inhibitor induced apoptosis through positive feedback regulation of E2F1 apoptotic activity.J Biol Chem 2006；281(15)：10508-10515；Park KC,Kim SW.Potential anti-cancer activity of N-hydroxy-7-(2-naphthylthio)heptanomide(HNHA),a histone deacetylase inhibitor,against breast cancer both in vitro and in vivo.Cancer Sci 2011；102(2)：343-350)。
組蛋白去乙醯化酶抑制劑依化學結構可被分為四大類，即羥胺酸類(hydroxamic acid)、環四肽類(cyclic tetrapeptide)、短鏈脂肪酸(short chain fatty acid)和苯甲醯胺類(benzamide)。其中羥胺酸類、環四肽類以及短鏈脂肪酸等三大類係屬於HDAC非選擇性抑制劑，其能抑制第I類和第II類之HDAC之所有亞型；已知之苯甲醯胺類化合物則顯示具有靶標作用之選擇性，主要抑制第I類HDAC(包括HDAC1、2、3)，但不抑制HDAC8。
由默克公司開發之Vorinostat(SAHA)係羥胺酸類組蛋白去乙醯化酶抑制劑，在完成第II期臨床試驗後，已於2006年底被美國FDA批准以皮膚T細胞淋巴瘤(cutaneous T-cell lymphoma,CTCL)為適應症而上市應用。由美國Celgene公司開發之Romidepsin(FK228)係環四肽類組蛋白去乙醯化酶抑制劑，於2009年被美國FDA批准上市用於CTCL之治療，於2011年被美國FDA批准上市用於復發性/難治性周邊T細胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma,PTCL)之治療。但由於SAHA和FK228均屬於HDAC非選擇性抑制劑，會同時抑制太多的細胞信號傳遞(signal transduction)，因此，其毒副作用較強，例如，SAHA可導致血栓形成和神經毒性(Duvic M and Vu J.Vorinostat in cutaneous T-cell lymphoma.Drugs Today(Barc)2007,43,585-599)；FK228與用藥有關之3級以上不良反應之發生率高達66%，該不良反應包含心臟毒性(http：//www.istodax.com/pdfs/ISTODAX_ PackageInsert.pdf)。此外，SAHA和FK228這兩個藥物與臨床有效性直接關聯之吸收峰濃度(Cmax)明顯高於其體外抑制正常或腫瘤細胞生長所需之濃度，因此其對正常細胞可能產生直接的細胞毒作用，而非針對腫瘤細胞之表觀遺傳調控作用，因此更進一步地增加了藥物使用之毒副作用，嚴重限制了它們在腫瘤治療中聯合其它不同作用機制藥物進行腫瘤綜合治療之應用(Azad N,et al.The future of epigenetic therapy in solid tumors lessons from the past.Nat Rev Clinic Oncology 2013；10(5)：256-266；GI50 Data of SAHA and FK-228 cited from reference dataset：http：//dtp.nci.nih.gov/index.html；Cmax Cited from prescribing information of ISTODAX®(FK-228)and ZOLINZA®(SAHA))。
由德國Bayer和美國Syndax開發之Entinostat(MS-275)係苯甲醯胺類化合物，臨床前動物試驗顯示，該化合物對血癌、肺癌、直腸癌等具有明顯的抗癌活性(Saito A.A synthetic inhibitor of histone deacetylase,MS-275,with marked in vivo antitumor activity against human tumors.PNAS 1999,96(8)：4592-4597)。雖然MS-275係HDAC選擇性抑制劑，但由於其人體內藥物動力學特性較差(清除半衰期接近100小時、藥物暴露量之個體差異大)，其在第I期臨床試驗中顯示出極差的耐受性，無法提高給藥劑量，因而無法保證其單藥臨床試驗之有效性。
因此，開發具有亞型選擇性和良好人體藥物動力學特性之選擇性組蛋白去乙醯化酶抑制劑就顯得尤為重 要。
本發明專利申請人在美國專利第US7,244,751B2號之實施例2中揭示了一種新的苯甲醯胺類組蛋白去乙醯化酶抑制劑CS02100055，其化學名稱為N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺(N-(2-amino-4-fluorophenyl)-4-[N-(Pyridn-3-ylacryloyl)aminomethyl]benzamide)，該化合物對總組蛋白去乙醯化酶具有抑制活性(IC50：8.4μM)，且對多種腫瘤細胞之生長具有抑制作用。
N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺之結構式中含有亞乙烯基團(-CH=CH-)，依美國專利第US7,244,751B2號之實施2之製備方法所得到的係E構型異構體和Z構型異構體之混合物。US7,244,751B2及其它現有技術皆未揭露該化合物之E構型異構體或Z構型異構體之製備方法和理化參數。
申請文件CN103432077A申請保護N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺與聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone，即聚維酮(povidone))所形成之固體分散體(solid dispersion)，但本案發明申請人發現，申請文件CN103432077A並未真正獲得這種固體分散體。根據申請檔CN103432077A所揭露之資訊，其實施 例1依所引用之文獻(中國新藥雜誌，2004年，第6期，第536-538頁)所製得之化合物係N-(2-氨基-5-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺，並未獲得N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺。因此，其無法獲得N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺與聚乙烯吡咯烷酮之固體分散體。此外，申請檔CN103432077A亦未揭露N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺與聚乙烯吡咯烷酮所形成之固體分散體之任何理化參數(如固體分散體之溶解度數據、溶出度數據或X-射線粉末繞射圖)。
申請文件CN103432077A亦申請保護N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺(N-(2-amino-4-fluorophenyl)-4-[N-(E)-3-(3-pyridyl)acryloyl]aminomethyl]benzamide)與聚乙烯吡咯烷酮形成之固體分散體，但本案發明申請人發現，申請文件CN103432077A並未真正獲得該固體分散體。根據申請檔CN103432077A揭露之資訊，其實施例3依所引用之文獻(美國專利第US7,244,751B2號)所製得的係N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺，並未獲得N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺(即E型異構體)。因此，也就無法獲得N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺與聚乙烯吡咯烷酮之固體分散體。此外，申請檔CN103432077A亦未揭露N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺與聚 乙烯吡咯烷酮形成之固體分散體之任何理化參數(如固體分散體之溶解度數據、溶出度數據或X-射線粉末繞射圖)。
有鑑於現有技術的缺失，本發明之目的在於提供一種具有亞型選擇性之組蛋白去乙醯化酶抑制活性之E構型苯甲醯胺類化合物及其製備方法、醫藥製劑與其於製備治療癌症之藥物之應用。
前述化合物之化學式(I)所示結構，其化學名稱為N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺，在其結構式中，3-吡啶丙烯醯基之構型為E型，
前述化合物之製備方法如下：
(a)將反式-3-(3-吡啶)丙烯酸(trans-3-(3-pyridyl)acrylic acid)與N,N’-羰基二咪唑(N,N'-carbonyldiimidazole,CDI)反應得到(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基咪唑活潑中間體，然後將(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基咪唑與4-氨甲基苯甲酸鈉反應得到4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲酸鈉，再經鹽酸酸化得到4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲酸；
(b)將4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲酸與N,N’-羰基二咪唑(CDI)反應得到4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯咪唑活潑中間體，然後將該4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯咪唑活潑中間體與4-氟鄰苯二胺反應得到N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺。
前述化合物係一種亞型選擇性組蛋白去乙醯化酶抑制劑，主要抑制第I類HDAC中之HDAC1、HDAC2、HDAC3和第IIb類HDAC中之HDAC10，不抑制HDAC6、7及9，且對HDAC8和11之抑制能力較弱。
前述化合物相較於N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺(即E型和Z型混合物)具有更佳的組蛋白去乙醯化酶抑制活性。前述化合物對於HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC10之半抑制濃度(IC50)分別為95nM、160nM、67nM和78nM，而E型和Z型混合物對於HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC10之半抑制濃度則分別為172nM、345nM、129nM和143nM。
前述化合物可以用於治療與組蛋白去乙醯化酶活性異常相關之疾病，如癌症，包括淋巴瘤、實體腫瘤和血液系統腫瘤等。
前述化合物可被加工成常用之醫藥製劑，如片劑、膠囊、針劑等。該醫藥製劑可包含1%~50%化學式(I)之化合物以及50%-~99%之藥用輔料。前述藥用輔料，包括但不限於：《藥用賦形劑手冊》(美國藥學協會，1986年10月)或化學工業出版社出版的《藥用輔料手冊》(Handbook of Pharmaceutical Excipients，原著第四版)所列之載體輔料。
前述化合物在臨床上可以藉由口服或注射方式給藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.01~200mg/kg體重，最佳用藥劑量為每日0.1~50mg/kg體重。
口服固體製劑進入體內後，均需經過溶出過程，方能透過生物膜被生物體吸收。難溶性藥物由於其溶出速率受溶解度限制，會影響生物體對藥物之吸收，因此該難溶性藥物作用緩慢，生物利用度較低。
前述化合物在水中之溶解度極小，幾乎不溶解，生物利用度低。因此，提高其溶出速率以增加生物利用度將具有重要之意義。
本發明提供了一種能改善化學式(I)化合物之水溶性、提高其溶出速率和生物利用度之固體分散體。前述固體分散體包含化學式(I)化合物和水溶性載體材料，化學式(I)化合物與水溶性載體材料之重量比為1：1~1：20。研究顯示，化學式(I)化合物與水溶性載體材料依重量比1：1~1：20進行組合，化學式(I)化合物可以以分子形式或無固定形狀態樣高度分散在水溶性載體材料中，從而大大改善化學式(I)化合物之水溶性，提高其溶出速率和生物利用度。在一些實施例中，化學式(I)化合物與水溶性載體材料之重量比為1：1；在一些實施例中，化學式(I)化合物與水溶性載體材料的重量比為1：5；在另一些實施例中，化學式(I)化合物與水溶性載體材料的重量比為1：20。
較佳的，前述化學式(I)化合物固體分散體中之水溶性載體材料為聚維酮、聚乙二醇(polyglycol)或泊洛沙姆(poloxamer)。
更佳的，前述化學式(I)化合物固體分散體中之水溶性載體材料為聚維酮K30。
本發明亦提供了前述化學式(I)化合物固體分散體之製備方法。前述方法為：分別稱取化學式(I)化合物和水溶性載體材料，加入有機溶劑，加熱至化學式(I)化合物和水溶性載體材料完全溶解，然後蒸去有機溶劑，收集固體，乾燥，粉碎即得。較佳的，前述化學式(I)化合物與水溶性載體材料之重量比為1：1~1：20。
較佳的，前述水溶性載體材料為聚維酮、聚乙二醇或泊洛沙姆。
更佳的，前述水溶性載體材料為聚維酮K30。
較佳的，前述有機溶劑為無水乙醇、95%乙醇、甲醇、乙腈或丙酮。
較佳的，前述化學式(I)化合物與有機溶劑之重量比為1：100~1：1000。
更佳的，前述化學式(I)化合物與有機溶劑之重量比為1：200~1：1000。
在一些實施例中，前述化學式(I)化合物與有機溶劑之重量比為1：200；在一些實施例中，前述化學式(I)化合物與有機溶劑之重量比為1：250；在另一些實施例中，前述化學式(I)化合物與有機溶劑之重量比為1：1000。
較佳的，前述加熱之溫度為60℃~90℃。前述蒸去有機溶劑包括但不限於用旋轉蒸發器(rotary evaporator)減壓蒸去有機溶劑。
較佳的，前述乾燥之溫度為於60℃~80℃，乾燥時間為2小時(h)~8小時。在一些實施例中，乾燥之溫 度與時間為60℃、8小時；在一些實施例中，乾燥之溫度與時間為80℃、2小時；在另一些實施例中，乾燥之溫度與時間為80℃、4小時。
較佳的，前述粉碎為粉碎過60~100目篩。
本發明針對前述化學式(I)化合物固體分散體在水中之溶解度進行檢測，結果顯示化學式(I)化合物在水中之溶解度為4.64μg/mL；而由化學式(I)化合物與聚維酮K30依重量比為1：5製成之固體分散體在水中之溶解度[依化學式(I)化合物計]為66.7μg/mL，相較於未添加聚維酮K30之化學式(I)化合物，其在水中之溶解度增加了14.4倍。結果顯示本發明之化學式(I)化合物固體分散體能增加化學式(I)化合物之溶解度，並加快其溶出速率。
本發明亦採用體外溶出度試驗分別測定化學式(I)化合物及化學式(I)化合物與聚維酮K30依重量比為1：1(實施例7)、1：5(實施例8)以及1：20(實施例9)所製成之固體分散體之溶出情況，四種樣品之取樣量分別為100mg、200mg、600mg和2100mg。測定方法為：依照溶出度測定法(中國藥典2010年版二部附錄X C第二法)，以水1000mL為溶出介質，轉速為50rpm，依該法操作，經45分鐘(min)時，取溶液10mL濾過，取過濾液並用水稀釋20倍以作為測試品溶液；另取化學式(I)化合物約25mg並置於100mL量瓶中，加入95%乙醇適量，經超音波溶解(ultrasonic dissolution)後，稀釋至刻度，並精密移取1mL至50mL量瓶中，用水稀釋成每1mL中約含 5μg之溶液，作為對照品溶液。利用照紫外-可見分光光度法在258nm之波長處測定吸光度，以計算其溶出度。測定結果顯示，化學式(I)化合物之溶出度為4.71%，而實施例7所製備之固體分散體、實施例8所製備之固體分散體和實施例9所製備之固體分散體之溶出度分別為60.3%、79.1%和82.2%，其溶出度均較化學式(I)化合物有顯著改善。
本發明亦採用體外溶出度試驗分別測定依實施例11所製備之含化學式(I)化合物固體分散體之片劑以及採用相同處方依實施例4所製得之含化學式(I)化合物之普通片劑之溶出情況。其測定方法為：取樣品6片，依照溶出度測定法(中國藥典2010年版二部附錄X C第二法)，以水1000mL為溶出介質，轉速為50rpm，依該法操作，經45min時，取溶液10mL濾過，取過濾液作為測試品溶液。另取化學式(I)化合物約25mg並置於100mL量瓶中，加入95%乙醇適量，經超音波溶解後，稀釋至刻度，並精密移取1mL至50mL量瓶中，用水稀釋成每1mL中約含5μg之溶液，作為對照品溶液。利用照紫外-可見分光光度法在258nm之波長處測定吸光度，以計算其溶出度。測定結果顯示，實施例11所製備之含化學式(I)化合物固體分散體之片劑之溶出度為99.4%，而實施例4製得之普通片劑之溶出度為57.8%。因此，實施例11所製備含化學式(I)化合物固體分散體之片劑之溶出度顯著提高，且其幾乎完全溶出。
本發明亦採用X-射線粉末繞射法對所製備之 化學式(I)化合物固體分散體進行分析。在化學式(I)化合物之X-射線粉末繞射圖中，其於3~50度區域有強繞射峰(diffraction peak)(圖1)。在實施例7所製備之固體分散體、實施例8所製備之固體分散體和實施例9所製備之固體分散體之X-射線粉末繞射圖中，其於3~50度區域，並無化學式(I)化合物之特徵繞射峰，且呈現無定形固體之特徵彌散峰(diffuse peak)(圖2、圖3和圖4)。在聚維酮K30之X-射線粉末繞射圖中，其於3~50度區域，呈現無定形固體之特徵彌散峰(圖5)。在化學式(I)化合物與聚維酮K30之機械混合物(重量比分別為1：1、1：5和1：20)之X-射線粉末繞射圖中，仍然可以觀察到化學式(I)化合物之特徵繞射峰(圖6、圖7和圖8)。試驗顯示，在本發明之固體分散體中，化學式(I)化合物係高度分散在載體材料中，且以分子形式或無定形狀態分散在其中。
本發明之化學式(I)化合物固體分散體可以和常規的藥用輔料組合以製成具有治療癌症功能之醫藥製劑，其包括口服固體製劑，如片劑、膠囊劑或顆粒劑等。前述醫藥製劑可以含5wt%~50wt%之化學式(I)化合物固體分散體以及50wt%~95wt%之藥用輔料。前述藥用輔料，包括助流劑、崩解劑(disintegration agent)及填充劑。前述助流劑包含滑石粉、硬脂酸鎂、微粉矽膠(silicon dioxide)等；前述崩解劑包含羧甲基澱粉鈉(sodium carboxymethyl starch)、交聯聚維酮(crosslinking povidone)、低取代羥丙基纖維素(low-substituted hydroxypropyl cellulose)；前述填充劑包含乳糖、微晶纖維素、澱粉等。
本發明將化學式(I)化合物與聚維酮K30依重量比1：5所製成之固體分散體之片劑進行臨床療效測試。治療復發或難治性周邊T細胞淋巴瘤之關鍵性第II期臨床試驗顯示，總緩解率為32.9%，與用藥有關之3級以上不良反應之發生率為39%，毒副作用遠低於Romidepsin。治療皮膚T細胞淋巴瘤之第II期臨床試驗顯示，總緩解率為32.0%。結合紫杉醇和卡鉑(carboplatin)治療非小細胞肺癌之第Ib期臨床試驗顯示，總緩解率為10%，5個有腦轉移病灶之患者經治療後，其中有2個病例患者之腦轉移灶全部消失。臨床試驗顯示，由化學式(I)化合物固體分散體所製成之口服製劑，在臨床上對癌症病人有較好之療效。前述癌症包含淋巴瘤、實體腫瘤或血液系統腫瘤，較佳的，前述癌症包含周邊T細胞淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤及肺癌。
本發明將化學式(I)化合物與聚維酮K30依重量比1：5製成之固體分散體之片劑進行33例晚期淋巴瘤患者(21例係PTCL、12例係CTCL)口服30mg前述固體分散片之人體藥物動力學研究，在患者可接受之耐受性下，該劑量範圍具有如上所述之明確臨床治療功效。其患者體內與臨床有效性直接關聯之吸收峰濃度，即最大血藥濃度(Cmax)明顯低於其體外抑制正常或腫瘤細胞生長所需的濃度，因此對正常細胞不會產生直接的細胞毒作用，而是針=對腫瘤細胞之表觀遺傳調控進行作用。是以其人體耐受性得以明顯提高，顯示此一口服固體分散體之片劑在改善用藥安全性上之優點。
圖1係本發明之化學式(I)化合物之X-射線粉末繞射圖。
圖2係本發明之實施例7所製備之化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：1)之X-射線粉末繞射圖。
圖3係本發明之實施例8所製備之化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：5)之X-射線粉末繞射圖。
圖4係本發明之實施例9所製備之化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：20)之X-射線粉末繞射圖。
圖5係本發明之聚維酮K30之X-射線粉末繞射圖。
圖6係本發明之化學式(I)化合物-聚維酮K30機械混合物(重量比為1：1)之X-射線粉末繞射圖。
圖7係本發明之化學式(I)化合物-聚維酮K30機械混合物(重量比為1：5)之X-射線粉末繞射圖。
圖8係本發明之化學式(I)化合物-聚維酮K30機械混合物(重量比為1：20)之X-射線粉末繞射圖。
本發明實施例揭示了一種具有亞型選擇性之組蛋白去乙醯化酶抑制活性之E構型苯甲醯胺類化合物及其醫藥製劑與應用。所屬技術領域中具有通常知識者可以借鑒本文內容，適當修改進製程參數(process parameter)以 據以實現。特別需要指出的係，所有類似之替換和更動對所屬領域中具有通常知識者來說係顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明之產品及應用已經通過較佳實施例進行描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和範圍內對本文所述之產品及應用進行更動或適當變更與組合，以實現和應用本發明之技術。
為了進一步理解本發明，以下結合實施例對本發明進行詳細說明。本發明所述之百分比除特別註明外，均為重量百分比。本發明實施例中所述化學式(I)化合物除特別註明外，均為N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺，本發明實施例中所述化學式(I)化合物固體分散體除特別註明外，均為N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺固體分散體。說明書中所述之數值範圍，如計量單位或百分比，均是為了提供明白無誤之書面參考。本技術領域中具有通常知識者在實施本發明時，使用在此範圍之外或有別於單個數值之溫度、濃度、數量等，仍然可以得到預期之結果。其中，前述X-射線粉末繞射和溶出度測定試驗方法如下：
X-射線粉末繞射測試條件：儀器：D/MAX-1200(日本Rigaku公司)；輻射源：Cu-Kα(40kV、40mA)。
溶出度測定條件：儀器：RC806型藥物溶出度測定儀；溶出介質：水1000mL；轉速：50rpm，溫度：37±0.5℃。
實施例1：4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲 基]苯甲酸之製備
在裝有機械攪拌和回流冷凝管之5升三口玻璃燒瓶中加入298g(2.00mol)反式-3-(3-吡啶)丙烯酸、324g(2.00mol)N,N’-羰基二咪唑及3000mL四氫呋喃(tetrahydrofuram)，於約45℃下反應約3小時以製得一(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基咪唑活潑中間體溶液。
在另一裝有機械攪拌之10升三口玻璃燒瓶中加入302g(2.00mol)4-氨甲基苯甲酸、80g(2.00mol)氫氧化鈉及2000mL水，於室溫下攪拌約30分鐘，然後滴加前述(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基咪唑活潑中間體溶液，並於室溫下反應約8小時，以形成一反應混合物。將該反應混合物真空濃縮以去除四氫呋喃，再加入2000mL飽和氯化鈉溶液，並用濃鹽酸中和至pH值等於5，過濾，濾紙分別用400mL水和400mL無水乙醇沖洗，真空乾燥以得一第一粗產品。將該第一粗產品溶於2000mL 1mol/L氫氧化鈉溶液，並用濃鹽酸中和至pH值等於4，過濾，濾紙分別用400mL水和400mL無水乙醇沖洗，真空乾燥以得4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲酸。其重量298g，收率52.8%，含量99.57%(HPLC方法測定)。IR(KBr)cm-1：3269，3059，1653，1624，1543，1275，1226，976。LC-MS(m/z)：281(M-1)。元素分析(C16H14N2O3)計算值：C 68.08，H 5.00，N 9.92；實測值：C 67.85，H 5.08，N 9.86。 核磁共振(INOVA 500,DMSO-d6)氫譜、碳譜、DEPT譜、gCOSY譜、gHMQC譜、gHMBC譜之測定資料及分析結果如表1所示。
根據7位元氫、8位氫之偶合常數(J7-8=16)，確認“3-(3-吡啶)丙烯醯基”的構型為E型。
實施例2：N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺之製 備
在裝有機械攪拌和回流冷凝管之5升三口玻璃燒瓶中加入282g(1.00mol)4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲酸、162g(1.00mol)N,N’-羰基二咪唑及2820mL四氫呋喃，於45℃下反應約3小時=以製得一4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯活潑中間體溶液。
在另一裝有機械攪拌的5升三口玻璃燒瓶中加入168g(1.33mol)4-氟鄰苯二胺及800mL四氫呋喃，通氮氣保護，室溫下攪拌約10分鐘，滴加前述4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯活潑中間體溶液，室溫下反應約24小時。過濾，濾紙用400mL四氫呋喃沖洗，真空乾燥得一第二粗產品。將該第二粗產品溶於1200mL 2mol/L鹽酸，滴加960mL 1mol/L NaOH溶液，攪拌約10分鐘，過濾，濾紙用400mL水沖洗，並移入一10升反應瓶中，加入6000mL水及1200mL 1mol/L NaOH溶液，攪拌約30分鐘，過濾，濾紙分別用1200mL水和1200mL乙醇沖洗，真空乾燥以獲得純N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺。其重量206g，收率52.7%，含量99.18%(HPLC方法測定)。IR(KBr)cm-1：3412~3197，3042，2911，1653，1617，1569， 1516，1441，1417，973，838，796。FAB-MS(m/z)：391(M+1)，390(M)。元素分析(C22H19FN4O2)計算值：C 67.68，H 4.91，N 14.35；實測值：C 67.68，H 4.88，N 14.25。核磁共振(INOVA 500,DMSO-d6)氫譜、碳譜、DEPT譜、gCOSY譜、gHMQC譜、gHMBC譜、19F譜之測定資料及分析結果如表2所示。
根據7位元氫、8位氫的偶合常數(J7-8=16)，確認“3-(3-吡啶)丙烯醯基”的的構型為E型；根據25位元C、19位H之間的HMBC相關峰，確認25位C處於20位C之鄰位；根據25位元C與F之間之偶合常數(JCF=9.8Hz)，確認F處於25位C之間位。
實施例3：供試化合物對HDAC不同亞型的抑制活性的測定
(一)實驗方案
利用純化之第I、II、IV類HDAC共11個亞型(HDAC1~11)，採用BSP Bioscoence公司生產之去乙醯化酶檢測試劑盒測定供試化合物對HDAC不同亞型之抑制活性，並計算其半數酶活抑制濃度(IC50)。
(二)實驗材料和試劑
1.將依本發明之實施例2所製備之N-(2-氨基-4-氟苯 基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺溶於DMSO(100mM)。
2.將依US7,244,751B2之實施例2所製備之N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺溶於DMSO(100mM)。
3.牛血清白蛋白(1mg/mL)
4.純化之HDAC1-11亞型蛋白(0.4ng/μL，N-GST標記，BSP Biosciences)
5.乙醯化修飾之螢光基質(以下簡稱乙醯化基質)(5mM)
6.2 x顯色反應液(50μM)
7.乙醯化檢測緩衝液
8.96孔檢測板
9.96孔板螢光檢測儀(BioTek Synergy)
(三)實驗步驟
1.將測試化合物以乙醯化檢測緩衝液分別稀釋為300、100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03及0.01μM之濃度梯度；將乙醯化基質稀釋為200μM之工作液；將純化之HDAC融合蛋白稀釋為0.4ng/μL之工作液；
2.在96孔檢測板中分別加入下列成份：5μL牛血清白蛋白溶液(1mg/mL)，5μL純化之HDAC融合蛋白(0.4ng/μL)，5μL乙醯化基質(200μM)，和30μL乙醯化檢測緩衝液，並將之混合均勻。
3.除對照反應孔外，向每個反應孔分別加入5μL不同濃度梯度之測試化合物溶液；陰性對照孔不加HDAC融合 蛋白，加入10μL乙醯化檢測緩衝液；陽性對照孔不加測試化合物，加入5μL乙醯化檢測緩衝液。每個檢測設置三個重複孔。
4.混合均勻後，在常溫下反應17小時。
5.每孔加入50μL 2 x顯色反應液，室溫反應20分鐘。
6.利用螢光檢測儀(BioTek Synergy)分別測量激發波長(excitation wavelength)(360nm)和發射波長(emission wavelength)(460nm)時之螢光強度。
7.加入測試化合物後之HDAC酵素活性依下面之公式計算：活性%=(F-Fb)/(Ft-Fb)。其中Ft為陽性對照孔之螢光強度，Fb為陰性對照孔之信號強度。針對不同濃度梯度之測試化合物處理後之酵素活性進行計算以得到劑量依賴之酵素活性曲線，利用統計計算得到測試化合物抑制不同HDAC亞型之半抑制濃度(IC50)。
(四)實驗結果
實驗結果如表3所示。
*化學式(I)化合物：N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺** CS02100055：N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺
表3測定結果顯示：本發明之化學式(I)化合物係一種亞型選擇性組蛋白去乙醯化酶抑制劑，主要抑制第I類HDAC中之HDAC1、HDAC2、HDAC3和第IIb類HDAC中之HDAC10，不抑制HDAC6、7及9，且對HDAC8和11之抑制較弱。此外，本發明之化學式(I)化合物比N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-(3-吡啶丙烯醯基)氨甲基]苯甲醯胺(即E型和Z型混合物)對HDAC1、2、3和10具有更好的抑制活性。
實施例4：含化學式(I)化合物之普通片劑之製備
處方(1000片)：
製備方法：將化學式(I)化合物過100目篩，秤取處方量之化學式(I)化合物、聚維酮K30、乳糖、微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第一軟材，將第一軟材用20目篩以製一第一濕顆粒，於60℃乾燥該第一濕顆粒直至第一濕顆粒之水分低於4%。再利用18目篩整粒，加入處方量之滑石粉和硬脂酸 鎂，混合均勻，壓片即得含化學式(I)化合物之普通片劑。
實施例5：含化學式(I)化合物之普通膠囊劑之製備
處方(1000粒)：
製備方法：將化學式(I)化合物過100目篩，秤取處方量之化學式(I)化合物、聚維酮K30、微晶纖維素、乳糖和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第二軟材，將第二軟材用20目篩以製一第二濕顆粒，於60℃乾燥該第二濕顆粒直至第二濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入處方量之硬脂酸鎂，混合均勻，灌裝膠囊即得含化學式(I)化合物之普通膠囊劑。
實施例6：含化學式(I)化合物之普通顆粒劑之製備
處方(1000包)：
羧甲基澱粉鈉 100g
製備方法：將化學式(I)化合物過100目篩，秤取處方量之化學式(I)化合物、聚維酮K30、乳糖、可溶性澱粉、微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第三軟材，將第三軟材用20目篩以製一第三濕顆粒，於60℃乾燥該第三濕顆粒直至第三濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，分裝即得含化學式(I)化合物之普通顆粒劑。
實施例7：化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：1)之製備
取4g化學式(I)化合物和4g聚維酮K30，加入800g無水乙醇，於60℃水浴加熱，使化學式(I)化合物和聚維酮K30完全溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集固體，置入熱風迴圈烘箱中於60℃乾燥8h，粉碎，過60目篩，即得化學式(I)化合物固體分散體。該固體分散體之45min之溶出度為60.3%，其X-射線粉末繞射圖如圖2所示。
實施例8：化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：5)之製備
取4g化學式(I)化合物和20g聚維酮K30，加入1000g無水乙醇，於90℃水浴加熱，使化學式(I)化合物和聚維酮K30完全溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集固體，置入熱風迴圈烘箱中於80℃乾燥2h，粉碎，過100目篩，即得化學式(I)化合物固體分散體。該固體分散體之45min之溶出度為79.1%，其X-射線粉末 繞射圖如圖3所示。
實施例9：化學式(I)化合物-聚維酮K30固體分散體(重量比為1：20)之製備
取4g化學式(I)化合物和80g聚維酮K30，加入4000g無水乙醇，於90℃水浴加熱，使化學式(I)化合物和聚維酮K30完全溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集固體，置入熱風迴圈烘箱中於80℃乾燥4h，粉碎，過100目篩，即得化學式(I)化合物固體分散體。該固體分散體之45min之溶出度為82.2%，其X-射線粉末繞射圖如圖4所示。
實施例10：含化學式(I)化合物固體分散體的片劑的製備
處方(1000片)：
製備方法：秤取處方量之固體分散體、乳糖、微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水為潤濕劑以製一第四軟材，將第四軟材用20目篩以製第四濕顆粒，於60℃乾燥該第四濕顆粒直至第四濕顆粒水分之低於4%。用18目篩整粒，加入處方量之滑石粉，混合均勻，壓片即得含化學式(I)化合物固體分散體的片劑。
實施例11：含化學式(I)化合物固體分散體 之片劑之製備
處方(1000片)：
製備方法：秤取處方量之固體分散體、乳糖、微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第五軟材，將第五軟材用20目篩以製一第五濕顆粒，於60℃乾燥該第五濕顆粒直至第五濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入處方量之滑石粉和硬脂酸鎂，混合均勻，壓片即得含化學式(I)化合物固體分散體之片劑。
實施例12：含化學式(I)化合物固體分散體之膠囊劑之製備
處方(1000粒)：
製備方法：秤取處方量之固體分散體、微晶纖維素、乳糖和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤 濕劑以製一第六軟材，將第六軟材用20目篩以製一第六濕顆粒，於60℃乾燥該第六濕顆粒直至第六濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入處方量硬脂酸鎂，混合均勻，灌裝膠囊即得含化學式(I)化合物固體分散體之膠囊劑。
實施例13：含化學式(I)化合物固體分散體之顆粒劑之製備
處方(1000包)：
製備方法：秤取處方量之固體分散體、乳糖、可溶性澱粉、微晶纖維素和羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第六軟材，將第六軟材用20目篩以製一第六濕顆粒，於60℃乾燥該第六濕顆粒直至第六濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，分裝即得含化學式(I)化合物固體分散體之顆粒劑。
實施例14：本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑治療復發或難治性周邊T細胞淋巴瘤之關鍵性第II期臨床試驗
(一)受試藥物之製備
20081020批號之本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑：取180g化學式(I)化合物和900g聚維酮K30，加入36,000g無水乙醇，於90℃水浴加熱，使 化學式(I)化合物及聚維酮K30完全溶解。用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集一第一固體，將該第一固體置於熱風迴圈烘箱中於80℃乾燥2h，粉碎該第一固體，過100目篩，即得一第一固體分散體；將該第一固體分散體與1,080g微晶纖維素、1,800g乳糖和360g羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第七軟材，將第七軟材用20目篩以製一第七濕顆粒，於60℃乾燥該第七濕顆粒直至第七濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入180g滑石粉，混合均勻，依5mg規格壓片，即得受試藥物。
20100322批號之本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑：取160g化學式(I)化合物和800g聚維酮K30，加入32,000g無水乙醇，於90℃水浴加熱，使化學式(I)化合物及聚維酮K30完全溶解。用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集一第二固體，將該第二固體置於熱風迴圈烘箱中於80℃乾燥2h，粉碎該第二固體，過100目篩，即得第二固體分散體；將該第二固體分散體與960g微晶纖維素、1,600g乳糖和320g羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第八軟材，將第八軟材用20目篩以製一第八濕顆粒，於60℃乾燥該第八濕顆粒直至第八濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入160g滑石粉，混合均勻，依5mg規格壓片，即得受試藥物。
20120509批號之本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑：取158g化學式(I)化合物和790g聚維酮K30，加入31200g無水乙醇，於90℃水浴加熱，使化 學式(I)化合物及聚維酮K30完全溶解。用旋轉蒸發器減壓蒸去無水乙醇，收集一第三固體，將該第三固體置於熱風迴圈烘箱中於80℃乾燥2h，粉碎該第三固體，過100目篩，即得第三固體分散體；將該第三固體分散體與948g微晶纖維素、1,580g乳糖和316g羧甲基澱粉鈉，混合均勻，以適量水作為潤濕劑以製一第九軟材，將第九軟材用20目篩以製一第九濕顆粒，於60℃乾燥該第九濕顆粒直至第九濕顆粒之水分低於4%。用18目篩整粒，加入158g滑石粉，混合均勻，依5mg規格壓片，即得受試藥物。
(二)試驗方案
本試驗為本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑治療復發或難治性周邊T細胞淋巴瘤之第II期臨床試驗。採用單臂、非隨機、開放、多中心之第II期臨床試驗設計。觀察PTCL患者在固定給藥方式和劑量下之療效和安全性。治療直到疾病進展或安全性原因退出為止。整個試驗截止至所有測試患者完成6週治療並隨訪1個月或終止治療或因任何原因死亡。
(三)測試藥物之名稱、規格、批號及用法用量
名稱：前述化學式(I)化合物固體分散體片劑
規格：5mg/片
批號：20081020，20100322，20120509
用法用量：患者餐早餐後30分鐘以溫開水200mL服用藥物。每週服藥兩次(週一、週四給藥或週二、週五給藥，依此類推)，無停藥休息期，每次之服藥劑量為 30mg。
(四)試驗結果
在前述化學式(I)化合物固體分散體片劑治療難治性或復發性PTCL之關鍵性第II期臨床試驗中，共包含83例病人，在全分析集(full analysis set,FAS)患者中，總緩解率(overall remission rate)為32.9%(26/79)，其中8例病人完全緩解(10.1%)，4例病人不確定完全緩解(5.1%)，14例病人部分緩解(17.7%)，與用藥有關之3級以上不良反應之發生率為39%。
實施例15：前述化學式(I)化合物固體分散體片劑治療皮膚T細胞淋巴瘤之第II期臨床試驗
(一)受試藥物之製備
同實施例14。
(二)試驗方案
本試驗為本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑治療皮膚T細胞淋巴瘤之第II期臨床試驗。該試驗分為兩個階段。首先採用多中心、隨機、開放設計，初步觀察兩組患者在不同間隔給藥方式(3週治療週期組和6週治療週期組)下之療效和安全性。基於以上兩組間隔給藥之試驗分析結果，設定了連續給藥組，觀察療效和安全性。每位患者服藥至疾病進展或出現不可耐受之毒性反應為止。
(三)受試藥物之名稱、規格、批號、用法用量
名稱：本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑
規格：5mg/片
批號：20081020，20100322，20120509
用法用量：患者於早餐後30分鐘以溫開水200mL送服藥物。每週服藥兩次(週一、週四給藥或週二、週五給藥，依此類推)，每次之服藥劑量為30mg。3週治療週期組患者連續服藥2週後停藥休息1週；6週治療週期組患者連續服藥4周後停藥休息2周；連續給藥組患者無停藥休息期。
(四)試驗結果
在本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑治療皮膚T細胞淋巴瘤之的II期臨床試驗中，共包含52例患者，其中3週治療週期組13例，6週治療週期組13例，連續給藥組26例。在全分析集患者中，總緩解率為32.0%(16/50)，三組之緩解率分別為33.3%(4/12)、23.1%(3/13)及36.0%(9/25)，其中連續給藥組之1例患者為完全緩解，其它獲得緩解之患者均為部分緩解。
實施例16：本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑聯合紫杉醇和卡鉑治療非小細胞肺癌之第Ib期臨床試驗
(一)受試藥物之製備
同實施例14。
(二)試驗方案
本試驗為本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑聯合紫杉醇和卡鉑治療非小細胞肺癌之第Ib期臨床試驗。採用開放、單中心、劑量遞增設計。受試者為非 小細胞肺癌患者，試驗中紫杉醇和卡鉑之劑量固定，只遞增化學式(I)化合物之劑量。
對於緩解或穩定之患者，聯合給藥最多為4個週期，對於此後仍處於未進展狀態者，改為化學式(I)化合物單藥治療，劑量不變，所有受試者均治療至疾病進展或出現無法耐受之毒性為止。
(三)受試藥物之名稱、規格、批號、用法用量
1.本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑
規格：5mg/片
批號：20100322，20120509
用法用量：患者於早餐後30分鐘以溫開水200mL送服藥物。每週服藥兩次(週一、週四給藥或週二、週五給藥，依此類推)，無停藥歇息期。依據服藥組別順序，患者每次服用之劑量分別為20mg、30mg和25mg。
2.紫杉醇注射液及卡鉑注射液
紫杉醇注射液(TAXOL®，泰素®)和卡鉑注射液(PARAPLATIN®，伯爾定®)皆係經過商業購買途徑獲得。
用法用量：每個治療週期為三週，所有患者每週期第5天給予靜脈注射紫杉醇注射液175mg/m2及卡鉑AUC=5mg/mL．min。
(四)試驗結果
本試驗共包含10例患者，其中20mg組3例，30mg組4例，25mg組3例。本試驗之劑量限制性毒性為血液學毒性反應。20mg組中有1例患者獲得部分緩解；5 例有腦轉移病灶之患者經治療後，2例患者之腦轉移病灶全部消失。
實施例17：本發明之化學式(I)化合物體外細胞生長抑制試驗
(一)試驗方法
用MTS[(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)]法測定生長抑制率。在96孔板中培養待測細胞(每孔5000個，且不同生長速度之細胞培養量不同)，培養24小時後加入不同濃度之化學式(I)化合物，繼續培養48小時後每孔加入20μl MTS檢測液(Promega)，於37℃下培養2小時後在酵素免疫分析儀(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA reader)上用490nm波長讀取結果。相對活細胞量以實驗組/對照組×100%計算，對細胞生長抑制50%之化學式(I)化合物濃度標示為GI50。化學式(I)化合物溶在DMSO中，並在加藥時進行1：1000之稀釋，使DMSO之最終濃度0.1%。每個實驗皆進行三重複。
(二)試驗結果
試驗結果如表4所示。
表4測定結果顯示：化學式(I)化合物對正常細胞、實體腫瘤細胞和血液腫瘤細胞之生長抑制之中位GI50值分別為60μM,6.65μM和1.21μM，因此，化學式(I)化合物需要較高之濃度方能對正常細胞產生直接之細胞毒作用。
實施例18：本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑之人體藥物動力學研究
本實施例係本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑在33例晚期淋巴瘤患者(21例PTCL患者、12例CTCL患者)中進行之人體藥物動力學研究。
(一)受試藥物之製備
同實施例14。
(二)試驗方案
同實施例14及15。患者在首次服藥後採集血液之時間點均為給藥前和給藥後之第1、2、6、12、24、48和72小時(共8個時間點)。
(三)受試藥物之名稱、規格、批號及用法用量
名稱：本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑
規格：5mg/片
批號：20081020，20100322，20120509
用法用量：患者於早餐後30分鐘以溫開水200mL送服藥物，劑量為30mg。
(四)實驗材料和試劑
色譜純甲醇(HPLC grade methanol)從Fisher公司購置；ACS(American Chemical Society)級甲酸購自Sigma公司；自製三蒸水；氬氣(99.999%)和液氮(99.999%)購自北京誠為信工業氣體銷售中心；空白健康人血漿由解放軍307醫院提供。
(五)實驗儀器和方法
儀器：Surveyor plus高效液相系統，配有自動進樣器、柱溫箱和MS泵，TSQ Quantum ultra質譜儀及XcalIIur 2.0軟體係購自Thermo Electron公司。
色譜條件：hypersil GOLD色譜柱，100mm×2.1mm，5μm；水(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.1%甲酸)為流動相，0-2min 5%甲醇，2-2.5min 5%-95%甲醇，2.5-5min 95%甲醇，5-5.5min 95%-5%甲醇，5.5-7min 5%甲醇；流速：每分鐘0.2mL；進樣量：5μL。
質譜條件：電離方式+ESI；噴霧電壓4500V；鞘流氣(sheath gas)流速30psi；輔氣(auxiliary gas)流速2psi；毛細管加熱溫度300℃；源誘導電壓-10V；碰撞氣壓力1.5psi；掃描模式選擇反應監測(selected-reaction monitoring,SRM)，監測離子反應為m/z 391.1→265.1(化學式(I)化合物)，m/z 377.1→359.2(MS275)；執行時間7min。
儲備標準溶液之製備：秤取一定量之化學式(I)化合物和MS275，溶解於甲醇中，製成1mg/mL之儲備液，於冰箱4℃保存。
校正標準曲線樣品和品質控制樣品之製備：將 化學式(I)化合物儲備液稀釋成系列濃度之工作溶液，即將10μl工作溶液加入到90μl血漿中以製成濃度為1ng/mL至1000ng/mL的之化學式(I)化合物標準血漿溶液。品質控制樣品之製備方法與校正標準曲線樣品相同，品質控制樣品之濃度為2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL以及1000ng/mL。
樣品處理方法：取100μL血漿樣品(標準曲線、品質控制或臨床樣品)，加入150μL乙腈(含100ng/mL MS275)沉澱蛋白，渦旋混合1min，再利用轉速17,000×g離心20min，吸取上清，以5μL體積注入樣品。
(六)血漿樣品採集和保存
患者於給藥前及給藥後1h、2h、6h、12h、24h、48h和72h採集全血3至4mL，混合均勻後離心10分鐘，取上清血漿，冷凍於-20℃冰箱中。
(七)試驗結果：
33例晚期淋巴瘤患者(其中21例PTCL患者、12例CTCL患者)餐後單次口服30mg之本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑後，藥物在體內呈現明顯之吸收和消除過程，體內吸收存在一定之個體差異性，但大多數患者之血藥達峰時間(Tmax)和最大血藥濃度(Cmax)較為接近，其平均血藥達峰時間(Tmax)為3.9±3.5h，最大血藥濃度(Cmax)為59.6±47.0ng/mL(152.66nM)。前述血藥達峰時間係指給藥後血藥濃度達到峰濃度(peak concentration)所需之時間。
結果顯示，在晚期淋巴瘤患者中，服用30mg 劑量之本發明之化學式(I)化合物固體分散體片劑，其患者體內最大血藥濃度為0.153μM，該濃度遠遠低於體外針對正常細胞、實體瘤細胞和血液腫瘤細胞之生長抑制之中位GI50值(分別為60μM、6.65μM和1.21μM)，因此，該製劑不會產生直接的細胞毒效應。
以上實施例之說明只是用於幫助理解本發明及其核心思想。對於所屬技術領域中具有通常知識者來說，在不脫離本發明原理之前提下，針對本發明進行若干改進和修飾亦會落入本發明權利要求之保護範圍。

Claims (1)

  1. 一種如化學式(I)所示E構型苯甲醯胺類化合物在製備用於治療周邊T細胞淋巴瘤和皮膚T細胞淋巴瘤的藥物中之應用， ，其化學名稱為N-(2-氨基-4-氟苯基)-4-[N-[(E)-3-(3-吡啶)丙烯醯基]氨甲基]苯甲醯胺，在其結構式中，3-吡啶丙烯醯基的構型為E型。
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